相關(guān)申請的參考按照35U.S.C.§119(e)的要求，所述的非臨時專利申請要求享有申請日為2007年4月18日的U.S.S.N.60/925312以及申請日為2007年8月20日的U.S.S.N.60/965582的優(yōu)先權(quán)。上述申請中的內(nèi)容作為整體在本文中被引入作為參考。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明屬于植物分子生物學(xué)領(lǐng)域并且涉及具有新的表現(xiàn)型的轉(zhuǎn)基因植物，生產(chǎn)這樣的植物的方法以及有效的用于這樣的方法之中的多核苷酸以及多肽。更具體的，本發(fā)明涉及所述的MYB多核苷酸的使用以及表達這種多核苷酸以及多肽的轉(zhuǎn)基因植物。
背景技術(shù)：
：環(huán)境的脅迫是形成農(nóng)業(yè)作物的顯著的產(chǎn)量降低的原因。除了先前公開的許多報道之外，在最近的幾年中對于整個美國在1982-1998年的時間里氣候的變化與玉米以及大豆的產(chǎn)量之間的關(guān)系進行了研究(參見Lobell以及Asner于2003年發(fā)表的文章)。逐步的溫度變化已經(jīng)對農(nóng)作物的產(chǎn)量產(chǎn)生了可以測量的影響。已經(jīng)估算出，當(dāng)所述的生長溫度每超出季節(jié)最適宜溫度上升一度，玉米以及大豆的產(chǎn)量降低17％。在1990年至2010年間，隨著預(yù)測溫度的增長為1.4℃至5.8℃(聯(lián)合國政府間氣候變化專門委員會(IPCC)工作組I，2001年)，農(nóng)作物植物對于高溫的耐受性的改進已經(jīng)成為農(nóng)業(yè)生物技術(shù)發(fā)展的主要焦點中的一個。單子葉植物以及雙子葉植物在開花以及結(jié)實的形成過程中對熱脅迫均格外敏感，并且因此熱脅迫對于種子的產(chǎn)量具有顯著的影響(參見Young等人于2004年發(fā)表的文章；Sato等人于2002年發(fā)表的文章；Angadi等人于2000年發(fā)表的文章；Carlson于1990年發(fā)表的文章；WahidA，GelaniS，AshrafM以及FooladM.R.于2007年發(fā)表的文章)。已經(jīng)提出植物擁有先天的基礎(chǔ)的熱耐受性能力以及后天獲得的熱耐受性，并且在不同的植物品種中存在著共同的熱應(yīng)答(參見Kapoor等人于1990年發(fā)表的文章；Vierling于1991年發(fā)表的文章；Flahaut等人于1996年發(fā)表的文章；Burke等人于2000年發(fā)表的文章；Hong以及Vieling于2000年發(fā)表的文章；Massie等人于2003年發(fā)表的文章；Larkindale等人于2005年發(fā)表的文章)?；A(chǔ)的熱耐受性允許植物在被暴露于高于最適的生長溫度時能夠存活，而后天獲得的熱耐受性是由在一種亞致死的熱脅迫條件下進行的短暫的馴化周期所引發(fā)的，這使得植物能夠在隨后的熱脅迫條件下存活下來，然而所述的熱脅迫條件應(yīng)當(dāng)是致命的。為了對在植物的熱耐受性中所涉及到的基因以及途徑進行識別以及定義，已經(jīng)進行了大量的研究。例如，熱休克轉(zhuǎn)錄因子(HSF)以及熱休克蛋白(HSP)已經(jīng)受到了大量的關(guān)注，用來闡明這些基因在應(yīng)答于熱脅迫時所發(fā)揮的作用以及所產(chǎn)生的功效，從而像存在于植物生長激素例如脫落酸以及乙烯一樣。轉(zhuǎn)錄因子是一種DNA結(jié)合蛋白，能夠與特異性的啟動子序列或者增強子序列發(fā)生相互作用并且改變所述的相關(guān)基因的基因表達。當(dāng)與所述的轉(zhuǎn)錄因子發(fā)生結(jié)合的所述的特異性序列與一組基因相關(guān)聯(lián)時，整體的途徑能夠同等的受到各種不同的組分基因的調(diào)節(jié)，同時發(fā)生上調(diào)節(jié)或者去調(diào)節(jié)。轉(zhuǎn)錄因子可以同等的改變一組基因，從而對一種刺激進行應(yīng)答，其中所述的刺激是例如一種環(huán)境脅迫，營養(yǎng)狀況或者病原體侵襲，或者可以是一種信號途徑的一個組成部分，其中所述的信號途徑是例如一種激素信號途徑。轉(zhuǎn)錄因子擁有一種模塊結(jié)構(gòu)并且主要依據(jù)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域為基礎(chǔ)被進行了分類。轉(zhuǎn)錄因子的MYB家族由至少198個基因構(gòu)成(參見Yanhui等人于2006年發(fā)表的文章)并且其已經(jīng)被提議在各種不同的過程中具有調(diào)節(jié)功能，所述的過程涉及從生長到形成防御應(yīng)答的范圍。植物MYB蛋白根據(jù)不完全的MYB重復(fù)的存在以及數(shù)量進行了分類，其中所述的每個不完全的MYB重復(fù)(MYBrepeats)由大約52個氨基酸構(gòu)成。所述的MYB結(jié)構(gòu)域形成了一種螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋構(gòu)象并且代表著所述的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。MYB蛋白的三種主要的群體被分為R1R2R3-MYB，R2R3-MYB以及MYB-相關(guān)性蛋白。擬南芥屬的R2R3-MYB蛋白家族由125個蛋白組成并且其特征在于在它們的N-末端具有一個R2R3DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(參見Kranz等人于1998年發(fā)表的文章，以及Stracke等人于2001年發(fā)表的文章)。這些基因在各種生物學(xué)過程中都有所涉及，所述的生物學(xué)過程包括激素作用的調(diào)節(jié)，次級代謝(參見Paz-Ares等人于1987年發(fā)表的文章)，細胞的形態(tài)形成的控制(參見Oppenheimer等人于1991年)，分生組織、花以及種子的形成(參見Kirik等人于1998年發(fā)表的文章，Schmitz等人于2002年發(fā)表的文章)以及對于各種環(huán)境因素的應(yīng)答(參見Kranz等人于1998年發(fā)表的文章；Jin以及Martin于1999年發(fā)表的文章；Meissner等人于1999年發(fā)表的文章)。MYB序列已經(jīng)被進一步劃分成各種亞群，所述的劃分是以序列為依據(jù)的(參見Krantz等人于1998年發(fā)表的文章，Stracke等人于2001年發(fā)表的文章)。Krantz等人于1998年識別出MYB68落入亞群14的范圍之內(nèi)，而MYB36以及MYB84同樣如此。然而，Stracke等人于2001年指出在亞群14中額外包括所述的MYB37，MYB38以及MYB87。Stracke進一步記錄了基因的功能保守性的幾種情況，其中所述的基因在所述的系統(tǒng)樹形圖中是集群在一起的。所述的R2R3-MYB家族的分類已經(jīng)在擬南芥(At)中識別出125種MYB蛋白。R2R3MYB基因的特征在于MYB結(jié)構(gòu)域，所述的結(jié)構(gòu)域含有兩個53個氨基酸(aa)的不完全重復(fù)(R2，以及R3)。每個重復(fù)(repeat)含有三個螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)。所述的R2結(jié)構(gòu)域以及R3結(jié)構(gòu)域位于所述蛋白的N-末端的附近。每個重復(fù)之上的最后兩個螺旋與它們之間的環(huán)一同形成了一種DNA-結(jié)合基序結(jié)構(gòu)，這與螺旋-環(huán)-螺旋(HLH)蛋白相似。所述的第三個螺旋直接與DNA進行結(jié)合，而所述的第一個螺旋以及第二個螺旋為形成所述的螺旋-環(huán)-螺旋基序的構(gòu)象作出了貢獻，其中所述的螺旋-環(huán)-螺旋基序?qū)τ谔禺愋曰虬邢虻淖R別而言似乎是重要的(參見Ogata等人于1994年發(fā)表的文章；William以及Grotewold于1997年發(fā)表的文章；Jia等人于2004年發(fā)表的文章)。所述的R2R3-MYB蛋白進一步被定義為22種亞群，這是依照它們的動植物種類間的關(guān)系，以除所述的MYB結(jié)構(gòu)域之外的至少一個共享的氨基酸基序為基礎(chǔ)來定義的(參見Kranz等人于1998年發(fā)表的文章)。AtMYB68，AtMYB84，以及AtMYB36被歸類為亞群14之中，這是以存在于所述蛋白的所述C-末端處的兩個共享基序為依據(jù)的，其中所述的兩個共享基序是：S1：SFSQLLLDPN序列識別號(SEQIDNO)：266以及S2：TSTSADQSTISWEDISEQIDNO：267。這些基序的同源性是有限的，例如，AtMYB36僅僅具有20％的同一性。其次，AtMYB87，AtMYB37以及AtMYB38同樣被包括在亞群14之中，這是以所述的MYBDNA結(jié)構(gòu)域中的序列保守性：R2以及R3的螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋重復(fù)為依據(jù)的(參見Stracke等人于2001年發(fā)表的文章)。所述的R2R3結(jié)構(gòu)域可以作為對于特異性的DNA結(jié)合的指示，其中所述的結(jié)合是經(jīng)由所述的R3結(jié)構(gòu)域中的所述第三個螺旋的獨特的氨基酸序列來進行的，并且次要的構(gòu)象變化與存在于所述的前兩個螺旋的結(jié)構(gòu)間相互作用發(fā)生關(guān)聯(lián)。已經(jīng)提出亞群14的成員可能是功能上多余的直向同源基因。例如，已經(jīng)在擬南芥的側(cè)生分生組織萌發(fā)中進行了針對MYB-亞群14的研究(參見Muller等人于2006年發(fā)表的文章)。MYB-亞群14中的所有成員表現(xiàn)出了與所述的番茄Blind(Bl)基因的高度相似性，其中所述的番茄Blind基因是一種腋生分生組織調(diào)節(jié)劑。利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)在組織中探測到四種成員的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物：AtMYB37，AtMYB38，AtMYB84以及AtMYB87，其中所述的組織包括莖尖，節(jié)間，葉片，花蕾，開放的花朵，以及根，而AtMYB36以及AtMYB68的表達在根組織中進行了表達。利用AtMYB37，AtMYB38以及AtMYB84的敲除來進行的表現(xiàn)型的分析表明，對于調(diào)節(jié)腋芽的形成而言，MYB-亞群14中的這些成員至少是部分多余的。MYB68是一種R2R3類型的MYB基因，并且屬于MYB-亞群14中的一個成員，其已經(jīng)在一項轉(zhuǎn)座子基因捕獲研究中被識別出來(參見Feng等人于2004年發(fā)表的文章)。已經(jīng)證明了這種基因的表達對于根部的中柱鞘細胞具有特異性。在所述的無價值的突變體中，沒有可以探測到的MYB68mRNA(信使核糖核酸)；然而，當(dāng)植物在標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境下進行生長時，沒有顯示出突變的表現(xiàn)型。在對于存在于各種不同的生長環(huán)境下的MYB68進行的評價中，僅僅當(dāng)植物在熱的溫室條件下(30-40℃)進行生長時，才辨認(rèn)出唯一的一種表現(xiàn)型，所述的表現(xiàn)型是植物的葉片面積的減少。通過使用一種野生型MYB68基因?qū)λ龅膍yb68突變體進行后臺轉(zhuǎn)化，從而對這種表現(xiàn)型進行了援救。對于在發(fā)根培養(yǎng)器中生長的所述的myb68突變體的根部組織進行的檢查表明，具有增加的生物量水平以及木質(zhì)素水平。筆者推定在根部的形成過程中涉及到MYB68(參見Feng等人于2004年發(fā)表的文章)。轉(zhuǎn)錄的激活作用首先經(jīng)由轉(zhuǎn)錄因子進行介導(dǎo)，其中所述的轉(zhuǎn)錄因子與增強子元件以及啟動子元件發(fā)生相互作用。轉(zhuǎn)錄因子與這樣的DNA元件所進行的結(jié)合構(gòu)成了轉(zhuǎn)錄開始的一個至關(guān)重要的步驟。每個轉(zhuǎn)錄因子同存在于啟動子中的與所述的轉(zhuǎn)錄因子具有特異性的結(jié)合序列進行結(jié)合，并且通過與輔激活因子和/或蛋白間發(fā)生的相互作用激活所述的連接的編碼區(qū)域的表達，其中所述的輔激活因子和/或蛋白屬于所述的轉(zhuǎn)錄復(fù)合體中的一部分。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明涉及一種增加植物的熱脅迫耐受性的方法，其中所述的方法通過增加MYB亞群-14多肽的表達的方式來完成。增加的熱脅迫耐受性包括在熱脅迫的條件下以及經(jīng)過熱脅迫的條件之后具有改善的結(jié)實現(xiàn)象。改善的結(jié)實現(xiàn)象導(dǎo)致了增加的產(chǎn)量。MYB-亞群-14多肽包括例如MYB68多肽，MYB36多肽，MYB84多肽，MYB37多肽，MYB38多肽或者MYB87多肽。優(yōu)選的，所述的MYB-亞群-14多肽是MYB68多肽，MYB36多肽或者MYB84多肽。所述的MYB-亞群-14多肽的表達是異位表達，或者是組成性表達?？梢赃x擇的，所述的MYB亞群-14多肽的表達發(fā)生在其典型的表達位點上，例如，根部組織。一種熱脅迫耐受性的植物是通過下述方法制備得到的：提供一種核酸構(gòu)建體，其中所述的核酸構(gòu)建體能夠增強所述的Myb亞群-14多肽的表達，將所述的核酸構(gòu)建體插入到一種載體之中，利用所述的載體對一種植物、組織培養(yǎng)物、或者植物細胞進行轉(zhuǎn)化，從而獲得一種具有增加的Myb亞群-14多肽的表達的植物、組織培養(yǎng)物或者植物細胞，并且使所述的植物進行生長或者從所述的組織培養(yǎng)物或者植物細胞中進行一種植物的再生。一種能夠增強所述的Myb亞群-14多肽的表達的核酸構(gòu)建體包括例如一種增強子元件。增強子是一種在真核細胞以及某些真核細胞病毒中發(fā)現(xiàn)的序列，當(dāng)其位于與所述的相關(guān)基因距離高達幾千堿基對的任意方位上時，它能夠增強所述基因的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)位于上述談?wù)摰幕虻?’側(cè)(上游)上時，這些序列發(fā)揮了增強子的作用。然而，當(dāng)被放置于所述基因的3’側(cè)(下游)上時，某些增強子是具有活性的。所述的增強子元件能夠激活基因的轉(zhuǎn)錄并且改變所述的內(nèi)源性基因的正常的表達類型。增強子元件對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的。例如所述的增強子元件是一種35S增強子元件。除此之外，一種能夠增強所述的Myb亞群-14多肽的表達的核酸構(gòu)建體包括例如一種編碼Myb亞群-14多肽的核酸。范例性的MYB多肽以及核酸包括那些序列識別號(SEQIDNO)為1-265的多肽以及核酸。所述的編碼Myb亞群-14多肽的核酸與一種啟動子發(fā)生了可操作性的連接。所述的啟動子是一種異源啟動子或者是一種同源啟動子。除此之外，所述的啟動子是一種組成型啟動子或者是一種誘導(dǎo)型啟動子。通過增加所述的MYB亞群-14多肽的表達，意味著由所述的經(jīng)過所述核酸構(gòu)建體進行轉(zhuǎn)化的細胞所生產(chǎn)的量高于沒有經(jīng)過所述的核酸構(gòu)建體進行轉(zhuǎn)化的細胞所生產(chǎn)的量，其中所述的沒有進行轉(zhuǎn)化的細胞是例如一種對照細胞。對照細胞包括例如一種能夠內(nèi)源性的表達MYB亞群-14多肽的細胞，例如一種植物根細胞，或者對照細胞是與所述的轉(zhuǎn)化細胞具有相同的細胞類型的一種非轉(zhuǎn)化細胞，是一種葉片細胞、分生組織細胞或者花朵細胞或者種子細胞。增加指的是一倍的增加，兩倍的增加，三倍的增加或者更高倍數(shù)的增加。表達上的增加同樣意在包括在一種通常情況下不產(chǎn)生MYB亞群-14多肽的細胞中進行的MYB亞群-14多肽的表達。同樣被包括在本發(fā)明之內(nèi)的是一種識別熱脅迫耐受性植物的方法。與一種對照植物相比，通過這些方法識別出的所述植物具有減少的花朵敗育以及增加的產(chǎn)量。熱脅迫耐受性植物是通過下述方式被識別出來的：將一群開花植物暴露于熱脅迫處理中并且從上述的植物群體中選擇一種具有減少的花朵敗育的植物。熱脅迫處理包括例如將所述的植物在足夠熱的溫度下暴露足夠長的時間，這樣一來導(dǎo)致了對植物的功能或者發(fā)育上的損傷。減少的花朵敗育意味著植物不會損失與因花朵敗育而損失的同樣多的花朵，或者與另外一種被暴露于類似的熱脅迫水平下的植物相比，所述的植物具有更高的結(jié)實產(chǎn)量。與一種對照植物相比，具有減少的花朵敗育的植物在結(jié)實產(chǎn)量上具有5％，10％，20％，25％，30％或者更高的增長。本發(fā)明進一步包括由本發(fā)明中所述的方法制備得到的所述植物，以及由所述的植物所生產(chǎn)的種子，其中所述的種子能夠生產(chǎn)出對熱脅迫具有增強的耐受力的植物。除非另外定義，這里所使用的全部的技術(shù)術(shù)語以及科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同的含義。盡管在本發(fā)明的實踐或者檢驗過程中可能使用到那些與這里所描述的方法以及材料相類似或者等價的方法以及材料，適宜的方法以及材料在下文中進行了描述。這里所提及的全部出版物、專利申請、專利、以及其他參考文獻均作為整體被引入作為參考。如果存在矛盾的情形，所述的說明書，包括定義，將起到主導(dǎo)作用。除此之外，所述的材料、方法、以及實施例僅僅是描述性的并且并不意在構(gòu)成限制。本發(fā)明的其他特征以及優(yōu)點將通過下面的詳細描述以及所述的權(quán)利要求而變得顯而易見。具體實施方式本發(fā)明是以對于下述植物的令人驚奇的發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)的：與一種野生型的對照組相比，所述的植物對熱脅迫具有增強的耐受性，這種耐受性導(dǎo)致了增加的產(chǎn)量。更具體的，本發(fā)明是以下述發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)的：增加所述的MYB-亞群14多肽(例如，MYB68)的表達導(dǎo)致了一種植物的產(chǎn)生，所述的植物對熱脅迫具有增強的抗性。MYB-亞群14多肽的表達可以通過例如下述方式來完成：通過增加所述的內(nèi)源性MYB-亞群14多肽的表達(例如，激活標(biāo)簽的插入)的方式或者通過編碼MYB-亞群14多肽的外源性基因構(gòu)建體的表達的方式。所述的用于編碼所述MYB-亞群14多肽的基因?qū)τ诒晦D(zhuǎn)化的物種而言可以是內(nèi)源性的或者是外源性的。正如實施例中所表示的，對熱脅迫具有增強的抗性的植物不僅僅是通過利用其自身的MYB-亞群14多肽對植物進行轉(zhuǎn)化而制備得到的，而且也包括利用來自于另外一個植物物種的MYB-亞群14多肽對植物進行轉(zhuǎn)化。因此本發(fā)明提供了用以增強(例如，增加)植物的熱脅迫耐受性的方法，其中所述的方法通過增加所述的MYB亞群-14多肽的表達來實現(xiàn)。同樣被包括在本發(fā)明之內(nèi)的是一種識別熱脅迫耐受性植物的方法。與一種對照植物相比，通過這些方法識別出的所述植物具有減少的花朵敗育以及增加的產(chǎn)量。熱脅迫耐受性的植物是通過下述方式被識別出來的：將一群開花植物暴露于熱脅迫處理中并且從上述的植物群體中選擇一種具有減少的花朵敗育的植物。本發(fā)明同樣包括由本發(fā)明中所述的方法制備得到的轉(zhuǎn)基因植物，以及由所述的轉(zhuǎn)基因植物所生產(chǎn)的種子，其中所述的種子能夠生產(chǎn)出一種對熱脅迫具有耐受性的植物。除非另外定義，這里所使用的全部的技術(shù)術(shù)語以及科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同的含義。盡管在本發(fā)明的實踐或者檢驗過程中可能使用到那些與這里所描述的方法以及材料相類似或者等價的方法以及材料，適宜的方法以及材料在下文中進行了描述。這里所提及的全部出版物、專利申請、專利、以及其他參考文獻均作為整體被引入作為參考。如果存在矛盾的情形，所述的說明書，包括定義，將起到主導(dǎo)作用。除此之外，所述的材料、方法、以及實施例僅僅是描述性的并且并不構(gòu)成限制。出于方便的目的，在對本發(fā)明進行進一步的描述之前，在這里對所述的說明書、實施例及后附的權(quán)利要求中使用到的某些術(shù)語進行定義。這些定義應(yīng)當(dāng)依照所述的公開內(nèi)容的其余部分以及按照所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員的理解來進行閱讀。所述的術(shù)語“組成性表達”指的是基因通過一種不規(guī)則的方式以恒定的水平在任意的細胞中所進行的表達。所述的術(shù)語“cMYB”以及“MYB”指的是MYB的cDNA克隆，并且兩者是可以互換使用的。在使用到或者提及到基因組序列的情況下，利用所述的術(shù)語“gMYB”或者“基因組MYB”對其進行識別以及區(qū)分，從而指的是基因組MYB序列。所述的術(shù)語“異位表達”指的是相對于所述的內(nèi)源性基因表達而言，基因在有機體的異常位置處所進行的表達。異位表達可能包括進行了組成性表達的基因，這取決于所述的給定基因的天然表達類型。所述的術(shù)語“表達盒”指的是一種載體構(gòu)建體，基因在所述的載體構(gòu)建體中進行轉(zhuǎn)錄。除此之外，所述的經(jīng)表達的mRNA(信使核糖核酸)可以被翻譯成一種多肽。所述的術(shù)語“表達”或者“過表達”可以互換使用并且指的是能夠進行轉(zhuǎn)基因的表達的一種基因的表達形式。可以使一個細胞中的全部表達水平相對于野生型細胞而言發(fā)生提升。“花朵敗育”指的是不能發(fā)育并且生產(chǎn)出果實或者種子的花朵。除了花朵的早熟性衰老之外，花朵敗育可以指的是花粉產(chǎn)量的損失，授粉以及授精的改變以及隨后的種子發(fā)育。分生組織的生長以及發(fā)育的改變，特別是花朵分生組織的生長以及發(fā)育的改變，也進一步的被包括在所述的花朵敗育的含義之內(nèi)。所述的術(shù)語“熱耐受性”被定義為一種表現(xiàn)型，在所述的表現(xiàn)型中，一種植物或者植物系具有增強的能力，能夠抵擋住升高的溫度，并且與另外一種植物或者植物系相比較，其生產(chǎn)的產(chǎn)量超過所述的另外一種植物或者植物系，其中所述的另外一種植物系是一種對照植物，例如是一種野生型對照植物系?！皢幼有蛄小保蛘摺皢幼印?，指的是一種核酸序列，所述的核酸序列能夠在一種植物細胞中誘導(dǎo)一種可操作性連接的基因序列進行轉(zhuǎn)錄。所述的術(shù)語“結(jié)實”是種子的形成，所述的種子的形成是花朵的授粉以及隨后的卵細胞的授精以及受精卵的發(fā)育所產(chǎn)生的結(jié)果。結(jié)實的減少將對所生產(chǎn)的種子數(shù)量形成聯(lián)網(wǎng)式的減少(netreduction)，其中所述的結(jié)實的減少的發(fā)生可能歸因于上述任意一個步驟的中斷。所述的術(shù)語“本質(zhì)上相類似”指的是當(dāng)核酸中的一個或者多個核苷發(fā)生變化時，并不會對所述的核酸或者其編碼的多肽的功能性質(zhì)產(chǎn)生改變。由于所述的遺傳密碼的退化，一個堿基對的改變可能不會在所述被編碼的氨基酸序列中產(chǎn)生變化。例如，所述的密碼子ACT，ACC，ACA以及ACG全部編碼一種蘇氨酸氨基酸。或者，一個或者多個堿基對的改變可能使所述被編碼的氨基酸產(chǎn)生變化，然而如果所述的替代氨基酸具有相類似的化學(xué)性質(zhì)，那么所述被編碼的蛋白的功能性可能不會受到影響。例如，當(dāng)蘇氨酸密碼子ACT以及ACC分別變化為AGT或者AGC時，其編碼絲氨酸，一種化學(xué)性質(zhì)以及生物性質(zhì)相類似的氨基酸。除此之外，在多肽中的某些氨基酸是非必需的，因而可以在這些位置處進行改變，而不會對所述多肽的功能性產(chǎn)生影響。本質(zhì)上相類似同樣指的是在一個或者多個核苷堿基上存在變化的序列，其中所述的變化不會對所述序列改變基因表達的能力產(chǎn)生影響，這是通過各種基因沉默方法來完成的，所述的基因沉默方法是例如反義RNAi或者共抑制。所述的術(shù)語“本質(zhì)上相類似”指的是在一個或者多個氨基酸上存在變化的多肽，如上所述，其中所述的變化不會對所述多肽的功能性質(zhì)產(chǎn)生改變。所述的術(shù)語“產(chǎn)量”指的是種子的數(shù)量，種子的重量，種子的大小，全部植物的生物量，增加的植物器官的生物量，果實的產(chǎn)量，以及花朵的產(chǎn)量，其中所述的植物器官是例如莖或者葉片或者根。所述的術(shù)語“產(chǎn)量保護”被定義為當(dāng)經(jīng)過了強加的脅迫之后，存在于所述的轉(zhuǎn)基因或者突變體的產(chǎn)量與所述的對照產(chǎn)量之間的正向差異，用％值來表示，其中所述的產(chǎn)量被表示成最佳產(chǎn)量的％。通過對所述的最佳產(chǎn)量與經(jīng)過了所述的脅迫處理之后的產(chǎn)量進行比較來完成所述的計算(脅迫產(chǎn)量/最佳產(chǎn)量x100)。根據(jù)序列的同源性以及上述定義的結(jié)構(gòu)域以及基序的存在將所述的MYB基因家族進行分類，其中上述定義的結(jié)構(gòu)域是例如R2R3結(jié)構(gòu)域。所述的分類并不是在所有的情況下都是絕對的，可以根據(jù)進行分析所選擇的標(biāo)準(zhǔn)發(fā)生改變(參見Krantz等人于1998年發(fā)表的文章，Stracke等人于2001年發(fā)表的文章)。在這里我們所定義的所述MYB-亞群14包括至少下述的成員，MYB68，MYB36，MYB37，MYB38以及MYB87。依照這里所描述的方法以及表格1中所涵蓋的實施例，利用所述的AtMYB68，MYB36，MYB84，MYB37，MYB38以及MYB87序列從其他的物種中對同系物進行識別。所述的術(shù)語“MYB序列”指的是一種在前后文中適宜的多核苷酸序列或者多肽序列。序列下述是來自于所述的MYB-亞群14家族中的序列，以及相應(yīng)的序列標(biāo)識符，這些序列以及序列標(biāo)識符是在所述的說明書、實施例以及后附的權(quán)利要求中使用到的序列以及標(biāo)識符：表1確定兩個序列或者多個序列之間的同源性為了確定兩個氨基酸序列或者兩個核酸的同源性百分?jǐn)?shù)，對所述的序列進行比對從而達到進行最佳比較的目的(例如，為了在所述的序列間進行最佳的比較，可以向進行比較的所述序列中的任何一個中導(dǎo)入缺口)。之后對處于相對應(yīng)的氨基酸位置或者核苷位置處的氨基酸殘基或者核苷進行比較。當(dāng)所述的第一個序列中的一個位置被一種氨基酸殘基或者核苷占據(jù)，而所述的氨基酸殘基或者核苷與所述的第二個序列中的相對應(yīng)的位置處的氨基酸殘基或者核苷相同時，那么在這個位置上所述的分子是同源的(即，在這里所使用的氨基酸或者核酸的“同源性”等同于氨基酸或者核酸的“同一性”)?？梢岳脙蓚€序列之間的同一性的程度來確定所述的核酸序列的同源性?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的計算機程序?qū)λ龅耐葱赃M行確定，所述的計算機程序是例如由GCG程序包提供的GAP軟件。參見，Needleman以及Wunsch于1970年在JMolBiol《分子生物學(xué)雜志》48：443-453中發(fā)表的文章。使用GCGGAP軟件并且進行下述的設(shè)定以進行核酸序列的比較：空位罰分(gapcreationpenalty)為5.0并且空位拓展罰分(gapextensionpenalty)為0.3，上述提及的所述相似的核酸序列的編碼區(qū)域展現(xiàn)出的同一性的程度優(yōu)選至少為70％，75％，80％，85％，90％，95％，98％，或者99％，其中所述的DNA序列的所述編碼序列(編碼)如表格1中所示。所述的術(shù)語“序列同一性”指的是在一段特定的比較區(qū)域內(nèi)，兩個多核苷酸序列或者多肽序列就每個殘基而言是相同的的程度。所述的術(shù)語“序列同一性的百分?jǐn)?shù)”是通過下述方式進行計算的：在進行比較的區(qū)域內(nèi)對兩個進行最佳比對的序列進行比較，確定同時在兩個序列中出現(xiàn)的所述相同的核酸堿基(例如，對于核酸而言，為A，T，C，G，U，或者I)的位置的數(shù)量，從而獲得所述的匹配位置的數(shù)量，將所述的匹配位置的數(shù)量除以位于所述的比較區(qū)域內(nèi)的位置的總數(shù)量(即，窗口的大小)，并且將上述得到的結(jié)果乘以100，從而獲得所述的序列同一性的百分?jǐn)?shù)。這里所使用的所述術(shù)語“本質(zhì)上的同一性”代表的是一種多核苷酸序列的性質(zhì)，其中所述的多核苷酸包括一種序列，所述的序列與一種參考序列相比，在比較區(qū)域內(nèi)具有至少80％的序列同一性，優(yōu)選具有至少85％的序列同一性并且通常具有90％至95％的序列同一性，更加通常具有至少99％的序列同一性。所述的術(shù)語“正向殘基(positiveresidue)的百分含量”是通過下述方式進行計算的：在進行比較的區(qū)域內(nèi)對兩個進行最佳比對的序列進行比較，如上文中所定義，確定同時在兩個序列中出現(xiàn)的所述相同的以及保守的氨基酸取代的位置的數(shù)量，從而獲得所述的匹配位置的數(shù)量，將所述的匹配位置的數(shù)量除以位于所述的比較區(qū)域內(nèi)的位置的總數(shù)量(即，窗口的大小)，并且將上述得到的結(jié)果乘以100，從而獲得所述的正向殘基的百分含量。重組表達載體以及宿主細胞本發(fā)明的另外一個方面是關(guān)于載體的，優(yōu)選是表達載體，所述的載體含有一種核酸，所述的核酸編碼一種MYB-亞群14蛋白、基因、其類似物或者同系物。所述的用以編碼MYB-亞群14多肽的序列可以是一種基因組序列或者是一種cDNA序列。這里所使用的所述術(shù)語表達載體包括那些被設(shè)計成用來提供所述的核酸序列的轉(zhuǎn)錄的載體。所述的經(jīng)過轉(zhuǎn)錄的核酸可以被翻譯成一種多肽產(chǎn)品或者蛋白產(chǎn)品。這里所使用的所述術(shù)語“載體”指的是一種核酸分子，所述的核酸分子能夠?qū)⒘硗庖环N核酸運送到與其進行連接的位置處。一種類型的載體是“質(zhì)粒”，它指的是一種環(huán)形的雙鏈DNA閉合環(huán)，可以在其中進行另外的DNA片段的連結(jié)。另外一種類型的載體是一種病毒載體，其中另外的DNA片段可以在所述的病毒基因組中進行連結(jié)。某些載體能夠在它們導(dǎo)入的宿主細胞中進行自主的復(fù)制(例如，細菌載體具有一種用于復(fù)制的細菌起源)。其他的載體通過向所述的宿主細胞中的導(dǎo)入作用，被整合到所述的宿主細胞的基因組中，并且因而沿所述的宿主基因組進行復(fù)制。而且，某些載體能夠?qū)⑺龌虻谋磉_導(dǎo)向與它們進行可操作性的連接的位置處。這樣的載體在這里被稱為“表達載體”。一般而言，在重組DNA技術(shù)中有效利用的表達載體通常是以質(zhì)粒的形式存在的。在本說明書中，由于所述的質(zhì)粒是載體的最常見的使用形式，“質(zhì)?！币约啊拜d體”可以進行互換使用。然而，本發(fā)明意在包括那些其他類型的表達載體，例如病毒載體或者植物轉(zhuǎn)化載體，二元載體(binary)或者另外的能夠提供同等功能的載體。本發(fā)明中所述的重組表達載體包括本發(fā)明所述的核酸，其中所述的核酸以一種適合于所述的核酸在宿主細胞中進行表達的形式存在，這意味著所述的重組表達載體包括一個或者多個調(diào)控序列，它是以需要用來進行表達的所述宿主細胞為依據(jù)進行選擇的，所述的調(diào)控序列與需要進行表達的所述核酸序列進行了可操作性的連接。在一個重組表達載體中，“可操作性的連接”意在表明所述的目標(biāo)核苷酸序列與所述的調(diào)控序列進行了連接，所述的連接是以一種允許所述的核苷酸序列進行表達的方式進行的(例如，在一種體外轉(zhuǎn)錄/翻譯體系中或者在一種宿主細胞中，當(dāng)所述的載體被導(dǎo)入到所述的宿主細胞中時)。所述的術(shù)語“調(diào)控序列”意在包括啟動子，增強子以及其他的表達控制元件(例如，多聚腺苷酸化作用信號)。這樣的調(diào)控序列在例如下述文獻中進行了描述：Goeddel于1990年發(fā)表的文章GENEEXPRESSIONTECHNOLOGY：METHODSINENZYMOLOGY《基因表達技術(shù)：酶學(xué)方法》185，AcademicPress(學(xué)術(shù)出版社)，SanDiego(圣地亞哥)，Calif.(加利福尼亞)。調(diào)控序列包括那些指導(dǎo)核苷酸序列在許多類型的宿主細胞中進行組成性表達的序列，以及那些指導(dǎo)所述的核苷酸序列僅在某些宿主細胞中(例如，組織特異性調(diào)控序列)或者在誘導(dǎo)型啟動子中進行表達的序列(例如，誘導(dǎo)對于非生物因素的應(yīng)答以及對于生物的應(yīng)答，其中所述的非生物因素是例如所述細胞的環(huán)境條件，熱，干旱，營養(yǎng)狀態(tài)或者生理學(xué)狀態(tài)，其中所述的生物因素是例如病原體應(yīng)答性的)。適合的啟動子的例子包括例如組成型啟動子，脫落酸(ABA)誘導(dǎo)型啟動子，組織特異性啟動子以及非生物性或者生物性誘導(dǎo)型啟動子。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠預(yù)期到，對于所述的表達載體的設(shè)計能夠取決于下列因素例如對于需要進行轉(zhuǎn)化的所述宿主細胞的選擇，所期望的蛋白表達水平以及時機和表達位置，等等?？梢詫⒈景l(fā)明所述的表達載體導(dǎo)入到宿主細胞中從而制成蛋白或者肽，包括融合蛋白或者肽，其中所述的蛋白或者肽是由本發(fā)明所描述的核酸進行編碼的(例如，MYB-亞群14蛋白例如MYB68蛋白，MYB68蛋白的突變體形式，融合蛋白，等等)。可以對本發(fā)明中所述的重組表達載體進行設(shè)計，使其能夠使MYB-亞群14基因或者MYB-亞群14蛋白在原核細胞或者真核細胞中進行表達。例如，MYB-亞群14基因或者MYB-亞群14蛋白可以在細菌細胞、昆蟲細胞(使用桿狀病毒表達載體)、酵母細胞、植物細胞或者哺乳動物細胞中進行表達，其中所述的細菌細胞是例如大腸桿菌。適合的宿主細胞在下述文獻中進行了進一步的討論：Goeddel于1990年發(fā)表的文章GENEEXPRESSIONTECHNOLOGY：METHODSINENZYMOLOGY《基因表達技術(shù)：酶學(xué)方法》185，AcademicPress(學(xué)術(shù)出版社)，SanDiego(圣地亞哥)，Calif.(加利福尼亞)?？梢赃x擇的，所述的重組表達載體可以在體外進行轉(zhuǎn)錄以及翻譯，例如使用T7啟動子調(diào)控序列以及T7聚合酶。在一種實施方式中，使用一種植物表達載體使本發(fā)明所述的核酸在植物細胞中進行表達。植物表達載體系統(tǒng)的例子包括在農(nóng)桿菌(Agrobacterium)中發(fā)現(xiàn)的腫瘤誘導(dǎo)(Ti)質(zhì)粒或者是上述質(zhì)粒的一部分，花椰菜花葉病毒(CAMV)DNA以及例如pBI121這樣的載體，pCAMBA種類的載體或者本領(lǐng)域技術(shù)人員優(yōu)先選擇的一種載體。為了在植物中進行表達，除了MYB-亞群14多核苷酸之外，所述的重組表達盒中還將含有能夠在植物細胞中發(fā)揮功效的啟動子區(qū)域，轉(zhuǎn)錄開始位點(如果需要進行轉(zhuǎn)錄的所述編碼序列缺少位點的話)，以及轉(zhuǎn)錄終止/多聚腺苷酸化作用序列。所述的終止/多聚腺苷酸化作用區(qū)域可以從與所述的啟動子序列相同的基因中獲得，或者可以從不同的基因中獲得。存在于所述的表達盒的5’端以及3’端處的獨特的限制酶位點通常被包括在內(nèi)，從而能夠容易的插入到一種預(yù)先存在的載體當(dāng)中。適合的植物可表達性啟動子的例子包括來自于植物病毒的啟動子，例如所述的來自于花椰菜花葉病毒(CaMV)的35S啟動子(參見Odell等人于1985年在Nature《自然》313：810-812中發(fā)表的文章)，來自于基因的啟動子例如水稻肌動蛋白(參見McElroy等人于1990年在PlantCell《植物細胞》163-171中發(fā)表的文章)，泛素(參見Christensen等人于1992年在PlantMol.Biol.《植物分子生物學(xué)》12：619-632中發(fā)表的文章；以及Christensen等人于1992年在PlantMol.Biol.《植物分子生物學(xué)》18：675-689中發(fā)表的文章)，pEMU(參見Last等人于1991年在Theor.Appl.Genet.《理論及應(yīng)用遺傳學(xué)》81：581-588中發(fā)表的文章)，甘露堿合成酶基因啟動子(MAS)(參見Velten等人于1984年在EMBOJ.《歐洲分子生物學(xué)學(xué)會雜志》3：2723-2730中發(fā)表的文章)，玉米H3組蛋白(參見Lepetit等人于1992年在Mol.Gen.Genet.《分子遺傳學(xué)與普通遺傳學(xué)》231：276-285中發(fā)表的文章；以及Atanassvoa等人于1992年在PlantJournal《植物學(xué)雜志》2(3)：291-300中發(fā)表的文章)，來自于根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)的T-DNA的5’-或者3’-啟動子，Smas啟動子，杜仲肉桂醇脫氫酶啟動子(美國專利No.5683439)，胭脂氨酸合成酶(Nos)啟動子，二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)啟動子，富甘氨酸蛋白質(zhì)基因(GRP)-18啟動子，ALS啟動子(WO96/30530)，合成啟動子，例如Rsyn7啟動子，單細胞蛋白(SCP)啟動子以及偶聯(lián)蛋白(UCP)啟動子，1，3-二磷酸核酮糖羧化酶，果實特異性啟動子，熱休克啟動子，種子特異性啟動子以及其他來自于各種不同的植物基因的轉(zhuǎn)錄開始區(qū)域，例如，包括各種不同的opine開始區(qū)域，例如，章魚堿，甘露堿，以及胭脂氨酸。有用的啟動子同樣包括熱誘導(dǎo)型啟動子例如所述的熱休克蛋白(HSP)18.2啟動子或者熱休克蛋白(HSP)81.1啟動子(參見Takahashi等人于1992年在PlantJ.《植物學(xué)雜志》2，751-761中發(fā)表的文章；Yoshida等人于1995年在Appl.Microbiol.Biotechnol.《應(yīng)用微生物學(xué)與生物技術(shù)》44，466-472中發(fā)表的文章；Ueda等人于1996年在MolGenGenet《分子遺傳學(xué)與普通遺傳學(xué)》250：533-539中發(fā)表的文章)。潛在啟動子同樣能夠有效的用于本發(fā)明中可以使用的嵌合構(gòu)建體。當(dāng)潛在基因調(diào)控元件存在于它們在所述的基因組中的本來位置處時，是不具備活性的，但是當(dāng)將其放置于鄰近轉(zhuǎn)基因植物的基因位置處時，它們具有完全的功能。除了嵌合啟動子-基因構(gòu)建體之外，可以預(yù)期到天然存在的MYB-亞群14啟動子的用途。通過調(diào)控元件的納入，可以對一種天然啟動子的表達性質(zhì)進行修飾，這樣一來表達水平被提升和/或進行異位的表達和/或進行組成性的表達。例如，可以在一種構(gòu)建體中納入四個(4X)35S增強子序列(參見Wiegel等人于2000年發(fā)表的文章)，用以增強表達?；蛘?，可以利用一種含有四個35S增強子序列的構(gòu)建體進行轉(zhuǎn)化，從而制備一類植物群體，其中所述的構(gòu)建體是例如Wiegel等人于2000年發(fā)表的文章中所描述的pSKI15載體?？梢詫ι鲜鼋?jīng)過轉(zhuǎn)化的群體進行篩選，從而篩選出具有增強的MYB-亞群14序列的表達的植物，或者篩選出具有增強的熱耐受性以及減少的花朵敗育的植物，或者進行這類篩選的組合，從而對目標(biāo)植物進行識別。為了在植物細胞中進行表達，能夠與編碼MYB-亞群14的核酸序列進行連接的其他的調(diào)控元件包括終止子，多聚腺苷酸化作用序列，以及編碼信號肽的核酸序列，其允許存在于植物細胞中或者將所述的蛋白從所述的細胞中分泌出來。這樣的調(diào)控元件以及將這些元件加入到MYB-亞群14基因的調(diào)控元件之中或者利用這些元件與MYB-亞群14基因中的調(diào)控元件進行交換的方法是本領(lǐng)域已知的，并且包括，但不局限于，3’終止和/或多聚腺苷酸化作用區(qū)域例如所述的根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)胭脂氨酸合成酶(nos)基因中的3’終止和/或多聚腺苷酸化作用區(qū)域(參見Bevan等人于1993年在Nucl.AcidsRes.《核酸研究》12：369-385中發(fā)表的文章)；馬鈴薯蛋白酶抑制劑II(PINII)基因中的3’終止和/或多聚腺苷酸化作用區(qū)域(參見Keil等人于1986年在Nucl.AcidsRes.《核酸研究》14：5641-5650中發(fā)表的文章并且在此被引入作為參考；以及An等人于1989年在PlantCell《植物細胞》1：115-122中發(fā)表的文章)；以及所述的花椰菜花葉病毒19S基因中的3’終止和/或多聚腺苷酸化作用區(qū)域(參見Mogen等人于1990年在PlantCell《植物細胞》2：1261-1272中發(fā)表的文章)。植物信號序列，包括，但不局限于，編碼信號肽的DNA/RNA序列，所述的序列將蛋白靶向定位于(targetproteinsto)所述的植物細胞的細胞外基質(zhì)(參見Dratewka-Kos等人于1989年在J.Biol.Chem.《生物化學(xué)雜志》264：4896-4900中發(fā)表的文章)以及所述的皺葉煙草(Nicotianaplumbaginifolia)的延伸基因(參見DeLoose等人于1991年在Gene《基因》99：95-100中發(fā)表的文章)，或者所述的信號肽將蛋白靶向定位于所述的液泡，如所述的甘薯貯藏蛋白基因(參見Matsuka等人于1991年在Proc.Nat’lAcad.Sci.(USA)《美國科學(xué)院院刊》88：834中發(fā)表的文章)以及所述的大麥凝集素基因(參見Wilkins等人于1990年在PlantCell《植物細胞》2：301-313中發(fā)表的文章)，或者所述的信號能夠引起蛋白的分泌例如PRIb的信號(參見Lind等人于1992年在PlantMol.Biol.《植物分子生物學(xué)》18：47-53中發(fā)表的文章)，或者是那些將蛋白靶向定位于所述的質(zhì)體的信號例如油菜籽脂烯酰基?；d體蛋白(enoyl-ACP)還原酶的信號，這些都可以有效的用于本發(fā)明之中。在另外一種實施方式中，所述的重組表達載體能夠指導(dǎo)所述的核酸優(yōu)先在一種特定的細胞類型中進行表達(例如，組織特異性調(diào)控元件被用來進行所述核酸的表達)。組織特異性調(diào)控元件是本領(lǐng)域已知的。能夠與本發(fā)明中所述的核酸進行特別有效的連接的是表達系統(tǒng)，所述的表達系統(tǒng)可以在植物中進行操作。這些系統(tǒng)包括受到組織特異性啟動子的控制的系統(tǒng)，以及那些包括能夠在所有的植物組織中進行操作的啟動子的系統(tǒng)。器官特異性啟動子同樣是熟知的。例如，所述的查爾酮合成酶-A基因(參見vanderMeer等人于1990年在PlantMolecularBiology《植物分子生物學(xué)》15(1)：95-109中發(fā)表的文章)或者所述的二氫黃酮醇-4-還原酶(dfr)啟動子(參見Elomaa等人在ThePlantJournal《植物學(xué)雜志》16(1)93-99中發(fā)表的文章)能夠在特異性的花朵組織中指導(dǎo)表達。同樣可以利用的是所述的patatinI類啟動子，所述的啟動子僅僅能夠在所述的馬鈴薯塊莖中發(fā)生轉(zhuǎn)錄活化，并且可以被用來作用于在所述的塊莖中發(fā)生的基因表達(參見BevanM.于1986年在NucleicAcidsResearch《核酸研究》14：4625-4636中發(fā)表的文章)。另外一種馬鈴薯特異性啟動子是所述的顆粒結(jié)合型淀粉合成酶(GBSS)啟動子(參見VisserR.G.R.等人于1991年在PlantMolecularBiology《植物分子生物學(xué)》17：691-699中發(fā)表的文章)?？梢允褂靡阎牟襟E對其他的器官特異性啟動子進行分離，其中所述的器官特異性啟動子對于一種目標(biāo)靶向器官而言是適合的。這些控制序列通常是與一類基因相關(guān)聯(lián)的，這類基因能夠在所述的目標(biāo)器官中進行唯一的表達。在一種典型的高等植物中，每個器官中含有數(shù)以千計的mRNA，這些mRNA在其他的器官系統(tǒng)中是不存在的(參見GoldbergP.于1986年在Trans.R.Soc.LondonB《皇家學(xué)會哲學(xué)匯刊，B輯》314：343中發(fā)表的文章)。上述得到的表達系統(tǒng)或者表達盒被連結(jié)在或者另外通過進行構(gòu)建而被納入到一種重組載體之中，其中所述的重組載體是適于進行植物的轉(zhuǎn)化的。所述的載體中還可以含有選擇性標(biāo)記基因，通過所述的選擇性標(biāo)記基因，可以在培養(yǎng)中對經(jīng)過轉(zhuǎn)化的植物細胞進行識別。所述的標(biāo)記基因可以編碼抗生素抗性。這些標(biāo)記包括對于G418的抗性，對于潮霉素的抗性，對于博來霉素的抗性，對于卡那霉素的抗性，以及對于慶大霉素的抗性?；蛘咚龅臉?biāo)記基因能夠編碼一種具有除草劑耐受性的基因，從而提供對于草銨膦類型或者草甘膦類型的除草劑的耐受性。在對所述的植物細胞進行轉(zhuǎn)化之后，通過其能夠在含有所述的特定抗生素或者除草劑的培養(yǎng)基中進行生長的能力，將能夠識別出那些含有所述的載體的細胞。起源于細菌或者病毒的復(fù)制序列通常也是被包括在內(nèi)的，從而允許所述的載體在一種細菌宿主或者噬菌體宿主中進行克隆，優(yōu)選被包括在內(nèi)的是一種具有廣泛的宿主范圍的起源于原核的復(fù)制。一種細菌的選擇性標(biāo)記同樣也應(yīng)當(dāng)被包括在內(nèi)，從而允許對承載了所述的目標(biāo)構(gòu)建體的細菌細胞進行選擇。適合的原核選擇性標(biāo)記同樣包括對于抗生素的抗性，其中所述的抗生素是例如卡那霉素或者四環(huán)素。正如本領(lǐng)域中所已知的，用于編碼額外功能的其他DNA序列同樣可以存在于所述的載體之中。例如，在進行農(nóng)桿菌(Agrobacterium)轉(zhuǎn)化的情形中，為了隨后向植物染色體中進行轉(zhuǎn)移，T-DNA序列同樣也應(yīng)當(dāng)被包括在內(nèi)。本發(fā)明的另外一個方面是關(guān)于宿主細胞的，在所述的宿主細胞中導(dǎo)入本發(fā)明中所述的重組表達載體。所述的術(shù)語“宿主細胞”以及“重組宿主細胞”在本文中可以互換使用?？梢岳斫獾氖?，這些術(shù)語不僅僅指的是具體的宿主細胞，其同樣指代所述的這種細胞的后裔或者潛在的后裔。由于突變或者環(huán)境影響的原因，在接下來的世代中可能發(fā)生某些修飾，這使得這樣的后裔實際上不同于所述的母本細胞，但其仍然被包括在這里所使用的所述術(shù)語的范圍之內(nèi)?？梢越?jīng)由傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)化技術(shù)或者轉(zhuǎn)染技術(shù)，將載體DNA導(dǎo)入到原核細胞或者真核細胞之中。這里所使用的所述術(shù)語“轉(zhuǎn)化”以及“轉(zhuǎn)染”意在指代本領(lǐng)域認(rèn)知的用于向一種宿主細胞中導(dǎo)入一種外源核酸(例如，DNA)的各種技術(shù)。本發(fā)明中所述的宿主細胞，例如在培養(yǎng)之中的原核宿主細胞或者真核宿主細胞，可以被用來制備(即，表達)本發(fā)明所述的多肽，其中所述的多肽是在本發(fā)明中所述的多核苷酸的開放閱讀框中進行編碼的。因此，本發(fā)明進一步提供用于制備一種多肽的方法，其中所述的方法使用了本發(fā)明中所述的宿主細胞。在一種實施方式中，所述的方法包括在一種適合的培養(yǎng)基中培養(yǎng)本發(fā)明中所述的宿主細胞(向所述的宿主細胞中導(dǎo)入編碼本發(fā)明所述的多肽的重組表達載體)，從而制備出所述的多肽。在另外一種實施方式中，所述的方法進一步包括從所述的培養(yǎng)基或者所述的宿主細胞中分離所述的多肽。許多類型的細胞可以作為適合的宿主細胞被用于進行多肽的表達，其中所述的多肽是由本發(fā)明中所述的多核苷酸的開放閱讀框進行編碼的。植物宿主細胞包括，例如，能夠發(fā)揮適合的宿主功能、用于進行本發(fā)明中所述的多核苷酸的表達的植物細胞包括來自于各種不同的植物種類的表皮細胞，葉肉以及其他的基本組織，以及葉片中的脈管組織，莖，花朵器官，以及根，其中所述的各種不同的植物種類是例如擬南芥屬(Arabidopsis)，蕓薹屬(Brassica)，稻屬(Oryza)，玉蜀黍?qū)?Zea)，高粱(Sorghum)，棉花屬(Gossypium)，小麥屬(Triticum)，豆屬(Glycine)，豌豆(Pisum)，菜豆屬(Phaseolus)，番茄屬(Lycopersicon)，三葉草(Trifolium)，大麻(Cannabis)，南瓜(Cucurbita)，薔薇(Rosa)，葡萄(Vitis)，胡桃(Juglans)，草莓(Fragaria)，蓮花(Lotus)，苜蓿(Medicago)，驢豆(Onobrychis)，葫蘆巴(Trigonella)，豇豆(Vigna)，柑橘屬(Citrus)，亞麻屬(Linum)，天竺葵(Geranium)，木薯(Manihot)，胡蘿卜屬(Daucus)，蘿卜屬(Raphanus)，芥子屬(Sinapis)，顛茄屬(Atropa)，辣椒屬(Capsicum)，曼陀羅(Datura)，莨菪屬(Hyoscyamus)，煙草(Nicotiana)，茄屬(Solanum)，矮牽牛(Petunia)，洋地黃(Digitalis)，墨角蘭(Majorana)，菊苣屬(Cichorium)，向日葵(Helianthus)，萵苣屬(Lactuca)，雀麥屬(Bromus)，蘆筍(Asparagus)，金魚草屬(Antirrhinum)，萱草屬(Hemerocallis)，Nemesis，天竺葵屬(Pelargonium)，黍櫻(Panieum)，狼尾草(Pennisetum)，毛茛屬(Ranunculus)，千里光(Senecio)，蛾蝶花(Salpiglossis)，黃瓜屬(Cucumis)，藍英花(Browallia)，黑麥草屬(Lolium)，燕麥屬(Avena)，大麥屬(Hordeum)，黑麥屬(Secale)，云杉屬(Picea)，Caco，以及楊屬(Populus)。保守性突變除了可能存在于所述群體之中的MYB-亞群14或者MYB68序列的天然發(fā)生的等位基因突變體之外，所述的熟練技術(shù)人員將能夠進一步的預(yù)期到，可以通過突變方式向具有下述序列識別號的核苷酸序列中導(dǎo)入變化，所述的序列為：序列1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，88，90，91，92，94，96，98，100，102，104，106，108，109，110，112，114，116，118，120，122，124，125，127，129，130，132，134，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，211，213，214，216，217，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，247，249，251，253，255，257，259，261，263以及265，從而使所述的經(jīng)過編碼的MYB-亞群14或者MYB68蛋白的氨基酸序列發(fā)生變化，并且不改變所述的MYB-亞群14或者MYB68蛋白的功能性能力。例如，可以在具有下述序列識別號的序列中利用核苷酸取代引發(fā)在“非必需”氨基酸殘基上的氨基酸取代，所述的序列為：序列2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，89，93，95，97，99，101，103，105，107，111，113，115，117，119，121，123，126，128，131，133，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，212，215，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，248，250，252，254，256，258，260，262以及264?！胺潜匦琛卑被釟埢傅氖沁@樣的一種殘基，其可以從所述的MYB-亞群14或者MYB68野生型序列中發(fā)生改變，但不會改變所述的生物活性，而“必需”氨基酸殘基是生物活性所需要的。例如，存在于本發(fā)明所述的MYB-亞群14或者MYB68蛋白中的保守的氨基酸殘基被預(yù)測為是不理想的改變性質(zhì)的候選者。對于保守性區(qū)域的比對以及識別在本發(fā)明中進行了描述，并且這種比對以及識別為必需氨基酸以及保守性氨基酸的識別提供了進一步的指導(dǎo)。本發(fā)明的另外一個方面是關(guān)于核酸分子的，其中所述的核酸分子編碼一種MYB-亞群14或者MYB68蛋白，在所述的MYB-亞群14或者MYB68蛋白中存在著氨基酸殘基上的變化，這些氨基酸殘基對于活性而言不是必需的。這樣的MYB-亞群14或者MYB68蛋白與具有下列序列識別號的序列的氨基酸序列存在不同但仍然保留了生物學(xué)活性，其中所述的序列為：序列2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，89，93，95，97，99，101，103，105，107，111，113，115，117，119，121，123，126，128，131，133，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，212，215，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，248，250，252，254，256，258，260，262以及264。在一種實施方式中，所述的被分離的核酸分子包括一種編碼蛋白的核苷酸序列，其中所述的蛋白包括一種氨基酸序列，所述的氨基酸序列與具有下述序列識別號的氨基酸序列存在至少大約75％的同源性，其中所述的序列為：序列2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，89，93，95，97，99，101，103，105，107，111，113，115，117，119，121，123，126，128，131，133，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，212，215，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，248，250，252，254，256，258，260，262以及264。優(yōu)選的，由所述的核酸編碼的所述蛋白與具有下述序列識別號的序列存在至少大約80％的同源性，其中所述的序列為：序列2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，89，93，95，97，99，101，103，105，107，111，113，115，117，119，121，123，126，128，131，133，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，212，215，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，248，250，252，254，256，258，260，262以及264，更加優(yōu)選與具有下述序列識別號的序列具有至少大約90％、95％、98％、并且最優(yōu)選具有至少大約99％的同源性，其中所述的序列為：序列2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，89，93，95，97，99，101，103，105，107，111，113，115，117，119，121，123，126，128，131，133，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，212，215，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，248，250，252，254，256，258，260，262以及264。一種經(jīng)過分離的核酸分子，所述的核酸分子編碼一種MYB-亞群14或者MYB68蛋白，其中所述的MYB-亞群14或者MYB68蛋白與具有下述序列識別號的蛋白是同源的，其中所述的序列為：序列2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，89，93，95，97，99，101，103，105，107，111，113，115，117，119，121，123，126，128，131，133，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，212，215，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，248，250，252，254，256，258，260，262以及264，這樣的核酸分子可以通過向具有下述序列識別號的核苷酸序列中導(dǎo)入一個或者多個核苷酸的取代、加成或者缺失來制備，其中所述的序列為：序列1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，88，90，91，92，94，96，98，100，102，104，106，108，109，110，112，114，116，118，120，122，124，125，127，129，130，132，134，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，211，213，214，216，217，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，247，249，251，253，255，257，259，261，263以及265，這樣一來一個或者多個氨基酸的取代、加成或者缺失被導(dǎo)入到所述被編碼的蛋白之中。可以通過標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)向具有下述序列識別號的核苷酸序列中導(dǎo)入突變，所述的序列為：序列1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，88，90，91，92，94，96，98，100，102，104，106，108，109，110，112，114，116，118，120，122，124，125，127，129，130，132，134，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，211，213，214，216，217，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，247，249，251，253，255，257，259，261，263以及265，其中所述的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)是例如定點突變以及由聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)介導(dǎo)的突變。優(yōu)選的，在一個或者多個預(yù)測的非必需氨基酸殘基處進行保守性氨基酸的取代?！氨Ｊ匦园被崛〈敝傅氖抢靡环N具有相似的側(cè)鏈的氨基酸殘基對所述的氨基酸殘基進行取代。具有相似的側(cè)鏈的氨基酸殘基家族已經(jīng)在所屬領(lǐng)域中進行了定義。這些家族包括具有堿側(cè)鏈的氨基酸(例如，賴氨酸，精氨酸，組氨酸)，具有酸側(cè)鏈的氨基酸(例如，天冬氨酸，谷氨酸)，具有不帶電荷的極性側(cè)鏈的氨基酸(例如，甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸，半胱氨酸)，具有非極性側(cè)鏈的氨基酸(例如，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，甲硫氨酸，色氨酸)，具有β-分支側(cè)鏈的氨基酸(例如，蘇氨酸，纈氨酸，異亮氨酸)以及具有芳香族側(cè)鏈的氨基酸(例如，酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，組氨酸)。因此，利用與存在于MYB68中的預(yù)測的非必需氨基酸殘基屬于相同的側(cè)鏈家族的另外一種氨基酸殘基對所述的非必需氨基酸殘基進行取代?？梢赃x擇的，在另外一種實施方式中，可以沿所述的MYB-亞群14或者MYB68編碼序列的全部或者一部分隨機的導(dǎo)入突變，例如通過飽和突變的方式，并且可以對上述得到的突變體進行生物活性的篩選，從而識別出保留了活性以及所期望的表現(xiàn)型的突變體。在具有下述序列識別號的序列發(fā)生突變之后，可以利用本領(lǐng)域已知的任意重組技術(shù)對所述被編碼的蛋白進行表達，并且可以確定所述蛋白的活性，其中所述的序列為：序列1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，88，90，91，92，94，96，98，100，102，104，106，108，109，110，112，114，116，118，120，122，124，125，127，129，130，132，134，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，211，213，214，216，217，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，247，249，251，253，255，257，259，261，263以及265。經(jīng)過轉(zhuǎn)化的植物細胞以及轉(zhuǎn)基因植物本發(fā)明包括原生質(zhì)體，植物細胞，植物組織以及植物(例如，單子葉植物或者雙子葉植物)，其中所述的原生質(zhì)體，植物細胞，植物組織以及植物(例如，單子葉植物或者雙子葉植物)經(jīng)過了MYB-亞群14核酸、含有MYB-亞群14核酸的載體或者含有MYB-亞群14核酸的表達載體的轉(zhuǎn)化。這里所使用的“植物”不僅僅意在包括整個的植物，同時也包括所述植物的某個部分(即，細胞，以及組織，包括例如，葉片，莖，嫩枝，根，花朵，果實以及種子)。所述的植物可以是任意種類的植物，包括，例如，選自下列種屬的物種：擬南芥屬(Arabidopsis)，蕓薹屬(Brassica)，稻屬(Oryza)，玉蜀黍?qū)?Zea)，高粱(Sorghum)，棉花屬(Gossypium)，小麥屬(Triticum)，豆屬(Glycine)，豌豆(Pisum)，菜豆屬(Phaseolus)，番茄屬(Lycopersicon)，三葉草(Trifolium)，大麻(Cannabis)，南瓜(Cucurbita)，薔薇(Rosa)，葡萄(Vitis)，胡桃(Juglans)，草莓(Fragaria)，蓮花(Lotus)，苜蓿(Medicago)，驢豆(Onobrychis)，葫蘆巴(Trigonella)，豇豆(Vigna)，柑橘屬(Citrus)，亞麻屬(Linum)，天竺葵(Geranium)，木薯(Manihot)，胡蘿卜屬(Daucus)，蘿卜屬(Raphanus)，芥子屬(Sinapis)，顛茄屬(Atropa)，辣椒屬(Capsicum)，曼陀羅(Datura)，莨菪屬(Hyoscyamus)，煙草(Nicotiana)，茄屬(Solanum)，矮牽牛(Petunia)，洋地黃(Digitalis)，墨角蘭(Majorana)，菊苣屬(Cichorium)，向日葵(Helianthus)，萵苣屬(Lactuca)，雀麥屬(Bromus)，蘆筍(Asparagus)，金魚草屬(Antirrhinum)，萱草屬(Hemerocallis)，Nemesis，天竺葵屬(Pelargonium)，黍櫻(Panieum)，狼尾草(Pennisetum)，毛茛屬(Ranunculus)，千里光(Senecio)，蛾蝶花(Salpiglossis)，黃瓜屬(Cucumis)，藍英花(Browallia)，黑麥草屬(Lolium)，燕麥屬(Avena)，大麥屬(Hordeum)，黑麥屬(Secale)，云杉屬(Picea)，Caco，以及楊屬(Populus)。本發(fā)明同樣包括細胞，組織，包括例如，葉片，莖，嫩枝，根，花朵，果實以及種子以及來自于所述的轉(zhuǎn)化植物的后裔。用于將外源基因向植物中導(dǎo)入的許多方法均是已知的并且可以利用上述方法將基因插入到一種植物宿主中，包括生物學(xué)以及物理學(xué)植物轉(zhuǎn)化方案(參見，例如，Miki等人于1993年在MethodsinPlantMolecularBiologyandBiotechnology《植物分子生物學(xué)與生物技術(shù)的方法》中發(fā)表的文章“ProcedureforIntroducingForeignDNAintoPlants《向植物中導(dǎo)入外源DNA的步驟》”，Glick以及Thompson編輯，CRCPressInc.，BocaRaton，第67-88頁；以及AndrewBent于1998年在CloughSJandBentAF中發(fā)表的文章“Floraldipping：asimplifiedmethodforAgrobacterium-mediatedtransformationofArabidopsisthaliana《花朵的浸泡：一種對擬南芥進行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化的簡便方法》”)。根據(jù)所述的宿主植物的不同來選擇所述的方法，并且所述的方法包括化學(xué)轉(zhuǎn)染法例如磷酸鈣，聚乙二醇(PEG)轉(zhuǎn)化法，由微生物例如農(nóng)桿菌(Agrobacterium)介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移(參見Horsch等人于1985年在Science《科學(xué)》227：1229-31中發(fā)表的文章)，電穿孔，原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法，顯微注射，花朵浸泡(flowerdipping)以及基因槍轟擊法。由農(nóng)桿菌(Agrobacterium)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化用于向植物中導(dǎo)入表達載體的應(yīng)用最廣泛的方法是以所述的根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)以及發(fā)根農(nóng)桿菌(A.rhizogenes)的天然轉(zhuǎn)化系統(tǒng)為基礎(chǔ)的，其中所述的根癌農(nóng)桿菌以及發(fā)根農(nóng)桿菌是能夠?qū)χ参锛毎M行遺傳性轉(zhuǎn)化的植物致病細菌。根癌農(nóng)桿菌以及發(fā)根農(nóng)桿菌的腫瘤誘導(dǎo)(Ti)質(zhì)粒以及根誘導(dǎo)(Ri)質(zhì)粒攜帶有進行植物的遺傳性轉(zhuǎn)化的基因(參見，例如，Kado于1991年在Crit.Rev.PlantSci.《植物科學(xué)的評論與回顧》10：1-32中發(fā)表的文章)。在前述的Gruber等人發(fā)表的文章中以及Moloney等人于1989年在PlantCellReports《植物細胞學(xué)報告》8：238-242中發(fā)表的文章中提供了對于農(nóng)桿菌載體系統(tǒng)以及由農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移的說明。根據(jù)AndrewBent于1998年在CloughSJandBentAF中發(fā)表的文章Floraldipping：asimplifiedmethodforAgrobacterium-mediatedtransformationofArabidopsisthaliana《花朵的浸泡：一種對擬南芥進行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化的簡便方法》中所描述的方法，通過在農(nóng)桿菌(Agrobacterium)培養(yǎng)液中浸泡開花植物的方法，能夠容易的制備出轉(zhuǎn)基因擬南芥(Arabidopsis)植物。使野生型植物進行生長，直至所述的植物孕育花朵并且開花。將所述的植物倒轉(zhuǎn)放入農(nóng)桿菌培養(yǎng)液溶液中保持1分鐘，其中所述的農(nóng)桿菌培養(yǎng)液溶液中帶有所述的適合的基因構(gòu)建體。之后將植物水平放置于盤中并且保持覆蓋兩天，從而維持濕度，并且隨后將其扶正(righted)并且裝入袋中(bagged)以繼續(xù)進行生長以及種子的發(fā)育。大批量的收獲成熟的種子。直接的基因轉(zhuǎn)移一種通?？梢詰?yīng)用的植物轉(zhuǎn)化的方法是由微彈介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，其中在所述的微彈的表面上攜帶著DNA，所述的微彈具有大約1至4微米的測量尺寸。將所述的表達載體導(dǎo)入到植物組織中，利用基因槍裝置對所述的微彈進行加速，使其達到300至600米/秒的速度，所述的速度足以穿透所述的植物細胞壁以及細胞膜(參見Sanford等人于1987年在Part.Sci.Technol.5：27-37中發(fā)表的文章；Sanford于1988年在TrendsBiotech《生物技術(shù)趨勢》6：299-302中發(fā)表的文章；Sanford于1990年在Physiol.Plant《植物生理學(xué)》79：206-209中發(fā)表的文章；Klein等人于1992年在Biotechnology《生物技術(shù)》10：286-291中發(fā)表的文章)。還可以通過美國專利5240842、美國專利6809232中描述的氣霧劑束注射(ABI)方法來完成植物的轉(zhuǎn)化。使用氣霧劑束技術(shù)對濕顆?；蛘吒深w粒進行加速，使得所述的顆粒能夠穿透存活的細胞。氣霧劑束技術(shù)利用到惰性氣體的射流膨脹，使其經(jīng)由一個小孔從具有較高的氣體壓力的區(qū)域流向具有較低的氣體壓力的區(qū)域。所述的膨脹的氣體加速了氣霧劑液滴，其中所述的氣霧劑液滴中含有需要被導(dǎo)入到細胞或者組織當(dāng)中的核酸分子。對所述的加速顆粒進行放置使其沖擊一個優(yōu)選的靶向，例如一種植物細胞。所述的顆粒作為一個具有足夠小的尺寸的液滴被進行構(gòu)建，從而使所述的細胞經(jīng)過穿透而存活下來。利用所述的應(yīng)用領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)使所述的經(jīng)過轉(zhuǎn)化的細胞或者組織進行生長從而制備一種植物。轉(zhuǎn)化體的再生從單一的植物原生質(zhì)體或者從各種不同的外植體中進行植物的發(fā)育或者再生是本領(lǐng)域熟知的(參見Weissbach以及Weissbach于1988年發(fā)表的文章)。這種再生以及生長的過程通常包括下述步驟：轉(zhuǎn)化細胞的篩選，對那些個體細胞進行培養(yǎng)，經(jīng)由所述的胚胎發(fā)育的平常時期并且經(jīng)由所述的根苗時期。轉(zhuǎn)基因晶胚以及種子進行類似的再生。在此后將上述得到的轉(zhuǎn)基因發(fā)根嫩芽種植在一種適宜的植物生長培養(yǎng)基例如土壤中。所述的植物的發(fā)育或者再生可以利用已經(jīng)有所描述的本領(lǐng)域熟知的方法(參見Horsch等人于1985年發(fā)表的文章)來完成，其中所述的植物中含有編碼目標(biāo)多肽的所述的外源、外生性基因，其中所述的基因是由來自于葉片外植體的農(nóng)桿菌(Agrobacterium)導(dǎo)入的。在這個方法中，將所述的轉(zhuǎn)化體在存在選擇性試劑的條件下進行培養(yǎng)，并且利用已經(jīng)有所描述的、能夠誘發(fā)所述的被轉(zhuǎn)化植株的嫩枝進行再生的培養(yǎng)基(參見Fraley等人于1983年發(fā)表的文章)中對所述的轉(zhuǎn)化體進行培養(yǎng)。具體的，美國專利No.5349124(說明書在本文中被引入作為參考)詳細描述了遺傳轉(zhuǎn)化的萵苣細胞的建立以及由此得到的植物，所述的植物表達雜交的晶體蛋白，其中所述的晶體蛋白為所述的植物賦予殺蟲的活性，其能夠抵抗鱗翅目的幼蟲。這種方法通常在兩個月至四個月的時間內(nèi)制備出嫩枝并且隨后將那些嫩枝轉(zhuǎn)移到一種適宜的根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其中所述的根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中含有所述的選擇性試劑以及一種抗生素用于預(yù)防細菌的生長。在所述的選擇性試劑的存在下，嫩枝發(fā)根從而形成苗，之后將苗移植到土壤或者其他介質(zhì)中從而允許根部的生成。這些過程依據(jù)所使用的具體的植株而發(fā)生改變，這些改變是本領(lǐng)域熟知的。優(yōu)選的，所述的再生型植物是自花授粉的從而提供了純合的轉(zhuǎn)基因植物，或者將從所述的再生型植物中獲得的花粉交叉?zhèn)魇诮o具有農(nóng)藝學(xué)重要性的種子生長型植物，所述的種子生長型植物優(yōu)選是近交系的。相反的，將來自于那些重要品系的植物的花粉用于對再生型植物進行授粉。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法對含有目標(biāo)多肽的本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)基因植物進行栽植。一種優(yōu)選的轉(zhuǎn)基因植物是一種獨立的分離株(segregant)并且能夠?qū)⑺龅腗YB68基因及其活性傳遞給它的后裔。一種更加優(yōu)選的轉(zhuǎn)基因植物對于所述的基因而言是純合的，并且能夠?qū)⑦@種基因傳遞給有性交配的所有后代。轉(zhuǎn)基因植物的種子可以在野外生長或者在溫室中生長，并且得到的性成熟的轉(zhuǎn)基因植物是自花授粉的從而生成真正的育種植物。這些植物的后裔成為真正的育種品系，這可以通過所述的MYB68轉(zhuǎn)基因的表達的增強來進行評價。制備轉(zhuǎn)基因植物的方法制備轉(zhuǎn)基因植物的方法是包含在本發(fā)明之內(nèi)的。所述的方法包括向一個或者多個植物細胞中導(dǎo)入一種化合物，用以對所述植物中的MYB-亞群14的表達或者活性進行改變，從而生成一種轉(zhuǎn)基因植物細胞，以及從所述的轉(zhuǎn)基因細胞中進行轉(zhuǎn)基因植物的再生。所述的化合物增強了MYB-亞群14的表達或者活性。可以對所述的增強的表達和/或活性進行另外的指導(dǎo)，使其以異位的方式或者以組成型的方式或者以組織特異性的方式發(fā)生。所述的化合物可以是，例如，(i)MYB-亞群14多肽；(ii)MYB-亞群14核酸及其類似物以及同系物；(iii)能夠增強MYB-亞群14核酸的表達的核酸。能夠增強MYB-亞群14核酸的表達的核酸可以包括啟動子元件或者增強子元件。所述的啟動子是一種異源啟動子或者是一種同源啟動子。除此之外，所述的啟動子是一種組成型啟動子或者是一種誘導(dǎo)型啟動子。啟動子包括例如，器官特異性啟動子或者組織特異性啟動子。適合指導(dǎo)基因表達的啟動子是本領(lǐng)域已知的并且在本發(fā)明進行了描述。增強子元件對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的。例如所述的增強子元件是一種35S增強子元件。通過增加所述的MYB亞群-14多肽的表達，意味著由所述的經(jīng)過所述核酸構(gòu)建體進行轉(zhuǎn)化的細胞所生產(chǎn)的量高于沒有經(jīng)過所述的核酸構(gòu)建體進行轉(zhuǎn)化的細胞所生產(chǎn)的量，其中所述的沒有進行轉(zhuǎn)化的細胞是例如一種對照細胞。對照細胞包括例如一種能夠內(nèi)源性的表達MYB亞群-14多肽的細胞，例如一種植物根細胞，或者對照細胞是與所述的轉(zhuǎn)化細胞具有相同的細胞類型的一種非轉(zhuǎn)化細胞，是一種葉片細胞、分生組織細胞或者花朵細胞或者種子細胞。增加指的是一倍的增加，兩倍的增加，三倍的增加或者更高倍數(shù)的增加。表達上的增加同樣意在包括在一種通常情況下不產(chǎn)生MYB亞群-14多肽的細胞中進行的MYB亞群-14多肽的表達。所述的核酸可以是內(nèi)源性的或者是外源性的。優(yōu)選的，所述的化合物是一種MYB-亞群14多肽或者編碼一種MYB-亞群14多肽的MYB-亞群14核酸。例如所述的化合物包括具有下述序列識別號的核酸序列，所述的序列為：序列1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，88，90，91，92，94，96，98，100，102，104，106，108，109，110，112，114，116，118，120，122，124，125，127，129，130，132，134，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，211，213，214，216，217，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，247，249，251，253，255，257，259，261，263以及265。優(yōu)選的，所述的化合物是一個MYB-亞群14核酸序列，其中所述的核酸序列來自于被轉(zhuǎn)化的物種的內(nèi)源性來源?；蛘?，所述的化合物是一種MYB-亞群14核酸序列，其中所述的核酸序列來自于被轉(zhuǎn)化的物種的外源性來源。制備轉(zhuǎn)基因植物的方法是同樣被包含在本發(fā)明之內(nèi)的。所述的方法包括向一個或者多個植物細胞中導(dǎo)入一種化合物，用以對所述植物中的MYB-亞群14核酸的表達或者活性進行改變，從而生成一種轉(zhuǎn)基因植物細胞，以及從所述的轉(zhuǎn)基因細胞中進行轉(zhuǎn)基因植物的再生。所述的化合物增強了MYB-亞群14序列的表達或者活性。所述的化合物可以是，例如，(i)MYB-亞群14多肽；(ii)MYB-亞群14核酸及其類似物以及同系物；(iii)能夠增強MYB-亞群14核酸的表達的核酸。能夠增強MYB-亞群14核酸的表達的核酸可以包括啟動子元件或者增強子元件。所述的核酸可以是內(nèi)源性的或者是外源性的。優(yōu)選的，所述的化合物是一種MYB-亞群14多肽或者MYB-亞群14核酸。例如所述的化合物包括具有下述序列識別號的核酸序列，所述的序列為：序列1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，88，90，91，92，94，96，98，100，102，104，106，108，109，110，112，114，116，118，120，122，124，125，127，129，130，132，134，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，211，213，214，216，217，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，247，249，251，253，255，257，259，261，263以及265。優(yōu)選的，所述的化合物是一個MYB-亞群14核酸序列，其中所述的核酸序列相對于被轉(zhuǎn)化的物種而言是內(nèi)源性的。或者，所述的化合物是一種MYB-亞群14核酸序列，其中所述的核酸序列相對于被轉(zhuǎn)化的物種而言是外源性的。在一種宿主物種中進行表達的外源性MYB-亞群14序列不需要與所述的內(nèi)源性MYB-亞群14序列相同。例如，以與GAMYB基因的序列相似性為基礎(chǔ)，可以獲得三個擬南芥GAMYB樣基因的序列，其中所述的GAMYB基因來自于大麥，水稻，以及毒麥(L.temulentum)。這三個擬南芥基因被確定為能夠編碼轉(zhuǎn)錄因子(AtMYB33，AtMYB65，以及AtMYB101)，并且能夠取代大麥GAMYB并且控制α-淀粉酶的表達(參見Gocal等人于2001年在PlantPhysiol.《植物生理學(xué)》127：1682-1693中發(fā)表的文章)。能夠?qū)︻慄S酮的生物合成進行調(diào)控的玉米MYB轉(zhuǎn)錄因子、矮牽?；∕YB轉(zhuǎn)錄因子以及AtMYB轉(zhuǎn)錄因子具有高度的遺傳相似性，并且對存在于它們的天然物種中的相同的特點產(chǎn)生影響，因此在這些不同的物種中，這些MYB轉(zhuǎn)錄因子的序列以及功能是彼此間相互關(guān)聯(lián)的(參見Borevitz等人于2000年在PlantCell《植物細胞》12：2383-2394中發(fā)表的文章)。因此僅僅需要在所述的宿主細胞中對被表達的MYB-亞群14進行功能性的識別即可。編碼核酸的MYB-亞群14在擬南芥中的表達為所述的功能等同(functionallyequivalent)檢測提供了基礎(chǔ)。例如來自于蕓薹屬，大豆，棉花或者玉米來源的MYB-亞群14在擬南芥中的表達以及對于所述的熱耐受性的評估證明了功能的等同性并且為下述預(yù)測提供了可靠的基礎(chǔ)：所述的外源性序列是一種MYB-亞群14基因并且因此發(fā)揮功能。本發(fā)明中公開的是對于MYB-亞群14序列的表達進行的描述，其中所述的MYB-亞群14序列來自于擬南芥，蕓薹屬以及大豆，已經(jīng)證明這種表達在擬南芥中是可以發(fā)揮功效的，這是因為上述得到的植物具有增強的熱耐受性以及在開花過程中在熱脅迫條件下具有增加的結(jié)實，其中所述的增強的熱耐受性是由減少的花朵敗育所表明的。在各種不同的方面中，與野生型植物(即，未經(jīng)過轉(zhuǎn)化的)相比，所述的轉(zhuǎn)基因植物具有一種改變的表現(xiàn)型。改變的表現(xiàn)型意味著所述的植物具有一個或者多個不同于所述的野生型植物的特征。例如，當(dāng)將所述的轉(zhuǎn)基因植物與一種化合物進行接觸時，其中所述的化合物能夠增強所述的MYB-亞群14核酸的表達或者活性，與野生型植物相比，所述的植物具有一種例如熱耐受性增強的表現(xiàn)型，并且在表現(xiàn)型中顯現(xiàn)出這種特點例如減少的花朵敗育，增加的結(jié)實以及發(fā)育，增強的產(chǎn)量保護以及對于花粉發(fā)育的保護以及分生組織的保護，特別是對于花朵分生組織的保護，保護其免受熱損傷，干旱的耐受性以及鹽的耐受性。與對照植物相比，具有減少的花朵敗育的植物在種子的產(chǎn)量上具有5％，10％，20％，25％，30％或者更高的增長。所述的植物可以是任意種類的植物，包括，例如，選自下列種屬的物種：擬南芥屬(Arabidopsis)，蕓薹屬(Brassica)，稻屬(Oryza)，玉蜀黍?qū)?Zea)，高粱(Sorghum)，棉花屬(Gossypium)，小麥屬(Triticum)，豆屬(Glycine)，豌豆(Pisum)，菜豆屬(Phaseolus)，番茄屬(Lycopersicon)，三葉草(Trifolium)，大麻(Cannabis)，南瓜(Cucurbita)，薔薇(Rosa)，葡萄(Vitis)，胡桃(Juglans)，草莓(Fragaria)，蓮花(Lotus)，苜蓿(Medicago)，驢豆(Onobrychis)，葫蘆巴(Trigonella)，豇豆(Vigna)，柑橘屬(Citrus)，亞麻屬(Linum)，天竺葵(Geranium)，木薯(Manihot)，胡蘿卜屬(Daucus)，蘿卜屬(Raphanus)，芥子屬(Sinapis)，顛茄屬(Atropa)，辣椒屬(Capsicum)，曼陀羅(Datura)，莨菪屬(Hyoscyamus)，煙草(Nicotiana)，茄屬(Solanum)，矮牽牛(Petunia)，洋地黃(Digitalis)，墨角蘭(Majorana)，菊苣屬(Cichorium)，向日葵(Helianthus)，萵苣屬(Lactuca)，雀麥屬(Bromus)，蘆筍(Asparagus)，金魚草屬(Antirrhinum)，萱草屬(Hemerocallis)，Nemesis，天竺葵屬(Pelargonium)，黍櫻(Panieum)，狼尾草(Pennisetum)，毛茛屬(Ranunculus)，千里光(Senecio)，蛾蝶花(Salpiglossis)，黃瓜屬(Cucumis)，藍英花(Browallia)，黑麥草屬(Lolium)，燕麥屬(Avena)，大麥屬(Hordeum)，黑麥屬(Secale)，云杉屬(Picea)，Caco，以及楊屬(Populus)。識別熱脅迫耐受性植物的方法同樣被包括在本發(fā)明之內(nèi)的是一種識別熱脅迫耐受性植物的方法。與一種對照植物相比，通過這些方法識別出的所述植物具有減少的花朵敗育以及增加的產(chǎn)量。熱脅迫耐受性植物是通過下述方式被識別出來的：將一群開花植物暴露于熱脅迫處理中并且從上述的植物群體中選擇一種具有減少的花朵敗育的植物。熱脅迫處理包括例如將所述的植物在足夠熱的溫度下暴露足夠長的時間，這樣一來導(dǎo)致了對植物的功能或者發(fā)育上的損傷。減少的花朵敗育意味著植物不會損失與因花朵敗育而損失的同樣多的花朵，或者與另外一種被暴露于類似的熱脅迫水平下的植物相比，所述的植物具有更高的結(jié)實產(chǎn)量。與一種對照植物相比，具有減少的花朵敗育的植物在結(jié)實產(chǎn)量上具有5％，10％，20％，25％，30％或者更高的增長。實施例本發(fā)明將在下述的非限制性實施例中進行進一步的描述。實施例1：熱耐受性突變體的識別使用pSKI15載體對擬南芥哥倫比亞生物型(Arabidopsisthalianavar.Columbia)進行轉(zhuǎn)化，其中所述的pSKI15載體中含有四個35S增強子序列(參見Wiegel等人于2000年發(fā)表的文章)。從擬南芥生物資源中心(ABRC)處獲得T3世代的擬南芥種子并且用來制備T4世代，所述的T4世代被用來進行遺傳篩選試驗。所述的擬南芥h138突變體被識別出來，當(dāng)在開花過程中被暴露于大約45℃的熱脅迫下保持大約30至60分鐘時，與野生型對照相比，所述的突變體具有減少的花朵敗育或者不存在花朵敗育。通過下述方式對初始的分離進行再測試：使開花植物經(jīng)受1小時的溫度梯度上升，由22℃上升至45℃，隨后經(jīng)受2小時的45℃下的熱脅迫，對花朵的產(chǎn)量、結(jié)實以及種子的發(fā)育進行監(jiān)控并且對熱脅迫圖線進行選擇。實施例2：熱脅迫MYB68基因的識別按照下述方法完成基因組的步移，從而使所述的T-DNA活化標(biāo)簽的插入局部化(localize)。通過苯酚：氯仿提取法對基因組DNA進行純化，其中使用的是10天大的突變體h138的幼苗。隨后利用所述的限制酶對上述分離的DNA進行消化，從而生成具有鈍末端的DNA片段，其中所述的限制酶是例如EcoRV，PvuII，NruI，或者StuI。將上述來自于每個消化反應(yīng)的片段與銜接子進行連結(jié)，其中所述的銜接子是由兩個寡核苷酸(oligos)的退火形成的，其中所述的兩個寡核苷酸(oligos)是：銜接子1以及銜接子2。所述的銜接子與所述的DNA片段發(fā)生的加成使得能夠進行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴增，其中使用對所述的銜接子具有特異性的引物以及T-DNA插入位點。進行兩輪聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，從而生成用于進行進一步的測序分析的DNA片段。在第一輪聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中使用引物HeatL1(序列)以及引物CAP1(序列)，其中所述的引物HeatL1對所述的T-DNA的左邊界具有特異性，而引物CAP1對所述的銜接子具有特異性。將上述得到的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的產(chǎn)物稀釋50倍，用來作為第二輪聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的模板。之后利用兩個套式引物HeatL2(序列)以及CAP2(序列)對一段確認(rèn)的DNA片段進行擴增。使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)程序TOUCH1(94℃，25秒，6次循環(huán)；72℃，7分鐘；94℃，25秒，32次循環(huán)；67℃，7分鐘，以及67℃，10分鐘，1次循環(huán))以及TOUCH2(94℃，25秒，4次循環(huán)；72℃，7分鐘；94℃，25秒，20次循環(huán)；67℃，7分鐘，以及67℃，10分鐘，1次循環(huán))進行上述的兩輪聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。使用Ex-Taq作為DNA聚合酶以及熱循環(huán)機來完成全部的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。對所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物進行測序，并且對所述的側(cè)面基因組序列進行識別。所述的四個35S增強子被插入到5kb的基因間隔區(qū)內(nèi)，所述的基因間隔區(qū)位于染色體5上的基因組AtMYB68(AT5G65790)的3’端的下游。Northern分析以及實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)表明：相對于野生型而言，在h138中引發(fā)的MYB68的表達超過野生型的2倍。實施例3：h138突變體(myb68)的生理學(xué)特征對植物在開花過程中的熱耐受性進行評價，并且根據(jù)所述敗育的花朵或者結(jié)莢的數(shù)量以及最終的種子產(chǎn)量進行打分。植物在受到控制的環(huán)境腔室中進行生長，其中最佳的生長條件為進行16小時200uE的光照以及8小時的黑暗，22℃以及70％的相對濕度。在所述的試驗設(shè)計中使用到三組植物：1)在最佳條件下進行生長的對照組；2)進行3小時熱處理的組以及3)進行4小時熱處理的組。在第一次開花之后進行6天的熱處理并且在1小時的時間內(nèi)將所述的溫度從22℃梯度上升至44℃。每組植物含有所述的myb68突變體以及所述突變體的野生型對照(myb68-空白)，每個品目(entry)每種處理進行10個復(fù)制鍋(replicatepots)，每個鍋(pot)中含有5種植物。在進行了所述的熱脅迫處理的一周之后對植物的花朵敗育進行評價，之后使其在最佳條件下進行生長直至成熟。對全部三組植物中的每個鍋的最終的種子產(chǎn)量進行確定。在經(jīng)過熱脅迫之后，在所述的3小時(25％)以及4小時(17％)脅迫處理組中，所述的myb68的種子產(chǎn)量均低于所述的myb68-空白對照，然而這種差異僅僅在所述的3小時處理組中是統(tǒng)計學(xué)顯著的。所述的3小時處理導(dǎo)致所述的敗育結(jié)莢相對于myb68-空白而言具有了32％的減少并且所述的最終種子產(chǎn)量相對于在最佳條件下進行生長的myb68植物而言增加了16％。所述的4小時處理同樣導(dǎo)致了種子的產(chǎn)量相對于最佳生長的myb68植物而言具有了16％的增加。與之相反的是，所述的myb68-空白在種子的產(chǎn)量上相對于最佳生長的植物而言表現(xiàn)出15％以及23％的降低。相對于所述的野生型而言，由所述的myb68突變體提供的全部的產(chǎn)量保護為31％以及39％。其他的試驗得出了在5％至44％的范圍內(nèi)的產(chǎn)量保護的結(jié)果，所述的結(jié)果取決于所述的試驗條件。實施例4：用于進行包括MYB68在內(nèi)的MYB-亞群14序列的表達的構(gòu)建體根據(jù)下文中所描述的方法，可以使用適宜的啟動子以及本發(fā)明中所述的MYB基因制備表達載體構(gòu)建體。例如由具有下述序列識別號的序列所描述的任何的基因序列，所述的序列為：序列1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，88，90，91，92，94，96，98，100，102，104，106，108，109，110，112，114，116，118，120，122，124，125，127，129，130，132，134，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，211，213，214，216，217，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，247，249，251，253，255，257，259，261，263以及265。這樣的載體構(gòu)建體能夠有效的用于制備MYB68基因，與一種能夠在植物細胞中發(fā)揮啟動子功能的序列進行可操作性的連接并且可操作性的表達所述的基因以及由所述的基因編碼的蛋白。按照下文中的描述，在組成型啟動子或者條件性啟動子的常規(guī)控制下，可以對過表達MYB68的載體進行構(gòu)建。所述的編碼一種MYB68開放閱讀框的序列與下述啟動子的啟動子序列進行了可操作性的連接：35S花椰菜花葉病毒(CaMV)組成型啟動子，P18.2或者P81.1熱誘導(dǎo)啟動子及其內(nèi)源性PMYB68啟動子。除此之外，在pEGAD載體骨架中，所述的MYB68基因組序列在所述的35S花椰菜花葉病毒組成型啟動子之后進行了克隆。35S-基因組AtMYB68(存在于pEGAD載體之中)(35S-gAtMYB68)利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對1.4kb的MYB68基因組DNA進行擴增，其中所述的MYB68基因組DNA中包含83bps的3’非翻譯區(qū)(UTR)，其中所述的擴增中使用下述引物：MYB68FW-BamH3(5’-AAAGGATCCATGGGAAGAGCACCGTGTTG-3’)(SEQIDNO：300)以及MYB68RV-BamH4(5’-AAAGGATCCCCACTCCCTAAAGACACAGATTT-3’)(SEQIDNO：301)，并且此后利用BamHI進行消化。將上述得到的DNA片段與pBluescriptIISK(+/-)進行連結(jié)，并且隨后在相同的位點處在pEGAD中進行亞克隆，從而獲得存在于pEGAD中的35S-基因組AtMYB68(35S-gAtMYB68)。35S-AtMYB68，35S-AtMYB84，35S-AtMYB36，35S-AtMYB37，35S-AtMYB38，35S-AtMYB87與AtMYB68一同，AtMYB84(At3g49690)，AtMYB36(At5g57620)，AtMYB37(At5g23000)，擬南芥MYB38(At2g36890)以及AtMYB87(At4g37780)被劃分為所述的MYB-亞群14家族中的成員(參見Stracke等人于2001年發(fā)表的文章)，因此它們的功能可能是多余的。這些MYB基因在擬南芥中發(fā)生過表達，從而檢驗它們作為AtMYB68的直系同源基因在熱耐受性方面的功能性。利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)對所述的cDNA序列進行擴增，并且在不帶有葡萄糖醛酸酶基因(GUS)的pBI121中進行克隆，從而生成35S-AtMYB84、35S-AtMYB36、35S-AtMYB37、35S-AtMYB38以及35S-AtMYB87的構(gòu)建體。通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)制備一種1.1kb的AtMYB68cDNA，其中使用了下述引物：HG2F(5’-AAATCTAGAATGGGAAGAGCACCGTGTT-3’)(SEQIDNO：302)以及HG2R(5’-AAAGGATCCTTACACATGATTTGGCGCAT-3’)(SEQIDNO：303)，并且利用XbaI以及BamHI進行消化。將上述得到的DNA片段在pBluescriptIISK(+/-)中進行克隆，并且隨后在不帶有葡萄糖醛酸酶基因(GUS)的pBI121中進行克隆，從而生成35S-MYB68。不帶有葡萄糖醛酸酶基因的pBI121是通過下述方法獲得的：利用SmaI以及EcolcR1進行雙重消化，并且隨后所述的剩余載體進行自身的連結(jié)。通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對AtMYB84(933bp，AtMYB84，At3g49690)的編碼序列進行擴增，其中使用到下述引物：含有一個XbaI位點的690M84-Xba-FW上游引物(5’-acgtTCTAGAATGGGAAGAGCACCGTGTTG-3’)(SEQIDNO：273)以及含有一個BamHI位點的690M84-Bam-Re下游引物(5’-atcgGGATCCTTAAAAAAATTGCTTTGAATCAGAATA-3’)(SEQIDNO：274)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在pBI121的XbaI-BamHI位點處進行克隆，生成35S-AtMYB84的構(gòu)建體。通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對AtMYB36(1002bp，AtMYB36，At5g57620)的編碼序列進行擴增，其中使用到下述引物：含有一個XbaI位點的M36-Xb-FW上游引物(5’-actgTCTAGAATGGGAAGAGCTCCATGCTG-3’)(SEQIDNO：304)以及含有一個BamHI位點的M36-Bm-Re下游引物(5’-cagtGGATCCTTAAACACTGTGGTAGCTCATC-3’)(SEQIDNO：305)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在pBI121的XbaI-BamHI位點處進行克隆，生成35S-AtMYB36的構(gòu)建體。通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對AtMYB37(990bp，AtMYB37，At5g23000)的編碼序列進行擴增，其中使用到下述引物：含有一個XbaI位點的AM37-Xb-FW上游引物(5’-actgTCTAGAATGGGAAGAGCTCCGTGTTG-3’)(SEQIDNO：306)以及含有一個BamHI位點的AM37-Bm-Re下游引物(5’-acgtGGATCCTAGGAGTAGAAATAGGGCAAG-3’)(SEQIDNO：307)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在pBI121的XbaI-BamHI位點處進行克隆，生成35S-AtMYB37的構(gòu)建體。通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對AtMYB38(897bp，AtMYB38，At2g36890)的編碼序列進行擴增，其中使用到下述引物：含有一個XbaI位點的AM38-Xb-FW上游引物(5’-actgTCTAGAATGGGTAGGGCTCCATGTTGT-3’)(SEQIDNO：308)以及含有一個BamHI位點的AM38-Bm-Re下游引物(5’-acgtGGATCCTCAGTAGTACAACATGAACTTATC-3’)(SEQIDNO：309)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在pBI121的XbaI-BamHI位點處進行克隆，生成35S-AtMYB38的構(gòu)建體。通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對AtMYB87(918bp，AtMYB87，At4g37780)的編碼序列進行擴增，其中使用到下述引物：含有一個XbaI位點的M87-Xb-FW上游引物(5’-aaaaTCTAGAATGGGAAGAGCACCGTGC-3’)(SEQIDNO：310)以及含有一個Bgl2位點的M87-Bg-Re下游引物(5’-aaaaAGATCTCTACTCATTATCGTATAGAGG-3’)(SEQIDNO：311)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在pBI121的XbaI-BamHI位點處進行克隆，生成35S-AtMYB87的構(gòu)建體。P18.2-MYB68，以及P81.1-MYB68所述的構(gòu)建包括四個步驟：1)通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對869bp的熱休克蛋白(Hsp)18.2啟動子以及406bp的熱休克蛋白(Hsp)81.1啟動子進行擴增，其中分別使用到下述引物組：HP1F(SEQIDNO：277)與HP1R(SEQIDNO：278)，以及HP2F(SEQIDNO：279)與HP2R(SEQIDNO：280)，并且利用SalI以及XbaI進行消化。將上述得到的DNA片段在相同的位點處在pBI101中進行克隆，從而生成所述的新的載體：P18.2pBI101以及P81.1pBI101；2)在XbaI位點以及SmaI位點處，在所述的新的載體中進行MCS2-寡核苷酸(MCS2-oligo)(包括下述限制性位點：XbaI，HpaI，AgeI，KpnI，XhoI，ScaI，SpeI，SalI，BamHI以及SmaI)的克隆。將上述得到的載體命名為P18.2pBI101MCS以及P81.1pBI101MCS；3)通過利用SmaI以及EcolcR1的雙重消化以及隨后的剩余載體的自身連結(jié)，除去所述的葡萄糖醛酸酶(GUS)基因，從而獲得不帶有葡萄糖醛酸酶基因(GUS)的P18.2pBI101MCS載體以及不帶有葡萄糖醛酸酶基因(GUS)的P81.1pBI101MCS載體；4)在XbaI位點以及BamHI位點處，將所述的1.1kb的MYB68cDNA片段連結(jié)在所述的兩個最新的載體之中，從而為P18.2-MYB68完成了不帶有葡萄糖醛酸酶基因的P18.2pBI101MCS的構(gòu)建，并且為P81.1-MYB68完成了不帶有葡萄糖醛酸酶基因的P81.1MCSpBI12的構(gòu)建。pHSP81.1-AtMYB68利用XbaI以及BamHI進行限制性消化來分離所述的AtMYB68的編碼序列，并且將其在pHSP81.1的XbaI-BamHI位點處進行克隆，其中所述的XbaI以及BamHI來自于質(zhì)粒pHSP18.2-AtMYB68。pHPR-AtMYB68利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)從擬南芥基因組DNA中對所述的擬南芥羥基丙酮酸還原酶基因(HPR，At1g68010)的啟動子序列(-1至-506bp，相對于ATG起始密碼子而言)進行擴增，其中所述的擴增使用到下述引物：含有一個SalI位點的上游引物(HPR-Sal-FW，acgtgtcgacGAAGCAGCAGAAGCCTTGAT)(SEQIDNO：312)以及含有一個XbaI位點的下游引物(HPR-Xb-R2，acgttctagaGGTAGAGAAAAGAGAaagcctc)(SEQIDNO：313)。將上述經(jīng)過消化的片段在所述的載體pHSP81.1-AtMYB68中進行克隆，其中所述的pHSP81.1-AtMYB68載體利用SalI以及XbaI進行了預(yù)先消化，從而除去了所述的熱休克蛋白(HSP)81.1啟動子。這樣生成了一個重組質(zhì)粒，其中所述的羥基丙酮酸還原酶基因(HPR)啟動子位于AtMYB68的位置之前。PMYB68-AtMYB68通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對所述的AtMYB68啟動子(從-1至-1034，相對于所述的MYB68ATG起始密碼子而言)進行擴增，所述的擴增中使用下述引物：Pm-68-H3-FW(SEQIDNO：275)以及Pm68-Av-Xh-Re(SEQIDNO：276)，并且利用下述限制酶進行消化：HindIII以及XhoI。將上述得到的啟動子片段在相同的位點處在不帶有葡萄糖醛酸酶基因的P81.1MCSpBI121中進行克隆，從而替代所述的熱休克蛋白(Hsp)81.1啟動子。之后將這種載體命名為PMYB68pBI121，并且將其用于在AvrII位點以及BamHI位點處進行AtMYB68cDNA(1.1kb)的進一步克隆，從而獲得PMYB68-AtMYB68。從所述的質(zhì)粒18.2-MYB68中回收所述的MYBcDNA的AvrII-BamHI片段。pM68-AtMYB84通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對AtMYB84(933bp，AtMYB84，At3g49690)的編碼序列進行擴增，其中使用到下述引物：含有一個XbaI位點的690M84-Xba-FW上游引物(5’-acgtTCTAGAATGGGAAGAGCACCGTGTTG-3’)(SEQIDNO：273)以及含有一個BamHI位點的690M84-Bam-Re下游引物(5’-atcgGGATCCTTAAAAAAATTGCTTTGAATCAGAATA-3’)(SEQIDNO：274)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在pB-Pm68的AvRII-BamHI位點處進行克隆，在所述的AtMYB68啟動子的控制下生成AtMYB84的構(gòu)建體。pM68-AtMYB36通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)從年幼的擬南芥幼苗(葉片以及根部)中分離出的RNA中對AtMYB36(1002bp，At5g57620)的編碼序列進行擴增，其中使用到下述引物：含有一個XbaI位點的M36-Xb-FW上游引物(5’-actgTCTAGAATGGGAAGAGCTCCATGCTG-3’)(SEQIDNO：305)以及含有一個BamHI位點的M36-Bm-Re下游引物(5’-cagtGGATCCTTAAACACTGTGGTAGCTCATC-3’)(SEQIDNO：306)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在如上所述的pBI-Pm68的AvRII位點以及BamHI位點處進行克隆。這樣一來，在所述的AtMYB68啟動子的控制下生成了AtMYB36的構(gòu)建體。35S-水稻MYB36(35S-OsMYB36)水稻MYB36cDNA同系物：利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)從水稻根部RNA中對水稻MYB36基因的編碼序列(966bp)進行擴增，其中所述的水稻MYB36基因的編碼序列編碼一種被識別為序列識別號10的蛋白，在所述的擴增中使用了下述引物：含有一個XbaI位點的rM-Xb-FW2上游引物(5’-acgtTCTAGAATGGGGAGAGCGCCGTGCTG-3’)(SEQIDNO：314)以及含有一個BamHI位點的rM-Bm-Re2下游引物(5’-tgcaGGATCCCTACTGCATCCCGAGGTCAGCT-3’)(SEQIDNO：315)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在pBI121的XbaI-BamHI位點處進行克隆，從而生成35S-水稻MYB36的構(gòu)建體。35S-基因組水稻MYB36(35S-gOsMYB36)水稻MYB基因組同系物克?。豪门c如上所述的相同的引物：rM-Xb-FW2上游引物(SEQIDNO：314)以及rM-Bm-Re2下游引物(SEQIDNO：315)，對所述的水稻MYB36基因的基因組序列(SEQIDNO：265)進行擴增(1259bp)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在pBI121的XbaI-BamHI位點處進行克隆，從而生成35S-基因組水稻MYB36的構(gòu)建體。35S-大豆MYB84(35S-GmMYB84)所述的大豆MYB161是AtMYB84的同系物。這里所述的術(shù)語“大豆MYB84”可以與大豆MYB161進行互換使用。利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)從大豆根部RNA中進行所述的1068bp的大豆MYB161編碼序列的克隆，其中使用到下述引物：含有一個XbaI位點的soybM-Xba-FW2上游引物(5’-acgtTCTAGAATGGGGAGGGCACCTTGCT-3’)(SEQIDNO：316)以及含有一個BamHI位點的soybM-Bm-Re下游引物(5’-acgtGGATCCTATTGCGCCCCCGGGTAG-3’)(SEQIDNO：317)。將所述的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物在pBI121的XbaI-BamHI位點處進行克隆，從而生成35S-大豆MYB84的構(gòu)建體。35S-玉米MYB36(35S-ZmMYB36)利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對所述的玉米MYB36cDNA(SEQIDNO：261)進行擴增，其中使用了下述引物：ZmYYBFW-XbaI(5’-aaatctagaATGGGGAGAGCTCCGTGCTGCGACA-3’)(SEQIDNO：318)以及ZmMYBRV-BamHI2(5’-aaaggatccCTACTTCATCCCAAGGTTTCCTGGC-3’)(SEQIDNO：319)。利用XbaI以及BamHI對所述的DNA片段進行消化并且隨后在同樣的位點處與pBluescriptIISK(+/-)進行連結(jié)，并且之后在所述的pBI121的相同位點處進行亞克隆，從而替代葡萄糖醛酸酶基因(GUS)。35S-棉花MYB68(35S-GhMYB68或者35S-CotMYB68)利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對所述的棉花MYB68cDNA進行擴增，其中使用了下述引物：CotM-Xb-Fw(5’-acgtTCTAGAATGGGGAGAGCTCCTTGTTG-3’)(SEQIDNO：320)以及CotM-BmRe(5’-acgtGGATCCCTATTGCGCTCCTCCTGGG-3’)(SEQIDNO：321)。利用XbaI以及BamHI對所述的DNA片段進行消化。將其在同樣的位點處與pBluescriptIISK(+)進行連結(jié)，并且之后在所述的pBI121的相同位點處進行亞克隆，從而替代葡萄糖醛酸酶基因(GUS)。35S-油菜MYB68r(35S-BnMYB68r)利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對所述的油菜根部MYB68cDNA進行擴增，其中使用了下述引物：Bn68root-Fw-XbaI(5’-aaatctagaATGGGAAGAGCACCGTGTTGTGATAAGGCC-3’)(SEQIDNO：322)以及Bn68root-RV-BamHI(5’-aaaggatccTTACACATTATTTGGCCCATTGAAGTATCTTGC-3’)(SEQIDNO：323)。利用XbaI以及BamHI對所述的DNA片段進行消化。將其在同樣的位點處與pBluescriptIISK(+)進行連結(jié)。之后將上述片段在所述的pBI121的相同位點處進行亞克隆，從而替代葡萄糖醛酸酶基因(GUS)。35S-油菜MYB68b(35S-BnMYB68b)利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對所述的油菜蓓蕾的MYB68cDNA進行擴增，其中使用了下述引物：Bn68Bud-Fw-XbaI(5’-aaatctagaATGGGAAGAGCACCGTGTTGTGACAAGGCT-3’)(SEQIDNO：324)以及Bn68Bud-RV-BamHI(5’-aaaggatccTTACAAATGATTTGCCCCATTGAAGTAACTTGC-3’)(SEQIDNO：325)。利用XbaI以及BamHI對所述的DNA片段進行消化。將其在同樣的位點處與pBluescriptIISK(+)進行連結(jié)。之后將上述片段在所述的pBI121的相同位點處進行亞克隆，從而替代葡萄糖醛酸酶基因(GUS)。下面的表格2描述的是在制備如上所述的載體構(gòu)建體中所使用到的寡核苷酸引物，以及能夠有效的用于克隆AtMYB同系物的其他的引物。表格2：用于進行AtMYB68同系物的克隆而合成的寡核苷酸引物注釋：1.FW：帶有基因特異性序列的上游引物，其中所述的基因特異性序列是從所述的ATG起始密碼子開始的。2.Re：帶有基因特異性序列的下游引物，其中所述的基因特異性序列是從所述的終止密碼子開始的。3.用下劃線表示在所述的5’端的限制性位點?？梢詫⒈景l(fā)明所述的表達載體構(gòu)建體導(dǎo)入到擬南芥、所述的起源植物或者所選擇的任何物種之中。例如一個AtMYB基因可以在蕓薹屬物種中進行過表達，或者可以選擇的在大豆、玉米、水稻或者棉花物種中進行過表達。實施例5：MYB68的氨基酸序列分析下面的表格提供了對于來自于不同的植物物種的MYB基因家族的氨基酸序列的比較，其中為進行多重序列的比對以及氨基酸序列的分析而進行了不同的設(shè)置。注釋：在針對不同的植物物種的所述文獻以及數(shù)據(jù)庫中使用不同的MYB命名以及編號體系。在下面的表格中，(*)表示根據(jù)肽序列的比對對所述預(yù)測的開放閱讀框(ORF)基因組DNA序列進行編輯，從而生成一個推定的編碼序列序列。所述的(P)標(biāo)識表示的是一個部分的序列。利用ClustalW在http：//www.ebi.ac.uk/clustalw/.上對序列的同源性以及多重序列的比對進行比較。表格3：表格4：來自于各種不同作物/物種的AtMYB68同系物在上述的表格4當(dāng)中，利用ClustalW在http：//www.ebi.ac.uk/clustalw/上對序列的同源性以及多重序列的比對進行比較，其中使用到下述的參數(shù)設(shè)定：矩陣(Matrix)：Gonnet250開放的缺口(GAPOPEN)：10.0末端缺口(ENDGAPS)：-1缺口的延伸(GAPEXTENSION)：0.2缺口的距離(GAPDISTANCES)：4表格5：來自于各種不同作物/物種的AtMYB68同系物在上述的表格5當(dāng)中，利用ClustalW在http：//www.ebi.ac.uk/clustalw/上對序列的同源性以及多重序列的比對進行比較，其中使用到下述的參數(shù)設(shè)定：矩陣(Matrix)：蛋白：Gonnet250開放的缺口(GAPOPEN)：DNA：15.0蛋白：10.0末端缺口(ENDGAPS)：-1缺口的延伸(GAPEXTENSION)：DNA：6.66蛋白：0.2缺口的距離(GAPDISTANCES)：4實施例6：35S-MYB68表達品系的生理學(xué)特征在一個轉(zhuǎn)基因品系群體中，將存在一種表達水平以及生理學(xué)應(yīng)答的分級。在某種程度上，所述的變化的分級是所述的基因構(gòu)建體的整合位點以及在這一位點上進行的基因表達的局部環(huán)境的結(jié)果。因此，為了篩選出具有最佳表現(xiàn)的品系，必須對品系進行篩選以及評價。這種方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是一種常規(guī)的方法。在一項熱與花朵敗育試驗中，對表達一種35S-MYB68表達構(gòu)建體的純合品系進行了評價。所述的試驗方案包括每個品系的8個復(fù)制植物，每個3尺的鍋(3’pot)中含有1個植物，并且使其在一個受到控制的環(huán)境腔室(18小時200uE的光照，6小時的黑暗，22℃，70％的相對濕度)中在最佳條件下進行生長。在最初的開花出現(xiàn)之后的三天，將植物在42℃的熱休克條件下暴露1小時，并且將其送回至最佳條件下進一步生長7天。對植物的主莖上的花朵敗育情況進行評價。對品系進行識別，其中被識別出的品系與野生型對照相比，其表現(xiàn)出的花朵敗育率減少了34％至60％。對九種獨立的35S-MYB68轉(zhuǎn)基因品系的種子產(chǎn)量以及產(chǎn)量保護進行確定，其中使用相對于野生型的百分?jǐn)?shù)進行表達。所述的試驗方案在每個3尺的鍋(pot)中包括3個植物，所述的植物在如上所述的條件下進行生長，每個品系含有22個復(fù)制體。在最初的開花出現(xiàn)之后的三天，將每個品系中的12個復(fù)制體在45℃下的熱脅迫條件下暴露3小時，其中所述的溫度是在1小時的時間里由22℃梯度上升為45℃的。三天之后，將上述的熱脅迫再施加一次。使每個品系中的剩余10個復(fù)制體植物在它們的全部生命周期中被維持在最佳條件下進行生長。對于上述全部植物的最終種子產(chǎn)量進行確定。由于上述施加的熱脅迫，野生型植物在產(chǎn)量上表現(xiàn)出40％的下降，而轉(zhuǎn)基因品系由于熱脅迫的原因盡管也具有下降的產(chǎn)量，但所述的下降程度較輕，形成了10％至12％的產(chǎn)量保護。對篩選出的品系進行再次評價并且按照下述方式進行脅迫。將植物暴露于1小時的溫度梯度上升階段，從22℃上升至45℃，并且使45℃的熱脅迫保持1.5至1.8小時。在連續(xù)的五天時間里每天施加熱脅迫，在此之后進行五天的恢復(fù)階段并且之后進行第六次的熱處理。上述的熱處理導(dǎo)致野生型(WT)植物在產(chǎn)量上發(fā)生了11％的下降，而在四種轉(zhuǎn)基因品系中觀察到在2％至17％范圍內(nèi)的產(chǎn)量的增加。正如表格6中所示，在接受了所述的熱脅迫之后，相對于野生型而言，六種轉(zhuǎn)基因品系(68，80，93，73，83，30)表現(xiàn)出了產(chǎn)量保護。這種保護在3％至31％的范圍內(nèi)。這些轉(zhuǎn)基因品系中的兩種(30以及73)已經(jīng)在先前的試驗中表現(xiàn)出了產(chǎn)量的保護，而兩種品系(93以及83)表現(xiàn)出了花朵敗育的減少。表格6：表達所述的PMYB68-AtMYB68構(gòu)建體的擬南芥(Arabidopsis)品系的特征在一項花朵敗育試驗中，對T3世代的十四種純合的轉(zhuǎn)基因品系進行了評價。使植物(每個品目針對十四個復(fù)制體)在2.25尺的鍋(pots)中在最佳條件下(18小時的光照，200uE，22℃，60％的相對濕度)進行生長，直至距離第一次開花有三天的時間。在這一時間點處將植物暴露于43℃下進行1小時的處理。在所述的熱處理過后，將植物送回至最佳條件下繼續(xù)進行7天的生長。在這一時間點處，通過對存在于被暴露于上述的熱脅迫中的所述區(qū)域內(nèi)的敗育結(jié)莢(pod)以及被損傷的(變短的)結(jié)莢(pod)進行計算，從而對上述的熱處理對于結(jié)莢的形成所產(chǎn)生的影響進行評價。與對照組(野生型-哥倫比亞以及所述的空白-n11-8)相比，六種轉(zhuǎn)基因品系在被損傷的結(jié)莢的總數(shù)量上表現(xiàn)出了減少(參見下面的表格7)。所述最佳的品系僅僅表現(xiàn)出了對照組的熱損傷的70％。在這里進行檢查的兩種轉(zhuǎn)基因品系在所述的T2階段的篩選中同樣表現(xiàn)出了減少的花朵敗育。所述的被作為一種陽性對照而包括在內(nèi)的myb68突變體同樣在被損傷的結(jié)莢總數(shù)量上表現(xiàn)出了減少，這種減少是與所述的myb68突變體的分離的空白對照(myb68-空白)相比較而言的。表格7：實施例7：對表達MYB68的轉(zhuǎn)基因植物進行的生理學(xué)評價AtMYB68突變體表現(xiàn)出干旱耐受性使每個3尺的鍋(pot)中的五個植物在生長腔室中在16小時的光照(180uE)、22℃、70％的相對濕度(RH)的最佳條件下進行生長，直至第一次開花，其中每個品目中針對6個復(fù)制體。開始進行干旱處理，對所有鍋中的水的量進行平衡并且停止?jié)菜?。通過對所述的鍋進行稱重從而每天測量水分的損失。對土壤的水分含量(SWC)進行計算，用初始的％來表示。在所述的干旱處理的第0天、第2天以及第4天對植物進行收集。對相對于所述植物的嫩枝干重而言的水分損失進行計算。在經(jīng)歷了所述的干旱處理之后，所述的myb68植物比對照組表現(xiàn)出了具有更高的土壤水分含量的趨勢。嫩枝的重量沒有差別或者比對照組的重量稍重一些。與對照組相比，所述的myb68突變體具有的兩天里的水分損失與第二天的嫩枝干重的比例較低，這表明其具有干旱耐受性的趨勢。表格8：在干旱處理的時間里的土壤水分含量(初始的％)以及相對于第二天的嫩枝干重而言在兩天時間里的水分損失myb68突變體以及35S-基因組MYB68以及35S-MYB68擬南芥轉(zhuǎn)基因品系在出苗階段表現(xiàn)出對于鹽的耐受性將種子進行滅菌并且將其放置于瓊脂平板之上，在所述的瓊脂平板上帶有1/2的MS生長培養(yǎng)基，所述的MS生長培養(yǎng)基中含有鹽(200毫摩氯化鈉)或者不含鹽(最佳平板)，每個品目(entry)中具有6個平板并且每個平板上具有30個種子。在4℃下放置3天之后，將平板放置于所述的生長室中，在22℃、以及18小時的光照(100uE)下生長16天。經(jīng)過7天之后，對平板中的萌芽狀況進行打分，并且再經(jīng)過9天之后對漂白的出苗狀況進行打分(表示脅迫的白色幼苗％)。在最佳平板以及鹽平板上，沒有發(fā)現(xiàn)對照組以及轉(zhuǎn)基因品系或者所述的突變體在萌芽狀況中存在差別。但是在被暴露于鹽中16天之后，幼苗通過被漂白而表現(xiàn)出脅迫的跡象。結(jié)果表明所述的myb68突變體以及所述的轉(zhuǎn)基因35S-MYB68表達品系具有更少的漂白苗，這代表著對于鹽脅迫具有較低的敏感性。表格9：在含有瓊脂的200毫摩氯化鈉以及1/2MS平板中進行16天的培養(yǎng)之后對被漂白的幼苗的打分(白色幼苗％)MYB68在擬南芥中的組成型表達引發(fā)了熱脅迫之后的產(chǎn)量保護使所述的35S-Myb68擬南芥植物在3尺的鍋(pot)中進行生長，每個鍋中裝有3個植物，并且每次最佳處理是針對10個復(fù)制體進行的，而每次熱處理是針對12個復(fù)制體進行的。讓所有的植物在最佳條件下進行生長直至開花進行兩天。在這一時間點上使最佳植物仍然保留在最佳條件下(22℃，18小時200uE的光照，70％的相對濕度)并且每天向所述的測試組施加一次熱處理，其中所述的熱處理是：在1小時的梯度時間里將溫度由22℃升高至45℃并且將這一溫度保持1.5至2.5小時，所述的熱處理連續(xù)進行五天。使植物恢復(fù)兩天的時間，在此期間不對其施加脅迫，在此之后再次施加三天的脅迫(共計八天的熱處理)。在所述的熱處理之后，將植物與所述的最佳組一同維持在最佳條件下直至成熟，并且對兩個組的最終種子產(chǎn)量進行確定。所述的結(jié)果表明，四種35S-Myb68轉(zhuǎn)基因品系(22-7，20-11，35-1以及8-6)在經(jīng)過了所述的熱脅迫處理之后表現(xiàn)出產(chǎn)量的保護，相對于對照組而言，所述的產(chǎn)量保護在8％至21％的范圍之內(nèi)。表格10：每個鍋(pot)中的種子產(chǎn)量，所述的種子產(chǎn)量來自于如上所述的在最佳條件下生長的植物以及在熱脅迫條件下生長的植物。通過在經(jīng)過所述的熱脅迫之后所述的種子產(chǎn)量間的差異計算出產(chǎn)量保護，并且將其表示為轉(zhuǎn)基因品系以及對照組中的最佳情形的百分?jǐn)?shù)(％)。實施例8：對AtMYB-亞群14序列及其來自于其他物種的同系物所具有的制備所述的目標(biāo)表現(xiàn)型例如熱耐受性表現(xiàn)型的功能的確認(rèn)油菜MYB68在擬南芥中的組成型表達引發(fā)了熱脅迫之后的減少的花朵敗育從蕓薹屬(Brassica)中識別出兩個高度相關(guān)的Myb68序列。它們的表達類型的不同之處在于：其中一個主要在所述的根部中進行表達(SEQIDNO：54)，另外一個主要在花蕾中進行表達(SEQIDNO：56)。對含有能夠表達任意的所述油菜Myb68的構(gòu)建體的植物進行生產(chǎn)以及評價。使植物在2.25尺的鍋(每鍋一個植物)中、在最佳條件下(22℃，50％的相對濕度，17小時200uE的光照)進行生長，直至距離第一次開花三天的時間。將植物從22℃下轉(zhuǎn)移至43℃下并保持2小時-2.5小時(參見下面的表格)。在經(jīng)過這種熱脅迫之后，將植物送回至22℃的最佳條件下保持一周。在經(jīng)過所述的熱脅迫一周之后，對敗育花朵的數(shù)量進行計算。與對照組(空白)相比，35S-油菜Myb68(根)構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因品系表現(xiàn)出較少的敗育蓓蕾。在經(jīng)過熱脅迫之后，與對照組(空白品系)相比，兩個35S-油菜Myb68(蓓蕾)構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因品系表現(xiàn)出減少的花朵敗育。表格11：在經(jīng)歷過43℃下的2小時熱脅迫之后，敗育花朵的數(shù)量——35S-油菜MYB68(根)表格12：在經(jīng)歷過43℃下的2.5小時熱脅迫之后，敗育花朵的數(shù)量——35S-油菜MYB68(蓓蕾)大豆MYB84或者AtMYB84或者AtMYB36在擬南芥中的組成型表達引發(fā)了熱脅迫之后的減少的花朵敗育制備大豆-Myb84(GmMyb84)或者AtMYB84(AtMyb84)或者AtMYB36(AtMyb36)的過表達構(gòu)建體，并且將所述的過表達構(gòu)建體轉(zhuǎn)化至擬南芥植物中，已經(jīng)對所述的Myb-亞群14同系物產(chǎn)生熱耐受性的功能進行了證實，所述的功能是通過在熱脅迫下發(fā)生的減少的花朵敗育來證明的。制備轉(zhuǎn)基因植物并且所述的T2世代被用來進行熱耐受性的初始篩選。隨后，T3純合轉(zhuǎn)基因植物被用來進行詳細的生理學(xué)評價以及對初始結(jié)果的證實。將所述的T2種子放置于0.5倍的MS瓊脂平板上，所述的平板上含有維生素(每個平板上一層)。每個測試組中包括一個陽性對照，所述的初始的熱耐受性突變體myb68，以及一個相應(yīng)的野生型。在萌芽之后的第十天將幼苗移植到土壤中。在早期的開花階段，將植物放置于一個45℃下的加熱腔室中(濕度65％)，保持24-30分鐘。之后將所述的植物放回到所述的具有正常的生長條件(17小時的光照/7小時的黑暗，200uE，22℃，濕度70％)的生長室中。在第三十二天對植物進行檢查并且對敗育的長角(silique)、部分?jǐn)∮拈L角、壞死的分生組織或者正常的長角進行打分。如果絕大部分的野生型植物出現(xiàn)了顯著的花朵敗育，則表明熱脅迫確實發(fā)揮了作用。利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對轉(zhuǎn)基因品系的基因表達進行評價并且證明其具有提升的表達水平。使用Myb-亞群14序列的同系物制備構(gòu)建體以及轉(zhuǎn)基因植物，并且所述的構(gòu)建體以及轉(zhuǎn)基因植物提升了熱耐受性，其中所述的Myb-亞群14序列的同系物來自于目標(biāo)作物物種，例如，水稻，玉米，小麥，大豆以及棉花。表格13：構(gòu)建體作為％對照的花朵敗育35S-油菜MYB68-蓓蕾8435S-油菜MYB68-根8235S-玉米MYB845835S-AtMYB847735S-AtMYB3681這個實施例證明，擬南芥可以被用來作為一種模型系統(tǒng)，用來評價以及提供構(gòu)象，Myb-亞群14序列能夠提供熱耐受性并且從其他的植物物種中識別出來的這一序列能夠在擬南芥中發(fā)揮功效。表達35S-AtMYB36構(gòu)建體的擬南芥品系的特征在一項花朵敗育試驗中，對T3世代的十五種純合的轉(zhuǎn)基因品系進行了評價。使植物(每個品目針對十四個復(fù)制體)在2.25尺的鍋(pots)中在最佳條件下(18小時的光照，200uE，22℃，60％的相對濕度)進行生長，直至距離第一次開花有四天的時間。在這一時間點處將植物暴露于43℃下進行1小時的處理。在所述的熱處理過后，將植物送回至最佳條件下繼續(xù)進行7天的生長。在這一時間點處，通過對存在于被暴露于上述的熱脅迫中的所述區(qū)域內(nèi)的敗育結(jié)莢(pod)以及被損傷的(變短的)結(jié)莢(pod)進行計算，從而對上述的熱處理對于結(jié)莢的形成所產(chǎn)生的影響進行評價。與對照組(野生型-哥倫比亞以及所述的空白-n77-4)相比，九種轉(zhuǎn)基因品系在被損傷的結(jié)莢的總數(shù)量上表現(xiàn)出了減少(參見下面的表格7)。在這里進行檢查的三種品系在所述的T2階段的篩選中同樣表現(xiàn)出了減少的花朵敗育。所述的被作為一種陽性對照而包括在內(nèi)的myb68突變體同樣在被損傷的結(jié)莢總數(shù)量上表現(xiàn)出了減少，這種減少是與所述的myb68突變體的分離的空白對照(myb68-空白)相比較而言的。表格14：AtMYB68在油菜(Brassicanapus)中的組成型表達或者誘導(dǎo)型表達表現(xiàn)出了熱脅迫之后的減少的花朵敗育在生長腔室的環(huán)境下，對于含有AtMYB68基因序列的五種轉(zhuǎn)基因品系的熱脅迫耐受性進行評價，其中所述的轉(zhuǎn)基因品系受到了組成型啟動子或者熱誘導(dǎo)型啟動子的控制。這些品系處于所述的T2階段并且是雜合的，除了所述的01-105G-1-E品系之外。相比較于在純合品系中完成的分析而言，對于雜合品系進行的同樣的分析通常會產(chǎn)生更大的變化。然而，早期的分析允許對所述的衍生的純合品系進行篩選以及隨后的分析。分離的空白以及所述的母本DH12075作為對照被包括在內(nèi)。所述的試驗被編排為一種裂區(qū)設(shè)計，其中利用溫度作為主要因素并且利用轉(zhuǎn)基因品系作為次要因素。使所述的植物在15厘米的塑料鍋中進行生長，在所述的塑料鍋中裝有“SunshineMix#3”，所述的植物接受到大約500微摩/平方米秒的光合有效輻射，所述的輻射作用于所述的作物冠層的頂端。進行分子分析從而確認(rèn)轉(zhuǎn)基因的存在。在所述的測試中包括兩組植物：一組在其全部的生長時期內(nèi)均在最佳條件(22℃/18℃的日/夜溫度，16小時的光周期)下進行生長，而所述的第二組每天經(jīng)受5小時的31℃下的熱脅迫(從18℃梯度上升至31℃，之后下降回18℃)。在所述的第一次開花之后的第三天開始進行熱脅迫條件的處理并且在此之后持續(xù)七天的時間。之后將所述的熱脅迫植物送回至最佳條件下直至其成熟。在所述的熱脅迫周期開始的時候以及結(jié)束的時候?qū)λ龅拿{迫植物的所有的總狀花序進行標(biāo)記，用以指明哪些花朵經(jīng)受了熱脅迫。對于存在于所述被標(biāo)記的總狀花序之上的存活的結(jié)莢以及敗育的結(jié)莢進行計算，并且通過熱脅迫條件下敗育的結(jié)莢與敗育的結(jié)莢加上存活的結(jié)莢的總數(shù)的比值來計算所述的結(jié)莢敗育率，以百分?jǐn)?shù)來表示。在收獲之后確定種子的產(chǎn)量。在這些不同的品系之間，在花朵敗育上存在著顯著的差異，與所述的母本品系相比，兩種35S-Myb68品系在經(jīng)過熱脅迫之后表現(xiàn)出顯著降低的敗育率。與其分離的空白(48％)以及DH12075(61％)相比，品系02-104G-4-A具有顯著降低的敗育率(33％)。品系02-104G-3-K的敗育率(47％)同樣顯著的低于所述的分離的空白(66％)以及DH12075的敗育率。與其分離的空白(58％)以及所述的母本對照相比，所述的純合品系(01-105G-1-E)具有些微降低的敗育率(53％)。在一個轉(zhuǎn)基因品系群體中，將存在一種表達水平以及生理學(xué)應(yīng)答的分級。在某種程度上，所述的變化的分級是所述的基因構(gòu)建體的整合位點以及在這一位點上進行的基因表達的局部環(huán)境的結(jié)果。這種分級是可以預(yù)期的并且因此，為了篩選出具有最佳表現(xiàn)的品系，必須對品系進行篩選以及評價。這種方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是一種常規(guī)的方法。在上述的受試品系間存在著種子產(chǎn)量的差異。所述的三種轉(zhuǎn)基因品系02-104G-3-K、02-104G-4-A以及01-105G-1-E的產(chǎn)量與所述的母本品系的產(chǎn)量相似，然而與其自身的空白(null)相比，所述的三種品系在種子產(chǎn)量上表現(xiàn)出了10％至22％的增長。與所述的DH12075母本相比，兩種轉(zhuǎn)基因品系(02-33H-1-V以及01-105G-3-G)呈現(xiàn)出的表現(xiàn)不佳，然而與適宜的空白(null)相比，一種品系則顯著的較低。由于這些品系的接合性，這樣的差異度是未預(yù)料到的。在存在于熱脅迫條件下的每個總狀花序的種子的數(shù)量方面發(fā)現(xiàn)了類似的趨勢。與所述的母本品系相比，品系02-104G-3-K、02-104G-4-A以及01-105G-1-E在每個總狀花序上具有些許增加的種子數(shù)量，但是其他的轉(zhuǎn)基因品系(02-33H-1-V以及01-105G-3-G)在每個總狀花序上具有顯著減少的種子數(shù)量。在上述的受試品系間，在100粒種子的重量上不存在顯著的差異。概括的說，在開花期間施加的熱脅迫過程中，表達所述的AtMYB68基因的兩種轉(zhuǎn)基因品系證明了其對于花朵敗育產(chǎn)生了顯著的保護。除此之外，三種轉(zhuǎn)基因品系表現(xiàn)出了一種種子產(chǎn)量增加的趨勢。表格15：實施例9：MYB-亞群14序列及其同系物的識別識別AtMYB序列的方法、將MYB序列劃分成指定的亞群的方法以及識別MYB-亞群14序列的方法在Stracke等人于2001年發(fā)表的文章中以及在Kranz等人于1998年發(fā)表的文章中進行了進一步的描述。MYB-亞群14序列已經(jīng)被定義為一種核苷酸序列或者一種蛋白序列，其中包括擬南芥，這樣的特征在本發(fā)明中也有所描述。所述的MYB-亞群14是一種R2R3MYB序列，所述的序列額外包括一種保守的基序，所述的基序是通過下述的形式來進行描述的。所述的一般模式(SEQIDNO：266)提供了一種序列，所述的序列可以被用來識別一種備選的MYB-亞群14序列。在某些位置處，對于所述給定的位置而言，允許存在多個氨基酸殘基。在允許存在多個氨基酸的情況下，將所述任選的殘基在方括號內(nèi)進行表示。當(dāng)一種R2R3MYB蛋白序列能夠與所述的一般模式相互匹配(fit)時，所述的蛋白序列可能是一個MYB-亞群14序列。一個MYB-亞群14序列可能不完全等同于所述的一般模式，例如它可以是90％、95％或者99％等同的。如果一個備選的MYB-亞群14序列與所述的一般模式相互匹配，并且其進一步的包括一種與所述的排他模式(SEQIDNO：267)之間的匹配，那么所述的序列是一種被包括在內(nèi)的有力的備選者，成為一個MYB-亞群14序列。所述的排他序列(SEQIDNO：267)定義了氨基酸的類型，這些氨基酸存在于MYB-亞群14序列中但是可能與其他的R2R3MYB蛋白產(chǎn)生不同。所述的排他模式在一種MYB蛋白中的出現(xiàn)是一種有力的指示，表明所述的MYB是所述的MYB-亞群14家族中的一個成員。如果一個備選的MYB-亞群14序列與所述的一般模式相互匹配，并且其進一步的包括一種與所述的絕對模式(SEQIDNO：268)之間的匹配，那么所述的序列是一種被包括在內(nèi)的有力的備選者，成為一個MYB-亞群14序列。所述的絕對模式(SEQIDNO：268)代表的是到目前為止分析出的存在于所有的MYB-亞群14序列中的序列殘基。對于下面列出的所述的一般模式、排他模式、以及絕對模式(SEQIDNO：266-268)而言，“X”表示的是任意的氨基酸，“X(N)”，其中N表示任意數(shù)字，表示的是由所指示的數(shù)量個“X”構(gòu)成的一串(即，X(23)表示的是由23個“X”構(gòu)成的一串)，其中X是任意的氨基酸。在某些位置處，對于所述給定的位置而言，允許存在多個氨基酸殘基。在允許存在多個氨基酸的情況下，將所述任選的殘基在方括號內(nèi)進行表示。一般模式(SEQIDNO：266)M-G-R-X-P-C-C-D-[KR]-X-X-[MV]-K-[RK]-G-X-W-[SA]-X-[DQE]-E-D-X-X-[IL]-[RK]-X-[FY]-X-X-X-X-G-X-X-X-[SN]-W-I-X-X-P-X-[RK]-X-G-[IL]-X-R-C-G-[KR]-S-C-R-L-R-W-[IL]-N-Y-L-R-P-X-[IL]-[RK]-H-G-X-[FY]-[ST]-X-X-E-[DE]-X-X-[IV]-X-X-X-[FY]-X-X-X-G-S-[KR]-W-S-X-[MI]-A-X-X-[ML]-X-X-R-T-D-N-D-[ILV]-K-N-[HY]-W-[DN]-[ST]-[RK]-L-[RK]-[RK]-[RK]排他模式(SEQIDNO：267)[RK]-X(9)G-X-X-I-X(28)-H-X(14)-[YF]-X(4)-S-X(23)-[RK]絕對模式(SEQIDNO：268)G-X-W-X-X-X-E-D-X-X-[IL]-[RK]-X-X-X-X-X-X-G-X(23)-R-W-[IL]-N-Y-L-R-P-X-[IL]-[RK]-H-G-X-[FY]-X-X-X-E-[DE]-X(13)-W-X-X-X-A-X-X-X-X-X-R-T可以通過序列識別號266的一致序列對MYB-亞群14序列進行定義。在所述的MYB-亞群14序列中，通過發(fā)現(xiàn)排他性的氨基酸殘基或者支配性的氨基酸殘基，從而對所述的氨基酸殘基所在的位置進行識別。在下面的描述中，所有的位置的數(shù)字是參照AtMYB68蛋白(SEQIDNO：2)而言的，所述的蛋白與上述的一般的一致序列，序列識別號266相關(guān)聯(lián)。在所述的R2結(jié)構(gòu)域中的位置26上，在MYB-亞群14中存在一個保守的帶陽性電荷的(K或者R)殘基。盡管這個氨基酸在這一位置上對于這個亞群而言不是排他性的，但所述的其余AtMYB蛋白的趨勢是一種疏水性的殘基，在所有的MYB蛋白中有超過50％的蛋白具有一個疏水性的異亮氨酸殘基或者纈氨酸殘基(參見Stracke等人于2001年發(fā)表的文章)。亞群14中的全部成員在位置36上含有一個插入，形成了一個額外的氨基酸殘基。這對于MYB-亞群14而言似乎是排他性的。在所有的情況下，甘氨酸(G)，一個小的疏水性殘基，是所述的額外的殘基，除了在MYB87(SEQIDNO：32)中以及在一種水稻同系物(SEQIDNO：194)中，在所述的MYB87中，這一位置上含有一個天冬酰胺殘基，而在所述的水稻同系物中，這一位置上含有一個銀色金屬(argentine)。所述的MYB-亞群14成員在位置39上支配性的含有一個疏水性的異亮氨酸殘基。其中一個例外是一種被鑒定為序列識別號191的水稻同系物，所述的水稻同系物在這一位置上具有一個谷氨酰胺。盡管在MYB蛋白的這一位置上通常會發(fā)現(xiàn)其他的疏水性殘基，但異亮氨酸對于MYB-亞群14而言似乎是排他性的。除此之外，在這一位置上，帶陽性電荷的殘基(39％R)以及極性殘基(23％N)是最普遍的。在所述的R3結(jié)構(gòu)域中的位置68上，所有的MYB-亞群14成員含有所述的帶陽性電荷的組氨酸殘基。一種帶陽性電荷的殘基出現(xiàn)在所有的MYB蛋白中的這一位置上；然而與所述的MYB-亞群14相反的是，在其他的MYB蛋白中73％含有一個精氨酸(R)殘基并且17％含有一個賴氨酸殘基。在位置83上，MYB-亞群14的大部分成員含有一個芳香族的疏水性殘基(酪氨酸Y，或者苯丙氨酸F)。芳香族疏水性殘基在這一位置上的出現(xiàn)對于MYB-亞群14而言似乎是排他性的。大部分的MYB蛋白具有一個組氨酸殘基(87％)。已經(jīng)提出這個組氨酸是存在于所述的螺旋的疏水性核中的一個至關(guān)重要的殘基(參見Ogata等人于1992年發(fā)表的文章)。經(jīng)過核磁共振(NMR)分析，所述的組氨酸似乎與兩個臨界的(critical)色氨酸殘基進行了接觸。在位置83上不存在組氨酸并不必須將其排除在MYB-亞群14的成員之外，因為已經(jīng)識別出有些成員不具有組氨酸殘基，例如序列識別號為169以及序列識別號為225的成員。在位置88上，MYB-亞群14的成員含有所述的極性絲氨酸殘基，而幾乎所有的其他MYB蛋白(91％)含有所述的極性天冬酰胺殘基。絲氨酸殘基對于這個亞群而言似乎是排他性的。在位置88上不存在絲氨酸并不必須將其排除在MYB-亞群14的成員之外，因為已經(jīng)識別出至少一個MYB-亞群14的成員在位置88上具有一個苯丙氨酸殘基，例如序列識別號為256的成員。在位置112上，MYB-亞群14的成員含有一個帶陽性電荷的精氨酸殘基或者賴氨酸殘基。大部分的MYB蛋白在這一位置上同樣含有帶陽性電荷的殘基，然而，組氨酸(48％)是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的最普遍的殘基。在位置112上不存在精氨酸并不必須將其排除在MYB-亞群14的成員之外，因為已經(jīng)識別出至少一個MYB-亞群14的成員在位置112上具有一個谷氨酸殘基，例如含有一個谷氨酸殘基的序列識別號為68的成員以及含有一個蘇氨酸的序列識別號為191的成員。在R2R3結(jié)構(gòu)域中存在變異是可以允許的，正如在所述的被識別出的一致序列中所表示出的。相對于所呈現(xiàn)的一致序列而言，一個MYB-亞群14序列的R2R3結(jié)構(gòu)域可以是90％同源的，優(yōu)選是95％同源的或者更加優(yōu)選是99％同源的。S1基序以及S2基序的加入在MYB-亞群14中，所述的MYB68序列以及MYB84序列中含有兩個更加保守的基序，所述的基序被鑒定為S1(SFSQLLLDPN)(SEQIDNO：269)以及S2(TSTSADQSTISWEDI)(SEQIDNO：270)。在AtMYB68序列、AtMYB36序列和AtMYB84序列以及蕓薹屬MYB68序列、蕓薹屬MYB36序列和蕓薹屬MYB84序列中都發(fā)現(xiàn)了這些基序，并且這些氨基酸序列表現(xiàn)出了至少70％的同源性。除此之外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在油菜(Brassicanapus)(Canola)、蕪菁(Brassicarapa)(卷心菜)、甘藍(Brassicaoleracea)、野芥菜(Raphanusraphanistrum)(小蘿卜)中的直系同源基因中存在與所述的S1基序或者S2基序的同源性，并且在枳殼(Poncirustrifoliate)(橘)的S2區(qū)域中存在同源性，而在截形苜蓿(Medicagotruncatula)的同系物以及葡萄(VitisVinifera)(葡萄)的同系物的S2區(qū)域中存在微弱的同源性。當(dāng)被作為S1基序或者S2基序而被包括在內(nèi)時，目標(biāo)序列應(yīng)當(dāng)表現(xiàn)出具有至少70％的同源性，更加優(yōu)選為80％并且最優(yōu)選為90％。來自于不屬于擬南芥以及蕓薹屬的物種中的MYB68序列以及MYB84序列可能不含有S1基序以及S2基序，但仍然可能被劃分為一種MYB亞群-14序列，這是根據(jù)序列分析以及考慮到其他標(biāo)準(zhǔn)來進行劃分的。MYB-亞群14成員的識別，包括MYB68，同系物可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種公共軟件或者商業(yè)軟件來尋找AtMYB-亞群14序列的同系物(表格1)或者一種目標(biāo)MYB68(SEQIDNO：1，SEQIDNO：2)?？梢岳没A(chǔ)性局部相似性比對搜索工具(Blast)進行比對并且對推定的序列進行識別?？梢园凑者@里所概括的方法進行搜索。使用例如tblastn、tblastp這樣的程序確定具有最高同源性的同系物，針對從美國國立生物信息中心(NCBI)處獲得的數(shù)據(jù)庫以及其他的基因組數(shù)據(jù)庫進行搜索，其中所述的從美國國立生物信息中心(NCBI)處獲得的數(shù)據(jù)庫是例如表達序列標(biāo)簽數(shù)據(jù)庫(EST)，基因組綜述序列數(shù)據(jù)庫(GSS)，高通量基因組數(shù)據(jù)庫(HTG)以及染色體數(shù)據(jù)庫，所述的其他基因組數(shù)據(jù)庫是例如所述的美國基因組研究所(TIGR)人類基因序列集成(unigene)數(shù)據(jù)庫，葫蘆(Cucurbit)基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(http：//www.icugi.org/)，向日葵以及萵苣(http：//compgenomics.ucdavis.edu/compositae_index.php)，截形苜蓿(國際苜?；蚪M注釋機構(gòu))，SGN(http：//www.sgn.cornell.edu/)，以及橘(http：//harvest.ucr.edu/)。當(dāng)物種具有更高程度的歧化時，在此情形下可以對所述的比對參數(shù)進行適當(dāng)?shù)淖兓?，其中所述的比對參?shù)是例如需要的缺口數(shù)量(Gapcosts)，矩陣值(matrixvalues)。為了證實在每個物種中最接近AtMYB68的hit基因事實上是一種MYB68同系物，可以進行雙向基礎(chǔ)性局部相似性比對搜索，在所述的搜索中針對所有的擬南芥蛋白進行上述同系物的基礎(chǔ)性局部相似性比對搜索。在許多情況中，所述的同系物中的最接近擬南芥的hit基因是一種MYB68基因家族成員(MYB亞群-14)，而不是MYB68本身。如果所述的同系物與一種擬南芥蛋白最接近，而所述的擬南芥蛋白不在所述的MYB68基因家族的范圍之內(nèi)，在這種情況下，所述的同系物被評定為不屬于MYB-亞群14中的成員。可以使用例如“getorf”這樣的程序?qū)﹂_放閱讀框進行確定，其中所述的“getorf”程序來自于所述的歐洲分子生物學(xué)開放軟件包(EMBOSS)程序，或者表達序列標(biāo)簽數(shù)據(jù)庫掃描(ESTScan)。識別MYB序列的方法、將MYB序列劃分成指定的亞群的方法以及識別MYB-亞群14序列的方法在Stracke等人于2001年發(fā)表的文章中以及在Kranz等人于1998年發(fā)表的文章中進行了進一步的描述。利用傳統(tǒng)的基礎(chǔ)性局部相似性比對搜索工具(blast)的方法通常不能找到在高度歧化的物種之間存在的具有微弱的保守性的同系物。在這樣的情況下，在同系物之間將存在保守的基序、結(jié)構(gòu)域以及指紋(fingerprint)，并且這些物質(zhì)是很好的功能同源性的預(yù)報者。存在許多精通于在物種間尋找保守性結(jié)構(gòu)域的程序，所述的程序使用到隱式馬爾可夫模型，位置特異性得分矩陣，以及模式。PSI-Blast，PRATT，PHI-Blast，以及HMMBuild/HMMSearchPRATT是一種由所述的蛋白質(zhì)功能位點(PROSITE)數(shù)據(jù)庫提供的工具。它建立了來自于一組保守性蛋白質(zhì)的保守性模式http：//www.expasy.ch/prosite/。利用PRATT來確定MYB68與同其最接近的同系物之間的保守性模式。之后利用ScanProsite以及PHI-Blast分別在所述的Swiss-Prot以及美國國立生物信息中心(NCBI)蛋白數(shù)據(jù)庫中尋找所述的保守性模式。所述的搜索結(jié)果限于發(fā)生在同樣含有所述的模式之間的比對。利用HMMBuild來建立一種隱式馬爾可夫模型，其中使用到所述的MYB68及其同系物。利用所述的隱式馬爾可夫模型，通過HMMSearch在所述的美國國立生物信息中心的蛋白數(shù)據(jù)庫中進行掃描。能夠找到與所述的基礎(chǔ)blastp搜索相類似的蛋白。利用上述的方法，在超過50種不同的植物物種中發(fā)現(xiàn)了MYB68的同系物。在大多數(shù)的情形中，同源性被限制于所述的N-末端MYBDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域中。在油菜(Brassicanapus)(Canola)、蕪菁(Brassicarapa)(卷心菜)、甘藍(Brassicaoleracea)、野芥菜(Raphanusraphanistrum)(小蘿卜)、枳殼(Poncirustrifoliate)(橘)中發(fā)現(xiàn)的基因中，在所述的保守性較弱的C-末端區(qū)域中存在同源性，而在截形苜蓿(Medicagotruncatula)的同系物以及葡萄(VitisVinifera)(葡萄)中發(fā)現(xiàn)的基因中，在所述的S2區(qū)域內(nèi)存在微弱的同源性。通過下載強有力的表達序列標(biāo)簽(EST)hits基因，并且使用CAP3對它們進行裝配，從而對所述的枳殼(Poncirustrifoliate)以及蕪菁(Brassicarapa)基因進行識別。上述得到的重疊群不能編碼一個完整的蛋白。來自于橘的所述重疊群序列編碼了一個僅僅跨越所述的S2區(qū)域的部分蛋白，而在蕪菁(Brassicarapa)中，發(fā)現(xiàn)了一個具有202個氨基酸的部分蛋白，所述的部分蛋白跨越了AtMYB68中的1-202位置。各種不同的程序已經(jīng)利用數(shù)據(jù)圖、模式、以及隱式馬爾可夫模型對所述的MYB結(jié)構(gòu)域進行了定義。為了證實所述的MYB結(jié)構(gòu)域在一個未知的序列中的存在，可以針對這些數(shù)據(jù)圖對這個序列進行搜索。InterProScan是格外有效的，因為它提供了一種能夠同時在13個程序中進行查詢的界面。被整合在InterPro中的所述數(shù)據(jù)庫包括a)ProDom：一個蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域家族的數(shù)據(jù)庫。是通過對來自于Swiss-Prot/Trembl(歐洲分子生物學(xué)實驗室)數(shù)據(jù)庫中的同源性片段進行聚集而建立的，并且隨后進行遞歸性的PSI-BLAST(位置特異性疊代基礎(chǔ)性局部相似性比對搜索工具)搜索。b)HMMTIGR：由隱式馬爾可夫模型所表示的蛋白質(zhì)家族。c)TMHMM：對蛋白質(zhì)中的跨膜螺旋的預(yù)測。d)FPrintScan：對指紋(fingerprints)PRINTS數(shù)據(jù)庫進行的檢索。指紋是由多個基序所表示的蛋白質(zhì)家族。e)ProfileScan：來自于家族相關(guān)性序列的數(shù)據(jù)圖。f)HMMPanther：一個隱式馬爾可夫模型的數(shù)據(jù)庫。g)HMMPIR：基于完整蛋白的進化關(guān)系的隱式馬爾可夫模型。h)ScanRegExp：對所述的模式以及數(shù)據(jù)圖的蛋白位點數(shù)據(jù)庫進行掃描。i)Gene3D：一個含有功能信息的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫。j)HMMPfam：由隱式馬爾可夫模型所表示的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域家族。k)Superfamily：一個對所有的經(jīng)過完整測序的有機體進行結(jié)構(gòu)蛋白以及功能蛋白的標(biāo)注的數(shù)據(jù)庫。l)HMMSmart：允許以隱式馬爾可夫模型為基礎(chǔ)對移動的結(jié)構(gòu)域進行識別。m)SignalIP：預(yù)測在氨基酸序列中是否存在信號肽的斷裂位點并且定位所述的信號肽斷裂位點在氨基酸序列中的位置。對應(yīng)于所述的蛋白中具有最高保守性的區(qū)域，將塊(blocks)乘以進行比對的不帶有缺口的片段。利用三個塊對所述的MYB結(jié)構(gòu)域進行表示。正如所預(yù)期的，AtMYB68含有這三個塊中的每一個，以及一個5Wos2塊。本發(fā)明在一定程度上是以發(fā)現(xiàn)了具有熱脅迫耐受性的植物作為基礎(chǔ)的。形成所述的熱耐受性表現(xiàn)型的基因已經(jīng)被確定并且被證明是一個MYB68基因。這里公開了制備一種熱耐受性轉(zhuǎn)基因植物的方法。具體的，本發(fā)明識別了一個轉(zhuǎn)錄因子基因家族，具體的說是所述的MYB基因家族，并且特別的說是一個MYB-亞群14，當(dāng)所述的MYB-亞群14在植物中進行表達時，使植物具有熱脅迫耐受性并且所述的植物在經(jīng)過熱脅迫之后具有增加的產(chǎn)量或者顯示出對干旱脅迫或者鹽脅迫所具有的耐受性。實施例10：MYB68同系物的識別利用數(shù)據(jù)庫序列搜索工具對來自于相同的植物物種、不同的植物物種或者其他有機體的同系物進行識別，其中所述的數(shù)據(jù)庫序列搜索工具是例如所述的基礎(chǔ)性局部相似性比對搜索工具(BLAST)(參見Altschul等人于1990年在J.Mol.Biol.《分子生物學(xué)雜志》215：403-410中發(fā)表的文章；以及Altschul等人于1997年在Nucl.AcidRes.《核酸研究》25：3389-3402中發(fā)表的文章)。利用所述的BLOSUM-62得分矩陣，對所述的tblastn或者blastn序列分析程序進行使用(參見HenikoffS.以及HenikoffJ.G.于1992年在Proc.Natl.Acad.Sci.USA《美國科學(xué)院院刊》89：10915-10919中發(fā)表的文章)。所述的基礎(chǔ)性局部相似性比對搜索工具(BLAST)報告的給出提供了一個得分，所述的得分考慮了相似殘基或者相同殘基的比對以及為了對所述的序列進行比對而需要的任何缺口。所述的得分矩陣為任何可能的序列對間進行的比對指定了一個得分。所述的P值反映了期望看到一個偶然發(fā)生的得分的次數(shù)。較高的得分是優(yōu)選的并且一個低的閾值P值的閾值是優(yōu)選的。這些是所述的序列識別標(biāo)準(zhǔn)。所述的tblastn序列分析程序被用來在一個核苷酸數(shù)據(jù)庫中的六種翻譯方式的序列中對一種多肽序列進行查詢。當(dāng)遇到P值小于-25，優(yōu)選小于-70，并且更加優(yōu)選小于-100時，將其鑒定為一種同源序列(范例性的選擇性的序列標(biāo)準(zhǔn))。所述的blastn序列分析程序被用來在一個核苷酸序列數(shù)據(jù)庫中對一種核苷酸序列進行查詢。同樣，在這種情形中，較高的得分是優(yōu)選的并且一個優(yōu)選的閾值P值小于-13，優(yōu)選小于-50，并且更加優(yōu)選小于-100?？梢赃x擇的，通過隨機引物法對來自于具有下述序列識別號的序列的片段進行32磷的放射性標(biāo)記(參見Sambrook等人于1989年編寫的MolecularCloning.ALaboratoryManual《分子克隆實驗室手冊》，第二版，ColdSpringHarborLaboratoryPress冷泉港實驗室出版社，NewYork紐約)，并且利用其進行一種植物基因組文庫的篩選(范例性的受試多核苷酸)，其中所述的序列是：序列1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，88，90，91，92，94，96，98，100，102，104，106，108，109，110，112，114，116，118，120，122，124，125，127，129，130，132，134，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，211，213，214，216，217，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，247，249，251，253，255，257，259，261，263以及265。作為一個例子，依照Stockinger等人所描述的方法(參見StockingerE.J.等人于1996年在J.Heredity《遺傳學(xué)雜志》87：214-218中發(fā)表的文章)，從擬南芥(Arabidopsisthaliana)、煙草(Nicotianatabacum)、醋栗番茄(Lycopersiconpimpinellifolium)、甜櫻桃(Prunusavium)、酸櫻桃(Prunussativus)、或者水稻(Oryzasativa)中分離出植物總DNA。使大約2至10微克的每種DNA的樣本進行限制性消化，將其轉(zhuǎn)移至尼龍膜上(MicronSeparations，Westboro，Mass.)并且進行雜交。雜交條件為：42℃，在由下述物質(zhì)組成的溶液中：50％的甲酰胺，5倍的檸檬酸鈉鹽緩沖液(SSC)，20毫摩磷酸鹽緩沖液1倍的Denhardt’s，10％的硫酸葡聚糖，以及100微克/毫升的鯡魚精DNA。在室溫(RT)下利用下述物質(zhì)進行四次低度嚴(yán)格的洗滌：2倍的檸檬酸鈉鹽緩沖液(SSC)，0.05％的十二烷基肌氨酸鈉以及0.02％的焦磷酸鈉，在此之后在55℃下利用下述物質(zhì)進行高度嚴(yán)格的洗滌：：0.2倍的檸檬酸鈉鹽緩沖液(SSC)，0.05％的十二烷基肌氨酸鈉以及0.02％的焦磷酸鈉。進行高度嚴(yán)格的洗滌直至依照Walling等人所描述的方法(參見WallingL.L等人于1988年在Nucl.AcidsRes.《核酸研究》16：10477-10492中發(fā)表的文章)在所述的洗脫液中探測不到可以計算的物質(zhì)。實施例11：MYB68的技術(shù)特征的鑒定可以利用識別基因?qū)YB68基因進行識別，其中所述的識別基因與AtMYB68(SEQIDNO：1)具有高度的同源性。除了與所述的核苷酸序列或者氨基酸序列具有同源性之外，我們可以對備選基因進行識別，其中所述的備選基因共享構(gòu)象蛋白結(jié)構(gòu)。這樣的結(jié)構(gòu)基序能夠幫助進行相關(guān)蛋白的識別，并且對所述的相關(guān)蛋白的結(jié)構(gòu)與功能間的關(guān)系進行鑒定。實施例12：同系物的功能確認(rèn)將備選的同系物導(dǎo)入到擬南芥中并且對熱耐受性進行評價。使由具有下述序列識別號的序列所公開的基因在擬南芥植物中進行表達并且按照這里所描述的方法對熱耐受性進行評價，其中所述的序列為：序列1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，88，90，91，92，94，96，98，100，102，104，106，108，109，110，112，114，116，118，120，122，124，125，127，129，130，132，134，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，211，213，214，216，217，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，247，249，251，253，255，257，259，261，263以及265。任選的，如果一個備選的MYB-亞群14序列與所述的一般模式相互匹配，并且其進一步的包括一種與所述的排他模式之間的匹配，那么所述的序列是一種被包括在內(nèi)的有力的備選者，成為一個MYB-亞群14序列或者MYB68基因，可以在任何可轉(zhuǎn)化的物種中對上述序列的表達進行評價，其中所述的物種是例如蕓薹屬，玉米，棉花，大豆或者水稻。在本發(fā)明公開中已經(jīng)提供了這樣的功能性測試的例子。值得注意的是，在這里所公開的某些序列不是完整長度的?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)分子方法獲得完整長度的序列。之后可以按照這里所描述的方法對所述的完整長度的序列進行表達。當(dāng)前第1頁1 2 3