1.一種寡雄腐霉原生質體的制備和再生方法,其特征是包括如下步驟:
a. 菌絲體制備:將培養(yǎng)在平板上的寡雄腐霉菌絲孢子混合體刮下來,用滲透壓穩(wěn)定劑洗滌,離心收集菌絲孢子混合體;
b. 原生質體制備:向每1g收集到的菌絲孢子混合體中加入0~6mL 1% lysing enzyme,0~6mL 1% cellulase和50~200 U lyticase復合酶解液進行酶解,獲得寡雄腐霉原生質體;
c. 原生質體純化:過濾除去上述獲得的原生質體與菌絲孢子的混合物,離心收集純化后的寡雄腐霉原生質體;
d. 原生質體再生:用滲透壓穩(wěn)定劑洗滌重懸原生質體,在液體再生培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)。
2.根據權利要求1所述的原生體制備和再生方法,其特征在于所述滲透壓穩(wěn)定劑為0.6~0.8 mol/L甘露醇溶液,25 mmol/L CaCl2和10 mmol/L Tris-HCl, pH值為7.5。
3.根據權利要求1所述的原生體制備和再生方法,其特征在于所述復合酶解液酶解寡雄腐霉菌絲孢子混合體的酶解條件為:30℃,80rmp,酶解2~3h。
4.根據權利要求1所述的原生體制備和再生方法,所述復合酶解液中l(wèi)ysing enzyme與cellulase的含量不能同時為0。
5.根據權利要求1所述的原生質體制備和再生方法,其特征在于所述純化離心條件為5500rpm,室溫離心10min。
6.根據權利要求1所述的原生質體制備和再生方法,其特征在于所述液體再生培養(yǎng)基為加入滲透壓穩(wěn)定劑的液體PDA培養(yǎng)基,pH值為7.5。
7.一種權利要求1中使用的用于制備寡雄腐霉原生質體的復合酶解液,其特征在于針對每1g寡雄腐霉菌絲孢子混合體,復合酶解液的配方為, 0~6mL 1% lysing enzyme,0~6mL 1% cellulase和50~200 U lyticase,且lysing enzyme與cellulase的含量不能同時為0。