1.一種特異性表達人CD46轉(zhuǎn)基因豬的實時熒光LAMP檢測方法,其特征在于,所述方法具體包括以下步驟:
1)提取待檢樣品基因組DNA作為LAMP檢測反應的模板;
2)配制反應液,構(gòu)建檢測體系;
所述的反應液包括:
步驟1)提取的DNA模板;
兩條外引物:F3:GCTGTGTCCGTGGTGAGA;
B3:GAACTCTGCACACAGGCC;
兩條內(nèi)引物:FIP:ACCCTTACCGCGGGTACTGTCTTTGCCCTGTGTTCCCTTG;
BIP:GTCTGCTGTGCCCCATGTGCTTACGCACAGCACGCTC;
兩條環(huán)引物:LF:CCCTAATGAACACCCCACTCA;
LB:CCTGGCCAGGTGTTGCT;
3)等溫擴增反應:將所述反應液離心混勻,進行等溫擴增反應;
4)結(jié)果判斷:若有“S”型擴增曲線,則判斷為陽性,即具有hCD46基因;若無“S”型擴增曲線,則判為陰性,即不含有hCD46基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述檢測體系為25μL熒光改良LAMP反應體系,包括:兩條內(nèi)引物各1.6μM,兩條外引物各0.2μM,兩條環(huán)引物0.8μM,1μLDNA模板。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述檢測體系為25μL熒光改良LAMP反應體系,還包括2.5μL 10×Isothermal buffer,0.8M甜菜堿,0.2mM每dNTPs,8U Bst DNA聚合酶,0.5μL SYBR Green I(25×)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任一項所述的方法,其特征在于,等溫擴增反應的條件為63℃反應45min。
5.一種特異性表達人CD46轉(zhuǎn)基因豬的實時熒光LAMP檢測引物組合,其特征在于,所述引物組合包括:
兩條外引物:F3:GCTGTGTCCGTGGTGAGA;
B3:GAACTCTGCACACAGGCC;
兩條內(nèi)引物:FIP:ACCCTTACCGCGGGTACTGTCTTTGCCCTGTGTTCCCTTG;
BIP:GTCTGCTGTGCCCCATGTGCTTACGCACAGCACGCTC;
兩條環(huán)引物:LF:CCCTAATGAACACCCCACTCA;
LB:CCTGGCCAGGTGTTGCT。
6.含有權(quán)利要求5所述引物組合的試劑或試劑盒。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑或試劑盒,其特征在于,其中的兩條內(nèi)引物各1.6μM,兩條外引物各0.2μM,兩條環(huán)引物0.8μM,1μLDNA模板。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑或試劑盒,其特征在于,其還包括2.5μL 10×Isothermal buffer,0.8M甜菜堿,0.2mM每dNTPs,8U Bst DNA聚合酶,0.5μL SYBR Green I(25×)。
9.權(quán)利要求5所述的引物組合或權(quán)利要求6~8任一項所述的試劑或試劑盒在特異性表達人CD46轉(zhuǎn)基因豬的實時熒光LAMP檢測中的應用。