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一種DC細胞的制備方法與流程

文檔序號:11837537閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種DC細胞的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

S1、用人單核細胞在培養(yǎng)基中孵育得到未成熟DC細胞溶液;

S2、取S1中得到的未成熟DC細胞溶液,加入IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、GM-CSF、IL-4、IL-7得到混合液;調(diào)節(jié)溫度至35-37℃,孵育48-52h,收集細胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述DC細胞的制備方法,其特征在于,S1中,培養(yǎng)基為含有IL-4、GM-CSF的DC-GROW培養(yǎng)基,其中,IL-4的濃度為1000U/ml,GM-CSF的濃度為800U/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述DC細胞的制備方法,其特征在于,S1中,將人單核細胞加入DC-GROW培養(yǎng)基中混勻,培養(yǎng)得到溶液A;調(diào)節(jié)溫度至35-37℃,孵育3.5-4.5h,除去非粘附細胞,向粘附細胞中加入培養(yǎng)基,繼續(xù)孵育,至有細胞集落生成時,繼續(xù)孵育23-25h得到未成熟DC細胞溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述DC細胞的制備方法,其特征在于,S1中,溶液A中,人單核細胞的濃度為1×106個/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述DC細胞的制備方法,其特征在于,S1中,在繼續(xù)孵育,至有細胞集落生成的過程中,若培養(yǎng)基顏色變黃,則補加培養(yǎng)基。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述DC細胞的制備方法,其特征在于,S2中,混合液中,IL-1β的濃度為20ng/ml,IL-6的濃度為200ng/ml,TNF-α的濃度為20ng/ml,PGE2的濃度為2μg/ml,GM-CSF的濃度為800U/ml,IL-4的濃度為1000U/ml,IL-7的濃度為20ng/ml。

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