分離提取2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎姆椒夹g(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及中藥有效成分的提取方法，具體是一種分離提取2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎姆椒?。技術(shù)背景款冬花是菊科植物款冬(TussilagofarfaraL.)的干燥花蕾。具有潤(rùn)肺下氣、止咳化痰的功效。除具有止咳化痰作用外，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)款冬花提取物對(duì)交感神經(jīng)、擬交感神經(jīng)、血管平滑肌等有直接作用，另外還有抗氧化、抗菌、α-葡萄糖苷酶抑制等作用。2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮是從款冬花中提取純化得到的，而且在款冬花中含量較高，因此可作為質(zhì)量控制指標(biāo)用于評(píng)價(jià)款冬花藥材、提取物及制劑的質(zhì)量(藥物分析雜志，2012，32(9)：1517-1524)。2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎?，英文名稱2,2-dimethyl-6-acetylchromanone，分子式：C13H14O3，，結(jié)構(gòu)式如下：目前尚無(wú)2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎獙?duì)照品及其制備方法。已有文獻(xiàn)(JournalofChinesePharmaceuticalSciences，2007,288-293)采用70％乙醇提取5次后合并，置水中成懸浮物，依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，再將環(huán)己烷部位用100:0-80:20比例的石油醚和乙酸乙酯混合溶劑過(guò)硅膠柱得到I-IV部分，最后將第Ⅲ部分用100：0-90：10比例的石油醚和丙酮混合溶劑過(guò)硅膠柱可得2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮。該方法步驟繁瑣，成本高，得率低(約為1mg/kg)。針對(duì)該問(wèn)題，我們開發(fā)了一種操作簡(jiǎn)單、成本較低、得率較高、對(duì)環(huán)境污染較小，純度在98％以上的2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎闹苽浞椒ā?br/>
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種分離提取2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎椒ǎ摲椒ú僮鞑襟E簡(jiǎn)單，得率較高，成本較低，2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎兌仍?8％以上可作為化學(xué)對(duì)照品。本發(fā)明的技術(shù)方案如下：(1)取款冬花藥材，加入液固比為2-3ml/g的石油醚常溫浸泡1-5h，超聲提取20-100min，取提取液過(guò)濾，減壓濃縮得到浸膏；(2)采用高速逆流色譜儀，溶劑系統(tǒng)由正己烷、甲醇、乙酸乙酯、水組成，體積比為10:5:11:3，置于分液漏斗中，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，用泵將固定相灌滿分離柱，取步驟(1)所得浸膏用上相溶解，上樣，泵入流動(dòng)相，流速為1-2.5ml/min(優(yōu)選為2.5ml/min)，主機(jī)轉(zhuǎn)速為750-850rpm(優(yōu)選為800rpm)，當(dāng)流動(dòng)相流出時(shí)根據(jù)檢測(cè)器圖譜收集目標(biāo)成分，減壓濃縮至干燥，即2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎制?；(3)將步驟(2)中所得2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮粗品過(guò)硅膠柱，以體積比為20-30:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶劑洗脫，用薄層色譜對(duì)各餾分進(jìn)行檢測(cè)，收集含2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎酿s分，減壓濃縮，即得到2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮。所述步驟(3)中石油醚和乙酸乙酯混合溶劑體積比為25:1。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明從原料款冬花開始經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的提取、一次逆流色譜分離，過(guò)一次硅膠柱可以得到2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎兤?。本發(fā)明分離提取方法操作簡(jiǎn)單，環(huán)境污染小，成本較低，2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎兌瓤蛇_(dá)98％以上。其可作為化學(xué)對(duì)照品，用于款冬花藥材、提取物及制劑的質(zhì)量控制。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中制備的2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎母咚倌媪鞑杉瘓D譜。圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中制備的2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎腍PLC圖譜。圖3為本發(fā)明實(shí)施例1中制備的2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮的1H-NMR圖譜。具體實(shí)施方式實(shí)施例1取干燥的款冬花蕾750g粉碎，加1.5L100％石油醚常溫浸泡3h，超聲提取80min，取提取液過(guò)濾，減壓濃縮至干燥，得浸膏1.392g。用高速逆流分離方法，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置于分液漏斗中，靜置分層，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，用泵將固定相灌滿分離柱，取浸膏用上相溶解，上樣，當(dāng)主機(jī)轉(zhuǎn)速達(dá)到800rpm，以2.5ml/min流速泵入流動(dòng)相，當(dāng)流動(dòng)相流出時(shí)根據(jù)檢測(cè)器圖譜(見圖1)收集目標(biāo)成分，減壓濃縮至干燥，得粗提取物。用硅膠色譜柱分離方法，以石油醚：乙酸乙酯＝25:1系統(tǒng)濕法裝柱，并用該配比的混合溶劑對(duì)粗提取物進(jìn)行洗脫，用石油醚和乙酸乙酯10:3作為展開劑對(duì)餾分進(jìn)行檢測(cè)，合并目標(biāo)餾分，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上揮干溶劑后得2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎兤?，得率為5.044mg/kg。實(shí)施例2取干燥的款冬花蕾750g粉碎，加2L100％石油醚常溫浸泡1h，超聲提取100min，提取液過(guò)濾，減壓濃縮至干燥，得浸膏1.354g。用高速逆流分離方法，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置于分液漏斗中，靜置分層，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，用泵將固定相灌滿分離柱，取浸膏用上相溶解，上樣，當(dāng)主機(jī)轉(zhuǎn)速達(dá)到750rpm，以1ml/min流速泵入流動(dòng)相，當(dāng)流動(dòng)相流出時(shí)根據(jù)檢測(cè)器圖譜(見圖1)收集目標(biāo)成分，減壓濃縮至干燥，得粗提取物。用硅膠色譜柱分離方法，以石油醚：乙酸乙酯＝20:1系統(tǒng)濕法裝柱，并用該配比的混合溶劑對(duì)粗提取物進(jìn)行洗脫，用石油醚和乙酸乙酯10:3作為展開劑對(duì)餾分進(jìn)行檢測(cè)，合并目標(biāo)餾分，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上揮干溶劑后得2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎?，得率為4.913mg/kg。實(shí)施例3取干燥的款冬花蕾750g粉碎，加1.75L100％石油醚常溫浸泡5h，超聲提取20min，提取液過(guò)濾，減壓濃縮至干燥，得浸膏1.301g。用高速逆流分離方法，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置于分液漏斗中，靜置分層，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，用泵將固定相灌滿分離柱，取浸膏溶于上相中，上樣，當(dāng)主機(jī)轉(zhuǎn)速達(dá)到850rpm，以2ml/min流速泵入流動(dòng)相，當(dāng)流動(dòng)相流出時(shí)根據(jù)檢測(cè)器圖譜(見圖1)收集目標(biāo)成分，減壓濃縮至干燥，得粗提取物。用硅膠色譜柱分離方法，以石油醚：乙酸乙酯＝23:1系統(tǒng)濕法裝柱，并用該配比的混合溶劑對(duì)粗提取物進(jìn)行洗脫，用石油醚和乙酸乙酯10:3作為展開劑對(duì)餾分進(jìn)行檢測(cè)，合并目標(biāo)餾分，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上揮干溶劑后得2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎?，得率為4.816mg/kg。實(shí)施例42,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎Y(jié)構(gòu)分析：采用核磁共振對(duì)實(shí)施例1中得到的2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，證明為2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎?。并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行1H-NMR歸屬(表1，圖3)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。表12,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎?H-NMR數(shù)據(jù)歸屬實(shí)施例52,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮的HPLC--UV液相色譜純度檢測(cè)：取上述條件得到的2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎獑误w適量，溶于色譜甲醇中，微孔濾膜過(guò)濾，置于液相小瓶中，采用如下條件檢測(cè)，結(jié)果顯示2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮純度98％以上(表2，圖2)表2名稱保留時(shí)間(分鐘)面積(微伏*秒)高度(微伏)1峰116.8255965813323252色譜條件：watersAlliancee2695HPLC色譜檢測(cè)儀(含e2695分離單元，2489UV-Detector)；Empower3色譜工作站；ODS-3(5μm,4.5×250mm)色譜柱。流動(dòng)相A乙腈，流動(dòng)相C水，乙腈-水(65:35)；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，204nm，203nm；流速1ml/min；柱溫30℃，檢測(cè)物質(zhì)為2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎＿M(jìn)樣量：10ul。