本發(fā)明涉及細胞技術領域，特別是涉及一種基于細胞因子的細胞處理方法、試劑盒及凍干粉。

背景技術：

細胞因子在面部皮膚保養(yǎng)方面的功能已為人們所熟悉，目前已有多種相關產(chǎn)品上市，比如含有成纖維細胞生長因子(fibroblastgrowthfactor，簡寫fgf)、表皮細胞生長因子(epidermalgrowthfactor，簡寫egf)等類型的單類型重組細胞因子凍干粉。這種類型的產(chǎn)品將凍干粉和溶媒配合使用，多用于創(chuàng)面修復領域。

研究發(fā)現(xiàn)，臍帶和脂肪來源的間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)液可促進皮膚成纖維細胞的增殖，提升膠原蛋白合成量。因此，也有采集間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)上清或?qū)㈤g充質(zhì)干細胞培養(yǎng)液和裂解液制作成凍干粉的技術，或者將培養(yǎng)上清制作成脂質(zhì)體，添加到護膚品中的技術，以作為皮膚美容用途。同時，富血小板血漿(platelet-richplasma，簡寫prp)在美容方面也被廣泛應用；也有多種采用手動離心或者儀器自動離心的方法進行prp富集制作，并將prp制作成凍干粉的技術。

但是，上述采用來源于臍帶間充質(zhì)干細胞的因子、富血小板血漿或直接采用重組的細胞因子進行皮膚保養(yǎng)，其細胞因子配比，很難真正反映人體的皮膚需求。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術問題是提供一種基于細胞因子的細胞處理方法、試劑盒及凍干粉，能夠最大限度地為用戶自體提供皮膚保養(yǎng)或為達到最大限度地為用戶自體提供皮膚保養(yǎng)而提供技術基礎。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的一個技術方案是：提供一種基于細胞因子的細胞處理方法，包括：獲取可產(chǎn)生或包含第一細胞因子的訓練劑和用戶自體的皮膚成纖維細胞，所述第一細胞因子是能夠促進細胞增殖、激活細胞功能的細胞因子；通過所述訓練劑對所述皮膚成纖維細胞進行訓練，以獲得激活的皮膚成纖維細胞。

其中，所述獲取可產(chǎn)生第一細胞因子的訓練劑的步驟，包括：獲取間充質(zhì)干細胞，將所述間充質(zhì)干細胞作為所述訓練劑；通過所述訓練劑對所述皮膚成纖維細胞訓練，以獲得激活的皮膚成纖維細胞的步驟，包括：將所述間充質(zhì)干細胞與所述皮膚成纖維細胞進行共培養(yǎng)，以獲得所述激活的皮膚成纖維細胞。

其中，所述間充質(zhì)干細胞來源于骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織或牙髓組織。

其中，所述獲取可產(chǎn)生第一細胞因子的訓練劑的步驟，包括：獲取間充質(zhì)干細胞因子凍干粉；通過第一溶媒將所述間充質(zhì)干細胞因子凍干粉溶解為間充質(zhì)干細胞因子溶液，將所述間充質(zhì)干細胞因子溶液作為訓練劑；所述通過所述訓練劑對所述皮膚成纖維細胞訓練，以獲得激活的皮膚成纖維細胞的步驟，包括：將所述間充質(zhì)干細胞因子溶液與所述皮膚成纖維細胞進行共培養(yǎng)，以獲得所述激活的皮膚成纖維細胞。

其中，所述第一細胞因子為成纖維細胞生長因子fgf、表皮細胞生長因子egf、血小板衍生生長因子pdgf、膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子gdnf、胰島素樣生長因子igf、顆粒細胞集落刺激因子gcsf、轉化生長因子βtgf-β、血管內(nèi)皮生長因子vegf、胎盤生長因子pigf、干細胞因子scf中的至少一種。

其中，所述方法還包括：利用所述激活的皮膚成纖維細胞獲取皮膚成纖維細胞多種因子第一溶液；將所述皮膚成纖維細胞多種因子第一溶液制成皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉。

其中，所述方法還包括：利用第二溶媒將所述皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子第二溶液，以供所述用戶在自身皮膚上使用；或利用第二溶媒和乳液將所述皮膚成纖維細胞多種因 子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子乳液，以供所述用戶在自身皮膚上使用；或利用第二溶媒和凝膠將所述皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子凝膠，以供所述用戶在自身皮膚上使用。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的另一個技術方案是：提供一種皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉，所述皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉是根據(jù)上述所述的方法制備的。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的又一個技術方案是：提供一種皮膚成纖維細胞多種因子試劑盒，包括：皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉，其是根據(jù)上述所述的方法制備的；第二溶媒，其可溶解所述皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉，并可施加在皮膚上；或乳液，其可施加在皮膚上；或凝膠，其可施加在皮膚上；其中，所述第二溶媒、所述第二溶媒和所述乳液、或所述第二溶媒和所述凝膠可以將所述皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子第二溶液、皮膚成纖維細胞多種因子乳液、或皮膚成纖維細胞多種因子凝膠，以供所述用戶在自身皮膚上使用。

其中，所述第二溶媒的成份包括：無菌水、丙二醇、丙三醇、透明質(zhì)酸以及薄荷醇中的至少一種。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的又一個技術方案是：訓練劑的細胞或凍干粉，所述訓練劑可產(chǎn)生或包含第一細胞因子，所述第一細胞因子是能夠促進細胞增殖、激活細胞功能的細胞因子；凍存的用戶自體的皮膚成纖維細胞；

其中，利用間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基復蘇和培養(yǎng)凍存的有多種來源的間充質(zhì)干細胞，或利用第一溶媒溶解所述訓練劑的凍干粉，獲得訓練劑，利用皮膚成纖維細胞培養(yǎng)基復蘇和培養(yǎng)所述凍存的用戶自體的皮膚成纖維細胞，獲得用戶自體的皮膚成纖維細胞，通過所述訓練劑對所述皮膚成纖維細胞訓練，以獲得激活的皮膚成纖維細胞。

本發(fā)明的有益效果是：區(qū)別于現(xiàn)有技術的情況，本發(fā)明獲取可產(chǎn)生或包含第一細胞因子的訓練劑和用戶自體的皮膚成纖維細胞，第一細胞 因子是能夠促進細胞增殖、激活細胞功能的細胞因子；通過訓練劑對皮膚成纖維細胞進行訓練，以獲得激活的皮膚成纖維細胞。由于訓練劑對皮膚成纖維細胞進行訓練，獲得激活的皮膚成纖維細胞，而且，該皮膚成纖維細胞來源于用戶自體，通過這種方式，能夠為最大限度地真正促進用戶自體皮膚保養(yǎng)做好準備，從而為滿足皮膚保養(yǎng)的個體化需求提供技術基礎。

附圖說明

圖1是本發(fā)明基于細胞因子的細胞處理方法一實施方式的流程圖；

圖2是本發(fā)明基于細胞因子的細胞處理方法另一實施方式的流程圖；

圖3是本發(fā)明基于細胞因子的細胞處理方法又一實施方式的流程圖；

圖4是本發(fā)明基于細胞因子的細胞處理方法又一實施方式的流程圖。

具體實施方式

在詳細介紹本發(fā)明之前，先介紹一下與本發(fā)明相關的基礎技術知識。

體細胞是一個相對于生殖細胞的概念，它是一類細胞類型，其遺傳信息不會像生殖細胞那樣遺傳給下一代。體細胞又分為干細胞和終末分化細胞兩大類。

干細胞具有自我更新特征和多向分化潛能，包括胚胎干細胞、成體干細胞等多種類型，在再生醫(yī)學、疾病治療、抗衰老等領域均具有較大的應用潛力。其中，成體干細胞是一類存在于成人的組織器官中的干細胞類型，在機體修復、更新等方面具有重要作用。科學家發(fā)現(xiàn)，成體干細胞減少是人體衰老的主要原因。目前常見的成體干細胞類型包括：來源于新生兒臍帶、胎盤組織的間充質(zhì)干細胞以及來源于成年人脂肪組織、牙髓組織的間充質(zhì)干細胞。這類細胞貼壁生長，具有梭形形態(tài)特征，可分化為成骨、軟骨、脂肪等多種細胞類型，并表達特定的表面抗原標 記。

終末分化體細胞包括組成人體皮膚在內(nèi)的各類器官組織的多種細胞類型。這類細胞不再具有分化能力，只是執(zhí)行機體的日常運行功能。其中，皮膚成纖維細胞存在于人體真皮組織中，在生長過程中可分泌多種細胞因子類型，主要包括：成纖維細胞生長因子(fibroblastgrowthfactor，簡寫fgf)、表皮細胞生長因子(epidermalgrowthfactor，簡寫egf)等，這些細胞因子對于皮膚的更新、膠原蛋白的分泌具有重要作用。皮膚成纖維細胞也被用于多項臨床研究，以探索其在抗衰老領域的潛在作用。

另外，富血小板血漿(platelet-richplasma，簡寫prp)也是一種有效的細胞因子來源。prp通過離心富集血液中的血小板，并激活因子釋放而得到。其含有細胞因子類型豐富，如血小板衍生生長因子(platelet-derivedgrowthfactor，簡寫pdgf)、轉化生長因子β(transforminggrowthfactorβ，簡寫tgf-β)、血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，簡寫vegf)等。prp及prp因子在美容方面也被廣泛應用。

但是，采用來源于臍帶間充質(zhì)干細胞的因子、富血小板血漿或直接采用重組的細胞因子進行皮膚保養(yǎng)，其細胞因子配比，很難真正反映人體的皮膚需求。

本發(fā)明通過可產(chǎn)生或包含細胞因子的訓練劑對用戶自體的皮膚成纖維細胞進行訓練，從而獲得用戶自體的、激活的皮膚成纖維細胞，由于激活的皮膚成纖維細胞是用戶自體的，其執(zhí)行的細胞功能、分泌的細胞因子類型以及細胞因子配比真正反映用戶自體的皮膚需求，因此，其分泌的細胞因子能夠最大限度地對用戶的皮膚進行保養(yǎng)，從而滿足皮膚保養(yǎng)的個體化需求。

下面結合附圖和實施方式對本發(fā)明進行詳細說明。

參閱圖1，圖1是本發(fā)明基于細胞因子的細胞處理方法一實施方式的流程圖，包括：

步驟s101：獲取可產(chǎn)生或包含第一細胞因子的訓練劑和用戶自體的 皮膚成纖維細胞，第一細胞因子是能夠促進細胞增殖、激活細胞功能的細胞因子。

第一細胞因子是能夠促進細胞增殖、激活細胞功能的細胞因子，這種類型的細胞因子由于能夠促進細胞增殖、激活細胞功能，因此，能夠促進對應組織的再生與修復，特別是在皮膚保養(yǎng)、抗衰老等方面具有很大的潛力。第一細胞因子包括但不限于：成纖維細胞生長因子fgf、表皮細胞生長因子egf、血小板衍生生長因子pdgf、膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子gdnf、胰島素樣生長因子igf、顆粒細胞集落刺激因子gcsf、轉化生長因子βtgf-β、血管內(nèi)皮生長因子vegf、胎盤生長因子pigf、干細胞因子scf等等。

訓練劑可產(chǎn)生第一細胞因子，例如：間充質(zhì)干細胞、富血小板血漿prr等，間充質(zhì)干細胞可以來源于骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織或牙髓組織等。

或者，訓練劑包含第一細胞因子，例如：可以是市售的成纖維細胞生長因子fgf、表皮細胞生長因子egf等類型的單類型重組細胞因子；或者是市售的兩種以上的單類型重組細胞因子混合得到的；或者，通過其它方式得到，只要包含第一細胞因子即可，例如間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)上清、間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)液和裂解液等等。

人體皮膚由外到內(nèi)分為三層：表皮、真皮以及皮下組織；表皮是皮膚的最外層，能不斷新生；真皮主要由膠原纖維及彈性纖維所構成，是與肌膚老化有直接關系的重要部位；皮下組織有防止散熱、儲備能量和抵御外來機械性沖擊的功能。

成纖維細胞是皮膚的主要細胞成分，其具有合成和分泌多種細胞因子的功能，在皮膚更新和創(chuàng)傷修復過程中，具有十分重要的作用。用戶自體的皮膚成纖維細胞是采用來源于用戶自體的皮膚成纖維前體細胞、通過細胞工程技術制備的皮膚成纖維細胞。

可以通過現(xiàn)有技術的方法獲取用戶自體的皮膚成纖維細胞，大致包括如下過程：用戶自體皮膚組織的獲取、皮膚成纖維細胞的原代分離、皮膚成纖維細胞的傳代培養(yǎng)。為了便于保存，還可以包括皮膚成纖維細 胞的凍存。

步驟s102：通過訓練劑對皮膚成纖維細胞進行訓練，以獲得激活的皮膚成纖維細胞。

通過訓練劑對皮膚成纖維細胞進行訓練，也即是將訓練劑和皮膚成纖維細胞進行共培養(yǎng)，從而獲得激活的皮膚成纖維細胞。

由于通過現(xiàn)有技術進行分離、培養(yǎng)和儲存的皮膚成纖維細胞，多是在用戶自體成年后取得的，已經(jīng)在細胞活性和細胞功能方面存在一定程度的下降，而且，此時的皮膚成纖維細胞沒有處在有效激活的狀態(tài)下，其執(zhí)行的細胞功能、分泌的細胞因子含量、細胞因子類型和細胞因子配比不能起到真正促進面部皮膚美容保養(yǎng)的作用。因此，本步驟通過訓練劑對來源于用戶自體的皮膚成纖維細胞進行訓練，可以獲得用戶自體的、激活的皮膚成纖維細胞；在激活狀態(tài)下的皮膚成纖維細胞，其細胞活性和細胞功能基本處于最好的狀態(tài)，其分泌的細胞因子含量、細胞因子類型和細胞因子配比，能夠最大限度地真正促進用戶自體皮膚美容保養(yǎng)的作用。

本發(fā)明實施方式獲取可產(chǎn)生或包含第一細胞因子的訓練劑和用戶自體的皮膚成纖維細胞，第一細胞因子是能夠促進細胞增殖、激活細胞功能的細胞因子；通過訓練劑對皮膚成纖維細胞進行訓練，以獲得激活的皮膚成纖維細胞。由于訓練劑對皮膚成纖維細胞進行訓練，獲得激活的皮膚成纖維細胞，而且，該皮膚成纖維細胞來源于用戶自體，通過這種方式，能夠為最大限度地真正促進用戶自體皮膚保養(yǎng)做好準備，從而為滿足皮膚保養(yǎng)的個體化需求提供技術基礎。

其中，獲取可產(chǎn)生第一細胞因子的訓練劑的步驟，可以是：獲取間充質(zhì)干細胞，將間充質(zhì)干細胞作為訓練劑。

間充質(zhì)干細胞是干細胞的一個研究分支，干細胞是一類具有自我復制和多向分化能力的細胞，它們可以不斷地自我更新，并在特定條件下轉變成為一種或多種構成人體組織或器官的細胞。其來源可以是骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織、牙髓組織等，具有獨特的細胞因子分泌功能，能分泌多種細胞因子。

可以通過現(xiàn)有技術的方法制備間充質(zhì)干細胞，大概包括如下過程：間充質(zhì)干細胞的原代分離和間充質(zhì)干細胞的傳代培養(yǎng)。為了便于長期保存，還包括間充質(zhì)干細胞凍存的過程。

當間充質(zhì)干細胞作為訓練劑時，步驟s102可以是：將間充質(zhì)干細胞與皮膚成纖維細胞進行共培養(yǎng)，以獲得激活的皮膚成纖維細胞。

由于間充質(zhì)干細胞能夠分泌多種細胞因子，其在與皮膚成纖維細胞進行共培養(yǎng)時，可以通過旁分泌途徑獲得激活的皮膚成纖維細胞。

在另一實施方式中，獲取可產(chǎn)生第一細胞因子的訓練劑的步驟，還可以通過下面的方式獲得，請參見圖2，具體包括子步驟s201和子步驟s202。

子步驟s201：獲取間充質(zhì)干細胞因子凍干粉。

包含第一細胞因子的間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)上清或?qū)㈤g充質(zhì)干細胞培養(yǎng)液和裂解液，均不易保存，間充質(zhì)干細胞因子凍干粉容易長時間保存。

通過間充質(zhì)干細胞或凍存的間充質(zhì)干細胞，獲得間充質(zhì)干細胞因子溶液，然后將間充質(zhì)干細胞因子溶液制備得到間充質(zhì)干細胞因子凍干粉。

子步驟s202：通過第一溶媒將間充質(zhì)干細胞因子凍干粉溶解為間充質(zhì)干細胞因子溶液，將間充質(zhì)干細胞因子溶液作為訓練劑。

第一溶媒是溶解間充質(zhì)干細胞因子凍干粉的溶媒，第一溶媒可以根據(jù)實際應用情況確定其組成成份。在一實施方式中，其成份包括：無菌水、丙二醇、丙三醇；其中，丙二醇的濃度是2％，丙三醇的濃度是3％。

當將間充質(zhì)干細胞因子溶液作為訓練劑時，步驟s102可以是：將間充質(zhì)干細胞因子溶液與皮膚成纖維細胞進行共培養(yǎng)，以獲得激活的皮膚成纖維細胞。

在一實施方式中，第一細胞因子成纖維細胞生長因子fgf、表皮細胞生長因子egf、血小板衍生生長因子pdgf、膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子gdnf、胰島素樣生長因子igf、顆粒細胞集落刺激因子gcsf、轉化生長因子βtgf-β、血管內(nèi)皮生長因子vegf、胎盤生長因子pigf、干細胞因子scf中的至少一種。這類第一細胞因子具有刺激細胞生長活性的 的特點。

其中，請參見圖3，該方法還可以包括：步驟s103和步驟s104。

步驟s103：利用激活的皮膚成纖維細胞獲取皮膚成纖維細胞多種因子第一溶液。培養(yǎng)激活的皮膚成纖維細胞，即可獲得皮膚成纖維細胞多種因子第一溶液。

步驟s104：將皮膚成纖維細胞多種因子第一溶液制成皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉。將皮膚成纖維細胞多種因子第一溶液制成皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉，可以便于保存。

參見圖4，該方法還可以包括步驟s105：利用第二溶媒將皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子第二溶液，以供用戶在自身皮膚上使用；或利用第二溶媒和乳液將皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子乳液，以供用戶在自身皮膚上使用；或利用第二溶媒和凝膠將皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子凝膠，以供用戶在自身皮膚上使用。

第二溶媒是溶解皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉的溶媒，第二溶媒可以根據(jù)實際應用情況確定其組成成份。例如：第二溶媒可以是用于化妝品中的任何具備保濕功能的液體，在一實施方式中，其成份包括：無菌水、丙二醇、丙三醇、透明質(zhì)酸、薄荷醇中的至少一種。乳液可以是用于化妝品中的任何乳液，在一實施方式中，乳液的主要成份包括橄欖油、乳木果脂、堪地里拉蠟、天然有機橄欖乳化蠟。凝膠可以是用于化妝品中的任何凝膠，在一實施方式中，乳液的主要成份包括凝膠形成劑或冰晶形成劑、無菌水、純露以及透明質(zhì)酸。不管以何種形式使用，皮膚成纖維細胞多種因子第二溶液、皮膚成纖維細胞多種因子乳液或皮膚成纖維細胞多種因子凝膠于4度冷藏的時間不能太長，一般不超過2天。

本發(fā)明還提供一種皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉，皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉是根據(jù)上述的方法制備的，詳細說明請參見上述方法部分，在此不再贅敘。

本發(fā)明還提供一種皮膚成纖維細胞多種因子試劑盒，該試劑盒包括：皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉和第二溶媒。該皮膚成纖維細胞多 種因子凍干粉是根據(jù)上述的方法制備的；該第二溶媒可溶解皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉，并可施加在皮膚上；其中，第二溶媒可以將皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子第二溶液，以供用戶在自身皮膚上使用。

其中，第二溶媒的成份包括：無菌水、丙二醇、丙三醇、透明質(zhì)酸以及薄荷醇中的至少一種。在一實施方式中，第二溶媒的成份包括：無菌水、丙二醇、丙三醇、透明質(zhì)酸以及薄荷醇，且丙二醇濃度為2％，丙三醇濃度為3％，透明質(zhì)酸的濃度為0.02％，薄荷醇的濃度為0.02％。

本發(fā)明還提供另一種皮膚成纖維細胞多種因子試劑盒，該試劑盒包括：皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉、第二溶媒以及乳液。該皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉是根據(jù)上述的方法制備的；該第二溶媒可溶解皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉，并可施加在皮膚上；該乳液可施加在皮膚上；其中，第二溶媒和乳液可以將皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子乳液，以供用戶在自身皮膚上使用。

其中，第二溶媒的成份包括：無菌水、丙二醇、丙三醇、透明質(zhì)酸以及薄荷醇中的至少一種。在一實施方式中，第二溶媒的成份包括：無菌水、丙二醇、丙三醇、透明質(zhì)酸以及薄荷醇，且丙二醇濃度為2％，丙三醇濃度為3％，透明質(zhì)酸的濃度為0.02％，薄荷醇的濃度為0.02％。

在一實施方式中，乳液的成份包括：橄欖油、乳木果脂、堪地里拉蠟以及天然有機橄欖乳化蠟。

本發(fā)明還提供一種皮膚成纖維細胞多種因子試劑盒，該試劑盒包括：皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉、第二溶媒以及凝膠。其中，皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉是根據(jù)上述的方法制備的；第二溶媒可溶解所述皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉，并可施加在皮膚上；凝膠可施加在皮膚上；其中，第二溶媒和凝膠可以將皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉配置成皮膚成纖維細胞多種因子凝膠，以供用戶在自身皮膚上使用。

其中，第二溶媒的成份包括：無菌水、丙二醇、丙三醇、透明質(zhì)酸以及薄荷醇中的至少一種。在一實施方式中，第二溶媒的成份包括：無菌水、丙二醇、丙三醇、透明質(zhì)酸以及薄荷醇，且丙二醇濃度為2％， 丙三醇濃度為3％，透明質(zhì)酸的濃度為0.02％，薄荷醇的濃度為0.02％。

在一實施方式中，凝膠的成份包括：凝膠形成劑或冰晶形成劑、無菌水、純露以及透明質(zhì)酸。

本發(fā)明還提供一種基于細胞因子的細胞處理試劑盒，該試劑盒包括：訓練劑的細胞或凍干粉和凍存的用戶自體的皮膚成纖維細胞。其中，訓練劑可產(chǎn)生或包含第一細胞因子，第一細胞因子是能夠促進細胞增殖、激活細胞功能的細胞因子；利用間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基復蘇和培養(yǎng)凍存的間充質(zhì)干細胞，或利用第一溶媒溶解訓練劑的凍干粉，獲得訓練劑，利用皮膚成纖維細胞培養(yǎng)基復蘇和培養(yǎng)凍存的用戶自體的皮膚成纖維細胞，獲得用戶自體的皮膚成纖維細胞，通過訓練劑對皮膚成纖維細胞訓練，以獲得激活的皮膚成纖維細胞。第一溶媒和細胞培養(yǎng)基可以根據(jù)實際應用情況現(xiàn)用現(xiàn)配。當然也可以在該細胞處理試劑盒中配備已經(jīng)配制好的第一溶媒和細胞培養(yǎng)基，這樣更好方便用戶直接使用。

下面以具體的處理過程為例來說明上述的方法和產(chǎn)品。需要說明的是，在不同的應用情況和應用環(huán)境下，具體的處理過程存在差別，在此并不作限定。

一、自體皮膚成纖維細胞分離培養(yǎng)：

1)皮膚組織的獲?。河蓪I(yè)人員使用醫(yī)用皮膚取樣器獲取用戶自體一定大小的皮膚塊，快速放入含有皮膚成纖維細胞完全培養(yǎng)基的保存液中。在培養(yǎng)皿中，用pbs溶液充分沖洗皮膚組織上的血跡，并將皮膚組織剪成多個小塊，繼續(xù)用pbs溶液充分沖洗。

2)皮膚成纖維細胞的原代分離：將沖洗后的皮膚組織塊轉移至稍大的離心管中，并加入合適濃度的分散酶進行消化。消化完成后，肉眼觀察消化狀態(tài)，并用一定體積的pbs溶液洗滌多次，充分去除酶消化液。用器械分離表皮組織和真皮組織，取真皮組織，轉入新的離心管，并加入一定濃度的i型膠原酶進行消化，肉眼觀察消化狀態(tài)，并用pbs溶液洗滌多次，充分去除酶消化液。在消化完成的組織中，加入皮膚成纖維細胞完全培養(yǎng)基，混合均勻后，整體轉入有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。觀察細胞形態(tài)，一定天數(shù)后添加皮膚成纖維細 胞完全培養(yǎng)基，觀察培養(yǎng)至細胞融合度達預定要求(例如：80％以上)。

3)皮膚成纖維細胞的傳代培養(yǎng)：吸取細胞融合度達預定要求(例如：80％以上)的培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，并用pbs沖洗培養(yǎng)皿，用一定濃度的胰酶消化細胞，將消化后的細胞轉入t175培養(yǎng)瓶中繼續(xù)擴大培養(yǎng)。

4)皮膚成纖維細胞的凍存：在t175培養(yǎng)瓶中，細胞融合度達預定要求(例如：80％以上)后，用一定濃度的胰酶消化細胞，用皮膚成纖維細胞完全培養(yǎng)基吹打培養(yǎng)瓶底部，并收集細胞懸液。用pbs溶液洗滌細胞懸液，離心獲取細胞沉淀。取等體積的皮膚成纖維細胞完全培養(yǎng)基和胎牛血清，混合均勻后懸浮細胞塊，用細胞計數(shù)儀計算細胞濃度，并按照要求的濃度(例如：5x10⁶/ml)進行稀釋，稀釋液為50％的皮膚成纖維細胞完全培養(yǎng)基和50％的胎牛血清混合液。在每個凍存管中加入凍存管1/2體積稀釋后的細胞懸液，加入一定濃度(例如10％)的二甲基亞砜(dimethylsulfoxide，簡稱dmso)。將分裝了細胞的凍存管放入程序降溫儀中，按照設定的程序進行降溫，隨后轉入氣相液氮罐中進行長期儲存。

二、訓練劑的準備和制作：

1)間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)，分別以來源于臍帶組織和脂肪組織的為例：

a1.臍帶間充質(zhì)干細胞的原代分離：由專業(yè)人員取一定長度的臍帶組織，快速放入含有臍帶間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基的保存液中。在培養(yǎng)皿中，用pbs溶液充分沖洗臍帶組織上的血跡，抽取靜脈和動脈，并用器械剪開臍帶組織，剝離華通氏膠組織，并將華通氏膠組織轉移到新的培養(yǎng)皿中，繼續(xù)充分沖洗，收集進稍大的離心管中，并剪成多個小組織塊，稱量組織塊重量。在組織塊中加入臍帶間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基，在每個t75培養(yǎng)瓶中加入一定體積的組織塊，再加入一定體積的完全培養(yǎng)基，放入預設條件的二氧化碳培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)后的一個星期左右，顯微鏡下觀察細胞貼壁情況，并在瓶中加入臍帶間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)一個星期左右，并傾斜吸取培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)基，重新加入新的臍帶間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中進行 培養(yǎng)。每天觀察細胞生長情況，至細胞融合度達預定要求(例如：80％以上)。

b1.臍帶間充質(zhì)干細胞的傳代培養(yǎng)：對于細胞融合度達預定要求(例如：80％以上)的培養(yǎng)瓶，吸取培養(yǎng)基并用pbs沖洗，用胰酶消化細胞，并將消化后的細胞轉入t175培養(yǎng)瓶中繼續(xù)擴大培養(yǎng)。

c1.臍帶間充質(zhì)干細胞的凍存：在t175培養(yǎng)瓶中細胞融合度達預定要求后，用胰酶消化細胞，用臍帶間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基吹打培養(yǎng)皿底部，并收集細胞懸液。用pbs溶液洗滌細胞懸液，離心獲取細胞塊。取等體積的臍帶間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基和胎牛血清，混合均勻后懸浮細胞沉淀，用細胞計數(shù)儀計算細胞濃度，并按照預定濃度進行稀釋，稀釋液為50％的臍帶間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基和50％的胎牛血清混合液。在每個凍存管中加入1/2稀釋后的細胞懸液，加入dmso。將分裝了細胞的凍存管放入程序降溫儀中，按照設定的程序進行降溫，隨后轉入氣相液氮罐中進行長期儲存。

a2.脂肪間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng)：由專業(yè)人員取一定體積的脂肪組織，將pbs溶液加入裝有脂肪組織的離心管中，反復吹打，靜置，然后用吸管吸出脂肪組織下層的液體。重復這一過程，直至所吸出的液體透明，不帶紅色血細胞。在清洗后的脂肪組織中加入與脂肪組織同體積的消化液，消化液的主要成分為胰酶和i型膠原酶，在其中一種配方中，胰酶的濃度為0.2％，i型膠原酶的濃度為0.15％。在37℃恒溫搖床中，震蕩消化。消化后，液面分為三層，吸取最下層含細胞的液體放入新的離心管中，并加入脂肪間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基終止酶消化過程。將離心管離心，去除上清，然后加入脂肪間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基輕輕吹打成細胞懸液，將各離心管中的細胞懸液收集到一起，混合均勻，用細胞計數(shù)儀測定細胞懸液濃度。在每個t75培養(yǎng)瓶中加入一定量細胞懸液，再加入完全培養(yǎng)基，放入預設條件(例如37℃，5％co2濃度)的二氧化碳培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。24小時后，鏡下觀察，如已有細胞貼壁即可進行第一次換液。此后每天觀察細胞生長情況，至細胞融合度達預定要求(例如：80％以上)。

b2.脂肪間充質(zhì)干細胞的傳代培養(yǎng)：對于細胞融合度達80％以上的培養(yǎng)瓶，吸取培養(yǎng)基并用pbs沖洗，用0.25％的胰酶消化細胞5分鐘，并將消化后的細胞轉入t175培養(yǎng)瓶中繼續(xù)擴大培養(yǎng)；

c2.脂肪間充質(zhì)干細胞凍存：對于一個細胞融合度達預定要求(例如：80％以上)的培養(yǎng)瓶，用胰酶消化細胞，用脂肪間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基吹打培養(yǎng)皿底部，并收集細胞懸液。用pbs溶液洗滌細胞懸液兩次，離心獲取細胞塊。取等體積的脂肪間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基和胎牛血清，混合均勻后懸浮細胞沉淀，用細胞計數(shù)儀計算細胞濃度，并按照預定濃度進行稀釋，稀釋液為50％的脂肪間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基和50％的胎牛血清混合液。在每個凍存管中加入1/2稀釋后的細胞懸液，加入dmso。將分裝了細胞的凍存管放入程序降溫儀中，按照設定的程序進行降溫，隨后轉入氣相液氮罐中進行長期儲存。

2)臍帶間充質(zhì)干細胞因子凍干粉的制作：

a.間充質(zhì)干細胞因子溶液的制備：取生長良好且傳代不超過5次的臍帶間充質(zhì)干細胞，將大多數(shù)培養(yǎng)皿內(nèi)的間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基轉移到新的試管中，用剩余的間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基吹打培養(yǎng)瓶底部，收集細胞懸液，并用pbs溶液洗滌細胞懸液，離心獲取細胞沉淀，并懸浮在之前收集的間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基中，用超聲破碎的方式裂解細胞。將超聲破碎后的細胞液離心，將上清液轉移至新的離心管中，并用無菌的0.22μm過濾篩過濾，得到間充質(zhì)干細胞因子溶液。

b.間充質(zhì)干細胞因子凍干粉的制作：將間充質(zhì)干細胞因子溶液的蛋白含量調(diào)整至預定濃度，加入凍干保護劑，混合均勻，并用無菌的0.22μm過濾篩過濾。在每個西林瓶中放入一定體積濾好的間充質(zhì)干細胞因子溶液，放入程序降溫盒中在-80度冰箱放置一晚進行預冷，然后放入預冷至-50℃的真空凍干機中，在-50℃冷凍干燥一天左右，檢查凍干狀況，并壓蓋密封。

c.間充質(zhì)干細胞因子溶媒(即第一溶媒)的制作：溶媒主要成分包括無菌水、丙二醇、丙三醇，在一實施方式中，丙二醇濃度為2％，丙三醇濃度為3％，混合完成后用無菌的0.22μm過濾篩過濾。在每個西 林瓶中放入一定體積的溶媒，壓蓋密封，置于4℃干燥處儲存。

三、細胞處理過程：

1)自體皮膚成纖維細胞-臍帶間充質(zhì)干細胞的訓練：

方法一：間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)訓練：

a.從液氮罐中取傳代不超過5代的自體皮膚成纖維細胞，在37℃水浴中復蘇，并在六孔板的每個孔內(nèi)接種例如1x10⁵細胞，貼壁培養(yǎng)24小時左右，至狀態(tài)穩(wěn)定。

b.同時，取傳代不超過五代的臍帶間充質(zhì)干細胞，在t75培養(yǎng)瓶中，觀察生長狀態(tài)是否良好。如是，將1x10⁵臍帶間充質(zhì)干細胞放入適用于六孔板的細胞培養(yǎng)小室(transwell)中。

c.將六孔板內(nèi)的培養(yǎng)基換成細胞訓練系統(tǒng)完全培養(yǎng)基，并將transwell放入對應的六孔板內(nèi)。在預設條件的二氧化碳培養(yǎng)箱中將兩種細胞共同培養(yǎng)48小時左右，對于自體皮膚成纖維細胞進行充分訓練。

方法二：間充質(zhì)干細胞因子溶液的訓練：

a.從液氮罐中取傳代不超過5代的自體皮膚成纖維細胞，在37℃水浴中復蘇，并在t75培養(yǎng)瓶內(nèi)接種例如1x10⁶細胞，貼壁培養(yǎng)例如24小時，至狀態(tài)穩(wěn)定。

b.取按照“二、訓練劑的準備和制作”所述方法制作的間充質(zhì)干細胞因子凍干粉一瓶，將溶媒加入因子凍干粉中，混合均勻，靜置稍待液體清澈。取混合后的間充質(zhì)干細胞因子溶液，加入自體皮膚成纖維細胞培養(yǎng)瓶中，在預設條件的二氧化碳培養(yǎng)箱中將兩種細胞共同培養(yǎng)例如48小時左右，對于自體皮膚成纖維細胞進行充分訓練。

2)訓練效果測定：

a.細胞訓練系統(tǒng)對自體成纖維細胞增殖活性的作用：

同時設置兩套相同細胞來源和數(shù)量的自體皮膚成纖維細胞培養(yǎng)體系，一套接受本發(fā)明訓練劑的訓練，一套不接受訓練。在訓練周期結束時，收集細胞，測定細胞數(shù)量和活率，并使用流式細胞儀對于整體細胞周期進行測定。

具體地，同時設置四套相同細胞來源和數(shù)量的自體皮膚成纖維細胞培養(yǎng)體系，其中兩套：起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁵，貼壁生長24小時，一套接受間充質(zhì)干細胞訓練劑的訓練，與間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)48小時，一套不接受訓練；另外兩套：起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁶，貼壁生長24小時，一套接受間充質(zhì)干細胞因子凍干粉訓練劑的訓練，與間充質(zhì)干細胞因子凍干粉所配制的間充質(zhì)干細胞因子溶液共培養(yǎng)48小時，一套不接受訓練。在訓練周期結束時，收集細胞，測定細胞數(shù)量和活率，并使用流式細胞儀對于整體細胞周期進行測定。具體數(shù)據(jù)請參見表1：

表1

備注：g0/g1代表dna合成前期，s代表dna合成期，g2/m代表dna合成后期和分裂期。

從表1可以看到：以間充質(zhì)干細胞和間充質(zhì)干細胞因子凍干粉為訓練劑時，訓練組的細胞數(shù)量比對照組的細胞數(shù)量多8％-10％左右，訓練組的細胞活率比對照組的細胞活率多5.6％左右。訓練組中處于細胞dna合成期的細胞的占比遠遠大于對照組中處于dna合成期的細胞的占比，這說明訓練組的細胞大部分是處于dna積極合成狀態(tài)，增值活性強。

b.細胞訓練系統(tǒng)對自體成纖維細胞遷移能力的影響：

在六孔板的每個孔內(nèi)接種例如5x10⁵細胞，在設置條件為37℃，5％co2濃度二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細胞鋪滿板底。用1ml規(guī)格的槍頭垂 直于底部，制造盡量均一的細胞劃痕，并用pbs沖洗去劃痕產(chǎn)生的細胞碎片。在一半的孔內(nèi)加入細胞訓練劑，一半設置為不加細胞訓練劑的同期對照，比較細胞訓練系統(tǒng)對人成纖維細胞遷移能力的影響。

具體地，以間充質(zhì)干細胞為訓練劑時，起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁵(也記為1x10^5)，貼壁生成24小時，接收訓練的一套，劃痕后與間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)8小時；以間充質(zhì)干細胞因子凍干粉為訓練劑時，起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁶(也記為1x10^6)，貼壁生成24小時，接收訓練的一套，劃痕后與間充質(zhì)干細胞因子凍干粉所配制的間充質(zhì)干細胞因子溶液共培養(yǎng)8小時。在一半的孔內(nèi)加入細胞訓練劑，一半設置為不加細胞訓練劑的同期對照，比較細胞訓練系統(tǒng)對人成纖維細胞遷移能力的影響。具體數(shù)據(jù)請參見表2：

表2

備注：起始劃痕寬度減去終末劃痕寬度，為細胞遷移走過的相對寬度，相對寬度越長，細胞遷移速度越快。

從表2可以看出，以間充質(zhì)干細胞和間充質(zhì)干細胞因子凍干粉為訓練劑時，訓練組的細胞的遷移速度明顯要比對照組的快很多，將近快一倍左右。

c.細胞訓練系統(tǒng)對自體皮膚成纖維細胞膠原蛋白分泌能力的影響：

在六孔板的每個孔內(nèi)接種例如5x10⁵細胞，在設置條件為37℃，5％co2濃度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，在一半的孔內(nèi)加入訓練劑，一半的孔內(nèi)不加訓練劑，繼續(xù)培養(yǎng)72小時。取上清50ul于試管中，100℃烤干后加入一定濃度的naoh溶液50ul，高氯酸溶液1ml和氯胺t溶液1ml，于65℃水浴中震蕩顯色15分鐘，在550nm下用分光光度計測a值,并計算膠原蛋白分泌量。

具體地，以間充質(zhì)干細胞為訓練劑時，起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁵(也記為1x10^5)，貼壁生成24小時，接收訓練的一套，然后與間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)72小時；以間充質(zhì)干細胞因子凍干粉為訓練劑時，起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁶(也記為1x10^6)，貼壁生成24小時，接收訓練的一套，然后與間充質(zhì)干細胞因子凍干粉所配制的間充質(zhì)干細胞因子溶液共培養(yǎng)72小時。具體數(shù)據(jù)請參見表3：

表3

備注：膠原蛋白分泌能力的倍數(shù)是指訓練組膠原蛋白的分泌量相對于對照組的倍數(shù)。

從表3可以看出，以間充質(zhì)干細胞和間充質(zhì)干細胞因子凍干粉為訓練劑時，訓練組的細胞的膠原蛋白分泌的能力比對照組的高將近60％左右。

d.細胞訓練系統(tǒng)對自體皮膚成纖維細胞內(nèi)sod酶活性的影響：

同時設置兩套相同細胞來源和數(shù)量的自體皮膚成纖維細胞培養(yǎng)體系，一套接受訓練，一套不接受訓練。在訓練周期結束時候，收集細胞，將離心后的細胞沉淀懸浮在預冷的緩沖液中超聲破碎，并離心，收集離心上清，并按照sod酶檢測試劑盒說明方法進行操作、分析和比較。

具體地，以間充質(zhì)干細胞為訓練劑時，起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁵(也記為1x10^5)，貼壁生成24小時，接收訓練的一套，然后與間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)48小時；以間充質(zhì)干細胞因子凍干粉為訓練劑時，起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁶(也記為1x10^6)，貼壁生成24小時，接收訓練的一套，然后與間充質(zhì)干細胞因子凍干粉所配制的間充質(zhì)干細胞因子溶液共培養(yǎng)48小時。具體數(shù)據(jù)請參見表4：

表4

備注：sod活性增加的倍數(shù)是指相對于對照組的倍數(shù)。

從表4可以看出，以間充質(zhì)干細胞和間充質(zhì)干細胞因子凍干粉為訓練劑時，訓練組的細胞的sod酶活性比對照組的高將近20％左右。

e.細胞訓練系統(tǒng)對自體皮膚成纖維細胞抗紫外損傷的影響：

在六孔板的每個孔內(nèi)接種例如1x10⁵細胞，在設置條件為37℃，5％co2濃度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，長至80％融合度時，用uva紫外線照射細胞，每天照射兩小時，共計四天。同時設置一個同樣細胞來源和數(shù)量的六孔板，作為不接受紫外照射的陰性對照。第五天，在接受紫外照射的六孔板內(nèi)，一半加入訓練劑，一半設置為不加訓練劑的同期對照；在未接受紫外照射的六孔板內(nèi)，同樣一半加入訓練劑，一半設置為不加訓練劑的同期對照。訓練48小時后，收集細胞，提取rna，進行實時rt-pcr，比較與皮膚成纖維細胞膠原分泌等功能緊密相關的基因(包括col1a1、col4a1、col5a1等)表達量。具體數(shù)據(jù)請參見表5：

表5

備注：陰性對照的倍數(shù)是指接收紫外線照射、未訓練組和接收紫外線照射、訓練組的基因含量col1a1、col4a1、col5a1相對陰性對照的倍數(shù)。

從表5可以看出：接收紫外線照射、未訓練組的基因含量col1a1、col4a1、col5a1相對陰性對照來說均大大降低，接收紫外線照射、訓練組的基因含量col1a1、col4a1、col5a1相對陰性對照來說均保持基本穩(wěn)定，這說明訓練組有很強的抗紫外損傷的能力。

f.細胞因子含量測定：

同時設置兩套相同細胞來源和數(shù)量的自體皮膚成纖維細胞培養(yǎng)體系，一套接受訓練，一套不接受訓練。在訓練周期結束時候，收集細胞，用elisa試劑盒對于主要細胞因子的濃度進行測定和比較。

具體地，以間充質(zhì)干細胞為訓練劑時，起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁵(也記為1x10^5)，貼壁生成24小時，接收訓練的一套，然后與間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)48小時；以間充質(zhì)干細胞因子凍干粉為訓練劑時，起始自體皮膚成纖維細胞數(shù)量1x10⁶(也記為1x10^6)，貼壁生成24小時，接收訓練的一套，然后與間充質(zhì)干細胞因子凍干粉所配制的間充質(zhì)干細胞因子溶液共培養(yǎng)48小時。具體數(shù)據(jù)請參見表6：

表6

備注：增值的倍數(shù)是指相對于對照組的倍數(shù)；gdnf：膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子，glialcell-derivedneurotrophicfactor；igf2：胰島素樣生長因子2，insulin-likegrowthfactor2。

從表6可以看出，以間充質(zhì)干細胞和間充質(zhì)干細胞因子凍干粉為訓練劑時，訓練組的細胞所分泌的細胞因子比對照組的高，大于10％以上。

四、訓練后的自體皮膚成纖維細胞多種因子凍干：

1)訓練后的自體皮膚成纖維細胞多種因子溶液的制備：

取訓練后的自體皮膚成纖維細胞，吸取培養(yǎng)上清，用胰酶消化，用皮膚成纖維細胞完全培養(yǎng)基吹打培養(yǎng)瓶底部，收集細胞懸液，并用pbs溶液洗滌細胞懸液，離心獲取細胞沉淀，并懸浮在無菌水中，用超聲破碎的方式裂解細胞。將超聲破碎后的細胞液離心，將上清液轉移至新的離心管中，并用無菌的0.22μm過濾篩過濾，得到訓練后的自體皮膚成纖維細胞多種因子溶液。

2)訓練后的自體皮膚成纖維細胞多種因子的凍干：

將訓練后的自體皮膚成纖維細胞多種因子溶液的蛋白含量調(diào)整至預定濃度，加入凍干保護劑，混合均勻，并用無菌的0.22μm過濾篩過濾。在每個西林瓶中放入例如1ml過濾好的自體皮膚成纖維細胞多種因子溶液，放入程序降溫盒中在例如-80℃冰箱放置例如12小時左右預冷， 然后放入預冷至例如-50℃的真空凍干機中，在-50℃冷凍干燥例如24小時左右，檢查凍干狀況，并壓蓋密封。

五、產(chǎn)品的完整性和包裝：

1)訓練后的自體皮膚成纖維細胞多種因子試劑盒(商品可以稱為自體細胞衍生品)的包裝：

a.第二溶媒配置：第二溶媒主要成分包括無菌水、丙二醇、丙三醇、透明質(zhì)酸、薄荷醇，在一實施方式中，丙二醇濃度為2％，丙三醇濃度為3％，透明質(zhì)酸濃度為0.02％，薄荷醇的濃度為0.02％。混合完成后用無菌的0.22μm過濾篩過濾。在每個例如5ml規(guī)格的西林瓶中放入例如3ml溶媒，壓蓋密封，置于4℃干燥處儲存。

b.乳液配置：乳液主要成分包括橄欖油、乳木果脂、堪地里拉蠟、天然有機橄欖乳化蠟。

c.凝膠配置：凝膠主要成分包括凝膠形成劑或冰晶形成劑、無菌水、純露以及透明質(zhì)酸。

d.產(chǎn)品規(guī)格：取1支溶媒倒入1支自體皮膚成纖維細胞多種因子凍干粉中，搖勻溶解，總量為例如3ml?？梢砸后w方式涂抹使用，或者將液體加入乳液中，混合使用。建議1支多種因子凍干粉，無論以何種形式使用，分2天用完。

e.產(chǎn)品儲存：多種自體皮膚成纖維細胞因子溶液開封后，無論以液體形式還是乳液形式、凝膠形式，必須在2-8℃環(huán)境中冷藏，冷藏使用時間不超過2天。

2)細胞訓練系統(tǒng)的包裝：

a.產(chǎn)品規(guī)格：取1支溶媒倒入1支訓練劑(間充質(zhì)干細胞因子)凍干粉中，搖勻溶解，溶液總量為例如3ml。在每1x10⁶自體皮膚成纖維細胞的訓練體系中，加入例如0.5ml訓練劑溶液。

b.產(chǎn)品儲存：未用完的訓練劑溶液，可以分裝至1.5mleppendorf管中，緊密管口，在2-8℃環(huán)境中冷藏，冷藏時間不超過一個月。

通過本發(fā)明的方法，有以下效果：

1)經(jīng)訓練后的自體皮膚成纖維細胞，增殖能力變強、遷移速度增 高、膠原蛋白分泌能力變強、抗紫外損傷能力增強、sod酶活性增加、與細胞功能活性相關基因表達量增高，鏡下染色發(fā)現(xiàn)衰老細胞比例減少。

2)以凍干粉的形式儲存訓練系統(tǒng)的訓練劑，可在急需情況下有效提升訓練進度，是新鮮的間充質(zhì)干細胞以及prp的一個可長期儲存的替代劑。

3)訓練后的皮膚成纖維細胞多種細胞因子凍干后，可在4度條件下長期儲存，保證使用的便利性。同時，將凍干溶液加入到乳液或凝膠中的使用方法，也提升產(chǎn)品在頸部等較難延展區(qū)域使用的便捷性。

以上所述僅為本發(fā)明的實施方式，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書及附圖內(nèi)容所作的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關的技術領域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。