本發(fā)明涉及醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異、能有效去除脂肪族醛的粉末酶制劑及其制造方法、以及其用途。

背景技術(shù)：

已知脂肪族醛會(huì)損傷dna，在現(xiàn)象方面會(huì)成為生活方式相關(guān)疾病、口腔、胃等消化系統(tǒng)癌癥的原因。另外，脂肪族醛大多具有特有的臭氣，例如已知有作為體臭、煙草臭的原因物質(zhì)的乙醛、作為老人臭的原因物質(zhì)的壬烯醛等。

近年來(lái)，為了過(guò)上健康的生活而喜歡自然的人、為了不令周圍的人呼吸不暢而進(jìn)行體臭護(hù)理的人正在增加，期待提供能利用天然的酶的效力有效去除這些脂肪族醛的產(chǎn)品。

醛脫氫酶能夠?qū)⒅咀迦┺D(zhuǎn)化為羧酸，因此能夠有效地用于分解在體內(nèi)外積蓄的脂肪族醛。

然而，醛脫氫酶容易受到溫度、濕度、氧氣等外部因素的影響，在制造加工時(shí)和保存時(shí)活性迅速降低，喪失醛分解能力。

因此，尤其在常溫下、氧氣存在下，使醛脫氫酶活性經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化并使用其將醛分解、去除是極為困難的。

以往，作為使酶活性經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化的技術(shù)，已知有添加脫脂奶、白蛋白等蛋白質(zhì)、蔗糖、麥芽糖等糖類、多元醇等的方法。

另外，專利文獻(xiàn)1中記載了通過(guò)將粒徑為200μm以下的金屬氧化物的膠體狀微粒與酶以離子相互作用復(fù)合化而使酶活性經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化的化妝品。

然而，本發(fā)明人利用前述現(xiàn)有技術(shù)嘗試了醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化，結(jié)果均未得到抑制酶活性降低的效果?？芍?，在前述現(xiàn)有技術(shù)中研究了酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化的是蛋白質(zhì)分解酶、水解酶、脂質(zhì)分解酶等，尚未確立使醛脫氫酶活性經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化的技術(shù)。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：日本特開平10-251122號(hào)公報(bào)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明要解決的問(wèn)題

本發(fā)明的目的在于提供即使在常溫下醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性也優(yōu)異、能有效去除脂肪族醛的粉末酶制劑及其制造方法、以及其用途。

用于解決問(wèn)題的方案

本發(fā)明人為了實(shí)現(xiàn)前述目的而反復(fù)進(jìn)行了深入研究。

其結(jié)果，發(fā)現(xiàn)通過(guò)在醛脫氫酶中配混2種以上游離氨基酸或它們的鹽而成的粉末酶制劑，且該2種以上游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶，意外地可緩和溫度、濕度、氧氣等外部環(huán)境的影響，即使在常溫下醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性也增加，從而完成了本發(fā)明。

即，本發(fā)明為：

(1)一種粉末酶制劑，其是在醛脫氫酶中配混2種以上游離氨基酸或它們的鹽而成的粉末酶制劑，

該2種以上游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶；

(2)根據(jù)(1)的粉末酶制劑，其中，

前述游離氨基酸或它們的鹽包含：

選自谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸中的2種以上游離氨基酸或它們的鹽；

(3)根據(jù)(1)或(2)的粉末酶制劑，其中，

相對(duì)于粉末酶制劑所含有的游離氨基酸總量，

前述選自谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸中的2種以上游離氨基酸或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為25％以上；

(4)根據(jù)(1)～(3)中任一項(xiàng)的粉末酶制劑，其中，

包含：

選自作為酸性氨基酸的前述谷氨酸和天冬氨酸、或它們的鹽中的1種以上；以及

選自作為堿性氨基酸的前述賴氨酸和精氨酸、或它們的鹽中的1種以上；

(5)根據(jù)(4)的粉末酶制劑，其中，

相對(duì)于粉末酶制劑所含有的游離氨基酸總量，

作為酸性氨基酸的前述谷氨酸和天冬氨酸、或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為15％以上且85％以下，

并且，作為堿性氨基酸的前述賴氨酸和精氨酸、或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為15％以上且85％以下；

(6)一種粉末酶制劑，其在醛脫氫酶中配混有2種以上游離氨基酸或它們的鹽；

(7)根據(jù)(6)的粉末酶制劑，其中，

前述游離氨基酸或它們的鹽包含：

選自谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸中的2種以上游離氨基酸或它們的鹽；

(8)根據(jù)(6)或(7)的粉末酶制劑，其中，

相對(duì)于粉末酶制劑所含有的游離氨基酸總量，

前述選自谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸中的2種以上游離氨基酸或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為25％以上；

(9)根據(jù)(6)～(8)中任一項(xiàng)的粉末酶制劑，其中，

包含：

選自作為酸性氨基酸的前述谷氨酸和天冬氨酸、或它們的鹽中的1種以上；以及

選自作為堿性氨基酸的前述賴氨酸和精氨酸、或它們的鹽中的1種以上；

(10)根據(jù)(9)的粉末酶制劑，其中，

相對(duì)于粉末酶制劑所含有的游離氨基酸總量，

作為酸性氨基酸的前述谷氨酸和天冬氨酸、或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為15％以上且85％以下，

并且，作為堿性氨基酸的前述賴氨酸和精氨酸、或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為15％以上且85％以下；

(11)一種粉末酶制劑的制造方法，其為(1)～(10)中任一項(xiàng)的粉末酶制劑的制造方法，

將前述醛脫氫酶與前述2種以上游離氨基酸或它們的鹽在溶液中混合之后，

將所得到的混合液干燥；

(12)根據(jù)(11)的粉末酶制劑的制造方法，其中，

前述混合液的干燥為冷凍干燥；

(13)一種食品，其配混(1)～(10)中任一項(xiàng)的粉末酶制劑、或通過(guò)(11)或(12)的制造方法得到的粉末酶制劑；

(14)一種食品的制造方法，其配混(1)～(10)中任一項(xiàng)的粉末酶制劑、或通過(guò)(11)或(12)的制造方法得到的粉末酶制劑；

(15)一種化妝品，其配混(1)～(10)中任一項(xiàng)的粉末酶制劑、或通過(guò)(11)或(12)的制造方法得到的粉末酶制劑。

發(fā)明的效果

根據(jù)本發(fā)明，能夠廉價(jià)且大量地制造醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異的粉末酶制劑。進(jìn)而，在25℃左右的常溫下經(jīng)數(shù)年保存的食品、化妝品中也能維持醛脫氫酶活性。

另外，氨基酸一直以來(lái)用于食品、化妝品，能夠安全地使用。

因此，本發(fā)明的粉末酶制劑通過(guò)用作食品、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)給物、食品添加劑、經(jīng)口劑、口腔內(nèi)清洗劑、化妝品、外用劑、除臭劑等，能夠去除對(duì)生物體有害、且成為難聞臭味的原因的脂肪族醛。

因此，能夠?qū)θ藗兊慕】岛蜕瞽h(huán)境的改善做出貢獻(xiàn)。

具體實(shí)施方式

以下詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。

需要說(shuō)明的是，本發(fā)明中，“％”意味著“質(zhì)量％”?！胺荨币馕吨百|(zhì)量份”。

＜本發(fā)明的特征＞

本發(fā)明的粉末酶制劑具有如下特征：其是在醛脫氫酶中配混2種以上游離氨基酸或它們的鹽而成的粉末酶制劑，該2種以上游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶，從而可緩和溫度、濕度、氧氣等外部環(huán)境的影響，即使在常溫下醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性也優(yōu)異。

＜粉末酶制劑的平均粒徑＞

本發(fā)明的粉末酶制劑是指，在醛脫氫酶中配混2種以上游離氨基酸或它們的鹽，該2種以上游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的粉末。

粉末酶制劑的平均粒徑只要能發(fā)揮本發(fā)明的效果就沒有特別限定，例如為1～1000μm左右即可。

＜醛脫氫酶＞

本發(fā)明的粉末酶制劑所含有的醛脫氫酶可以源自植物，也可以源自動(dòng)物，可以為食品工業(yè)的領(lǐng)域等中廣泛使用的源自酵母、醋酸菌等微生物的醛脫氫酶，尤其可以使用比活性特別高的源自醋酸菌的醛脫氫酶。

另外，源自微生物的醛脫氫酶以該酶貫通細(xì)胞膜的復(fù)合體的形態(tài)存在，因此作為本發(fā)明的醛脫氫酶的原料，除了可以使用分離出來(lái)的單獨(dú)的醛脫氫酶之外，也可以使用與細(xì)胞膜一體的前述復(fù)合體。

使用單獨(dú)的酶時(shí)，例如，添加表面活性劑并將酶分離、純化。使用與細(xì)胞膜一體的前述復(fù)合體時(shí)，例如，通過(guò)法式壓力破碎(frenchpress)等處理將細(xì)胞破碎而去除細(xì)胞質(zhì)?；蛘邔⒓?xì)胞不經(jīng)破碎地直接使用。

對(duì)于如此得到的醛脫氫酶，可以在不損害本發(fā)明的效果的范圍內(nèi)實(shí)施干燥等處理。

本發(fā)明的粉末酶制劑使用與細(xì)胞膜一體的前述復(fù)合體作為醛脫氫酶時(shí)，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性增加。

進(jìn)而，作為與細(xì)胞膜一體的前述復(fù)合體，使用未破碎的細(xì)胞自身、例如微生物菌體自身時(shí)，經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。特別是將微生物菌體自身制成滅活菌體來(lái)使用時(shí)，會(huì)抑制由活菌的代謝作用造成的變質(zhì)，經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。

需要說(shuō)明的是，除了特別規(guī)定的情況之外，以下將與細(xì)胞膜一體的前述復(fù)合體或其破碎物省略稱為醛脫氫酶。

＜游離氨基酸或它們的鹽＞

本發(fā)明的粉末酶制劑中配混的游離氨基酸為構(gòu)成蛋白質(zhì)的20種。

具體而言，為丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、組氨酸、賴氨酸。

另外，游離氨基酸的鹽可列舉出上述20種的鈉鹽、鉀鹽、鹽酸鹽等鹽類等。

本發(fā)明中使用的游離氨基酸可以為l體、d體、或dl體中任一個(gè)光學(xué)異構(gòu)體，也可以為水合物。

需要說(shuō)明的是，游離氨基酸或它們的鹽的配混量只要是發(fā)揮本發(fā)明的效果的量即可，具體而言，相對(duì)于粉末酶制劑總量以游離氨基酸換算計(jì)為1～99％即可。保存中的游離氨基酸量的增減相對(duì)于本發(fā)明的游離氨基酸或它們的鹽的配混量是極少的，不影響配混量。

＜谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸＞

本發(fā)明的粉末酶制劑包含前述20種的游離氨基酸之中的選自谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸中的2種以上游離氨基酸或它們的鹽時(shí)，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。

＜谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸的總含量＞

本發(fā)明的粉末酶制劑含有以游離氨基酸換算計(jì)為游離氨基酸總量的25％以上、進(jìn)而35％以上的、谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸的4種游離氨基酸或它們的鹽時(shí)，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。

上述4種游離氨基酸或它們的鹽的總含量的上限只要能發(fā)揮本發(fā)明的效果就沒有特別限定，具體而言為100％以下。

需要說(shuō)明的是，本發(fā)明中，游離氨基酸量是指，以游離氨基酸換算計(jì)含有對(duì)醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化做出貢獻(xiàn)的氨基酸、即粉末酶制劑中存在的游離氨基酸或它們的鹽的量的測(cè)定值，不包括以蛋白質(zhì)、肽的形態(tài)存在的氨基酸。

游離氨基酸量通過(guò)通常使用的測(cè)定法求出即可，例如，如后述試驗(yàn)例2那樣在粉末酶制劑中添加離子交換水，實(shí)施振蕩、離心分離處理，分離上清。在分離出來(lái)的上清中添加磺基水楊酸，實(shí)施脫蛋白處理，再次實(shí)施振蕩、離心分離處理。將所得到的上清減壓干固后，添加檸檬酸緩沖液進(jìn)行溶解，使用氨基酸自動(dòng)分析計(jì)來(lái)測(cè)定。

＜谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸的最佳組合＞

進(jìn)而，本發(fā)明的粉末酶制劑將選自作為酸性氨基酸的谷氨酸和天冬氨酸、或它們的鹽中的1種以上與選自作為堿性氨基酸的賴氨酸和精氨酸、或它們的鹽中的1種以上組合來(lái)配混時(shí)，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。

＜酸性氨基酸和堿性氨基酸的含量＞

關(guān)于本發(fā)明的粉末酶制劑的醛脫氫酶活性，相對(duì)于粉末酶制劑所含的游離氨基酸總量，作為酸性氨基酸的谷氨酸和天冬氨酸、或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為15％以上且85％以下，并且作為堿性氨基酸的賴氨酸和精氨酸、或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為15％以上且85％以下時(shí)，經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。

進(jìn)而，前述酸性氨基酸、或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為25％以上且75％以下，并且前述堿性氨基酸、或它們的鹽的總含量以游離氨基酸換算計(jì)為25％以上且75％以下時(shí)，經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性特別優(yōu)異。

＜游離氨基酸或它們的鹽的作用＞

前述2種以上游離氨基酸或它們的鹽影響醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化的作用機(jī)理尚不清楚，可以認(rèn)為，通過(guò)不同種類的游離氨基酸共存，可緩和溫度、濕度、氧氣等外部因素的影響，有助于醛脫氫酶活性在常溫下的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化。

可以認(rèn)為，特別是谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸這4種游離氨基酸或它們的鹽均具有極性，表現(xiàn)出與醛脫氫酶的靜電相互作用，從而有利于醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化。

進(jìn)而，在中性條件下，作為酸性氨基酸的谷氨酸和天冬氨酸帶負(fù)電荷，作為堿性氨基酸的賴氨酸和精氨酸帶正電荷。可以認(rèn)為，通過(guò)配混具有正負(fù)不同的電荷的游離氨基酸或它們的鹽，與醛脫氫酶之間表現(xiàn)出的靜電相互作用增強(qiáng)，而且游離氨基酸或它們的鹽彼此的相互作用也變強(qiáng)，非常有利于醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化。

＜醛脫氫酶和游離氨基酸或它們的鹽的含有比率＞

關(guān)于本發(fā)明的粉末酶制劑中的游離氨基酸或它們的鹽的含有比率，相對(duì)于以微生物換算的前述醛脫氫酶1份，以游離氨基酸換算計(jì)為0.1份以上且20份以下、進(jìn)而0.2份以上且15份以下時(shí)，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。

＜其它原料＞

本發(fā)明的粉末酶制劑中可以在不損害本發(fā)明的效果的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇并配混除了作為必需原料的醛脫氫酶和2種以上游離氨基酸或它們的鹽之外的原料。

具體而言，可列舉出葡萄糖、半乳糖、甘露糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇、海藻糖、淀粉水解物、淀粉糖漿、還原淀粉糖漿、淀粉、果膠、纖維素等糖類、全脂奶粉、脫脂奶粉、酪蛋白、白蛋白等蛋白質(zhì)、抗壞血酸、生育酚、丹寧酸、兒茶素、姜黃素、橘皮苷、異黃酮等多酚類等抗氧化劑、各種表面活性劑、荷荷巴油、棕櫚油、乳木果油、硅藻土、二氧化硅、活性炭等多孔材料等。

＜粉末酶制劑的制造方法＞

本發(fā)明的粉末酶制劑如前所述使用源自植物或源自動(dòng)物的醛脫氫酶，優(yōu)選使用食品工業(yè)的領(lǐng)域等中廣泛使用的源自酵母、醋酸菌等菌的醛脫氫酶，特別是比活性高的源自醋酸菌的醛脫氫酶。此外，可以在醛脫氫酶中加入2種以上游離氨基酸或它們的鹽，例如如下所述地制造。

＜源自醋酸菌的醛脫氫酶的制備＞

將醋酸菌在至少包含源自葡萄糖等的糖類、源自酵母提取物等的維生素和礦物類、以及乙醇的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

此時(shí)，可以在將培養(yǎng)基中的乙醇濃度設(shè)為3％以上、物料溫度25～35℃、通氣量相對(duì)于每1l培養(yǎng)基為0.02～5l/分鐘的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。

該培養(yǎng)在培養(yǎng)液中的醋酸酸度不足4％的條件下進(jìn)行。即，伴隨培養(yǎng)基中的醋酸菌的增殖，培養(yǎng)基中的乙醇經(jīng)由醛而被氧化為醋酸，培養(yǎng)基中的醋酸酸度上升，本發(fā)明中，在醋酸酸度達(dá)到4％之前、優(yōu)選在醋酸酸度為0.5％以上且3.9％以下時(shí)、特別是1％以上且3.5％以下時(shí)停止培養(yǎng)。

需要說(shuō)明的是，關(guān)于醋酸酸度，以酚酞的顯色反應(yīng)作為指標(biāo)，滴加氫氧化鈉直至中和，通過(guò)滴加的氫氧化鈉的物質(zhì)量換算來(lái)算出。

在停止了培養(yǎng)的培養(yǎng)液中，醛脫氫酶以與醋酸菌的細(xì)胞膜一體的前述復(fù)合體的形態(tài)被含有。另外，培養(yǎng)液中，除了培養(yǎng)基成分之外，還含有因培養(yǎng)而生成的醋酸等發(fā)酵成分。

本發(fā)明中，從使醛脫氫的活性經(jīng)時(shí)穩(wěn)定化的觀點(diǎn)出發(fā)，可以將包含醛脫氫酶的醋酸菌體和前述發(fā)酵成分分離。

關(guān)于分離的方法，例如實(shí)施離心處理(重力換算、1000～20000g)、膜濃縮處理、干燥處理等，分取包含醛脫氫酶的醋酸菌體的級(jí)分。

接著，為了從醋酸菌體的級(jí)分中去除培養(yǎng)基成分、發(fā)酵成分，可以進(jìn)行清洗。

關(guān)于清洗方法，例如利用醋酸菌體的濃縮級(jí)分不溶于水的特征，向檸檬酸、磷酸的緩沖水溶液中稀釋混合后，再次實(shí)施離心處理，去除其上清液，從而去除培養(yǎng)基成分、發(fā)酵成分。

如此得到的包含醛脫氫酶的醋酸菌體可以直接用作醛脫氫酶，也可以實(shí)施加熱、氧氣阻隔等處理而制成滅活菌體來(lái)使用。

另外，醛脫氫酶存在于菌膜，因此可以對(duì)菌體實(shí)施超聲波、法式壓力破碎等處理，使用細(xì)胞膜破碎物，也可以進(jìn)一步使表面活性劑、酶發(fā)生作用，制成將醛脫氫酶分級(jí)而得到的單獨(dú)的酶來(lái)使用。

＜游離氨基酸的混合工序＞

接著，在前述醛脫氫酶中混合2種以上游離氨基酸或它們的鹽。

混合方法大致分為將粉末彼此混合的方法、以及一部分或全部在溶劑中混合并干燥的方法。

＜混合工序＞

將通過(guò)前述方法制造的醛脫氫酶和2種以上游離氨基酸或它們的鹽混合，使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶。

混合方法例如可列舉出如下三種方法：將醛脫氫酶粉末與游離氨基酸或它們的鹽的粉末混合的方法、將醛脫氫酶粉末與游離氨基酸或它們的鹽的溶液混合的方法、將醛脫氫酶與游離氨基酸或它們的鹽在溶液中混合的方法。

將醛脫氫酶粉末與游離氨基酸或它們的鹽的粉末混合時(shí)，采用例如在旋轉(zhuǎn)圓筒內(nèi)等添加兩者并通過(guò)滾動(dòng)進(jìn)行造粒等常規(guī)方法進(jìn)行粉末化即可。

將醛脫氫酶粉末與游離氨基酸或它們的鹽的溶液混合時(shí)，對(duì)于醛脫氫酶粉末，將游離氨基酸或它們的鹽的溶液通過(guò)噴霧等通常實(shí)施方法進(jìn)行噴霧等來(lái)混合即可。

將醛脫氫酶與游離氨基酸或它們的鹽在溶液中混合時(shí)，可以向溶劑中添加醛脫氫酶和游離氨基酸或它們的鹽并混合，也可以將醛脫氫酶的分散液與游離氨基酸或它們的鹽的溶液混合。

溶液中使用的溶劑在不損害本發(fā)明的效果的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇清水、ph緩沖液等即可。

該工序中，可以在不損害本發(fā)明的效果的范圍內(nèi)配混糖類等通常使用的賦形劑等其它原料。

前述混合方法之中，特別是將游離氨基酸、或其鹽的一部分或全部制成溶液后用于混合時(shí)，游離氨基酸或它們的鹽以分子狀態(tài)存在，因此與將粉末彼此混合的情況相比，游離氨基酸或它們的鹽容易吸附于醛脫氫酶，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。

＜干燥工序＞

將原料的一部分或全部以溶液的形態(tài)用于混合的制造方法中，通過(guò)噴霧干燥、冷凍干燥等常規(guī)方法進(jìn)行粉末化。

實(shí)施噴霧干燥時(shí)，例如將前述溶液在入口溫度100～130℃、出口溫度50～70℃的條件下噴霧、干燥。

實(shí)施冷凍干燥時(shí)，例如將前述溶液流入至金屬制的桶，在-20～-50℃下冷凍后，在減壓下將擱板加熱至5～50℃，去除溶劑使其干燥。

本發(fā)明中，通過(guò)熱對(duì)醛脫氫酶的影響得以抑制的冷凍干燥而進(jìn)行粉末化時(shí)，所得到的粉末酶制劑的醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。

需要說(shuō)明的是，將醛脫氫酶粉末與游離氨基酸或它們的鹽的溶液混合時(shí)，可以與通常實(shí)施的造粒的方法同樣地同時(shí)進(jìn)行前述混合工序和前述干燥工序。

＜粉末酶制劑的用途＞

本發(fā)明的粉末酶制劑具有去除脂肪族醛的效果。

特別是對(duì)于碳數(shù)為1～10且不含氮原子的脂肪族醛的去除發(fā)揮出色的效果。

具體而言，例如可列舉出甲醛、乙醛、丁醛、甘油醛、丙二醛、戊醛、己醛、庚醛、辛醛、壬烯醛、癸醛、異辛醛、異壬烯醛、異癸醛等。

本發(fā)明的粉末酶制劑可以在希望去除脂肪族醛的所有場(chǎng)合下使用。

例如，為了去除生物體內(nèi)或生物體外的脂肪族醛，可以經(jīng)口攝入，也可以作為外用劑來(lái)涂布。

醛在揮發(fā)時(shí)的濃度僅為0.1～數(shù)十ppm下就會(huì)成為對(duì)生物體的氧化應(yīng)激、難聞臭味的原因。

通過(guò)經(jīng)口攝入、涂布而使用本發(fā)明的粉末酶制劑時(shí)的用量只要是能夠?qū)⑷┓纸狻⑷コ乃郊纯?，例如，每?jīng)口攝入1頓或涂布100平方厘米，可以設(shè)為1～100mg。

另外，本發(fā)明的粉末酶制劑為了去除建筑物、人密集的公共設(shè)施的臭氣等環(huán)境中的醛而可以涂布或噴霧于墻體材料等建筑材料。

＜含有粉末酶制劑的食品＞

將本發(fā)明的粉末酶制劑用于食品時(shí)，可以在不損害本發(fā)明的粉末酶制劑的效果的范圍內(nèi)組合使用以下的原料。

具體而言，可列舉出海藻糖、阿斯巴甜、苯丙氨酸等甜味劑、檸檬酸、醋酸、乳酸、磷酸、柑橘果汁等酸味劑、葡萄糖、蔗糖、乳糖、食鹽、醬油等調(diào)味料、果膠、明膠、瓊脂、褐藻酸、大豆多糖類、纖維素、黃原膠、瓜爾豆膠、卡拉膠等增稠穩(wěn)定劑、膠原、透明質(zhì)酸、胎盤、輔酶q10、軟骨素、蜂王漿等美容原料、姜黃、肝提取物、肉桂、茴香、芍藥、甘草等生藥、香料、色素、防腐劑等。

＜含有粉末酶制劑的化妝品＞

將本發(fā)明的粉末酶制劑用于化妝品時(shí)，可以在不損害本發(fā)明的粉末酶制劑的効果的范圍內(nèi)組合使用以下的原料。

具體而言，可列舉出硅藻土、活性炭、二氧化硅等多孔微粒、滑石、云母、膨潤(rùn)土、高嶺土、絹云母等粘土礦物、纖維素、羧甲基纖維素、糊精、環(huán)糊精、玉米淀粉、土豆淀粉等多糖類、多酚、桉樹提取物、兒茶素、月見草提取物等植物提取物、聚硅氧烷、環(huán)狀硅氧烷等硅油、肉豆蔻酸異丙酯、石蠟、角鯊?fù)?、蜂蠟、棕櫚油、荷荷巴油、乳木果油等油脂、乙醇、異丙基甲基苯酚、苯扎氯銨、三氯生、雙氯苯雙胍己烷、三氯碳酰替苯胺、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、苯氧基乙醇、溶菌酶氯化物、銀化合物等滅菌或防腐劑、氯化鋁、堿式氯化鋁、明礬、對(duì)苯酚磺酸、氧化鋅、羥基磷灰石、氧化鎂、碳酸鈣、酒石酸等收斂或除臭劑、甘草酸、尿素、黃芩提取物、黃柏提取物等抗炎劑、膠原、透明質(zhì)酸、輔酶q10、軟骨素、胎盤、神經(jīng)酰胺、彈性蛋白、蝦青素、白藜蘆醇、番茄紅素、蜂王漿、蘆薈提取物、鉑納米膠體、視黃酸、視黃醇、水解小麥、四棱豆提取物、乳鐵蛋白、豆乳發(fā)酵液、egf等美容成分、維生素c衍生物、熊果苷、富勒烯、氨甲環(huán)酸、氫醌、薏苡仁提取物等美白成分、氧化鈦、二苯甲酮衍生物、對(duì)氨基苯甲酸衍生物、甲氧基肉桂酸衍生物等紫外線吸收劑、戊二醇、己二醇、辛二醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇、聚乙二醇、腺苷等保濕劑、烷基苯磺酸鹽、聚氧化烯烷基醚硫酸酯鹽、烷基硫酸酯鹽、烯烴磺酸鹽、脂肪酸鹽、二烷基磺基琥珀酸鹽等陰離子表面活性劑、聚乙二醇?xì)浠吐橛?、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油衍生物等非離子表面活性劑、烷基三甲基銨鹽、二烷基二甲基銨鹽、烷基吡啶鎓鹽、十八烷基三甲基氯化銨等陽(yáng)離子表面活性劑、烷基甜菜堿、烷基酰胺丙基甜菜堿、咪唑啉甜菜堿、蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂等兩性表面活性劑、各種氨基酸、各種維生素、各種肽、高級(jí)脂肪酸、多元醇、增稠劑、碳酸鹽、乳化劑、香料等。

以下，對(duì)于本發(fā)明，基于實(shí)施例、比較例和試驗(yàn)例進(jìn)行具體說(shuō)明。需要說(shuō)明的是，本發(fā)明不限定于此。

[制備例1]

在乙醇4％、酵母提取物0.2％和清水95.7％中添加醋酸菌(gluconacetobacterkonbuchaenbrc14816株)0.1％，在物料溫度30℃、相對(duì)于培養(yǎng)液的通氣量設(shè)為0.4l/分鐘的條件下進(jìn)行24小時(shí)培養(yǎng)。

對(duì)于所得到的醋酸菌溶液施加離心濃縮處理(10000g)，用清水清洗幾次后，制備10％醋酸菌溶液。

對(duì)所得到的溶液實(shí)施法式壓力破碎處理，將醋酸菌體破碎將其滅絕，得到以微生物換算計(jì)為10％的醛脫氫酶(酶與細(xì)胞膜一體的前述復(fù)合體)水溶液。

[制備例2]

制備例1中，除了將醋酸菌替換為acetobacteraceti(醋酸桿菌)nbrc14818株之外，同樣地操作，得到以微生物換算計(jì)為10％的醛脫氫酶(酶與細(xì)胞膜一體的前述復(fù)合體)水溶液。

[實(shí)施例1]

將制備例1的10％醛脫氫酶(酶與細(xì)胞膜一體的前述復(fù)合體)10％、l-谷氨酸鈉3％、l-天冬氨酸鈉3％、l-精氨酸3％、糊精10％、清水71％攪拌混合。將其在物料溫度-30℃下快速冷凍后，在減壓下、擱板溫度15℃下實(shí)施真空冷凍干燥處理，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的本發(fā)明的粉末酶制劑。

[實(shí)施例2]

除了將l-精氨酸替換為賴氨酸之外，全部根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行制備，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的本發(fā)明的粉末酶制劑。

[實(shí)施例3]

除了將l-谷氨酸鈉3％、l-天冬氨酸鈉3％、l-精氨酸3％、糊精10％替換為l-谷氨酸鈉6.5％、l-精氨酸2.5％、甘露醇2.5％、清水13.7％之外，全部根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行制備，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的本發(fā)明的粉末酶制劑。

[實(shí)施例4]

除了將l-谷氨酸鈉3％、l-天冬氨酸鈉3％、l-精氨酸3％替換為l-天冬氨酸鈉3％、賴氨酸6％、甘氨酸0.2％、糊精2.5％、清水4.5％之外，全部根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行制備，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的本發(fā)明的粉末酶制劑。

[實(shí)施例5]

除了將l-谷氨酸鈉3％、l-天冬氨酸鈉3％、l-精氨酸3％替換為l-谷氨酸鈉1％、l-天冬氨酸鈉1％、l-精氨酸1％、清水6％之外，全部根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行制備，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的本發(fā)明的粉末酶制劑。

[實(shí)施例6]

除了將l-谷氨酸鈉3％、l-天冬氨酸鈉3％、l-精氨酸3％替換為l-谷氨酸鈉0.1％、l-天冬氨酸鈉0.1％、l-精氨酸0.2％、甘氨酸0.6％、清水8％之外，全部根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行制備，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的本發(fā)明的粉末酶制劑。

[比較例1]

除了將l-谷氨酸鈉3％、l-天冬氨酸鈉3％、l-精氨酸3％替換為甘氨酸9％之外，全部根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行制備，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的粉末酶制劑。

通過(guò)醛脫氫酶活性的測(cè)定求出的醛脫氫酶的相對(duì)于初始活性的殘留活性為0％。

[比較例2]

除了將l-谷氨酸鈉3％、l-天冬氨酸鈉3％、l-精氨酸3％替換為l-谷氨酸鈉9％之外，全部根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行制備，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的粉末酶制劑。

通過(guò)醛脫氫酶活性的測(cè)定求出的醛脫氫酶的相對(duì)于初始活性的殘留活性為4％。

[比較例3]

除了將l-谷氨酸鈉3％、l-天冬氨酸鈉3％、l-精氨酸3％替換為l-精氨酸9％之外，全部根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行制備，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的粉末酶制劑。

通過(guò)醛脫氫酶活性的測(cè)定求出的醛脫氫酶的相對(duì)于初始活性的殘留活性為10％。

[試驗(yàn)例1]游離氨基酸的配混對(duì)醛脫氫酶的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性的影響

將實(shí)施例1～6和比較例1～3中得到的粉末酶制劑0.05g封入5cm見方的鋁袋中，供于37℃下2個(gè)月的加速保存試驗(yàn)。

關(guān)于醛脫氫酶的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性，使用以下的游離氨基酸含量的測(cè)定方法、醛脫氫酶活性的測(cè)定方法、殘留活性的評(píng)價(jià)基準(zhǔn)進(jìn)行。

＜游離氨基酸含量的測(cè)定方法＞

在粉末酶制劑2g中添加10ml的離子交換水并振蕩15分鐘，在50℃下加溫30分鐘后，實(shí)施離心分離處理，將上清分離并移至容量瓶，定容至50ml。

向經(jīng)定容的上清20ml中添加3％磺基水楊酸20ml并振蕩15分鐘(脫蛋白處理)，實(shí)施離心分離處理，將上清分離并減壓干固。向其中添加檸檬酸鹽緩沖液，使用孔徑0.45μm的膜過(guò)濾器實(shí)施過(guò)濾處理后，使用氨基酸自動(dòng)分析計(jì)測(cè)定粉末酶制劑中存在的游離氨基酸。

＜醛脫氫酶活性的測(cè)定方法＞

如下測(cè)定剛制造后和加速保存試驗(yàn)后的醛脫氫酶活性。

即，將ph5的mcilvaine緩沖液0.125ml、0.1m乙醛0.2ml、0.1mg/ml粉末酶制劑懸濁液混合，添加蒸餾水，調(diào)整至總量0.8ml。

向其中加入0.1m鐵氰化鉀0.1ml，在37℃下實(shí)施20分鐘保溫處理，加入dupanol液0.5ml而使酶反應(yīng)停止。

接著，混合2.5ml的蒸餾水，在室溫下放置20分鐘后，以吸光度660nm測(cè)定所生成的普魯士藍(lán)的顯色。

此時(shí)，作為空白試驗(yàn)，測(cè)定未配混粉末酶制劑懸濁液的試樣。

需要說(shuō)明的是，醛脫氫酶的殘留活性是以粉末酶制劑的剛制造后的醛脫氫酶活性的值作為100％而算出的值。

＜評(píng)價(jià)基準(zhǔn)＞

a：殘留活性為50％以上

b：殘留活性為30％以上

c：殘留活性不足30％

[表1]

※()內(nèi)為游離氨基酸換算的值

根據(jù)表1，配混有2種以上游離氨基酸或它們的鹽的粉末酶制劑、特別是包含選自谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、賴氨酸中的2種以上游離氨基酸或它們的鹽的粉末酶制劑(實(shí)施例1～6)的殘留活性為30％以上，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性高。另外，相對(duì)于醛脫氫酶(微生物換算)1份，前述2種以上游離氨基酸或它們的鹽的含有比例為0.1份以上且20份以下的范圍。

另一方面，僅配混有1種游離氨基酸或它們的鹽的粉末酶制劑(比較例1～3)的殘留活性大幅降低至不足30％，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性欠缺。

因此，可知：通過(guò)在醛脫氫酶中配混2種以上游離氨基酸或它們的鹽，即使在常溫下醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性也增加。

另外，還可知：將選自作為酸性氨基酸的谷氨酸和天冬氨酸、或它們的鹽中的1種以上與選自作為堿性氨基酸的賴氨酸和精氨酸、或它們的鹽中的1種以上組合來(lái)配混時(shí)，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性增加(實(shí)施例1～6)。

另外，含有25％以上且75％以下的選自作為酸性氨基酸的谷氨酸和天冬氨酸、或它們的鹽中的1種以上、并且含有25％以上且75％以下的選自作為堿性氨基酸的賴氨酸和精氨酸、或它們的鹽中的1種以上的粉末酶制劑(實(shí)施例1～5)的殘留活性更高，保持在50％以上，醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異。

因此，可知：以含有特定量的選自作為酸性氨基酸的谷氨酸和天冬氨酸、或它們的鹽中的1種以上、以及選自作為堿性氨基酸的賴氨酸和精氨酸、或它們的鹽中的1種以上的方式制備的粉末酶制劑即使在常溫下醛脫氫酶活性的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性也優(yōu)異。

[試驗(yàn)例2]除臭試驗(yàn)(乙醛、壬烯醛)

首先，準(zhǔn)備鋪設(shè)濾紙的300ml用的錐形燒瓶，在該濾紙上注入乙醛1μl和實(shí)施例1的粉末酶制劑的1水溶液1ml，立即將錐形燒瓶用丁基橡膠制的蓋子密閉。密閉后，在物料溫度37℃下進(jìn)行10分鐘的保溫處理。

同樣地，將乙醛替換為壬烯醛并進(jìn)行保溫處理。

對(duì)于實(shí)施例2～6和比較例1～3也進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的試驗(yàn)。

對(duì)于所得到的2個(gè)錐形燒瓶，按照下述評(píng)價(jià)基準(zhǔn)實(shí)施除臭試驗(yàn)。

＜評(píng)價(jià)基準(zhǔn)＞

a：乙醛和壬烯醛臭氣幾乎消失。

b：乙醛和壬烯醛臭氣減輕。

c：乙醛或壬烯醛臭氣未減輕。

[表2]

根據(jù)表2，試驗(yàn)例1中醛脫氫酶的相對(duì)于初始活性的殘留活性為30％以上的粉末酶制劑(實(shí)施例1～6)減輕了乙醛和壬烯醛臭氣。特別是試驗(yàn)例1中乙醛脫氫酶的相對(duì)于初始活性的殘留活性為50％以上的粉末酶制劑(實(shí)施例1～5)使乙醛和壬烯醛臭氣幾乎消失。

另一方面，試驗(yàn)例1中醛脫氫酶的相對(duì)于初始活性的殘留活性不足30％的粉末酶制劑(比較例1～3)未能減輕乙醛和壬烯醛臭氣。

[實(shí)施例7]

除了將真空冷凍干燥處理替換為噴霧干燥處理之外，全部根據(jù)實(shí)施例1進(jìn)行制備，制備本發(fā)明的粉末酶制劑。噴霧干燥處理在噴霧干燥機(jī)的入口物料溫度170℃、出口物料溫度65℃下實(shí)施干燥處理，得到本發(fā)明的粉末酶制劑。

按照試驗(yàn)例2的評(píng)價(jià)基準(zhǔn)，與實(shí)施例1的粉末酶制劑進(jìn)行比較，結(jié)果得到了除臭效果，但實(shí)施例1的除臭效果比實(shí)施例7更優(yōu)異。

[實(shí)施例8]

將從制備例1的10％醛脫氫酶(酶與細(xì)胞膜結(jié)合而成的復(fù)合體)中分離出來(lái)的醛脫氫酶粉末10％、以及l(fā)-谷氨酸鈉粉末3％、l-天冬氨酸鈉粉末3％、l-精氨酸粉末3％、糊精粉末10％在常溫(20℃)下投入至粉體混合機(jī)后，以100rpm攪拌混合5小時(shí)，得到使游離氨基酸或它們的鹽吸附于醛脫氫酶而成的本發(fā)明的粉末酶制劑。

按照試驗(yàn)例2的評(píng)價(jià)基準(zhǔn)進(jìn)行除臭試驗(yàn)，結(jié)果得到了除臭效果。另外，實(shí)施例1的除臭效果比實(shí)施例8更優(yōu)異。

[實(shí)施例9]食品

將實(shí)施例1的粉末酶制劑0.1份、糊精0.5份、結(jié)晶纖維素0.3份、玉米淀粉0.05份、蔗糖脂肪酸酯0.05份進(jìn)行干式混合后，相對(duì)于每1平方厘米施加1.6t的載荷來(lái)進(jìn)行壓縮成形，制造直徑9mm、厚度4mm、重量290mg、俯視為圓形的片劑。

食用所得到的片劑時(shí)，改善了由乙醛導(dǎo)致的口臭。

[實(shí)施例10]食品

將除了使用制備例2的醛脫氫酶之外與實(shí)施例1同樣操作而得到的粉末酶制劑0.1份、蔗糖4份、姜黃粉末0.05份、維生素c0.05份、維生素b20.05份、難消化性糊精0.05份、檸檬酸0.005份、醋酸0.005份、清水95.69份混合，通過(guò)常規(guī)方法制造1瓶100g的容器裝飲料。

在飲用800ml啤酒后，飲用所得到的容器裝飲料時(shí)，減輕了由乙醛造成的飲酒時(shí)的醉后難受。

[實(shí)施例11]化妝品

將實(shí)施例2的粉末酶制劑0.1份、液化石油氣90份、2-乙基己酸十六烷基酯7.7份、硅酸酐1份、聚硅氧烷共聚物1份混合，通過(guò)常規(guī)方法制造一罐180ml的噴霧劑。

將所得到的噴霧劑噴霧、涂布于50多歲男性穿了24小時(shí)的棉制內(nèi)衣時(shí)，減輕了由壬烯醛導(dǎo)致的老人臭。

[實(shí)施例12]化妝品

將除了使用制備例2的醛脫氫酶之外與實(shí)施例2同樣操作而得到的粉末酶制劑0.1份、乙醇10份、異丙基甲基苯酚2份、滑石1份、薄荷醇0.05份、清水86.85份混合，根據(jù)常規(guī)方法浸漬于10cm見方的聚酯制片。

50多歲男性使用所得到的片狀化妝品擦拭脖頸時(shí)，減輕了由壬烯醛導(dǎo)致的老人臭。