本發(fā)明描述了可用于治療的有機(jī)化合物。所述化合物表現(xiàn)出作為選擇性Smurf-1抑制劑的性質(zhì)，因此可用于治療一系列病癥例如肺動脈高壓、青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合以及COPD和哮喘。

背景技術(shù)：

Smurf-1(Smad泛素化調(diào)節(jié)因子1)是E3泛素連接酶的HECT家族的成員，其標(biāo)記用于通過泛素依賴性蛋白水解途徑進(jìn)行蛋白水解降解的特異性底物。Smurf-1的主要底物包括RhoA、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)受體(BMPR)1和2、smad1和5、TNFα受體相關(guān)因子(TRAF)6和myD88(Andrews,P.S.等人.Assay Drug Dev.Technol.2010)。鑒于底物列表，Smurf-1在調(diào)節(jié)BMP信號傳導(dǎo)(Chen,D等人.Growth Factors,2004)、神經(jīng)元細(xì)胞極性(Stiess,M.和Bradke,F.Neuron,2011)、細(xì)胞遷移(Huang,C.Cell Adh.Migr.2010)、腫瘤細(xì)胞侵襲(Sahai,E.等人.JCB,2007)、線粒體自噬(Orvedahl,A.Nature,2011)、間質(zhì)干細(xì)胞增殖(Zhao,L.等人.J.Bone Miner.Res.2010)和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)(Ozdamar,B等人.Science 2005)中起作用。

肺動脈高壓(PAH)是多種病因的威脅生命的攻擊性的和復(fù)雜的疾病，其特征在于導(dǎo)致右心室肥大/衰竭的進(jìn)行性肺血管病變，并且在大多數(shù)情況下導(dǎo)致過早死亡。目前的藥理療法是姑息的。雖然已經(jīng)觀察到預(yù)期壽命的改善，但是目前的療法重點(diǎn)在于改變疾病的血管收縮元件，其不會停止或逆轉(zhuǎn)疾病的進(jìn)展，并且移植(雙肺或心肺)仍然是唯一的根治療法。鑒于目前治療類別的有限效果，需要靶向PAH的潛在進(jìn)行性肺血管重塑的新型療法。

轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族受體骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體II(BMPR-II)基因中的種系突變在70％的可遺傳形式的和一些散發(fā)形式的特發(fā)性PAH(IPAH)中是普遍的。骨形態(tài)發(fā)生蛋白是屬于TGF-β超家族的信號分子。骨形態(tài)發(fā)生蛋白最初通過其誘導(dǎo)軟骨和骨形成的能力來鑒定，并且隨后被鑒定為調(diào)節(jié)廣泛功能的多功能蛋白，所述功能例如多種細(xì)胞類型中的增殖、分化和凋亡，所述細(xì)胞類型包括成骨細(xì)胞、上皮細(xì)胞、神經(jīng)元、免疫細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞。到目前為止，已經(jīng)鑒定了>20種哺乳動物BMP，但是在哺乳動物中僅克隆了能夠與BMP結(jié)合的三種I型和三種II型受體(分別為BMPR-I和BMPR-II)。骨形態(tài)發(fā)生蛋白從多種細(xì)胞類型包括肺血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞合成和分泌。除了在BMPR-I和-II中的突變之外，來自患有非家族性PAH的患者的肺顯示顯著降低的血管BMPR-1和-II的水平，這意味著在許多形式的PAH中破壞的BMP信號傳導(dǎo)的中心作用(Du,L等人.N.Eng.J.Med,2003)。因此，PAH患者的肺血管系統(tǒng)中BMP信號傳導(dǎo)的恢復(fù)在用于治療PAH的新型抗重塑治療劑的開發(fā)中是特別令人感興趣的。

已經(jīng)顯示Smurf-1介導(dǎo)多種細(xì)胞類型包括成骨細(xì)胞(Zhao,M等人.JBC,2003)、成肌細(xì)胞(Ying,SX等人.JBC,2003)、肺上皮(Shi W,等人.Am.J.Physiol.Cell.Mol.Physiol,2004)、神經(jīng)元組織(Kallan,T等人.Mol.Cell.Biol,2009)和心內(nèi)膜細(xì)胞(Towsend,TA,等人.Cells Tissues Organs,2011)中BMPR-I、-II以及smad1和5的降解。最近，支持Smurf-1在PAH中的作用的第一個證據(jù)出現(xiàn)，其中增強(qiáng)的Smurf-1水平在慢性缺氧和野百合堿臨床前體內(nèi)PAH模型中被觀察到，并與BMPR1和2的下調(diào)相關(guān)(Murakami,K,等人.Exp.Biol.Med,2010和Yang,J.等人.Circ.Res,2010)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

仍然需要用于肺動脈高壓的新的治療和療法。本發(fā)明提供了化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體、其藥物組合物及其組合產(chǎn)品，所述化合物是Smurf-1抑制劑。本發(fā)明還提供了治療、預(yù)防或改善肺動脈高壓的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的Smurf-1抑制劑。

根據(jù)本發(fā)明的第一方面，實(shí)施方案1提供了式(I)的化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其中

R¹是(C₃-C₆)烷基或(C₃-C₆)環(huán)烷基；

R²是甲基；

R³選自(C₆-C₁₀)支鏈烷基、(C₆-C₁₀)支鏈烯基、(C₅-C₈)環(huán)烯基、(C₅-C₈)環(huán)烷基或Het；其中(C₅-C₈)環(huán)烯基或(C₅-C₈)環(huán)烷基是未取代的或被1、2、3或4個取代基R⁴取代；且其中Het被1、2、3或4個取代基R⁴取代；

各R⁴獨(dú)立地選自鹵代、(C₁-C₄)烷基、鹵代(C₁-C₄)烷基、(C₁-C₄)烷氧基或鹵代(C₁-C₄)烷氧基；或

兩個R⁴基團(tuán)當(dāng)連接在相同的碳原子上時，可以與它們所連接的碳原子一起形成環(huán)戊基、四氫呋喃或二氧戊環(huán)環(huán)；且

Het是5或6元的完全飽和或部分飽和的雜環(huán)，其包含a)在2-或3-位的1個氧原子，或b)在2-和5-位或2-和6-位的2個氧原子，其中編號相對于連接點(diǎn)；且

(C₅-C₈)環(huán)烷基可以是含有5、6、7或8個碳原子的單環(huán)或橋環(huán)系統(tǒng)。

在另一個實(shí)施方案中，提供了如上定義的式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含治療有效量的根據(jù)式(I)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共結(jié)晶體或其亞式以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含治療有效量的根據(jù)式(I)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其亞式以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。

在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療選自以下的病癥或疾病的方法：肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨折愈合、青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合以及COPD和哮喘，其包括向所述受試者施用治療有效量的根據(jù)式(I)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共結(jié)晶體或其亞式或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體。在一些實(shí)施方案中，向受試者施用治療有效量的根據(jù)式(I)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在其它實(shí)施方案中，向受試者施用治療有效量的根據(jù)式(I)亞式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。其他實(shí)施方案提供了治療選自青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘的病癥或疾病的方法。

在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了組合產(chǎn)品特別是藥物組合產(chǎn)品，其包含治療有效量的根據(jù)式(I)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體或其亞式以及一種或多種治療活性劑。

本文描述了本發(fā)明的各種實(shí)施方案。

詳細(xì)說明

因此，本發(fā)明提供如上文作為實(shí)施方案1所述的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體。

實(shí)施方案2.根據(jù)實(shí)施方案1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其中R¹是異丙基、環(huán)丁基或環(huán)己基。

實(shí)施方案3.根據(jù)實(shí)施方案1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其中R¹是環(huán)己基。

實(shí)施方案4.根據(jù)任何前述實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其中R³選自2,2-二甲基戊基、2,2-二甲基戊-2-烯基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、二烷基、四氫呋喃基、二氧戊環(huán)基和二環(huán)[2.2.2]辛基；其中所述環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、二烷基、四氫呋喃基、二氧戊環(huán)基或二環(huán)[2.2.2]辛基環(huán)是未取代的或被1、2、3或4個取代基R⁴取代；且

各R⁴獨(dú)立地選自鹵代、(C₁-C₄)烷基、鹵代(C₁-C₄)烷基、(C₁-C₄)烷氧基或鹵代(C₁-C₄)烷氧基；或

兩個R⁴基團(tuán)當(dāng)連接在相同的碳原子上時，可以與它們連接的碳原子一起形成四氫呋喃或二氧戊環(huán)環(huán)。

實(shí)施方案5.根據(jù)任何前述實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其中R³是

且m是1、2、3或4。

實(shí)施方案6.根據(jù)任何前述實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其中R³是

且m是1、2、3或4。

實(shí)施方案7.根據(jù)任何前述實(shí)施方案的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其中各R⁴獨(dú)立地選自甲基、異丙基、叔丁基和甲氧基。

實(shí)施方案8.根據(jù)實(shí)施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物選自

實(shí)施例1

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例1.1

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(6-乙基-4-甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例1.2

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(6,6-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例1.3

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4-乙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例1.4

[5-(4-(叔丁基)環(huán)己-1-烯-1-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例1.5

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-甲基環(huán)己-1-烯-1-基)異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例1.6

5-(環(huán)庚-1-烯-1-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例1.7

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-(三氟甲基)環(huán)己-1-烯-1-基)異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例2

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例2.1

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例2.2

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例3

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例4

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例5

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例6

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例6.1

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基環(huán)戊基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例7

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例8

(Z)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例9

(E)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例10

5-環(huán)己基-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例11

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例12

5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例13

5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例14

5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例15

5-(6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例16

5-(6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例17

5-(6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-異丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例18

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(6-異丙基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例19

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例20

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例21.1

[5-(4-溴-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]；

實(shí)施例21.2

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例22

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例23

5-(4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例24

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4-異丙基四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例25

5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例26

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體。

實(shí)施方案9.根據(jù)實(shí)施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物選自：

實(shí)施例20

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例26

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例2.2

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺；

實(shí)施例2.1

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]；和

實(shí)施例11

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酰胺；

或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體。

實(shí)施方案10.根據(jù)實(shí)施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是

實(shí)施例20

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體。

實(shí)施方案11.根據(jù)實(shí)施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是

實(shí)施例26

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體。

實(shí)施方案12.根據(jù)實(shí)施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是

實(shí)施例2.2

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體。

實(shí)施方案13.根據(jù)實(shí)施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是

實(shí)施例2.1

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體。

實(shí)施方案14.根據(jù)實(shí)施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是

實(shí)施例11

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體。

本文所用的術(shù)語“鹵代”(或鹵素)是指氟、溴、氯或碘，特別是氟、氯。鹵素取代的基團(tuán)和部分例如被鹵素取代的烷基(鹵代烷基)可以是單-、多-或全鹵化的。

如本文所用，術(shù)語“雜原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子，特別是氮或氧。

本文所用的術(shù)語“烷基”是指具有至多10個碳原子的完全飽和的支鏈或非支鏈烴部分。除非另有規(guī)定，烷基是指具有1至10個碳原子、1至6個碳原子或1至4個碳原子的烴部分。烷基的代表性實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。支鏈烷基的代表性實(shí)例包括但不限于異丙基、仲丁基、異丁基、叔丁基、異戊基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基等。取代的烷基是含有一個或多個例如一個、兩個或三個選自鹵素、羥基或烷氧基的取代基的烷基。

本文所用的術(shù)語“鹵代烷基”是指如本文所定義的烷基，其被一個或多個如本文所定義的鹵代基團(tuán)取代。鹵代烷基可以是單鹵代烷基、二鹵代烷基或多鹵代烷基，包括全鹵代烷基。單鹵代烷基可以在烷基內(nèi)具有一個碘、溴、氯或氟。二鹵代烷基和多鹵代烷基可以在烷基內(nèi)具有兩個或更多個相同的鹵素原子或不同鹵素基團(tuán)的組合。通常，多鹵代烷基含有至多12、或10、或8、或6、或4、或3、或2個鹵代基團(tuán)。鹵代烷基的非限制性實(shí)例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全鹵代烷基是指所有氫原子被鹵素原子替換的烷基。

如本文所用的術(shù)語“烷氧基”是指烷基-O-，其中烷基如上文所定義。烷氧基的代表性實(shí)例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、環(huán)丙氧基-、環(huán)己氧基等。通常，烷氧基具有1-4個碳原子。

本文所用的術(shù)語“鹵代烷氧基”是指如本文所定義的烷氧基，其被一個或多個如本文所定義的鹵代基團(tuán)取代。

除非另有規(guī)定，本文所用的術(shù)語“環(huán)烷基”是指3-8個碳原子的飽和單環(huán)、雙環(huán)或螺環(huán)烴基。除非另外指出，環(huán)烷基是指具有3至6個或5至8個環(huán)碳原子的環(huán)狀烴基。

如本文所用，術(shù)語“環(huán)烯基”是指3-8個碳原子的部分飽和的單環(huán)、雙環(huán)或螺環(huán)烴基。除非另外指出，環(huán)烯基是指具有3至6個或5至8個環(huán)碳原子的環(huán)狀烴基。

根據(jù)起始原料和方法的選擇，化合物可以以可能異構(gòu)體之一的形式或者作為其混合物存在，例如作為光學(xué)純異構(gòu)體或者作為異構(gòu)體混合物諸如外消旋物和非對映異構(gòu)體混合物存在，這取決于不對稱碳原子的數(shù)目。本發(fā)明意在包括所有這些可能的異構(gòu)體，包括外消旋混合物、非對映異構(gòu)體混合物和光學(xué)純形式?？梢杂檬中院铣勺踊蚴中栽噭┲苽浠蛘哂贸Ｒ?guī)技術(shù)拆分光學(xué)活性的(R)-和(S)-異構(gòu)體。如果化合物包含雙鍵，取代基可以是E或Z構(gòu)型。如果化合物包含二取代的環(huán)烷基，環(huán)烷基取代基可以具有順式-或反式-構(gòu)型。還預(yù)期包括所有的互變異構(gòu)形式。

如文中所用，術(shù)語“鹽”指本發(fā)明化合物的酸加成鹽或堿加成鹽?！胞}”特別包括“藥學(xué)上可接受的鹽”。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指保留本發(fā)明化合物的生物有效性和性質(zhì)的鹽，且其通常不是生物學(xué)或在其他方面不希望的。

含有能夠充當(dāng)氫鍵的供體和/或受體的基團(tuán)的本發(fā)明化合物即式(I)化合物能夠與適合的共晶體形成劑(co-crystal former)形成共晶體。這些共晶體可由式(I)化合物通過已知的共晶體形成方法制備。此類方法包括研磨、加熱、共升華、共熔化或在結(jié)晶條件下在溶液中使式(I)化合物與共晶體形成劑接觸以及分離由此形成的共晶體。適合的共晶體形成劑包括描述于WO 2004/078163中的那些。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含式(I)化合物的共晶體。

在許多情況下，本發(fā)明的化合物能夠通過甲酰胺基團(tuán)或其類似基團(tuán)的存在而形成酸和/或堿鹽和/或共晶體。

藥學(xué)上可接受的酸加成鹽或共晶體可與無機(jī)酸和有機(jī)酸形成。

可以由其衍生鹽或共晶體的無機(jī)酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以由其衍生鹽或共晶體的有機(jī)酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸等。

藥學(xué)上可接受的堿加成鹽或共晶體可以與無機(jī)和有機(jī)堿形成。

可以由其衍生鹽或共晶體的無機(jī)堿包括例如銨鹽和元素周期表第I至XII族的金屬。在某些實(shí)施方案中，鹽衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、銀和鋅；特別合適的鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。

可以由其衍生鹽或共晶體的有機(jī)堿包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代胺、環(huán)胺、堿性離子交換樹脂等。某些有機(jī)胺包括膽堿鹽、賴氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨基丁三醇。

在另一方面，本發(fā)明提供了乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、癸酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、谷氨酸鹽、戊二酸鹽、乙醇酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、癸二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽trifenatate或昔萘酸鹽或共晶體形式的式I化合物。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、癸酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、谷氨酸鹽、戊二酸鹽、乙醇酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、癸二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽trifenatate或昔萘酸鹽或共晶體形式的N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)異唑-3-甲酰胺。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、癸酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、谷氨酸鹽、戊二酸鹽、乙醇酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、癸二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽trifenatate或昔萘酸鹽或共晶體形式的N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、癸酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、谷氨酸鹽、戊二酸鹽、乙醇酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、癸二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽trifenatate或昔萘酸鹽或共晶體形式的N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、癸酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、谷氨酸鹽、戊二酸鹽、乙醇酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、癸二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽trifenatate或昔萘酸鹽或共晶體形式的[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、癸酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、谷氨酸鹽、戊二酸鹽、乙醇酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、癸二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽trifenatate或昔萘酸鹽或共晶體形式的N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酰胺。

在另一方面，本發(fā)明提供了鈉、鉀、銨、鈣、鎂、銀、鋅、膽堿鹽、賴氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇鹽或共晶體形式的式I化合物。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供鈉、鉀、銨、鈣、鎂、銀、鋅、膽堿鹽、賴氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇鹽或共晶體形式的N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)異唑-3-甲酰胺。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了鈉、鉀、銨、鈣、鎂、銀、鋅、膽堿鹽、賴氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇鹽或共晶體形式的N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了鈉、鉀、銨、鈣、鎂、銀、鋅、膽堿鹽、賴氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇鹽或共晶體形式的N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了鈉、鉀、銨、鈣、鎂、銀、鋅、膽堿鹽、賴氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇鹽或共晶體形式的[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了鈉、鉀、銨、鈣、鎂、銀、鋅、膽堿鹽、賴氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇鹽或共晶體形式的N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酰胺。

本文給出的任何式亦意欲表示未標(biāo)記形式和同位素標(biāo)記形式的化合物。同位素標(biāo)記的化合物具有本文給出的式所描繪的結(jié)構(gòu)，除了一個或多個原子被具有所選擇原子量或質(zhì)量數(shù)的原子替換外。可引入至本發(fā)明化合物中的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分別為²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I。本發(fā)明包括各種同位素標(biāo)記的本文定義的化合物，例如存在放射性同位素例如³H和¹⁴C的那些化合物或存在非放射性同位素例如²H和¹³C的那些化合物。這些同位素標(biāo)記的化合物可用于代謝研究(采用¹⁴C)、反應(yīng)動力學(xué)研究(采用例如²H或³H)、檢測或成像技術(shù)如正電子發(fā)射斷層顯像(PET)或單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(SPECT)包括藥物或底物組織分布分析，或用于患者的放射治療。特別是，¹⁸F或標(biāo)記化合物特別適合用于PET或SPECT研究。式(I)的同位素標(biāo)記化合物可一般地通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)或者通過所附的實(shí)施例和制備中描述的那些方法的類似方法，利用適當(dāng)?shù)耐凰貥?biāo)記試劑替換先前所用的非同位素標(biāo)記試劑進(jìn)行制備。

此外，用較重同位素、特別是氘(即²H或D)取代可因更大的代謝穩(wěn)定性而提供一些治療優(yōu)勢，例如體內(nèi)半衰期延長或所需劑量降低或治療指數(shù)提高。應(yīng)理解，在此情況下氘被視為式(I)化合物的取代基。該較重同位素特別是氘的濃度可通過同位素富集因子來界定。本文所用的術(shù)語“同位素富集因子”是指特定同位素的同位素豐度與天然豐度的比率。如果本發(fā)明化合物中的取代基表示為氘，則對于各指定氘原子，該化合物具有至少3500(在各指定氘原子處具有52.5％氘摻入)、至少4000(60％氘摻入)、至少4500(67.5％氘摻入)、至少5000(75％氘摻入)、至少5500(82.5％氘摻入)、至少6000(90％氘摻入)、至少6333.3(95％氘摻入)、至少6466.7(97％氘摻入)、至少6600(99％氘摻入)或至少6633.3(99.5％氘摻入)的同位素富集因子。

根據(jù)本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的溶劑合物包括其中結(jié)晶的溶劑可以是同位素取代的那些例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO。

如本文使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”包括任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣劑、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗細(xì)菌劑、抗真菌劑)、等張劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物穩(wěn)定劑、粘合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、矯味劑、染料等物質(zhì)及其組合，如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的那樣(參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版，Mack Printing Company,1990,第1289-1329頁)。涵蓋任意常規(guī)載體在治療或藥物組合物中的應(yīng)用，除非其與活性成分不相容。

術(shù)語本發(fā)明化合物的“治療有效量”是指將引發(fā)受試者的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)、例如降低或抑制酶或蛋白質(zhì)活性、或改善癥狀、緩和病狀、減緩或延緩疾病進(jìn)展或預(yù)防疾病等的本發(fā)明化合物的量。在一非限制性實(shí)施方案中，術(shù)語“治療有效量”是指當(dāng)施用于受試者時對以下各項(xiàng)有效的本發(fā)明化合物的量：(1)至少部分緩和、抑制、預(yù)防和/或改善(i)由Smurf-1介導(dǎo)的或(ii)與Smurf-1活性有關(guān)的或(iii)特征在于Smurf-1活性(正?；虍惓５?的病患或病癥或疾?。换?2)減輕或抑制Smurf-1活性或(3)減輕或抑制Smurf-1的表達(dá)。在另一個非限制性實(shí)施方案中，術(shù)語“治療有效量”是指當(dāng)施用于細(xì)胞或組織或非細(xì)胞生物學(xué)材料或介質(zhì)時有效地至少部分減輕或抑制Smurf-1活性或者至少部分減輕或抑制Smurf-1的表達(dá)的本發(fā)明化合物的量。

如本文所用的術(shù)語“受試者”是指動物。典型地所述動物是哺乳動物。受試者也是指例如靈長類動物(例如人，男性或女性)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥等。在某些實(shí)施方案中，所述受試者是靈長類動物。在其他實(shí)施方案中，所述受試者是人。

如本文所用的術(shù)語“抑制”是指特定的病況、癥狀或病癥或疾病的減輕或遏抑，或者生物學(xué)活性或過程的基線活性的顯著降低。

如本文所用的術(shù)語“治療”任何疾病或病癥在一個實(shí)施方案中指改善疾病或病癥(即減緩或阻止或減輕疾病或其至少一種臨床癥狀的發(fā)展)。在另一個實(shí)施方案中，“治療”指緩和或改善至少一種身體參數(shù)，包括可能不為患者所察覺的身體參數(shù)。在又一個實(shí)施方案中，“治療”指從身體上(例如穩(wěn)定可察覺的癥狀)或生理學(xué)上(例如穩(wěn)定身體的參數(shù))或上述兩方面調(diào)節(jié)疾病或病癥。在又一個實(shí)施方案中，“治療”指預(yù)防或延遲疾病或病癥的發(fā)作、發(fā)展或惡化。

如本文所用，如果受試者在生物學(xué)上、醫(yī)學(xué)上或生活質(zhì)量上受益于此類治療，則受試者是“需要”治療的。

如本文所用，本發(fā)明的語境(尤其在權(quán)利要求的語境)中所用的術(shù)語“一個/種(“a”,“an”)”、“該(the)”和類似術(shù)語被解釋為包括單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非本文另有指明或與上下文明顯矛盾。

本文所述的所有方法可以以任何適宜的順序進(jìn)行，除非本文另有指明或與上下文明顯矛盾。本文提供的任何和所有實(shí)例和示例性語言(例如“如”)的使用僅僅旨在更好地說明本發(fā)明而不限制另外要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍。

本發(fā)明化合物的任何不對稱原子(例如碳等)可以以外消旋或?qū)τ丑w富集例如(R)-、(S)-或(R，S)-構(gòu)型存在。在一些實(shí)施方案中，每個不對稱原子就(R)-或(S)-構(gòu)型具有至少50％對映體過量、至少60％對映體過量、至少70％對映體過量、至少80％對映體過量、至少90％對映體過量、至少95％對映體過量或至少99％對映體過量。具有不飽和雙鍵的原子上的取代基可以(如有可能的話)以順式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。

因此，如本文所用，本發(fā)明化合物可以為可能的異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其混合物之一的形式，例如作為基本上純的幾何(順式或反式)異構(gòu)體、非對映體、旋光異構(gòu)體(對映體)、外消旋物或其混合物。

通過色譜和/或分步結(jié)晶，根據(jù)成分的物理化學(xué)差異，可將任何得到的異構(gòu)體混合物拆分為純或基本上純的幾何或光學(xué)異構(gòu)體、非對映體、外消旋物。

任何所得到的終產(chǎn)物或中間體的外消旋物可通過已知方法例如通過分離與光學(xué)活性酸或堿獲得的其非對映體鹽并且釋放該光學(xué)活性酸性或堿性化合物而拆分成旋光對映體。特別是，堿性部分由此可用于將本發(fā)明化合物拆分成它們的旋光對映體，例如通過對與光學(xué)活性酸如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙?；剖帷⒍?O,O′-對甲苯酰酒石酸、扁桃酸、蘋果酸或樟腦-10-磺酸形成的鹽進(jìn)行分步結(jié)晶來拆分。外消旋產(chǎn)物也可通過手性色譜法例如高壓液相色譜法(HPLC)使用手性吸附劑來拆分。

此外，本發(fā)明化合物包括其鹽還能夠以其水合物的形式得到或者包含用于其結(jié)晶的其他溶劑。本發(fā)明化合物可固有地或經(jīng)設(shè)計(jì)與藥學(xué)上可接受的溶劑(包括水)形成溶劑合物；因此，預(yù)期本發(fā)明包括溶劑化的或未溶劑化的形式。術(shù)語“溶劑合物”指本發(fā)明化合物(包括其藥學(xué)上可接受的鹽)與一種或多種溶劑分子的分子絡(luò)合物。所述溶劑分子是藥學(xué)領(lǐng)域常用的那些，已知其對于接受者是無害的，例如水、乙醇等。術(shù)語“水合物”指溶劑分子是水的所述絡(luò)合物。

本發(fā)明化合物包括其鹽、共晶體、水合物和溶劑合物可以固有地或經(jīng)設(shè)計(jì)形成多晶型物。

一般流程

通常，式(I)化合物可以根據(jù)下文提供的流程制備。

本發(fā)明的化合物可以通過以下流程或?qū)嵤├忻枋龅穆肪€制備。

所有縮寫如下文實(shí)施例部分所定義。

流程1

其中X和Y獨(dú)立地為H或–(C₁-C₆)烷基。

步驟1：鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)。

典型條件：鈀(0)催化劑；合適的硼錫或鋅化合物如硼酸、硼酸酯或錫烷；有機(jī)或無機(jī)堿；在水中；在合適的溶劑中，在80-110℃。

優(yōu)選條件：雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(II)、乙烯基三氟硼酸鹽、三乙胺，在乙醇中，在90℃

步驟2：二羥基化

典型條件：四氧化鋨；合適的助氧化劑如N-甲基嗎啉-N-氧化物；在合適的溶劑中

優(yōu)選條件：四氧化鋨(Admixα或Admixβ)可用于與合適的添加劑例如甲磺酰胺來接近手性二醇。優(yōu)選的溶劑系統(tǒng)是叔丁醇/水。

步驟3：氧化裂解

典型條件：高碘酸鈉，在THF/水溶劑系統(tǒng)中

流程2

當(dāng)R²是甲基時，式(I)化合物可以根據(jù)流程2制備。

其中X²和Y²被如此定義：它們與它們所連接的碳原子一起形成R³取代基。

步驟1：形成硼酸乙烯酯

典型條件：a)在強(qiáng)堿例如LDA或LHMDS存在下烯醇化，然后用合適的鹵代烷基磺酸酯或磺酰胺猝滅，得到穩(wěn)定的烯醇形式。b)使用合適的鈀(0)催化劑和雙頻哪醇合二硼(pinacolatodiboron)進(jìn)行烯醇化物的鈀(0)催化的硼基化

優(yōu)選條件：a)LDA在THF中，在-78℃，然后用1,1,1-三氟-N-(吡啶-2-基)-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺猝滅。b)1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物和雙頻哪醇合二硼、乙酸鉀，在二烷中，在80-100℃下進(jìn)行4-16小時。

步驟2：鈀催化的交叉偶聯(lián)

典型條件：如流程1步驟1所述

優(yōu)選條件：1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物、碳酸鉀(2M水溶液)在MeCN中，在80℃，1.5小時

步驟3a皂化

典型條件：合適的堿水溶液，任選合適的共溶劑如THF，

優(yōu)選條件：2M氫氧化鈉(水溶液)與THF在室溫下，30分鐘

步驟3b酰胺偶聯(lián)

典型條件：在合適的非質(zhì)子溶劑中，在合適的堿例如三乙胺、DIPEA等的存在下，合適的偶聯(lián)試劑例如HATU、T3P、EDCI等。

優(yōu)選條件：HATU和DIPEA，在DMF中，在室溫，約2h

步驟4氫化

其中R³含有C＝C雙鍵的式(I)化合物可以通過氫化反應(yīng)轉(zhuǎn)化為其中R³是完全飽和的式(I)化合物。

典型條件：不溶性鈀催化劑、氫氣、在合適的溶劑如醇中

優(yōu)選條件：10％鈀/碳和氫氣，在乙醇中

流程3

當(dāng)X³是Br或I時，步驟3的產(chǎn)物也是式(I)化合物。

步驟1：Prins反應(yīng)

典型條件：在氯化溶劑中的酸催化劑和合適的脫水劑。

優(yōu)選條件：(i)三氟乙酸和分子篩，在DCM中；或(ii)InBr₃和三甲基溴硅烷，在DCM中；或(iii)InOTf₃和三氟甲磺酸三甲基硅基酯，在DCM中。

步驟2a：如流程2步驟3a中所述的皂化反應(yīng)

步驟2b：Mitsunobu反轉(zhuǎn)

典型條件：三芳基膦、偶氮二甲酸二烷基酯和苯甲酸，在合適的溶劑如THF中，在室溫

優(yōu)選條件：三苯基膦、偶氮二甲酸二異丙酯和2,4-二硝基苯甲酸，在THF中，在室溫

步驟2c：甲基化

典型條件：合適的強(qiáng)堿和烷基化劑，在合適的溶劑中

優(yōu)選條件：氫化鈉和甲基碘，在DMF中

步驟2d、步驟3a、步驟4a：如流程2步驟3a中所述的皂化反應(yīng)

步驟2e、3b和4b：如流程2步驟3b中所述的酰胺偶聯(lián)

步驟5：如流程2步驟4中所述的氫化

流程4

步驟1：如流程3步驟1中所述的Prins反應(yīng)

步驟2a：如流程2步驟3a中所述的皂化反應(yīng)

步驟2b：如流程2步驟3b中所述的酰胺偶聯(lián)

步驟3：如流程2步驟4中所述的氫化

流程5

步驟1：縮醛形成

典型條件：強(qiáng)酸催化劑，在合適的溶劑中，在脫水條件下

優(yōu)選條件：pTSOH和甲苯在Dean Stark條件下，在110℃下，2-16小時。

步驟2a：如流程2步驟3a中所述的皂化反應(yīng)

步驟2b：如流程2步驟3b中所述的酰胺偶聯(lián)

流程6

PG是合適的保護(hù)基，例如叔丁基二甲基甲硅烷基

X⁶和Y⁶各自獨(dú)立地為H或–(C₁-C₆)烷基。

步驟1：保護(hù)

典型條件：合適的保護(hù)基團(tuán)，例如三烷基氯硅烷，在合適的堿的存在下，在合適的溶劑中。

優(yōu)選條件：叔丁基二甲基氯硅烷，在三乙胺和DMAP存在下，在DMF中。

步驟2：烷基化反應(yīng)

典型條件：烯丙基溴，在合適的堿的存在下，在合適的溶劑中

優(yōu)選條件：3-溴-2-甲基丙-1-烯和氫化鈉，在THF中。

步驟3a：如流程2步驟3a中所述的皂化反應(yīng)

步驟3b：如流程2步驟3b中所述的酰胺偶聯(lián)

步驟4：脫保護(hù)

典型條件：氟化物源，在合適的溶劑中

優(yōu)選條件：TBAF，在THF中

步驟5：環(huán)化反應(yīng)

典型條件：三氟乙酸汞(II)和氧化汞(II)，在THF中，在室溫下，然后在-78℃下加入三乙基硼烷和硼氫化鈉。

本發(fā)明還包括本方法的任何變體，其中在其任何階段可獲得的中間體產(chǎn)物用作起始原料并且進(jìn)行其余步驟，或其中起始原料在反應(yīng)條件下原位形成或其中以它們的鹽或光學(xué)純物質(zhì)的形式使用反應(yīng)組分。

根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員普遍已知的方法，本發(fā)明化合物和中間體還可互相轉(zhuǎn)化。

另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。在另一實(shí)施方案中，所述組合物包含至少兩種藥學(xué)上可接受的載體例如文中所述的那些。對本發(fā)明來說，除非另外指出，通常將溶劑合物和水合物用于組合物。優(yōu)選地，藥學(xué)上可接受的載體是無菌的。藥物組合物可以被配制以用于特定的施用途徑，例如口服施用、胃腸道外施用和直腸施用等。此外，本發(fā)明的藥物組合物還可以被制備為固體形式(包括但不限于膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、粉劑或栓劑)，或者液體形式(包括但不限于溶液劑、混懸劑或乳劑)。藥物組合物可以經(jīng)過常規(guī)的藥物操作如滅菌，和/或可以含有常規(guī)的惰性稀釋劑、潤滑劑或緩沖劑以及輔助劑如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑和緩沖劑等。

典型地，藥物組合物是包含活性成分，以及一種或多種下述成分的片劑和明膠膠囊：

a)稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；

b)潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂鹽或鈣鹽和/或聚乙二醇；對于片劑還包含

c)粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，還包含

d)崩解劑，例如淀粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽或者泡騰混合物；和

e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑。

可以按照本領(lǐng)域已知的方法對片劑進(jìn)行薄膜包衣或腸溶包衣。

適合的口服施用的組合物包括片劑、錠劑、水性或油性混懸劑、可分散的粉劑或顆粒劑、乳劑、硬或軟膠囊劑或者糖漿劑或酏劑形式的有效量的本發(fā)明化合物。按照本領(lǐng)域已知的制備藥物組合物的任意方法來制備用于口服使用的組合物，并且這類組合物可以含有一種或多種選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑的物質(zhì)，以提供藥學(xué)上美觀和可口的制劑。片劑可含有與適合制備片劑的無毒、藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的活性成分。這些賦形劑是例如：惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；制粒劑和崩解劑，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合劑，例如淀粉、明膠或阿拉伯膠；以及潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。片劑是未被包衣的或者通過已知技術(shù)對其進(jìn)行包衣，以延緩在胃腸道中的崩解和吸收并由此提供歷經(jīng)較長時間的持久作用。例如，可以采用時間延遲材料，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服使用的制劑可以被制備成硬明膠膠囊劑，其中活性成分與惰性固體稀釋劑如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或者被制備成軟明膠膠囊劑，其中活性成分與水或油介質(zhì)如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。

某些可注射的組合物是水性等張溶液或混懸液，并且栓劑可由脂肪乳劑或混懸劑有利地制備。所述的組合物可以被滅菌和/或含有輔劑如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、溶解促進(jìn)劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，它們還可以含有其它在治療上有價值的物質(zhì)。所述組合物可分別按照常規(guī)的混合、制?；虬路椒ㄖ苽?，并且含有約0.1-75％或包含約1-50％的活性成分。

適合透皮應(yīng)用的組合物包含有效量的本發(fā)明化合物和適合的載體。適用于透皮遞送的載體包括可吸收的藥理學(xué)可接受的溶劑，以幫助穿過宿主的皮膚。例如，透皮裝置是繃帶形式的，該繃帶包含背襯部分、含有化合物和任選的載體的貯庫、任選的速率控制屏障(以便歷經(jīng)較長時間以受控和預(yù)定的速率遞送化合物至宿主皮膚)和固定該裝置于皮膚的器具。

適合的局部應(yīng)用、例如應(yīng)用于皮膚和眼的組合物包括水性溶液劑、混懸劑、軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑或可噴霧的制劑，例如用于通過氣霧劑等遞送的那些制劑。這類局部遞送系統(tǒng)將特別適于皮膚應(yīng)用，例如用于治療皮膚癌、例如在防曬霜、洗劑、噴霧劑中的預(yù)防性應(yīng)用等。因此，它們特別適用于本領(lǐng)域眾所周知的局部制劑，包括化妝品。這類制劑可以含有增溶劑、穩(wěn)定劑、張力增強(qiáng)劑、緩沖劑和防腐劑。

如本文所用，局部應(yīng)用也可涉及吸入或鼻內(nèi)應(yīng)用。它們可方便地以干粉形式(單獨(dú)地或作為混合物、例如與乳糖的干摻合物，或?yàn)榛旌系某煞诸w粒(例如與磷脂的))由干粉吸入器遞送，或?yàn)闅忪F劑噴霧呈遞形式由加壓容器、泵、噴霧器、霧化器或噴射器遞送，使用和不使用適宜的拋射劑。

本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明化合物作為活性成分的無水藥物組合物和劑型，因?yàn)樗梢源龠M(jìn)某些化合物的降解。

本發(fā)明的無水藥物組合物和劑型可以使用無水或低水分含量的成分和低水分或低濕度條件制備。無水藥物組合物可以制備和儲存，以保持其無水性質(zhì)。因此，使用已知防止暴露于水的材料包裝無水組合物，使得它們可包括在合適的制劑套盒中。合適的包裝的實(shí)例包括但不限于密封箔、塑料、單位劑量容器(例如小瓶)、泡罩包裝和條狀包裝。

本發(fā)明還提供了藥物組合物和劑型，其包含一種或多種降低作為活性成分的本發(fā)明化合物分解速率的物質(zhì)。這些物質(zhì)在本文中稱為“穩(wěn)定劑”，包括但不限于抗氧化劑如抗壞血酸、pH緩沖劑或鹽緩沖劑等。

游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式I化合物顯示有價值的藥理性質(zhì)例如Smurf-1調(diào)控性質(zhì)，如同下面部分提供的體外和體內(nèi)測試所顯示的，并由此表明用于治療或者作為研究化學(xué)品例如工具化合物。

本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可用于治療各種適應(yīng)癥，包括：

肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)

纖維化

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

骨折愈合

青光眼

遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)

蛋白尿

傷口愈合

COPD

哮喘

肺動脈高壓(PAH)

肺動脈高壓具有多因素病理生理學(xué)。血管收縮、肺血管壁的重塑和血栓形成促使PAH中肺血管阻力增加(Humbert等人,J.Am.Coll.Cardiol.,2004.)。本文公開的本發(fā)明的化合物可用于治療PAH及其癥狀。肺動脈高壓應(yīng)理解為包括以下形式的肺高血壓：特發(fā)性PAH(IPAH)；可遺傳的PAH(HPAH)；藥物或毒素誘導(dǎo)的PAH、與其他病患相關(guān)的PAH(APAH)例如與結(jié)締組織疾病相關(guān)的PAH、與HIV感染相關(guān)的PAH、與門靜脈高壓相關(guān)的PAH、與先天性心臟病相關(guān)的PAH、與血吸蟲病相關(guān)的PAH、與慢性溶血性貧血相關(guān)的PAH或新生兒的持續(xù)性肺高血壓(等人,ERJ,2009；Simonneau等人,JACC,2009)。

特發(fā)性PAH是指未確定原因的PAH?？蛇z傳的PAH是指懷疑或記錄遺傳性傳播的PAH，包括在BMP受體、BMPR2潛伏突變的那些或具有ALK1或內(nèi)皮因子突變(具有或不具有遺傳性出血性細(xì)血管擴(kuò)張)的那些。

與藥物或毒素相關(guān)的PAH應(yīng)理解為包括與攝入下列物質(zhì)相關(guān)的PAH:阿米雷司、芬氟拉明化合物(例如芬氟拉明或右芬氟拉明)、某些毒性油(例如油菜籽油)、吡咯里西定(pyrrolizidine)生物堿(例如灌木茶(bush tea))、野百合堿、苯丙胺類、L-色氨酸、甲基苯丙胺類、可卡因、苯丙醇胺、圣約翰草(St John’s Wort)、化學(xué)治療劑或SSRI’s。

與結(jié)締組織疾病相關(guān)的PAH應(yīng)理解為包括與系統(tǒng)性硬化、肺纖維化、多發(fā)性肌炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征(Sjogren syndrome)相關(guān)的PAH或與系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)的PAH。

與先天性心臟病相關(guān)的PAH應(yīng)理解為包括具有全身性肺分流的患者、與艾森曼格(Eisenmenger)綜合征、小室間隔或心房間隔缺損相關(guān)的PAH或與校正性心臟手術(shù)相關(guān)的PAH。

與慢性溶血性貧血相關(guān)的PAH應(yīng)理解為包括患有慢性遺傳性和獲得性貧血的患者，包括患有鐮狀細(xì)胞病、地中海貧血、遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、口形紅細(xì)胞增多和微血管病性溶血性貧血的患者。

PAH的癥狀包括呼吸困難、心絞痛、暈厥和水腫(McLaughlin等人.,Circulation,2006,114:1417-1431)。本文公開的本發(fā)明的化合物可用于治療PAH的癥狀。

肺高血壓(PH)

肺高血壓(PH)應(yīng)理解為與根據(jù)Dana Point臨床分類(Simonneau,G等人.JACCC,2009)分組的以下病癥相關(guān)：

第1'組-PH應(yīng)理解為與患有肺靜脈閉塞性疾病(PVOD)和肺毛細(xì)血管血管瘤病(PCH)的患者相關(guān)。

第2組-與左心臟病相關(guān)的PH包括具有左側(cè)心室或瓣膜疾病的那些患者。

第3組-由于肺部疾病和/或缺氧引起的PH。導(dǎo)致PH的肺疾病應(yīng)理解為包括肺纖維化、肺氣腫、肺纖維化和肺氣腫聯(lián)合、支氣管擴(kuò)張、囊性纖維化和慢性阻塞性肺病(COPD)的患者。

第4組-與慢性血栓栓塞(CTEPH)相關(guān)的PH。

第5組-與不清楚或多因素病因相關(guān)的PH。這類PH患者應(yīng)理解為包括以下組之一的患者：1)慢性骨髓增殖性疾病，包括真性紅細(xì)胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥或慢性髓性白血?。?)系統(tǒng)性疾病，包括結(jié)節(jié)病、導(dǎo)致肺毛細(xì)血管床破壞的病癥例如纖維化、大肺動脈的外源性壓迫、肺部朗格漢氏(Langerhan’s)細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥的患者、淋巴管平滑肌瘤病、1型神經(jīng)纖維瘤病和抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體相關(guān)的血管炎；3)代謝性疾病，包括Ia型糖原貯積病、葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、戈謝(Gaucher)病和甲狀腺疾病(甲狀腺功能減退和甲狀腺功能亢進(jìn))；4)包括具有擴(kuò)展到肺動脈內(nèi)腔中的腫瘤、通過轉(zhuǎn)移性腫瘤栓塞的肺微血管閉塞、縱隔纖維化的患者或具有接受長期血液透析的終末期腎病的患者。

纖維化

已經(jīng)顯示TGFβ/BMP信號傳導(dǎo)途徑的失調(diào)在包括腎、心臟、肺、皮膚、胰腺和肝臟的各種器官的纖維化中以及在全身性硬化癥和相關(guān)病變中具有致病作用(由Leask和Abraham,FASEB,2004綜述)。已經(jīng)顯示BMP7抵消TGFβ1-誘導(dǎo)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)(Zeisberg,M等人.Nat.Med,2003)和膠原誘導(dǎo)(Izumi,N等人.AJP.Lung,Cell,Mol.,Physiol.2005)，兩者是纖維化發(fā)展的關(guān)鍵機(jī)制。在腎臟的進(jìn)行性腎小管間質(zhì)性纖維化的單側(cè)輸尿管阻塞(UUO)小鼠模型中證明了Smurf-1在纖維化病理中的作用的直接證據(jù)，其中在與降低水平的保護(hù)性Smurf-1底物Smad7相關(guān)的患病腎臟中存在增加水平的Smurf-1(Fukasawa，H等人，PNAS，2004)。最近，在肺部上皮細(xì)胞中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)中提出了Smurf-1在肺纖維化中的作用，其確定了Smurf-1底物Smad7在限制EMT中的關(guān)鍵作用(Shukla,MA,等人.Am.J.Resp.Cell.Mol.Biol.2009)。本文公開的本發(fā)明的化合物可用于治療纖維化及其癥狀。纖維化應(yīng)理解為包括以下：具有肺纖維化、特發(fā)性肺纖維化、囊性纖維化、肝硬化、心內(nèi)膜心肌纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化、進(jìn)行性大塊纖維化(progressive massive fibrosis)、腎源性系統(tǒng)性纖維化、克羅恩病、瘢痕疙瘩、老年心肌梗塞、硬皮病(系統(tǒng)性硬化癥)、關(guān)節(jié)纖維化或粘連性囊炎的患者。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

促炎細(xì)胞因子例如腫瘤壞死因子α(TNFα)在慢性炎性病癥例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的發(fā)作和維持中起關(guān)鍵作用。骨密度的降低通常與RA相關(guān)，并且已經(jīng)顯示Smurf-1在介導(dǎo)RA誘導(dǎo)的骨丟失中起關(guān)鍵作用。顯示TNFα引發(fā)Smurf-1底物Smad1和Runx2的蛋白水解降解，這兩者對骨形成成骨細(xì)胞活性是必需的。在smurf-1KO小鼠中證明了支持這種聯(lián)系的直接證據(jù)，其中TNFα不能影響來自Smurf-1KO小鼠(而不是相應(yīng)野生型小鼠)的骨的破骨細(xì)胞活性(Guo,R等人.JBC,2008)。本文公開的本發(fā)明化合物可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及其癥狀。RA應(yīng)理解為包括具有滑膜細(xì)胞腫脹、滑膜關(guān)節(jié)液過多和關(guān)節(jié)內(nèi)纖維組織形成繼發(fā)的滑膜慢性炎癥的患者。此外，RA還應(yīng)包括具有由于壞死性肉芽腫、血管炎、壞疽性膿皮病、Sweet’s綜合征、結(jié)節(jié)性紅斑、小葉性脂膜炎、數(shù)字皮膚萎縮、掌紅斑或皮膚擴(kuò)散性變薄引起的RA的患者。RA還延伸到其他器官，并且本文將涵蓋患有肺纖維化、腎淀粉樣變性、作為RA結(jié)果的動脈粥樣硬化、心包炎、心內(nèi)膜炎、左心室衰竭、瓣膜炎和纖維化的患者。RA還將包括具有鞏膜外層炎和干燥性角結(jié)膜炎的眼睛病癥、溫自身免疫性溶血性貧血(warm autoimmune hemolytic anemia)的血液病、嗜中性白細(xì)胞減少癥和血小板增多癥(thrmobocytosis)、周圍神經(jīng)病的神經(jīng)病癥、多發(fā)性單神經(jīng)炎和腕管綜合征、骨質(zhì)疏松癥和淋巴瘤的患者。

骨折愈合

BMP途徑在此發(fā)揮作用，Smurf-1抑制劑增加BMP信號。本文公開的本發(fā)明的化合物可用于治療骨折愈合。骨折愈合應(yīng)當(dāng)被理解為包括骨折修復(fù)技術(shù)，其中包含有成骨細(xì)胞和支持結(jié)締組織可以遷移進(jìn)入其中的孔的骨內(nèi)膜移植物被手術(shù)植入骨折部位。在插入上述植入物之后施用Smurf-1抑制劑可以有助于植入物的整合，并通過增強(qiáng)分化成成骨細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖來加速恢復(fù)(Zhao,M等人.JBC,2004)。

青光眼

升高的眼內(nèi)壓(IOP)是原發(fā)性開角型青光眼(POAG)的主要危險因素之一。IOP在前房中通過在睫狀體中產(chǎn)生并通過小梁網(wǎng)區(qū)域流出的房水維持。在青光眼患者中已觀察到與小梁網(wǎng)區(qū)域中細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)沉積的積累相關(guān)的增加房水流出阻力。這種在POAG患者中的ECM病理學(xué)類似于在許多非眼系統(tǒng)中由TGFb蛋白誘導(dǎo)的纖維化。TGFb2誘導(dǎo)的IOP增加在臨床前體內(nèi)和離體模型中得到證實(shí)。在幾個小規(guī)模的臨床研究中，也已經(jīng)報道，在房水中的TGFb2蛋白水平在POAG患者中升高。調(diào)節(jié)青光眼患者中的TGFb活性可潛在地降低IOP并導(dǎo)致新的青光眼療法(Wordinger RJ JOURNAL OF OCULAR PHARMACOLOGY AND THERAPEUTICS，Volume 30,Number 2,2014)。考慮到Smurf1在通過其底物BMP9和SMAD7調(diào)節(jié)TGFb信號傳導(dǎo)中的作用，本文所述的本發(fā)明化合物(或其藥學(xué)上可接受的鹽)可用于治療青光眼。

遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)

遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)，也稱為Osler-Weber-Rendu綜合征，是影響1:5000至1:40,000的血管遺傳性疾病?；加蠬HT的人具有形成在動脈和靜脈之間缺少正常毛細(xì)血管的血管的趨勢，使得高壓下的動脈血液直接流入靜脈，其可能破裂和流血。HHT的癥狀可以表現(xiàn)為輕度至重度，其中90-95％的患者成年時出現(xiàn)流鼻血，90-95％的患者在中年時在臉部或手上發(fā)展為毛細(xì)管擴(kuò)張，以及40％的患者出現(xiàn)肺動靜脈畸形(AVM)，其構(gòu)成重大風(fēng)險。AVM還可以發(fā)生在腦、肝臟和腸中，具有不同的健康影響的嚴(yán)重性。HHT可以治療，最常見的是采用凝血療法、栓塞術(shù)或受影響的組織的手術(shù)切除治療。HHT突變導(dǎo)致BMP信號傳導(dǎo)中的單倍劑量不足(Ricard等人.Blood,2010)，導(dǎo)致血管成熟缺陷和脈管系統(tǒng)的過度分支，其部分歸因于BMP9信號傳導(dǎo)受損(Choi,等人.PlosOne,2013)。Smurf1下調(diào)BMP信號傳導(dǎo)(Murakami Exp.Biol.Res.2010和Cao,等人.Sci.Rep.2014)，并且已經(jīng)報道在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)(Crose,等人.JBC,2009和Human Protein Atlas and GeneCards)，因此，Smurf1抑制劑可用于恢復(fù)BMP信號傳導(dǎo)并校正血管生成異常。因此，本文所述的本發(fā)明的化合物(或其藥學(xué)上可接受的鹽)可用于治療HHT。

蛋白尿

尿中異常量的蛋白質(zhì)是慢性腎臟疾病的最早的征兆之一，其可由高血壓、糖尿病或與腎臟炎癥相關(guān)的疾病引起。如果不治療，慢性腎臟疾病可能進(jìn)展為終末期腎臟疾病和腎衰竭。Smurf1涉及與腎功能和蛋白尿相關(guān)的多種機(jī)制。Smurf1底物Ras同源基因家族成員A(RhoA)在調(diào)節(jié)腎小球細(xì)胞的遷移中起關(guān)鍵作用。Synaptopodin通過阻斷Smurf1結(jié)合并泛素化RhoA的能力而使得能夠在腎足細(xì)胞內(nèi)應(yīng)激纖維形成，從而促進(jìn)足細(xì)胞運(yùn)動性和調(diào)節(jié)腎臟足細(xì)胞過濾屏障的篩選性質(zhì)(Asanuma,等人.Nat.Cell Biol.2006)。此外，轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)β的細(xì)胞內(nèi)拮抗劑Smad7在腎臟中起著關(guān)鍵的保護(hù)作用。已經(jīng)顯示Smurf1活性泛素化和降解導(dǎo)致腎小管間質(zhì)性纖維化和腎功能障礙的Smad7(Fukasawa,等人.PNAS 2004)。這些報告一起表明Smurf1抑制劑除阻斷與腎臟的促纖維化信號的傳播外，可能允許足細(xì)胞遷移和維持足細(xì)胞過濾屏障，最終對于蛋白尿提供治療益處。因此，本發(fā)明的化合物(或其藥學(xué)上可接受的鹽)可用于治療蛋白尿。

傷口愈合

慢性非愈合性傷口在60歲以上的人中最常見，導(dǎo)致顯著量的身體疼痛，并且大致分為三組：靜脈性潰瘍、糖尿病性和壓力性潰瘍。轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)β和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)信號通路的活性的精確時間在正常傷口愈合中是關(guān)鍵的，調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞遷移和細(xì)胞外基質(zhì)沉積、炎癥細(xì)胞流入、血管發(fā)生和再次上皮化的關(guān)鍵促愈合過程(Pakyari,M等人.Adv.Wound Care 2013)。TGFβ的延長的活化可導(dǎo)致延遲的傷口愈合，并且用抗TGFβ抗體建立的非愈合性傷口的治療性干預(yù)導(dǎo)致改善的愈合和減少的瘢痕肥大(Lu等人.J.Am.Coll.Surg.2005)。Smurf1調(diào)節(jié)TGFβ和BMP信號傳導(dǎo)的程度(Murakami Exp.Biol.Res.2010和Cao,等人.Sci.Rep.2014,Wang等人.J.Cell.Mol.Med.2012)，因此，預(yù)期Smurf1抑制劑將標(biāo)準(zhǔn)化過量的TGFβ信號，使得能夠治愈慢性傷口。因此，本發(fā)明的化合物(或其藥學(xué)上可接受的鹽)可用于治療慢性非愈合性傷口和/或一般傷口愈合

COPD和哮喘

氣道重塑在患有慢性阻塞性肺病(COPD)或哮喘的患者中是明顯的。哮喘中氣道重塑的主要特征是纖維化、基底膜增厚、杯狀細(xì)胞數(shù)量增加和平滑肌細(xì)胞質(zhì)量增加、收縮反應(yīng)增強(qiáng)，這被認(rèn)為是由負(fù)責(zé)氣道高反應(yīng)性和可逆性氣道阻塞的慢性炎癥誘導(dǎo)的(Carroll等人.Am.Rev Resp.Dis.1993,Metcalfe,等人.Physiol.Rev.1997和Roche,等人.Lancet 1989)。在COPD中，肺重塑的特征在于在具有鱗狀化生、杯狀細(xì)胞增生和粘液分泌過多的大氣道中的上皮的解體，以及在肺氣腫發(fā)展中具有平滑肌膨脹、纖維化和肺泡破壞的小氣道重塑，最終導(dǎo)致氣流限制(De,Decramer,等人.Lancet,2012,Pain等人.Eur.Respir.Rev.2014和Chung,Proc.Am.Thorac.Soc.2005)。在這兩種疾病中，有下調(diào)的BMP信號傳導(dǎo)(Kariyawasam,等人.Am.J Resp.Crit.Care Med.2008)和升高的TGFβ(Mak.等人.Respir.Med.2009和Chakir等人.J.All.Clin.Immunol.2003)的證據(jù)，其與促重塑機(jī)制如成纖維細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Araya,等人.J.Clin.Invest.2007)、細(xì)胞外基質(zhì)沉積(Baarsma,等人.Am.J.Physiol.Lung Cell Mol.PHysiol.2011)和炎癥(Chakir等人.J.All.Clin.Immunol.2003)相關(guān)。Smurf1抑制劑可以使關(guān)鍵的促重塑細(xì)胞如平滑肌和成纖維細(xì)胞中的TGFβ信號傳導(dǎo)正?；⒆钄嘀厮艿倪M(jìn)程，導(dǎo)致對COPD或哮喘患者的治療益處。因此，本發(fā)明的化合物(或其藥學(xué)上可接受的鹽)可用于治療COPD和/或哮喘

因此，作為另一個實(shí)施方案，本發(fā)明提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在治療中的用途。在另一個實(shí)施方案中，所述治療選自可通過抑制Smurf-1治療的疾病。在另一個實(shí)施方案中，所述疾病選自上述列表，適當(dāng)?shù)剡x自肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨折愈合；更適當(dāng)?shù)貫榉蝿用}高壓(PAH)。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在治療選自青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘的疾病中的用途。

因此，作為另一個實(shí)施方案，本發(fā)明提供了用于治療的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一個實(shí)施方案中，所述治療選自可以通過抑制Smurf-1治療的疾病。在另一個實(shí)施方案中，所述疾病選自上述列表，適當(dāng)?shù)剡x自肺高血壓包括

肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨折愈合；

更適當(dāng)?shù)貫榉蝿用}高壓(PAH)。在另一實(shí)施方案中，所述疾病選自青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘。

在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療通過抑制Smurf-1治療的疾病的方法，其包括施用治療可接受量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一個實(shí)施方案中，所述疾病選自上述列表，適當(dāng)?shù)剡x自

肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨折愈合；

更適當(dāng)?shù)貫榉蝿用}高壓(PAH)。

在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過抑制Smurf-1治療疾病的方法，所述方法包括施用治療可接受量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述疾病選自青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘。

因此，作為另一個實(shí)施方案，本發(fā)明提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物中的用途。在另一個實(shí)施方案中，所述藥物用于治療疾病，其可通過抑制Smurf-1來治療。在另一個實(shí)施方案中，所述疾病選自上述列表，適當(dāng)?shù)剡x自

肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨折愈合；

更適當(dāng)?shù)貫榉蝿用}高壓(PAH)。

在另一個實(shí)施方案中，所述藥物用于治療選自青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘的疾病。

在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其用于治療

肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨折愈合；

更適當(dāng)?shù)胤蝿用}高壓(PAH)。

在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘。

在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其用于治療

肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨折愈合；

更適當(dāng)?shù)胤蝿用}高壓(PAH)。

在本發(fā)明的又一個實(shí)施方案中，提供了N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘。

在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其用于治療

肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨折愈合；

更適當(dāng)?shù)胤蝿用}高壓(PAH)。

在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘。

在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其用于治療

肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨折愈合；

更適當(dāng)?shù)胤蝿用}高壓(PAH)。

在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘。

在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽或共晶體，其用于治療

肺高血壓包括肺動脈高壓(PAH)、纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨折愈合；

更適當(dāng)?shù)胤蝿用}高壓(PAH)。

在本發(fā)明的進(jìn)一個實(shí)施方案中，提供了N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療青光眼、遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張(HHT)、蛋白尿、傷口愈合、COPD和哮喘。

對于約50-70kg的受試者，本發(fā)明的藥物組合物或組合可以是約1至1000mg活性成分的單位劑量，或約1-500mg或約1-250mg或約1-150mg或約0.5-100mg、或約1-50mg活性成分?；衔铩⑺幬锝M合物或其組合的治療有效劑量取決于受試者的種類、體重、年齡和個體狀況、待被治療的病癥或疾病或其嚴(yán)重程度。普通技術(shù)的醫(yī)師、臨床醫(yī)師或獸醫(yī)可以容易地確定預(yù)防、治療或抑制病癥或疾病的進(jìn)展所需的每種活性成分的有效量。

上述的劑量性質(zhì)可有利地采用哺乳動物例如小鼠、大鼠、狗、猴或分離的器官、組織及其制備物在體外和體內(nèi)試驗(yàn)中證實(shí)。本發(fā)明的化合物可以以溶液例如水溶液的形式體外施用，以及以腸內(nèi)、胃腸外、有利地靜脈內(nèi)例如作為混懸液或水溶液在體內(nèi)施用。體外劑量可以在為10^-3-10^-9摩爾濃度。體內(nèi)的治療有效量可以取決于施用途徑，在約0.1-500mg/kg或約1-100mg/kg之間。

根據(jù)本發(fā)明的化合物的活性可以通過以下體外和體內(nèi)方法評價。

藥物測定

本發(fā)明的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，以下也稱為“本發(fā)明的活性劑”可用作藥物。特別是，所述化合物是選擇性Smurf-1抑制劑，并且可以在以下測定中測試。

為了測定化合物的HECT E3連接酶選擇性，使用一組(panel)生物化學(xué)HECT E3連接酶自泛素化(autoubiquitinylation)測定(Smurf-1、Smurf-2、WWP1、WWP2、ITCH、Nedd4、Nedd4L和E6AP)。泛素與蛋白質(zhì)底物的綴合是多步過程。在初始的需要ATP的步驟中，在泛素的羧基末端和泛素激活酶(E1)的內(nèi)部半胱氨酸殘基之間形成硫酯鍵。然后將活化的泛素轉(zhuǎn)移至泛素綴合酶(E2)的特異的半胱氨酸殘基。E2將泛素賦予HECT E3連接酶(E3)，從E3其被轉(zhuǎn)移至底物蛋白。HECT E3連接酶可以自泛素化。在該組中使用的TR-FRET(時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移)測定中檢測該事件。反應(yīng)混合物含有在合適的緩沖液中的E1、E2、標(biāo)記的-E3、生物素綴合的泛素、所述化合物和ATP，并孵育45分鐘以允許E3連接酶的自泛素化。為了通過TR-FRET測量泛素化的E3連接酶的程度，在反應(yīng)完成后加入與抗生蛋白鏈菌素(其隨后與生物素化泛素結(jié)合)綴合的供體熒光團(tuán)銪穴狀化合物(Eu3+穴狀化合物)和與標(biāo)簽-特異性的抗體(HA、His或GST)偶聯(lián)的修飾的別藻藍(lán)蛋白XL665(主要受體熒光團(tuán))，其識別各自的E3連接酶融合蛋白。當(dāng)這兩種熒光團(tuán)通過生物分子相互作用(在該情況下，E3連接酶的泛素化)聚集在一起時，由穴狀化合物在激發(fā)期間捕獲的能量的一部分通過在620nm的熒光發(fā)射釋放，而剩余的能量轉(zhuǎn)移到XL665。該能量然后由XL665作為在665nm的特異性熒光釋放。665nm處的光僅通過具有銪的FRET發(fā)射。由于銪穴狀化合物存在于測定中，所以即使當(dāng)生物分子相互作用不使XL665緊密接近時，也檢測到620nm的光。

Smurf-1在細(xì)胞中的自泛素化導(dǎo)致Smurf-1的蛋白酶體降解。因此，抑制Smurf-1催化結(jié)構(gòu)域消除Smurf-1自泛素化和降解，導(dǎo)致細(xì)胞中抑制的Smurf-1蛋白的積累。

使用DiscoverX PathHunter ProLabel檢測試劑盒，通過測量在四環(huán)素誘導(dǎo)型啟動子控制下穩(wěn)定表達(dá)Prolabel-標(biāo)記的Smurf-1的HEK293細(xì)胞中的Smurf-1蛋白積累來評估化合物在Smurf-1HECT結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞活性。該技術(shù)在細(xì)胞裂解物的酶互補(bǔ)測定中測量Prolabel-標(biāo)記的Smurf-1的量。在該方法中，稱為ProLabel的β-半乳糖苷酶的小的4kDa互補(bǔ)片段作為與人Smurf-1的N-末端融合物表達(dá)。該標(biāo)簽是酶供體(ED)并且能夠在與β-半乳糖苷酶的較大部分(稱為酶受體的EA)互補(bǔ)以形成功能性β-半乳糖苷酶之后檢測靶蛋白水平。將EA外源地加入到細(xì)胞裂解物中。使用化學(xué)發(fā)光底物測量酶活性，并且酶活性與重構(gòu)的酶的量和Smurf-1水平成比例。

在90％DMSO中以180x[最終]制備測試和參考化合物，并在90％DMSO中以1:3稀釋。

對于該生化測定組，將50nl的測試化合物、參考化合物和緩沖液/DMSO對照轉(zhuǎn)移到384孔白色GREINER"SMALL VOLUME"PS板的各個孔中。測定組在室溫下在Biomek FX液體處理工作站上運(yùn)行。向含有在90％DMSO中的50nl化合物或?qū)φ杖芤旱臏y定板中，每孔加入4.5ul E3連接酶溶液，隨后加入4.5ul預(yù)孵育的E1/E2/Ub混合物或預(yù)稀釋的泛素(LOW對照)。每次添加后劇烈搖動平板。在該測定中，化合物濃度在8點(diǎn)劑量-反應(yīng)曲線中為3nM至10uM。

孵育45分鐘后，通過加入4.5ul 2mM NEM，隨后立即加入4.5ul包含XL665-標(biāo)記的抗體和抗生蛋白鏈菌素偶聯(lián)的銪的檢測溶液，使總體積為18ul，停止泛素化反應(yīng)。在黑暗中孵育45分鐘后，將板轉(zhuǎn)移到Pherastar熒光讀數(shù)器中以測量TR-FRET信號。

對于細(xì)胞測定，然后將250nl的測試化合物、參考化合物和緩沖液/DMSO對照轉(zhuǎn)移到無菌的120ul 384孔白色GREINER PS,CELLSTAR,uClear組織培養(yǎng)板的各個孔中。為了在加入細(xì)胞之前將化合物溶液均勻地分布在培養(yǎng)基中，使用MULTIDROP 384分配器將10ul細(xì)胞培養(yǎng)基加入含有化合物的板的每個孔中并劇烈振蕩。在與胰蛋白酶-EDTA短暫溫育后，將細(xì)胞從燒瓶中分離，計(jì)數(shù)并在培養(yǎng)基中稀釋至1.5x10⁶細(xì)胞/ml的濃度。通過加入多西環(huán)素至0.2ug/ml的終濃度誘導(dǎo)Smurf-1的表達(dá)。通過使用MULTIDROP 384分配器將10ul細(xì)胞懸浮液加入到含有化合物的平板的每個孔中。將板在37℃、5％CO₂下溫育過夜。在該測定中，化合物濃度在8點(diǎn)劑量-反應(yīng)曲線中為6.75nM至22.5uM。

與化合物孵育過夜后，使用來自DiscoverX的PathHunter Prolabel檢測試劑盒測定Smurf-1的水平。首先使用多通道步階-移液器手動添加10ul裂解/CL檢測工作溶液，然后加入5ul酶受體EA。將板在板振蕩器上混合，并在室溫下孵育2-3小時，然后在PherStar讀板器中測量化學(xué)發(fā)光信號。

以下實(shí)施例的化合物具有如表A所示的在上述數(shù)據(jù)測量中的Smurf-1IC₅₀值。

表A.

本發(fā)明的化合物可以與一種或多種其它治療劑同時或在其之前或之后施用。本發(fā)明的化合物可以通過相同或不同的施用途徑單獨(dú)施用，或者與其它治療劑在相同的藥物組合物中一起施用。治療劑是當(dāng)例如與本發(fā)明化合物聯(lián)合施用至患者時具有治療活性或增強(qiáng)治療活性的化合物、肽、抗體、抗體片段或核酸。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種其它治療劑的產(chǎn)品，作為用于在治療中同時、分別或順序使用的組合制劑。在一個實(shí)施方案中，治療是治療由Smurf-1介導(dǎo)的疾病或病癥。作為組合制劑提供的產(chǎn)品包括在相同的藥物組合物中一起包含式(I)的化合物和其它治療劑的組合物，或者包含單獨(dú)形式例如藥盒的形式的式(I)的化合物和其它治療劑的組合物。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和另一種治療劑的藥物組合物。任選地，藥物組合物可以包含如上所述的藥學(xué)上可接受的載體。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含兩種或更多種分開的藥物組合物的藥盒，其中至少一種藥物組合物含有式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一個實(shí)施方案中，藥盒包含用于分開地容納所述組合物的裝置，例如容器、分開的瓶或分開的箔包。這種藥盒的一個實(shí)例是泡罩包裝，通常用于包裝片劑、膠囊等。

本發(fā)明的藥盒可以用于施用不同的劑型，例如口服和胃腸外劑型，用于以不同的劑量間隔施用分開的組合物，或用于彼此劑量調(diào)整(titrating)分開的組合物。為了輔助順應(yīng)性，本發(fā)明的藥盒通常包括施用說明。

在本發(fā)明的組合治療中，本發(fā)明的化合物和其它治療劑可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，本發(fā)明的化合物和其它治療劑可以如下一起進(jìn)入組合療法：(i)在將組合產(chǎn)品釋放給醫(yī)生之前(例如在包含本發(fā)明化合物和其它治療劑的藥盒的情況下)；(ii)由醫(yī)生本人(或在醫(yī)生的指導(dǎo)下)在給藥前不久；(iii)在順序施用本發(fā)明的化合物和其它治療劑期間由患者自己。

因此，本發(fā)明提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于治療由Smurf-1介導(dǎo)的疾病或病癥的用途，其中所述藥物被制備用于與另一種治療劑一起施用。本發(fā)明還提供了另一種治療劑用于治療由Smurf-1介導(dǎo)的疾病或病癥的用途，其中所述藥物與式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽一起施用。

本發(fā)明還提供了用于治療由Smurf-1介導(dǎo)的疾病或病癥的方法中的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽被制備用于與另一種治療劑一起施用。本發(fā)明還提供了用于治療由Smurf-1介導(dǎo)的疾病或病癥的方法中的另一種治療劑，其中所述其它治療劑被制備用于與式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽一起施用。本發(fā)明還提供了用于治療由Smurf-1介導(dǎo)的疾病或病癥的方法中的式(I)化合物，其中式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與另一種治療劑一起施用。本發(fā)明還提供了用于治療由Smurf-1介導(dǎo)的疾病或病癥的方法中的另一種治療劑，其中所述其它治療劑與式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽一起施用。

本發(fā)明還提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于治療由Smurf-1介導(dǎo)的疾病或病癥的用途，其中患者先前(例如在24小時內(nèi))已經(jīng)用另一種治療劑治療。本發(fā)明還提供了另一種治療劑用于治療由Smurf-1介導(dǎo)的疾病或病癥的用途，其中患者先前(例如在24小時內(nèi))已經(jīng)用式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽治療。

以下實(shí)施例旨在說明本發(fā)明，而不應(yīng)解釋為對其的限制。溫度以攝氏度給出。如果沒有另外提及，所有蒸發(fā)在減壓下進(jìn)行，通常在約15mm Hg至100mm Hg(＝20-133mbar)之間。最終產(chǎn)物、中間體和起始材料的結(jié)構(gòu)通過標(biāo)準(zhǔn)分析方法例如微量分析和波譜特征例如MS、IR、NMR確認(rèn)。所使用的縮寫是本領(lǐng)域中常規(guī)的那些。

用于合成本發(fā)明化合物的所有原料、結(jié)構(gòu)單元、試劑、酸、堿、脫水劑、溶劑和催化劑可商購或可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的有機(jī)合成方法制備。此外，本發(fā)明的化合物可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的有機(jī)合成方法制備，如以下實(shí)施例所示。

一般條件：

由以下配置的一系列儀器采用電噴霧、化學(xué)和電子碰撞電離方法，在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系統(tǒng)上獲得質(zhì)譜：具有Agilent 6110質(zhì)譜儀的Agilent 1100 HPLC系統(tǒng)，[M+H]+是指化學(xué)物種的質(zhì)子化分子離子。

NMR譜在Bruker AVANCE 400MHz或500MHz NMR波譜儀上使用ICON-NMR，在TopSpin程序控制下進(jìn)行。除非另有說明，波譜在298K下測量，并相對參考溶劑共振。

儀器

MS方法：使用Agilent 1100HPLC系統(tǒng)和Agilent 6110質(zhì)譜儀

LowpH_v002

2minLC_v003

8minLowpHv01:

2minLowpH:

2minLowpHv01:

2minLowpHv03:

2minHighpHv03:

10minLowpHv01:

LCMS(SRPb)

縮寫：

aq 含水的

br 寬

d 雙峰

dd 雙二重峰

DBU 1,8-二氮雜二環(huán)十一-7-烯

DCM 二氯甲烷

DIBAL-H 二異丁基氫化鋁

DIPEA 二乙基異丙胺

DME 二甲氧基乙烷

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亞砜

℃ 攝氏度

EDCI 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺

Et₂O 乙醚

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

Et₃N 三乙胺

HATU (1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]

吡啶3-氧化物六氟磷酸鹽

HCl 鹽酸

hr(s) 小時

H₂SO₄ 硫酸

K₂CO₃ 碳酸鉀

KHMDS 雙(三甲基甲硅烷基)氨基鉀

KOAc 乙酸鉀

LCMS 液相色譜和質(zhì)譜法

LDA 二異丙基氨基鋰

M 摩爾的

MgSO₄ 硫酸鎂

MeCN 乙腈

MeOH 甲醇

MS 質(zhì)譜法

Mult(s) 多重峰

mg 毫克

min 分鐘

ml 毫升

mmol 毫摩爾

m/z 質(zhì)荷比

NaBH₄ 硼氫化鈉

NaH 氫化鈉

NaHCO₃ 碳酸氫鈉

NaOH 氫氧化鈉

Na₂SO₄ 硫酸鈉

n-BuLi 丁基鋰

NH₄Cl 氯化銨

NMP N-甲基吡咯烷酮

NMR 核磁共振

PdCl₂(PPh₃)₂ (雙三苯基膦)二氯化鈀

PdCl₂(dppf) 1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(II)

PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂ 1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(II)二氯甲

烷絡(luò)合物

Pd(Ph₃P)₄ 四(三苯基膦)鈀(0)

ppm 百萬分之

pTsOH p-甲苯磺酸

q 四重峰

rac 外消旋的

Rt 保留時間

s 單峰

t 三重峰

TBAI 四丁基碘化銨

TBAF 四丁基氟化銨

TBME 甲基叔丁基醚

TFA 三氟乙酸

THF 四氫呋喃

TMSCl 三甲基氯硅烷

TMSOTf 三氟甲磺酸三甲基硅基酯

UV 紫外

最終化合物的制備

實(shí)施例1:

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]

步驟1:[三氟甲磺酸4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基酯]

在氮?dú)鈿夥障?，并冷卻至-70℃，將4-異丙基環(huán)己酮(1g,7.13mmol)的干燥THF(3mL)溶液滴加2M LDA(在THF/庚烷/乙基苯)(4.28mL,8.56mmol)進(jìn)行處理。加入完成后，使混合物在-70℃攪拌1.5小時。向混合物中，加入1,1,1-三氟-N-(吡啶-2-基)-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(2.81g,7.84mmol)的干燥THF(2mL)溶液。使反應(yīng)保持在-70℃，攪拌3hrs，并用水小心地猝滅，并放置過夜。將得到的混合物用乙醚萃取并將合并的有機(jī)萃取物用10％NaOH(aq)洗滌，用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到粗物質(zhì)。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅(silica)上，并通過色譜法純化，采用100％異己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.76(1H,t),2.45-2.30(2H,mults),2.22(1H,br d),1.99-1.90(2H,mults),1.61-1.52(1H,mult),1.48-1.36(2H,mults),0.93(6H,dd).

步驟2:[2-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷]

將攪拌的[三氟甲磺酸4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基酯](1.75g,6.43mmol)的二烷(30mL)溶液用雙頻哪醇合二硼(1.714g,6.75mmol)、乙酸鉀(1.892g,19.28mmol)和PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(0.157g,0.193mmol)處理，并將混合物在80℃攪拌6hrs。將得到的混合物用EtOAc稀釋并用水洗滌。將有機(jī)層用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到粗物質(zhì)。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟3:[5-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯]

向2-5mL微波瓶中加入[2-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷](282mg,1.127mmol)、5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(264mg,1.127mmol)、PdCl₂(dppf)(82mg,0.113mmol)、碳酸鉀(467mg,3.38mmol)、MeCN(2mL)和水(0.667mL)。將瓶用氮?dú)馀趴?，密封并?0℃置于微波中1hr。將得到的混合物用EtOAc和水稀釋并分離各層。將有機(jī)物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到棕色油狀物，為粗品。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-10％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.73mins；MS m/z[M+H]+278.5；方法2minLowpHv03

步驟4:[5-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸]

向[5-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯](92mg,0.332mmol)的THF(5mL)和MeOH(3mL)溶液中，加入2M氫氧化鈉(aq)(0.166mL,0.332mmol)并將混合物在室溫攪拌2hrs。將得到的混合物在減壓下濃縮并用水稀釋。將水層用EtOAc洗滌，用2M HCl(aq)酸化并用EtOAc萃取。將有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.70mins；MS m/z[M+H]+250.2；方法2minLowpHv03

步驟5:[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]

在氮?dú)鈿夥障孪騕5-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸](42mg,0.168mmol)的干燥DCM(3mL)溶液中加入DMF(0.026mL,0.337mmol)，隨后加入草酰氯(0.016mL,0.185mmol)并將混合物在室溫攪拌30mins。加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(38.8mg,0.185mmol)，隨后加入三乙胺(0.070mL,0.505mmol)并將混合物攪拌30mins。加入水并將混合物劇烈攪拌，然后通過相分離柱。收集有機(jī)洗脫液并在減壓下濃縮，得到橙色油狀物。將粗物質(zhì)溶解在DMSO(0.9mL)中，并采用質(zhì)量指導(dǎo)的自動化的反相色譜以9.5分鐘的50-98％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度純化。將產(chǎn)物流分在減壓下濃縮。將剩余的水混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液處理并用DCM萃取，使有機(jī)萃取物通過相分離柱。在空氣流下除去溶劑并在減壓下干燥，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝4.98mins；MS m/z[M+H]+441.4；方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.04(1H,br s),6.33(1H,s),4.06(1H,tt),3.26(3H,s),2.62(1H,br d),2.48-2.35(2H,mults),2.31(3H,s),2.22(3H,s),2.05-1.86(8H,mults),1.71(1H,br d),1.60-1.52(1H,mults),1.43-1.17(5H,mults),0.96(3H,d),0.94(3H,d).

采用與實(shí)施例1的方法類似的方法通過用適當(dāng)?shù)耐苌?商業(yè)可獲得的或下文描述的制備)替換4-異丙基環(huán)己酮(步驟1)來制備實(shí)施例1.1至1.2。

實(shí)施例1.1:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(6-乙基-4-甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的非對映體混合物

LC-MS:Rt＝4.90mins；MS m/z[M+H]+441.1；方法8minLowpHv01

實(shí)施例1.2:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(6,6-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

LC-MS:Rt＝4.60mins；MS m/z[M+H]+427.7；方法8minLowpHv01

采用與實(shí)施例1的方法類似的方法通過用適當(dāng)?shù)呐鹚峄蚨跖痣s環(huán)戊烷衍生物(商業(yè)可獲得的或下文描述的制備)替換2-(4-異丙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷(步驟3)來制備實(shí)施例1.3至1.7。

實(shí)施例1.3:

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4-乙基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]

LC-MS:Rt＝4.77mins；MS m/z[M+H]+427.6；方法8minLowpHv01

實(shí)施例1.4:

[5-(4-(叔丁基)環(huán)己-1-烯-1-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]

LC-MS:Rt＝5.16mins；MS m/z[M+H]+455.4；方法8minLowpHv01

實(shí)施例1.5:

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-甲基環(huán)己-1-烯-1-基)異唑-3-甲酰胺]

LC-MS:Rt＝4.47mins；MS m/z[M+H]+414.5；方法8minLowpHv01

實(shí)施例1.6:

5-(環(huán)庚-1-烯-1-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

LC-MS:Rt＝4.42mins；MS m/z[M+H]+413.6；方法8minLowpHv01

實(shí)施例1.7:

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-(三氟甲基)環(huán)己-1-烯-1-基)異唑-3-甲酰胺]

LC-MS:Rt＝1.36mins；MS m/z[M+H]+467.4；方法2minLowpHv03

實(shí)施例2:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺

步驟1:螺[4.5]癸-6-烯-8-酮

向環(huán)戊烷甲醛(Aldrich)(0.82g,8.36mmol)的干燥甲苯(10mL)溶液中，加入甲基乙烯基酮(Alfa Aesar)(0.684mL,8.36mmol)，隨后加入催化量的濃H₂SO₄(0.045mL,0.836mmol)。將混合物在45℃加熱1.5小時，然后采用Dean-Stark分水器回流1小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并再加入甲基乙烯基酮(Alfa Aesar)(0.684mL,8.36mmol)。將反應(yīng)混合物加熱回流1小時，冷卻至室溫并用1M NaHCO₃(30mL)水溶液處理。將水混合物用甲苯萃取并將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-20％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.74(1H,d),5.86(1H,d),2.45(2H,t),1.92(2H,t),1.80-1.71(4H,br mults),1.71-1.61(4H,br mults).

步驟2:螺[4.5]癸-8-酮

將螺[4.5]癸-6-烯-8-酮(442mg,2.94mmol)的乙醇(15mL)溶液用氮?dú)鉀_洗并用10％Pd-C,50％濕的(Alfa Aesar,38303)(313mg,2.94mmol)處理。在氫氣氣氛下將反應(yīng)混合物攪拌16小時并通過過濾，用乙醇淋洗。將濾液在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ2.31–2.25(4H,t),1.72-1.66(4H,t),1.65-1.60(4H,br mults),1.53-1.47(4H,br mults).

步驟3:三氟甲磺酸螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯

在氮?dú)鈿夥障隆?78℃，將1.6M n-BuLi的己烷溶液(1.900mL,3.04mmol)加至攪拌的二異丙胺(0.454mL,3.19mmol)的干燥THF(20mL)溶液中。將溶液升溫至0℃保持20分鐘，然后再冷卻至-78℃。歷經(jīng)5分鐘，加入螺[4.5]癸-8-酮(0.440g,2.89mmol)的干燥THF(5mL)溶液，并將溶液在-78℃攪拌50分鐘，然后加入2-[N,N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]吡啶(Alfa Aesar)(1.141g,3.19mmol)的干燥THF(5mL)溶液。將混合物攪拌并升溫至室溫過夜。將得到的混合物用飽和NaHCO₃(4mL)水溶液猝滅。將水部分用TBME(x2)萃取并將合并的有機(jī)萃取物用10％NaOH水溶液、鹽水洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟4:4,4,5,5-四甲基-2-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷

向攪拌的三氟甲磺酸螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯(635mg,2.234mmoL)的干燥1,4-二烷(15mL)溶液中，加入雙(頻哪醇合)二硼(Alfa Aesar)(567mg,2.234mmol)，隨后加入乙酸鉀(Acros)(438mg,4.47mmol)和PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(Alfa Aesar)(54.7mg,0.067mmoL)。將反應(yīng)混合物用氮?dú)鉀_洗，并加熱至80℃反應(yīng)16小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并通過過濾，用TBME淋洗。將濾液在減壓下濃縮，并將殘留物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之間分配。將有機(jī)相用鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟5:4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸乙酯

向含有4,4,5,5-四甲基-2-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷(168mg,0.641mmol)的MeCN(2mL)溶液的2-5mL微波瓶中，加入5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(150mg,0.641mmol)，隨后加入K₂CO₃(266mg,1.923mmol)、PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(Alfa Aesar)(52.3mg,0.064mmol)和水(1mL)。將瓶用氮?dú)鉀_洗，密封并在微波中(Biotage Smith Initiator)在90℃處理1小時。將反應(yīng)混合物在水(20mL)和EtOAc(20mL)之間分配，并將有機(jī)相用鹽水(20mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到橙色油狀物。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.75mins；MS m/z[M+H]+290.4；方法2minLowpHv03

步驟6:4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸

向攪拌的4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸乙酯(180mg,0.622mmol)的乙醇(10mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(0.311mL,0.622mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌。將得到的混合物用水(30mL)稀釋并通過加入2M HCl(aq)酸化至pH 5-6。將水混合物用EtOAc(2x 20mL)萃取并將合并的有機(jī)萃取物用鹽水(20mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.61mins；MS m/z[M+H]+262.3；方法2minLowpHv03

步驟7:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺

向攪拌的4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸(95mg,0.364mmol)的干燥NMP(3ml)溶液中，加入HATU(152mg,0.400mmol)，隨后加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(84mg,0.400mmol)和三乙胺(0.111mL,0.800mmol)，并將其在室溫攪拌16小時。將反應(yīng)混合物在EtOAc(30mL)和1M NaOH(aq)(30mL)之間分配，并將有機(jī)相用水(30mL)、鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到橙色油狀物。將粗物質(zhì)溶解在DMSO中，并采用UV-指導(dǎo)的自動化反相色譜法以9.5分鐘的50-98％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度純化。將產(chǎn)物流分加至EtOAc(50mL)中，并用飽和NaHCO₃水溶液(50mL)洗滌。將有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.59mins；MS m/z[M+H]+453.7；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.21(1H,br s),6.19(1H,mult),4.00(1H,tt),3.25(3H,s),2.46-2.40(2H,br mults),2.23(3H,s),2.14(3H,s),2.10-2.05(2H,mults),1.99-1.88(2H,mults),1.84-1.74(4H,br mults),1.66-1.53(7H,br mults),1.41-1.35(4H,br mults),1.34-1.23(2H,br mults),1.21-1.10(1H,br mult).

實(shí)施例2.1:

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]

采用與實(shí)施例2的方法類似的方法通過用[1-氧雜螺[4.5]癸-8-酮](Fluorochem)替換螺[4.5]癸-8-酮(步驟3)來制備標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.10mins；MS m/z[M+H]+455.5；方法2minLowpHv01

實(shí)施例2.2:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

采用與實(shí)施例2的方法類似的方法用4,4-二甲基環(huán)己烯-1-基硼酸、頻哪醇酯(Combi Blocks)替換4,4,5,5-四甲基-2-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷(步驟5)來制備標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝5.52mins；MS m/z 427.6[M+H]+；方法10minLowpHv01

實(shí)施例3:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

步驟1:三氟甲磺酸4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基酯

在氮?dú)鈿夥障?、?78℃，向攪拌的4,4-二甲基環(huán)戊-2-烯酮(Atlantic)(0.500g,4.54mmol)的干燥THF(25mL)溶液中，加入1M L-Selectride的THF(4.539mL,4.54mmol)溶液。將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌1小時并用1,1,1-三氟-N-(吡啶-2-基)-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(Alfa Aesar)(1.626g,4.54mmol)的干燥THF(5mL)溶液處理。將混合物攪拌并升溫至室溫過夜。將得到的混合物在己烷(60mL)和水(50mL)之間分配，分離各相并將水相用己烷(50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用10％NaOH水溶液(40mL)、鹽水(40mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到淺黃色油狀物。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用100％異己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.54(1H,mult),2.42-2.39(2H,mult),2.23-2.20(2H,mult),1.17(3H,s),1.17(3H,s).

步驟2:2-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷

向攪拌的三氟甲磺酸4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基酯(367mg,1.503mmol)的干燥1,4-二烷(10mL)溶液中，加入雙(頻哪醇合)二硼(Alfa Aesar)(382mg,1.503mmol)，隨后加入乙酸鉀(Acros)(295mg,3.01mmol)和PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(Alfa Aesar)(36.8mg,0.045mmol)。將反應(yīng)混合物在80℃加熱并攪拌16小時。將得到的混合物冷卻至室溫并通過過濾，用TBME(100mL)洗滌。將有機(jī)濾液用水(50mL)、鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到棕色油狀物。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用100％異己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.34-6.31(1H,mult),2.21-2.18(2H,mult),2.17-2.14(2H,mult),1.20(12H,s)0.99(6H,s).

步驟3:5-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

向含有2-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷(214mg,0.966mmol)的乙腈(2mL)溶液的2-5mL微波瓶中，加入5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(226mg,0.966mmol)，隨后加入K₂CO₃(400mg,2.90mmol)、PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(Alfa Aesar)(79mg,0.097mmol)和水(1mL)。將瓶用氮?dú)鉀_洗，密封并在微波中(Biotage Smith Initiator)在90℃加熱1小時。將得到的混合物通過過濾，用EtOAc(50mL)洗滌。將濾液用水(50mL)、鹽水(50mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到棕色油狀物。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用100％異己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.64mins；MS m/z[M+H]+250.9/251.5；方法2minLowpHv03

步驟4:5-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸

向攪拌的5-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(243mg,0.975mmol)的乙醇(5mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(0.975mL,1.949mmol)，并將溶液在室溫攪拌。一旦完成后，將反應(yīng)混合物用水(30mL)稀釋并通過加入2M HCl(aq)酸化至pH 5-6。將水相用EtOAc萃取(2x 20mL)，并將合并的有機(jī)萃取物用鹽水(20mL)洗滌，用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.46mins；MS m/z[M+H]+222.5；方法2minLowpHv03.

步驟5:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

向攪拌的5-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸(105mg,0.475mmol)的干燥NMP(3mL)溶液中，加入HATU(198mg,0.522mmol)，隨后加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(109mg,0.522mmol)和三乙胺(0.146mL,1.044mmol)。將混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物在EtOAc(20mL)和1M NaOH(aq)(20mL)之間分配，并將有機(jī)相用水(20mL)、鹽水(20mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-60％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到粗物質(zhì)。將粗物質(zhì)溶解在DMSO中，并采用質(zhì)量指導(dǎo)的自動化的反相色譜以9.5分鐘的40-80％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度純化。將產(chǎn)物流分加至EtOAc(50mL)中，并用飽和NaHCO₃水溶液(50mL)洗滌。將有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.40mins；MS m/z[M+H]+413.1/414.6；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.09(1H,br s),6.27(1H,br t),4.06(1H,tt),3.27(3H,s),2.66(2H,mult),2.40(2H,mult),2.34(3H,s),2.22(3H,s),2.06-1.95(2H,br mults),1.92-1.83(4H,br mults),1.75-1.68(1H,br mult),1.44-1.31(2H,br mults),1.30-1.23(1H,br mult),1.19(6H,s).

實(shí)施例4:

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]

步驟1:1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸乙酯

將4-氧代環(huán)己烷甲酸乙酯(11.7g,68.7mmol)、乙二醇(5.75mL,103mmol)和p-TsOH(0.620g,3.26mmol)的甲苯(60mL)混合物回流攪拌4hrs，采用Dean-Stark分水器以收集水。將得到的混合物冷卻至室溫，用飽和NaHCO₃水溶液(30mL)猝滅，并用EtOAc(100mL)稀釋。將有機(jī)層用鹽水(30mL)洗滌，用無水硫酸鈉干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到黃色油狀物。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.14(2H,q),3.96(4H,s),2.38-2.31(1H,br mult),1.99-1.91(2H,br mults),1.87-1.76(4H,br mults),1.61-1.53(2H,br mults),1.26(3H,t).

步驟2:8-(2-(芐基氧基)乙基)-1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸乙酯

在-78℃、氮?dú)鈿夥障?，?8-烯丙基-1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)甲醇(6g,28.0mmol)的干燥THF(100mL)溶液加至預(yù)冷卻的KHMDS(1M在THF中)(36.4mL,36.4mmol)的THF(100mL)溶液中。將得到的混合物在該溫度攪拌2hrs，并加入((2-溴乙氧基)甲基)苯(5.31mL,33.6mmol)的THF(100mL)溶液。將反應(yīng)混合物升溫至室溫并在室溫攪拌過夜。將得到的混合物用飽和氯化銨水溶液猝滅，并加入EtOAc。將有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-40％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到粗物質(zhì)。將粗物質(zhì)再次吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-20％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.36-7.31(2H,mults),7.30-7.26(3H,mults),4.39(2H,s),4.01(2H,q),3.84(4H,s),3.40(2H,t),2.05-1.98(2H,br mults),1.78(2H,t),1.61-1.54(2H,br mults),1.49-1.41(4H,br mults),1.12(3H,t).

步驟3:[1,4,10-三氧雜二螺[4.2.4.2]十四烷-9-酮]

將[8-(2-(芐基氧基)乙基)-1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-甲酸乙酯](1.6g,4.59mmol)的乙醇(5mL)溶液徹底脫氣，再填充氮?dú)?。加入Pd-C(0.147g,1.378mmol)，并將混合物在氫氣氣氛下攪拌。一旦完成后，將反應(yīng)混合物通過柱過濾，用EtOH洗脫。將濾液收集并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.29(2H,t),3.97(4H,mult),2.19(2H,t),2.08-1.99(2H,br mults),1.97-1.89(2H,br mults),1.71-1.56(4H,br mults).

步驟5:[1,4,10-三氧雜二螺[4.2.4.2]十四烷-9-醇]

在氮?dú)鈿夥障?，?,4,10-三氧雜二螺[4.2.4.2]十四烷-9-酮(880mg,4.15mmol)的甲苯(30mL)溶液冷卻至-78℃并用1M DIBAL-H(1M在甲苯中)(4.56mL,4.56mmol)處理。將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌2小時。將得到的混合物用10％乙酸水溶液(18mL)/冰60g)處理，并與氯仿(150mL)攪拌5mins。分離水相并用氯仿(x3)萃取并將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.13(1H,s),4.11(1H,mult),3.97(4H,mult),3.93(1H,mult),2.12(1H,s),1.95-1.77(3H,br mults),1.76-1.60(6H,br mults),1.58-1.49(1H,br mults).

步驟6:[1,4,10-三氧雜二螺[4.2.4.2]十四烷]

在氮?dú)鈿夥障隆?78℃，向攪拌的三乙基硅烷(1.965mL,12.30mmol)的DCM(40mL)溶液中，連續(xù)加入三氟乙酸(0.948mL,12.30mmol)和[1,4,10-三氧雜二螺[4.2.4.2]十四烷-9-醇](0.878g,4.1mmol)的DCM(40mL)溶液，在-78℃。將得到的混合物緩慢升溫至0℃并攪拌2小時。加入飽和NaHCO₃水溶液，并將混合物用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物。

步驟7:[2-氧雜螺[4.5]癸-8-酮]

將攪拌的1,4,10-三氧雜二螺[4.2.4.2]十四烷(813mg,4.1mmol)的丙酮(28mL)溶液在室溫用10％HCl水溶液(12.46mL,41.0mmol)處理。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌1小時。將得到的混合物用鹽水(40mL)稀釋，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用飽和NaHCO₃水溶液(2x30mL)和鹽水(1x 30mL)洗滌，用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.96(2H,t),3.70(2H,s),2.45-2.36(4H,br mults),1.95-1.89(6H,mults).

步驟8:[三氟甲磺酸2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯]

在氮?dú)鈿夥障拢瑢⒍惐?0.407mL,2.85mmol)的THF(25mL)溶液冷卻至-78℃并用n-BuLi(1.0M的己烷溶液)(1.702mL,2.72mmol)處理。歷經(jīng)30mins將反應(yīng)混合物升溫至0℃并冷卻至-78℃，然后加入2-氧雜螺[4.5]癸-8-酮(400mg,2.59mmol)的THF(25mL)溶液。在-78℃1.5小時后，將反應(yīng)混合物用1,1,1-三氟-N-(吡啶-2-基)-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(1208mg,3.37mmol)的THF(10mL)溶液處理并升溫至室溫過夜。加入飽和NaHCO₃水溶液，隨后用EtOAc稀釋。將有機(jī)層用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-25％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.77(1H,t),3.92(2H,t),3.56(2H,mult),2.46-2.29(2H,br mult),2.25-2.22(2H,br mult),1.83-1.76(4H,br mults).

步驟9:[4,4,5,5-四甲基-2-(2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷]

將[三氟甲磺酸2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯](270mg,0.943mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷)(251mg,0.990mmol)的二烷(5mL)溶液用乙酸鉀(185mg,1.886mmol)處理并將混合物徹底脫氣，再填充氮?dú)?。加入PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(23.11mg,0.028mmol)，并將混合物加熱至80℃反應(yīng)16小時。將粗反應(yīng)混合物吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-15％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.54(1H,mult),3.88(2H,t),3.52(2H,mult),2.24-2.18(2H,br mults),2.15-2.12(2H,br mults),1.76-1.68(2H,br mults),1.62-1.57(2H,br mults),1.28(12H,s).

步驟10:[4-甲基-5-(2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸乙酯]

將[4,4,5,5-四甲基-2-(2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷](0.172g,0.651mmol)、5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(0.183g,0.781mmol)和Cs₂CO₃(0.849g,2.60mmol)混合在DME(3mL)和水(1.250mL)中。加入PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(0.016g,0.020mmol)，并將混合物徹底脫氣，再填充氮?dú)?。將混合物在微波中?0℃攪拌1小時。分離雙相反應(yīng)混合物，并將有機(jī)相吸附到二氧化硅上。通過色譜法純化，采用梯度的EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.27(1H,mult),4.42(2H,q),3.91(2H,t),3.56(2H,mult),2.56-2.51(2H,br mults),2.31-2.27(2H,br mults),2.28(3H,s),1.83-1.72(4H,br mults),1.41(3H,t).

步驟11:[4-甲基-5-(2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸]

將[4-甲基-5-(2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸乙酯](170mg,0.584mmol)的MeOH(3.60mL)和THF(6mL)溶液在室溫用2M NaOH(aq)(0.584mL,1.167mmol)處理。將得到的混合物在室溫攪拌并用2M HCl(aq)(0.2mL)和EtOAc處理。將合并的有機(jī)層用MgSO₄干燥并過濾，并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝0.61mins；MS m/z[M+H]+264.4；方法2minHighpHv03

步驟12:[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酰胺]

將[4-甲基-5-(2-氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸](40mg,0.152mmol)的DMF(3mL)溶液用4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(38.2mg,0.182mmol)、DIPEA(0.106mL,0.608mmol)和HATU(75mg,0.198mmol)處理。將得到的混合物在室溫攪拌16小時。將水加至混合物中，并將水混合物用EtOAc萃取(x2)。將合并的有機(jī)萃取物用0.5M氯化鋰(aq)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-5％MeOH的EtOAc溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.19mins；MS m/z[M+H]+455.5；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.31(1H,s),6.23(1H,mult),4.01(1H,tt),3.88(2H,t),3.53(2H,s),3.26(3H,s),2.51-2.44(2H,br mults),2.28-2.25(2H,mults),2.23(3H,s),2.14(3H,s),1.98-1.87(2H,br mults),1.81-1.70(8H,mults),1.65-1.58(1H,br mult),1.38-1.33(1H,br mult),1.31-1.25(1H,br mult),1.18-1.05(1H br mult).

實(shí)施例5:

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]

步驟1:1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇

在0℃向攪拌的1,4-環(huán)己二酮單乙二縮酮(Aldrich)(2g,12.81mmol)的干燥MeOH(30mL)溶液，分次加入NaBH₄(0.727g,19.21mmol)，保持溫度低于5℃。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌15分鐘，并在室溫攪拌2小時。將得到的混合物在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.96(4H,s),3.86-3.78(1H,br mult),1.94-1.79(4H,br mults),1.73-1.76(4H,br mults),1.43(1H,br s).

步驟2:8-異丙氧基-1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷

向攪拌的1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇(0.5g,3.16mmol)的2-碘丙烷(5.37g,31.6mmol)溶液中，加入氧化銀(I)(1.392g,6.01mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌。一旦完成后，將得到的混懸液用EtOAc稀釋并在減壓下過濾混懸液。將濾液在減壓下濃縮，得到淺黃色油狀物。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.84(4H,s),3.63(1H,mult),3.44(1H,mult),1.72-1.62(4H,br mults),1.53-1.42(4H,br mults),1.06(3H,s),1.05(3H,s).

步驟3:4-異丙氧基環(huán)己酮

向攪拌的8-異丙氧基-1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷(0.464g,2.317mmol)的THF(2mL)和水(2mL)溶液中，加入p-TsOH(0.080g,0.463mmol)。將混合物加熱至100℃過夜。將得到的混合物冷卻至室溫，并在EtOAc(30mL)和水(30mL)之間分配。將有機(jī)相用鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.78(1H,mult),3.73(1H,mult),2.40-2.31(2H,br mults),2.27-2.18(2H,br mults),1.96-1.87(2H,br mults),1.85-1.75(2H,br mults),1.12(3H,s),1.11(3H,s).

步驟4:[三氟甲磺酸4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基酯]

在氮?dú)鈿夥障?、?78℃，將1.6M nBuLi的己烷溶液(Aldrich)(1.285mL,2.057mmol)加至二異丙胺(Acros)(0.307mL,2.155mmol)的干燥THF(30mL)溶液中。將溶液升溫至0℃反應(yīng)30分鐘，然后再冷卻至-78℃。歷經(jīng)5分鐘加入4-異丙氧基環(huán)己酮(306mg,1.959mmol)的干燥THF(5mL)溶液，并將混合物在-78℃攪拌1小時，然后加入2-[N,N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]吡啶(Alfa Aesar)(772mg,2.155mmol)的干燥THF(5mL)溶液。將混合物攪拌并升溫至室溫過夜。將得到的混合物用飽和NaHCO₃水溶液(30mL)猝滅，并將水相用TBME(2x 20mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用10％NaOH水溶液(30mL)、鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-10％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.76(1H,mult),3.72-3.63(2H,mults),2.44-2.30(3H,br mults),2.14-2.06(1H,mult),1.86-1.73(2H,br mults),1.09-1.04(6H,mults).

步驟5:[2-(4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷]

向攪拌的[三氟甲磺酸4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基酯](459mg,1.592mmol)的干燥二烷(15mL)溶液中，加入雙(頻哪醇合)二硼(Alfa Aesar)(404mg,1.592mmol)，隨后加入乙酸鉀(Acros)(313mg,3.18mmol)和PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(Alfa Aesar)(39.0mg,0.048mmol)。將燒瓶用氮?dú)鉀_洗，并加熱至80℃過夜。將得到的混合物冷卻至室溫并通過過濾，用TBME洗滌。將有機(jī)濾液在減壓下濃縮，并將殘留物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之間分配。將有機(jī)相用鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟6:[5-(4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯]

向含有[2-(4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷](375mg,1.410mmol)的乙腈(2mL)溶液的2-5mL微波瓶中，加入5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(330mg,1.410mmol)，隨后加入K₂CO₃(585mg,4.23mmol)、PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(11.51mg,0.014mmol)和水(2mL)。將瓶用氮?dú)鉀_洗并在微波(Biotage Smith Initiator)中在80℃處理90分鐘。將反應(yīng)混合物在水(30mL)和EtOAc(30mL)之間分配。將有機(jī)相用鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，通過墊層過濾，并將濾液在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-60％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.33分鐘；MS m/z[M+H]+294.4；方法2minLowpHv01

步驟7:[5-(4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸]

向攪拌的[5-(4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯](393mg,1.340mmol)的THF(3mL)和乙醇(3mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(4.179ml,8.36mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌。一旦完成后，將得到的混合物倒入水(20mL)中，并通過加入1M HCl(aq)將pH調(diào)節(jié)至pH 6。將水混合物用EtOAc(30mL)萃取，并將有機(jī)萃取物用鹽水(20mL)洗滌，用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.13分鐘；MS m/z[M+H]+266.1；方法2minLowpHv01

步驟8:[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]

向攪拌的5-(4-異丙氧基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸(174mg,0.656mmol)的干燥NMP(3mL)溶液中，加入HATU(274mg,0.721mmol)，隨后加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(151mg,0.721mmol)和三乙胺(0.201mL,1.443mmol)。將混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物在EtOAc(20mL)和1M NaOH(aq)(20mL)之間分配，并將有機(jī)相用水(30mL)、鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)溶解在DMSO中，采用UV-指導(dǎo)的反相色譜法以9.5分鐘的40-80％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度純化。將產(chǎn)物流分加至EtOAc(50mL)中，并用飽和NaHCO₃水溶液(50mL)洗滌。將有機(jī)相用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.19分鐘；MS m/z[M+H]+457.3；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47(1H,s),6.27(1H,mult),3.91(1H,mult),3.75(1H,mult),3.75-3.67(1H,br mult),3.22(3H,s),2.58-2.40(4H,br mults),2.19(3H,s),2.19-2.09(1H,br mults),2.06-2.01(4H,mults),1.99(1H,mult),1.96-1.86(1H,br mult),1.82-1.74(2H,br mults),1.72-1.58(4H,br mults),1.38-1.24(2H,br mults),1.11-1.07(6H,mults).

實(shí)施例6:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

將N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(實(shí)施例2.2)(40mg,0.094mmol)的乙醇(20mL)溶液用氮?dú)鉀_洗并用10％Pd-C,50％濕的(Alfa Aesar,38303)(14.97mg,0.141mmol)處理。將反應(yīng)混合物在室溫在氫氣氣氛下攪拌3小時。將得到的混合物通過過濾，用乙醇洗滌，隨后加入DCM。將濾液在減壓下濃縮，并使殘留物通過500mg二氧化硅-TMT柱，用乙醇:乙醚(1:1)洗脫。將濾液收集并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS；Rt＝1.33分鐘；MS m/z[M+H]+429.5；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(1H,s),3.92(1H,tt),3.21(3H,s),2.84(1H,mult),2.07(3H,s),2.02(3H,s),2.03-1.95(2H,mults),1.82-1.58(9H,mults),1.50-1.43(2H,mults),1.37-1.22(5H,mults),0.97(3H,s),0.95(3H,s).

實(shí)施例6.1:

[N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基環(huán)戊基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]

采用與實(shí)施例6的方法類似的方法通過用N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(實(shí)施例3)替換N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(實(shí)施例2.2)(步驟1)來制備標(biāo)題化合物。

LC-MS:Rt＝1.46mins；MS m/z[M+H]+415.1/416.4；方法2minLowpHv03

實(shí)施例7:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

步驟1:5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

將5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(100mg,0.427mmol)和3,3-二甲基丁-1-炔(0.058mL,0.470mmol)的乙腈(3mL)溶液徹底脫氣，再填充氮?dú)?。加入二環(huán)己胺(0.085mL,0.427mmol)、CuI(2.85mg,0.015mmol)和PdCl₂(PPh₃)₂(7.50mg,10.68μmol)。將混合物在微波中在100℃攪拌45mins。將得到的混合物吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-10％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.53mins；MS m/z[M+H]+236.4；方法2minLowpHv03

步驟2:5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸

5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(101mg,0.429mmol)的THF(3mL)和MeOH(1.800mL)溶液在室溫用2M NaOH(aq)(0.429mL,0.859mmol)處理1小時。加入2M HCl(aq)(0.6mL)和水，并將水混合物用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.07(1H,br s),2.14(3H,s),1.33(9H,s).

步驟3:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

將5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸(85mg,0.410mmol)和4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(86mg,0.410mmol)的DMF(2mL)溶液在室溫用DIPEA(0.287mL,1.641mmol)和HATU(172mg,0.451mmol)處理，并攪拌16小時。將得到的混合物用水稀釋并用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)萃取物用0.5M氯化鋰(aq)溶液洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.42mins；MS m/z[M+H]+399.7；方法2minLowpHv03

步驟4:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

將N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(30mg,0.075mmol)的乙醇(5mL)溶液徹底脫氣，再填充氮?dú)?，并加入Pd-C(16.02mg,7.53μmol)。將混合物在氫氣氣氛下攪拌。一旦完成后，將反應(yīng)混合物通過過濾，并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.37mins；MS m/z[M+H]+403.1/404.4；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.97(1H,br s),4.04(1H,tt),3.24(3H,s),2.72-2.66(2H,mult),2.19(3H,s),2.16(3H,s),2.04-1.92(2H,br mults),1.90-1.81(4H,br mults),1.70(1H,br mult),1.60-1.54(2H,mult),1.43-1.29(2H,br mults),1.27-1.18(1H,br mult),0.96(9H,s).

實(shí)施例8:

(Z)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

步驟1:(Z)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

將N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(實(shí)施例7,步驟3))(30mg,0.075mmol)的EtOAc(3mL)溶液用2,2'-(乙烷-1,2-二基雙(硫烷二基))二乙醇(13.72mg,0.075mmol)和Pd-5％硫酸鋇(16.02mg,7.53μmol)處理。將混合物脫氣，完全再填充氮?dú)?，并將混合物在氫氣氣氛下在室溫攪拌過夜。再加入Pd-5％硫酸鋇(16.02mg,7.53μmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫在氫氣氣氛下攪拌16小時。將得到的混合物通過過濾，用EtOAc洗脫，并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.35mins；MS m/z[M+H]+401.2；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.94(1H,br s),6.00(1H,d,J＝12.9Hz),5.91(1H,d,J＝12.9Hz),4.01-3.92(1H,tt),3.16(3H,s),2.13(3H,s),2.09(3H,s),1.96-1.84(2H,br mults),1.82-1.74(4H,br mults),1.62(1H,br mult),1.34-1.23(2H,mult),1.19-1.10(1H,br mult),1.05(9H,s).

實(shí)施例9:

(E)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

步驟1:(E)-三丁基(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)錫烷

在0℃、在暗處，將氫化三丁基錫(1.637mL,6.09mmol)滴加加至3,3-二甲基丁-1-炔(500mg,6.09mmol)和Pd(Ph₃P)₄(70mg,0.06mmol)的THF(4mL)溶液中。攪拌30分鐘，將反應(yīng)混合物升溫至室溫，并攪拌16小時。在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用100％異己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟2:(E)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

將(E)-三丁基(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)錫烷(1194mg,0.8mmol)和5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(187mg,0.8mmol)溶解在二烷(6mL)中，并將混合物徹底脫氣，再填充氮?dú)?。加入Pd(Ph₃P)₄(92mg,0.080mmol)并將混合物在100℃攪拌16小時。將粗反應(yīng)混合物吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-10％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.64(1H,d,J＝17Hz),6.19(1H,d,J＝17Hz),2.23(3H,s),1.45(3H,t),1.16(9H,s).

步驟3:(E)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸

將(E)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(160mg,0.674mmol)的THF(3mL)和MeOH(1.8mL)溶液用2M NaOH(aq)(1.349mL,2.70mmol)處理，并在室溫攪拌2小時。將得到的混合物用2M HCl(aq)處理并用乙酸乙酯(x3)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物。

步驟4:(E)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

將(E)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸(102mg,0.487mmol)和4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(112mg,0.536mmol)的DMF(2mL)溶液用DIPEA(0.341mL,1.950mmol)和HATU(222mg,0.585mmol)處理。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時。將得到的混合物用水處理并用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)萃取物用0.5M LiCl(aq)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.41mins；MS m/z[M+H]+401.0/402.5；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,MeOD)δ6.64(1H,d,J＝17Hz),6.33(1H,d,J＝17Hz),4.16(1H,tt),3.36(3H,s),2.22(3H,s),2.20-2.09(2H,br mults),2.17(3H,s),1.95-1.82(4H,br mults),1.76-1.69(1H,br mult),1.50-1.38(2H,br mults),1.35-1.25(1H,br mult),1.18(9H,s).

實(shí)施例10:

5-環(huán)己基-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

步驟1:5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸

向5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(8.65g,37.0mmol)的MeOH(100mL)溶液中加入2M NaOH(aq)(18.48mL,37.0mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌10分鐘，并采用1M HCl(aq)將得到的混合物酸化，并在減壓下濃縮以除去MeOH。將水混合物用水稀釋并用EtOAc萃取(x3)并將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝0.82mins；MS m/z[M+H]+206.0；方法2minLowpH

步驟2:5-溴-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

將DMF(5.33mL,68.8mmol)的DCM(200mL)溶液冷卻至0℃并用草酰氯(3.31ml,37.9mmol)處理。加入5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸(7.09g,34.4mmol)并在冰冷卻下攪拌10mins。在0℃加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(7.92g,37.9mmol)和三乙胺(14.39ml,103mmol)，并將混合物在該溫度攪拌30mins。將得到的混合物用DCM稀釋，用飽和NaHCO₃(aq)溶液洗滌。將有機(jī)層用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用100％TBME洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝0.93mins；MS m/z[M+H]+397.2/400.2；方法2minLowpH

步驟3:5-環(huán)己基-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

向5-溴-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(75mg,0.189mmol)中加入環(huán)己基溴化鋅(II)(0.5M在THF中)(1133μL,0.566mmol)和雙(三-叔丁基膦)鈀(0)(9.65mg,0.019mmol)并將混合物在100℃在微波中攪拌30分鐘。將得到的混合物用EtOAc稀釋并過濾，并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.12mins；MS m/z[M+H]+401.0/402.4；方法2minLowpH

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(1H,s),3.90(1H,m),3.20(3H,s),2.90(1H,m),2.05(3H,s),2.00(3H,s),2.80-1.00(20H,m).

實(shí)施例11:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酰胺

步驟1:三氟甲磺酸1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯

在氮?dú)鈿夥障拢瑢嚢璧?,4-環(huán)己二酮單乙二縮酮(Aldrich)(2g,12.81mmol)的干燥THF(30mL)溶液冷卻至-70℃，并滴加加入0.6M LDA(在庚烷/THF/乙基苯中)(25.6mL,15.37mmol)，保持溫度低于-65℃。將反應(yīng)混合物在-70℃攪拌20mins，然后歷經(jīng)30分鐘滴加加入2-[N,N-雙(三氟甲基磺酰基)氨基]吡啶(Alfa Aesar)(5.05g,14.09mmol)的干燥THF(10mL)溶液進(jìn)行處理，確保溫度不超過-65℃。將反應(yīng)混合物在-70℃攪拌1小時，然后逐漸升溫至室溫并攪拌過夜。將得到的混合物用飽和NaHCO₃水溶液(100mL)猝滅，并用TBME(2x 150mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用10％NaOH(aq)(100mL)、鹽水(100mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-10％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.80(1H,mult),3.91(4H,mult),2.51-2.49(2H,mult),2.49-2.43(2H,br mults),2.37-2.34(2H,br mults),1.86-1.81(2H,mults).

步驟2:4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷

向攪拌的三氟甲磺酸1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯(1.19g,4.13mmol)的干燥二烷(15mL)溶液中，加入雙(頻哪醇合)二硼(Alfa Aesar)(1.048g,4.13mmol)，隨后加入乙酸鉀(Acros)(0.810g,8.26mmol)和PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(Alfa Aesar)(0.101g,0.124mmol)。將反應(yīng)混合物用氮?dú)鉀_洗，并在80℃攪拌過夜。將得到的混合物冷卻至室溫并通過過濾，用TBME洗滌。將有機(jī)濾液在減壓下濃縮，并在EtOAc(50mL)和水(50mL)之間分配。將有機(jī)相用鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟3:4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸乙酯

向含有4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷(586mg,2.200mmol)的乙腈(2mL)溶液的2-5mL微波瓶中，加入5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體D)(515mg,2.200mmol)，隨后加入K₂CO₃(912mg,6.60mmol)、PdCl₂(dppf).CH₂Cl₂加合物(17.97mg,0.022mmol)和水(0.667mL)。將瓶用氮?dú)鉀_洗，并在微波中(Biotage Smith Initiator)在80℃攪拌1小時，并在100℃攪拌30分鐘。將得到的混合物在水(30mL)和EtOAc(30mL)之間分配。將有機(jī)相用鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到橙色油狀物。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-40％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.26(1H,mult),4.37(2H,q),3.93(4H,s),2.62-2.56(2H,br mults),2.47-2.43(2H,mults),2.23(3H,s),1.82(2H,mult),1.23(3H,t).

步驟4:4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酸乙酯

將4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)異唑-3-甲酸乙酯(556mg,1.896mmol)的乙醇(20mL)溶液用氮?dú)鉀_洗，然后用10％Pd-C,50％濕的(Alfa Aesar,38303)(303mg,2.84mmol)處理。將反應(yīng)混合物在氫氣氣氛下在室溫攪拌過夜。將得到的混合物通過過濾，用乙醇和DCM洗滌。將濾液在減壓下濃縮，并使殘留物通過500mg二氧化硅-TMT柱，用乙醇:乙醚(1:1)洗脫。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.11mins；MS m/z[M+H]+296.2；方法2minLowpHv01

步驟5:4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酸

向攪拌的4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酸乙酯(558mg,1.889mmol)的THF(5mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(4.179ml,8.36mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌15分鐘。將得到的混合物倒入水(20mL)中，并通過加入1M HCl將pH調(diào)節(jié)至pH 5-6。將水混合物用EtOAc(30mL)萃取并將合并的有機(jī)萃取物用鹽水(20mL)洗滌，用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝0.89分鐘；MS m/z[M+H]+268.2；方法2minLowpHv01

步驟6:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酰胺

向攪拌的4-甲基-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)異唑-3-甲酸(239mg,0.894mmol)的干燥NMP(3mL)溶液中，加入HATU(374mg,0.984mmol)，隨后加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(206mg,0.984mmol)和三乙胺(0.274mL,1.967mmol)。將混合物在室溫攪拌16小時。將得到的混合物在EtOAc(20mL)和1M NaOH(20mL)之間分配。將有機(jī)相用水(30mL)、鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-2％MeOH的DCM溶液洗脫，得到粗物質(zhì)。將分離的物質(zhì)溶解在DMSO(2mL)中，并用水(30mL)研磨。將得到的混懸液在減壓下過濾，并將固體用水(20mL)洗滌并在真空下干燥，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝0.96分鐘；MS m/z[M+H]+459.5:方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(1H,s),3.96-3.86(5H,mults),3.21(3H,s),3.02(1H,mult),2.07(3H,s),2.05-1.92(2H,br mults),2.02(3H,s),1.84-1.72(8H,br mults),1.70-1.57(5H,br mults),1.38-1.23(2H,br mults),1.22-1.11(1H,br mult).

實(shí)施例12:

5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物

步驟1:5-(1-羥基丁-3-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

向5-甲酰基-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體C)(350mg,1.911mmol)的DCM(19mL)溶液中加入烯丙基三甲基硅烷(276μl,1.911mmol)并將混合物冷卻至-78℃。將三氟化硼醚合物(278μl,2.198mmol)的DCM(5mL)溶液冷卻至-78℃，并歷經(jīng)5min加至反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)混合物攪拌15mins，加入三乙胺(266μl,1.911mmol)。將反應(yīng)混合物在-78℃保持15分鐘，并升溫至室溫。將得到的混合物通過加入飽和NaHCO₃水溶液(10mL)猝滅，并用DCM(2x 10mL)萃取。使合并的有機(jī)萃取物通過相分離柱并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-40％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.06mins；MS m/z[M+H]+225.8/226.4；方法2minLowpHv03

步驟2:

2a:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的外消旋混合物

和2b:5-((2S,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的外消旋混合物

向5-(1-羥基丁-3-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(140mg,0.622mmol)的DCM(6.2mL)溶液中加入新戊醛(67.5μl,0.622mmol)。滴加加入TMSOTf(112μl,0.622mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌1小時。加入MeOH(2mL)，并將得到的混合物在水(5mL)和DCM之間分配，分離各層并將水混合物用DCM萃取(2x 5mL)。將合并的有機(jī)萃取物用Na₂SO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-50％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

2a:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的外消旋混合物L(fēng)C-MS:Rt＝1.64mins；MS m/z[M+H]+326.6；方法2minLowpHv03

2b:5-((2S,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的外消旋混合物。LC-MS:Rt＝1.54mins；MS m/z[M+H]+326.6；方法2minLowpHv03

步驟3:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸的外消旋混合物

向2a的外消旋合物:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(9mg,0.028mmol)的MeOH(0.45mL)和THF(0.75mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(59.9μl,0.120mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時。將得到的混合物在減壓下濃縮，得到殘留物，將其用2M NaOH(aq)(5mL)稀釋，并用DCM(5mL)洗滌。將水層用2M HCl(aq)(8mL)酸化，并用DCM(3x 5mL)萃取。使合并的有機(jī)萃取物通過相分離柱并在減壓下除去溶劑，得到5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸的外消旋混合物；

LC-MS:Rt＝1.44mins；MS m/z[M+H]+298.5；方法2minLowpHv03

步驟4:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的外消旋混合物

向5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸(9mg,0.030mmol)的外消旋混合物的NMP(0.3mL)溶液中，加入HATU(12.66mg,0.033mmol)，隨后加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(6.33mg,0.030mmol)和Et₃N(8.39μl,0.061mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物在EtOAc(10mL)和飽和NaHCO₃水溶液(10mL)之間分配。將有機(jī)層用鹽水(10mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-10％MeOH的DCM溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝4.57mins；MS m/z[M+H]+489.3；方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06(1H,br s),4.98(1H,dd),4.06(1H,tt),3.82(1H,mult),3.50(1H,dd),3.40(3H,s),3.26(3H,s),2.28(3H,s),2.21(3H,s),2.14-2.07(1H,mults),2.05–1.82(8H,br mults),1.71(1H,br mult),1.51(1H,mult),1.43-1.29(2H,br mults),1.29-1.17(1H,br mult),0.92(9H,s).

實(shí)施例13:

5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物

通過與實(shí)施例12的方法類似的方法通過在步驟3中用2b替換2a來制備實(shí)施例13；

LC-MS:Rt＝4.40mins；MS m/z[M+H]+489.4；方法8minLowpHv01

實(shí)施例13a:5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和實(shí)施例13b:5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

采用超臨界流體色譜法手性分離實(shí)施例13，得到個體對映體:

方法細(xì)節(jié):

實(shí)施例13a:5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

SFC保留時間＝4.86mins

LCMS:Rt 1.42mins MS m/z[M+H]+489.5；方法2minLowpHv03

實(shí)施例13b:5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

SFC保留時間＝2.85mins

LCMS:Rt 1.42mins MS m/z[M+H]+489.5；方法2minLowpHv03

實(shí)施例14:

5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的非對映體混合物

步驟1:5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-(2,2,2-三氟乙酰氧基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-(2,2,2-三氟乙酰氧基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物

將5-甲?；?4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(100mg,0.546mmol)和2,2-二甲基己-5-烯-3-醇(中間體F)(70.0mg,0.546mmol)合并在DCM(12mL)中，并用烘干的分子篩(100mg,0.546mmol)和TFA(3.15mL,40.9mmol)處理。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時。加入新戊醛(0.059mL,0.546mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物用飽和NaHCO₃水溶液猝滅并用DCM萃取(x3)。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物。

步驟2:5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-羥基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-羥基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物

將鈉(45.7mg,1.988mmol)溶解在乙醇中，并在室溫將得到的溶液加至5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-(2,2,2-三氟乙酰氧基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-(2,2,2-三氟乙酰氧基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯混合物(270mg,0.663mmol)的EtOH(5mL)溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌2hrs。加入0.1M HCl(aq)(50mL)，分離水相并用EtOAc萃取(x3)。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟4:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-4-氧代四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-4-氧代四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物

將5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-羥基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-羥基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物(35mg,0.112mmol)的DCM(20mL)溶液在室溫用Dess-Martin試劑(47.7mg,0.112mmol)處理，并攪拌30mins。加入飽和偏亞硫酸氫鈉水溶液并將混合物攪拌15mins。分離得到的各層，并將有機(jī)層用飽和NaHCO₃水溶液洗滌。將水部分用DCM萃取，并將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-40％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.78(1H,dd),4.38(2H,q),3.34(1H,dd),2.83(1H,mult),2.62-2.56(1H,mults),2.45-2.33(2H,br mults),2.21(3H,s),1.35(3H,t),0.90(9H,s).

步驟5:5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-羥基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸化合物和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-羥基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸的非對映體混合物(1:1)

將5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-4-氧代四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-4-氧代四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物(420mg,1.358mmol)的THF(20mL)溶液冷卻至-78℃并用1M L-Selectride的THF溶液(1.426mL,1.426mmol)處理并在-78℃攪拌3hrs。將得到的混合物用乙酸猝滅并用1M HCl(aq)洗滌。將水混合物用EtOAc萃取(x2)。合并所有有機(jī)層，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-50％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到粗物質(zhì)。將粗物質(zhì)溶解在THF中，用2M NaOH(aq)處理并在室溫攪拌2小時。用1M HCl(aq)將得到的混合物酸化并用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥并過濾，并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.10mins；MS m/z[M+H]+284.3；方法2minLowpHv03

步驟6:5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸甲酯化合物和5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸甲酯(1:1)以及5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸甲酯化合物和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸甲酯(1:1)的非對映體混合物

在0℃將5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-羥基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸化合物和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-羥基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸(1:1)的非對映體混合物(31mg,0.109mmol)的DMF(0.5mL)溶液加至氫化鈉(10.94mg,0.274mmol)的DMF(2mL)溶液中。將混合物升溫至室溫，攪拌2小時，加入碘甲烷(0.068mL,1.094mmol)。將反應(yīng)在室溫攪拌過夜。將得到的混合物用2M HCl(aq)猝滅并用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)萃取物用0.5M LiCl(aq)、鹽水洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟7:5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸的非對映體混合物

將5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸甲酯化合物和5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸甲酯(1:1)以及5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸甲酯化合物和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸甲酯(1:1)的非對映體混合物(14mg,0.045mmol)的THF(1mL)和MeOH(0.6mL)溶液在室溫用2M NaOH(aq)(0.090mL,0.180mmol)處理1小時。將得到的混合物用2M HCl(aq)(4mL)處理，并用EtOAc(x2)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

步驟8:將5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸以及5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸的非對映體混合物(20mg,0.067mmol)和4-氨基-2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體E)(12.80mg,0.071mmol)的DMF(0.5mL)溶液用DIPEA(0.047mL,0.269mmol)和HATU(33.2mg,0.087mmol)處理。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物用水處理并用EtOAc萃取(x2)。將合并的有機(jī)萃取物用0.5M氯化鋰(aq)、鹽水洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.38mins；MS m/z[M+H]+461.6；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.10(1H,br s),4.99(1H,d),4.63(1H,mult),3.82(1H,mult),3.51(1H,d),3.41(3H,s),3.28(3H,s),2.88-2.75(2H,br mults),2.41-2.31(2H,br mults),2.28(3H,s),2.22(3H,s),2.14-2.06(1H,br mult),1.99-1.83(3H,br mults),1.83-1.72(1H,br mult),1.52(1H,mult),0.92(9H,s).

實(shí)施例15:

5-(6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

步驟1:5-((2R,6S)-4-溴-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-4-溴-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(1:1)的混合物

在氮?dú)鈿夥障拢蚝?,2-二甲基己-5-烯-3-醇(中間體F)(400mg,3.12mmol)和溴化銦(III)(55.4mg,0.156mmol)的干燥DCM(31mL)溶液的冰冷卻的燒瓶中，加入溴代三甲基硅烷(0.405ml,3.12mmol)。將反應(yīng)混合物在冰冷卻下攪拌30mins。在另一燒瓶中，在氮?dú)鈿夥障聦?-甲酰基-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體C)(572mg,3.12mmol)的干燥DCM(31mL)溶液在冰中冷卻。在冰冷卻下，歷經(jīng)30分鐘將其滴加加至第一燒瓶中。將反應(yīng)混合物在冰冷卻下攪拌1.5hr，并在室溫過夜。向反應(yīng)混合物中加入新戊醛(0.085ml,0.781mmol)，并將其攪拌2小時。再加入新戊醛(0.085ml,0.781mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。向得到的混合物中加入飽和NaHCO₃(aq)水溶液并將混合物劇烈攪拌2mins。將得到的混合物通過相分離柱并收集有機(jī)洗脫液，并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS；Rt＝1.68mins；MS m/z[M+H]+376.4；方法2minLowpHv03

步驟2:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(1:1)的混合物

在氮?dú)饬飨拢?-((2R,6S)-4-溴-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-4-溴-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物(1:1)(233mg,0.623mmol)的EtOH(7.1mL)和EtOAc(0.7mL)溶液中加入10％Pd/C(26.5mg,0.249mmol)并將混合物在氫氣氣氛下在室溫攪拌7小時。加入硼氫化鈉(209mg,2.490mmol)并將反應(yīng)混合物在氫氣氣氛下攪拌過夜。再加入10％Pd/C(26.5mg,0.249mmol)并在氫氣氣氛下繼續(xù)攪拌過夜。將得到的混合物通過柱過濾，用EtOAc洗脫并在減壓下除去有機(jī)溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-50％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.72mins；MS m/z[M+H]+296.3；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.54(1H,d),4.66(2H,q),3.01(1H,d),2.19(3H,s),1.94(1H,mult),1.83-1.77(1H,mult),1.73-1.48(3H,mults),1.34(3H,t),1.35-1.26(1H,mults),0.84(9H,s).

步驟3:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸(1:1)的混合物

在室溫，向攪拌的5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(1:1)(112mg,0.379mmol)的THF(2mL)和MeOH(1.2mL)溶液加入2M NaOH(aq)(0.209mL,0.417mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。在減壓下除去溶劑并將殘留物用EtOAc和水稀釋。分離各層并將水層用EtOAc(x2)洗滌。通過加入2M HCl(aq)使水層成酸性并用EtOAc萃取(x3)。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS；Rt 1.57mins；MS m/z[M+H]+268.3；方法2minLowpHv03

步驟4:5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

在氮?dú)鈿夥障拢?-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸(1:1)的混合物(40mg,0.150mmol)的干燥DCM(3mL)溶液中加入草酰氯(0.014mL,0.165mmol)和DMF(0.023mL,0.299mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌5分鐘，并加入4-氨基-2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體E)(27.1mg,0.150mmol)和三乙胺(0.063mL,0.449mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌5分鐘。向得到的混合物中加入水并將其劇烈攪拌，然后通過相分離柱。收集有機(jī)物并在減壓下除去溶劑。然后將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到粗物質(zhì)，為對映異構(gòu)體的混合物。

采用超臨界流體色譜法將所述物質(zhì)手性分離，得到個體對映體:

方法細(xì)節(jié):

實(shí)施例15a:5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

手性SFC:Rt＝14.26mins

LC-MS:Rt＝4.59mins；MS m/z[M+H]+431.5；方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.28(1H,br s),4.69-4.59(2H,mults),3.32(3H,s),3.10(1H,d),2.83(2H,mults),2.41-2.34(2H,mults),2.29(3H,s),2.23(3H,s),2.03(1H,br d),1.96-1.60(6H,mults),1.45-1.33(1H,mults),0.93(9H,s).

實(shí)施例15b:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

手性SFC:Rt＝18.40mins

LC-MS:Rt＝4.58mins；MS m/z[M+H]+431.5；方法8minLowpHv01

1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.28(1H,br s),4.69-4.59(2H,mults),3.32(3H,s),3.10(1H,d),2.83(2H,mults),2.41-2.34(2H,mults),2.29(3H,s),2.23(3H,s),2.03(1H,br d),1.96-1.60(6H,mults),1.45-1.33(1H,mults),0.93(9H,s).

實(shí)施例16:

5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

通過與實(shí)施例15的方法類似的方法用4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)替換步驟4中的4-氨基-2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體E)來制備標(biāo)題化合物。采用超臨界流體色譜法手性分離，得到個體對映異構(gòu)體:

方法細(xì)節(jié):

5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

手性SFC Rt＝8.19mins；

LC-MS:Rt＝4.87mins；MS m/z[M+H]+459.5；方法8minLowpHv01

1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.99(1H,s),4.53(1H,dd),3.97(1H,tt),3.18(3H,s),3.01(1H,dd),2.20(3H,s),2.12(3H,s),1.96-1.86(2H,mults),1.83-1.74(4H,mults),1.72-1.49(6H,mults),1.35-1.22(2H,mults),1.21-1.11(2H,mults),0.84(9H,s).

實(shí)施例17:

5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-異丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-異丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物

步驟1:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-4-碘四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-4-碘四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(1:1)的混合物

在氮?dú)鈿夥障隆⒃谑覝?，歷經(jīng)10秒向攪拌的5-甲?；?4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(1g,5.46mmol)、2,2-二甲基己-5-烯-3-醇(中間體F)(0.700g,5.46mmol)和碘化鈉(0.818g,5.46mmol)的干燥MeCN(20mL)溶液中滴加加入TMSCl(0.698mL,5.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。向得到的混合物中加入新戊醛(0.593mL,5.46mmol)并將反應(yīng)混合物攪拌3小時。將得到的混合物用EtOAc稀釋并用10％硫代硫酸鈉(aq)溶液(x1)和水(x1)洗滌。將有機(jī)層用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。然后將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-50％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.76mins；MS m/z[M+H]+422.3；方法2minLowpHv03

步驟2:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-5,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-5,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(1:1)的混合物

向5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-4-碘四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-4-碘四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物(1:1)(794mg,1.885mmol)的甲苯(3.8mL)溶液中加入DBU(0.284ml,1.885mmol)，并將其在室溫攪拌過夜。向得到的混合物中加入DBU(0.142ml,0.94mmol)并將其在室溫攪拌4小時。將得到的混合物用EtOAc和水稀釋并分離各層。水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。然后將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-20％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.64mins；MS m/z[M+H]+294.5；方法2minLowpHv03

步驟3:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物

在氮?dú)鈿夥障?，?-((2R,6S)-6-(叔丁基)-5,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-5,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物(1:1)(212mg,0.723mmol)的乙醇(14.5mL)溶液中加入10％Pd/C(769mg,0.723mmol)。將反應(yīng)混合物在氫氣氣氛下在室溫攪拌過夜。在氮?dú)鈿夥障?，將得到的混合物通過柱過濾，用EtOAc洗脫。在減壓下除去有機(jī)溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.70mins；MS m/z[M+H]+296.4；方法2minLowpHv03

步驟4:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸(1:1)

向5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物(100mg,0.339mmol)的THF(3mL)和MeOH(1.8mL)溶液中加入2M NaOH(aq)(0.186mL,0.372mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物在減壓下濃縮并將殘留物用EtOAc和水稀釋。將有機(jī)層用0.1M NaOH(aq)萃取。將合并的水層用1M HCl(aq)酸化并用EtOAc萃取(x3)。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.52mins；MS m/z[M+H]+268.4；方法2minLowpHv03

步驟5:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-異丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-異丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物(1:1)

在氮?dú)鈿夥障?，?-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸的混合物(1:1)(77mg,0.288mmol)的DCM(2mL)溶液中加入草酰氯(0.026mL,0.302mmol)和DMF(2.230μl,0.029mmol)。加入4-氨基-2-異丙基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體G)(48.7mg,0.288mmol)和三乙胺(0.161mL,1.152mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。向得到的混合物中加入1M NaOH和DCM，并使混合物通過相分離柱。將有機(jī)層用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。然后將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝4.50mins；MS m/z[M+H]+419.5；方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(1H,s),4.72(1H,mult),4.36(1H,mult),3.22(3H,s),3.16(1H,d),2.14(3H,s),2.04(3H,s),1.99-1.90(1H,mult),1.84-1.78(1H,mult),1.70-1.59(3H,br mult),1.35(6H,d),1.38-1.23(1H,br mult),0.88(9H,s).

實(shí)施例18:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,6R)-6-異丙基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,6S)-6-異丙基-5,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,6R)-6-異丙基-5,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,6S)-6-異丙基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物

步驟1:4-甲基-5-乙烯基異唑-3-甲酸乙酯

類似于中間體C,步驟1那樣制備標(biāo)題化合物。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.86(1H,dd),6.02(1H,d),5.69(1H,d),4.37(2H,q),2.19(3H,s),1.33(3H,t).

步驟2:4-甲基-5-乙烯基異唑-3-甲酸

將4-甲基-5-乙烯基異唑-3-甲酸乙酯(250mg,0.993mmol)溶解在THF(5.3mL)和MeOH(3.2mL)中，并向其中加入2M NaOH(aq)(497μl,0.993mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌15分鐘。將得到的混合物在減壓下濃縮并用2M HCl(5mL)和水(5mL)處理。將DCM加至水混合物中，導(dǎo)致形成乳液。在減壓下除去溶劑。將得到的殘留物混懸在DCM(25mL)中并使其通過相分離柱。在減壓下除去有機(jī)溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.04mins:MS m/z[M+H]+154.1:方法2minLowpHv03

步驟3:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-乙烯基異唑-3-甲酰胺

將4-甲基-5-乙烯基異唑-3-甲酸(172mg,0.809mmol)的DCM(10mL)混懸液冷卻至0℃，用草酰氯(0.142mL,1.617mmol)和DMF(4滴)處理。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時，并在室溫攪拌30分鐘。在減壓下除去溶劑，并將殘留物溶解在DCM(8mL)中。加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(169mg,0.809mmol)(中間體D)和三乙胺(0.338mL,2.426mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物用水(15mL)稀釋，并用DCM(x2)萃取。將有機(jī)萃取物合并并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用20-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt 1.11mins:MS m/z[M+H]+345.4:方法2minLowpHv03

步驟4:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-甲?；?4-甲基異唑-3-甲酰胺

向N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-乙烯基異唑-3-甲酰胺(53mg,0.154mmol)的THF(1mL)和水(0.5mL)溶液中加入高碘酸鈉(99mg,0.462mmol)和Os EnCat^TM(微囊化的OsO₄)(10.26mg,3.08μmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物通過棉花塞過濾，并在減壓下濃縮洗脫液，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.09(1H,s),8.34(1H,br s),4.07(1H,mult),3.32(3H,s),2.57(3H,s),2.23(3H,s),2.08-1.95(2H,br mults),1.94-1.80(4H,br mults),1.71(1H,br mult),1.44-1.30(2H,br mults),1.30-1.16(1H,br mult).

步驟5:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(1-羥基丁-3-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

將N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-甲?；?4-甲基異唑-3-甲酰胺(53mg,0.153mmol)的THF(1.5mL)溶液冷卻至0℃，歷經(jīng)15mins滴加加入1M烯丙基溴化鎂的Et₂O溶液(337μl,0.337mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫，并加入飽和NH₄Cl(aq)。將水層用DCM萃取(x3)。使合并的有機(jī)萃取物通過相分離柱，并在減壓下除去有機(jī)溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用50-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟6:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,6R)-6-異丙基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,6S)-6-異丙基-5,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,6R)-6-異丙基-5,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,6S)-6-異丙基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物

將N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(1-羥基丁-3-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(26mg,0.054mmol)的DCM(0.5mL)溶液冷卻至0℃，并加入異丁醛(5.38μl,0.059mmol)和TMSOTf(10.66μl,0.059mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時，并在室溫過夜。向得到的混合物中加入飽和NH₄Cl(aq)溶液，并將其用DCM萃取(x3)。使合并的有機(jī)萃取物通過相分離柱，并在減壓下除去有機(jī)溶劑。將粗物質(zhì)溶解在DMSO中，并采用UV-指導(dǎo)的自動化反相色譜法以歷經(jīng)9.5分鐘的30-70％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度采用Xselect CSH Prep C18柱純化，得到標(biāo)題化合物，為烯的混合物，NMR揭示產(chǎn)物的比例是3:24-烯:3-烯；提示立體化學(xué)是syn。

LC-MS:Rt＝1.40mins；MS m/z[M+H]+443.3:方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.13-8.07(m,2H),6.08-6.03(m,1H),5.936-5.92(m,1H),5.80-5.73(m,2H),5.46-5.42(m,1H),4.85(dd,J＝10.37,3.3,1H),4.18-4.14(m,1H),4.10-4.04(m,3H),3.43-3.40(m,1H),3.32-3.24(m,7H),2.30(s,3H),2.27(s,3H),2.24-2.21(m,8H),2.02-1.50(m,16H),1.44-1.06(m,8H),1.01-0.94(m,12H).

實(shí)施例19:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2S,6S)-6-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,6R)-6-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺的混合物

步驟1:5-(1-羥基丁-3-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

將三氟化硼乙醚合物(54.1μl,0.427mmoL)的DCM(0.3mL)溶液冷卻至-78℃。在另一分開的燒瓶中，將5-甲?；?4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體C)(68mg,0.371mmol)和烯丙基三甲基硅烷(59.0μl,0.371mmol)的DCM溶液冷卻至-78℃并將該溶液滴加加至所述三氟化硼乙醚合物溶液中。將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌1小時，并在室溫過夜。向得到的混合物中加入NaHCO₃(aq)飽和溶液(5mL)，并將其用DCM萃取(x3)。使合并的有機(jī)萃取物通過相分離柱并在減壓下濃縮洗脫液。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-50％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.07mins；MS m/z[M+H]+226.1:方法2minLowpHv03

步驟2:4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酸乙酯

將5-(1-羥基丁-3-烯-1-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(35mg,0.155mmol)的DCM(1mL)溶液用乙醛(8.72μl,0.155mmol)處理并將反應(yīng)混合物冷卻至0℃。加入冷卻至0℃的TMSOTf(80.4μL,0.465mmol)的DCM(1.5mL)溶液，并將反應(yīng)混合物在0℃攪拌30分鐘，并在室溫過夜。向得到的混合物中加入氯化銨(aq)飽和溶液(2mL)并將其用DCM萃取(x3)。使合并的有機(jī)萃取物通過相分離柱并在減壓下濃縮洗脫液。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.32mins:MS m/z[M+H]+252.2:方法2minLowpHv03

步驟3:4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酸

向4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酸乙酯(14mg,0.056mmol)的MeOH(0.2mL)和THF(0.3mL)溶液中加入2M NaOH(aq)(27.9μl,0.056mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌3小時。將得到的混合物在減壓下濃縮，并加入2M NaOH(aq)(1mL)和水(1mL)。將水混合物用DCM萃取(x3)，并使合并的有機(jī)萃取物通過相分離柱。在減壓下濃縮洗脫液，得到標(biāo)題化合物。

步驟4:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2S,6S)-6-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,6R)-6-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺的外消旋混合物

向4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酸)(12.03mg,0.054mmoL)的NMP(0.5mL)溶液中加入HATU(20.49mg,0.054mmol)。加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(11.28mg,0.054mmol)和三乙胺(7.49μl,0.054mmoL)并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物在飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)和EtOAc(10mL)之間分配。將有機(jī)物用鹽水(10mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用40-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝3.65mins:MS m/z[M+H]+415.3:方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.98(s,1H),5.86-5.77(m,1H),5.68-5.60(m,1H),4.77(dd,J＝10.9,3.3Hz,1H),4.37(s,1H),4.04-3.93(m,1H),3.31(t,J＝7.0Hz,1H),3.26(s,3H),2.67-2.54(m,1H),2.31(t,J＝8.1Hz,1H),2.19-2.08(m,7H),2.02-1.87(m,2H),1.86-1.72(m,2H),1.64-1.59(m,1H),1.36-1.05(m,7H).

實(shí)施例20:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)異唑-3-甲酰胺

步驟1:5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-羥基丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

在0℃，將叔丁基二甲基氯硅烷(6.3g,41.5mmol)分次加至5-((1R,2S)-1,2-二羥基丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體B)(8.65g,37.7mmol)、4-二甲基氨基吡啶(1.38g,11.32mmol)和三乙胺(5.80mL,)的DMF(100mL)溶液，并將反應(yīng)升溫至室溫。18h后，將反應(yīng)在EtOAc和鹽水之間分配，用飽和氯化銨水溶液、鹽水洗滌，用Na₂SO₄干燥，并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用15％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.59mins；MS m/z[M+H]+344.4；方法2minLowpHv03

步驟2:5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸2-甲基烯丙基酯

在室溫，將NaH(700mg 60wt％在礦物油中的分散體,17.47mmol)分次加至5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-羥基丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(3.0g,8.73mmol)的THF(75mL)溶液中，隨后歷經(jīng)10分鐘分次加入3-溴-2-甲基丙-1-烯(8.81ml,87mmol)。加入四丁基碘化銨(2.58g,6.99mmol)并將得到反應(yīng)物在58℃加熱2小時。將反應(yīng)冷卻至室溫并連續(xù)用鹽水(75mL)和EtOAc(75mL)猝滅，用Na₂SO₄干燥，并在減壓下濃縮，得到粗標(biāo)題化合物，為大約9:1混合物；

LC-MS:Rt＝1.90mins；MS m/z[M+H]+398.5；方法2minLowpHv03

LC-MS:Rt＝1.95mins；MS m/z[M+H]+424.5；方法2minLowpHv03

步驟3:5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸

將氫氧化鋰一水合物(3.20g,76mmol)分次加至5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸2-甲基烯丙基酯的混合物[4.5g，為大約9:1混合物，含有殘留的四丁基碘化銨(25％w/w)]的THF/水(300mL,1.5/1.0)溶液中，并將得到的混合物在70℃溫和加熱。冷卻至室溫后，分離各層，并將剩余的水混合物用1M鹽酸水溶液酸化并用EtOAc萃取。將有機(jī)萃取物合并并用鹽水洗滌，用Na₂SO₄干燥，并在減壓下濃縮，得到粗標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.75mins；MS m/z[M+H]+370.5；方法2minLowpHv03

步驟4:5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

將4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(2.63g,12.55mmol)分次加至5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸(4.14g,～70％w/w)的DMF(100mL)溶液中，隨后加入DIPEA(7.8ml,44.8mmol)和HATU(4.8g,12.55mmol)。在室溫攪拌18h后，將反應(yīng)混合物在EtOAc和鹽水之間分配。將水相用EtOAc萃取，并將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，用Na₂SO₄干燥，并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用50-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.77mins；MS m/z[M+H]+561.8；方法2minLowpHv03

步驟5:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,2S)-2-羥基-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

將四丁基氟化銨(15.16ml,15.16mmol)滴加到5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(5.06g,7.58mmol(推定76％純度))的THF(160mL)溶液中，并將得到的混合物在室溫下攪拌18h。將得到的混合物通過連續(xù)地加入水(150mL)和EtOAc(200ml)淬滅。將有機(jī)物用鹽水洗滌，用Na₂SO₄干燥，并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用50-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.12mins；MS m/z[M+H]+447.5；方法2minLowpHv03

步驟6:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)異唑-3-甲酰胺

在室溫下，將三氟乙酸汞(3.92g,9.19mmol)分次加至N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,2S)-2-羥基-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(3.59g,8.03mmol)的THF(160mL)溶液中。加入紅色氧化汞(1.99g,9.19mmol)并將得到的反應(yīng)混合物在室溫下攪拌。1h后，將反應(yīng)冷卻至-78℃并滴加三乙基硼烷(16.84ml,16.84mmol)，隨后分次加入硼氫化鈉(579mg,15.31mmol)。1h后，在-78℃下將反應(yīng)逐漸地升溫至室溫。將得到的混合物通過加入鹽水和EtOAc淬滅，分離，用Na₂SO₄干燥，并在減壓下濃縮。加入DCM(200mL)和Biotage Si-Thiol(17g,1.4mmol/g負(fù)載,～3eq)并將得到的混懸液在室溫攪拌18h。將反應(yīng)過濾，用DCM洗滌，并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用90-95％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物(>95％ee)；

LC-MS:Rt＝1.16mins；MS m/z[M+H]+447.5；方法2minLowpHv03

¹H NMR.([400MHz],[DMSO]9.55(1H,s),4.36(1H,d),4.09(1H,m),3.91(1H,m),3.65(1H,d),3.42(1H,d),3.21(3H,s),2.16(3H,s),2.03(3H,s),1.98(2H,m),1.78(2H,m),1.64(3H,m),1.37(3H,s),1.31(2H,m),1.17(1H,m),1.10(3H,s),0.87(3H,d).

實(shí)施例21.1

21.1[5-(4-溴-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]

和實(shí)施例21.2:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺

步驟1:[5-(4-溴-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯]

在氮?dú)鈿夥障?，向冰冷卻的2-甲基丁-3-烯-1-醇(Aldrich)(0.171mL,1.638mmol)、溴化銦(III)(28.3mg,0.082mmol)和干燥DCM(10mL)的混合物中，加入溴三甲基硅烷(0.213mL,1.638mmol)。將反應(yīng)混合物在冰冷卻下攪拌30mins。將冰冷的5-甲酰基-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體C)(300mg,1.638mmol)的干燥DCM(2mL)溶液歷經(jīng)5分鐘加至反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)混合物在冰冷卻下攪拌并升溫至室溫歷經(jīng)周末。在0℃下，將得到的混合物在攪拌下用飽和NaHCO₃水溶液(10ml)處理。使得到的混合物通過相分離柱，并將洗脫液在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)溶解在DMSO中并通過UV-指導(dǎo)的自動化反相色譜法以9.5分鐘的50-98％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度純化。將產(chǎn)物流分加入到EtOAc(50mL)中并用飽和NaHCO₃水溶液(50ml)洗滌。將有機(jī)物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.47mins；MS m/z[M+H]+332.2/334.2:方法2minLowpHv03

步驟2:[5-(4-溴-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸鉀]和(R)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酸鉀和(S)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酸鉀

向[5-(4-溴-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯](211mg,0.635mmol)的干燥THF(5mL)溶液中，加入三甲基硅醇鉀(Aldrich)(107mg,0.953mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌并超聲。進(jìn)一步加入THF并將混合物攪拌3小時。將得到的混合物在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物的混合物；

LC-MS:Rt＝1.07mins；MS m/z[M+H]+224.2；Rt＝1.20mins；MS m/z[M+H]+306.2:方法2minLowpHv03.

步驟3:[5-(4-溴-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]以及(R)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺化合物和(S)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺(1:1)的混合物

向攪拌的5-(4-溴-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸鉀和4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酸鉀(粗混合物)(217mg,0.634mmol)的干燥NMP(4mL)溶液中加入HATU(Fluorochem)(265mg,0.697mmol)、4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(133mg,0.634mmol)和三乙胺(0.194mL,1.395mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜，并在EtOAc(25mL)和1M NaOH(25mL)之間分配。將有機(jī)物用水(30mL)、鹽水(30mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)溶解在DMSO中，并通過UV-指導(dǎo)的自動化反相色譜法，以9.5分鐘的30-70％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度純化。將產(chǎn)物流分加入到EtOAc(50mL)中，并用飽和NaHCO₃水溶液(50mL)洗滌。將有機(jī)層用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物。

實(shí)施例21.1:[5-(4-溴-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺]LC-MS:Rt＝1.30mins；MS m/z[M+H]+497.5:方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.88(1H,s),4.47(1H,mult),4.03-3.87(2H,br mults),3.80-3.72(1H,mult),3.14(3H,s),2.43-2.36(1H,br mult),2.13(3H,s),2.08(3H,s),2.01(1H,br mult),1.91-1.80(3H,br mults),1.79-1.68(5H,br mults),1.58(1H,br mult),1.31-1.18(2H,br mults),1.16-1.05(1H,br mult),0.95(3H,d).

實(shí)施例21.2:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺LC-MS:Rt＝1.25mins；MS m/z[M+H]+415.4:方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.04(1H,s),5.63(1H,mult),4.78(1H,dd),4.26-4.00(3H,br mults),3.26(3H,s),2.72-2.61(1H,br mult),2.28(3H,s),2.21(3H,s),2.07-1.93(3H,br mults),1.92-1.81(5H,br mults),1.75-1.66(2H,br mults),1.67(3H,s),1.44-1.30(2H,br mults),1.30-1.18(1H,br mult).

實(shí)施例22:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,5R)-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺

在氮?dú)饬飨拢?R)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺化合物和(S)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺(1:1)的混合物(實(shí)施例21.2)(35mg,0.084mmol)的EtOH(15mL)溶液中加入Pd-C(3.59mg,0.034mmol)。在氫氣氣氛、0.35bar下，將反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時。將得到的混合物通過過濾，用乙醇洗滌。將濾液在減壓下濃縮并在重力下通過1g Biotage二氧化硅-TMT柱。將該柱用乙醇洗滌并在減壓下濃縮洗脫液。將粗物質(zhì)溶解在DMSO中，并通過UV-指導(dǎo)的自動化反相色譜法以9.5分鐘的30-70％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度純化。將產(chǎn)物流分加入至EtOAc(30mL)中，并用飽和NaHCO₃(30mL)水溶洗滌液。將有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt 1.23mins；MS m/z[M+H]+417.4；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.35(1H,mult),4.77(1H,mult),4.17-3.99(2H,mults),3.72(1H,dd),3.50(1H,dd),3.34(3H,mult),2.29-2.22(6H,mults),2.08-1.97(4H,mults),1.86(3H,mults),1.75(1H,mult),1.63(1H mult),1.37(2H,mult),1.30-1.22(3H,mult),1.05(2H,mult),0.87(1H,mult).

采用超臨界流體色譜法手性分離實(shí)施例22，得到順式非對映體的兩種個體對映異構(gòu)體和反式非對映體的外消旋混合物：

方法細(xì)節(jié):

實(shí)施例22.a N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺的單一立體異構(gòu)體

SFC保留時間＝9.74mins

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.04(1H,br s),4.80-4.75(1H,br mult),4.05(1H,tt),3.76-3.70(1H,dd),3.55-3.48(1H,dd),3.25(3H,s),2.28(3H,s),2.21(3H,s),2.07-1.93(2H,br mults),1.93-1.75(8H,br mults),1.71(1H,br mult),1.67-1.58(1H,br mult),1.44-1.30(2H,br mults),1.30-1.18(1H,br mult),1.05(3H,d).

實(shí)施例22.b:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺的單一立體異構(gòu)體

SFC保留時間＝8.12mins

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.10(1H,br s),4.79-4.76(1H,br mult),4.06(1H,tt),3.75-3.70(1H,dd),3.53-3.48(1H,dd),3.27(3H,s),2.28(3H,s),2.22(3H,s),2.03-1.95(2H,mult),1.92-1.77(8H,br mults),1.71(1H,br mult),1.66-1.59(1H,br mult),1.42-1.32(2H,br mults),1.27-1.20(1H,br mult),1.05(3H,d).

實(shí)施例22.c:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2S,5R)-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,5S)-5-甲基四氫-2H-吡喃-2-基)異唑-3-甲酰胺的混合物

SFC保留時間＝5.84mins

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.10(1H,br s),4.50(1H,dd),4.10-3.98(2H,br mults),3.26(3H,s),3.17(1H,t),2.27(3H,s),2.21(3H,s),2.09-1.92(4H,br mults),1.93-.177(7H,br mults),1.71(1H,br d),1.42-1.17(3H,br mults),0.87(3H,d).

實(shí)施例23:

5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物

步驟1:2,2-二甲基丁-3-烯-1-醇

向2,2-二甲基丁-3-炔-1-醇(PharmaBlocks)(3g,30.6mmol)的干燥乙醚(40mL)溶液加入2,2'-(乙烷-1,2-二基雙(硫烷二基))二乙醇(5.57g,30.6mmol)，隨后加入5％在硫酸鋇上的Pd(Aldrich)(6.51g,3.06mmol)。將混合物徹底脫氣，再填充氮?dú)?，并在氫氣氣氛下、在室溫攪?小時。將得到的混合物在減壓下過濾，用乙醚洗滌結(jié)晶。將濾液小心在減壓下濃縮以除去大部分的溶劑。將得到的混懸液過濾并將濾液在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.71(1H,dd),5.05-4.97(2H,mults),3.27(2H,s),1.41(1H,br mult),0.95(6H,s).

步驟2:5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物

在氮?dú)鈿夥障拢虮鋮s的2,2-二甲基丁-3-烯-1-醇(328mg,3.28mmol)、溴化銦(III)(56.6mg,0.164mmol)和干燥DCM(20mL)的混合物中加入溴三甲基硅烷(0.425mL,3.28mmol)并將得到的混合物在冰冷卻下攪拌30mins。歷經(jīng)15分鐘將冰冷的5-甲酰基-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體C)(600mg,3.28mmol)的干燥DCM(2mL)溶液加至反應(yīng)混合物中，并將反應(yīng)混合物在冰冷卻下攪拌85分鐘。在0℃，將得到的混合物在攪拌下用飽和NaHCO₃水溶液(10mL)處理。將兩相的混合物通過相分離柱，并將濾液在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-60％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.48mins；MS m/z[M+H]+346.2/348.2:方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.12(1H,dd),4.45(2H,q),4.10-4.01(2H,mult),2.73-2.65(1H,mult),2.46-2.39(1H,mult),2.27(3H,s),1.82(3H,s),1.80(3H,s),1.43(3H,t).

步驟3:5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸的混合物

向攪拌的5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯的混合物(442mg,1.277mmol)的THF(10mL)和MeOH(1mL)溶液中加入2M NaOH(aq)(1.277mL,2.55mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌。一旦完成后，將反應(yīng)加至水(20mL)中并通過加入1M HCl(aq)酸化至pH 5-6。將水混合物用EtOAc(40mL)萃取并將合并的有機(jī)萃取物用鹽水(20mL)洗滌，用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.18mins；MS m/z[M+H]+318.4/320.5:方法2minLowpHv03

步驟4:5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物

在氮?dú)鈿夥铡?℃下，向攪拌的DMF(0.073mL,0.943mmol)的干燥DCM(15mL)混合物中，加入草酰氯(0.045mL,0.519mmol)。5分鐘后加入5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸的混合物(150mg,0.471mmol)的干燥DCM(3mL)溶液，并將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘。加入4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(109mg,0.519mmol)的干燥DCM(2mL)和三乙胺(0.197mL,1.414mmol)的溶液并將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌40分鐘。將得到的混合物在DCM(30mL)和飽和的NaHCO₃水溶液(30mL)之間分配。將有機(jī)物通過相分離柱并在減壓下濃縮洗脫液。將粗物質(zhì)溶解在DMSO中，并通過UV-指導(dǎo)的自動化反相色譜法以9.5分鐘的30-70％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度純化。將產(chǎn)物流分加入至EtOAc(50mL)中，并用飽和NaHCO₃水溶液(50mL)洗滌。將有機(jī)層用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC:Rt＝1.26mins:方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06(1H,br s),5.19(1H,t),4.53(1H,mult),4.40(1H,mult),4.05(1H,tt),3.26(3H,s),2.92-2.77(2H,br mult),2.28(3H,s),2.21(3H,s),2.06-1.94(2H,br mults),1.92-1.83(4H,br mults),1.72(3H,s),1.72-1.63(1H,br mults),1.64(3H,s),1.44-1.30(2H,br mults),1.29-1.19(1H,br mult).

實(shí)施例24:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,4R)-4-異丙基四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,4S)-4-異丙基四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物

在氮?dú)饬飨?，?-(4-(2-溴丙-2-基)四氫呋喃-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺(62mg,0.122mmol)的乙醇(10mL)中加入Pd-C(5.18mg,0.049mmol)。將混合物在氫氣氣氛下在0.35bar和室溫攪拌過夜。向反應(yīng)混合物中加入NaHCO₃(40.9mg,0.487mmol)并將反應(yīng)混合物在氫氣氣氛下在0.35bar和室溫攪拌2.5小時。將得到的混合物通過過濾，用EtOH洗滌。將濾液通過Biotage 1g二氧化硅-TMT柱，并在減壓下除去洗脫液。將粗物質(zhì)通過制備HPLC-MS以9.5分鐘的30-98％MeCN的水(0.1％TFA)溶液梯度純化。將產(chǎn)物流分溶解在EtOAc(20mL)中并用飽和NaHCO₃水溶液(20mL)洗滌。將有機(jī)層用鹽水(10mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.30mins；MS m/z[M+H]+431.5:方法2minLowpHv03.

采用超臨界流體色譜法手性分離實(shí)施例24，得到個體對映異構(gòu)體。

方法細(xì)節(jié):

實(shí)施例24.a:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,4R)-4-異丙基四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,4S)-4-異丙基四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

SFC Rt＝3.99mins

LC-MS；Rt＝1.30mins；MS m/z[M+H]+431.5；方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.99(1H,br s),5.09(1H,mult),4.09(1H,t),4.10-4.00(1H,tt),3.69(1H,t),3.24(3H,s),2.45-2.36(1H,mult),2.25(3H,s),2.21(3H,s),2.18-2.09(1H,br mult),2.06-1.93(2H,br mults),1.91-1.83(5H,br mults),1.71(1H,br mult),1.67-1.60(1H,br mult),1.44-1.30(2H,br mults),1.29-1.19(1H,br mult),1.00(3H,d),0.95(3H,d).

實(shí)施例24.b:N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,4R)-4-異丙基四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,4S)-4-異丙基四氫呋喃-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

SFC Rt＝5.42mins

LC-MS:Rt 1.30mins；MS m/z[M+H]+431.6:方法2minLowpHv03

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06(1H,br s),5.12-5.06(1H,mult),4.12-4.01(2H,mults),3.69(1H,t),3.26(3H,s),2.44-2.36(1H,mult),2.26(3H,s),2.21(3H,s),2.18-2.08(1H,mult),2.05-1.95(2H,br mults),1.91-1.83(5H,br mults),1.71(1H,br mult),1.68-1.59(1H,mult),1.44-1.31(2H,br mults),1.30-1.19(1H,br mult),1.00(3H,s),0.95(3H,s).

實(shí)施例25:

5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

步驟1:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

向5-甲酰基-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體C)(50mg,0.273mmol)的甲苯(0.5mL)溶液中加入3,3-二甲基丁烷-1,2-二醇(32.3mg,0.273mmol)并將混合物在110℃加熱4.5小時。將得到的混合物在EtOAc和水之間分配，并將有機(jī)層用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.42mins；MS m/z[M+H]+284.3:方法2minHighpHv03

步驟2:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸鉀

向5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(42mg,0.148mmol)的THF(4mL)溶液中加入三甲基硅醇鉀(19.02mg,0.148mmol)并將混合物在室溫攪拌1.5小時。將得到的混合物在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物。

步驟3:5-((2R,4R)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2R,4S)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2S,4R)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺和5-((2S,4S)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的混合物

向5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酸鉀(43.5mg,0.148mmol)的NMP(0.7mL)溶液中加入HATU(62.0mg,0.163mmol)、三乙胺(45.5μl,0.326mmol)和4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中間體D)(31.0mg,0.148mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。向得到的混合物中加入水和EtOAc。將有機(jī)物用鹽水洗滌(x2)，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物，為非對映異構(gòu)體的混合物。

實(shí)施例25a-25d:

5-((2R,4R)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2S,4R)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺或5-((2S,4S)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

采用超臨界流體色譜法手性分離5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺，得到個體對映體。

方法細(xì)節(jié):

實(shí)施例25a:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的個體立體異構(gòu)體SFC:Rt＝3.36mins

LC-MS:Rt＝4.11mins；MS m/z[M+H]+447.6:方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.29(1H,br s),6.02(1H,s),4.14-4.00(2H,mults),3.97-3.87(2H,mults),3.36(3H,s),2.31(3H,s),2.23(3H,s),2.09-1.97(2H,mults),1.88(3H,br t),1.73(1H,br d),1.44-1.31(2H,mults),1.30-1.20(2H,mults),1.01(9H,s).

實(shí)施例25b:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的個體立體異構(gòu)體手性SFC:Rt＝3.78mins

LC-MS:Rt＝4.12mins；MS m/z[M+H]+447.5；方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06(1H,br s),6.19(1H,s),4.16-4.00(3H,mults),3.85(1H,t),3.30(3H,s),2.30(3H,s),2.22(3H,s),2.07-1.94(2H,mults),1.87(3H,br t),1.72(1H,br d),1.45-1.20(4H,mults),0.99(9H,s).

實(shí)施例25c:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的個體立體異構(gòu)體手性SFC:Rt＝4.05mins

LC-MS:Rt＝4.09mins；MS m/z[M+H]+447.5；方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.99(1H,br s),6.02(1H,s),4.10-4.01(2H,mults),3.97-3.87(2H,mults),3.25(3H,s),2.32(3H,s),2.21(3H,s),2.06-1.93(2H,mults),1.88(3H,br t),1.71(1H,br d),1.44-1.30(2H,mults),1.30-1.20(2H,mults),1.00(9H,s).

實(shí)施例25d:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺的個體立體異構(gòu)體手性SFC:Rt＝5.95mins

LC-MS:Rt＝4.15mins；MS m/z[M+H]+447.6；方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.00(1H,br s),6.20(1H,s),4.16-4.09(2H,mults),4.07-4.00(2H,mults),3.27(3H,s),2.30(3H,s),2.21(3H,s),2.07-1.94(2H,mults),1.87(3H,br t),1.72(1H,br d),1.45-1.20(4H,mults),0.99(9H,s).

實(shí)施例26:

N-(2-環(huán)己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基異唑-3-甲酰胺

通過與實(shí)施例25的方法類似的方法用2,2-二甲基丙烷-1,3-二醇替換3,3-二甲基丁烷-1,2-二醇(步驟1)來制備標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝3.68mins；MS m/z[M+H]+433.4；方法8minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.98(1H,s),5.58(1H,s),3.96(1H,tt),3.71(2H,d),3.55(2H,d),3.18(3H,s),2.26(3H,s),2.11(3H,s),1.97-1.86(2H,mults),1.80-1.74(3H,mults),1.62(1H,br d),1.33-1.11(4H,mults),1.23(3H,s),0.75(3H,s).

中間體A:

5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

步驟1:4-甲基-5-氧代-4,5-二氫異唑-3-甲酸乙酯

向草酰丙酸二乙酯(diethyl oxalyl propionate)(300g,1.48mol)的乙醇(2l)溶液中加入鹽酸羥胺(124g,1.78mol)并將反應(yīng)混合物在80℃加熱3小時。將得到的混合物冷卻至室溫并在減壓下除去溶劑。將殘留物用水和DCM處理并將水混合物用DCM萃取。將合并的有機(jī)物干燥并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.40(2H,q),2.09(3H,s),1.38(3H,t).

步驟2:5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

將4-甲基-5-氧代-4,5-二氫異唑-3-甲酸乙酯(42.5g,248mmol)和三溴氧磷(199g,695mmol)一起攪拌，并加熱至80℃。歷經(jīng)15mins，滴加加入三乙胺(34.6mL,248mmol)，并將反應(yīng)混合物在80℃攪拌3小時。將得到的混合物冷卻至室溫。加入DCM(400mL)，并在攪拌下將混合物倒入冰(～400mL)中。加入2M NaOH(aq)(1250mL)，直到pH 7，并分離得到的層。將水層用DCM萃取(2x 300mL)，并合并得到的有機(jī)萃取物，用水(400mL)、硫代硫酸鈉(5％w/v溶液,400mL)、水(400mL)和鹽水(400mL)洗滌。將有機(jī)物用MgSO₄和碳干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.02mins:MS m/z[M+H]+234.0:方法2minLowpH

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.47(2H,q),2.21(3H,s),1.44(3H,t).

中間體B:

5-((1R,2S)-1,2-二羥基丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

步驟1:(E)-4-甲基-5-(丙-1-烯-1-基)異唑-3-甲酸乙酯

將反式-1-丙烯基三氟硼酸鉀(9.86g,66.7mmol)、PdCl₂(dppf).DCM加合物(907mg,1.11mmol)、5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(13g)和三乙胺(7.7mL)的EtOH(250mL)混懸液在真空下脫氣并用氮?dú)饣靥?，然后?0℃加熱18h。冷卻至室溫后，將反應(yīng)在EtOAc和鹽水之間分配，分離，用MgSO₄干燥，并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用5-10％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.30mins；MS m/z[M+H]+196.2；方法2minLowpHv03

步驟2:5-((1R,2S)-1,2-二羥基丙基)-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

將(E)-4-甲基-5-(丙-1-烯-1-基)異唑-3-甲酸乙酯(500mg,2.56mmol)的tert-BuOH-水(1mL)溶液分次加至在tert-BuOH-水(1:1,19mL)中的AD-mix-beta(3.59g,7.63mmol)、甲烷磺酰胺(731mg,7.68mmol)、修飾的AD-mix-β(DHQD)₂PHAL(80mg,0.102mmol)和四氧化鋨(0.836mL 2.5wt％tert-BuOH溶液,0.067mmol)的混合物中，并將得到的反應(yīng)混合物在室溫攪拌1.5hr。一次性加入亞硫酸鈉(3.9g)，并將反應(yīng)攪拌30mins。分離各相并將EtOAc相用Na₂SO₄干燥，并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用65-75％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物(96％ee)；

LC-MS:Rt＝0.78mins；MS m/z[M+H]+230.2；方法2minLowpHv03

中間體C:

5-甲酰基-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

步驟1:4-甲基-5-乙烯基異唑-3-甲酸乙酯

將5-溴-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯(中間體A)(15g,64.1mmol)和三丁基(乙烯基)錫烷(22.48mL,77mmol)在干燥二烷(250mL)中攪拌，在室溫用氮?dú)鉀_洗90分鐘。加入四(三苯基膦)鈀(3.70g,3.20mmol)，并將反應(yīng)混合物在100℃攪拌過夜。將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯(250mL)和水(250mL)之間分配并分離。向有機(jī)層中加入氟化鈉溶液(～1M,250mL)，并將得到的混懸液通過過濾。分離各層和將有機(jī)物用水、鹽水洗滌，用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-30％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.20mins:MS m/z[M+H]+182.5:方法2minLowpHv03

步驟2:5-甲酰基-4-甲基異唑-3-甲酸乙酯

在室溫，向4-甲基-5-乙烯基異唑-3-甲酸乙酯(3g,16.56mmol)的THF(40mL)和水(20mL)溶液中，加入高碘酸鈉(10.62g,49.7mmol)和鋨ENCAT 40(828mg,0.248mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過周末。將得到的混合物通過(5g)過濾，用EtOAc洗滌。分離各層，并將水層用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)萃取物用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)混懸在DCM中，超聲并通過相分離柱。收集洗脫液并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.12(1H,s),4.50(2H,q),2.56(3H,s),1.46(3H,s).

中間體D:

4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

步驟1:2-環(huán)己基-5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

將環(huán)己基肼鹽酸鹽(AK Scientific)(700g,4643mmol)加至攪拌的DCM(3000mL)和冰冷的2M氫氧化鈉溶液(1778mL,3556mmol)的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌10分鐘。分離得到的相并將水層用DCM萃取(4x 2000mL)。將合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾并在減壓下濃縮。將得到的固體溶解在水(1300mL)中，向其中加入乙酸(1300mL)和乙酰乙酸乙酯(Fluka)(450mL,3556mmol)并將反應(yīng)混合物在85℃攪拌1小時。將得到的混合物在減壓下濃縮至干，并將殘留物溶解在DCM(3000mL)和水(1000mL)中。采用2M K₂CO₃(aq)將pH調(diào)節(jié)至pH 9，分離各相并將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌(1x 2L)。將第一水層用氯化鈉飽和，并將合并的水相用DCM萃取(4x 2L)。將合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到固體。將粗固體粉碎，加入TBME(2000mL)并將混合物在50℃攪拌1小時，隨后在室溫攪拌1小時。將得到的混懸液過濾，用TBME(4x 500mL)洗滌固體。將分離的固體在真空下在45℃干燥16小時，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.62(1H,br s),5.06(1H,s),3.89(1H,mult),1.98(3H,s),1.81-1.55(7H,mults),1.36-1.22(2H,mults),1.18-1.05(1H,mult).

步驟2:2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

將2-環(huán)己基-5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(525g,2834mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2200mL)混懸液加熱至40℃，加入碘甲烷(532mL,8502mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至70℃反應(yīng)20小時。再加入碘甲烷(177mL,2834mmol)，并將混合物在75℃攪拌3.5小時，然后在80℃攪拌20小時。將得到的混合物在減壓下濃縮，并將殘留物用TBME(2000mL)研磨。通過過濾收集產(chǎn)物，用TBME(5x 500mL)洗滌，得到固體。將分離的固體混懸在DCM(2500mL)和水(500mL)中，并采用2M K₂CO₃水溶液(1700mL)將pH調(diào)節(jié)至pH 9。分離各相并將水層用DCM萃取(3x 500mL)。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水(1000mL)洗滌，并在減壓下濃縮。將得到的殘留物溶解在乙酸乙酯(2000mL)中，用無水硫酸鈉干燥并通過200g硅膠(40-63μm)過濾，用10％MeOH的EtOAc溶液(7x 300mL)洗脫。將濾液在減壓下濃縮并在65℃干燥，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.02(1H,s),3.84(1H,tt),3.14(3H,s),2.06(3H,s),1.98-1.86(2H,mults),1.78-1.53(5H,mults),1.33-1.20(2H,mults),1.18-1.04(1H,mult).

步驟3:2-環(huán)己基-1,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮

向冷卻至-15℃的三氟乙酸(1940mL)中，加入2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(535g,2231mmol)并將反應(yīng)混合物冷卻至0℃。歷經(jīng)90分鐘滴加加入硝酸90％(211mL,4461mmol)，保持溫度低于15℃并將反應(yīng)混合物在10℃攪拌30分鐘。將得到的混合物緩慢倒入冰水(8L)中并攪拌30分鐘。通過過濾收集固體并用水(2x 2L)、飽和碳酸氫鈉溶液(1x 2L)、水(2x 2L)、TBME(3x 2L)和庚烷(2x 2L)洗滌。將分離的固體在真空爐中干燥，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.06(1H,tt),3.61(3H,s),2.57(3H,t),2.15-2.03(2H,mults),1.81-1.65(4H,mults),1.64-1.55(1H,mult),1.38-1.24(2H,mults),1.19-1.06(1H,mult).

步驟4:4-氨基-2-環(huán)己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

向2-環(huán)己基-1,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮(415g,1.73mol)的MeOH(4500mL)和THF(4500ml)溶液中，加入10％Pd/C(70g)并將反應(yīng)混合物在0.1bar和RT氫化57.5h。將得到的混合物通過壓力過濾器過濾，并用甲醇(1x1L)和THF(2x 1L)洗滌。將濾液在減壓下濃縮，得到深紅色油狀物。將油狀物立即溶解在TBME(4L)中，并在減壓下濃縮至約2L，并接種(100mg)。將混懸液在RT攪拌2h并在冰浴中冷卻1hr。通過過濾收集固體并用冰冷的TBME分次洗滌，直到濾液無色并在真空下干燥，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt 0.55mins；MS m/z 210.1[M+H]⁺；方法(SRPb)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.68(1H,tt),3.53(2H,br s),2.77(3H,s),1.96-1.83(2H,mults),1.92(3H,s),1.78-1.69(2H,mults),1.64-1.53(3H,mults),1.33-1.19(2H,mults),1.17-1.04(1H,mult).

中間體E:

4-氨基-2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

步驟1:2-環(huán)丁亞基肼甲酸叔丁酯

將環(huán)丁酮(16.96ml,227mmol)和肼甲酸叔丁酯(30g,227mmol)的異己烷(378mL)混合物在氮?dú)鈿夥障聰嚢杌亓?小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并攪拌1小時。將得到的混懸液過濾，用異己烷淋洗固體(x2)。將固體在30℃在真空下干燥，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.16(1H,br s),3.02(2H,mult),2,81(2H,mult),2.10-2.00(2H,mult),1.53(9H,s).

步驟2:2-環(huán)丁基肼甲酸叔丁酯

在氮?dú)鈿夥障?，歷經(jīng)1.5小時，將2-環(huán)丁亞基肼甲酸叔丁酯(5.0g,27.1mmol)的THF(50mL)溶液滴加加至硼烷四氫呋喃絡(luò)合物溶液(33.9mL,33.9mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌2.5小時。滴加加入硼烷四氫呋喃(3mL,3mmol)并將混合物在室溫攪拌過夜。通過加入水(50mL)將得到的混合物小心猝滅并將混合物在減壓下濃縮。將殘留物用水(30mL)稀釋，并用EtOAc(2x 200mL)萃取，采用鹽水以助分離。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用0-10％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物。

步驟3:1-環(huán)丁基-2-甲基肼

在氮?dú)鈿夥障?，?-環(huán)丁基肼甲酸叔丁酯(1.0g,5.37mmol)的THF(26.8mL)溶液滴加加至2.4M氫化鋁鋰的THF溶液(11.63mL,27.9mmol)中。一旦加入完成，將反應(yīng)混合物回流攪拌20小時。采用冰浴將得到的混合物冷卻，向其中加入水(1mL)、15％NaOH(1mL)和水(3mL)。將得到的混懸液攪拌15分鐘，然后通過過濾。向?yàn)V液中加入HCl(4M的二烷溶液,1.4mL,5.6mmol)，并在減壓下除去溶劑，與EtOH(x2)共沸。將混合物用乙醚研磨，并將得到的固體過濾并用乙醚洗滌。在減壓下將固體干燥，得到標(biāo)題化合物。

步驟4:(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)-3-氧代丁酸甲酯

在室溫和在氮?dú)鈿夥障?，將戴?馬丁試劑(Dess-Martin periodinan)(2.84g,6.69mmol)的DCM(50mL)溶液加至Boc-L-蘇氨酸甲酯(1.3g,5.57mmol)的DCM(20mL)溶液中。將白色混懸液在室溫攪拌3小時。將得到的混合物用DCM(50mL)稀釋并通過加入含有0.5M亞硫酸鈉(6.2g)的飽和NaHCO₃(aq)(50mL)猝滅。分離各相，并將有機(jī)層用飽和NaHCO₃(aq)(50mL)和水洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用10-50％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.72(1H,br d),5.07(1H,d),3.84(3H,s),2.38(3H,s),1.46(9H,s).

步驟5:(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸叔丁酯

將(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)-3-氧代丁酸甲酯(400mg,1.730mmol)的EtOAc(6.407mL)溶液用1-環(huán)丁基-2-甲基肼(284mg,2.076mmol)處理，隨后加入乙酸鈉(213mg,2.59mmol)。將混懸液在室溫攪拌30分鐘并在80℃攪拌4小時。將得到的混合物用水(10mL)稀釋并加入EtOAc。分離各層，并將水層用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將殘留物溶解在EtOAc中，并加入異己烷。將得到的混懸液過濾并將固體用異己烷淋洗。將濾液在減壓下濃縮。然后將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法純化，采用50-100％EtOAc的異己烷溶液洗脫，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.19(1H,br s),4.61(1H,mult),3.23(3H,s),2.85-2.72(2H,mults),2.39-2.30(2H,mults),2.17(3H,s),1.93-1.83(1H,mult),1.81-1.71(1H,mult),1.48(9H,s).

步驟6:4-氨基-2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

向(2-環(huán)丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸叔丁基酯的DCM(5mL)溶液中加入硫酸(0.034mL,0.634mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將另外的硫酸(0.068mL,1.268mmol)加至反應(yīng)混合物中，并將其攪拌2小時。將得到的混合物用DCM和水稀釋，并分離各層。通過滴加2M NaOH(aq)使水層成堿性。將水層用DCM萃取(x3)并使合并的有機(jī)萃取物通過相分離柱。在減壓下濃縮洗脫液，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.54(1H,mult),2.94(3H,s),2.72(2H,mults),2.43(2H,br s),2.36-2.26(2H,mults),2.04(3H,s),1.90-1.78(1H,mult),1.78-1.67(1H,mult).

中間體F:

2,2-二甲基己-5-烯-3-醇

在0℃向三甲基乙醛(10.2mL,90.9mmol)的乙醚(200mL)溶液中加入烯丙基溴化鎂(100mL,1M的醚溶液)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時。將得到的混合物用飽和氯化銨猝滅并用乙醚萃取。將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，用Na₂SO₄干燥并過濾。在減壓下小心地除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.95-5.83(1H,mult),5.18(1H,mult),5.15(1H,mult),3.28(1H,mult),2.45-2.35(1H,mult),2.06-1.95(1H,mult),1.62(1H,s),0.95(9H,s).

中間體G:

4-氨基-2-異丙基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

步驟1:2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-羥基丁酸甲酯

向2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-羥基丁酸(5g,14.65mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入H₂SO₄(0.781mL,14.65mmol)。將反應(yīng)混合物回流攪拌過夜。將得到的混合物冷卻至室溫并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并采用梯度的0-100％EtOAc的異己烷溶液通過色譜法純化，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.27mins；MS m/z[M+H]+356.3:方法2minLowpHv03

步驟2:2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-氧代丁酸甲酯

向2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-羥基丁酸甲酯(1.5g,4.22mmol)的DCM(25mL)溶液中分次加入戴斯-馬丁試劑(1.790g,4.22mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將得到的混合物用DCM稀釋，并加入1:12M碳酸鈉(aq)和飽和亞硫酸鈉溶液(aq)，并在室溫攪拌15分鐘。分離各層，并將有機(jī)層用MgSO₄干燥并過濾。在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.36mins；MS m/z[M+H]+354.3:方法2minLowpHv03

步驟3:(2-異丙基-5-甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯

向在1.25M HCl的乙醇溶液(25mL)中的2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-氧代丁酸甲酯(2.766g,7.83mmol)溶液中，加入異丙基肼鹽酸鹽(1.298g,11.74mmol)。將反應(yīng)混合物回流攪拌。一旦完成后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并通過色譜法采用梯度的0-100％EtOAc的異己烷溶液和10％MeOH的EtOAc溶液純化，得到粗物質(zhì)。將粗物質(zhì)溶解在IPA中，向其中加入水，得到混濁的混合物，將其超聲并置于室溫。將得到的混懸液過濾并將固體在減壓下干燥，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.14mins；MS m/z[M+H]+378.3/379.3:方法2minLowpHv03

步驟4:(2-異丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯

向(2-異丙基-5-甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯(2.109g,5.59mmol)的DMF(30mL)溶液中加入碘甲烷(2.80mL,44.7mmol)。將反應(yīng)混合物在90℃攪拌過夜。將得到的混合物用IPA和水猝滅并用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在減壓下除去溶劑。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并采用梯度的0-10％MeOH的EtOAc溶液通過色譜法純化，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.20mins；MS m/z[M+H]+392.4:方法2minLowpHv03

步驟5:4-氨基-2-異丙基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

在室溫，向(2-異丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氫-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯(2.047g,5.23mmol)的DMF(30mL)溶液中加入哌啶(2.59mL,26.1mmol)。一旦加入完成后，將反應(yīng)混合物加至水(30mL)中。將得到的混懸液用水(100mL)稀釋，并用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)物用2M HCl(aq)萃取，將酸性水萃取物用飽和碳酸氫鈉溶液中和，并上載到C18柱上。將柱用水洗脫，并將收集的水混合物與SCX-2漿化并過濾。將樹脂用MeOH和7M氨的MeOH溶液淋洗。在減壓下除去MeOH和水濾液溶劑。將MeOH(150mL)加至得到的混合物中，超聲，過濾，并將濾液在減壓下濃縮。將EtOH加至得到的混合物中，并過濾。將濾液在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上并采用梯度的0-10％MeOH的DCM溶液通過色譜法純化，得到粗物質(zhì)。將粗物質(zhì)的MeOH溶液與SCX-2(30g)漿化。將混懸液過濾并用MeOH洗滌。然后將樹脂用7M NH₃的MeOH溶液洗脫。在減壓下濃縮該氨的甲醇溶液，得到粗物質(zhì)。然后將粗物質(zhì)吸附到二氧化硅上，并采用梯度的0-10％MeOH的DCM溶液通過色譜法純化，得到標(biāo)題化合物；

LC-MS:Rt＝1.48mins；MS m/z[M+H]+170.2:8minHighpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(2H,br s),4.42(1H,mult),3.28(3H,s),2.25(3H,s),1.36(6H,d).