本發(fā)明屬于發(fā)酵工程和生物質(zhì)能源領(lǐng)域，涉及利用多菌種混合發(fā)酵秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的方法，該方法能夠?qū)⒔斩捇蛘哳A(yù)處理的秸稈等纖維質(zhì)原料降解的葡萄糖和木糖轉(zhuǎn)化為乙醇，實(shí)現(xiàn)秸稈中葡萄糖和木糖的徹底利用。

背景技術(shù)：

以木質(zhì)纖維素為原料生產(chǎn)燃料乙醇是當(dāng)前能源領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。木質(zhì)纖維素類(lèi)物質(zhì)主要由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素組成。木質(zhì)纖維原料中纖維素約占干重的35～45％，半纖維素約占20～40％。纖維素水解產(chǎn)物為葡萄糖；而半纖維素水解產(chǎn)物較復(fù)雜，主要是以木糖和葡萄糖為主的單糖。所有這些水解產(chǎn)物中，葡萄糖和木糖含量占絕大部分。因此，葡萄糖和木糖的高效充分轉(zhuǎn)化是纖維素乙醇生產(chǎn)必須解決的關(guān)鍵問(wèn)題。

研究表明，充分利用木質(zhì)纖維原料中的木糖發(fā)酵生成乙醇，能使木質(zhì)纖維原料乙醇發(fā)酵的產(chǎn)量在原有基礎(chǔ)上增加25％。因此，木糖的乙醇發(fā)酵一直被人們視為木質(zhì)纖維原料生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)乙醇是否經(jīng)濟(jì)可行的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。自然界僅有少數(shù)細(xì)菌、酵母菌和真菌可發(fā)酵木糖產(chǎn)乙醇，利用微生物發(fā)酵木糖合成乙醇的代謝過(guò)程如圖1所示，這些菌株大多存在副產(chǎn)物(甘油、木糖醇等)多、乙醇收率低、對(duì)水解物中低濃度抑制物敏感、乙醇耐受性低等問(wèn)題。傳統(tǒng)的用于乙醇發(fā)酵生產(chǎn)的微生物(釀酒酵母和運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌)都能很好地利用葡萄糖，且乙醇發(fā)酵效率高，乙醇耐受能力強(qiáng)，但均不能代謝木糖。因此，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外許多研究者致力于構(gòu)建可以高效代謝五碳糖(主要是木糖)和六碳糖產(chǎn)乙醇的基因重組菌，如中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)cn101942435a通過(guò)在釀酒酵母中導(dǎo)入博伊丁假絲酵母代謝木糖相關(guān)酶的編碼基因的片段，使釀酒酵母能夠分泌表達(dá)木糖異構(gòu) 酶，能夠有效利用木糖生產(chǎn)乙醇。但利用基因重組菌進(jìn)行乙醇發(fā)酵的過(guò)程中，也存在菌種退化等問(wèn)題。

基于以上研究現(xiàn)狀，本發(fā)明提出了一種基于多菌種混合菌系(包括發(fā)酵葡萄糖菌種和發(fā)酵木糖菌種)發(fā)酵秸稈水解產(chǎn)物(主要為葡萄糖和木糖)高效生產(chǎn)燃料乙醇的方法。該方法最大化地把秸稈中的葡萄糖和木糖轉(zhuǎn)化為乙醇，并顯著降低副產(chǎn)物甘油的合成，有利于乙醇的高產(chǎn)率生產(chǎn)和有效分離，大幅度降低纖維素乙醇的生產(chǎn)成本，為實(shí)現(xiàn)纖維原料生產(chǎn)燃料乙醇的工業(yè)化提供技術(shù)基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種基于多菌種混合菌系(包括葡萄糖發(fā)酵菌種和木糖發(fā)酵菌種)發(fā)酵秸稈水解產(chǎn)物(主要為葡萄糖和木糖)高效生產(chǎn)燃料乙醇的方法，以充分利用秸稈水解產(chǎn)物葡萄糖和木糖生產(chǎn)乙醇，并降低副產(chǎn)物甘油的合成，實(shí)現(xiàn)生物質(zhì)的高效利用和纖維素乙醇生產(chǎn)成本的有效降低。

本發(fā)明的第一方面涉及一種生產(chǎn)燃料乙醇的方法，包括以下步驟：

1)以葡萄糖和木糖的混合液或者生物質(zhì)(例如玉米秸稈、小麥秸稈或水稻秸稈)水解產(chǎn)物作為碳源，添加酵母粉及微量元素，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；

2)將葡萄糖發(fā)酵菌的種子液和木糖發(fā)酵菌的種子液按照1:1～1:3(v/v)的比例(例如1:2)，同時(shí)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，在25～38℃(例如27℃、30℃、32℃、33℃、35℃、36℃、37℃或38℃)的溫度下發(fā)酵36～60小時(shí)(例如40小時(shí)、15小時(shí)、48小時(shí)、50小時(shí)、55小時(shí)、56小時(shí)或58小時(shí))；

或者，

先將葡萄糖發(fā)酵菌的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，在25～38℃(例如25℃，28℃，35℃或38℃)的溫度下發(fā)酵24～36小時(shí)(例如28小時(shí)、30小時(shí)、32小時(shí)或36小時(shí))，再接種木糖發(fā)酵菌的種子液，在25～42℃(例如25℃，28℃，38℃或42℃)繼續(xù)發(fā)酵12～36小時(shí)(例如20小時(shí)、25 小時(shí)、30小時(shí)、32小時(shí)或36小時(shí))，其中葡萄糖發(fā)酵菌的種子液和木糖發(fā)酵菌的種子液按1:1～3:1(v/v)的比例(例如1:2)進(jìn)行接種。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明第一方面所述的生產(chǎn)燃料乙醇的方法，其特征在于，葡萄糖和木糖的混合液中葡萄糖濃度為24g/l～180g/l，木糖濃度為6g/l～45g/l。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明第一方面所述的生產(chǎn)燃料乙醇的方法，其特征在于，生物質(zhì)水解產(chǎn)物的制備方法包括以下步驟：

所述的生物質(zhì)水解產(chǎn)物的制備方法包括以下步驟：

用酸溶液或堿溶液浸泡生物質(zhì)(例如玉米秸稈、小麥秸稈或水稻秸稈)進(jìn)行預(yù)處理，或者將生物質(zhì)(例如玉米秸稈、小麥秸稈或水稻秸稈)接入白腐菌(例如黃孢原毛平革菌(例如phanerochaetechrysosporium)、蟲(chóng)擬蠟菌(ceriporiopsissubvermispora)等)進(jìn)行預(yù)處理，將預(yù)處理后的生物質(zhì)原料調(diào)節(jié)至ph為6.0～7.0，烘干，加水配制成濃度為30～90g/l(例如30g/l、40g/l、50g/l、60g/l、70g/l、80g/l)的溶液，添加量分別為0.1～15u/g生物質(zhì)(例如8u/g生物質(zhì)、10u/g生物質(zhì)、12u/g生物質(zhì)、15u/g生物質(zhì))，調(diào)節(jié)酶解溫度和酶解ph值，進(jìn)行水解反應(yīng)，得到生物質(zhì)水解產(chǎn)物；

或者，所述生物質(zhì)水解產(chǎn)物的制備方法包括以下步驟：

將質(zhì)加水配制成濃度為30～90g/l(例如30g/l、40g/l、50g/l、60g/l、70g/l、80g/l)的溶液，添加纖維素酶(如杰能科產(chǎn)spezymecp)和/或木聚糖酶(如杰能科產(chǎn)accellerasexc)，添加量分別為0.1～15u/g生物質(zhì)(例如8u/g生物質(zhì)、10u/g生物質(zhì)、12u/g生物質(zhì)、15u/g生物質(zhì))，調(diào)節(jié)酶解溫度和酶解ph值，進(jìn)行水解反應(yīng)，得到生物質(zhì)水解產(chǎn)物，

或者，所述的生物質(zhì)水解產(chǎn)物的制備方法包括以下步驟：

用酸溶液或堿溶液浸泡生物質(zhì)(例如玉米秸稈、小麥秸稈或水稻秸稈)進(jìn)行預(yù)處理，或者將生物質(zhì)(例如玉米秸稈、小麥秸稈或水稻秸稈)接入白腐菌(例如黃孢原毛平革菌(例如phanerochaetechrysosporium)、蟲(chóng)擬蠟菌(ceriporiopsissubvermispora)等)進(jìn)行預(yù)處理，將預(yù)處理后 的生物質(zhì)原料調(diào)節(jié)至ph為6.0～7.0，烘干，加水配制成濃度為30～90g/l(例如30g/l、40g/l、50g/l、60g/l、70g/l、80g/l)的溶液，添加纖維素酶(如杰能科產(chǎn)spezymecp)和/或木聚糖酶(如杰能科產(chǎn)accellerasexc)，添加量分別為0.1～15u/g生物質(zhì)(例如8u/g生物質(zhì)、10u/g生物質(zhì)、12u/g生物質(zhì)、15u/g生物質(zhì))，調(diào)節(jié)酶解溫度和酶解ph值，進(jìn)行水解反應(yīng)，得到生物質(zhì)水解產(chǎn)物。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明第一方面所述的生產(chǎn)燃料乙醇的方法，其特征在于，所述的微量元素為磷酸二氫鉀和/或硫酸鎂，

優(yōu)選地，磷酸二氫鉀的添加量為0.5～3g/l(例如0.1g/l、2g/l、3g/l)，硫酸鎂的添加量為0.1～1g/l(例如0.2g/l、0.5g/l、0.6g/l、1g/l)。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的生產(chǎn)燃料乙醇的方法，其特征在于，酵母粉的添加量為0.3～3g/l(例如0.5g/l、0.8g/l、1g/l、2g/l)。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明第一方面所述的生產(chǎn)燃料乙醇的方法，其特征在于以下i)至viii)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：

i)預(yù)處理前，將生物質(zhì)秸稈粉碎至粒徑為5～30mm(例如10mm、15mm、20mm、30mm)；

ii)酸溶液為0.1～0.5mol/l(例如0.2mol/l、0.3mol/l)的硫酸或鹽酸溶液；

iii)堿溶液為0.5～1mol/l(例如0.8mol/l)的naoh溶液或氨水溶液；

iv)用酸溶液或堿溶液浸泡生物質(zhì)的時(shí)間為12～24h；

v)接種白腐菌后，預(yù)處理時(shí)間為10～20天；

vi)酶解溫度為45～55℃(例如50℃)；

vii)酶解ph值為3.0～11.0(例如5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0或8.5)；

viii)酶解時(shí)間為40～55小時(shí)(例如48小時(shí)或50小時(shí))。

本發(fā)明的第二方面涉及另一種生產(chǎn)燃料乙醇的方法，包括以下步 驟：

1)用酸溶液或堿溶液浸泡生物質(zhì)(例如玉米秸稈、小麥秸稈或水稻秸稈)進(jìn)行預(yù)處理，或者將生物質(zhì)原料(例如玉米秸稈、小麥秸稈或水稻秸稈)接入白腐菌(例如黃孢原毛平革菌(例如phanerochaetechrysosporium)、蟲(chóng)擬蠟菌(ceriporiopsissubvermispora等)進(jìn)行預(yù)處理，將預(yù)處理后的生物質(zhì)原料調(diào)節(jié)至ph為6.0～7.0，烘干，加水配制成濃度為30～90g/l的溶液，添加酵母粉以及微量元素，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；

2)將葡萄糖發(fā)酵菌的種子液和木糖發(fā)酵菌的種子液按照1:1～1:3(v/v)的比例(例如1:2)，同時(shí)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，并添加纖維素酶(如杰能科產(chǎn)spezymecp)和/或木聚糖酶(如杰能科產(chǎn)accellerasexc)，添加量分別為0.1～15u/g生物質(zhì)(例如8u/g生物質(zhì)、10u/g生物質(zhì)、12u/g生物質(zhì)、15u/g生物質(zhì))，設(shè)置發(fā)酵溫度25～38℃(例如30℃、32℃、35℃)，發(fā)酵36～60小時(shí)(例如56小時(shí))；

或者，

先將葡萄糖發(fā)酵菌的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，并添加纖維素酶(如杰能科產(chǎn)spezymecp)和/或木聚糖酶(如杰能科產(chǎn)accellerasexc)，添加量分別為0.1～15u/g生物質(zhì)(例如8u/g生物質(zhì)、10u/g生物質(zhì)、12u/g生物質(zhì)、15u/g生物質(zhì))，在25～38℃(例如30℃、32℃、35℃)的溫度下發(fā)酵24～36小時(shí)(例如30小時(shí))，再接種木糖發(fā)酵菌的種子液，在25～42℃(例如25℃，28℃，38℃或42℃)繼續(xù)發(fā)酵12～50小時(shí)(例如40小時(shí)或48小時(shí))，其中葡萄糖發(fā)酵菌的種子液和木糖發(fā)酵菌的種子液按1:1～3:1的比例進(jìn)行接種。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明第二方面所述的生產(chǎn)燃料乙醇的方法，其特征在于以下i)至vii)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：

i)預(yù)處理前，將生物質(zhì)秸稈粉碎至粒徑為5～30mm(例如10mm、15mm、20mm、30mm)；

ii)酸溶液為0.1～0.5mol/l(例如0.2mol/l、0.3mol/l)的硫酸或鹽酸溶液；

iii)堿溶液為0.5～1mol/l(例如0.8mol/l)的naoh溶液或氨水 溶液；

iv)用酸溶液或堿溶液浸泡生物質(zhì)的時(shí)間為12～24h；

v)接種白腐菌后，預(yù)處理時(shí)間為10～20天；

vi)微量元素為磷酸二氫鉀和/或硫酸鎂；

優(yōu)選地，磷酸二氫鉀的添加量為0.5～3g/l(例如0.1g/l、2g/l、3g/l)，硫酸鎂的添加量為0.1～1g/l(例如0.2g/l、0.5g/l、0.6g/l、1g/l)；

vii)酵母粉的添加量為0.3～3g/l(例如0.5g/l、0.8g/l、1g/l、2g/l)。

本發(fā)明中，所述的葡萄糖發(fā)酵菌選自：運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌(zymomonasmobilis)，釀酒酵母(saccharomycescerevisiae)和克魯維酵母(kluyveromycesmarxianus)等。

本發(fā)明中，所述的木糖發(fā)酵菌選自：粗糙脈孢菌(neurosporacrassa)，尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)，畢赤酵母(pichiapastoris)，嗜鞣管囊酵母(pachysolentannophilus)，休哈塔假絲酵母(candidashehatae)，嗜熱厭氧細(xì)菌(thermoanerobacterethanolicus)，芽孢桿菌(bacillusmaceran)，大腸桿菌(escherichiacoli)，構(gòu)建的可以同時(shí)利用葡萄糖和木糖的大腸桿菌(e.coli)，和運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌(z.mobilis)基因工程菌。

在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的生產(chǎn)燃料乙醇的方法，其工藝流程圖如圖2所示，包括以下步驟：

(1)葡萄糖/木糖混合液的制備

分別稱(chēng)取市售葡萄糖和木糖樣品，加水葡萄糖和木糖混合液(二者質(zhì)量比例為4:1)，其中，葡萄糖濃度范圍為：24g/l～180g/l，木糖濃度范圍為：6g/l～45g/l。

(2)秸稈水解產(chǎn)物的制備：

將秸稈(玉米秸稈、小麥秸稈、水稻秸稈或其他生物質(zhì)原料)粉碎至5～30mm粒徑，加入0.1～0.5mol/l的稀酸(硫酸或鹽酸)或0.5～1mol/l堿溶液(naoh或氨水等)等處理12～24h，或者接入白腐菌(黃孢原毛平革菌(phanerochaetechrysosporium)、蟲(chóng)擬蠟菌(ceriporiopsissubvermispora)等)處理10～20天，將預(yù)處理后的秸稈經(jīng)水洗至ph為 6.0～7.0，烘干，得到預(yù)處理的秸稈。將預(yù)處理的秸稈配制成濃度為30～90g/l，添加纖維素酶(如杰能科產(chǎn)spezymecp)和/或木聚糖酶(如杰能科產(chǎn)accellerasexc)，添加量分別為0.1～10u/g秸稈，在其最適水解溫度和ph條件下水解預(yù)處理的秸稈制備葡萄糖和木糖的混合液。

(3)發(fā)酵葡萄糖菌和發(fā)酵葡萄糖/木糖菌種子液的制備

選取葡萄糖發(fā)酵菌(例如運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌(zymomonasmobilis)，釀酒酵母(saccharomycescerevisiae)和克魯維酵母(kluyveromycesmarxianus)等)中的至少1株菌種，活化后接種于其種子培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)12～36h后，得到該菌的種子液。

選取發(fā)酵葡萄糖/木糖生產(chǎn)乙醇的菌種(粗糙脈孢菌(neurosporacrassa，尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)，畢赤酵母(pichiapastoris)，嗜鞣管囊酵母(pachysolentannophilus)，休哈塔假絲酵母(candidashehatae)，嗜熱厭氧細(xì)菌(thermoanaerobacterethanolicus)，芽孢桿菌(bacillussubtilis)和大腸桿菌(escherichiacoli)，以及構(gòu)建的可以同時(shí)利用葡萄糖/木糖的大腸桿菌和運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌基因工程菌等)中的至少1株菌種，活化后，根據(jù)該菌株生長(zhǎng)條件，接種于適合其生長(zhǎng)的種子培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)12～48h后，得到該菌的種子液。

(4)混合菌分步糖化發(fā)酵制備秸稈水解產(chǎn)物生產(chǎn)乙醇

配制發(fā)酵培養(yǎng)基：取市售葡萄糖/木糖混合液或者秸稈水解產(chǎn)物作為碳源，配制成濃度為24g/l～180g/l葡萄糖和濃度為6g/l～45g/l木糖的混合液，添加0.3～3g/l的酵母粉以及其它微量元素(其它微量元素的添加量為：0.5～3g/l磷酸二氫鉀，0.1～1g/l硫酸鎂)，滅菌備用。

在同時(shí)接種發(fā)酵生產(chǎn)乙醇時(shí)，分別取葡萄糖發(fā)酵菌和木糖發(fā)酵菌種子液，按照1:1～1:3(v/v)的比例，同時(shí)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，設(shè)置發(fā)酵溫度25～38℃，時(shí)間36～60h后。待過(guò)程結(jié)束時(shí)，發(fā)酵液中殘留葡萄糖濃度約為0.0～1.5g/l，木糖濃度約為0.0～2.5g/l，乙醇濃度約為12.0～55.0g/l，甘油濃度約為0.1～2.0g/l。

在分步接種發(fā)酵生產(chǎn)乙醇時(shí)，先取葡萄糖發(fā)酵菌種子液，設(shè)置發(fā)酵溫度25～38℃，發(fā)酵24～36h后，按葡萄糖發(fā)酵菌種子液/木糖發(fā)酵菌種子 液1:1～3:1(v/v)的比例接種木糖發(fā)酵菌種子液，在25～42℃(例如25℃，28℃，38℃或42℃)繼續(xù)發(fā)酵12～36h。待過(guò)程結(jié)束時(shí)，發(fā)酵液中殘留葡萄糖濃度約為0.0～1.5g/l，木糖濃度約為0.0～2.5g/l，乙醇濃度約為12.0～50.0g/l，甘油濃度約為0.1～3.0g/l。

(5)混合菌同步糖化發(fā)酵制備秸稈水解產(chǎn)物生產(chǎn)乙醇

將預(yù)處理的秸稈配制成濃度為30～90g/l，添加0.3～3g/l的酵母粉以及其它微量元素，包括(0.5～3g/l磷酸二氫鉀，0.1～1g/l硫酸鎂)，滅菌得到發(fā)酵培養(yǎng)基，備用。

在同時(shí)接種發(fā)酵生產(chǎn)乙醇時(shí)，分別取葡萄糖發(fā)酵菌和木糖發(fā)酵菌種子液，按照1:1～1:3(v/v)的比例，同時(shí)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，并添加市售的纖維素酶(如杰能科產(chǎn)spezymecp)和/或木聚糖酶(如杰能科產(chǎn)accellerasexc)，添加量分別為0.1～10u/g秸稈；設(shè)置發(fā)酵溫度25～38℃，時(shí)間36～60h后。待過(guò)程結(jié)束時(shí)，發(fā)酵液中殘留葡萄糖濃度約為0.0～1.5g/l，木糖濃度約為0.0～2.5g/l，乙醇濃度約為12.0～50.0g/l，甘油濃度約為0.1～2.0g/l。

在分步接種發(fā)酵生產(chǎn)乙醇時(shí)，先取葡萄糖發(fā)酵菌種子液，接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，并添加市售的纖維素酶(如杰能科產(chǎn)spezymecp)和/或木聚糖酶(如杰能科產(chǎn)accellerasexc)，添加量為0.1～10u/g秸稈；設(shè)置發(fā)酵溫度25～38℃，發(fā)酵24～36h后，按葡萄糖發(fā)酵菌種子液/木糖發(fā)酵菌種子液1:1～3:1(v/v)的比例接種木糖發(fā)酵菌種子液，在25～42℃(例如25℃，28℃，38℃或42℃)繼續(xù)發(fā)酵12～48h。待過(guò)程結(jié)束時(shí)，發(fā)酵液中殘留葡萄糖濃度約為0.0～1.5g/l，木糖濃度約為0.0～2.5g/l，乙醇濃度約為12.0～45.0g/l，甘油濃度約為0.1～3.0g/l。

本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提供的生產(chǎn)燃料乙醇的方法可以將葡萄糖高效轉(zhuǎn)化為乙醇，并同時(shí)將木糖最大程度地轉(zhuǎn)化成乙醇，發(fā)酵液中副產(chǎn)物甘油的產(chǎn)量顯著降低，顯著地改善了提取和純化步驟，纖維素乙醇的生產(chǎn)成本明顯降低。

附圖說(shuō)明

圖1為微生物發(fā)酵木糖合成乙醇及其他副產(chǎn)物(甘油和木糖醇等)的代謝圖；

圖2為本發(fā)明所述的工藝流程圖。

具體實(shí)施方式

以下以具體實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。

實(shí)施例1

分別稱(chēng)取市售葡萄糖和木糖樣品，加水將葡萄糖和木糖混合液(葡萄糖和木糖的質(zhì)量比例為4:1)，其中，葡萄糖濃度為：100g/l，木糖濃度為：25g/l，添加3g/l的酵母粉以及其它微量元素(其它微量元素的添加量為：1g/l磷酸二氫鉀，0.5g/l硫酸鎂)，得到發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌備用。

選取運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌，經(jīng)活化后接種到種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖50g/l，kh2po42g/l，酵母粉10g/l，ph7.0)，培養(yǎng)12h后，得到該菌的種子液。

選取嗜鞣管囊酵母，經(jīng)活化后接種到種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖20g/l，胰蛋白胨3.0g/l，酵母浸膏5.0g/l)，培養(yǎng)48h后，得到該菌的種子液。

將運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌種子液和嗜鞣管囊酵母的種子液按照1:1(v/v)的比例同時(shí)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，設(shè)置發(fā)酵溫度27℃，發(fā)酵48h后，發(fā)酵液中殘留葡萄糖濃度約為1.5g/l，木糖濃度約為0.5g/l，乙醇濃度約為50.0g/l，甘油濃度約為0.9g/l。

實(shí)施例2

將玉米秸稈粉碎至20mm粒徑，將秸稈配制成濃度為60g/l，添加市售的纖維素酶如杰能科產(chǎn)spezymecp和木聚糖酶制劑如杰能科產(chǎn)accellerasexc，添加量分別為15u/g秸稈，在ph為7.0、50℃條件下水 解48h，制備得到葡萄糖和木糖的混合液，添加2g/l的酵母粉以及其它微量元素(其它微量元素的添加量為：3g/l磷酸二氫鉀，1g/l硫酸鎂)，得到發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌備用。

選取釀酒酵母，經(jīng)活化后接種到種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖40g/l，kh2po43g/l，酵母粉5g/l，ph7.0)，經(jīng)培養(yǎng)18h后，得到該菌的種子液。

選取休哈塔假絲酵母，經(jīng)活化后接種到種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖30g/l，胰蛋白胨3g/l，酵母浸膏5g/l,kh2po43g/l)，經(jīng)培養(yǎng)36h后，得到該菌的種子液。

將釀酒酵母種子液和休哈塔假絲酵母種子液按照1:2(v/v)的比例同時(shí)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，設(shè)置發(fā)酵溫度27℃，發(fā)酵48h后，發(fā)酵液中殘留葡萄糖濃度約為0.5g/l，木糖濃度約為0.1g/l，乙醇濃度約為55.0g/l，甘油濃度約為1.9g/l。

實(shí)施例3

將小麥秸稈粉碎至30mm粒徑，加入0.2mol/lh2so4溶液處理24h，將預(yù)處理后的秸稈經(jīng)水洗至ph為6.0～7.0，烘干。將預(yù)處理的秸稈配制成濃度為70g/l，添加市售的纖維素酶如杰能科產(chǎn)spezymecp或木聚糖酶制劑如杰能科產(chǎn)accellerasexc，添加量為10u/g秸稈，在ph6.0、50℃水解48h，制備得到葡萄糖和木糖的混合液，添加3g/l的酵母粉以及其它微量元素(其它微量元素的添加量為：1g/l磷酸二氫鉀，0.5g/l硫酸鎂)，得到發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌備用。

選取克魯維酵母，經(jīng)活化后接種到種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖50g/l，kh2po45g/l，酵母粉10g/l，ph7.0)，經(jīng)培養(yǎng)24h后，得到該菌的種子液。

選取尖孢鐮刀菌，經(jīng)活化后接種其種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖20g/l，胰蛋白胨3g/l，酵母浸膏3g/l)，經(jīng)培養(yǎng)30h后，得到該菌的種子液。

先取克魯維酵母種子液，接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，35℃下發(fā)酵30h后， 按1:1(v/v)接種尖孢鐮刀菌種子液，調(diào)整發(fā)酵溫度為28℃，繼續(xù)發(fā)酵36h。待過(guò)程結(jié)束時(shí)，發(fā)酵液中殘留葡萄糖濃度約為0.1g/l，木糖濃度為2.0g/l，乙醇濃度為40.0g/l，甘油濃度為1.7g/l。

實(shí)施例4

將玉米秸稈粉碎至20mm粒徑，接入蟲(chóng)擬蠟菌處理20天，將預(yù)處理后的秸稈經(jīng)水洗至ph為6.0～7.0，烘干。將預(yù)處理的秸稈配制成濃度為60g/l，添加2g/l的酵母粉以及其它微量元素(其它微量元素的添加量為：1g/l磷酸二氫鉀，0.6g/l硫酸鎂)，得到發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌備用。

選取運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌，經(jīng)活化后接種到種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖50g/l，kh2po42g/l，酵母粉10g/l，ph7.0)，經(jīng)培養(yǎng)12h后，得到該菌的種子液。

選取畢赤酵母，經(jīng)活化后接種到種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖30g/l，胰蛋白胨3g/l，酵母浸膏5g/l,kh2po43g/l)，經(jīng)培養(yǎng)24h后，得到該菌的種子液。

分別取運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌種子液和畢赤酵母種子液，按照1:1(v/v)的比例同時(shí)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，并添加市售的纖維素酶如杰能科產(chǎn)spezymecp和木聚糖酶制劑如杰能科產(chǎn)accellerasexc，添加量分別為12u/g秸稈，設(shè)置發(fā)酵溫度38℃，發(fā)酵56h后，發(fā)酵液中殘留葡萄糖濃度約為0.0g/l，木糖濃度約為0.3g/l，乙醇濃度約為50.0g/l，甘油濃度約為0.9g/l。

實(shí)施例5

將水稻秸稈粉碎至15mm粒徑，加入0.5mol/lnaoh溶液處理24h，將預(yù)處理后的秸稈經(jīng)水洗至ph為6.0～7.0，烘干。將預(yù)處理的秸稈配制成濃度為30g/l，添加1g/l的酵母粉以及其它微量元素(其它微量元素的添加量為：2g/l磷酸二氫鉀，1g/l硫酸鎂)，得到發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌備用。

選取釀酒酵母，經(jīng)活化后接種到種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為： 葡萄糖40g/l，kh2po43g/l，酵母粉5g/l，ph7.0)，經(jīng)培養(yǎng)18h后，得到該菌的種子液。

選取嗜熱厭氧菌，經(jīng)活化后接種其種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖20g/l,nh4c10.90g/l，nacl0.90g/l，mgcl20.40g/l，kh2po40.75g/l，k2hpo41.50g/l，trypticase2.00g/l，yeastextract1.00g/l，fecl22.50×10^-3g/l，cysteine-hcl0.75g/l)，經(jīng)培養(yǎng)24h后，得到該菌的種子液。

先取釀酒酵母種子液，接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，并添加市售的纖維素酶如杰能科產(chǎn)spezymecp和木聚糖酶制劑如杰能科產(chǎn)accellerasexc，添加量分別為8u/g秸稈，設(shè)置發(fā)酵溫度38℃，發(fā)酵36h后，按1:1(v/v)接種嗜熱厭氧菌種子液，調(diào)整發(fā)酵溫度為42℃，繼續(xù)發(fā)酵48h。待過(guò)程結(jié)束時(shí)，發(fā)酵液中殘留葡萄糖濃度約為0.5g/l，木糖濃度為1.0g/l，乙醇濃度為27.0g/l，甘油濃度為0.7g/l。