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一種吡啶衍生物的多晶型及其制備方法、用途與流程

文檔序號(hào):12608710閱讀:318來源:國知局
一種吡啶衍生物的多晶型及其制備方法、用途與流程
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)合成領(lǐng)域,具體涉及化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺化合物的多晶型及其制備方法及其作為治療藥物,特別是作為在制備預(yù)防或治療血栓形成或栓塞的藥物中的用途。
背景技術(shù)
:血栓性疾病是嚴(yán)重危害人類健康的疾病,根據(jù)血栓形成部位、條件與性質(zhì),主要分為動(dòng)脈血栓與靜脈血栓。動(dòng)脈血栓形成是從動(dòng)脈血管壁動(dòng)脈粥樣硬化病變與血小板激活開始,其導(dǎo)致的嚴(yán)重臨床反應(yīng)主要為急性心肌梗死、腦卒中;靜脈血栓由靜脈血管中多種原因誘發(fā)形成,可導(dǎo)致靜脈血栓栓塞(venousthromboembolism,VTE),其主要臨床表現(xiàn)為深靜脈血栓形成(deepvenousthrombosis,DVT)和肺栓塞(pulmonaryembolism,PE)。VTE是繼急性冠脈綜合征與腦卒中之后的第三大心血管疾病。在醫(yī)院所有死亡病例中,VTE約占10%,歐盟6國中每年癥狀性VTE發(fā)生總數(shù)100萬,死亡病例數(shù)超過艾滋病、乳腺癌、前列腺癌及交通事故造成死亡的總和。美國死亡病例則超過29.6萬/年,而致死性PE在死亡前僅有不到50%得到確診。國際上的相關(guān)指南已將預(yù)防VTE列為降低住院患者死亡率最重要的策略之一。大規(guī)模臨床試驗(yàn)證據(jù)顯示,抗凝治療可阻止血栓的蔓延和復(fù)發(fā),并進(jìn)一步降低卒中、PE等的發(fā)生率和死亡率。因此,抗凝治療已成為目前臨床預(yù)防和治療血栓栓塞性疾病的核心和基礎(chǔ),而抗凝藥物的研發(fā)也始終是新藥研發(fā)的熱點(diǎn),尤其是以Xa因子抑制劑為靶點(diǎn)的藥物研發(fā)。本發(fā)明在不斷地研究過程中,通過試驗(yàn)摸索,意外的獲得了新的1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺化合物的多晶型。眾所周知,對(duì)于藥物的多晶型而言,不同的晶型可以具有不同的化學(xué)和物理特性,包括化學(xué)穩(wěn)定性、溶解度、光學(xué)和機(jī)械性質(zhì)等,這些性質(zhì)可以直接影響原料藥和制劑的處理和生產(chǎn)工藝過程,并且會(huì)影響到制劑的穩(wěn)定性、溶解度和生物利用度,因此,多晶型的研究對(duì)于藥物制劑的質(zhì)量、安全性和有效性具有重要意義。對(duì)于Xa因子抑制劑而言,本領(lǐng)域存在著這樣的更適合于工業(yè)化生產(chǎn)、理化性質(zhì)優(yōu)異的1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺化合物的多晶型。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本發(fā)明公開了一種如下結(jié)構(gòu)式I所示的1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺化合物的多晶型,以及各晶型制備方法,及其各晶型在制備對(duì)Xa因子抑制劑相關(guān)疾病進(jìn)行治療的藥物中的用途。更具體而言,所述用途為在制備預(yù)防或治療血栓或栓塞藥物中的用途。本發(fā)明公開的式I結(jié)構(gòu)化合物的多晶型具體包括晶型B、M1、O、P、Q、T、U、V和X。本發(fā)明提供了式I化合物的晶型B,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。進(jìn)一步的,晶型B的譜圖具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。更進(jìn)一步的,晶型B具有基本如附圖2所示的X射線粉末衍射圖譜。本發(fā)明提供了式I化合物的晶型M1,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。進(jìn)一步的,晶型M1的譜圖具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。更進(jìn)一步的,晶型M1具有基本如附圖3所示的X射線粉末衍射圖譜。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型O,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。進(jìn)一步的,晶型O的譜圖具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。更進(jìn)一步的,晶型O具有基本如附圖4所示的X射線粉末衍射圖譜。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型P,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。進(jìn)一步的,晶型P譜圖具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。更進(jìn)一步的,晶型P具有基本如附圖5所示的X射線粉末衍射圖譜。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型Q,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。進(jìn)一步的,晶型Q的譜圖具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。更進(jìn)一步的,晶型Q具有基本如附圖6所示的X射線粉末衍射圖譜。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型T,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。進(jìn)一步的,晶型T譜圖具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。更進(jìn)一步的,晶型T具有基本如附圖7所示的X射線粉末衍射圖譜。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型U,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。進(jìn)一步的,晶型U譜圖具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。更進(jìn)一步的,晶型U具有基本如附圖8所示的X射線粉末衍射圖譜。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型V,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。進(jìn)一步的,晶型V譜圖具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。更進(jìn)一步的,晶型V具有基本如附圖9所示的X射線粉末衍射圖譜。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型X,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。進(jìn)一步的,晶型X譜圖具有下表所示的衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。更進(jìn)一步的,晶型X具有基本如附圖10所示的X射線粉末衍射圖譜。本發(fā)明還公開的式I結(jié)構(gòu)化合物的多晶型具體包括晶型C、D、F、H、I、J、L、M、R和S。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型C,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度。2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型D,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型F,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型H,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型I,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度。2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型J,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型L,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型M,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度。2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型R,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明又一方面提供了式I化合物的晶型S,使用Cu-ka射線進(jìn)行X射線粉末測(cè)定,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度:2θ衍射角的誤差為±0.2。本發(fā)明還公開了式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺的制備方法:在室溫(10~25℃)條件下,起始原料2-甲基-4-硝基苯胺與5-氯代戊酰氯反應(yīng)生成化合物a,化合物a在堿性條件下發(fā)生分子內(nèi)關(guān)環(huán)生成化合物b,化合物b在五氯化磷的作用下生成化合物c,生成的化合物c進(jìn)一步在嗎啉的作用下生成化合物d,化合物d中的硝基還原后生成化合物e,化合物e再一次與4-氯代丁酰氯反應(yīng)生成化合物f,化合物f再一次發(fā)生分子內(nèi)關(guān)環(huán)生成化合物g,化合物g與[(4-甲氧基苯基)肼基]氯乙酸乙酯生成化合物h,化合物h胺解后得到式I化合物。本發(fā)明式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺的晶型B、M1、O、P、Q、T、U、V和X可以通過如下方法制備:(1)將式I結(jié)構(gòu)所示的化合物加入到樣品瓶中,加入正溶劑,在室溫或回流條件下使其完全溶解,直接或滴加反溶劑后冷卻至室溫結(jié)晶;(2)抽濾,室溫或加熱條件下常壓或真空干燥,得到不同的晶型;以及任選的,將該晶型加在反溶劑中形成懸濁液后攪拌、抽濾、干燥獲得不同晶型。其中,正溶劑是指本發(fā)明的結(jié)構(gòu)式I化合物在該溶劑中溶解性較好,正溶劑具體選自甲醇、乙醇、四氫呋喃、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、二氧六環(huán)、二氯甲烷和和乙酸乙酯中一種或多種;優(yōu)選甲醇、乙醇、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺和和乙酸乙酯中一種或多種;反溶劑是指本發(fā)明的結(jié)構(gòu)式I化合物在該溶劑中溶解性較差,反溶劑具體選自水、甲基叔丁基醚、正庚烷、正己烷和環(huán)己烷中一種或多種;優(yōu)選水、甲基叔丁基醚和正庚烷中一種或多種。進(jìn)一步,本發(fā)明式I化合物的晶型B、M1、O、P、Q、T、U、V和X可以通過如下方法制備:(1)將式I結(jié)構(gòu)所示的化合物加入到樣品瓶中,加入正溶劑,在室溫或回流條件下使其完全溶解,直接或滴加反溶劑后冷卻至室溫結(jié)晶;(2)抽濾,室溫或加熱條件下常壓或真空干燥,得到不同的晶型?;蛘撸M(jìn)一步,本發(fā)明式I化合物的晶型B、M1、O、P、Q、T、U、V和X可以通過如下方法制備:(1)將式I結(jié)構(gòu)所示的化合物加入到樣品瓶中,加入正溶劑,在室溫或回流條件下使其完全溶解,直接或滴加反溶劑后冷卻至室溫結(jié)晶;(2)抽濾,室溫或加熱條件下常壓或真空干燥,得到不同的晶型,將該晶型加在反溶劑中形成懸濁液后攪拌、抽濾、干燥獲得不同晶型。本發(fā)明通過溶解度試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),式I化合物的晶型B、晶型M1、晶型O、晶型P、晶型Q、晶型T、晶型U、晶型V或晶型X都具有很好的溶解性;通過5天和10天的化學(xué)穩(wěn)定性考察試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),式I化合物的晶型B、晶型M1、晶型O、晶型P、晶型Q、晶型T、晶型U、晶型V和晶型X均具有優(yōu)異的化學(xué)穩(wěn)定性。進(jìn)一步的,通過10天的物理穩(wěn)定性考察試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),本發(fā)明晶型具有良好的物理穩(wěn)定性。再進(jìn)一步,本發(fā)明考察了式I化合物的無定形、晶型B、晶型M1、晶型O、晶型P、晶型Q、晶型T、晶型U、晶型V和晶型X在常溫常濕條件下的吸潮性,結(jié)果顯示本發(fā)明晶型B、晶型X無吸濕性,晶型M1、晶型O、晶型P、晶型Q、晶型T、晶型V略有吸濕性,晶型U有吸濕性。通過對(duì)正常小鼠APTT的作用試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),本發(fā)明制備的無定型及各種晶型具有顯著延長小鼠APTT值的作用,均顯著優(yōu)于陽性藥阿哌沙班;而與無定型相比,本發(fā)明B晶型的APTT值極顯著增加(P<0.01),晶型M1、O、Q、X晶型的APTT值顯著增加(P<0.05);說明晶型B、晶型M1、晶型O、晶型Q、晶型X的效果相對(duì)更好。即本發(fā)明制備的式I化合物的晶型B、M1、O、Q、X可用于制備抗凝、預(yù)防或治療血栓或栓塞藥物中的用途,特別是在制備抗凝藥物中的用途或制備Xa因子抑制劑藥物中的用途。附圖說明圖1式I化合物無定型的XRPD圖譜圖2式I化合物晶型B的XRPD圖譜圖3式I化合物晶型M1的XRPD圖譜圖4式I化合物晶型O的XRPD圖譜圖5式I化合物晶型P的XRPD圖譜圖6式I化合物晶型Q的XRPD圖譜圖7式I化合物晶型T的XRPD圖譜圖8式I化合物晶型U的XRPD圖譜圖9式I化合物晶型V的XRPD圖譜圖10式I化合物晶型X的XRPD圖譜具體實(shí)施方式以下將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述,本發(fā)明的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案,并非限制本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍。化合物的結(jié)構(gòu)是通過核磁共振(1HNMR)來測(cè)定的。核磁共振(1HNMR)位移(δ)以百萬分之一(ppm)為單位給出;核磁共振(1HNMR)的測(cè)定是用BrukerAVANCE-400核磁儀進(jìn)行,測(cè)定溶劑為六氘代二甲基亞砜(CDCl3),內(nèi)標(biāo)為四甲基硅烷(TMS)。質(zhì)譜(MS)的測(cè)定用FINNIGANLCQAd(ESI)質(zhì)譜儀(生產(chǎn)商:Therm,型號(hào):FinniganLCQadvantageMAX)進(jìn)行。HPLC譜圖的測(cè)定采用安捷倫Agilent1260DAD型液相色譜儀進(jìn)行。在本發(fā)明的術(shù)語“氮?dú)夥铡笔侵咐鐚⒎磻?yīng)瓶連接一個(gè)1L容積的氮?dú)鈿馇?。薄層硅膠使用煙臺(tái)黃海HSGF254或青島GF254硅膠板。X射線粉末衍射(XRPD)的測(cè)定是采用PanalyticalEmpyreanX射線粉末衍射分析儀進(jìn)行,具體參數(shù)見下表:熱重分析(TGA)和差示掃描量熱儀(DSC)測(cè)定數(shù)據(jù)分別在TAQ500熱重分析和TAQ200差示掃描量熱儀上采集,儀器參數(shù)列于下表:本發(fā)明中的術(shù)語“室溫”是指溫度處于10℃至25℃之間。實(shí)施例1化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺的制備制備方案如下所示:第一步:a的制備將2-甲基-4-硝基苯胺(3g,19.7mmol)溶于二氯甲烷(60ml)中,加入N,N-二異丙基乙胺(6.4g,49.5mmol),冰浴降溫到5℃以下,滴加5-氯乙酰氯(3.7g,23.9mmol)以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在室溫下反應(yīng)過夜。薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,向反應(yīng)液中倒入水、分液、水洗3次、無水硫酸鎂干燥,過濾,減壓蒸餾除去溶劑后得化合物a(4.2g,黃色固體),收率:78.8%。MSm/z(ES):271.1[M+1]第二步:b的制備將a(4.2g,15.5mmol)溶于四氫呋喃(80ml)中,冰浴下分批加入氫化鈉(0.75g,31.3mmol)以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在室溫下反應(yīng)過夜。薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,冰浴下向反應(yīng)混合物中加入冰水,淬滅氫化鈉,減壓蒸餾除去四氫呋喃后,乙酸乙酯萃取2次、無水硫酸鎂干燥、過濾、減壓蒸餾除去溶劑后殘留物經(jīng)柱層析純化得b(3.27g,黃色固體),收率:90.1%。MSm/z(ES):235.1[M+1]第三步:c的制備將b(3.27g,14.0mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中,冰浴下分批加入五氯化磷(8.7g,41.8mmol)以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在40℃下回流反應(yīng)。待反應(yīng)液基本不冒氣泡時(shí),薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,冰浴下向反應(yīng)混合物中加入冰水淬滅五氯化磷、分液、水洗3次、無水硫酸鎂干燥、過濾、減壓蒸餾除去溶劑后得c(4g,黃色固體),收率:94.6%。MSm/z(ES):303.0,305.0[M+1]第四步:d的制備將c(4g,13.2mmol)溶于嗎啉(40ml)中以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在120℃下回流反應(yīng)2小時(shí),薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,加入乙酸乙酯溶解、水洗3次、無水硫酸鎂干燥、過濾、減壓蒸餾除去溶劑后得d(3.98g,黑色固體),收率:95.0%。MSm/z(ES):318.1[M+1]第五步:e的制備將d(3.98g,12.5mmol)溶于乙醇(50ml)中,加入九水硫化鈉(9g,37.5mmol),再加入水(20ml)以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在50℃下回流反應(yīng)過夜。薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,減壓濃縮除去乙醇、乙酸乙酯萃取三次、合并有機(jī)相、無水硫酸鎂干燥、過濾、減壓蒸餾除去溶劑后得e(3.2g,黃色固體),收率:88.9%。MSm/z(ES):288.2[M+1]第六步:f的制備將e(3.2g,11.1mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中,加入N,N-二異丙基乙胺(3.6g,27.9mmol),冰浴下,滴加4-氯丁酰氯(2.4g,17.0mmol)以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在室溫下反應(yīng)過夜。薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,向反應(yīng)液中加入水、分液、水洗3次、無水硫酸鎂干燥、過濾、減壓蒸餾除去溶劑后得f(3.5g,黃色固體),收率:80.3%。MSm/z(ES):392.2[M+1]第七步:g的制備將f(3.5g,8.9mmol)溶于四氫呋喃(50ml)中,冰浴下分批加入氫化鈉(0.6g,25mmol)以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在室溫下反應(yīng)過夜。薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,向反應(yīng)液中加入冰水淬滅氫化鈉,減壓蒸餾除去四氫呋喃后,加入二氯甲烷萃取2次、合并有機(jī)相、無水硫酸鎂干燥、過濾、減壓蒸餾除去溶劑后,殘留物經(jīng)柱層析純化得g(2.59g,黃色固體),收率:81.7%。MSm/z(ES):356.2[M+1]第八步:h的制備將g(280mg,0.79mmol)溶于甲苯(10ml)中,室溫下加入[(4-甲氧基苯基)肼基]氯乙酸乙酯(214mg,0.83mmol)、三乙胺(252mg,2.5mmol)以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在120℃下回流反應(yīng)過夜。薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,減壓蒸餾除去甲苯,殘留物加入二氯甲烷(20ml)溶解后,室溫下加入三氟乙酸(2ml)以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在室溫下反應(yīng)過夜。薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,經(jīng)柱層析純化得h(300mg,黃色固體),收率:77.9%。MSm/z(ES):489.2[M+1]第九步:結(jié)構(gòu)式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺的制備將h(300mg,0.61mmol)溶于甲醇(4ml)中,加入氨水(2ml)以得到反應(yīng)混合物,使所述反應(yīng)混合物在70℃下回流反應(yīng)過夜。薄層色譜跟蹤反應(yīng)進(jìn)程,反應(yīng)完全后,經(jīng)柱層析純化得結(jié)構(gòu)式I化合物(208mg,淺黃色固體),收率:73.8%。MSm/z(ES):460.2[M+1]1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.51–7.46(m,4H),7.17(d,J=8.5Hz,1H),6.93(d,J=8.8Hz,2H),6.87(brs,1H),5.54(brs,1H),4.09–4.02(m,1H),3.84–3.79(m,6H),3.45–3.32(m,2H),2.60(t,J=8.0Hz,2H),2.26(s,3H),2.19–2.13(m,2H).將柱層析得到的樣品用X-射線粉末衍射(XRPD)圖像進(jìn)行固態(tài)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)該樣品在XRPD中無明顯特征峰,故判定該樣品為無定型,見附圖1。通過薄層色譜分離得到的產(chǎn)品進(jìn)行了XRPD法分析,發(fā)現(xiàn)樣品仍然是無定型。實(shí)施例2式I化合物的晶型B的制備將100mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入3ml甲醇,加熱使其完全溶解后,冷卻至室溫,抽濾,收集析出的晶體,150℃真空干燥,得到82mg淺黃色固體,收率82%。該結(jié)晶樣品的X-射線粉末衍射圖譜見附圖2,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度的特征峰:該結(jié)晶樣品的DSC在約202℃有特征吸收峰,TGA顯示該結(jié)晶樣品加熱至150℃時(shí)失重為0.25%。根據(jù)以上結(jié)果得知,該晶型為無水晶型,定義為晶型B。實(shí)施例3式I化合物的晶型M1的制備將30mg按照實(shí)施例2制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺的晶型B加入樣品瓶中,加入0.5ml丙酮,形成的懸濁液室溫?cái)嚢柽^夜,離心分離后得到的樣品室溫干燥,得到26mg淺黃色固體,收率86.7%。該結(jié)晶樣品的X-射線粉末衍射圖譜見附圖3,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度的特征峰:該結(jié)晶樣品的DSC在約85℃、106℃、144℃、149℃、179℃和208℃有多個(gè)特征吸熱/放熱峰,TGA顯示該結(jié)晶樣品加熱至100℃時(shí)失重為7.40%。該結(jié)晶樣品的1HNMR測(cè)試結(jié)果表明樣品中含丙酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2%,結(jié)合加熱試驗(yàn)所得TGA數(shù)據(jù),可推測(cè)丙酮為吸附溶劑。對(duì)該結(jié)晶樣品用KF法進(jìn)行水分測(cè)定得出其含水量為7.2%。根據(jù)以上結(jié)果得知,該晶型為二水合物,定義為晶型M1。實(shí)施例4式I化合物的晶型O的制備將30mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入1ml二氯甲烷將其溶解,室溫下緩慢揮發(fā)使其析出固體,抽濾,將所得的固體在氮?dú)獗Wo(hù)下加熱至180℃后泠卻至室溫,得到25mg淺黃色固體,收率83.3%。該結(jié)晶樣品的X-射線粉末衍射圖譜見附圖4,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度的特征峰:該結(jié)晶樣品的DSC在約199℃和208℃有重疊的吸熱峰,TGA顯示該結(jié)晶樣品加熱至180℃時(shí)失重為0.82%。根據(jù)以上結(jié)果得知,該晶型為無水晶型,定義為晶型O。實(shí)施例5式I化合物的晶型P的制備將30mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入1ml二氯甲烷將其溶解,室溫下緩慢揮發(fā)使其析出固體,抽濾,將所得的固體在氮?dú)獗Wo(hù)下加熱至205℃后泠卻至室溫,得到24mg淺黃色固體,收率80.0%。該結(jié)晶樣品的X-射線粉末衍射圖譜見附圖5,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度的特征峰:該結(jié)晶樣品的DSC在約211℃有特征吸收峰,TGA顯示該結(jié)晶樣品加熱至200℃時(shí)失重為0.24%。根據(jù)以上結(jié)果得知,該晶型為無水晶型,定義為晶型P。實(shí)施例6式I化合物的晶型Q的制備將30mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入1ml二氯甲烷將其溶解,室溫下緩慢揮發(fā)使其析出固體,抽濾,將所得的固體在氮?dú)獗Wo(hù)下加熱至140℃后泠卻至室溫,得到26mg淺黃色固體,收率86.7%。該結(jié)晶樣品的X-射線粉末衍射圖譜見附圖6,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度的特征峰:該結(jié)晶樣品的DSC在約156℃、168℃、189℃、200℃和208℃有多個(gè)吸熱/放熱峰,TGA顯示該結(jié)晶樣品加熱至150℃時(shí)失重為1.1%。根據(jù)以上結(jié)果得知,該晶型為無水晶型,定義為晶型Q。實(shí)施例7式I化合物的晶型T的制備將30mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺化合物加入樣品瓶中,加入0.5ml四氫呋喃,形成的懸濁液在50℃攪拌過夜,離心分離后室溫真空干燥。將所得的固體溶于1.5ml純水中,形成的懸濁液在50℃攪拌過夜,離心分離后室溫真空干燥后,得到22mg淺黃色固體,收率73.3%。該結(jié)晶樣品的X-射線粉末衍射圖譜見附圖7,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度的特征峰:該結(jié)晶樣品的DSC在約83℃、107℃、148℃和208℃有多個(gè)特征吸熱/放熱峰,TGA顯示該結(jié)晶樣品加熱至120℃時(shí)失重為7.7%。該結(jié)晶樣品的1HNMR測(cè)試結(jié)果表明樣品中含四氫呋喃質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.3%。對(duì)該結(jié)晶樣品用KF法進(jìn)行水分測(cè)定得出其含水量為7.3%。根據(jù)以上結(jié)果得知,該晶型為二水合物,定義為晶型T。實(shí)施例8式I化合物的晶型U的制備將15mg按照實(shí)施例7制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺的晶型T在氮?dú)夥諊写祾?0min后,得到13.5mg淺黃色固體,收率90.0%。該結(jié)晶樣品的X-射線粉末衍射圖譜見附圖8,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度的特征峰:該結(jié)晶樣品重新暴露在空氣中后,可迅速吸水轉(zhuǎn)變?yōu)榫蚑。根據(jù)以上結(jié)果得知,該晶型為無水晶型,定義為晶型U。實(shí)施例9式I化合物的晶型V的制備將30mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺化合物加入樣品瓶中,加入0.9ml甲醇將其完全溶解,室溫下緩慢揮發(fā)使其析出固體。離心分離后得到固體在氮?dú)獗Wo(hù)下加熱到120℃后泠卻至室溫,得到18mg淺黃色固體,收率60.0%。該結(jié)晶樣品的X-射線粉末衍射圖譜見附圖9,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度的特征峰:該結(jié)晶樣品的DSC在約168℃、175℃和208℃有多個(gè)特征吸熱/放熱峰,TGA顯示該結(jié)晶樣品加熱至15℃時(shí)失重為1.9%。該結(jié)晶樣品的1HNMR測(cè)試結(jié)果表明樣品中含甲醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2%。對(duì)該結(jié)晶樣品用KF法進(jìn)行水分測(cè)定得出其含水量為2.1%。根據(jù)以上結(jié)果得知,該晶型為水合物晶型,定義為晶型V。實(shí)施例10式I化合物的晶型X的制備將200mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入1.6mlN,N-二甲基甲酰胺,加熱到80℃使其完全溶解后,滴加1.2ml水,自然泠卻至室溫,抽濾,收集析出的晶體,70℃干燥,得到166mg淺黃色固體,收率83.0%。該結(jié)晶樣品的X-射線粉末衍射圖譜見附圖10,其圖譜具有下表所示衍射角、晶面間距和相對(duì)強(qiáng)度的特征峰:該結(jié)晶樣品的DSC在約214℃有特征吸收峰,TGA顯示該結(jié)晶樣品加熱至150℃時(shí)失重為0.32%。根據(jù)以上結(jié)果得知,該晶型為無水晶型,定義為晶型X。實(shí)施例11式I化合物的晶型B的制備將100mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入10ml乙酸乙酯,加熱使其完全溶解后,冷卻至室溫,抽濾,收集析出的晶體,150℃真空干燥,得到86mg淺黃色固體,收率86%。粉末衍射圖譜與實(shí)施例2保持一致。實(shí)施例12式I化合物的晶型M1的制備將50mg按照實(shí)施例2制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺的晶型B加入樣品瓶中,加入0.45ml四氫呋喃,形成的懸濁液室溫?cái)嚢柽^夜,離心分離后得到的樣品室溫干燥,得到42mg淺黃色固體,收率84%。粉末衍射圖譜與實(shí)施例3保持一致。實(shí)施例13式I化合物的晶型O的制備將40mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入0.5ml四氫呋喃和0.6ml乙酸乙酯將其溶解,室溫下緩慢揮發(fā)使其析出固體,抽濾,將所得的固體在氮?dú)獗Wo(hù)下加熱至180℃后泠卻至室溫,得到34mg淺黃色固體,收率85%。粉末衍射圖譜與實(shí)施例4保持一致。實(shí)施例14式I化合物的晶型P的制備將40mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入0.5ml四氫呋喃和0.6ml乙酸乙酯將其溶解,室溫下緩慢揮發(fā)使其析出固體,抽濾,將所得的固體在氮?dú)獗Wo(hù)下加熱至205℃后泠卻至室溫,得到28mg淺黃色固體,收率70%。粉末衍射圖譜與實(shí)施例5保持一致。實(shí)施例15式I化合物的晶型Q的制備將40mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入0.5ml四氫呋喃和0.6ml乙酸乙酯將其溶解,室溫下緩慢揮發(fā)使其析出固體,抽濾,將所得的固體在氮?dú)獗Wo(hù)下加熱至140℃后泠卻至室溫,得到30mg淺黃色固體,收率75%。粉末衍射圖譜與實(shí)施例6保持一致。實(shí)施例16式I化合物的晶型T的制備將30mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺化合物加入樣品瓶中,加入0.6ml丙酮,形成的懸濁液在50℃攪拌過夜,離心分離后室溫真空干燥。將所得的固體溶于1.5ml水,形成的懸濁液在50℃攪拌過夜,離心分離后室溫真空干燥后,得到24mg淺黃色固體,收率80%。粉末衍射圖譜與實(shí)施例7保持一致。實(shí)施例17式I化合物的晶型U的制備將20mg按照實(shí)施例16制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺的晶型T在氮?dú)夥諊写祾?0min后,得到18.5mg淺黃色固體,收率92.5%。粉末衍射圖譜與實(shí)施例8保持一致。實(shí)施例18式I化合物的晶型V的制備將20mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺化合物加入樣品瓶中,加入0.7ml二氧六環(huán)將其完全溶解,室溫下緩慢揮發(fā)使其析出固體。離心分離后得到固體在氮?dú)獗Wo(hù)下加熱到120℃后泠卻至室溫,得到14mg淺黃色固體,收率70.0%。粉末衍射圖譜與實(shí)施例9保持一致。實(shí)施例19式I化合物的晶型X的制備將100mg按照實(shí)施例1制備的式I化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[2-甲基-4-(2-氧代四氫吡咯-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺加入樣品瓶中,加入0.9mlN,N-二甲基甲酰胺和0.5ml水,加熱到80℃使其完全溶解后,自然泠卻至室溫,抽濾,收集析出的晶體,70℃干燥,得到73mg淺黃色固體,收率73.0%。粉末衍射圖譜與實(shí)施例10保持一致。試驗(yàn)例1溶解性考察試驗(yàn)為了考察本發(fā)明實(shí)施例1制備的無定形與實(shí)施例2~10制備的晶型B、M1、O、P、Q、T、U、V和X的溶解性,本發(fā)明分別在25℃、37℃條件下在pH=1.0(0.1N)的鹽酸和pH=4.0的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中,測(cè)定實(shí)施例1制備的無定形,實(shí)施例2~10制備的晶型B、M1、O、P、Q、T、U、V和X的平衡溶解度(飽和溶液),結(jié)果如下表1所示:表1溶解性試驗(yàn)溶解性試驗(yàn)結(jié)果表明,25℃、37℃條件下在pH=1.0(0.1N)的鹽酸和pH=4.0的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中,式I化合物的無定型、晶型B、晶型M1、晶型O、晶型P、晶型Q、晶型T、晶型U、晶型V和晶型X都具有很好的平衡溶解性。試驗(yàn)例2化學(xué)穩(wěn)定性考察試驗(yàn)將實(shí)施例1制備無定型和實(shí)施例2~10制備的晶型B、M1、O、P、Q、T、U、V和X樣品分別放入潔凈的培養(yǎng)皿中敞口平攤放置,考察在高溫(60℃)、高濕(25℃、RH90%±5%)、強(qiáng)光(4500Lx±500Lx)條件下樣品的穩(wěn)定性,考察取樣時(shí)間為5天和10天,放置10天。分別在5天和10天取樣測(cè)定,HPLC純度檢測(cè)結(jié)果見下表2:表2穩(wěn)定性試驗(yàn)(純度%)穩(wěn)定性考察結(jié)果表明,式I結(jié)構(gòu)所示的無定型、晶型B、晶型M1、晶型O、晶型P、晶型Q、晶型T、晶型U、晶型V和晶型X在敞口放置的條件下,經(jīng)高溫(60℃)、高濕(25℃、RH90%±5%)、強(qiáng)光(4500Lx±500Lx)等條件下的穩(wěn)定性比較發(fā)現(xiàn),本發(fā)明晶型B、晶型M1、晶型O、晶型P、晶型Q、晶型T、晶型U、晶型V和晶型X在高濕、高溫、光照條件純度無明顯變化,即本發(fā)明各種晶型的化學(xué)穩(wěn)定性均較好;而無定型產(chǎn)物在高濕條件下的純度無明顯變化,但高溫條件下和光照條件下純度均明顯下降。說明在光照、高溫、高濕條件下,本發(fā)明實(shí)施例2~10制備的晶型B、M1、O、P、Q、T、U、V和X的穩(wěn)定性明顯優(yōu)于無定型。試驗(yàn)例3物理穩(wěn)定性考察試驗(yàn)實(shí)施例2制備的樣品晶型B(作為晶型B0天參考數(shù)據(jù),批號(hào)20140408),實(shí)施例5制備的樣品晶型P(作為晶型P0天參考數(shù)據(jù),批號(hào)20140415),實(shí)施例6制備的樣品晶型Q(作為晶型Q0天參考數(shù)據(jù),批號(hào)20140418),實(shí)施例7制備的樣品晶型T(作為晶型T0天參考數(shù)據(jù),批號(hào)20140421),實(shí)施例10制備的樣品晶型X(作為晶型X0天參考數(shù)據(jù),批號(hào)20140427),分別放入潔凈的培養(yǎng)皿中敞口平攤放置,考察在高溫(60℃)、高濕(25℃、RH90%±5%)、強(qiáng)光(4500Lx±500Lx)條件下,各晶型樣品的物理穩(wěn)定性,考察取樣時(shí)間為10天。在第10天取樣,用X-射線粉末衍射(XRPD)圖進(jìn)行固態(tài)分析,粉末衍射數(shù)據(jù)結(jié)果如下表3~7所示。結(jié)果表明,在敞口放置的條件下,經(jīng)高溫、高濕、強(qiáng)光等條件下,10天后,晶型B、P、Q、T、X的X-射線粉末衍射角度值(以2θ衍射角表示)與樣品晶型B、P、Q、T、X0天的參考數(shù)據(jù)均保持一致,即說明本發(fā)明晶型的物理穩(wěn)定性好。表3晶型B在高溫、高濕、光照條件下的粉末衍射角度數(shù)據(jù)(2θ衍射角)表4晶型P在高溫、高濕、光照條件下的粉末衍射角度數(shù)據(jù)(2θ衍射角)PeakNo.晶型P0天高溫10天光照10天高濕10天16.6019706.6548916.6259266.57413528.1554738.2169638.1358998.152156310.87070010.82632510.92126310.895623411.88593011.84135811.93162511.862592512.95490012.89269212.93159213.024856614.97511014.94586214.98235615.025889715.58157015.55826815.62389315.581662820.26818020.31693220.24581120.285583923.82968023.87166923.79494623.861449表5晶型Q在高溫、高濕、光照條件下的粉末衍射角度數(shù)據(jù)(2θ衍射角)PeakNo.晶型Q0天高溫10天光照10天高濕10天16.4836226.5488566.5216356.45592326.7008186.6516986.7165526.745691310.19969010.23491610.18592110.158916412.29944012.27156112.35645612.321583512.95873013.01591612.98151412.921162613.38755013.42159213.35846113.378141714.98096015.04789514.94546814.994681821.32225021.34581221.27861821.371592924.84981024.79512324.82458624.871686表6晶型T在高溫、高濕、光照條件下的粉末衍射角度數(shù)據(jù)(2θ衍射角)PeakNo.晶型T0天高溫10天光照10天高濕10天111.28811011.32589611.31585911.294583211.83385011.82489311.79266111.814692315.94038015.98145615.95482615.895492416.54999016.57489216.49826216.582262518.91151018.94856218.88926218.894825619.28069019.24861319.31565819.325491719.74457019.78156119.71459219.754816821.79384021.84591221.83149121.768911923.67941023.68161323.72146423.644513表7晶型X在高溫、高濕、光照條件下的粉末衍射角度數(shù)據(jù)(2θ衍射角)試驗(yàn)例4吸潮性考察試驗(yàn)將實(shí)施例1制備的無定型、實(shí)施例2~10制備的晶型B、M1、O、P、Q、T、U、V和X樣品分別放入潔凈的培養(yǎng)皿中敞口平攤放置,考察在常溫常濕(25℃、RH50%)條件下放置,檢查其質(zhì)量增加百分比,結(jié)果如下表8所示:表8吸濕性試驗(yàn)批號(hào)晶型6h12h24h48h20140309無定型0.2%0.4%0.7%0.9%20140408晶型B0.01%0.03%0.05%0.08%20140409晶型M10.3%0.5%0.6%0.7%20140414晶型O0.2%0.5%0.7%0.9%20140415晶型P0.3%0.5%0.7%0.9%20140418晶型Q0.2%0.4%0.5%0.7%20140421晶型T0.3%0.7%1.2%1.8%20140424晶型U5.6%7.7%9.1%9.4%20140425晶型V0.3%0.6%0.8%1.0%20140427晶型X0.02%0.04%0.07%0.09%試驗(yàn)結(jié)果表明,在常溫常濕(25℃、RH50%)條件下,本發(fā)明式I化合物的晶型B、晶型X,質(zhì)量增加百分比均小于0.2%,即無吸濕性;晶型M1、晶型O、晶型P、晶型Q、晶型T、晶型V質(zhì)量增加百分比在0.2%-2%范圍內(nèi),即略有吸濕性;晶型U質(zhì)量增加百分比大于2%范圍內(nèi),即有吸濕性。效果例式I化合物及其各晶型對(duì)正常小鼠APTT的作用試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康模嚎疾?mg/kg給藥劑量下各實(shí)施例制備的晶型在給藥后對(duì)小鼠APTT的作用。1.試驗(yàn)材料:1.1.藥品:受試藥:式I化合物(無定型),實(shí)施例1制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140309;陽性對(duì)照藥:阿哌沙班,購自上海皓元化學(xué)科技有限公司,純度99.9%,批號(hào)HM-038_13-20140427;受試藥:晶型B,實(shí)施例2制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140408;受試藥:晶型M1,實(shí)施例3制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140409;受試藥:晶型O,實(shí)施例4制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140414;受試藥:晶型P,實(shí)施例5制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140415;受試藥:晶型Q,實(shí)施例6制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140418;受試藥:晶型T,實(shí)施例7制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140421;受試藥:晶型U,實(shí)施例8制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140424;受試藥:晶型V,實(shí)施例9制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140425;受試藥:晶型X,實(shí)施例10制備,由成都苑東藥業(yè)有限公司合成研究室提供,淺黃色固體,批號(hào):20140427;1.2試驗(yàn)器材:SysmexCA7000型全自動(dòng)血凝分析儀;RocheC501全自動(dòng)生化分析儀;采血管、手術(shù)剪、注射器等;1.3試驗(yàn)動(dòng)物:KM小鼠,體重22~24g,120只,雌雄各半,由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供,生產(chǎn)設(shè)施許可證:SCXK(川)2013-24。動(dòng)物購回后飼養(yǎng)于動(dòng)物房,適應(yīng)性觀察至少3天,檢疫合格后用于實(shí)驗(yàn)。2.1分組:小鼠根據(jù)體重按照表9分組,每組10只,雌雄各半,組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;表9試驗(yàn)分組及給藥方案2.2APTT測(cè)定:按照表9分別對(duì)各組灌胃給予相應(yīng)受試藥(空白組給予生理鹽水),給藥1h后,眼眶取血于含枸櫞酸鈉的0.5ml真空采血管中,采集血樣后測(cè)定各動(dòng)物的APTT;3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用Excel進(jìn)行統(tǒng)計(jì),實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用表示,多組之間比較采用雙側(cè)T檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。4.試驗(yàn)結(jié)果:表10對(duì)正常小鼠APTT的影響組別受試物給藥劑量(mg/kg)APTT值(s)空白組生理鹽水516.11±1.05陽性組阿哌沙班521.58±0.97**實(shí)施例1組無定型527.92±2.65**△△實(shí)施例2組晶型B531.42±2.53**△△◇◇實(shí)施例3組晶型M1530.58±2.40**△△◇實(shí)施例4組晶型O530.78±2.18**△△◇實(shí)施例5組晶型P529.07±2.91**△△實(shí)施例6組晶型Q530.06±1.73**△△◇實(shí)施例7組晶型T528.97±1.84**△△實(shí)施例8組晶型U528.54±3.70**△△實(shí)施例9組晶型V529.88±2.93**△△實(shí)施例10組晶型X531.00±2.91**△△◇注:與空白組相比*P<0.05;**P<0.01;與陽性組相比△P<0.05;△△P<0.01;與實(shí)施例1組相比◇P<0.05;◇◇P<0.01。5.結(jié)論:(1)從表10中可以看出,與空白組相比,給藥1h后,陽性組、各實(shí)施例組的APTT(活化部分凝血活酶時(shí)間)值極顯著增加(P<0.01),說明陽性藥阿哌沙班、實(shí)施例1及其各晶型在給藥1h后均能極顯著延長小鼠的APTT值;(2)與陽性組相比,各實(shí)施例組的APTT值極顯著增加(P<0.01),說明實(shí)施例1化合物(無定型)及其各晶型對(duì)延長小鼠APTT值均優(yōu)于陽性組;(3)與實(shí)施例1組相比,實(shí)施例2組的APTT值極顯著增加(P<0.01)、而實(shí)施例3、4、6、10組的APTT值顯著增加(P<0.05),說明實(shí)施例2化合物的晶型B、實(shí)施例3化合物的晶型M1、實(shí)施例4化合物晶型O、實(shí)施例6化合物晶型Q、實(shí)施例10化合物晶型X的效果相對(duì)更好。對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言明顯的是,在不偏離本發(fā)明精神或者范圍的情況下,可對(duì)本發(fā)明化合物、組合物以及其制備方法進(jìn)行的多種修飾和變化,因此,本發(fā)明的保護(hù)范圍涵蓋了對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的各種修飾和變化,只要所述修飾或變化處于權(quán)利要求和其等同實(shí)施方式所涵蓋的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3 
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