本發(fā)明屬于生物工程領域，具體地，本發(fā)明涉及一種產(chǎn)高活性角蛋白水解酶的菌株及其應用。
背景技術：
：羽毛是家禽飼養(yǎng)和屠宰工業(yè)的重要副產(chǎn)物，我國羽毛產(chǎn)量豐富，目前每年羽毛的年產(chǎn)量達120多萬噸。羽毛中有著豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸，對羽毛的合理利用一方面可以減少廢棄物對環(huán)境的污染,另一方面可以作為一種飼料蛋白質(zhì)應用于畜禽的飼養(yǎng)。羽毛是禽類的外保護層，它的抗逆能力很強。對羽毛蛋白分析可知，其中含硫氨基酸在總的氨基酸中所占的比重較大，這樣在羽毛蛋白分子內(nèi)跟分子間，除許多氫鍵、鹽鍵，還存在著大量的二硫鍵，因此普通的蛋白酶難以降解羽毛蛋白，導致其消化不佳，這是羽毛蛋白作為動物飼料蛋白源存在的主要問題之一。目前，工業(yè)上處理羽毛粉的方法一般為高溫高壓蒸煮，這樣將導致一些熱敏性氨基酸的變性，一些非營養(yǎng)性的氨基酸生成，產(chǎn)品的穩(wěn)定性下降，還會導致動物食用后的消化不良。微生物降解法雖然反應條件溫和，但目前還處在實驗室研究階段，另一方面因其發(fā)酵過程中需消耗大量的能源，將會使大大增加羽毛粉的生產(chǎn)成本，所以還無法在實際生產(chǎn)中應用。目前已知的分解角蛋白的菌分布在細菌、放線菌和真菌中，主要有地衣芽孢桿菌，高溫單胞菌屬，白色假絲酵母和鏈霉菌等，它們普遍酶活力不高，酶解效果不好。因此，本領域迫切需要開發(fā)一種新菌屬、可適用于多種角蛋白原料且蛋白裂解效率高的新型角蛋白酶、制劑及相應的技術。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種可新菌屬、可適用于多種角蛋白原料且蛋白裂解效 率高的新型角蛋白酶、制劑及相應的技術。本發(fā)明第一方面提供了一種產(chǎn)角蛋白水解酶的菌株，所述菌株為耐輻射異常球菌(Deinococcusradiodurans)，并且所述菌株表達角蛋白水解酶。在另一優(yōu)選例中，所述的角蛋白水解酶酶解選自下組的底物：角蛋白、家禽羽毛。在另一優(yōu)選例中，所述菌株的保藏號為CCTCCNO.2015459。在另一優(yōu)選例中，所述的角蛋白水解酶的活性≥5萬U/g，較佳地≥10萬U/g0，更佳地為10-25萬U/g。在另一優(yōu)選例中，所述菌株的發(fā)酵液上清中蛋白水解酶的酶活為1000-10000U/mL,較佳地為1500-5000U/mL，更佳地為2000-3500U/mL。在另一優(yōu)選例中，所述的衍生菌株是保藏號為CCTCCNO.2015459的衍生菌株，并且所述衍生菌株所產(chǎn)生的角蛋白水解酶的酶活性≥5萬U/g。在另一優(yōu)選例中，所述的衍生菌株所產(chǎn)生的角蛋白水解酶的酶活性為10-25萬U/g。在另一優(yōu)選例中，所述的衍生菌株是CCTCCNO.2015459經(jīng)1-100傳代而獲得的衍生菌株。在另一優(yōu)選例中，所述的衍生菌株與CCTCCNO.2015459具有相同的16srRNA。在另一優(yōu)選例中，所述的衍生菌株在上述傳代過程中經(jīng)誘變處理或不經(jīng)誘變處理。在另一優(yōu)選例中，所述的角蛋白水解酶以角蛋白或角蛋白原料為底物，降解生成分子量為100Da－2000Da小肽，較佳地為180Da－1000Da的小肽。在另一優(yōu)選例，在以下測定條件下，經(jīng)所述的角蛋白水解酶酶解后，酶解產(chǎn)物中小肽的含量≥70％，較佳地≥75％，更佳地≥80％，按酶解產(chǎn)物的干重計：pH8.0-8.5，角蛋白底物濃度10-12％，酶添加量為40000U/g底物，溫度35-55℃(較佳地，45℃)，和酶解時間6-12小時。本發(fā)明第二方面提供了一種用于降解角蛋白的酶制劑，所述的制劑含有(a)本發(fā)明第一方面所述的菌株的發(fā)酵產(chǎn)物、或從所述發(fā)酵產(chǎn)物中分離出的角蛋白水解酶；和/或(b)本發(fā)明第一方面所述的菌株的菌體；以及(c)任選的輔料或載體。在另一優(yōu)選例中，所述的菌體包括活菌體。在另一優(yōu)選例中，所述的分離出的角蛋白水解酶包括粗酶產(chǎn)品或經(jīng)純化的酶產(chǎn)品。在另一優(yōu)選例中，所述的粗酶產(chǎn)品包括：(i)發(fā)酵液去除菌體后獲得的粗酶液；(ii)所述粗酶液經(jīng)凍干后獲得的酶粉制劑。在另一優(yōu)選例中，所述制劑中角蛋白水解酶的酶活性為≥5萬U/g，較佳地≥10萬U/g，更佳地為10-25萬U/g。在另一優(yōu)選例中，所述粗酶液中蛋白水解酶的酶活為1000-10000U/mL,較佳地為1500-5000U/mL，更佳地為2000-3500U/mL。在另一優(yōu)選例中，所述的制劑為固定化酶制劑。本發(fā)明第三方面提供了一種生產(chǎn)角蛋白水解酶的方法，所述的方法包括步驟：(1)用本發(fā)明第一方面所述的菌株進行發(fā)酵，得到含角蛋白水解酶的發(fā)酵液；和(2)從發(fā)酵液中分離所述的角蛋白水解酶。在另一優(yōu)選例中，在步驟(1)中，在以下pH條件下進行發(fā)酵：pH5.0-12，較佳地pH5.0-10,更佳地，pH6.0-9.0。在另一優(yōu)選例中，步驟(1)中所述發(fā)酵在以下條件下進行：(i)發(fā)酵培養(yǎng)基的起始pH為5.0-10.0，較佳地，7.0-8.0，更佳地，8.0；(ii)發(fā)酵接種量為4-10(v/v)％，較佳地，4-6(v/v)％，更佳地，4(v/v)％；按發(fā)酵液的總體積計。在另一優(yōu)選例中，所述接種所用的接種液含有0.005～0.4g/ml(較佳地，0.01-0.3g/ml)或1×105－1×108個/ml(較佳地，2×105－1×107)的所述菌體。在另一優(yōu)選例中，所述的培養(yǎng)基碳源選自下組：羽毛粉、葡萄糖、淀粉、乳糖、或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述碳源為羽毛粉。在另一優(yōu)選例中，所述的培養(yǎng)基的氮源選自下組：羽毛粉、硫酸銨、蛋白胨、酵母膏、或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述氮源為羽毛粉。在另一優(yōu)選例，在步驟(1)中的發(fā)酵條件包括：所述碳源的添加量為0.1-3.0wt％，基于培養(yǎng)基總重量計；所述氮源添加量為0.1-3.0wt％，基于培養(yǎng)基總重量計。在另一優(yōu)選例中，所述的發(fā)酵液是含菌體的發(fā)酵液。在另一優(yōu)選例中，所述發(fā)酵液是通過包括以下步驟的方法制備：將所述菌株接種至培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到種子液；將所述種子液接種入發(fā)酵罐，形成發(fā)酵體系；和對所述發(fā)酵體系進行培養(yǎng)，得到發(fā)酵后的發(fā)酵液。在另一優(yōu)選例中，在發(fā)酵培養(yǎng)時，在以下條件下培養(yǎng)：培養(yǎng)溫度37±3℃，發(fā)酵起始pH5－10(較佳地8.0±0.5)。本發(fā)明第四方面提供了一種水解的方法，所述方法包括步驟：在本發(fā)明第一方面所述菌株的存在下，和/或在本發(fā)明第二方面所述用于降解角蛋白的酶制劑的存在下，對角蛋白或角蛋白原料進行水解，從而形成水解產(chǎn)物。在另一優(yōu)選例中，所述水解在pH8-10(較佳地，8.5-9.5)的條件下進行。在另一優(yōu)選例中，所述的酶解條件為底物濃度為10-12％(以干物質(zhì)計)，酶添加量為30000-50000U/g(以干物質(zhì)計)，溫度為35-55℃，時間為6-12h，pH為6.0-12.0。在另一優(yōu)選例中，所述的角蛋白原料包括：家禽羽毛、蹄、角。在另一優(yōu)選例中，所述方法為非治療性和非診斷性的。本發(fā)明第五方面提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的菌株的用途，用于制備角蛋白水解酶，或用于制備降解角蛋白的制劑。在另一優(yōu)選例中，所述的制劑為酶制劑或活菌制劑。應理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附圖說明圖1顯示了本發(fā)明的菌株的菌落形態(tài)，菌落扁平，表面光滑，為革蘭氏陽性菌。圖2顯示了不同初始pH對產(chǎn)酶的影響。圖3顯示了不同接種量對產(chǎn)酶的影響。圖4顯示了不同碳源對菌發(fā)酵的影響。圖5顯示了不同氮源對菌發(fā)酵的影響。圖6顯示了不同酶解pH對羽毛酶解的影響。圖7顯示了不同酶添加量對羽毛酶解的影響。圖8顯示了不同酶解溫度對羽毛酶解的影響。具體實施方式發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，首次從環(huán)境(含角蛋白的堆積物)中篩選到一株對角蛋白具有優(yōu)良降解效果的菌株，并經(jīng)過進一步誘變處理，最終篩選到一株對角蛋白有優(yōu)異降解效果的耐輻射異常球菌，該菌株被命名為耐輻射異常球菌J1。性能測試表明，該耐輻射異常球菌J1的遺傳穩(wěn)定性好，產(chǎn)酶量高，安全性高，產(chǎn)品穩(wěn)定，制備工藝簡便。對于多種常見的角蛋白原料的測試表明，經(jīng)本發(fā)明菌株所產(chǎn)的角蛋白酶降解后，小肽含量可高達75％以上，具有極高的應用價值。本發(fā)明可有助利用角蛋白生產(chǎn)功能性蛋白肽。在此基礎上完成了本發(fā)明。定義酶活單位的定義。以粗酶液為例，每1mL粗酶液，在一定溫度和pH值條件下(pH7.2和40℃)，1min水解酪素產(chǎn)生1ug酪氨酸為一個酶活力單位，以(u/mL)表示。對于凍干制劑等其他形式的酶，依此類推。菌株如本文所用，術語“本發(fā)明菌株”、“本發(fā)明耐輻射異常球菌”、“本發(fā)明耐輻射異常球菌J1”、“本發(fā)明工程菌”、“本發(fā)明的保藏菌株”可互換使用，指保藏于CCTCC的保藏號為CCTCCNO.2015459菌株或由該菌株得到的衍生菌株，其中包括經(jīng)傳代培養(yǎng)得到的菌株。本發(fā)明菌株是如下獲得的：(a)對從可能存在動物蛋白酶菌株的環(huán)境(如含角蛋白的堆積物)取一定量的樣本，于富集培養(yǎng)基中進行富集，然后對富集液進行稀釋，通過涂布進行分離，得到各種不同的單菌落。(b)對獲得的各種單菌落進行初篩，得到酶活性較高的菌株。(c)對初篩所獲得的菌株，進一步制備其發(fā)酵產(chǎn)物，制得粗酶液后，測定酶活，進一步選取酶活性高的菌株。(d)對于步驟(c)中選出的菌株，進一步進行誘變處理，并測定誘變處理后菌株的酶活性，最終確定誘變后酶活性效果優(yōu)異的菌株，作為工程菌。在本發(fā)明中，經(jīng)過上述方法，成功地篩選到一株角蛋白酶活性優(yōu)異的菌株，即本發(fā)明的耐輻射異常球菌J1。對本發(fā)明的所述耐輻射異常球菌J1進行的研究表明，本發(fā)明菌株為耐輻射異常球菌。如圖1所示，菌株的菌落呈紅色，扁平，表面光滑，為革蘭氏陽性菌。對該耐輻射異常球菌的特性進行的研究表明，該菌株的一些主要特性如下：最適培養(yǎng)溫度37±3℃，發(fā)酵起始pH5.0至10.0(較佳地8.0±0.5)，碳源和氮源優(yōu)選羽毛粉為唯一碳源和氮源。對于所制備的本發(fā)明角蛋白酶，其合適酶解pH7.5-9.0(較佳地pH8.0-8.5)，30000-50000U/g底物(較佳地40000U/g底物)，酶解溫度為35℃-55℃(較佳地45℃)。用于培養(yǎng)本發(fā)明菌株的培養(yǎng)基中的營養(yǎng)源沒有特別的限制。本領域技術人員可以根據(jù)公知的技術來選擇合適的碳源、氮源和其他營養(yǎng)源。例如，碳源可以是淀粉、糊精、葡萄糖、果糖、蔗糖、甘油、肌醇、甘露醇等。氮源可以是胨、大豆蛋白胨、大豆粉、黃豆餅粉、肉膏、蛋白粉、麥皮、米糖、酵母粉、玉米漿、銨鹽以及其他有機物或無機含氮化合物。另外，培養(yǎng)基中還可適當加入一些無機鹽類，如氯化鈉、磷酸鹽(如磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀等)、硫酸錳、硫酸銨、硫酸鎂、碳酸鈣等金屬鹽。通常可采用各種已知的常規(guī)培養(yǎng)基，如LB瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、葡萄糖酵母膏瓊脂培養(yǎng)基和牛肉浸汁瓊脂培養(yǎng)基等對本發(fā)明菌株進行斜面固體培養(yǎng)并4℃環(huán)境下進行初步保藏。對于本發(fā)明菌株而言，可以選用本領域常用的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。在具體實施方案中，一些代表性的培養(yǎng)基包括(但并不限于)：(1)富集培養(yǎng)基(g/L)：蛋白胨10，牛肉浸膏3，NaCl3；pH7.2-7.4。(2)平板篩選培養(yǎng)基(g/L)：羽毛粉10，NaCl3，瓊脂15；pH7.2-7.4(3)液體活化培養(yǎng)基(g/L)：羽毛粉10，葡萄糖5，NaCl3；pH7.2-7.4(4)種子培養(yǎng)基(g/L)：葡萄糖3，蛋白胨5，酵母膏3，NaCl3；pH7.2-7.4(5)發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：羽毛粉10，NaCl1.5，CaCl23，K2HPO41.4，KH2PO40.7，MgSO40.1；pH7-8然而，本領域技術人員應當理解，本發(fā)明并不局限于本文中列舉的這些具體培養(yǎng)基配方。培養(yǎng)本發(fā)明中的菌株的溫度、pH、氣液比、罐壓、轉(zhuǎn)速等條件沒有特別嚴格的限制，只要該條件適合該菌的生長即可。在一些較佳的實施方案中，pH宜控制在7.5～8.5之間，培養(yǎng)溫度宜在35～ 40℃之間。應理解，本發(fā)明的發(fā)酵可以是連續(xù)發(fā)酵，也可以是間歇式發(fā)酵。角蛋白酶的制備和制劑在本發(fā)明中，還提供了基于本發(fā)明菌株的角蛋白酶，以及含有所述角蛋白酶的制劑。在本發(fā)明中，一種優(yōu)選的角蛋白酶制劑是本發(fā)明菌株的粗酶制劑，即將本發(fā)明菌株的發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)離心去除固體雜質(zhì)(包括菌體)后，所獲得的溶液。該粗酶溶液可以直接作為酶制劑使用，也可進一步經(jīng)后續(xù)處理(如凍干處理)后獲得固態(tài)形式的酶制劑。在本發(fā)明酶制劑中，可任選地添加有利于保持酶活性的物質(zhì)，如穩(wěn)定劑等。對角蛋白進行水解的方法(應用)本發(fā)明還提供一種對角蛋白進行水解(或酶解)的方法，該方法包括在本發(fā)明菌株所產(chǎn)生的角蛋白酶存在下，對角蛋白原料進行酶解處理(如保溫一段時間)，從而將角蛋白酶解為小肽。通常，本發(fā)明的酶解反應可在合適的酶解溫度(如35℃-60℃)、pH(如pH8.0-10，較佳地pH8.5-9.5)進行。在本發(fā)明中，酶解時酶用量沒有特別限制，通常為10000-100000U/g蛋白(底物)，較佳地為30000-40000U/g蛋白。在本發(fā)明中，酶解時間沒有特別限制，可以為1小時至數(shù)天、甚至數(shù)周。通常，酶解時間為2-72小時，較佳地6-12小時。在本發(fā)明中，角蛋白原料沒有特別限制，可以是任何含角蛋白的原料，如羽毛。通常，在本發(fā)明中，酶解反應時，底物(動物蛋白)的濃度為5-15wt％，較佳地10-12wt％。典型地，在本發(fā)明中，酶解反應時，底物濃度為10％-12％(以干物質(zhì)計)，酶添加量為30000-50000U/g(以干物質(zhì)計)，溫度為35℃-55℃，時間為6h-12h，pH為6.0-12.0。菌種保藏本發(fā)明的上述菌種已于2015年7月20日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ChinaCenterforTypeCultureCollection，簡稱CCTCC)，地址:湖北省武漢市武昌珞珈山，保藏號：CCTCCNO.2015459，名稱為：耐輻射異常球菌(Deinococcusradiodurans)J1。本發(fā)明的主要優(yōu)點包括：1、產(chǎn)酶活性高、酶解效果好。2、獲得的菌株穩(wěn)定性好。3、生產(chǎn)成本低，安全性高。本發(fā)明的菌株和酶制劑有助于將我國大量的廢棄角蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)閮?yōu)質(zhì)蛋白肽產(chǎn)品，對緩解國內(nèi)角蛋白資源缺乏現(xiàn)狀具有重大意義和應用價值。下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆：實驗室手冊(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。通用實驗方法和材料：材料1.培養(yǎng)基：(1)富集培養(yǎng)基(g/L)：蛋白胨10，牛肉浸膏3，NaCl3；pH7.2-7.4。(2)平板篩選培養(yǎng)基(g/L)：羽毛粉10，NaCl3，瓊脂15；pH7.2-7.4(3)液體活化培養(yǎng)基(g/L)：羽毛粉10，葡萄糖5，NaCl3；pH7.2-7.4(4)種子培養(yǎng)基(g/L)：葡萄糖3，蛋白胨5，酵母膏3，NaCl3；pH7.2-7.4(5)發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：羽毛粉10，NaCl1.5，CaCl23，K2HPO41.4，KH2PO40.7，MgSO40.1；pH7-8紫外分光光度法測蛋白酶酶活測定實驗前配制pH為7.4的磷酸緩沖液及10％的TCA溶液，稱取1g角蛋白底物(偶氮樓蛋白)溶于150mL的磷酸緩沖液中。設置實驗組及空白組組， 實驗組：1.5mL角蛋白溶液+1mL粗酶液；空白組：1.5mL角蛋白溶液+1mL水，放置37℃的水浴鍋中反應1h，加1mL10％的TCA終止反應，4℃靜置30min，靜置完成后于4℃離心15min，取上清在280nm處測定吸光度，每增加0.01的吸光度及為一個酶活單位。實施例1菌株的篩選和誘變1.1.菌株的篩選分離取一定量的角蛋白堆積物(0.1-1g)，加入到含有50mL富集培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，37℃、180r/min振蕩培養(yǎng)5-7天，觀察培養(yǎng)基顏色變化。對富集培養(yǎng)液進行梯度稀釋，將稀釋度為10-5、10-6及10-7的稀釋液分別涂布于羽毛粉篩選平板上，挑取生長的單菌落于篩選平板上繼續(xù)再次培養(yǎng)，進行分離純化以得到單菌落。將上述獲得的單菌落進行試管保存?zhèn)溆?。結(jié)果，篩選到27株不同的菌株，其酶活性在300U/ml內(nèi)。1.2.酶活復篩將上一步驟中篩選獲得并保存菌株以6％的接種量接種于裝有50ml發(fā)酵培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，180r/min、36℃振蕩培養(yǎng)72h，8000r/min離心10min去除菌體，粗酶液采用紫外分光光度法進行酶活測定。經(jīng)測定，所述菌株中有17株的酶活性在250－300U/ml。1.3.菌株的γ-射線誘變挑選上一步驟中經(jīng)鑒定酶活性較高的10株菌株，調(diào)整對數(shù)期菌液的濃度為105左右，送至輻照公司進行γ-射線輻照，輻照劑量60Gy，時間10-360s，稀釋涂布后用黑布包裹置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，并與未照射的菌種做對照。選取生長的單菌落進行酶活復篩，最終確定誘變效果較好的菌株，選取誘變效果最好的進行培養(yǎng)基的優(yōu)化。經(jīng)過多輪篩選，成功篩選到一株角蛋白酶活性優(yōu)異的菌株，經(jīng)培養(yǎng)和16srRNA鑒定，與耐輻射異常球菌(Deinococcusradiodurans)匹配達99.9％，命名為耐輻射異常球菌J1。實施例2發(fā)酵條件的優(yōu)化在本實施例中，對實施例1中所獲得的耐輻射異常球菌J1，進行培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基優(yōu)化。2.1.不同初始pH對產(chǎn)酶的影響設定初始pH為5、6、7、8、9、10，考察初始pH對發(fā)酵產(chǎn)酶的影響。結(jié)果如圖2所示。其中，pH中性(如pH為8)時，羽毛的酶解率最高(高達64％)，并且菌株的長勢更好，更有利發(fā)酵產(chǎn)酶。2.2.不同接種量對產(chǎn)酶的影響設計接種量為4％，6％，8％，10％，12％，考察接種量對菌株生長的影響。結(jié)果如圖3所示。其中，接種量為4％時羽毛酶解率較高。2.3.不同碳源對菌發(fā)酵的影響分別設置實驗組和對照組，研究外加碳源對菌株生長的影響。其中，外加碳源的添加量為0.5％。其他碳源的種類為：葡萄糖、可溶性淀粉、乳糖。其余成分和條件與初始發(fā)酵培養(yǎng)基相同。實驗組：在羽毛粉為碳源的基礎上添加其他的碳源。對照組：未添加其他碳源。結(jié)果如圖4所示。添加外加碳源不利于菌株發(fā)酵產(chǎn)酶。2.4.不同氮源對菌發(fā)酵的影響分別設置實驗組和對照組，研究外加氮源對菌株生長的影響。其中，外加氮源的添加量為0.5％。其他氮源的種類為：硫酸銨、蛋白胨、酵母浸膏。其余成分和條件與初始發(fā)酵培養(yǎng)基相同。結(jié)果如圖5所示。添加外加氮源不利于菌株發(fā)酵產(chǎn)酶。實施例3酶制劑的制備在實施例2所獲得的最佳發(fā)酵初始pH、接種量、碳源和氮源的基礎上，進行發(fā)酵試驗，其中發(fā)酵條件為36℃，搖床培養(yǎng)96h，將所得發(fā)酵液離心去菌體后得到的粗酶液和冷凍干燥制備酶粉制劑。結(jié)果顯示，粗酶液酶活為2500U/mL，冷凍干燥后，酶粉制劑活性在12.5萬U/g(堿性條件檢測為23.8萬)以上(其中，凍干后的含酶物質(zhì)(干物質(zhì))占發(fā) 酵液重量的約2％左右)。實施例4羽毛酶解實驗在本實施例中，將所得發(fā)酵液離心去菌體后得到的粗酶液(實施例3制備)用作酶制劑，進行羽毛蛋白的酶解試驗。初始酶解溫度55℃，pH8.0，羽毛底物5g，酶添加量60mL(酶活2500U/mL)，酶解時間12h。1.在pH6、8、10、12條件下，考察不同酶解pH對羽毛酶解的影響。結(jié)果如圖6所示，結(jié)果顯示，pH8.0條件下酶解產(chǎn)物中小肽/干物質(zhì)含量達到75.63％。2.在溫度35℃，40℃，45℃，50℃，55℃條件下，考察不同酶解溫度對羽毛酶解的影響。結(jié)果如圖8所示，結(jié)果顯示，45℃條件下酶解產(chǎn)物中小肽/干物質(zhì)含量達到70.33％。3.在酶液添加量為60mL，80mL，100mL，120mL條件下，考察不同酶添加量對羽毛酶解的影響。結(jié)果如圖7所示，結(jié)果顯示，酶液添加80mL(酶活2500U/mL)條件下酶解產(chǎn)物中小肽/干物質(zhì)含量達到77.21％。4.同時，對于優(yōu)化后酶解條件，還用一種市售的蛋白酶(2709堿性蛋白酶)作為對照，對酶解活性進行比較。其中，實驗組的酶添加量為4×104U/g羽毛，對照組(2709酶)的酶活為20×104U/g，其酶添加量與實驗組一樣，均為4×104U/g羽毛。測試結(jié)果如下表所示：表1.本發(fā)明蛋白酶與市售蛋白酶的酶解活性比較(按酶解后，產(chǎn)物中小肽含量計算)酶解底物(10％)2709酶本發(fā)明酶羽毛43.2％77.2％注：①酶解條件為廠家推薦酶解條件：2709堿性蛋白酶，40-50℃、pH9-12。②所述的小肽指出180Da≤分子量≤1000Da的肽。菌種保藏本發(fā)明的菌種耐輻射異常球菌J1(與保藏名稱相同)已于2015年7月20日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(ChinaCenterforTypeCultureCollection， 簡稱CCTCC)，地址:湖北省武漢市武昌珞珈山，保藏號：CCTCCNO.2015459。在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。當前第1頁1 2 3