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阿爾茲海默癥關(guān)鍵致病因子app的基因工程細(xì)胞株和藥物篩選模型的制作方法

文檔序號(hào):12346294閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種阿爾茲海默癥的基因工程細(xì)胞株,其特征在于:是指致病基因app完全或者部分缺失的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

2.一種用于app基因編碼序列敲除的Cas9質(zhì)粒載體,其特征在于:是指分別插入有如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.4所示堿基序列的質(zhì)粒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于app基因編碼序列敲除的Cas9質(zhì)粒載體,其特征在于:所述的質(zhì)粒是指PX335。

4.一種基于權(quán)利要求2或3所述的Cas9質(zhì)粒載體的app基因編碼序列敲除方法,其特征在于,包括如下步驟:將上述質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,對(duì)app基因編碼序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增,再對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物測序檢測app基因編碼序列發(fā)生敲除的細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)粒載體的app基因編碼序列敲除方法,其特征在于:所述的哺乳動(dòng)物細(xì)胞為HeLa、K562、HEK293、A549、MCF-7、LNCap、N2a、SH-SY5Y或者其它哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的任一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)粒載體的app基因編碼序列敲除方法,其特征在于:是采用脂質(zhì)體Lipofectamine2000試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)粒載體的app基因編碼序列敲除方法,其特征在于:PCR擴(kuò)增檢測突變類型中使用的引物序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

8.一種根據(jù)權(quán)利要求4~8任一項(xiàng)所述的app基因編碼序列敲除方法所獲得的完全或部分缺失的病理細(xì)胞株。

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