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基于作為異源多肽載體的包含非節(jié)段負鏈RNA病毒的核蛋白的多聚核糖核蛋白的亞單位疫苗平臺的制作方法

文檔序號:11849917閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.得自至少200個融合蛋白和細胞核糖核酸(RNA)的組合體的多聚核糖核蛋白(RNP),其中所述融合蛋白包含副粘病毒(Paramyxoviridae)科非節(jié)段負鏈RNA病毒的核蛋白(N),所述核蛋白與攜帶一或多個表位的異源多肽直接或間接融合。

2.權利要求1的多聚RNP,其中副粘病毒科非節(jié)段負鏈RNA病毒是麻疹病毒,優(yōu)選衍生自減毒活麻疹病毒毒株的麻疹病毒,更優(yōu)選衍生自Schwarz、Moraten、Rubeovax、AIK-C、Zagreb和Edmonston毒株的麻疹病毒,甚至更優(yōu)選衍生自Schwarz毒株或Moraten毒株的麻疹病毒。

3.權利要求1或2的多聚RNP,其中所述異源多肽來自寄生物,優(yōu)選來自瘧原蟲(Plasmodium)屬的原生動物寄生物,更優(yōu)選來自伯氏瘧原蟲(Plasmodium berghei)或惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum),或者來自病毒,優(yōu)選來自小RNA病毒(Picornaviridiae)科,更優(yōu)選來自腸道病毒(Enterovirus)屬,例如來自腸道病毒71(EV71)。

4.權利要求1-3任一項的多聚RNP,其中所述異源多肽與核蛋白(N)的C末端融合,特別是通過肽接頭與核蛋白(N)的C末端融合,所述肽接頭的序列大小為5-10個氨基酸殘基,優(yōu)選6或7個氨基酸殘基的肽接頭。

5.權利要求1-4任一項的多聚RNP,其是高分子量RNP,由核蛋白(N)與異源多肽獲得的200-1000個融合蛋白組合而成,優(yōu)選由300-700個所述融合蛋白、特別是由500-700個所述融合蛋白組合而成。

6.權利要求1-4任一項定義的融合蛋白的多核苷酸,特別是包含如下序列的多核苷酸:(i)編碼選自SEQ ID No:2、SEQ ID No:5、SEQ ID No:8和SEQ ID No:11的核蛋白(N)的核苷酸序列,任選地與(ii)編碼選自SEQ ID No:26和SEQ ID No:28的肽接頭的核苷酸序列融合,及(iii)與(i)的核苷酸序列或者,如果有的話,與(ii)的核苷酸序列融合的編碼異源多肽的核苷酸序列。

7.權利要求6的多核苷酸,其進一步包含前導序列和/或尾隨序列,例如SEQ ID No:42所示的克隆在核蛋白(N)的編碼序列上游的前導序列,和/或SEQ ID No:43所示的克隆在異源多肽編碼序列下游的尾隨序列。

8.權利要求6的分離的或純化的多核苷酸,其編碼權利要求1-4任一項定義的融合蛋白,并且包含選自SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34和SEQ ID NO:37的核苷酸序列。

9.表達載體,特別是攜帶權利要求6-8任一項的多核苷酸的質粒。

10.重組酵母,其是用權利要求6-8任一項的多核苷酸在使得權利要求1-5任一項的多聚RNP組成型表達或瞬時表達或可誘導表達的條件下重組的。

11.權利要求10的重組酵母,其是從巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)株或釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)株中制備的。

12.滅活的重組酵母,其得自權利要求10或11的重組酵母在58-60℃熱滅活45-60分鐘,優(yōu)選在60℃熱滅活45分鐘。

13.酵母裂解物,其是權利要求10或11的重組酵母的裂解物。

14.免疫原性組合物,其包含權利要求1-5任一項的多聚RNP或者權利要求10-12任一項的重組酵母或者權利要求13的酵母裂解物,其任選地不包含輔助佐劑。

15.亞單位疫苗平臺,其包含權利要求1-5任一項的多聚RNP或者權利要求10-12任一項的重組酵母或者權利要求13的酵母裂解物。

16.多價免疫原性組合物,其包含權利要求10-12任一項的重組酵母的混合物或者權利要求13的酵母裂解物的混合物,其中在所述混合物中存在重組酵母或酵母裂解物的至少兩個克隆,一個克隆表達權利要求1、3和4任一項定義的異源多肽,所述異源多肽與其他克隆的異源多肽不同。

17.一種制備權利要求1-5任一項的多聚RNP的方法,特征在于其包括如下步驟:

(i)獲得權利要求10-12任一項的重組酵母或者權利要求13的酵母裂解物,及

(ii)從所述酵母或酵母裂解物中回收多聚RNP。

18.一種制備權利要求10-12任一項的重組酵母或者權利要求13的酵母裂解物的方法,包括:

(i)將酵母用權利要求6-8任一項的多核苷酸重組,

(ii)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述酵母,

(iii)在所述酵母中表達融合蛋白,

(iv)任選地,將所述酵母在58-60℃熱滅活45-60分鐘,優(yōu)選在60℃熱滅活45分鐘,及

(v)任選地,制備酵母裂解物。

19.權利要求10-12任一項的重組酵母或者權利要求13的酵母裂解物作為在體外產(chǎn)生免疫原性組合物的活性成分或者作為向宿主遞送的表達和載體系統(tǒng)的用途。

20.權利要求1-5任一項的多聚RNP作為在體外產(chǎn)生免疫原性組合物的活性成分的用途。

21.權利要求1-5任一項的多聚RNP或者權利要求10-12任一項的重組酵母或者權利要求13的酵母裂解物,用于在需要其的宿主內引起針對異源多肽的保護性預防或治療性免疫應答。

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