本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及作為鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑化合物的晶型及其制備方法以及化合物的晶型在制備治療和/或預(yù)防腎損傷或心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
醛固酮是一種在腎上腺皮質(zhì)合成的鹽皮質(zhì)激素，通過與鹽皮質(zhì)激素受體結(jié)合，活化其受體來促進(jìn)鈉離子的保留和鉀離子的排泄，對電解質(zhì)平衡及改變動脈壁上的內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、纖維原細(xì)胞和動脈外膜及其介質(zhì)上的基質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能具有重要作用。醛固酮水平過高，導(dǎo)致鹽皮質(zhì)激素受體被異?；罨?，會導(dǎo)致電解質(zhì)失衡及血管損傷和纖維化等，造成高血壓等心血管疾病、腎/心臟/腦等器官損傷以及內(nèi)分泌紊亂等疾病。藥物通過競爭性的與鹽皮質(zhì)激素受體結(jié)合，阻斷醛固酮與鹽皮質(zhì)激素受體的結(jié)合，來抑制醛固酮介導(dǎo)的損害作用，進(jìn)而減少前述疾病的發(fā)生。式(1)所示的化合物2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈(在專利申請WO2012022121中已有描述)為醛固酮受體拮抗劑，選擇性與鹽皮質(zhì)激素受體結(jié)合，對糖皮質(zhì)激素、雄激素受體的親和力較低。WO2012022121記載了式(1)所示化合物的制備方法，是通過式(1)所示化合物的外消旋體化合物拆分后旋干所得，得到的化合物為無定形。式(1)化合物含有兩個手性中心，為了得到單一的異構(gòu)體，本領(lǐng)域技術(shù)人員通常需要進(jìn)行拆分，WO2012022121中記載的是先得到式(1)所示化合物的外消旋化合物后，再進(jìn)行拆分得到式(1)所示化 合物，使得式(1)所示化合物難以在GMP標(biāo)準(zhǔn)化車間內(nèi)生產(chǎn)，不利于產(chǎn)業(yè)化，且成本較大。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
在藥物研發(fā)中晶型的研究非常重要，化合物的晶型不同，將導(dǎo)致其穩(wěn)定性、溶解度等性質(zhì)的不同。因此本發(fā)明人對式(1)所示化合物的晶型進(jìn)行了大量的研究，由此確認(rèn)和發(fā)明了式(1)化合物的晶型。本發(fā)明人在制備式(1)化合物時，將拆分步驟提前，使得式(1)所示化合物很容易在GMP標(biāo)準(zhǔn)車間內(nèi)生產(chǎn)，可以順利實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。本發(fā)明目的之一在于提供式(1)化合物的晶型。本發(fā)明目的之二在于提供式(1)化合物的制備方法。本發(fā)明目的之三在于提供式(1)化合物的晶型的制備方法及其相互轉(zhuǎn)化方法。本發(fā)明的另一目的在于提供式(1)化合物的晶型在預(yù)防和/或治療腎損傷或心血管疾病(包括心臟損傷、高血壓、心力衰竭、心肌梗塞、心絞痛、心臟肥大、心肌炎、心臟和血管纖維化、壓力感受器官功能障礙或心律不齊)中的應(yīng)用，及其在制備治療和/或預(yù)防腎損傷或心血管疾病(包括心臟損傷、高血壓、心力衰竭、心肌梗塞、心絞痛、心臟肥大、心肌炎、心臟和血管纖維化、壓力感受器官功能障礙或心律不齊)的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：1.式(1)所示化合物2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈的晶型其特征在于，使用Cu-Ka輻射，以2θ角度表示的X-射線粉末衍射，在以下位置有特征峰：晶型I：14.8°±0.2°、17.4°±0.2°、19.4°±0.2°、19.8°±0.2°；晶型II：14.6°±0.2°、19.9°±0.2°、21.2°±0.2°、24.6°±0.2°；晶型III：15.3°±0.2°、19.5°±0.2°、20.5°±0.2°、25.0°±0.2°。2.技術(shù)方案1所述的化合物的晶型，其特征在于，使用Cu-Ka輻射，以2θ角度表示的X-射線粉末衍射，在以下位置有特征峰：晶型I：14.8°±0.2°、16.9°±0.2°、17.4°±0.2°、19.4°±0.2°、19.8°±0.2°、26.2°±0.2°；晶型II：14.6°±0.2°、18.0°±0.2°、18.7°±0.2°、19.9°±0.2°、21.2°±0.2°、24.6°±0.2°；晶型III：10.0°±0.2°、15.3°±0.2°、15.8°±0.2°、19.5°±0.2°、20.5°±0.2°、25.0°±0.2°。3.技術(shù)方案1或2所述的化合物的晶型，其特征在于，使用Cu-Ka輻射，以2θ角度表示的X-射線粉末衍射，在以下位置有特征峰：晶型I：9.8°±0.2°、12.9°±0.2°、14.8°±0.2°、15.4°±0.2°、16.9°±0.2°、17.4°±0.2°、19.4°±0.2°、19.8°±0.2°、22.6°±0.2°、26.2°±0.2°；晶型II：4.5°±0.2°、9.0°±0.2°、12.2°±0.2°、14.0°±0.2°、14.6°±0.2°、18.0°±0.2°、18.7°±0.2°、19.9°±0.2°、21.2°±0.2°、24.6°±0.2°；晶型III：3.8°±0.2°、10.0°±0.2°、15.3°±0.2°、15.8°±0.2°、17.9°±0.2°、19.5°±0.2°、20.5°±0.2°、25.0°±0.2°、26.0°±0.2°、27.2°±0.2°。4.式(1)所示化合物2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(9)將2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯手性拆分得(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯；(10)將(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯水解制得(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸；(11)(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡 唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸與4-羥基哌啶通過縮合反應(yīng)制得式(1)所示化合物。5.技術(shù)方案4的制備方法，還包括下述步驟之一：將步驟(11)得到的式(1)所示化合物置于無水低級醇、乙腈、乙酸乙酯與乙醇的混合溶劑、甲醇與四氫呋喃的混合溶劑、或乙腈與丙酮的混合溶劑中，加熱所得到的溶液直至澄清，然后使所述溶液降溫，將析出的固體過濾并干燥；或者將步驟(11)得到的式(1)所示化合物置于低級醇中使其溶解，再將所得到的溶液滴入水中，過濾，和任選地真空干燥；或者將步驟(11)得到的式(1)所示化合物用水和乙腈混合溶液漿洗，過濾，和任選地真空干燥；或者將步驟(11)得到的式(1)所示化合物溶于丙酮中，再將所得到的溶液滴入正庚烷中，過濾。5-1.技術(shù)方案4或5的制備方法，還包括在步驟(9)前的步驟(8)：(8)(E)-6-環(huán)戊基亞甲基-5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯與2-氯-4-肼基苯甲腈鹽酸鹽通過縮合反應(yīng)制得2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯。5-2.技術(shù)方案5-1的制備方法，還包括在步驟(8)前的步驟(7)：(7)2-氯-4-肼基苯甲腈與通過鹽酸成鹽反應(yīng)制得2-氯-4-肼基苯甲腈鹽酸鹽。5-3.技術(shù)方案5-2的制備方法，還包括在步驟(7)前的步驟(6)：(6)2-氯-4-氟苯腈與水合肼通過取代反應(yīng)制得2-氯-4-肼基苯甲腈。5-4.技術(shù)方案5-3的制備方法，還包括在步驟(6)前的步驟(5)：(5)5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯與環(huán)戊基甲醛通過縮合反應(yīng)制得(E)-6-環(huán)戊基亞甲基-5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯。5-5.技術(shù)方案5-4的制備方法，還包括在步驟(5)前的步驟(4)：(4)5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-甲腈通過水解和酯化反應(yīng)得到5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯。5-6.技術(shù)方案5-5的制備方法，還包括在步驟(4)前的步驟(3)：(3)5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-N-氧化物與N，N-二甲氨基甲酰氯，三甲基氰硅烷通過取代反應(yīng)得到5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-甲腈。5-7.技術(shù)方案5-6的制備方法，還包括在步驟(3)前的步驟(2)：(2)5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉通過氧化反應(yīng)得到5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-N-氧化物。5-8.技術(shù)方案5-7的制備方法，還包括在步驟(2)前的步驟(1)：(1)1，3-環(huán)己二酮與乙酸銨，丙烯醛通過縮合和加成反應(yīng)得到5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉。6.如技術(shù)方案1、2或3所述的式(1)所示化合物的晶型I的制備方法，其特征在于，將化合物2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈置于無水低級醇、乙腈、乙酸乙酯與乙醇的混合溶劑、甲醇與四氫呋喃的混合溶劑、或乙腈與丙酮的混合溶劑中，加熱所得到的溶液直至澄清，然后使所述溶液降溫，將析出的固體過濾并干燥得到化合物的晶型I；或者將化合物2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈溶于丙酮中，再將所得到的溶液滴入正庚烷中，過濾得到晶型I。7.如技術(shù)方案1、2或3所述的式(1)所示化合物的晶型III的制備方法，其特征在于，將化合物2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈置于低級醇中使其溶解，再將所得到的溶液滴入水中，過濾得到晶型III；或者將化合物2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈用水和乙腈混合溶液漿洗，過濾得到晶型III。8.如技術(shù)方案1、2或3所述的式(1)所示化合物的晶型II的制備方法，其特征在于，將化合物2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈置于低級醇中使其溶解，再將所得到的溶液滴入水中，過濾得到晶型III；或者將化合物2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈用水和乙腈混合溶液漿洗，過濾得到晶型III；然后再將晶型III真空干燥得晶型II。在本發(fā)明中，所述“低級醇”為甲醇、乙醇、正丙醇等。9.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物含有技術(shù)方案1、2或3所述的式(1)所示化合物的晶型，和藥用可接受的載體，其中 所述晶型包括晶型I、II、III或其組合。9-1.本發(fā)明還提供一種包括式(1)所示化合物的晶型I、II、III或其組合的藥物組合物。所述藥物組合物還可以包括藥用可接受的載體，例如賦形劑、粘合劑、增濕劑、崩解劑、增稠劑等。10.技術(shù)方案1、2或3所述的式(1)所示化合物的晶型在制備治療和/或預(yù)防腎損傷或心血管疾病的藥物中的應(yīng)用，其中所述晶型包括晶型I、II、III或其組合。11.技術(shù)方案10的應(yīng)用，其中所述心血管疾病包括心臟損傷、高血壓、心力衰竭、心肌梗塞、心絞痛、心臟肥大、心肌炎、心臟和血管纖維化、壓力感受器官功能障礙或心律不齊。12.一種治療和/或預(yù)防腎損傷或心血管疾病的方法，所述方法包括給予需要其的受試者治療有效量的技術(shù)方案1、2或3所述的式(1)所示化合物的晶型，其中所述晶型包括晶型I、II、III或其組合。13.技術(shù)方案12的方法，其中所述心血管疾病包括心臟損傷、高血壓、心力衰竭、心肌梗塞、心絞痛、心臟肥大、心肌炎、心臟和血管纖維化、壓力感受器官功能障礙或心律不齊。14.用于治療和/或預(yù)防腎損傷或心血管疾病的技術(shù)方案1、2或3所述的式(1)所示化合物的晶型，其中所述晶型包括晶型I、II、III或其組合。15.技術(shù)方案14的應(yīng)用，其中所述心血管疾病包括心臟損傷、高血壓、心力衰竭、心肌梗塞、心絞痛、心臟肥大、心肌炎、心臟和血管纖維化、壓力感受器官功能障礙或心律不齊。16.式(1)所示化合物的晶型I、II、III及無定形在一定條件下可以相互轉(zhuǎn)化，本發(fā)明還提供了晶型I、晶型II、晶型III以及與無定形之間的轉(zhuǎn)化關(guān)系。無定形在無水乙醇中重結(jié)晶制得晶型I；晶型I、II、III或其組合在低級醇溶劑中溶解后旋干制得無定形；晶型II在無水乙醇中重結(jié)晶制得晶型I；無定形溶于甲醇，然后將溶液滴入水中制得晶型III；晶型III室溫干燥制得晶型II；晶型I在乙腈與水的體系中漿洗制得晶型III；晶型III在無水乙醇中重結(jié)晶制得晶型I。附圖說明圖1：式(1)化合物晶型I的XRD圖譜；圖2：式(1)化合物晶型II的XRD圖譜；圖3：式(1)化合物晶型III的XRD圖譜；圖4：式(1)化合物晶型I、晶型II、晶型III以及與無定形之間的轉(zhuǎn)化關(guān)系圖，其中：1.乙醇重結(jié)晶；2.低級醇溶解后旋干；3.溶于甲醇，滴入水析出；4.低級醇溶解后旋干；5.低級醇溶解后旋干；6.乙醇重結(jié)晶；7.乙腈/水漿洗；8.乙醇重結(jié)晶；9.室溫干燥。具體實施方式以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實施例。實施例12-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈的制備1、5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉(01)的制備反應(yīng)方程式：投2個平行反應(yīng)：在100L的反應(yīng)釜中，加入45L甲苯，攪拌下加入1，3-環(huán)己二酮15kg，加熱至固體溶解，加入乙酸銨24kg，加熱至回流，反應(yīng)12h，冷卻至0℃，分批緩慢加入丙烯醛共15kg，緩慢升溫至回流，反應(yīng)12h，冷卻，分層，下層用甲苯洗滌2次(5L×2)，合并甲苯與上層溶液，旋蒸，共得5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉粗品7.4kg，黑色液體，產(chǎn)率18.8％。2、5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-N-氧化物(02)的制備反應(yīng)方程式：實驗操作如下：將5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉粗品7.4kg投入100L的反應(yīng)釜中，補(bǔ)加二氯甲烷至總量為50L，降溫至-10℃，分批加入間氯過氧苯甲酸共13kg，加入完畢，室溫攪拌反應(yīng)20h，抽濾，濾餅用 二氯甲烷洗滌2次，與濾液合并，用飽和硫代硫酸鈉溶液洗滌至碘化鉀淀粉試紙不顯藍(lán)色，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，得溶液50L，不經(jīng)處理直接投入下一步反應(yīng)。3、5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-甲腈(03)的制備反應(yīng)方程式：在100L的反應(yīng)釜中，加入上步得到的5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-N-氧化物溶液50L，加入三甲基氰硅烷10kg，緩慢加入N，N-二甲氨基甲酰氯11kg，室溫攪拌反應(yīng)48h，攪拌下緩慢分批加入飽和氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至8～9，分層，萃取，水相用二氯甲烷洗滌3次(8L×3)，合并有機(jī)相，用水洗滌1次(20L)，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋蒸，得約8L紅黑色液體，冷卻，乙醇結(jié)晶，得5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-甲腈930g，產(chǎn)率10.7％(以5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉為原料計算)。4、5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯(05)的制備反應(yīng)方程式：投3個平行反應(yīng)：在2L的圓底燒瓶中，加入800mL無水乙醇和5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-甲腈280g，冰浴下加入濃鹽酸400mL，升溫回流反應(yīng)16h，冷卻，旋蒸，加入1L無水乙醇，冷卻至0℃，滴加氯化亞砜200mL，升溫至回流反應(yīng)10h，旋蒸，粗品加入二氯甲烷溶解，用碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至堿性，分層，水相用二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相，干燥，旋蒸，共得5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯875g，產(chǎn)率8.18％。5、(E)-6-環(huán)戊基亞甲基-5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯(07) 的制備反應(yīng)方程式：投3個平行反應(yīng)：在2L的單口瓶中，加入5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯291g和450mL乙醇，-20℃冰浴中加入環(huán)戊基甲醛213mL，攪拌10min，緩慢加入吡咯烷110mL，N2置換3次，室溫避光反應(yīng)8h，-20℃冰浴中靜置2h，抽濾，固體用冰乙醇洗滌，干燥，共得(E)-6-環(huán)戊基亞甲基-5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯862g，產(chǎn)率72.3％。6、2-氯-4-肼基苯甲腈鹽酸鹽(08)的制備反應(yīng)方程式：在100L的反應(yīng)釜中，加入40L乙醇和2-氯-4氟苯腈7kg，加入水合肼4L，加熱回流反應(yīng)5h，冷卻，離心，固體投入到100L的反應(yīng)釜中，加入40L無水乙醇，緩慢加入濃鹽酸7.5L，加熱回流反應(yīng)2h，離心，干燥，得2-氯-4-肼基苯甲腈鹽酸鹽7kg，收率76.2％。7、2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯(09)的制備反應(yīng)方程式：投4個平行反應(yīng)：在2L的單口瓶中，加入(E)-6-環(huán)戊基亞甲基-5-氧代-5，6，7，8-四氫喹啉-2-羧酸乙酯215.5g、2-氯-4-肼基苯甲腈鹽酸鹽191g和900mL乙醇，N2置換3次，80℃避光回流反應(yīng)9h，冷卻至室溫，-20℃冰浴中靜置2h，抽濾，固體用冰乙醇、乙醚分別洗滌，干燥，共得2-(3- 氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯1026g，產(chǎn)率79.3％。8、(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯(12)的制備反應(yīng)方程式：將2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯用SFC(超臨界流體色譜儀)拆分，有兩個光學(xué)異構(gòu)體，分離收集第一個組分為(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯；拆分條件：儀器：SFC(Novasep30-50)制備柱：ChiralpakIA，20μm，5×25cm流動相：A相為超臨界CO2，B相為二氯甲烷∶四氫呋喃∶二乙醇胺＝50∶50∶0.1(vol∶vol∶vol)，A∶B＝50∶50(vol∶vol)流速150g/min檢測波長：465nm樣品配置：取2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯1025g，添加二氯甲烷超聲溶解，濾過，得濃度約為50mg/mL的樣品溶液。用SFC拆分，收集第一個出峰異構(gòu)體樣品即為(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯601.58g。9、(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸(13)的制備反應(yīng)方程式：在20L的反應(yīng)釜中，加入(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸乙酯1066g、4L四氫呋喃和2L甲醇，-10℃攪拌10min，緩慢加入溶有氫氧化鈉192g的水溶液1.2L，室溫反應(yīng)4h，旋去約一半溶劑，用稀鹽酸調(diào)pH至3～4，抽濾，固體用冰甲醇和乙醚分別洗滌，干燥，得(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸867g，產(chǎn)率86.7％。10、2-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈(式(1)化合物)的制備反應(yīng)方程式：在5L的反應(yīng)瓶中，加入(3S，3aR)-2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-環(huán)戊基-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-7-羧酸380g、900mL二氯甲烷和360mLN，N-二甲基甲酰胺，攪拌下加入三乙胺380mL，降溫至-10℃，繼續(xù)攪拌10min，加入溶有4-羥基哌啶137g的二氯甲烷溶液700mL，攪拌5min，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)380g，室溫反應(yīng)3h，補(bǔ)加2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯50g，反應(yīng)1h，旋蒸除去二氯甲烷和部分三乙胺，將剩余溶液滴入10倍量水中，有固體析出，抽濾，固體用2L二氯甲烷溶解，用2L水洗滌1次，水相用500mL二氯甲烷反萃1次，合并有機(jī)相，干燥，旋干得式(1)固體290g，產(chǎn)率63.7％。分子式：C28H30ClN5O2質(zhì)譜(M+H)：5041H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.375-8.395(1H，d)，7.423-7.474(2H，m)，7.264-7.276(1H，d)，6.968-6.995(1H，dd)，4.641-4.678(1H，dd)，4.17-4.21(1H，m)，3.99(1H，s)，3.76-3.79(1H，m)，3.515(1H，m)， 3.41-3.44(1H，m)，3.230-3.322(2H，m)，2.995(1H，m)，2.321-2.352(1H，m)，2.10-2.15(2H，m)，1.978-2.089(2H，m)，1.863-1.895(1H，m)，1.758-1.777(1H，m)，1.433-1.663(7H，m)，1.221-1.352(2H，m)。實施例22-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈晶型I的制備(1)將實施例1制備所得式(1)所示化合物1g，置于3mL無水乙醇中，加熱至80℃，直至溶液澄清，然后緩慢降溫至室溫，有大量固體析出，過濾，用無水乙醇淋洗三遍，將得到的固體放置于真空干燥箱中60℃真空干燥12h，獲得晶型I。晶型I的X-射線粉末衍射(XRD)圖譜如圖1中所示，其中主要參數(shù)如下：實施例32-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈晶型I的制備(2)將實施例1制備所得式(1)所示化合物146mg，80℃溶于50mL乙腈中，后緩慢降溫至室溫，攪拌過夜，過濾，得晶型I。實施例42-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫 -2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈晶型I的制備(3)將實施例1制備所得式(1)所示化合物200mg，置于100mL圓底燒瓶中，加10mL乙酸乙酯，78℃回流仍不溶解，后加入0.5mL乙醇后80℃攪拌，迅速溶解，緩慢降溫至室溫，2天后過濾，得晶型I。實施例52-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈晶型I的制備(4)將實施例1制備所得式(1)所示化合物100mg，置于100mL圓底燒瓶中，加3mL丙酮，溶解，滴入20mL正庚烷中，析出固體，過濾，得晶型I。實施例62-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈晶型I的制備(5)將實施例1制備所得式(1)所示化合物100mg，置于100mL圓底燒瓶中，取1mL甲醇與1mL四氫呋喃制成甲醇∶四氫呋喃＝1∶1的混合溶劑，取0.5mL混合溶劑加入到圓底燒瓶中，60℃加熱攪拌溶解，后緩慢降至室溫，析出固體，過濾，得晶型I。實施例72-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈晶型I的制備(6)將實施例1制備所得式(1)所示化合物100mg，置于100mL圓底燒瓶中，取5mL乙腈與5mL丙酮配制成乙腈∶丙酮＝1∶1的混合溶劑，取3.5mL混合溶劑加入到圓底燒瓶中，60℃加熱攪拌溶解，后緩慢降至室溫，析出固體，過濾，得晶型I。實施例82-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈晶型III的制備(1)將實施例1制備所得式(1)所示化合物200mg置于4mL甲醇中， 80℃溶解，將該溶液反滴入40mL水中，過濾得到晶型III。晶型III的X-射線粉末衍射(XRD)圖譜如圖3中所示，其中主要參數(shù)如下：實施例92-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈晶型III的制備(2)將實施例1制備所得式(1)所示化合物100mg置于10mL離心管中，取10mL水和1mL乙腈配制成水∶乙腈＝10∶1的混合溶液，取8mL水與乙腈的混合溶液加入離心管中，攪拌漿洗，過濾得到晶型III。實施例102-氯-4-[(3S，3aR)-3-環(huán)戊基-7-(4-羥基哌啶-1-羰基)-3，3a，4，5-四氫-2H-吡唑并[3，4-f]喹啉-2-基]苯甲腈晶型II的制備將實施例8制備的晶型III室溫下真空干燥12h獲得晶型II。晶型II的X-射線粉末衍射(XRD)圖譜如圖2中所示，其中主要參數(shù)如下：實驗例1本發(fā)明化合物晶型I的穩(wěn)定性供試品：式(1)所示化合物晶型I：通過實施例2制得；影響因素試驗考察條件：高溫試驗：①將式(1)所示化合物晶型I平鋪于干燥潔凈表面皿中，在60℃ 條件下放置10天，分別于第5天和第10天取樣，測定有關(guān)物質(zhì)及式(1)所示化合物的含量，與0天的樣品進(jìn)行比較；②將式(1)所示化合物晶型I內(nèi)層用藥用低密度聚乙烯袋、外套聚酯/鋁/聚乙烯藥品包裝用復(fù)合膜密封包裝，在60℃條件下放置10天，分別于第5天和第10天取樣，測定有關(guān)物質(zhì)及式(1)所示化合物的含量，與0天的樣品進(jìn)行比較。高濕試驗：將式(1)所示化合物晶型I平鋪于干燥潔凈表面皿中，在25℃、RH90％±5％條件下放置10天，分別于第5天和第10天取樣，測定有關(guān)物質(zhì)及式(1)所示化合物的含量，與0天的樣品進(jìn)行比較。光照試驗：將式(1)所示化合物晶型I平鋪于干燥潔凈表面皿中，置光照箱內(nèi)，于照度為4500Lx±500Lx條件下放置10天，分別于第5天和第10天取樣，測定有關(guān)物質(zhì)及式(1)所示化合物的含量，與0天的樣品進(jìn)行比較。含量：按照中國藥典2010版附錄VD高效液相色譜法，采用外標(biāo)法進(jìn)行測定。有關(guān)物質(zhì)：按照中國藥典2010版附錄VD高效液相色譜法，采用面積歸一化法進(jìn)行測定。試驗結(jié)果：見下表1。表1式(1)所示化合物晶型I的影響因素試驗考察結(jié)果本發(fā)明人對式(1)所示化合物的晶型I的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，由試驗結(jié)果可知，式(1)所示化合物的晶型I在高溫、高濕和光照的條件下，有關(guān)物質(zhì)、式(1)所示化合物的含量基本沒有變化，晶型I的 穩(wěn)定性優(yōu)于無定形，表明式(1)所示化合物的晶型I具有較高的穩(wěn)定性，便于藥品的制備、儲存和運(yùn)輸，更利于保證藥物使用的有效性和安全性。實驗例2本發(fā)明化合物晶型II的穩(wěn)定性供試品：式(1)所示化合物晶型II：通過實施例4制得；影響因素試驗考察條件：高溫試驗：①將式(1)所示化合物晶型II平鋪于干燥潔凈表面皿中，在60℃條件下放置10天，于第10天取樣，測定有關(guān)物質(zhì)及式(1)所示化合物的含量，與0天的樣品進(jìn)行比較；②將式(1)所示化合物晶型II內(nèi)層用藥用低密度聚乙烯袋、外套聚酯/鋁/聚乙烯藥品包裝用復(fù)合膜密封包裝，在60℃條件下放置10天，于第10天取樣，測定有關(guān)物質(zhì)及式(1)所示化合物的含量，與0天的樣品進(jìn)行比較。高濕試驗：將式(1)所示化合物晶型II平鋪于干燥潔凈表面皿中，在25℃、RH90％±5％條件下放置10天，于第10天取樣，測定有關(guān)物質(zhì)及式(1)所示化合物的含量，與0天的樣品進(jìn)行比較。光照試驗：將式(1)所示化合物晶型II平鋪于干燥潔凈表面皿中，置光照箱內(nèi)，于照度為5000Lx±500Lx條件下放置10天，于第10天取樣，測定有關(guān)物質(zhì)及式(1)所示化合物的含量，與0天的樣品進(jìn)行比較。含量：按照中國藥典2010版附錄VD高效液相色譜法，采用外標(biāo)法進(jìn)行測定。有關(guān)物質(zhì)：按照中國藥典2010版附錄VD高效液相色譜法，采用面積歸一化法進(jìn)行測定。試驗結(jié)果：見下表2。表2式(1)所示化合物晶型II的影響因素試驗考察結(jié)果本發(fā)明人對式(1)所示化合物的晶型II的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，由試驗結(jié)果可知，式(1)所示化合物的晶型II在高溫、高濕和光照的條件下，有關(guān)物質(zhì)、式(1)所示化合物的含量基本沒有變化，晶型II的穩(wěn)定性優(yōu)于無定形，表明式(1)所示化合物的晶型II具有較高的穩(wěn)定性，便于藥品的制備、儲存和運(yùn)輸，更利于保證藥物使用的有效性和安全性。實驗例3本發(fā)明化合物晶型I對高鹽誘導(dǎo)的Dahl鹽敏感(Dahl/ss)大鼠的器官保護(hù)和降壓作用供試品及配制：本發(fā)明化合物晶型I的固體分散體(本發(fā)明化合物晶型I∶PVPK30＝1∶8(w/w))：本發(fā)明化合物晶型I的固體分散體用適量的滅菌注射用水配制濃度為0.03、0.10、0.30、1.00mg/mL的混懸液，每天臨用前配制。動物分組及造模：實驗動物：雄性8-9周齡的SPF級(無特定病原體級)Dahl/ss大鼠(購自HARLANLABORATORIES，INC.，由北京維通利華試驗動物有限公司代購)，正常檢疫1周后，體征狀況良好的入選本實驗。Dahl/ss大鼠根據(jù)給藥前檢測血壓隨機(jī)分為6組：正常對照組(n＝10)，模型組(4％NaCl，n＝12)，本發(fā)明化合物晶型I治療組，4組：0.3mg/kg/day劑量組(n＝11)、1mg/kg/day劑量組(n＝11)、3mg/kg/day劑量組(n＝11)、10mg/kg/day劑量組(n＝11)，n為大鼠只數(shù)。實驗方法：采用含4％NaCl的AIN-93G試驗動物飼料誘導(dǎo)Dahl/ss大鼠高血壓腎病模型評價本發(fā)明化合物晶型I的體內(nèi)藥效活性。在實驗開始前1周，采用夾尾法血壓檢測方法進(jìn)行兩次血壓監(jiān)測，使大鼠適應(yīng)血壓監(jiān)測操作。實驗開始前監(jiān)測血壓一次，作為實驗給藥前的基礎(chǔ)血壓值。大鼠根據(jù)給藥前檢測血壓隨機(jī)分組。第二天開始造模，將含4％NaCl的AIN-93G試驗動物飼料用做飼料，動物自由進(jìn)食和飲水，持續(xù)42天。正常對照組給予AIN-93G飼料，模型組及本發(fā)明化合物晶型I治療組的各劑量組給予含4％NaCl的AIN-93G飼料。本發(fā)明化合物晶型I治療組分別給予本發(fā)明化合物晶型I0.3、1、3、10mg/kg/day，每天灌胃給藥兩次，每次灌胃體積為5mL/kg。模型組與正常對照組給予等量的滅菌注射用水。血壓(收縮壓，簡稱SBP)檢測：每周測量1次血壓，連續(xù)6周，分析各組血壓變化情況。腎臟、心臟病理檢測：試驗結(jié)束后，無痛方式處死大鼠，摘取雙側(cè)腎臟、心臟。腎臟用蘇木精-伊紅(HE)染色，評價腎臟損傷。心臟測量心臟左心室壁厚度，評價心臟損傷。實驗結(jié)果：降壓作用：由此看出，本發(fā)明化合物晶型I在該模型上表現(xiàn)出明顯的降壓作用，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，見表3。表3SBP(mmHg，平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)*p＜0.05，與正常對照組相比；＃p＜0.05，與模型組相比。腎臟和心臟保護(hù)：根據(jù)腎損傷評分結(jié)果，本發(fā)明化合物晶型I治療組在保護(hù)腎臟損傷方面有顯著的療效，見表4。與模型組比較，本發(fā)明化合物晶型I顯著降低左心室壁厚度，見表4。表4對腎臟損和心臟損傷的保護(hù)作用*p＜0.05，與正常對照組相比；＃p＜0.05，與模型組相比。在高鹽誘導(dǎo)的Dhal/ss大鼠高血壓及腎病模型中，本發(fā)明化合物晶型I表現(xiàn)出明顯的降壓作用和腎損傷保護(hù)的作用。