制備基于透明質(zhì)酸的組合物的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種制備組合物的方法，所述組合物包含交聯(lián)的第一聚合物，任選地第二聚合物，所述第二聚合物可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述方法包含至少步驟(i)至(iv)：(i)交聯(lián)含所述第一聚合物和水的混合物；(ii)步驟(i)交聯(lián)后，終止所述交聯(lián)；(iii)任選地將步驟ii)中得到的產(chǎn)物與所述第二聚合物混合；(iv)透析步驟(iii)中得到的產(chǎn)物。
【專利說明】制備基于透明質(zhì)酸的組合物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及制備基于多糖如透明質(zhì)酸的組合物如凝膠的方法，涉及像這樣的組合物，涉及含注射器和所述組合物的套件，并涉及所述組合物作為皮膚填充物(dermatological filler)的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]已知使用凝膠如基于多糖和水的水凝膠作為皮膚填充物。此類凝膠通常通過包含各多糖在含水介質(zhì)中化學交聯(lián)的方法制備。合適的多糖例如基于透明質(zhì)酸，因為它在各生物體內(nèi)存在于相同或相似的組合物中。如透明質(zhì)酸是皮膚的主要成分，在那里它參與組織修復。因此，它提供最小的副作用并允許安全應(yīng)用。
[0003]EP 1818344涉及用于制備交聯(lián)的透明質(zhì)酸凝膠的方法，包括在酸性或堿性條件下攪拌并混合含10?/ν%或更多透明質(zhì)酸、交聯(lián)劑和水的混合物。
[0004]EP 2 054 039 (W0 2008/018796)涉及一種粘彈性水凝膠組合物，其包含能通過立構(gòu)復合(stereocomplex)相互作用而彼此相互作用的第一微粒和第二微粒,其中所述第一微粒包含交聯(lián)的第一親水聚合物，所述第一微粒包含第一低聚物或含第一手性部位的共聚低聚物的外部接枝物，所述第一手性部位包含第一手性單體，且其中所述第二微粒包含交聯(lián)的第二親水聚合物，所述第二微粒包含第二低聚物或含第二手性部位的共聚低聚物的外部接枝物，所述第二手性部位包含第二手性單體，所述第二手性單體具有與所述第一手性單體手性相反的手性，其中所述第一手性部位和所述第二手性部位彼此非共價相互作用。所述親水聚合物可為透明質(zhì)酸。
[0005]EP 2 178 923 (W0 2009/018076)涉及用于制備交聯(lián)的透明質(zhì)酸的方法，所述方法包含將透明質(zhì)酸與聚乙二醇基交聯(lián)劑接觸。
[0006]WO 2011/119468涉及用于軟組織增強的水凝膠，其包含具有零長度交聯(lián)部分的交聯(lián)的生物相容性聚合物和任選地至少一種嵌入到所述交聯(lián)的生物相容性聚合物中的其它活性成分。
[0007]EP 2 152 329 (W0 2008/068297)涉及可以單相水凝膠形式皮下或皮內(nèi)注射的植入物，其包含由交聯(lián)的透明質(zhì)酸組成的凝膠和它的生理學上可接受的鹽中的一種。
[0008]EP 2 170 961 (W0 2009/021526)涉及用在美容醫(yī)學和整形外科學中的透明質(zhì)酸分散液，其中所述分散相包含由交聯(lián)的透明質(zhì)酸制成的顆粒，且所述連續(xù)相大體上包含線性透明質(zhì)酸。
[0009]EP I 699 500 (W0 2005/067994)涉及包含交聯(lián)的、水不溶的、水化的透明質(zhì)酸凝膠顆粒的透明質(zhì)酸組合物。所述組合物可用于在需要組織增強的受試者中增強組織，涉及一種穩(wěn)定交聯(lián)的HA的方法，所述方法包括用含局部麻醉劑的生理兼容的水溶液使水不溶的、脫水的交聯(lián)HA水化，其中穩(wěn)定組合物的儲能模量值G’為非穩(wěn)定組合物的G’值的至少約110%，并涉及所述穩(wěn)定的HA組合物。
[0010]WO 2010/015900涉及基于透明質(zhì)酸和其藥學上可接受的鹽的軟組織裝填物，例如真皮和真皮下裝填物，其中所述透明質(zhì)酸基組合物可包括治療上有效量的至少一種麻醉齊U，例如，利多卡因。所述包含利多卡因的透明質(zhì)酸基組合物相對于包含利多卡因的傳統(tǒng)的組合物具有增強的穩(wěn)定性，例如當進行殺菌技術(shù)或長時間儲存時。也提供了制備此類透明質(zhì)酸基組合物的方法和過程。
[0011]FR 2 919 999涉及化妝用組合物或藥物組合物，其包含透明質(zhì)酸和二價陽離子。所述組合物可用于處理皺紋。
[0012]EP 2 254 584 (W0 2009/098127)涉及能釋放鋅和/或至少一種鋅形式的糖鹽的生物相容的可注射產(chǎn)品，涉及含所述產(chǎn)品的組合物，并涉及其用途，尤其是用于裝填或增加生物組織的體積或用于代替或補充生物流體。
[0013]EP 2 155 212 (W0 2008/139122)涉及透明質(zhì)酸和至少一種透明質(zhì)酸降解抑制劑的組合，其尤其是旨在用在人類的皮膚科和整形外科中。
[0014]EP O 839 159 BI公開了用于制備交聯(lián)的生物相容的多糖凝膠組合物的方法。所述方法包含在多官能交聯(lián)劑存在下多糖的交聯(lián)，其中形成了粘彈性的凝膠。
[0015]EP I 711 552 BI涉及一種用于生產(chǎn)生物相容的交聯(lián)凝膠的方法，包括交聯(lián)生物相容的聚合物，用非交聯(lián)的聚合物稀釋所述交聯(lián)的聚合物，和終止所述交聯(lián)反應(yīng)的步驟。
[0016]EP O 466 300 BI涉及一種獲得生物相容的粘彈性凝膠懸浮液的方法，所述方法包含將含交聯(lián)的透明質(zhì)酸的生物相容凝膠和可例如為透明質(zhì)酸的第二聚合物混合，以形成兩相混合物，并涉及像這樣的凝膠。
[0017]發(fā)明目的
[0018]本發(fā)明的一個目的是提供用于制備基于多糖的組合物如凝膠的方法，所述組合物可用作皮膚填充物，其中所述組合物應(yīng)具有優(yōu)異的穩(wěn)定性，即在應(yīng)用后不改變它的性質(zhì)，尤其是它的粘彈性質(zhì)，且可以根據(jù)皮膚學要求以特制的方式調(diào)整所述組合物。此外，所述凝膠應(yīng)具有優(yōu)異的皮膚組織相容性。
[0019]發(fā)明簡沭
[0020]用制備組合物如凝膠的方法實現(xiàn)該目的，所述組合物包含交聯(lián)的第一聚合物，任選地可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的第二聚合物，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖；和用根據(jù)上述方法制備的組合物實現(xiàn)該目的。
[0021]特別地，根據(jù)第一方面，本發(fā)明涉及制備組合物如凝膠的方法，所述組合物包含交聯(lián)的第一聚合物，任選的第二聚合物，所述第二聚合物可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述方法包含至少步驟(i)至(iv):
[0022](i)交聯(lián)含所述第一聚合物和水的混合物；
[0023](ii)步驟(i)交聯(lián)后，終止所述交聯(lián)；
[0024](iii)任選地將步驟(ii)中得到的產(chǎn)物與所述第二聚合物混合；
[0025](iv)透析步驟(ii)或步驟(iii)中得到的產(chǎn)物。
[0026]在一個實施方案中，所述第二聚合物的存在是強制性的。在該實施方案中，所述方法要求根據(jù)步驟(iii)將步驟(ii)中得到的產(chǎn)物與所述第二聚合物混合。
[0027]在一個實施方案中，所述第二聚合物的存在不是必須的。在該實施方案中，所述方法不要求根據(jù)步驟(iii)將步驟(ii)中得到的產(chǎn)物與所述第二聚合物混合。
[0028]在一個實施方案中，所述第一和第二聚合物可相同。
[0029]在一個實施方案中，所述第一和第二聚合物可彼此不同。
[0030]在一個實施方案中，所述第一聚合物為交聯(lián)的且所述第二聚合物為非交聯(lián)的。
[0031]在一個實施方案中，所述第一和第二聚合物選自透明質(zhì)酸及其鹽。
[0032]在一個實施方案中，所述第一和第二聚合物選自透明質(zhì)酸或其鹽。
[0033]在一個實施方案中，所述透明質(zhì)酸鹽為鈉鹽。
[0034]在一個實施方案中，步驟(i)中使用的第一聚合物具有從1.5MDa至小于3.5MDa或從2.0MDa至小于3.5MDa或從2.5MDa至小于3.0MDa的分子量Mw。
[0035]在一個實施方案中，步驟(iii)中使用的第二聚合物具有至少3.0MDa或至少3.5MDa的分子量。
[0036]在一個實施方案中，所述第二組合物的重量基于所述第一組合物的重量為少于5%，或少于4%，例如在0.01-5%的范圍內(nèi)，或在0.1-4%的范圍內(nèi)，或在0.1-2.5%的范圍內(nèi)，或 0.2-2.0%，或 0.5-1.5%。
[0037]在一個實施方案中，所述方法包含在步驟(iv)后進一步的步驟(V):
[0038](V)將麻醉劑或抗心律失常劑，如利多卡因，或鹽酸利多卡因，或鹽酸利多卡因一水合物，或丁卡因，摻和到步驟(iv)得到的產(chǎn)物中。
[0039]在一個實施方案中，所述方法包含在步驟(iv)后，或步驟(V)后，進一步的步驟(vi):
[0040](vi)將步驟(iv)或步驟(V)得到的產(chǎn)物裝填到注射器中并對其殺菌。
[0041]在一個實施方案中，步驟(i)中混合物進一步包含堿性磷酸鹽緩沖劑。
[0042]在一個實施方案中，在步驟(iii)中以具有磷酸鹽緩沖劑的混合物的形式提供所述第二聚合物。
[0043]在一個實施方案中，以具有磷酸鹽緩沖劑的混合物的形式提供步驟(V)中提供的所述麻醉劑或抗心律失常劑，如利多卡因或丁卡因。
[0044]在一個實施方案中，步驟(i)的反應(yīng)溫度為0_40°C，如15_40°C ;或25_351:，或25-30°C，或 30 至 35°C。
[0045]在一個實施方案中，步驟(ii)的反應(yīng)溫度為0_30°C，如0-10°C ;或3_7°C。
[0046]在一個實施方案中，步驟(iii)的反應(yīng)溫度為0_30°C，如0-10°C ;或3_7°C。
[0047]在一個實施方案中，步驟(iv)的反應(yīng)溫度為0_30°C，如0-10°C ;或3_7°C。
[0048]在一個實施方案中，步驟(i)中，二縮水甘油醚(diglycidyl ether)被用作交聯(lián)劑。
[0049]在一個實施方案中，步驟(i)中，1，4_丁二醇二縮水甘油醚(BDDE)被用作交聯(lián)劑。
[0050]在一個實施方案中，步驟(ii)包含步驟(i1.1):
[0051](i1.1)將步驟(i)中得到的產(chǎn)物經(jīng)受酸處理。
[0052]在一個實施方案中，步驟(ii)包含步驟(i1.1)和(i1.2):
[0053](i1.1)將步驟(i)中得到的產(chǎn)物經(jīng)受酸處理；
[0054](i1.2)擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物；或
[0055]通過篩(sieve)擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物；或
[0056]通過具有500-600 μ m范圍的篩孔尺寸的篩擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物。
[0057]在一個實施方案中，根據(jù)步驟(iv)的所述透析步驟進一步包括步驟(iv.1)至(iv.3):(iv.1)通過第一篩擠壓步驟(iii)中得到的產(chǎn)物，并隨后通過第二篩擠壓所述第一篩的擠壓產(chǎn)物，其中所述第二篩的篩孔尺寸小于所述第一篩的篩孔尺寸；或
[0058]通過第一篩擠壓步驟(iii)中得到的產(chǎn)物，并隨后通過第二篩擠壓所述第一篩的擠壓產(chǎn)物，并隨后通過第三篩擠壓所述第二篩的擠壓產(chǎn)物，其中所述第二篩的篩孔尺寸小于所述第一篩的篩孔尺寸，且所述第三篩的篩孔尺寸小于所述第二篩的篩孔尺寸；
[0059](iv.2)將步驟(iv.1)中得到的產(chǎn)物裝填至透析膜中；
[0060](iv.3)將步驟(iv.2)中得到的裝填的膜放到透析溶液中。
[0061]在一個實施方案中，根據(jù)步驟(iv)的所述透析步驟進一步包括步驟(iv.1)至(iv.3):
[0062](iv.1)通過具有325-425 μ m篩孔尺寸的第一篩擠壓步驟(iii)得到的產(chǎn)物；并隨后通過具有175-225 μ m篩孔尺寸的第二篩擠壓所述第一篩的擠壓產(chǎn)物；并隨后通過具有110-170 μ m篩孔尺寸的第三篩擠壓所述第二篩的擠壓產(chǎn)物；
[0063](iv.2)將步驟(iv.1)中得到的產(chǎn)物裝填到具有12，000-14, OOODa的截留分子量的透析膜中；
[0064](iv.3)將步驟(iv.2)中得到的裝填的膜放到透析溶液中。
[0065]上述實施方案的任一個實施方案可與至少一個選自上述實施方案的另一個實施方案結(jié)合。
[0066]根據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明涉及組合物，如凝膠，所述組合物包含交聯(lián)的第一聚合物，任選地第二聚合物，所述第二聚合物可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述組合物可通過根據(jù)所述第一方面的方法或根據(jù)所述第一方面的方法和其中限定的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合得到。
[0067]根據(jù)本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明涉及套件，所述套件包含注射器和根據(jù)所述第二方面的組合物，或根據(jù)所述第一方面的方法制備的組合物。
[0068]根據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明涉及根據(jù)所述第二方面的組合物在美容應(yīng)用中的使用，或涉及根據(jù)所述第一方面的方法制備的組合物在美容應(yīng)用中的使用。
[0069]在一個實施方案中，所述組合物被用作皮膚填充物。
[0070]根據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明涉及用作藥劑的根據(jù)所述第二方面的組合物如凝膠。
[0071]發(fā)明詳沭
[0072]根據(jù)所述第一方面，本發(fā)明涉及制備含交聯(lián)的第一聚合物、可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的任選地第二聚合物和水的組合物的方法，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述方法包含至少步驟(i)至(iv):
[0073](i)交聯(lián)含所述第一聚合物和水的混合物；
[0074](ii)步驟(i)交聯(lián)后，終止所述交聯(lián)；
[0075](iii)任選地將步驟(ii)中得到的產(chǎn)物與所述第二聚合物混合；
[0076](iv)透析步驟(ii)或步驟(iii)中得到的產(chǎn)物。
[0077]本公開內(nèi)容中使用的術(shù)語“組合物”包含含交聯(lián)的第一聚合物、可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的任選地第二聚合物和水的產(chǎn)物。
[0078]在一個實施方案中，所述組合物為凝膠如水凝膠。本文中使用的術(shù)語“凝膠”包含同時具有粘性和彈性性質(zhì)的產(chǎn)物。因此，所述術(shù)語包含粘彈性產(chǎn)物。在大眾科學中，凝膠有時被表征為果凍狀物質(zhì)?？赏ㄟ^測定所述凝膠的損耗模量(loss modulus)和儲能模量(storage modulus)來測定凝膠的粘彈性質(zhì)。
[0079]可由損耗因子tanS =G”/G’表示所述損耗模量G”和所述儲能模量G’的比值。所述損耗因子越高，產(chǎn)物的性質(zhì)越接近牛頓流體(Newtonian flow)?？捎眯g(shù)語Π*表示所述產(chǎn)物的粘性。用于測定tan δ和的合適的方法是本領(lǐng)域已知的。
[0080]在本發(fā)明的方法中，所述組合物或根據(jù)本發(fā)明的組合物如凝膠強制性要求多糖作為第一聚合物使用，且如果還使用第二聚合物，那么也強制性要求多糖作為第二聚合物使用。
[0081]本文所用的術(shù)語“多糖”包含由通過糖苷鍵連接在一起的重復單體單元組成的或包含通過糖苷鍵連接在一起的重復單體單元的碳水化合物分子。一般來說，所述多糖包含多于10個單糖單元。多糖的例子為例如淀粉、糖原、纖維素、甲殼素或透明質(zhì)酸，或其混合物的多糖。
[0082]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多糖為透明質(zhì)酸?？梢云潲}的形式如鈉鹽提供所述透明質(zhì)酸。也可能提供所述酸及其鹽如鈉鹽的混合物。
[0083]因此，本文使用的術(shù)語“透明質(zhì)酸(hyaluronic acid) ”是術(shù)語如“透明質(zhì)酸(hyaluronan) ”或“透明質(zhì)酸鹽(hyaluronate) ”的同義詞。在下文中，透明質(zhì)酸可被簡寫成術(shù)語“HA”。
[0084]HA為二糖的非交聯(lián)聚合物。它可具有多達25.000個二糖單元的長度。HA的分子量可為 5，000-20，000，OOODa0
[0085]HA在本領(lǐng)域中具有廣泛公認的含義。具有不同分子量(Mw)和/或不同分子量分布等級的HA是在市場上可買到的。它以非交聯(lián)形式獲得，在根據(jù)本發(fā)明的方法的步驟(i)中作為起始原料。
[0086]步驟⑴
[0087]步驟(i)要求交聯(lián)含所述第一聚合物和水的混合物。
[0088]本文中使用的術(shù)語“交聯(lián)”包含通過一個化學鍵(a chemical bond)或多個化學鍵(chemical bonds)交聯(lián)所述多糖的至少兩個不同聚合物鏈。因此，所述第一聚合物的分子量增加，并因此粘性和/或彈性增加。
[0089]在一個實施方案中，通過交聯(lián)劑實施交聯(lián)。
[0090]用于交聯(lián)多糖如透明質(zhì)酸的合適的交聯(lián)劑是本領(lǐng)中已知的。
[0091]在一個實施方案中，可在根據(jù)本發(fā)明的方法中使用以環(huán)氧化物結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的交聯(lián)劑。
[0092]在一個實施方案中，二環(huán)氧甘油醚(diglycidyether)用于交聯(lián)。
[0093]在一個實施方案中，1，4-丁二醇二縮水甘油醚(BDDE)用于交聯(lián)。該化合物是可商購的。
[0094]在一個實施方案中，所述交聯(lián)劑以5-15% (交聯(lián)劑的體積/透明質(zhì)酸的重量)，如6-14% (v/w),或 7-12% (v/w)的量使用。
[0095]有利地，可控制根據(jù)步驟⑴的交聯(lián)反應(yīng)的溫度。
[0096]在一個實施方案中，在0_40°C的溫度范圍內(nèi)產(chǎn)生根據(jù)步驟(i)的交聯(lián)。
[0097]在另一個實施方案中，控制步驟⑴的溫度使其在15_40°C的溫度范圍內(nèi)進行。
[0098]在一個實施方案中，所述步驟(i)的溫度為25-35°C。
[0099]在一個實施方案中，控制步驟(i)的溫度使所述交聯(lián)在25_30°C的溫度范圍內(nèi)進行。
[0100]在另一個實施方案中，控制步驟(i)的溫度使所述交聯(lián)在30-35°C，或從30°C以上至35 °C的溫度范圍內(nèi)進行。
[0101]這樣的溫度或溫度范圍可確保非常均質(zhì)的交聯(lián)盡可能地避免不均質(zhì)的顆粒。此夕卜，在一個實施方案中，溫度的控制允許根據(jù)本發(fā)明的組合物的粘彈性質(zhì)的特制的調(diào)節(jié)。
[0102]在一個實施方案中，如果在較高溫度下，如在從30°C以上至35°C的溫度范圍，實施根據(jù)步驟(i)的所述交聯(lián)，那么所得到組合物如凝膠相比較于在較低溫度如在25-30°C的溫度下實施所述交聯(lián)的組合物具有更強的粘彈性質(zhì)?？赏ㄟ^根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法測定所述組合物的儲能模量和損耗模量表征該差異。相應(yīng)地，在一個實施方案中，步驟(i)中反應(yīng)溫度的合適選擇允許制備具有不同粘彈性質(zhì)的組合物如凝膠。
[0103]本文中使用的術(shù)語“混合物”包含混合但彼此不化學結(jié)合的兩種或更多種物質(zhì)的組合。因此，術(shù)語“混合物”指所述第一聚合物(其為多糖)和水的物理組合?？梢匀芤?，或懸浮液，或膠體的形式提供所述混合物。
[0104]所述第一聚合物，即所述第一多糖，即HA，通常具有1.0-4.0MDa范圍，或從1.5MDa至小于3.5MDa，或從2.0MDa至小于3.5MDa的分子量Mw。這些分子量Mw范圍分別指交聯(lián)前的范圍。
[0105]在一個實施方案中，所述第一多糖具有從2.5MDa至小于3.0MDa的分子量Mw，同樣是在交聯(lián)之前。
[0106]可以自來水、蒸餾水或去離子水形式提供水。
[0107]在一個實施方案中，步驟(i)中使用的混合物額外地包含緩沖溶液。
[0108]在一個實施方案中，所述緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液。
[0109]在一個實施方案中，所述磷酸鹽緩沖溶液由氯化鈉，無水磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉二水合物和水制成。
[0110]在一個實施方案中，所述緩沖液為堿性緩沖液。
[0111]在一個實施方案中，所述緩沖液的pH為6.8-7.6，或7.0-7.4，或7.1-7.3。
[0112]在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法制備的最終組合物的pH被調(diào)至6.5-7.5范圍，如6.7-7.2，或6.8-7.1或6.8-6.9。這樣的pH可支持所述組合物與皮膚組織的相容性。在一個實施方案中，為調(diào)節(jié)所述PH，使用所述緩沖液。
[0113]在一個實施方案中，可通過混合所述第一聚合物、水、所述交聯(lián)劑，和任選地緩沖溶液，并攪拌所述混合物以預定時間來實現(xiàn)步驟(i)，其中控制溫度不超過預定設(shè)置點。
[0114]步驟(ii)
[0115]步驟(ii)要求終止步驟(i)中實施的交聯(lián)。
[0116]根據(jù)步驟(ii)的交聯(lián)反應(yīng)的終止是強制性必要的，因為否則可能得到具有太高粘性或粘性和彈性的組合物或凝膠以致不能允許作為皮膚填充物的合理使用，只要所述凝膠含可產(chǎn)生交聯(lián)的化合物如步驟(i)中使用的交聯(lián)劑，所述組合物或凝膠的各自的粘性或粘彈性質(zhì)將不是恒定的。
[0117]從根本上說，能與所述交聯(lián)劑反應(yīng)并因此使其失活的各化合物可用于終止所述交聯(lián)反應(yīng)。
[0118]在一個實施方案中，由于在步驟(i)中使用環(huán)氧化物型的交聯(lián)劑，可通過添加使環(huán)氧部分裂開以使不能發(fā)生與所述多糖中的合適基團進一步交聯(lián)的化合物來實現(xiàn)交聯(lián)的終止。
[0119]在一個實施方案中，可通過酸實現(xiàn)環(huán)氧化物的裂開和因此的步驟(i)中交聯(lián)反應(yīng)的終止。有機酸和無機酸可用于交聯(lián)的終止。
[0120]在一個實施方案中，可使用無機酸如鹽酸。
[0121]用于終止交聯(lián)反應(yīng)的化合物可在緩沖溶液中應(yīng)用，如在步驟(i)中使用的緩沖溶液中。
[0122]這樣的溶液可被稱為“淬滅溶液”。相應(yīng)地，可通過淬滅根據(jù)步驟(i)得到的交聯(lián)的混合物實現(xiàn)根據(jù)步驟(ii)的終止。
[0123]在一個實施方案中，在0_30°C的溫度范圍內(nèi)實現(xiàn)根據(jù)步驟(ii)的交聯(lián)的終止。
[0124]在另一個實施方案中，控制步驟(ii)的溫度使其不超過20°C，或15°C。
[0125]在一個實施方案中，步驟(ii)中的溫度為0-10°C，或3_7°C，如5°C。
[0126]可通過在根據(jù)步驟(i)的混合物中添加用于終止的化合物，并例如攪拌預定時間來實現(xiàn)根據(jù)(ii)的所述終止。
[0127]所述交聯(lián)反應(yīng)的終止對于根據(jù)本發(fā)明的方法是重要的，因為因此得到的組合物或凝膠具有優(yōu)異的穩(wěn)定性，即它的性質(zhì)尤其是它的粘性或它的粘彈性質(zhì)在應(yīng)用后，如在皮膚組織中用作皮膚填充物后不發(fā)生變化。
[0128]在一個實施方案中，通過在步驟(ii)中擠壓在步驟(i)中得到的交聯(lián)產(chǎn)物，如通過篩擠壓所述產(chǎn)物進一步支持終止。不受理論的束縛，認為在擠壓中所施加的高剪切力在所述組合物或凝膠中提供所述交聯(lián)劑和用于終止所述交聯(lián)反應(yīng)的化合物的完全混合。因此，所述交聯(lián)劑被完全或幾乎完全地滅活，因此阻止進一步的交聯(lián)并因此阻止進一步的不希望的分子量和粘性和/或彈性的增加。
[0129]術(shù)語“通過篩擠壓(extruding through a sieve) ”包含術(shù)語如“通過篩(passedthrough a sieve) ”，或“通過篩加壓(pressed through a sieve) ” 或“通過篩控制(directed through a sieve)” 或“過濾(filtered)，，。
[0130]因此，在一個實施方案中，步驟(ii)包含步驟(i1.1):
[0131](i1.1)擠壓步驟(i)中得到的交聯(lián)產(chǎn)物。
[0132]在另一個實施方案中，步驟(ii)包含步驟(i1.1)和(i1.2):
[0133](i1.1)將步驟(i)中得到的產(chǎn)物經(jīng)受酸處理；
[0134](i1.2)擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物；或通過篩擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物。
[0135]在一個實施方案中，步驟(ii)包含步驟(i1.1)和(i1.2):
[0136](i1.1)將步驟(i)中得到的產(chǎn)物經(jīng)受酸處理；
[0137](i1.2)擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物；或
[0138]通過篩擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物；或
[0139]通過具有500_600nm范圍的篩孔尺寸的篩擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物。
[0140]在一個實施方案中，步驟(i1.2)中使用的篩的篩孔尺寸為約560μπι，如558.8μπι(0.022 “)
[0141]步驟(iii)
[0142]可選的步驟(iii)要求將步驟(ii)得到的產(chǎn)物與所述第二聚合物混合。
[0143]在一個實施方案中，所述第二聚合物的存在不是必需的，且因此所述步驟(iii)在步驟(i)至(iv)的反應(yīng)順序中被省去。
[0144]在另一個實施方案中，所述第二聚合物的存在是必需的，因此步驟(iii)在步驟(i)至(iv)的反應(yīng)順序中是必須實施的。
[0145]本文中使用的術(shù)語“混合”包含步驟(ii)中得到的交聯(lián)聚合物與步驟(iii)中使用的第二聚合物的混合，其中得到的混合物包含所述交聯(lián)的第一聚合物和所述第二聚合物，所述第二聚合物也可為交聯(lián)的，然而，所述第二聚合物也可以非交聯(lián)的形式提供，所得到的混合物相對于所述第一和所述第二聚合物具有不同的物理性質(zhì)。
[0146]所述第二聚合物也可為多糖。該聚合物可以與所述第一聚合物相同，或可以與其不同。
[0147]因此，在一個實施方案中，所述第二聚合物為與步驟(i)中使用的所述第一聚合物相同的HA，或為與步驟(i)中使用的HA不同的HA。
[0148]在一個實施方案中，所述第一聚合物具有與所述第二聚合物相同的分子量。在另一個實施方案中，所述分子量彼此不同。所述第二聚合物的術(shù)語“分子量”指在混合和任選地交聯(lián)所述第二聚合物前的所述聚合物的相應(yīng)分子量。
[0149]在一個實施方案中，所述第二聚合物具有至少3.0MDa的分子量，或至少3.5MDa，或至少4.0MDa的分子量。
[0150]在一個實施方案中，所述第二聚合物具有至少3.0MDa的分子量，其中上限分別為20MDa,或 1MDa，或 8MDa，或 6MDa，或 4MDa。
[0151]在一個實施方案中，所述第二聚合物具有至少3.5MDa的分子量，其中上限分別為20MDa,或 1MDa，或 8MDa，或 6MDa，或 4MDa。
[0152]在一個實施方案中，所述第二聚合物具有至少4.5MDa的分子量，其中上限分別為20MDa,或 1MDa，或 8MDa，或 6MDa，或 4MDa。
[0153]在一個實施方案中，在緩沖液中如在可在步驟(i)或步驟(ii)使用的緩沖液中提供所述第二聚合物。
[0154]在一個實施方案中，在0-40°C，或0-30°C溫度范圍內(nèi)實施根據(jù)步驟(iii)的混合。
[0155]在另一個實施方案中，控制步驟(iii)的溫度使其不超過20°C，或15°C。
[0156]在一個實施方案中，步驟(iii)的溫度為0-10°C，或3_7°C，如5°C。
[0157]在一個實施方案中，通過攪拌所述交聯(lián)產(chǎn)物和所述第二聚合物實施根據(jù)步驟
(iii)的混合，其中所述交聯(lián)已根據(jù)步驟(ii)被終止。
[0158]在一個實施方案中，所述第二組合物的重量基于所述第一組合物的重量為少于5%，或少于4%，例如在從0.01-5%的范圍內(nèi)，或在0.1-4%的范圍內(nèi)，或在0.1-2.5%的范圍內(nèi)，或 0.2-2.0%，或 0.5-1.5%。
[0159]在一個實施方案中，步驟(iii)允許對所述目標組合物或凝膠的粘性和彈性，或粘性或彈性的性質(zhì)的特制調(diào)節(jié)，所述性質(zhì)是用作皮膚填充物必需的。這樣的性質(zhì)可通過選擇如下參數(shù)來實現(xiàn):步驟(i)中的合適的溫度范圍和/或步驟(iii)中的第一和第二聚合物的重量比和/或步驟(i)中使用的交聯(lián)劑的量和任選地使用的第二聚合物的量，假設(shè)該第二聚合物在步驟(iii)中使用且以交聯(lián)形式使用。
[0160]此外，步驟(iii)中第二聚合物的使用可提升所述組合物通過篩的流動性，如果實施篩分步驟的話。然后，通常，相比較于不含所述第二聚合物的組合物，需要使用較低的擠壓力以擠壓所述組合物通過所述篩(sieve)或篩(sieves)。此外，以非交聯(lián)的形式使用第二聚合物可有利地提升根據(jù)本發(fā)明所述組合物通過注射器的針頭的流動性，所述注射器用于將上述組合物應(yīng)用于美容應(yīng)用中。因此，可使用較小的力擠壓所述組合物通過所述針。
[0161]步驟(iv)
[0162]步驟(iv)要求對步驟(ii)或(iii)中得到的產(chǎn)物進行透析。
[0163]在一個實施方案中，該步驟用于從步驟(iii)得到的凝膠中去除外來化合物或顆粒。外來化合物或顆?？蓪λ鼋M合物如凝膠的物理性質(zhì)產(chǎn)生不利的影響和/或可對所述組合物或凝膠與皮膚組織的相容性產(chǎn)生不利的影響。因此，在一個實施方案中，步驟(iv)用于降低或避免當根據(jù)本發(fā)明的組合物被注射入皮膚組織時可能產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)。
[0164]在另一個實施方案中，該步驟用于調(diào)節(jié)步驟(ii)或步驟(iii)中得到的凝膠的溶脹。
[0165]本文中使用的術(shù)語“溶脹”或“溶脹性”包含凝膠的吸水性。
[0166]在一個實施方案中，當經(jīng)歷步驟(iv)時，步驟(iii)中得到的凝膠的溶脹，即在透析過程中水的吸收量，基于上述凝膠的總重量為5-25%，如6-23%，或7-22%，或9_21 %。
[0167]在另一個實施方案中，所述溶脹或溶脹性為7-18%，或8-15 %。
[0168]在一個實施方案中，該溶脹或溶脹性產(chǎn)生使HA基質(zhì)能承受壓縮力(例如當被注射至皮膚組織且所述皮膚組織遭受壓縮力時)的溶脹壓力。
[0169]在一個實施方案中，步驟(iv)用于從步驟(ii)或步驟(iii)得到的凝膠中去除外來化合物或顆粒并用于調(diào)節(jié)步驟(ii)或步驟(iii)中得到的凝膠的溶脹。
[0170]因此，步驟(iv)用于，尤其是，提供比本領(lǐng)域已知的產(chǎn)物進一步改進的HA組合物。
[0171]因此，除了步驟(ii)(所述交聯(lián)的終止)，步驟(iv)(透析)為制備根據(jù)本發(fā)明的組合物如凝膠所必需的步驟順序中另一個重要的反應(yīng)步驟。特別地，在根據(jù)本發(fā)明的反應(yīng)順序中，步驟(ii)和步驟(iv)的組合允許提供具有所述性質(zhì)的組合物如凝膠，這應(yīng)根據(jù)所提出的問題實現(xiàn)。
[0172]在一個實施方案中，用具有預定截留分子量的透析膜實施透析。該透析膜可商購。
[0173]本文中使用的術(shù)語“截留分子量(MWCO) ”指定義百分比的溶質(zhì)被用于透析的膜保留的最低分子量溶質(zhì)(以道爾頓)，或指定義百分比的分析物被禁止膜擴散時的分子量。
[0174]可商購的透析膜通常具有1，000-100, OOODa的MWC0。
[0175]在一個實施方案中，所使用的透析膜具有12，000-14, OOODa的MWC0。
[0176]在一個實施方案中，用含緩沖液的透析溶液實施透析。
[0177]在一個實施方案中，所述緩沖液為步驟(i)中使用的，或步驟(ii)中使用的，或步驟(iii)中使用的緩沖液。
[0178]在一個實施方案中，在0_30°C的溫度范圍內(nèi)實施根據(jù)步驟(iv)的透析。
[0179]在另一個實施方案中，控制步驟(iv)中的溫度使其不超過20°C，或15°C。
[0180]在一個實施方案中，步驟(iv)中的溫度為0-10°C，或3_7°C，如5°C。
[0181]在一個實施方案中，實施根據(jù)本發(fā)明的方法使步驟(i)中的溫度為25_35°C，且步驟(ii)至步驟(iv)中的溫度為0-10°C，分別地；或?qū)嵤└鶕?jù)本發(fā)明的方法使步驟⑴中的溫度為25-35°C，且步驟(ii)至步驟(iv)中的溫度為3-7°C，如5°C，分別地。
[0182]在一個實施方案中，在對步驟(iii)中得到的產(chǎn)物進行透析之前，將所述產(chǎn)物進行一個篩分步驟，或多個篩分步驟，以進一步均化所述產(chǎn)物，分別去除對用作皮膚填充物產(chǎn)生不利影響的不均質(zhì)顆?；蛉魏纹渌w粒。
[0183]在一個實施方案中,所述透析步驟(iv)包含步驟(iv.1)至(iv.3):
[0184](iv.1)通過第一篩擠壓步驟(ii)或步驟(iii)中得到的產(chǎn)物，并隨后通過第二篩擠壓所述第一篩的擠壓產(chǎn)物，其中所述第二篩的篩孔尺寸小于所述第一篩的篩孔尺寸；或
[0185]通過第一篩擠壓步驟(ii)或(iii)中得到的產(chǎn)物，并隨后通過第二篩擠壓所述第一篩的擠壓產(chǎn)物，并隨后通過第三篩擠壓所述第二篩的擠壓產(chǎn)物，其中所述第二篩的篩孔尺寸小于所述第一篩的篩孔尺寸，且所述第三篩的篩孔尺寸小于所述第二篩的篩孔尺寸；
[0186](iv.2)將步驟(iv.1)中得到的產(chǎn)物裝填至透析膜中；
[0187](iv.3)將步驟(iv.2)中得到的裝填的膜放入透析溶液中。
[0188]在透析前這樣的使用篩可進一步支持透析步驟的效力。所述篩的篩孔尺寸的合適的選擇進一步支持對產(chǎn)物所要求的同質(zhì)性產(chǎn)生不利影響的外來化合物和顆粒例如膠化的顆粒的去除。因此，在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法中使用的一個篩分步驟或多個篩分步驟允許制備特別均質(zhì)的組合物，即含所述第一聚合物、任選地所述第二聚合物和水的特別均質(zhì)的凝膠。同質(zhì)性是所述組合物所期望的性質(zhì)，這將根據(jù)本發(fā)明的方法得到，并支持和改善預期應(yīng)用如所述組合物在化妝品或醫(yī)藥使用中的應(yīng)用。
[0189]在一個實施方案中,所述透析步驟(iv)包括步驟(iv.1)至(iv.3):
[0190](iv.1)通過具有325-425 μ m篩孔尺寸的第一篩擠壓步驟(ii)或步驟(iii)得到的產(chǎn)物；并隨后通過具有175-225 μ m篩孔尺寸的第二篩擠壓所述第一篩的擠壓產(chǎn)物；并隨后通過具有110-170 μ m篩孔尺寸的第三篩擠壓所述第二篩的擠壓產(chǎn)物；
[0191](iv.2)將步驟(iv.1)中得到的產(chǎn)物裝填到具有12，000-14, OOODa的截留分子量的透析膜中；
[0192](iv.3)將步驟(iv.2)中得到的裝填的膜放到透析溶液中。
[0193]在一個實施方案中，通過具有約380 μ m篩孔尺寸，如381 μ m(0.015”)的第一篩或篩網(wǎng)(screen),然后通過具有約200 μ m篩孔尺寸,如203.2 μ m(0.008”)的第二篩或篩網(wǎng)，然后通過具有約140 μ m篩孔尺寸，如139.7 μ m (0.0055”)的第三篩或篩網(wǎng)，將步驟(ii)或步驟(iii)得到的凝膠擠壓至所述透析膜中。然后將裝填的透析膜(filled dialysismembrane)或裝填的膜(filled membranes)放入含合適透析溶液如根據(jù)本發(fā)明的第一方面對于步驟(i)使用的緩沖溶液的容器中。
[0194]在一個實施方案中，如果在步驟(ii)后和透析步驟(iv)之前實施混合步驟
(iii)，那么步驟(iii)有助于根據(jù)步驟(iv.1)在步驟(iv)后實施的篩分步驟。
[0195]在一個實施方案中，通過攪拌所述容器的內(nèi)容物實施透析。在一個實施方案中，可用新鮮透析溶液更換所述透析溶液一次或至少兩次。在一個實施方案中，更換的間隔為8-18h，或10-14h，如12±2h。在一個實施方案中，根據(jù)步驟(iv)的透析允許進行30_45h，或 35-39h，如 37±2h。
[0196]在一個實施方案中，步驟(iv)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ 在 0.1 至 0.9 間，如 0.1 至 0.5，或 0.2 至 0.4。
[0197]在另一個實施方案中，步驟(iv)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ 在 0.1 至 3.5 間。
[0198]在一個實施方案中，在0.7Hz的頻率和30°C條件下，η *在2，000mPa*s至200，000mPa*s 的范圍內(nèi)，其中 tan δ 在 0.1-0.9 間，如 0.1 至 0.5，或 0.2 至 0.4。
[0199]在一個實施方案中，步驟(iv)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ在0.10至3.5間。在一個實施方案中，對應(yīng)的黏度η *在2，500mPa*s至145, 000mPa*s 范圍內(nèi)，或 4，000 至 145, 000mPa*s。
[0200]在一個實施方案中，步驟(iv)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan5為在0.10至3.5間。在一個實施方案中，步驟(iv)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ為在0.10至0.25間。
[0201]步驟(V)
[0202]雖然根據(jù)本發(fā)明的組合物允許盡可能避免不良皮膚反應(yīng)的應(yīng)用，然而在一個實施方案中，可將局部麻醉和/或抗心律失常藥物添加到步驟(iv)中得到的根據(jù)本發(fā)明的組合物或凝膠中，如果必要或需要的話。這種藥物可以減輕當根據(jù)本發(fā)明的組合物或凝膠被注射至皮膚組織時可能由皮膚炎癥引起的瘙癢、燒灼感和疼痛。
[0203]合適的藥物是本領(lǐng)域已知的。
[0204]在一個實施方案中，利多卡因被用作局部麻醉和/或抗心律失常藥物。該藥物已知作為牙科麻醉劑或用于小手術(shù)的局部麻醉劑用于例如注射。
[0205]在一個實施方案中，以鹽的形式如鹽酸鹽和/或以水合物如一水合物的形式使用利多卡因。
[0206]相應(yīng)地，本文使用的術(shù)語“利多卡因”包含它的鹽和水合物。
[0207]在一個實施方案中，基于所述組合物或凝膠重量，以O(shè)-1wt%或0-0.5wt%的量使用利多卡因。
[0208]在一個實施方案中，所述重量為從0.3%至0.35%。
[0209]在一個實施方案中，所述重量為0.3%或0.35%。
[0210]在另一個實施方案中，使用丁卡因。本文中使用的術(shù)語“丁卡因”包含它的鹽和水合物?？梢耘c利多卡因相同的量使用丁卡因。
[0211]在另一個實施方案中，可使用利多卡因和丁卡因的混合物。
[0212]相應(yīng)地，在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的所述方法在步驟(iv)后進一步包含步驟(V):
[0213](V)將麻醉劑或抗心律失常劑或麻醉劑和抗心律失常劑摻到步驟(iv)得到的產(chǎn)物中。
[0214]在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的所述方法在步驟(iv)后進一步包含步驟(V):
[0215](V)將利多卡因，或鹽酸利多卡因，或鹽酸利多卡因一水合物摻到步驟(iv)得到的產(chǎn)物中；或?qū)⒍】ㄒ驌降讲襟E(iv)得到的產(chǎn)物中；或?qū)⒗嗫ㄒ蚝投】ㄒ驌降讲襟E(iv)得到的產(chǎn)物中。
[0216]在一個實施方案中，步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ 為在 0.1 至 0.9 間，如 0.1 至 0.5，或 0.2 至 0.4。
[0217]在一個實施方案中，步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ為在0.1至3.5或0.15至3.4間。
[0218]在一個實施方案中，在0.7Hz的頻率和30 °C下，η*在2，OOOmPa^s至200，000mPa*s 間，其中 tan δ 在 0.1 至 0.9 間，如 0.1 至 0.5，或 0.2 至 0.4。
[0219]在一個實施方案中，步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tanS為在0.10至3.5間。在一個實施方案中，對應(yīng)的黏度η *在2，500mPa*s至145, 000mPa*s 或 4, 000 至 145, 000mPa*s 的范圍內(nèi)。
[0220]在一個實施方案中，步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ為在0.10至3.5間。在一個實施方案中，步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ為在0.10至0.25間。
[0221]在一個實施方案中，步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tanS為在0.1至3.5間。在一個實施方案中，對應(yīng)的黏度η *在2，000mPa*s至150，000mPa*s范圍內(nèi)。在一個實施方案中，步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tanS為在0.15至3.5間。在一個實施方案中，對應(yīng)的黏度η *在2，500mPa*s至 145, 000mPa*s 或 4, 000 至 145, 000mPa*s 的范圍內(nèi)。
[0222]在一個實施方案中，步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tanS為在0.15至0.25間。在一個實施方案中，對應(yīng)的黏度η *在15，000mPa*s至28, OOOmPa^s 范圍內(nèi)。
[0223]步驟(vi)
[0224]最后，在一個實施方案中，步驟(iv)或步驟(V)中得到的產(chǎn)物可被裝填到注射器中。這是因為根據(jù)本發(fā)明的方法得到的產(chǎn)物旨在通過注射使用。
[0225]在一個實施方案中，步驟(iv)或步驟(V)得到的產(chǎn)物被裝填到注射器中，并被殺菌。
[0226]相應(yīng)地，在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法在步驟(iv)或步驟(V)后進一步包含步驟(vi):
[0227](vi)將步驟(iv)或步驟(V)得到的產(chǎn)物裝填到注射器中并對其殺菌。
[0228]在一個實施方案中，將步驟(iv)或步驟(V)得到的產(chǎn)物擠壓到注射器中，從而實施所述裝填。
[0229]可通過本領(lǐng)域已知的方法實施殺菌。本文中使用的術(shù)語“殺菌(sterilizat1n)”包括任何消除或去除或殺死存在于所述注射器表面和/或根據(jù)本發(fā)明的方法制備的所述組合物或凝膠中的各種形式的微生物生命，包括可傳染因子(transmissible agent)(如真菌，細菌，病毒，孢子形式體等)?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的方法如應(yīng)用熱、化學品、輻射、高壓或過濾，或它們適當?shù)慕M合來實現(xiàn)殺菌。
[0230]在一個實施方案中，在根據(jù)步驟(vi)的裝填前實施殺菌，即，將步驟(iv)或步驟(v)得到的組合物或凝膠以及注射器彼此獨立消毒。
[0231]在另一個實施方案中，在根據(jù)步驟(vi)的裝填過程中實施殺菌。
[0232]在另一個實施方案中，在根據(jù)步驟(vi)的裝填后實施殺菌。
[0233]在一個實施方案中，在最終組合物如凝膠中的HA的總含量為以所述組合物總重量計為在1_5?1:%范圍內(nèi)。在另一個實施方案中，所述總含量在1.5-4wt%范圍內(nèi)，或2-2.5wt % ο
[0234]在一個實施方案中，根據(jù)步驟(iv)或根據(jù)步驟(V)或根據(jù)步驟(Vi)得到的產(chǎn)物為等張的無菌的粘彈性組合物如凝膠。該組合物或凝膠為可注射的且可作為移植物以增加皮膚組織的體積，即填充(augment)它。
[0235]在一個實施方案中，根據(jù)步驟(iv)或根據(jù)步驟(V)或根據(jù)步驟(Vi)得到的產(chǎn)物為等張的無菌的粘彈性的可注射的凝膠或移植物以增加如臉部皮膚組織的體積，或修正中度或深度皺紋。
[0236]在一個實施方案中，所述皮膚組織包含或為嘴唇的組織。
[0237]在另一個實施方案中，所述皮膚組織包含或為中度至嚴重的面部皺紋或褶皺如鼻唇溝褶皺的皮膚組織
[0238]在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明第一方面制備的組合物提供一種安全有效，生物相容的，非免疫原性的組合物，其易于分發(fā)和存儲，且不需要過敏測試。此外，當被應(yīng)用于皮膚組織時，所述組合物具有可接受的持久性。在一個實施方案中，當被應(yīng)用于皮膚組織時，根據(jù)本發(fā)明方法制備的組合物在相當長的時期內(nèi)是穩(wěn)定的。
[0239]相應(yīng)地，在一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)第一方面或根據(jù)第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法制備組合物的方法，其中步驟(iii)中得到的組合物在步驟(iv)中進行透析以具有6.5-7.5，如6.7-7.2，或6.8-7.1，或6.8-6.9 的 pH。
[0240]相應(yīng)地，在一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)第一方面或根據(jù)第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法制備組合物的方法，其中步驟
(iii)中得到的凝膠在步驟(iv)中進行透析以具有以所述凝膠總重量計5-25%，如6-23%或7-22 %或9-21 %的溶脹性。
[0241]在一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)第一方面或根據(jù)第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法的制備組合物的方法，其中步驟Qv)或步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ為在0.1至0.9間和/或黏度Π *在2，OOOmPa^s至200，OOOmPa^s范圍內(nèi)；或在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ為在0.1至3.5間和/或黏度η *在2，000mPa*s至150，000mPa*s范圍內(nèi)；或步驟(iv)或步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ為在0.15至3.5間和/或在0.7Hz的頻率和30°C下測量的黏度η*在2，10mPa^s至145，OOOmPa^s范圍內(nèi)，或從2，500至145，000mPa*s，或從4，000至145，000mPa*s ;或步驟(iv)或步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ為在0.10至0.25間和/或在0.7Hz的頻率和30°C下測量的黏度η*為在15，OOOmPa^s至28，OOOmPa^s范圍內(nèi)；或步驟(iv)或步驟(V)中得到的組合物在0.7Hz的頻率和30°C下測量的tan δ為在0.10至0.25間和/或在0.7Hz的頻率和30°C下測量的黏度η*為在22，000mPa*s至28，000mPa*s范圍內(nèi)。
[0242]在一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)第一方面或根據(jù)第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法制備組合物的方法，其中當注射至皮膚組織時，所述組合物穩(wěn)定至少三個月，例如至少四個月，或五個月，或六個月。
[0243]在一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)第一方面或根據(jù)第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法制備組合物的方法，其中當注射至皮膚組織時，釋放步驟(V)的所述麻醉劑和/或抗心律失常劑，如利多卡因或丁卡因，或利多卡因和丁卡因；且其中所述組合物為無菌的。
[0244]在一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)第一方面或根據(jù)第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法制備組合物的方法，其中最終組合物如凝膠中的HA的總含量以所述組合物總重量計為l_5wt%，例如1.5-4wt%，或2-2.5wt%。
[0245]在一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)第一方面或根據(jù)第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法制備組合物的方法，其中當注射至皮膚組織中時所述組合物不刺激皮膚組織。
[0246]在一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)第一方面或根據(jù)第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法制備組合物的方法，其中當所述組合物為凝膠形式時，所述組合物被用作可注射的組織裝填物。
[0247]在一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)第一方面或根據(jù)第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法制備組合物的方法，其中所述透明質(zhì)酸，或所述透明質(zhì)酸和所述麻醉劑和/或抗心律失常劑為所述組合物僅有的活性成分。
[0248]根據(jù)第二方面，本發(fā)明涉及包含交聯(lián)的第一聚合物，可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的任選地第二聚合物，和水的組合物，如凝膠，其中所述第一和第二聚合物選自多糖如HA。
[0249]在一個實施方案中，通過根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，或根據(jù)本發(fā)明第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法可得到所述組合物如凝膠，其包含交聯(lián)的第一聚合物，可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的任選地第二聚合物，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖。
[0250]在一個實施方案中，通過根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法,或根據(jù)本發(fā)明第一方面和其中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合的方法可得到所述組合物如凝膠，其由交聯(lián)的第一聚合物，可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的任選地第二聚合物，和水，和任選地麻醉劑和/或抗心律失常劑組成，其中所述第一和第二聚合物選自多糖。
[0251]根據(jù)第三方面，本發(fā)明涉及一套件，所述套件包含注射器和根據(jù)第二方面的所述組合物如凝膠，或注射器和根據(jù)第一方面的方法制備的組合物如凝膠。
[0252]根據(jù)第四方面，本發(fā)明涉及根據(jù)第二方面的所述組合物如凝膠在美容應(yīng)用中的使用，或涉及根據(jù)第一方面的方法制備的組合物如凝膠在美容應(yīng)用中的使用。
[0253]在一個實施方案中，所述組合物如凝膠，被用作皮膚填充物。
[0254]本文中使用的術(shù)語“皮膚填充物”是指根據(jù)本發(fā)明制備的所述組合物如凝膠適用于增加皮膚組織的體積，即填充皮膚組織。
[0255]在一個實施方案中，所述組合物如凝膠用于填充皮膚組織如填充臉部皮膚組織，和/或用于修正中度的或嚴重的皺紋。
[0256]在一個實施方案中，所述組合物為可注射組合物，即當應(yīng)用時，其被注射至皮膚組織中。
[0257]根據(jù)進一步的方面，根據(jù)第二方面的組合物可用作藥物組合物或用在藥物組合物中。
[0258]在一個實施方案中，所述組合物用于醫(yī)學應(yīng)用中，其需要基于透明質(zhì)酸的組合物如凝膠的使用。
[0259]因此，根據(jù)第五方面，本發(fā)明涉及用作藥劑的根據(jù)第二方面的組合物如凝膠。
[0260]根據(jù)第六方面，本發(fā)明涉及制備組合物如凝膠的方法，所述組合物包含交聯(lián)的第一聚合物，任選地第二聚合物，所述第二聚合物可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述方法包含至少第一篩分步驟(a)。
[0261]術(shù)語“篩分步驟”包含通過篩擠壓交聯(lián)的聚合物如交聯(lián)的透明質(zhì)酸和水的步驟。
[0262]在一個實施方案中，術(shù)語“篩分步驟”通過篩擠壓本發(fā)明第一方面定義的步驟(i)至(vi)的任一步驟得到的產(chǎn)物。術(shù)語“通過篩擠壓”(例如在本發(fā)明第一方法提到的)包含術(shù)語如“通過篩”或“通過篩加壓”或“通過篩控制”或“過濾”。
[0263]術(shù)語“篩”包含術(shù)語“過濾器”。
[0264]術(shù)語“篩”或“過濾器”包含任何具有孔或洞的設(shè)備，通過這些孔或洞液體可滲透，其中可能包含在液體中的顆?？杀灰瞥虮恍藜粢赃m合通過所述篩或過濾器的孔。因此，在一個實施方案中，通過篩分或過濾調(diào)整所述顆粒的大小。例如可以金屬絲或纖維如塑料纖維的網(wǎng)的形式提供所述篩。合適的篩在篩分和過濾領(lǐng)域是已知的。
[0265]在一個實施方案中，所述方法包含至少第二篩分步驟(b)。
[0266]在另一個實施方案中，所述方法除第一篩分步驟(a)和第二篩分步驟(b)外還包含至少第三篩分步驟(C)。
[0267]在另一個實施方案中，所述方法除第一篩分步驟(a)和第二篩分步驟(b)和第三篩分步驟(C)外還包含至少一個進一步的篩分步驟，或至少兩個進一步的篩分步驟或至少三個進一步的篩分步驟或至少四個進一步的篩分步驟。
[0268]在一個實施方案中，用具有比在第一篩分步驟(a)中使用的第一篩的篩孔尺寸小的篩孔尺寸的第二篩實施所述第二篩分步驟(b)。
[0269]在另一個實施方案中，用具有比在第二篩分步驟(b)中使用的第二篩的篩孔尺寸小的篩孔尺寸的第三篩實施所述第三篩分步驟(C)。
[0270]在另一個實施方案中，用具有比在第二篩分步驟(b)中使用的第二篩的篩孔尺寸小的篩孔尺寸的第三篩實施所述第三篩分步驟(C)，所述第三篩相應(yīng)地具有比在第一篩分步驟(a)中使用的第一篩的篩孔尺寸小的篩孔尺寸。
[0271]在另一個實施方案中，各隨后使用的篩具有比前面篩分步驟中使用的篩的篩孔尺寸小的篩孔尺寸。
[0272]在一個實施方案中,所述第一篩具有200-600 μ m范圍的篩孔尺寸。
[0273]在另一個實施方案中，所述第一篩具有200-600 μ m范圍的篩孔尺寸；且所述第二篩具有100-400 μ m范圍的篩孔尺寸。
[0274]在另一個實施方案中，所述第一篩具有200-600 μ m范圍的篩孔尺寸；且所述第二篩具有100-400 μ m范圍的篩孔尺寸；且所述第三篩具有50-300 μ m范圍的篩孔尺寸。
[0275]在一個實施方案中，所述第一篩具有300-500 μ m范圍的篩孔尺寸。
[0276]在另一個實施方案中，所述第一篩具有300-500 μ m范圍的篩孔尺寸；且所述第二篩具有100-300 μ m范圍的篩孔尺寸。
[0277]在另一個實施方案中，所述第一篩具有300-500 μ m范圍的篩孔尺寸；且所述第二篩具有100-300 μ m范圍的篩孔尺寸；且所述第三篩具有50-200 μ m范圍的篩孔尺寸。
[0278]在一個實施方案中，所述第一篩具有325-425 μ m范圍的篩孔尺寸。
[0279]在另一個實施方案中，所述第一篩具有325-425 μ m范圍的篩孔尺寸；且所述第二篩具有175-225 μ m范圍的篩孔尺寸。
[0280]在另一個實施方案中，所述第一篩具有325-425 μ m范圍的篩孔尺寸；且所述第二篩具有175-225 μ m范圍的篩孔尺寸；且所述第三篩具有110-170 μ m范圍的篩孔尺寸。
[0281]在一個實施方案中，根據(jù)所述篩分步驟(a)，(b)或(C)中至少一個的所述篩分在5-30°C如 5-25°C或 5-20°C或 5-15°C或 5_10°C 的溫度下實施。
[0282]在一個實施方案中，在所述第一篩分步驟(a)之前或之后，或在所述第二篩分步驟(b)之前或之后，或在所述第三篩分步驟(C)之前或之后，所述方法包含正如本發(fā)明第一方面定義的下面的步驟(i)至(vi)中的至少一個步驟。
[0283]相應(yīng)地，在第六方面的一個實施方案中，在所述第一篩分步驟(a)之前或之后，或在所述第二篩分步驟(b)之前或之后，或在所述第三篩分步驟(C)之前或之后，所述方法包含下面步驟(i)至(vi)中的至少一個步驟:
[0284](i)交聯(lián)含第一聚合物和水的混合物；
[0285](ii)繼步驟(i)交聯(lián)后，終止所述交聯(lián)；
[0286](iii)任選地將步驟(ii)中得到的產(chǎn)物與第二聚合物混合；
[0287](iv)透析步驟(ii)或步驟(iii)中得到的產(chǎn)物；
[0288](V)將麻醉劑或抗心律失常劑，如利多卡因，或鹽酸利多卡因，或鹽酸利多卡因一水合物，或丁卡因，或利多卡因和丁卡因摻到步驟(iv)得到的產(chǎn)物中；
[0289]將步驟(V)得到的產(chǎn)物裝填到注射器中并對其殺菌。
[0290]在另一個實施方案中，在所述第一篩分步驟(a)之前或之后，或在所述第二篩分步驟(b)之前或之后，或在所述第三篩分步驟(C)之前或之后，所述方法包含下面步驟(i)至(vi)中的至少一個步驟:
[0291](i)交聯(lián)含第一聚合物和水的混合物；
[0292](ii)繼步驟(i)交聯(lián)后，終止所述交聯(lián)；
[0293](iii)任選地將步驟(ii)中得到的產(chǎn)物與第二聚合物混合；
[0294](iv)透析步驟(i)，或步驟(ii)，或步驟(iii)中得到的產(chǎn)物；
[0295](V)將麻醉劑或抗心律失常劑，如利多卡因，或鹽酸利多卡因，或鹽酸利多卡因一水合物，或丁卡因，或利多卡因和丁卡因摻到步驟(i)，或步驟(ii)，或步驟(iii)得到的產(chǎn)物中；
[0296](vi)將步驟(i)，或步驟(ii)，或步驟(iii)得到的產(chǎn)物裝填到注射器中并對其殺菌。
[0297]在一個實施方案中，繼步驟(i)后實施所述第一篩分步驟(a)。
[0298]在另一個實施方案中，繼步驟(i)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b) ο
[0299]在另一個實施方案中，繼步驟(i)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b)和所述第三篩分步驟(C)。
[0300]在一個實施方案中，繼步驟(ii)后實施所述第一篩分步驟(a)。
[0301]在另一個實施方案中，繼步驟(ii)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b) ο
[0302]在另一個實施方案中，繼步驟(ii)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b)和所述第三篩分步驟(C)。
[0303]在一個實施方案中，繼步驟(iii)后實施所述第一篩分步驟(a)。
[0304]在另一個實施方案中，繼步驟(iii)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b)。
[0305]在另一個實施方案中，繼步驟(iii)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b)和所述第三篩分步驟(C)。
[0306]在一個實施方案中，繼步驟(iv)后實施所述第一篩分步驟(a)。
[0307]在另一個實施方案中，繼步驟(iv)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b) ο
[0308]在另一個實施方案中，繼步驟(iv)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b)和所述第三篩分步驟(C)。
[0309]在一個實施方案中，繼步驟(V)后實施所述第一篩分步驟(a)。
[0310]在另一個實施方案中，繼步驟(V)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b) ο
[0311]在另一個實施方案中，繼步驟(V)后實施所述第一篩分步驟(a)和所述第二篩分步驟(b)和所述第三篩分步驟(C)。
[0312]篩的使用支持可對產(chǎn)物所要求的同質(zhì)性產(chǎn)生不利影響的外來化合物和顆粒如膠化的顆粒的去除，或有助于通過施加剪切力調(diào)整顆粒的大小以適應(yīng)通過所述篩的孔。因此，在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法中使用的一個篩分步驟或多個篩分步驟允許特別同質(zhì)的組合物的制備，即含所述第一聚合物、可選地第二聚合物和水的特別同質(zhì)的凝膠。同質(zhì)性支持和提升預期的應(yīng)用如上述組合物在化妝品或藥物用途中的應(yīng)用。
[0313]根據(jù)第七方面，本發(fā)明涉及組合物，如凝膠，其包含交聯(lián)的第一聚合物，和任選地第二聚合物，所述第二聚合物可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述組合物如凝膠可通過本發(fā)明第六方面中定義的方法或在第六方面中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合中定義的方法制備或可得到。
[0314]根據(jù)第八方面，本發(fā)明涉及一種套件，所述套件包含注射器和由本發(fā)明第六方面中定義的方法或第六方面的任一實施方案制備或可得到的組合物；或涉及含注射器和本發(fā)明第七方面中定義的組合物的套件。
[0315]根據(jù)第九方面，本發(fā)明涉及由本發(fā)明第六方面或第六方面中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合中定義的方法制備或可得到的組合物的使用；或涉及在本發(fā)明第七方面中定義的所述組合物的使用，在美容應(yīng)用中；或作為皮膚填充物。
[0316]根據(jù)本發(fā)明第十方面，本發(fā)明涉及一種組合物，如凝膠，所述組合物包含交聯(lián)的第一聚合物，和任選地第二聚合物，所述第二聚合物可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述組合物如凝膠可通過本發(fā)明第六方面中定義的方法或在第六方面中定義的任一實施方案或至少兩個實施方案的任一組合中定義的方法制備或可得到，或涉及在本發(fā)明第七方面中定義的組合物，其作為藥物使用。
[0317]根據(jù)第十一方面，本發(fā)明涉及在含交聯(lián)的透明質(zhì)酸和水的組合物的制備中至少一個篩或至少一個篩分步驟的使用。
[0318]在該應(yīng)用的一個實施方案中，使用至少兩個篩或兩個篩分步驟。
[0319]在另一個實施方案中，使用至少三個篩或至少三個篩分步驟。
【具體實施方式】
[0320]實施例1
[0321]緩沖溶液的制備
[0322]由氯化鈉，無水磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉二水合物和水，通過在水中溶解這些鹽制備緩沖溶液。
[0323]緩沖液中HA的制備
[0324]繼制備所述緩沖溶液后，將具有從2.5MDa至小于3.0MDa的分子量的透明質(zhì)酸鈉加入至一夸脫攪拌缽中并加入一部分的所述緩沖溶液。當攪拌缽護套設(shè)定值(jacketsetpoint)設(shè)為50°C時在250rpm攪拌下混合所述物質(zhì)2.0-2.5h。繼所述混合后,將所述物質(zhì)冷卻至5-7 °C。
[0325]堿性溶液的添加
[0326]通過將氫氧化鈉在上述緩沖溶液中溶解制備第一堿性溶液。然后，通過將氫氧化鈉在上述緩沖溶液中溶解制備第二堿性溶液。然后將所述第一堿性溶液添加到攪拌缽中的物質(zhì)中，且所述物質(zhì)在250rpm, 5°C護套設(shè)定值下混合30至40分鐘。
[0327]交聯(lián)反應(yīng)「步驟(i)1
[0328]通過將BDDE添加到部分第二堿性緩沖溶液中制備所述交聯(lián)溶液。將含交聯(lián)劑的該堿性溶液添加到攪拌缽中的物質(zhì)中并使其在500rpm，5°C護套設(shè)定值下混合10至15分鐘。然后將混合速率降低至10rpm且所述溫度設(shè)定值變?yōu)?0°C。當溫度達到28°C后，關(guān)閉所述混合，且將所述物質(zhì)放置約3h。
[0329]用于終止所述交聯(lián)反應(yīng)的淬滅溶液的制備
[0330]將Im HCl溶液添加到部分所述緩沖溶液中以形成淬滅溶液。
[0331]淬滅反應(yīng)「步驟(ii)]
[0332]將護套的溫度設(shè)定值設(shè)為5°C，且將所述淬滅溶液添加到缽內(nèi)物質(zhì)中。然后將所述物質(zhì)在500rpm下混合10至15分鐘。
[0333]奪聯(lián)的HA的處理
[0334]然后將步驟(ii)得到的聚合物切成段，可能是形成塊或條。所述塊或條的尺寸可能為1，27cm xl, 27cm xl, 27cm(0.5x0.5x0.5英寸)或更小。然后所述塊或條在150rpm和5°C護套設(shè)定值下混合約2.5至3.0h。繼所述混合后，將所述混合的產(chǎn)物通過558.8ymym(0.022 “)的篩網(wǎng)擠壓并放回到所述攪拌缽中并在150rpm和5°C護套設(shè)定值下進一步混合2.0至2.5h。
[0335]所述第二聚合物的提供
[0336]將Mw彡3.0MDa的HA(鈉鹽)添加到部分所述緩沖溶液中。用架空混合器(overhead mixer)將所述物質(zhì)混合很短的一段時間。
[0337]凝膠的制備「步驟(iii) I
[0338]將一部分在緩沖液中的第二聚合物(1% w/w)加入到所述一夸脫攪拌缽中的物質(zhì)中。使所述物質(zhì)在250rpm下混合I至5分鐘。
[0339]誘析反應(yīng)「步驟(iv)l
[0340]將具有12，000至14.0OODa MWCO的透析膜在無菌水中水合。然后，通過具有約380 μ m,如381 μ m(0.015”)篩孔尺寸的篩網(wǎng)，然后通過具有約200 μ m，如203.2μπι(0.008”)篩孔尺寸的篩網(wǎng)，然后通過具有約140μπι，如139.7 μ m(0.0055”)篩孔尺寸的篩網(wǎng)，將步驟(iii)得到的凝膠擠壓至所述透析膜中。所述透析膜被填滿并具有約20.3cm(8英寸)的有效長度和約25.4cm(10英寸)總長度。然后將上述膜放置在含上述緩沖溶液的容器中。將所述容器降至5°C設(shè)定值并攪拌所述物質(zhì)。以12±2h的間隔更換透析溶液兩次。使所述透析進行37±2h。
[0341]擠壓步驟(iv)中得到的產(chǎn)物「步驟(Vi)I
[0342]透析后，將所述膜合并，混合且通過具有約140 μ m，如139.7 μ m(0.0055”)篩孔尺寸的篩擠壓兩次，且然后在真空下進一步混合30-40分鐘。將所得材料擠壓至注射器中并進行蒸汽滅菌。
[0343]步驟(iv)后得到的和在步驟(Vi)后含在注射器中的產(chǎn)物為等張的，無菌的，粘彈性的可注射的凝膠。該凝膠可用作適合于增加如臉部皮膚組織的體積，即適合于填充所述皮膚組織，和/或適合于修正中度或深度皮膚皺紋的植入物。
[0344]實施例2
[0345]根據(jù)實施例1實施該反應(yīng)，但交聯(lián)步驟(i)不同:
[0346]通過將BDDE添加至部分第二堿性緩沖溶液中制備所述交聯(lián)溶液。將含交聯(lián)劑BDDE的該堿性溶液添加至攪拌缽中的物質(zhì)中并使其在500rpm和5°C護套設(shè)定值下混合10至15分鐘。然后將混合速率降低至10rpm且所述溫度設(shè)定值變?yōu)?3.33°C。當溫度達到31.33°C后，關(guān)閉所述混合，且將所述物質(zhì)放置約3h。
[0347]步驟(iv)后得到的和在步驟(vi)后含在注射器中的產(chǎn)物為等張的，無菌的，粘彈性的可注射的凝膠。該凝膠可用作適合于增加如臉部皮膚組織的體積，即適合于填充所述皮膚組織，和/或適合于修正中度或深度皮膚皺紋的植入物。該凝膠具有比根據(jù)實施例1的凝膠更高的彈性和粘性。
[0348]實施例3
[0349]根據(jù)實施例1實施該反應(yīng)，不同的是將麻醉劑和抗心律失常劑如利多卡因添加至步驟(iii)后得到的凝膠中:
[0350]利多卡因的添加「步驟(V)I
[0351]將鹽酸利多卡因一水合物溶液溶解在所述緩沖溶液中并添加到含根據(jù)步驟(iii)制備的凝膠的透析膜中，其添加的量基于凝膠為0.35wt.-%。所述物質(zhì)可通過具有約140 μ m,如139.7 μ m(0.0055”)篩孔尺寸的篩擠壓兩次并在真空下進一步混合30至40分鐘。
[0352]步驟(V)后得到的和在步驟(Vi)后含在注射器中的產(chǎn)物為等張的，無菌的，粘彈性的可注射的凝膠。該凝膠可用作適合于增加如臉部皮膚組織的體積，即適合于填充所述皮膚組織，和/或適合于修正中度或深度皮膚皺紋的植入物。
[0353]實施例4
[0354]根據(jù)實施例1實施該反應(yīng)，但交聯(lián)步驟(i)不同:
[0355]通過將BDDE添加至部分第二堿性緩沖溶液中制備所述交聯(lián)溶液。將含交聯(lián)劑BDDE的該堿性溶液添加至攪拌缽中的物質(zhì)中并使其在500rpm和5°C護套設(shè)定值下混合10至15分鐘。然后將混合速率降低至10rpm且所述溫度設(shè)定值變?yōu)?7°C。當溫度達到25°C后，關(guān)閉所述混合，且將所述物質(zhì)放置約3h。
[0356]步驟(iv)后得到的和在步驟(Vi)后含在注射器中的產(chǎn)物為等張的，無菌的，粘彈性的可注射的凝膠。該凝膠可用作適合于增加如臉部皮膚組織的體積，即適合于填充所述皮膚組織，和/或適合于修正中度或深度皮膚皺紋的植入物。該凝膠具有比根據(jù)實施例1的凝膠更低的彈性和粘性。
[0357]實施例5
[0358]根據(jù)實施例1實施該反應(yīng)，但交聯(lián)步驟⑴和混合步驟(iii)不同:
[0359]通過將BDDE添加至部分第二堿性緩沖溶液中制備所述交聯(lián)溶液。將含交聯(lián)劑BDDE的該堿性溶液添加至攪拌缽中的物質(zhì)中并使其在500rpm和5°C護套設(shè)定值下混合10至15分鐘。然后將混合速率降低至10rpm且所述溫度設(shè)定值變?yōu)?0°C。當溫度達到27°C后，關(guān)閉所述混合，且將所述物質(zhì)放置約3h。
[0360]所述第二聚合物的提供
[0361]將Mw ^ 3.0MDa的HA (鈉鹽)添加到部分所述緩沖溶液中。用架空混合器將所述物質(zhì)混合很短的一段時間。
[0362]凝膠的制備「步驟(iii) I
[0363]將一部分在緩沖液中的第二聚合物(3% w/w)加入到所述一夸脫攪拌缽中的物質(zhì)中。使所述物質(zhì)在250rpm下混合I至5分鐘。
[0364]步驟(iv)后得到的和在步驟(vi)后含在注射器中的產(chǎn)物為等張的，無菌的，粘彈性的可注射的凝膠。該凝膠可用作適合于增加如臉部皮膚組織的體積，即適合于填充所述皮膚組織，和/或適合于修正中度或深度皮膚皺紋的植入物。
[0365]實施例6
[0366]根據(jù)實施例1實施該反應(yīng)，但交聯(lián)步驟⑴和混合步驟(iii)不同:
[0367]通過將BDDE添加至部分第二堿性緩沖溶液中制備所述交聯(lián)溶液。將含交聯(lián)劑BDDE的該堿性溶液添加至攪拌缽中的物質(zhì)中并使其在500rpm和5°C護套設(shè)定值下混合10至15分鐘。然后將混合速率降低至10rpm且所述溫度設(shè)定值變?yōu)?5°C。當溫度達到22°C后，關(guān)閉所述混合，且將所述物質(zhì)放置約3h。
[0368]所述第二聚合物的提供
[0369]將Mw彡3.0MDa的HA (鈉鹽)添加到部分所述緩沖溶液中。用架空混合器將所述物質(zhì)混合很短的一段時間。然后，將步驟(i)中使用的部分交聯(lián)溶液添加至緩沖溶液中的所述第二聚合物中。
[0370]凝膠的制備「步驟(iii) I
[0371]將一部分在緩沖液中的交聯(lián)的第二聚合物(1% w/w)加入到所述一夸脫攪拌缽中的物質(zhì)中。使所述物質(zhì)在250rpm下混合I至5分鐘。
[0372]步驟(iv)后得到的和在步驟(vi)后含在注射器中的產(chǎn)物為等張的，無菌的，粘彈性的可注射的凝膠。該凝膠可用作適合于增加如臉部皮膚組織的體積，即適合于填充所述皮膚組織，和/或適合于修正中度或深度皮膚皺紋的植入物。
[0373]實施例7
[0374]根據(jù)實施例2實施該反應(yīng)，不同的是將麻醉劑和抗心律失常劑如利多卡因添加至步驟(iii)后得到的凝膠中:
[0375]利多卡因的添加「步驟(V)I
[0376]將鹽酸利多卡因一水合物溶液溶解在所述緩沖溶液中并添加到含根據(jù)步驟(iii)制備的凝膠的透析膜中，其添加的量基于凝膠為0.35wt.-%。所述物質(zhì)可通過具有約140 μ m,如139.7 μ m(0.0055”)篩孔尺寸的篩擠壓兩次并在真空下進一步混合30至40分鐘。
[0377]步驟(V)后得到的和在步驟(vi)后含在注射器中的產(chǎn)物為等張的，無菌的，粘彈性的可注射的凝膠。該凝膠可用作適合于增加如臉部皮膚組織的體積，即適合于填充所述皮膚組織，和/或適合于修正中度或深度皮膚皺紋的植入物。
[0378]實施例8
[0379]根據(jù)實施例1實施該反應(yīng)，不同的是在步驟(ii)后省去混合步驟(iii)。
[0380]步驟(iv)后得到的和在步驟(Vi)后含在注射器中的產(chǎn)物為等張的，無菌的，粘彈性的可注射的凝膠。該凝膠可用作適合于增加如臉部皮膚組織的體積，即適合于填充所述皮膚組織，和/或適合于修正中度或深度皮膚皺紋的植入物。
[0381]實施例9-14
[0382]根據(jù)實施例2-7實施該反應(yīng)，不同的是在步驟(ii)后省去混合步驟(iii)。
[0383]分別在步驟(iv)后得到的和在步驟(vi)后含在注射器中的產(chǎn)物為等張的，無菌的，粘彈性的可注射的凝膠。該凝膠可用作適合于增加如臉部皮膚組織的體積，即適合于填充所述皮膚組織，和/或適合于修正中度或深度皮膚皺紋的植入物。
【權(quán)利要求】
1.制備組合物，如凝膠的方法，所述組合物包含交聯(lián)的第一聚合物，任選地第二聚合物，所述第二聚合物可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述方法包含至少步驟α)至(iV): (i)交聯(lián)含所述第一聚合物和水的混合物； (?)步驟(i)交聯(lián)后，終止所述交聯(lián)； (iii)任選地將步驟(ii)中得到的產(chǎn)物與所述第二聚合物混合； (iv)透析步驟(ii)或步驟(iii)中得到的產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中所述第一和所述第二聚合物可相同或彼此不同。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法，其中所述第二聚合物為非交聯(lián)的。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述方法，其中所述第一和所述第二聚合物選自透明質(zhì)酸和/或其鈉鹽。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述方法，其中步驟(i)中使用的第一聚合物具有從2.5MDa至小于3.0MDa的分子量Mw。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述方法，其中步驟(iii)中使用的所述第二聚合物具有至少3.0MDa的分子量。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述方法，其中所述第二聚合物的重量以所述第一聚合物的重量為基礎(chǔ)為少于5%，或少于4%，例如在0.01-5%的范圍內(nèi)，或在0.1-4%的范圍內(nèi)，或在 0.1-2.5%的范圍內(nèi)，或 0.2-2.0%，或 0.5-1.5%。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述方法，進一步包含步驟(V): (v)將麻醉劑和/或抗心律失常劑，如利多卡因，或鹽酸利多卡因，或鹽酸利多卡因一水合物，或丁卡因，或利多卡因和丁卡因，摻到步驟(iv)得到的產(chǎn)物中。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述方法，進一步包含步驟(vi): (Vi)將步驟(iv)或步驟(V)得到的產(chǎn)物裝填到注射器中并對其殺菌。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述方法，其中步驟(ii)包含步驟(i1.1)，或步驟(i1.1)和(i1.2): (i1.D使步驟(i)中得到的產(chǎn)物經(jīng)受酸處理； (i1.2)擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物；或 通過篩擠壓步驟(i1.D中得到的產(chǎn)物；或 通過具有500-600μπι范圍如558.8μπι的篩孔尺寸的篩擠壓步驟(i1.1)中得到的產(chǎn)物。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述方法，其中所述透析步驟(iv)包含步驟(iv.1)至(iv.3): (iv.1)通過第一篩擠壓步驟(iii)中得到的產(chǎn)物，并隨后通過第二篩擠壓所述第一篩的擠壓產(chǎn)物，其中所述第二篩的篩孔尺寸小于所述第一篩的篩孔尺寸；或 通過第一篩擠壓步驟(iii)中得到的產(chǎn)物，并隨后通過第二篩擠壓所述第一篩的擠壓產(chǎn)物，并隨后通過第三篩擠壓所述第二篩的擠壓產(chǎn)物，其中所述第二篩的篩孔尺寸小于所述第一篩的篩孔尺寸，且所述第三篩的篩孔尺寸小于所述第二篩的篩孔尺寸；或 通過具有325-425 μ m篩孔尺寸的第一篩擠壓步驟(iii)得到的產(chǎn)物；并隨后通過具有175-225 μ m篩孔尺寸的第二篩擠壓所述第一篩的擠壓產(chǎn)物；并隨后通過具有110-170 μ m篩孔尺寸的第三篩擠壓所述第二篩的擠壓產(chǎn)物； (iv.2)將步驟(iv.1)中得到的產(chǎn)物裝填至透析膜中；或?qū)⒉襟E(iv.1)中得到的產(chǎn)物裝填到具有12，000-14, OOODa的截留分子量的透析膜中； (iv.3)將步驟(iv.2)中得到的裝填的膜放到透析溶液中。
12.組合物，如凝膠，所述組合物包含交聯(lián)的第一聚合物，任選地第二聚合物，所述第二聚合物可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述組合物可通過根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的方法得到。
13.套件，所述套件包含注射器和根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項中定義的方法制備的組合物；或包含注射器和權(quán)利要求12的組合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項中定義的方法制備的組合物在美容應(yīng)用中的使用，或權(quán)利要求12的組合物在美容應(yīng)用中的使用；或根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項中定義的方法制備的組合物作為皮膚填充劑的使用，或權(quán)利要求12的組合物作為皮膚填充劑的使用。
15.用作藥劑的組合物，如凝膠，所述組合物包含交聯(lián)的第一聚合物，任選地第二聚合物，所述第二聚合物可為交聯(lián)的或非交聯(lián)的，和水，其中所述第一和第二聚合物選自多糖，所述組合物可通過根據(jù)權(quán)利要求ι-1i任一項的方法得到。
【文檔編號】C08B37/08GK104395348SQ201380031602
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2013年6月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月15日
【發(fā)明者】?？啤ぐ蜖柛? 約瑟夫·弗里德里希, 沃爾夫?qū)だ愄貏? 羅伯特·G·福格茨, 蒂姆·斯蒂芬·里格曼 申請人:莫茨藥物股份兩合公司