一種云芝糖肽制備的方法一、技術領域本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及到一種云芝糖肽高效制備的方法。二、

背景技術：
云芝[Coriolusversicolor]，又稱千層蘑、彩紋云芝、多色云芝、采絨革蓋菌等，隸屬于真菌門(Mycology)、擔子菌亞門(Basidiomycotina)、多孔菌科(Polyporales)、栓菌屬(Trametes)。曾用名：PolystictuisVersicolor(L)Fr。云芝糖肽(PolysacchridePeptideofCoriolusversicolor，簡稱PSP)是從中國云芝擔子菌綱多孔菌科中的一些屬、種中提取的一種蛋白多糖類物質(zhì)，是良好的生物效應劑，適用于食管癌、胃癌等癌癥的治療，具有免疫調(diào)節(jié)作用，對腫瘤患者的細胞免疫功能和血液系統(tǒng)有一定保護作用，可提高患者的生活質(zhì)量。在近期的研究中人們又發(fā)現(xiàn)它具有抗艾滋病毒活性，近十幾年來它引起了人們越來越大的興趣，成為了很有潛力的抗癌藥物。云芝糖肽最早是由日本從211種擔子菌中篩選出的云芝里提取獲得的，經(jīng)過21年的研究，于1981年在美國獲得專利，是一種新型的生物反應調(diào)節(jié)劑類藥物，命名為polysaccharidesK，簡稱：PSK，在當時引起了整個醫(yī)藥界廣泛的興趣。目前，云芝糖肽既可由云芝子實體中提取，也可通過液體發(fā)酵的方法從云芝菌絲體中提取獲得，現(xiàn)大都采用后種提取方法。日本是最先提取獲得云芝糖肽的國家，他們采用靜置培養(yǎng)法培養(yǎng)菌膜，并用勻漿機將菌膜打碎，以制備發(fā)酵種子。在提取工藝上，日本先用NaOH在95-98℃的溫度下堿提3個小時，后用5kd濾膜超濾，以除去小分子成分，再用硫酸銨鹽析，噴霧干燥以后得到云芝糖肽。自從云芝糖肽的分離后，國內(nèi)外學者從體內(nèi)到體外都進行了大量的實驗，目前云芝糖肽已被定位為生物學應答調(diào)節(jié)劑，在體內(nèi)，能增加γ-IFN，IL-2的分泌和促進T細胞的增殖，調(diào)節(jié)體液免疫和細胞免疫功能，同時，能中和環(huán)磷酰胺等化療藥物對白細胞和IL-2的抑制作用并且推遲超敏反應，并對于體內(nèi)的抗腫瘤細胞的增殖活性已得到很好的證明。PSP目前臨床上主要應用于放療、化療及手術治療后的聯(lián)合治療，能緩解腫瘤患者免疫功能下降的狀況，同時應用于抗HBV及HCV等病毒感染的輔助治療，有助于調(diào)節(jié)患者的免疫狀態(tài)。而當今云芝發(fā)酵生產(chǎn)云芝糖肽的過程中，存在著投入較大，成本較高，而云芝糖肽的收率較低，經(jīng)濟效益不高等問題，阻礙了產(chǎn)品的發(fā)展。三、

技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提出高效制備云芝糖肽的一種工藝，依此法可以有效提高云芝糖肽的產(chǎn)量和產(chǎn)品純度，提高產(chǎn)率，降低生產(chǎn)成本。一種云芝糖肽高效制備的方法，主要通過如下技術方案實現(xiàn)：(1)堿液提取發(fā)酵菌絲體獲得云芝糖肽的菌絲體提取液微生物發(fā)酵后獲得菌絲體烘干，研細，精密稱定，按比例加入堿液，提取數(shù)次后，離心獲得云芝糖肽初提液。(2)冷熱堿提取菌絲體殘渣獲得云芝糖肽菌絲體殘渣提取液菌絲體殘渣烘干，研細，精密稱定，按比例加入堿液，常溫下提取，離心獲得部分提取液，堿提后殘渣按比例加入堿液，高溫提取，離心后合并提取液獲得菌絲體殘渣提取液。(3)從云芝糖肽提取液中制備獲得云芝糖肽堿提獲得菌絲體提取液及菌絲體殘渣提取液混合，減壓濃縮至約原體積的1/5，加入HCl中和；中和處理后提取液同菌株發(fā)酵上清液合并，減壓濃縮約至原體積的1/5，將濃縮液移至透析袋中流水透析72小時；緩慢加入4倍體積95％乙醇，攪拌均勻，4℃下靜置12h，倒出上清液，取沉淀，分別用95％乙醇和丙酮洗滌，70℃真空干燥，即得到云芝糖肽，得率高于10.50g/L以上。四、本發(fā)明的優(yōu)點(1)本發(fā)明對云芝糖肽的提取工藝進行了深入研究，既用水提醇沉法提取了發(fā)酵液中的胞外糖肽，又分別通過水提、堿提的方法來處理菌絲體，獲取胞內(nèi)糖肽類物質(zhì)，并對水提后的菌絲體殘渣再依次用冷堿和熱堿進行提取，有效提高了云芝糖肽的得率；(2)本發(fā)明脫色工藝中用樹脂法取代傳統(tǒng)的活性炭和雙氧水脫色的方法，具有脫色時間短、多糖損失小、脫色效率高、易分離等優(yōu)點，可有效提高云芝糖肽的色澤和質(zhì)量；(3)本發(fā)明提供的一種云芝糖肽的制備工藝具有技術先進、工藝簡單、產(chǎn)率高、成本低、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點，有利于我國云芝糖肽生產(chǎn)技術和產(chǎn)業(yè)化水平的提高。五、附圖說明附圖1是先通過堿提的方法來處理菌絲體，獲得含有胞內(nèi)糖肽類物質(zhì)的溶液，進一步對堿提后的菌絲體殘渣再依次用冷堿和熱堿進行提取，獲得的提取液同發(fā)酵液及菌絲體提取液合并，采用水提醇沉淀的方法處理，獲得高質(zhì)量云芝糖肽的工藝流程圖。六、具體實施方式下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明進一步說明。實施例一...