專利名稱：交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠及其制備方法，即在交聯(lián)透明質(zhì)酸中混入羥丙基甲基纖維素(HPMC)方法，特別指的是用高速分散法在交聯(lián)透明質(zhì)酸中混入羥丙基甲基纖維素(HPMC)。
背景技術(shù)：
開發(fā)能應(yīng)用與臨床的皮膚填充劑，就必須對透明質(zhì)酸進(jìn)行一系列的化學(xué)修飾和處理過程。如果采用非交聯(lián)的透明質(zhì)酸作為皮膚填充劑，那么，在皮膚中天然存在的透明質(zhì)酸酶與自由基就會(huì)一個(gè)一個(gè)的切斷聚合起來的透明質(zhì)酸分子，快速降解非交聯(lián)的透明質(zhì)酸。 結(jié)果使得透明質(zhì)酸在組織內(nèi)的半衰期只有一天到兩天，然后經(jīng)過水的稀釋，在肝臟內(nèi)逐步降解為水和二氧化碳。這樣，產(chǎn)品在注射的部位就會(huì)很快的失去效用(在一周內(nèi))，結(jié)果使得非交聯(lián)的透明質(zhì)酸在皮膚中的滯留時(shí)間受到了很大的限制。因此，非交聯(lián)的透明質(zhì)酸起不到一個(gè)作為皮膚填充劑應(yīng)該起到的療效。
將高分子量的透明質(zhì)酸Q60萬左右)交聯(lián)起來，提高了透明質(zhì)酸分子的穩(wěn)定性， 可以有效地防止透明質(zhì)酸酶和自由基對透明質(zhì)酸的降解作用，明顯地提高透明質(zhì)酸在皮膚內(nèi)的停留時(shí)間，具有良好的作為皮膚填充劑應(yīng)有的療效。然而，交聯(lián)透明質(zhì)酸仍有想當(dāng)大的孔徑會(huì)讓透明質(zhì)酸酶進(jìn)入到交聯(lián)透明質(zhì)酸的內(nèi)部而將透明質(zhì)酸降解。而在交聯(lián)透明質(zhì)酸中混入小分子量(10萬左右)的羥丙基甲基纖維素(HPMC)，讓羥丙基甲基纖維素(HPMC)穿插進(jìn)入到透明質(zhì)酸的縫隙中，以填補(bǔ)交聯(lián)透明質(zhì)酸空隙，起到一種“柵欄作用”而阻擋了透明質(zhì)酸酶進(jìn)入到交聯(lián)透明質(zhì)酸中，有效地阻止了交聯(lián)透明質(zhì)酸的降解，達(dá)到延長交聯(lián)透明質(zhì)酸在體內(nèi)的停留時(shí)間的目的。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠及其制備方法，采用高速分散機(jī)，將交聯(lián)透明質(zhì)酸粉碎成微小顆粒的同時(shí)，讓羥丙基甲基纖維素 (HPMC)填補(bǔ)到交聯(lián)透明質(zhì)酸的空隙中，以達(dá)到交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素(HPMC) 的均勻混合。
本發(fā)明提供的一種交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠的原料的質(zhì)量組成
交聯(lián)透明質(zhì)酸-3% ；
羥丙基甲基纖維素0. 5% -1% ；
其余為水。
可選地，按照上述的質(zhì)量組成任意組合。交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素質(zhì)量比為 1 16 1。
所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸為以NaOH作為催化劑，采用雙環(huán)氧交聯(lián)劑(如1，2，7，8_雙環(huán)氧辛烷或1，4-丁二醇雙縮水甘油醚等)交聯(lián)而成的透明質(zhì)酸凝膠(溶脹度為80-500倍， 交聯(lián)度為"10% ) 0
所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸的分子量為65-260萬。
所述的羥丙基甲基纖維素的分子量為8-20萬。
本發(fā)明所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠的顆粒大小為 0. 05-0. 2_，優(yōu)選 0. 1_。
本發(fā)明提供的一種交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠的制備方法包括如下步驟
1)分別配制透明質(zhì)酸水凝膠與羥丙基甲基纖維素水溶液；
2)按計(jì)量將透明質(zhì)酸水凝膠與羥丙基甲基纖維素水溶液放入高速分散機(jī)中，以 12000-18000rps的轉(zhuǎn)速進(jìn)行高速分散；優(yōu)選16000rps ；
3)高速分散機(jī)每20-30s暫停一次，連續(xù)4_6次，總時(shí)間2-5min。
所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸的濃度為10-30mg/ml，優(yōu)選20mg/ml ；所述的羥丙基甲基纖維素的濃度為10-30mg/ml，優(yōu)選20mg/ml。
本發(fā)明采用IKA公司生產(chǎn)的25T普通型高速分散機(jī)，以16000rps的轉(zhuǎn)速將大塊狀的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠粉碎，同時(shí)將羥丙基甲基纖維素(HPMC)混入到交聯(lián)透明質(zhì)酸中。以高速分散機(jī)的高轉(zhuǎn)速將小分子量的羥丙基甲基纖維素(HPMC)穿插到交聯(lián)透明質(zhì)酸的孔隙中，填補(bǔ)了交聯(lián)透明質(zhì)酸的空隙，并且利用氫鍵作用將羥丙基甲基纖維素(HPMC)固定在交聯(lián)透明質(zhì)酸的網(wǎng)格中，從而達(dá)到阻止透明質(zhì)酸酶進(jìn)入交聯(lián)透明質(zhì)酸內(nèi)部的目的，可有效地阻止了交聯(lián)透明質(zhì)酸的降解，達(dá)到延長交聯(lián)透明質(zhì)酸在體內(nèi)的停留時(shí)間的目的。以體外酶解實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，酶解時(shí)間提高了 20%左右。本發(fā)明中羥丙基甲基纖維素(HPMC)與透明質(zhì)酸之間只是簡單的物理混合，不存在化學(xué)反應(yīng)，透明質(zhì)酸完全降解后，羥丙基甲基纖維素可隨體液排出，無潛在的安全風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明方法簡單，容易操作，成本低廉，安全可靠。


圖1為未加入羥丙基甲基纖維素(HPMC)的交聯(lián)透明質(zhì)酸透明質(zhì)酸分子量與時(shí)間關(guān)系圖。
圖2為采用高速分散法混入羥丙基甲基纖維素(HPMC)的交聯(lián)透明質(zhì)酸透明質(zhì)酸分子量與時(shí)間關(guān)系圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠的制備
將0. 5g氫氧化鈉溶解于20ml水中，加入5g透明質(zhì)酸鈉(分子量260萬，山東福瑞達(dá)生物技術(shù)有限公司出品)，攪拌12-14h，攪拌至透明質(zhì)酸鈉完全溶解后，再向反應(yīng)體系中加入0.25g 1，2，7，8-二環(huán)氧辛烷(亦可采用1，4_ 丁二醇雙縮水甘油醚作為交聯(lián)劑，相同方法制備)，迅速攪拌均勻，在25°C下反應(yīng)M小時(shí)。反應(yīng)用2mol/L鹽酸終止，調(diào)至pH = 5左右，同時(shí)在40°C，13. 3Kpa的真空度條件下蒸餾去除反應(yīng)體系中的水，當(dāng)蒸餾出的水達(dá)到50mL時(shí)停止減壓蒸餾。分3次用200mL pH = 8-9的含30%乙醇的氫氧化鈉溶液浸泡， 中和凝膠的鹽酸，此交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的理論交聯(lián)度為5%。中和后的凝膠在吸水達(dá)到溶脹平衡QOmg/mL)后備用。
取部分(1/2)達(dá)到溶脹平衡O0mg/mL)后的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠，按透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素(分子量12萬)的比例為6 1加入濃度為20mg/mL羥丙基甲基纖維素水溶液，裝入高速分散機(jī)(IKA公司生產(chǎn)的25T普通型高速分散機(jī))，以16000rps的轉(zhuǎn)速將羥丙基甲基纖維素迅速分散在交聯(lián)透明質(zhì)酸的水凝膠內(nèi)，高速分散機(jī)每20s暫停一次，連續(xù)6 次，總時(shí)間2min，使羥丙基甲基纖維素在交聯(lián)透明質(zhì)酸中分散均勻。通過刻度顯微鏡觀察， 此時(shí)的透明質(zhì)酸凝膠顆粒大小在0. Imm左右。
實(shí)施例2 混入羥丙基甲基纖維素(HPMC)的交聯(lián)透明質(zhì)酸組合水凝膠與單純交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠(實(shí)施例1中制備，濃度20mg/ml，理論交聯(lián)度5% )的酶解實(shí)驗(yàn)對照
各取實(shí)施例1制備的混入羥丙基甲基纖維素(HPMC)的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠與單純交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠2mL于比色管中，加入透明質(zhì)酸酶600單位，加水2mL稀釋，放置在 37°C恒溫水浴振蕩器中，從稀釋后起計(jì)時(shí)，從第二十分鐘開始，每二十分鐘用微量注射器取 50 μ L上清液，取出的上清液置于冰箱迅速冷卻至5°C，取5小時(shí)之內(nèi)的酶解上清液，分別用水相凝膠滲透色譜(GPC)檢測不同時(shí)段的上清液分子量，當(dāng)分子量趨于常數(shù)時(shí)，則可確定該產(chǎn)品酶解完成。
酶解實(shí)驗(yàn)結(jié)果如附圖1和2所示，添加了羥丙基甲基纖維素(HPMC)的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠比單純的交聯(lián)透明質(zhì)水凝膠酸降解時(shí)間延長了將近40分鐘，而且在酶解初期，混入羥丙基甲基纖維素(HPMC)的透明質(zhì)酸水凝膠要比單純的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的降解速度要慢很多，這是由于羥丙基甲基纖維素(HPMC)從交聯(lián)透明質(zhì)酸中緩慢的釋放出來而阻止的透明質(zhì)酸酶進(jìn)入到交聯(lián)透明質(zhì)酸的內(nèi)部。待交聯(lián)透明質(zhì)酸內(nèi)部的羥丙基甲基纖維素 (HPMC)釋放完全后，交聯(lián)透明質(zhì)酸才開始緩慢的被透明質(zhì)酸酶降解。
權(quán)利要求
1.一種交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠，其特征在于它的原料的質(zhì)量組成交聯(lián)透明質(zhì)酸-3% ； 羥丙基甲基纖維素0.5% -1% ； 其余為水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合水凝膠，其特征在于所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸為以NaOH作為催化劑，采用1，2，7，8_雙環(huán)氧辛烷或1，4_ 丁二醇雙縮水甘油醚雙環(huán)氧交聯(lián)劑交聯(lián)而成的透明質(zhì)酸凝膠，溶脹度為80-500倍，交聯(lián)度為-10%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合水凝膠，其特征在于所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸的分子量為 65-260 萬。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合水凝膠，其特征在于所述的羥丙基甲基纖維素的分子量為8-20萬。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合水凝膠，其特征在于所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠的顆粒大小為0. 05-0. 2mm。
6.一種權(quán)利要求1所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠的制備方法， 其特征在于包括如下步驟1)分別配制透明質(zhì)酸水凝膠與羥丙基甲基纖維素水溶液；2)按計(jì)量將透明質(zhì)酸水凝膠與羥丙基甲基纖維素水溶液放入高速分散機(jī)中，以 12000-18000rps的轉(zhuǎn)速進(jìn)行高速分散；3)高速分散機(jī)每20-30s暫停一次，連續(xù)4-6次，總時(shí)間2-5min。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸的濃度為 10-30mg/mlo
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸的濃度為20mg/ml ο
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的羥丙基甲基纖維素的濃度為 10-30mg/mlo
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的羥丙基甲基纖維素的濃度為 20mg/mlo
全文摘要
本發(fā)明涉及一種交聯(lián)透明質(zhì)酸與羥丙基甲基纖維素組合水凝膠及其制備方法，它的原料的質(zhì)量組成交聯(lián)透明質(zhì)酸1％-3％；羥丙基甲基纖維素0.5％-1％；其余為水。在交聯(lián)透明質(zhì)酸中混入羥丙基甲基纖維素(HPMC)方法，特別指的是用高速分散法在交聯(lián)透明質(zhì)酸中混入羥丙基甲基纖維素(HPMC)。本發(fā)明中羥丙基甲基纖維素(HPMC)與透明質(zhì)酸之間只是簡單的物理混合，不存在化學(xué)反應(yīng)，透明質(zhì)酸完全降解后，羥丙基甲基纖維素可隨體液排出，無潛在的安全風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明方法簡單，容易操作，成本低廉，安全可靠。
文檔編號C08J3/075GK102492180SQ201110392570
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月1日
發(fā)明者李睿智, 簡軍 申請人:北京愛美客生物科技有限公司