專(zhuān)利名稱(chēng)：拐棗多糖的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種拐棗多糖的分離純化方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
拐棗(Hovenia cerba Lindl.)為鼠李科拐棗屬落葉喬木，俗稱(chēng)犋子、鉤子、雞腳爪、萬(wàn)字果、萬(wàn)壽果、龍爪。它全身都是寶，是一種果、藥、材兼用的名貴樹(shù)，有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。果實(shí)中含葡萄糖及蘋(píng)果酸鈣，種子含枳犋皂苷，具有鎮(zhèn)靜、抗驚厥和降血壓等功效。肉質(zhì)可治風(fēng)濕，有清熱利利尿止渴降火解毒功效，樹(shù)皮可活血，舒筋解毒，果梗性甘平，有健胃補(bǔ)血的作用，無(wú)毒，主治頭風(fēng)，潤(rùn)五臟利大小便。木質(zhì)部含二羧酸三萜類(lèi)化合物枳犋子酸 (Hobeniaaced, C3tlH8tlO5)。朱炯波等采用蒽酮-硫酸比色法測(cè)定其多糖含量為13.83%，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)拐棗活性多糖的作用研究尚未見(jiàn)報(bào)道。多糖是天然有機(jī)化合物中的大分子物質(zhì)，某些活性多糖有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能的作用，一些多糖則具有復(fù)雜的控制細(xì)胞分裂和分化、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)與衰老等多方面功能， 改性的多糖則有抗HIV感染的作用，一些重要的生理過(guò)程如炎癥反應(yīng)，受體識(shí)別，免疫反應(yīng)等都與多糖分子密切相關(guān)。已有的大量藥理研究表明，植物多糖，特別是中藥中的多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗感染、降血糖等多種生理活性，其原生藥大多屬補(bǔ)益類(lèi)中藥。 雖然目前有很多合成化療藥物，但它們?cè)跉⑺腊┘?xì)胞的同時(shí)也同樣累及正常細(xì)胞，臨床上表現(xiàn)出很多副作用，特別是化療藥物對(duì)患者的免疫系統(tǒng)造成損害，但植物藥的遺傳毒性不太明顯，表明中草藥在抗癌抗突變方面有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和廣闊的應(yīng)用前景。因此，多糖類(lèi)免疫調(diào)節(jié)劑在腫瘤上的治療很有吸引力。離子交換樹(shù)脂是一種多孔性交聯(lián)聚合物，具有較高的比表面積，因而具有優(yōu)良的吸附能力。離子吸附樹(shù)脂屬于兩相結(jié)構(gòu)聚合物相和孔。聚合物相是由眾多的納米級(jí)聚合物微粒堆積而成的，微粒之間是孔。通過(guò)調(diào)整合成的方法可以調(diào)節(jié)為例大小，已寄孔徑和比表面積等，從而使樹(shù)脂具有不同的吸附性能。此外，吸附樹(shù)脂按表面性質(zhì)又可分為非極性、 中極性、極性和強(qiáng)極性四種。不同的表面性質(zhì)使吸附樹(shù)脂具備不同的吸附機(jī)理和吸附性能， 因此使樹(shù)脂獲得多方面的用途。有研究表明，用交換樹(shù)脂代替常用的活性炭進(jìn)行脫色，不但可加快過(guò)濾速度，而且脫色效果也好，同時(shí)還達(dá)到去雜的目的，從而提高產(chǎn)品的質(zhì)量。樹(shù)脂除脫色外，同時(shí)具有離子作用，能與溶液中的離子起離子交換反應(yīng)，加上通用樹(shù)脂還有較強(qiáng)的配位體基團(tuán)(_0H、-NH3)，能對(duì)金屬離子起絡(luò)合作用，從而除去溶液中的金屬離子，起著去雜的作用?，F(xiàn)有多糖脫色技術(shù)常采用活性炭脫色，雖價(jià)格低廉，但操作時(shí)必須使用粉末活性炭，存在脫色后溶液中的炭殘?jiān)y以完全出去的致命缺點(diǎn)；雙氧水脫色需目的產(chǎn)物具有穩(wěn)定性、不易氧化的特點(diǎn)，但由于雙氧水脫色法是直接氧化提取液中的色素，并未脫除，且有可能將多糖鏈狀結(jié)構(gòu)破壞，氧化后的色素仍然作為雜質(zhì)留在提取液中，并不能保證其最后品質(zhì)。本發(fā)明采用離子交換樹(shù)脂處理能力大，范圍廣，脫色率高，使得多糖保留率高，可再生重復(fù)利用，成本較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于提供一種拐棗多糖的分離純化方法，從拐棗中經(jīng)熱水浸提、 醇沉、離心DEAE纖維素柱層析除雜、離子交換樹(shù)脂柱脫色、半透膜透析并干燥得成品。該方法提取得到較高純度的拐棗活性多糖。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)措施拐棗多糖的分離純化方法，其特征在于包括下列步驟(1)多糖提取液制備將拐棗粉碎，加熱水浸提2-3次，浸提M-48小時(shí)，過(guò)濾，合并浸提液，濃縮得拐棗浸膏；(2)醇沉將拐棗浸膏加入3-5倍80-90%的食用乙醇攪拌5_15分鐘后靜置沉淀， 離心過(guò)濾除去上清液，收集沉淀物；(3)除雜、脫色將離心沉淀物用熱水?dāng)嚢枞芙?，上DEAE纖維素柱，0-0. 5mol/ LNaCl溶液梯度洗脫，再上離子交換樹(shù)脂柱吸附脫色，下柱液過(guò)濾后用半透膜透析，干燥即得成品。所述步驟O)中離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為5000-10000rpm。所述步驟(3)中纖維素柱采用DEAE-23、DEAE-52。所述步驟(3)中離子交換樹(shù)脂可選苯乙烯系樹(shù)脂和丙烯酸系樹(shù)脂或兩者混合樹(shù)月旨。苯乙烯系樹(shù)脂可采用Asmit 265P、Duolite A171P陰離子樹(shù)脂；丙烯酸系樹(shù)脂可采用 Asmit295, DoliteA172、IRA958S、A860 陰離子樹(shù)脂。所述步驟C3)中半透膜為截留分子量4000-10000的半透膜透析袋，透析對(duì)-48小時(shí)。所述步驟(3)中干燥方法可采用冷凍干燥或噴霧干燥中的一種。本發(fā)明的特點(diǎn)1)拐棗經(jīng)熱水浸提、醇沉、除雜、脫色、干燥等步驟，得到拐棗多糖，制備方法簡(jiǎn)單，易于實(shí)施；2)離子交換樹(shù)脂脫色效果好，產(chǎn)品純度高；3)為拐棗的應(yīng)用提供了有利的技術(shù)手段，制得的拐棗多糖可用于對(duì)其活性的進(jìn)一步研究，并為拐棗多糖藥物和保健品提供了大量原料，促進(jìn)了拐棗的經(jīng)濟(jì)發(fā)展。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 將陰干的拐棗粉碎成80目粗粉，置于提取罐中，加入10倍90-100°C熱水恒溫浸泡提取，反復(fù)提取3次，每次M小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏；向浸膏中加入3倍體積量的90 %食用乙醇，攪拌5分鐘后靜置沉淀，離心過(guò)濾除去上清液，收集沉淀物，將沉淀物用熱水?dāng)嚢枞芙猓螪EA-23纖維素柱，0-0. 5mol/LNaCl溶液梯度洗脫，將預(yù)處理好的Asmit 265P陰離子交換樹(shù)脂裝柱，洗脫液濃縮至0. 3kg/L，以2BV/h上柱，收集下柱液，過(guò)濾后濃縮至最小體積，將濃縮液裝入截留分子量4000的半透膜透析袋透析48小時(shí)，噴霧干燥即得拐棗多糖，所得拐棗多糖純度達(dá)70%左右。實(shí)施例2:
將陰干的拐棗粉碎成100目粗粉，置于提取罐中，加入14倍90-100°C熱水恒溫浸泡提取，反復(fù)提取2次，每次48小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏；向浸膏中加入4倍體積量的85%食用乙醇，攪拌15分鐘后靜置沉淀，離心過(guò)濾除去上清液，收集沉淀物，將沉淀物用熱水?dāng)嚢枞芙?，上DEAE-52纖維素柱，0-0. 5mol/LNaCl溶液梯度洗脫，將預(yù)處理好的Asmit 265P和Asmit295混合陰離子交換樹(shù)脂裝柱，洗脫液濃縮至0. 44kg/L，以2BV/h上柱，收集下柱液，過(guò)濾后濃縮至最小體積，將濃縮液裝入截留分子量7000的半透膜透析袋透析M小時(shí)，噴霧干燥即得拐棗多糖，所得拐棗多糖純度達(dá)70%左右。實(shí)施例3 將陰干的拐棗粉碎成80目粗粉，置于提取罐中，加入13倍90-100°C熱水恒溫浸泡提取，反復(fù)提取3次，每次M小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏；向浸膏中加入4倍體積量的 90%食用乙醇，攪拌10分鐘后靜置沉淀，離心過(guò)濾除去上清液，收集沉淀物，將沉淀物用熱水?dāng)嚢枞芙?，上DEAE-52纖維素柱，0-0. 5mol/LNaCl溶液梯度洗脫，將預(yù)處理好的Duolite A171P陰離子交換樹(shù)脂裝柱，洗脫液濃縮至0. 38kg/L，以2BV/h上柱，收集下柱液，過(guò)濾后濃縮至最小體積，將濃縮液裝入截留分子量4000的半透膜透析袋透析36小時(shí)，冷凍干燥即得拐棗多糖，所得拐棗多糖純度達(dá)70%左右。實(shí)施例4 將陰干的拐棗粉碎成60目粗粉，置于提取罐中，加入10倍90-100°C熱水恒溫浸泡提取，反復(fù)提取2次，每次36小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏；向浸膏中加入4倍體積量的80%食用乙醇，攪拌15分鐘后靜置沉淀，離心過(guò)濾除去上清液，收集沉淀物，將沉淀物用熱水?dāng)嚢枞芙?，上DEAE-52纖維素柱，0-0. 5mol/LNaCl溶液梯度洗脫，將預(yù)處理好的Dolite A172陰離子交換樹(shù)脂裝柱，洗脫液濃縮至0. 5kg/L,以2BV/h上柱，收集下柱液，過(guò)濾后濃縮至最小體積，將濃縮液裝入截留分子量6000的半透膜透析袋透析48小時(shí)，噴霧干燥即得拐棗多糖，所得拐棗多糖純度達(dá)70%左右。實(shí)施例5 將陰干的拐棗粉碎成40目粗粉，置于提取罐中，加入12倍90-100°C熱水恒溫浸泡提取，反復(fù)提取2次，每次48小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏；向浸膏中加入3倍體積量的 90%食用乙醇，攪拌15分鐘后靜置沉淀，離心過(guò)濾除去上清液，收集沉淀物，將沉淀物用熱水?dāng)嚢枞芙?，上DEAE-23纖維素柱，0-0. 5mol/LNaCl溶液梯度洗脫，將預(yù)處理好的Duolite A171P和Dolite A172混合陰離子交換樹(shù)脂裝柱，洗脫液濃縮至0. 40kg/L,以2BV/h上柱， 收集下柱液，過(guò)濾后濃縮至最小體積，將濃縮液裝入截留分子量5000的半透膜透析袋透析 24小時(shí)，冷凍干燥即得拐棗多糖，所得拐棗多糖純度達(dá)70%左右。實(shí)施例6 將陰干的拐棗粉碎成50目粗粉，置于提取罐中，加入13倍90-100°C熱水恒溫浸泡提取，反復(fù)提取3次，每次30小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏；向浸膏中加入3倍體積量的 85%食用乙醇，攪拌10分鐘后靜置沉淀，離心過(guò)濾除去上清液，收集沉淀物，將沉淀物用熱水?dāng)嚢枞芙?，上DEAE-23纖維素柱，0-0. 5mol/LNaCl溶液梯度洗脫，將預(yù)處理好的A860陰離子交換樹(shù)脂裝柱，洗脫液濃縮至0. 34kg/L，以2BV/h上柱，收集下柱液，過(guò)濾后濃縮至最小體積，將濃縮液裝入截留分子量10000的半透膜透析袋透析36小時(shí)，冷凍干燥即得拐棗多糖，所得拐棗多糖純度達(dá)70%左右。
實(shí)施例7:將陰干的拐棗粉碎成60目粗粉，置于提取罐中，加入15倍90-100°C熱水恒溫浸泡提取，反復(fù)提取2次，每次M小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏；向浸膏中加入4倍體積量的 80%食用乙醇，攪拌15分鐘后靜置沉淀，離心過(guò)濾除去上清液，收集沉淀物，將沉淀物用熱水?dāng)嚢枞芙?，上DEAE-52纖維素柱，0-0. 5mol/LNaCl溶液梯度洗脫，將預(yù)處理好的IRA958S 陰離子交換樹(shù)脂裝柱，洗脫液濃縮至0. 35kg/L,以2BV/h上柱，收集下柱液，過(guò)濾后濃縮至最小體積，將濃縮液裝入截留分子量7000的半透膜透析袋透析48小時(shí)，冷凍干燥即得拐棗多糖，所得拐棗多糖純度達(dá)70%左右。
權(quán)利要求
1.拐棗多糖的分離純化方法，其特征在于包括下列步驟(1)多糖提取液制備將拐棗粉碎，加熱水浸提2-3次，浸提M-48小時(shí)，過(guò)濾，合并浸提液，濃縮得拐棗浸膏；(2)醇沉將拐棗浸膏加入3-5倍80-90%的食用乙醇攪拌5-15分鐘后靜置沉淀，離心過(guò)濾除去上清液，收集沉淀物；(3)除雜、脫色將離心沉淀物用熱水?dāng)嚢枞芙?，上DEAE纖維素柱，0-0.5mol/LNaCl溶液梯度洗脫，再上離子交換樹(shù)脂柱吸附脫色，下柱液過(guò)濾后用半透膜透析，干燥即得成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化方法，其特征在于所述步驟O)中離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為 5000-10000rpm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化方法，其特征在于所述步驟(3)中纖維素柱采用 DEAE-23、DEAE-52。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化方法，其特征在于所述步驟(3)中離子交換樹(shù)脂可選苯乙烯系樹(shù)脂和丙烯酸系樹(shù)脂或兩者混合樹(shù)脂。苯乙烯系樹(shù)脂可采用Asmit 265P、 DuoliteA171P陰離子樹(shù)脂；丙烯酸系樹(shù)脂可采用AsmiU95、DoliteA172、IRA958S、A860陰離子樹(shù)脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化方法，其特征在于所述步驟(3)中半透膜為截留分子量4000-10000的半透膜透析袋，透析M-48小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化方法，其特征在于所述步驟(3)中干燥方法可采用冷凍干燥或噴霧干燥中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種拐棗多糖的分離純化方法，其特征在于其具體步驟為1)將原材料粉碎，熱水浸提、過(guò)濾、濃縮得拐棗浸膏；2)將拐棗浸膏加醇沉淀、離心得拐棗粗多糖；3)用適量熱水溶解拐棗粗多糖，以DEAE纖維素柱層析除雜、離子交換樹(shù)脂柱脫色、半透膜透析并干燥得成品。采用本發(fā)明生產(chǎn)拐棗多糖顏色純白、雜質(zhì)少、純度高，此外離子交換樹(shù)脂對(duì)拐棗多糖提取液進(jìn)行脫色處理，脫色效果好，多糖保留率高。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102477104SQ201010557750
公開(kāi)日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月25日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請(qǐng)人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司