專利名稱：從蓮子心中提取洛土辛堿的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥品，特別是植物提取藥物的制備方法。
曾有“蓮子心水煎液成份可增強離體蛙心收縮力”的報道(霍景文、丘晨肽、張茂絕中國藥理學會第二屆全國會員代表大會論文摘要集，第二集，1956，8-9)；惜未作進一步單體活性成份的藥理學研究。我們在進行蓮子心植物化學、藥理學研究時，發(fā)現(xiàn)提取蓮子心脂溶性部位后，蓮子心水溶性部位有增強心肌收縮力作用，并從中提取分離出一種新生物堿，經(jīng)波譜及理化分析證實為洛土辛。離體及在體藥理學實驗證明洛土辛堿可能為磷酸二酯酶III和/或V型抑制劑。
本發(fā)明的目的在于提供一種低成本、高收得率、優(yōu)質(zhì)(含量大于90％)、適合于工業(yè)化生產(chǎn)的從蓮子心中提取純化洛土辛堿的制備方法。
實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案即從蓮子心中提取洛土辛堿的制備方法包括1.以蓮子心為原料，制取水溶性總生物堿；2.水溶性總生物堿分離；3.分步結(jié)晶法分離洛土辛。
具體操作方法是將蓮子心生藥以甲醇浸泡3次，回收甲醇得總堿浸膏，以1％鹽酸水溶液調(diào)pH至2-3，過濾，得酸性總堿溶液，以濃氨水調(diào)pH至9-10，得堿性總堿沉淀、懸液，以氯仿提取5次，得堿性水層，調(diào)pH至2-3，加入飽和雷氏銨鹽，充分沉淀，濾取沉淀物，風干，溶于丙酮，濾除不溶物；丙酮液中加入飽和硫酸銀液，充分沉淀，濾除沉淀物，回收丙酮，減壓濃縮至糖漿狀，析晶，得粗品總堿結(jié)晶，分別于無水乙醇和水中反復結(jié)晶，乙醇中分步結(jié)晶，得白色方晶。水溶液中加入飽和氯化鋇，濾除沉淀，無水乙醇中重結(jié)晶得洛土辛鹽酸鹽。
附圖
為本發(fā)明方法的工藝流程圖。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明方法作進一步說明。
實施例擇凈、干燥蓮子心8kg，預(yù)先用適量3％Na2CO3(約100ml/kg生藥)浸潤濕，再加入適量(約4000ml/kg)甲醇(或乙醇)于室溫下浸泡一周，連續(xù)三次。合并甲醇浸泡液，回收甲醇，殘留液用3％鹽酸調(diào)pH至2-3，過濾，濾液用乙醚脫脂，繼續(xù)以下步驟(1).水溶性總生物堿分離將上述脫脂后酸性溶液，用濃氨水調(diào)pH至9左右，用氯仿提取各3次，回收氯仿。水層過濾，濾液用鹽酸調(diào)pH至2-3，加入飽和雷氏銨鹽，立即生成大量沉淀，收集沉淀物，室溫下風干后，溶于丙酮，濾除不溶物，適量回收丙酮、濃縮后，加入飽和硫酸銀使之充分沉淀，濾除沉淀，濾液為水溶性總堿之硫酸鹽溶液，(或濾液經(jīng)適量減壓濃縮后，加入飽和氯化鋇，立即生成大量硫酸鋇沉淀，充分沉淀后，濾除不溶物)，濾液經(jīng)減壓濃縮至糖漿狀，放置析晶，得出粗品結(jié)晶8.3g。
(2)分步結(jié)晶法分離洛土辛將粗品結(jié)晶8.3g分別回流下溶于無水乙醇200ml(或甲醇)及熱水浴下溶于水50ml，反復結(jié)晶，得水溶性總生物堿結(jié)晶6.2g。再于無水乙醇中分步結(jié)晶，第一步結(jié)晶得針狀結(jié)晶。過濾分離得母液；母液進行第二步結(jié)晶，得白色方晶5.6，經(jīng)TLC鑒定為洛土辛，再于甲醇與水中反復結(jié)晶(依色澤而定，可用活性炭脫色)，得精品洛土辛4.7g。
所得物質(zhì)——洛土辛堿的確認(理化及波譜鑒定)主要理化常數(shù)及波譜數(shù)椐洛土辛鹽酸鹽白色方晶(無水乙醇)，MP213-214℃；洛土辛硫酸鹽MP224-225℃。UVλMax95％EtOH229.2nm，283.2nm，UVλmax95％EtOH252.4nm(在堿性(KOH)條件下藍移)。254nm紫外光照射下不發(fā)熒光；IRVmaxKBrcm-13550、3390、3200、1615、1530、1520、1265、1240、1115、915、880、840。MS M/Z314(M+1)、298、206、192、107、73、58、44。NMR(D2O)δ3.02(3H)，3.28(3H，2×N-CH3)，3.33(3H，O-CH3)、4.39(1H，多重峰)，5.57(1H)芳-H 6.72(1H)，6.74(4H)；上述數(shù)據(jù)與文獻[古川宏Yakugaku Zasshi 1965；85(5)472][王嘉陵等中國中藥雜志1991；16(11)673-675][王嘉陵等中藥材1991；14(6)36-38]相符，故確認為洛土辛堿(Lotusine、蓮心季銨堿、蓮心單堿)，其化學結(jié)構(gòu)為
中文名為洛土辛堿、蓮心季銨堿、蓮心單堿英文名Lotusine化學名1-二甲基-6-羥基-7-甲氧基-10-芐基(對-羥基)四氫異喹啉；分于量313.47；分子式C19H23NO3
以本發(fā)明方法制取洛土辛堿，具有原料來源豐富、成本低、收得率高、優(yōu)質(zhì)——含量大于90％、適合于工業(yè)化生產(chǎn)等特點。
洛土辛堿藥理作用的實驗結(jié)果1.在離體和在體標本上，洛土辛及其甲基化衍生物(1-100μmol/L)有明顯的正性肌力作用且優(yōu)于西藥氨力農(nóng)(Amrinone，Am，PDE III抑制劑)和罌粟堿(Papavirine，非選擇性PDE抑制劑)，EC50可與西藥相當；2.洛土辛輕度延長心肌細胞動作電位時程，增加Ca++電流，對Ca++通道影響的動力學特點不同于Bay K 8644和異丙腎上腺素；3.洛土辛拮抗多種收縮血管藥作用，舒張血管作用強度相當于罌粟堿；4.洛土辛舒張陰莖海綿體血管且作用強度略優(yōu)于罌粟堿和Am。
5.洛土辛抑制PDE，提高血小板內(nèi)cAMP，cGMP含量。
結(jié)論洛土辛為PDE III(表明其有Ca++增敏作用)和/或V型抑制劑。
實驗及結(jié)果Lot對心肌收縮力的影響1.對豚鼠左心房及乳頭狀肌收縮力的影響在豚鼠左心房及乳頭狀肌標本上，Lot 1-300μmol/L可濃度依賴性地增加收縮力，3,300μmol/L分別使左心房收縮力增加19％和84％，使乳頭狀肌收縮力增加21％和91％。同樣實驗條件下，Am 1-300μmol/L也濃度依賴性地增加收縮力，3,300μmol/L分別使左心房收縮力增加9％和58％。表明Lot的作用明顯優(yōu)于Am。
表1洛土辛及氨力農(nóng)對豚鼠左心房及洛土辛豚鼠乳頭狀肌收縮力的影響(x±SD)，(n＝7～9)洛土辛(μmol/L)對照 1 31030100 300豚鼠左心房收縮力(mg) 445±95 495±140 530±135 590±105 645±120 771±141 823±199增加(％) 0 11±4 19±5 33±6 45±1473±1884±14GPla(n＝9)豚鼠乳頭狀肌收縮力(mg) 301±75 340±37 365±31 420±57 470±80 545±78 578±113增加(％) 0 9±4 21±5 39±7 56±1281±1491±15GPC(n＝7)氨力農(nóng)(μmol/L)
對照 1 3 1030100 300豚鼠左心房收縮力(mg) 421±81 432±89 459±96 501±98 589±101 629±108 657±114增加(％)0 3±39±419±840±9 49±1158±132.對大鼠左心房及貓乳頭狀肌收縮力的影響在大鼠左心房標本上，洛土辛1-300μmol/L可濃度依賴性地增加收縮力，3,300μmol/L分別使左心房收縮力增加23％和94％。在貓乳頭狀肌標本上，洛土辛1-300μmol/L同樣可濃度依賴性地增加收縮力，3,300μmol/L分別使收縮力增加21％和117％。
表2洛土辛對大鼠左心房(上)及貓乳頭狀肌(下)收縮力的影響(x±SD)，(n＝6～7)洛土辛(μmol/L)對照 1 310 30 100 300大鼠左心房收縮力(mg)487±98 514±91 602±112 693±154 756±196 875±238 945±243增加(％) 05.5±4 23±542±655±11 80±18 94±12貓乳頭狀肌增加(％) 0 7±5 13±621±11 47±13 84±22 117±32氨力農(nóng)(μmol/L)對照 1 310 30 100大鼠左心房收縮力(mg)463±31 471±33 490±45 511±61 562±57 616±64增加(％) 0 2±26±4 11±821±7 33±9Ratln(n＝6)貓乳頭狀肌收縮力(mg)352±44 363±37 387±43 412±41 472±48 528±61增加(％) 0 3±410±417±734±11 51±12Ratc(n＝6)3.對利血平化豚鼠狀肌收縮力的影響在預(yù)先經(jīng)利血平化處理[9](5mg/kg，腹腔注射，24h后制備標本)或未經(jīng)利血平化處理豚鼠乳頭狀肌標本上，洛土辛1-100μmol/L均可濃度依賴性地增加收縮力。但與未經(jīng)利血平化處理組相比較，洛土辛增加利血平化豚鼠狀肌收縮力的劑量—效應(yīng)曲線明顯右移并壓低；100μmol/L洛土辛增加肌力作用，由未經(jīng)利血平化處理組的83％降至經(jīng)利血平化處理組的51％。提示洛土辛正性肌力作用與去甲腎上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)。同樣實驗條件下，罌粟堿1-100μmol/L可雙相性地影響未經(jīng)或經(jīng)利血平化處理的豚鼠乳頭狀肌收縮力，使前者的量效應(yīng)曲線呈現(xiàn)先升高后降低，而使后者呈現(xiàn)先略升而后抑制，甚至低于給藥前水平。表3洛土辛對利血平化豚鼠狀肌收縮力的影響(x±SD，n＝8)未經(jīng)利血平化經(jīng)利血平化藥物 收縮力 增加 收縮力 增加(μmol/L) (mg) (Δ％) (mg)(Δ％)洛土辛0 209±48 0 233±56010 270±50 29 252±60830 318±90 52 294±6126100382±63 83 353±7851罌粟堿0 230±56 0 218±40010 274±81 19 224±30330 282±80 23 245±8612186±68 -154.洛土辛正性肌力作用的動物種屬選擇性比較比較Lot正性肌力作用可見，30μmol/L Lot分別使豚鼠、大鼠及家兔左心房收縮力增加45％、55％和51％；分別使豚鼠、大鼠及貓乳頭狀肌收縮力增加56％、53％和47％。表明Lot正性肌力作用并無明顯地動物種屬選擇性。
表4洛土辛30(μmol/L)正性肌力作用動物種屬選擇性比較(n＝5～9，x±SD)標本 肌力增加(％)豚鼠左心房 45±14
大鼠左心房 55±11家兔左心房 51±18豚鼠乳頭肌 56±12大鼠乳頭肌 53±13貓乳頭肌47±135.洛土辛對氨力農(nóng)、罌粟堿、Lema(Lemakalim，雷馬卡林)、異丙腎上腺素正肌作用的影響及與普萘洛爾的相互作用在豚鼠左心房及乳頭狀肌標本上，氨力農(nóng)30μmol/L略增加心肌收縮力，在此基礎(chǔ)上再給予洛土辛30μmol/L，心肌收縮力的增加明顯高與單用氨力農(nóng)或洛土辛組，提示兩者有相加作用。同樣，在豚鼠左心房肌標本上，在預(yù)先用罌粟堿30μmol/L處理，再給予洛土辛30μmol/L，心肌收縮力明顯增高。
在豚鼠左心房標本上，預(yù)先用Lama 10μmol/L可使肌力明顯下降，再給予洛土辛100μmol/L可翻轉(zhuǎn)Lama的負肌作用為正肌作用。
在豚鼠左心房標本上，預(yù)先用洛土辛30μmol/L處理，再給予異丙腎上腺素，制作濃度—效應(yīng)曲線。洛土辛略使異丙腎上腺素濃度—效應(yīng)曲線左移，最大反應(yīng)不變。
在預(yù)先用普萘洛爾0.1μmol/L處理的豚鼠左心房標本上，再給予洛土辛，普萘洛爾可顯著拮抗或取消洛土辛的正肌作用。表5罌粟堿、氨力農(nóng)、Lama對洛土辛正肌作用的影響(n＝6～9，x±SD)藥物(μmol/L) 收縮力(mg) 增加(％)0431±105 0罌粟堿 30 564±165 31罌粟堿±洛土辛735±175 710420±92 0氨力農(nóng) 30 589±108 40氨力農(nóng)+洛土辛 773±139 830413±87 0Lama 30 302±79 -27Lama+洛土辛100528±102 +28
6.刺激頻率對洛土辛正肌作用的影響在豚鼠左心房標本上，Bay K 8644 10nmol/L正性肌力作用隨刺激頻率(0.25-2Hz)的增快而增加，呈頻率依賴性[10]。而洛土辛100μmol/L正肌作用僅在低頻率刺激時呈上升趨勢，高頻率刺激時卻下降趨勢。在豚鼠乳頭狀肌標本上也可見類似現(xiàn)象。
7.洛土辛對右心房自搏頻率的影響在豚鼠及大鼠右心房標本上，洛土辛1-300μmol/L略增快右心房自搏頻率，但無顯著性意義。Res化豚鼠右心房標本上，Lot仍不增快右心房自搏頻率(n＝5，p＞0.05)。表6洛土辛右心房自搏頻率的影響(n＝5～7，X±SD)心率(次/分鐘)洛土辛(μmol/L 豚鼠 大鼠0192±21179±111188±20177±93187±22177±810190±17178±730193±18180±5100192±18179±10300195±20183±128.洛土辛離體心臟功能的影響在離體工作心臟標本上，經(jīng)左心房灌流插管，單劑量(10mmol/L，0.2ml)給予洛土辛(終濃度為20μmol/L)，0.5min后，左心室壓(LVP)、左心室收縮速率(+dp/dt)及左心室舒張速率(-dp/dt)增加(-dp/dt負值加大)；冠脈流量(CO)及主動脈流量(MAO)略增而心率不變(p＞0.05)。
權(quán)利要求
1.一種從蓮子心中提取洛土辛堿的制備方法，包括(1)以蓮子心為原料，制取水溶性總生物堿；其特征在于，(2)分離水溶性總生物堿，得粗品總堿結(jié)晶；(3)以分步結(jié)晶法分離洛土辛堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從蓮子心中提取洛土辛堿的制備方法，其特征在于所說的以蓮子心為原料，制取水溶性總生物堿的方法是將蓮子心生藥以甲醇浸泡3次，回收甲醇得總堿浸膏，以1％鹽酸水溶液調(diào)pH至2-3，過濾，得酸性總堿溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從蓮子心中提取洛土辛堿的制備方法，其特征在于所說的分離水溶性總生物堿的方法是將所制得的酸性總堿溶液以濃氨水調(diào)pH至9-10，得堿性總堿沉淀、懸液，再以氯仿提取5次，保留堿性水層，調(diào)pH至2-3，加入飽和雷氏銨鹽，充分沉淀，濾取沉淀物，風干，溶于丙酮，濾除不溶物；丙酮液中加入飽和硫酸銀液，充分沉淀，濾除沉淀物，回收丙酮，減壓濃縮至糖漿狀，析晶，得粗品總堿結(jié)晶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從蓮子心中提取洛土辛堿的制備方法，其特征在于所說的以分步結(jié)晶法分離洛土辛堿的方法是將分離水溶性總生物堿制得的粗品總堿結(jié)晶分別于無水乙醇和水中反復結(jié)晶，乙醇中分步結(jié)晶，得白色方晶，水溶液中加入飽和氯化鋇，濾除沉淀，無水乙醇中重結(jié)晶得洛土辛鹽酸鹽。
全文摘要
從蓮子心中提取洛土辛的制備方法,將蓮子心Na
文檔編號C07D215/00GK1257069SQ9812170
公開日2000年6月21日 申請日期1998年12月14日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月14日
發(fā)明者王嘉陵 申請人:同濟醫(yī)科大學