一種蛹蟲草腺苷的提取方法
【專利摘要】一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為：（1）超微粉碎：（2）蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取、酶解提取。本發(fā)明的一種蛹蟲草腺苷的提取方法，應(yīng)用酶解技術(shù)破除了蛹蟲草堅硬的細胞壁，有利于細胞內(nèi)容物的溶出，有利于提取過程的順利進行，在保證腺苷的生物活性的同時，提高腺苷的提職率，減少浪費；應(yīng)用該方法提取得到的腺苷，不僅提取率高，易于后續(xù)的分離純化，而且易于吸收，能夠充分發(fā)揮腺苷在體內(nèi)的功效。
【專利說明】一種蛹蟲草腺苷的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物提取【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種蛹蟲草腺苷的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]蛹蟲草又名北冬蟲夏草、北蟲草等，與冬蟲夏草同屬異種，是蟲草屬的模式種，屬于子囊菌亞門蟲草屬，是其寄生在昆蟲綱鱗翅目夜蛾科昆蟲蛹體上所長出的子座與僵死蛹體的復(fù)合體。多年的研宄表明蛹蟲草具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗感染等多種藥理活性，廣泛用于腫瘤、免疫功能低下、包括艾滋病毒感染等多種疾病中。
[0003]腺苷是一種內(nèi)源性嘌呤核苷酸，具有廣泛的生理活性，蛹蟲草中腺苷的含量與冬蟲夏草相似，甚至更高，多在0.01%以上。至今已從蟲草及發(fā)酵菌絲中分離鑒定有11個核苷類化合物，包括腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶、尿苷、鳥嘌呤、鳥苷、次黃嘌呤、次黃嘌呤核苷、胸腺嘧啶、胸腺嘧啶脫氧核苷及尿嘧啶脫氧核苷等。蟲草素是蛹蟲草中主要活性成分，也是第一個從真菌中分離出來的核苷類抗生素，又稱蟲草菌素、蛹蟲草菌素。蟲草素的分子式為C10H13N503，相對分子質(zhì)量為251。蛹蟲草是在目前已報道的300余種蟲草菌中唯一能大量形成蟲草素的菌種。天然冬蟲夏草或發(fā)酵菌絲體中蟲草素不存在或極其微量。目前國內(nèi)外針對其結(jié)構(gòu)及藥理作用已經(jīng)進行了詳細的研宄，研宄證明蟲草素具有多種生物活性，主要表現(xiàn)在抗菌、抗炎、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等幾個方面。其中蟲草素對腫瘤的抑制作用一直是廣大科學家們關(guān)注的熱點。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種蛹蟲草腺苷的提取方法。
[0005]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為:
(1)超微粉碎:稱取200g烘干的蛹蟲草子實體，放入超微粉碎機中粉碎5-15分鐘；
(2)蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取、酶解提取，包括:
a、按照料液比，每g物料加入Iml的提取劑，為6~25m/v的比例加入PH值為4.0-6.0的鹽酸溶液，稱取質(zhì)量體積比為0.5-1%的破壁酶，于37°C條件下保溫10~30min，然后于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風干；
b、再按照料液比，每g物料加入Iml的提取劑，為6~25m/v的比例向上述PH值為4.0-6.0的鹽酸溶液提取，結(jié)束后自然風干的沉淀中加入pH為6~7.5，濃度為0.lmol/L的磷酸鈉緩沖溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風干收集上清液，沉淀自然風干；
C、最后向自然風干的沉淀中加入6~30倍體積，每g物料加入Iml的提取劑，PH值為8.0-9.0氫氧化鈉堿性溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，棄去沉淀； d、合并三次上清液，過0.45um的水系膜后取10ul加超純水稀釋至100ul，過0.22um的水系膜后，于高效液相色譜儀中測定腺苷的含量，得到蛹蟲草腺苷。
[0006]本發(fā)明具有以下有益效果
1.該方法模擬人體胃腸道酸堿環(huán)境進行蛹蟲草腺苷的提取，所獲得的腺苷易于加工成各種類型的藥劑；在生產(chǎn)加工成口服液或其他類型的劑型之后，可確保蛹蟲草有效成分的直接吸收，減輕腸胃負擔；
2.該方法提取蛹蟲草腺苷含量高，腺苷的含量可達到每g原藥材提取得到2.825mg的量，最終活性成分的提取率可高達0.304%，比其他的常規(guī)提取方法提取率都高，且質(zhì)量可控，料損少，生產(chǎn)周期短，適合大規(guī)模生產(chǎn)，市場潛力巨大；
3.酶解技術(shù)破除了蛹蟲草堅硬的細胞壁，有利于細胞內(nèi)容物的溶出，有利于提取過程的順利進行，在保證腺苷的生物活性的同時，提高腺苷的提職率，減少浪費；
4.應(yīng)用該方法提取得到的腺苷，不僅提取率高，易于后續(xù)的分離純化，而且易于吸收，能夠充分發(fā)揮腺苷在體內(nèi)的功效。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為:
(I)超微粉碎:稱取200g烘干的蛹蟲草子實體，放入超微粉碎機中粉碎10分鐘。
[0008](2)蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取加酶解提取，包括:
a、按照料液比(每g物料加入Iml的提取劑)為15(m/v)的比例加入PH值為5.0的鹽酸溶液，稱取質(zhì)量體積比為0.5%的破壁酶，于37°C條件下保溫20min，然后于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風干；
b、再按照料液比(每g物料加入Iml的提取劑)為15(m/v)的比例向上述PH值為5.0的鹽酸溶液提取。結(jié)束后自然風干的沉淀中加入PH為7.0，濃度為0.lmol/L的磷酸鈉緩沖溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風干收集上清液，沉淀自然風干；
C、最后向自然風干的沉淀中加入15倍體積(每g物料加入Iml的提取劑)的PH值為8.5氫氧化鈉堿性溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，棄去沉淀；
d、合并三次上清液，過0.45um的水系膜后取10ul加超純水稀釋至100ul，過0.22um的水系膜后于高效液相色譜儀中測定腺苷的含量。
[0009]腺苷的含量可達到每g原藥材提取得到2.265mg的量，最終活性成分的提取率可高達 0.272%。
[0010]實施例2
一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為:
(I)超微粉碎:稱取200g烘干的蛹蟲草子實體，放入超微粉碎機中粉碎15分鐘。
[0011](2)蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取加酶解提取，包括:
a、按照料液比(每g物料加入Iml的提取劑)為10 (m/v)的比例加入PH值為5.0的鹽酸溶液，稱取質(zhì)量體積比為1%的破壁酶，于37°C條件下保溫20min，然后于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風干；
b、再按照料液比(每g物料加入Iml的提取劑)為10 (m/v)的比例向上述PH值為
4.0-6.0的鹽酸溶液提取。結(jié)束后自然風干的沉淀中加入pH為7.0，濃度為0.lmol/L的磷酸鈉緩沖溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風干收集上清液，沉淀自然風干；
C、最后向自然風干的沉淀中加入10倍體積(每g物料加入Iml的提取劑)的PH值為8.5氫氧化鈉堿性溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，棄去沉淀；
d、合并三次上清液，過0.45um的水系膜后取10ul加超純水稀釋至100ul，過0.22um的水系膜后于高效液相色譜儀中測定腺苷的含量。
[0012]腺苷的含量可達到每g原藥材提取得到2.825mg的量，最終活性成分的提取率可高達 0.304%。
【權(quán)利要求】
1.一種蛹蟲草腺苷的提取方法，其特征在于:其提取方法的具體步驟為: (1)超微粉碎:稱取200g烘干的蛹蟲草子實體，放入超微粉碎機中粉碎5-15分鐘； (2)蛹蟲草腺苷的超聲仿生提取、酶解提取，包括: a、按照料液比，每g物料加入Iml的提取劑，為6~25m/v的比例加入PH值為4.0-6.0的鹽酸溶液，稱取質(zhì)量體積比為0.5-1%的破壁酶，于37°C條件下保溫10~30min，然后于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風干； b、再按照料液比，每g物料加入Iml的提取劑，為6~25m/v的比例向上述PH值為.4.0-6.0的鹽酸溶液提取，結(jié)束后自然風干的沉淀中加入pH為6~7.5，濃度為0.lmol/L的磷酸鈉緩沖溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風干收集上清液，沉淀自然風干； C、最后向自然風干的沉淀中加入6~30倍體積，每g物料加入Iml的提取劑，PH值為8.0-9.0氫氧化鈉堿性溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱1~5鐘之后，以.8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，棄去沉淀； d、合并三次上清液，過0.45um的水系膜后取10ul加超純水稀釋至100ul，過0.22um的水系膜后，于高效液相色譜儀中測定腺苷的含量，得到蛹蟲草腺苷。
【文檔編號】C07H19/167GK104478978SQ201410732004
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月6日
【發(fā)明者】陳喜軍 申請人:黑龍江眾生生物工程有限公司