一種利用高速逆流色譜分離純化制備哈巴俄苷和斬龍劍苷a的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用高速逆流色譜分離純化制備哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法，將玄參藥材粉碎、乙醇提取后，經(jīng)大孔吸附樹脂富集得到粗提物，粗提物進行高速逆流色譜分離，以體積比為1-5:5-10:1-10的溶劑A、溶劑B、溶劑C組成高速逆流溶劑體系，溶劑A為甲醇、乙醇、正丁醇或異丁醇，溶劑B為乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸正丁酯，溶劑C為水，上相為固定相，下相為流動相，分別制得哈巴俄苷、斬龍劍苷A。本發(fā)明采用采用高速逆流色譜法制備，不存在不可逆吸附，避免了樣品的損耗，具有分離效果好，溶劑用量少，無污染，高效、快速的特點。
【專利說明】一種利用高速逆流色譜分離純化制備哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法
(-)【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物分離領域，涉及一種分離純化哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法，尤其涉及一種利用高速逆流色譜分離純化高純度哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法。
(二)【背景技術】
[0002]玄參為玄參科植物玄參Scrophularia ningpoensis Hemsl的干燥根。中醫(yī)認為玄參味甘、苦、咸，其性微寒，具有滋陰涼血、瀉火解毒等功效，一般用于熱病煩躁、發(fā)斑、夜寐不寧，自汗盜汗，喉嚨腫痛等癥，為臨床常用中藥。
[0003]現(xiàn)代醫(yī)學表明，玄參中含萜類、苷類、生物堿等成分，具有抗炎、抗腫瘤、保肝作用。
[0004]哈巴俄苷為環(huán)烯醚萜類物質(zhì)，分子式C2tlH22O8，淡黃色粉末，熔點189_190°C，分子結
構式如下:
[0005]
【權利要求】
1.一種利用高速逆流色譜分離純化制備哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法，其特征在于所述方法包括以下步驟: (O將玄參藥材粉碎成粗粉，加入體積分數(shù)10%-95%的乙醇溶劑中，加熱至回流提取.1-3次，提取液趁熱過濾，冷卻，濾液減壓除去溶劑，得到乙醇提取物； (2)哈巴俄苷、斬龍劍苷A的富集:將步驟(1)的乙醇提取物加入填充有大孔吸附樹脂的色譜柱中，用水和甲醇或乙醇的混合溶劑梯度洗脫，收集含有哈巴俄苷、斬龍劍苷A的洗脫液，減壓除去溶劑，干燥、得到哈巴俄苷、斬龍劍苷A混合粗提物； (3)哈巴俄苷、斬龍劍苷A的純化:將哈巴俄苷、斬龍劍苷A混合粗提物進行高速逆流色譜分離，以體積比為1-5:5-10:1-10的溶劑A、溶劑B、溶劑C組成高速逆流溶劑體系，所述溶劑A為甲醇、乙醇、正丁醇或異丁醇，所述溶劑B為乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸正丁酯，所述溶劑C為水，將所述高速逆流溶劑體系混合充分后靜置，按上下兩相分開，取上相為固定相，下相為流動相，將固定相充滿高速逆流色譜儀的多層線圈分離柱，設定高速逆流色譜儀，在500~1000r/min轉(zhuǎn)速下，以0.5~5ml/min的流速注入流動相，以波長190_380nm的紫外檢測器檢測，當明顯有流動相流出時，取哈巴俄苷、斬龍劍苷A混合粗提物，用上相、下相體積比1:1的混合溶劑溶解后進樣，根據(jù)紫外檢測器光譜圖的峰形分別收集對應流出液，濃縮、干燥，分別制得哈巴俄苷、斬龍劍苷A。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中，乙醇溶劑的體積用量以粗粉的質(zhì)量計為3~10L/kg，每次回流提取的時間為30-60min，提取次數(shù)為1_3次。
3.如權利 要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中，所述乙醇溶劑為體積分數(shù).50%的乙醇溶劑。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中，所述大孔吸附樹脂為非極性、弱極性或中極性的大孔吸附樹脂。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中，所述大孔吸附樹脂為D101、AB-8或DM301大孔吸附樹脂。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中，所述梯度洗脫條件為先用.2-6倍柱體積的水洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分數(shù)10%-30%乙醇或甲醇的水溶液洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分數(shù)30%-50%乙醇或甲醇水溶液洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分數(shù)40%-70%乙醇或甲醇水溶液洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分數(shù)60%-95%乙醇或甲醇水溶液洗脫。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述溶劑A為正丁醇，所述溶劑B為乙酸乙酯。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述溶劑A、溶劑B、溶劑C的體積比為1:9:10。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述高速逆流溶劑體系為體積比1:9:10的正丁醇-乙酸乙酯-水體系。
10.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述紫外檢測器的波長為.210 ~254nm。
【文檔編號】C07H1/08GK103880895SQ201410093815
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月14日 優(yōu)先權日:2014年3月14日
【發(fā)明者】李行諾, 童勝強, 顏繼忠, 張文強 申請人:浙江工業(yè)大學