一種從尿液中制備人血白蛋白的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從尿液中制備人血白蛋白的方法。收集已吸附尿蛋白的樹脂，進(jìn)行清洗、解吸處理，收集洗脫峰，超濾濃縮，調(diào)節(jié)pH和電導(dǎo)，經(jīng)過金屬螯合親和層析、疏水層析、陰離子交換層析，制備人血白蛋白。本方法成本低，收率高，無免疫原性，質(zhì)量穩(wěn)定，適合大規(guī)模生產(chǎn)操作，為白蛋白的來源開辟了一條全新的渠道。
【專利說明】一種從尿液中制備人血白蛋白的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及人血白蛋白的制造領(lǐng)域，尤其涉及一種從尿液中制備人血白蛋白的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人血白蛋白(Human Serum Albumin,HSA)是人體血液中最重要的一種功能性蛋白質(zhì)，其主要生理功能為維持血液滲透壓，結(jié)合并運(yùn)輸小分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和藥物。HSA是目前用量最大的一種蛋白藥物，臨床上用于治療低蛋白血癥、慢性腎炎、肝炎、肝硬化和晚期惡性腫瘤等疾病，此外，人血白蛋白還用作賦形劑和穩(wěn)定劑、生產(chǎn)疫苗的免疫佐劑、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基的組分等。
[0003]人血白蛋白主要來源于血漿，據(jù)2012年市場(chǎng)統(tǒng)計(jì)資料顯示，全球每年人血白蛋白需求量達(dá)600噸以上，除美國(guó)外，其他國(guó)家大多數(shù)需要依靠部分進(jìn)口，以滿足需求。目前，我國(guó)的年需求量約為170噸左右，其中臨床用量120噸左右，疫苗生產(chǎn)企業(yè)用量約40噸左右，隨著我國(guó)疫苗需求量的增加，培養(yǎng)基級(jí)白蛋白用量迅速擴(kuò)大，預(yù)計(jì)未來白蛋白市場(chǎng)需求將升至250噸以上，由于我國(guó)血漿供給的制約等因素，市場(chǎng)缺口非常大，因此，進(jìn)一步擴(kuò)展白蛋白的來源成為業(yè)界亟待 解決的問題。目前，白蛋白的基因工程產(chǎn)品取得了較大的進(jìn)展，EP0612761、EP0570916、US6638740B1等均公開了純化重組人血白蛋白的方法，但這些方法制得的白蛋白容易殘留微量異源蛋白引起過敏等副反應(yīng)，存在重組白蛋白生理功能不確定的缺陷容易引起不可知隱患，因此其應(yīng)用受到嚴(yán)重的限制。
[0004]資料顯示，人尿中也含有白蛋白，其結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)與人血白蛋白完全一致(劉蘭英等，1984，吉林大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào)，122-126)，因此人尿來源的白蛋白若能得到開發(fā)利用，可在一定程度上替代血漿來源的白蛋白，從而緩解白蛋白市場(chǎng)的緊張局面。
[0005]本發(fā)明以中國(guó)專利ZL201010106302.9為基礎(chǔ)，通過樹脂在線吸附富集白蛋白等尿蛋白，并通過應(yīng)用現(xiàn)代層析技術(shù)成功實(shí)現(xiàn)白蛋白的純化，成本低，收率高，無免疫原性，質(zhì)量穩(wěn)定，適合大規(guī)模生產(chǎn)操作，為白蛋白的來源開辟了一條全新的渠道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種從尿液中制備人血白蛋白的方法，成本低，收率高，無免疫原性，SDS-PAGE顯示為單一條帶，HPLC顯示不含多聚體，質(zhì)量穩(wěn)定，適合大規(guī)模生產(chǎn)操作，為白蛋白的來源開辟了一條全新的渠道。
[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明從尿液中制備人血白蛋白的方法技術(shù)方案是:
一種從尿液中制備人血白蛋白的方法，收集已吸附尿蛋白的樹脂，進(jìn)行清洗處理，還包括如下步驟:
a)尿蛋白解吸附，得到尿蛋白濃縮液；
b)采用平衡液平衡好的金屬螯合親和層析柱層析，沖洗液洗脫收集洗脫峰；
c)采用平衡液平衡好的陰離子層析柱層析，上樣上一步的洗脫峰，沖洗液洗脫收集洗脫峰；
d)采用平衡液平衡好的疏水層析柱層析，上樣上一步的洗脫峰，沖洗液洗脫收集洗脫
峰；
e)采用平衡液平衡好的陰離子交換層析，上樣上一步的洗脫峰，沖洗液洗脫收集洗脫峰，得到人血白蛋白。
[0008]步驟a)利用0.5 — 1.5M的NaCl溶液進(jìn)行尿蛋白的解吸附。
[0009]步驟d)和步驟e)之間增加一個(gè)去病毒步驟，調(diào)節(jié)步驟d)中的洗脫液蛋白質(zhì)濃度至20% - 25%，加入辛酸鈉作為保護(hù)劑，進(jìn)行60°C加熱處理10小時(shí)。
[0010]步驟b)中金屬螯合親和層析柱的螯合金屬離子是Cu2+、Zn2+、Ni2+、Fe3+中的任意一種。優(yōu)選Cu2+。
[0011]步驟b)中尿蛋白濃縮液上金屬螯合親和層析柱之前超濾濃縮，調(diào)節(jié)PH4 —8，電導(dǎo)0.5 - 10mS/cm，平衡液為0.02 一 0.2M醋酸鹽或磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.2 — 2.0M,洗脫液為0.02 - 0.2M磷酸鹽溶液，0.5 - 1.5M NH4Cl, pH6.0 — 8.4。平衡液優(yōu)選0.02M醋酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.5M，洗脫液優(yōu)選配0.02M磷酸鹽，1.0M NH4Cl, pH8.0。
[0012]在洗脫之前加入沖洗步驟，用pH5.0-8.0，NH4Cl濃度0.5M的沖洗液沖洗金屬螯合親和層析柱，所述的沖洗液緩沖介質(zhì)為0.02 - 0.2M磷酸鹽或者醋酸鹽。沖洗液優(yōu)選0.02M 磷酸鹽，0.2M NH4Cl, pH6.0。
[0013]步驟c)中的陰離子層析柱平衡液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，PH5 - 8 ;洗脫液為0.05 - 1.0M磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，pH4 — 8。平衡液優(yōu)選0.02M磷酸鹽緩沖液，PH6.0，洗脫液優(yōu)選0.5M醋酸鹽緩沖液，pH5.0。
[0014]步驟d)洗脫峰上疏水層析柱之前對(duì)洗脫峰進(jìn)行超濾濃縮液調(diào)節(jié)pH和電導(dǎo)，PH6 -9，電導(dǎo) 5.0 — IOmS/Cm0
[0015]步驟d)中的疏水層析柱平衡液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液，(NH4) 2S04濃度為0.5 - 2.0M，pH6 — 9，洗脫液為 0.02 — 0.2M 磷酸鹽緩沖液，(NH4)2SO4 濃度為 0.2 - 1.0M,PH6 - 9。平衡液優(yōu)選0.02M磷酸鹽緩沖液，(NH4)2SO4濃度為1.5M，pH7.0，洗脫液優(yōu)選0.02M磷酸鹽緩沖液，(NH4) 2S04濃度為0.5M，pH7.0。
[0016步驟e)洗脫峰上陰離子交換柱之前對(duì)洗脫峰進(jìn)行超濾濃縮，調(diào)節(jié)pH6 — 9，電導(dǎo)0.5 — 5.0mS/cm。
[0017]步驟e)中的陰離子交換層析柱平衡液為0.02 一 0.2M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.1 — 1.0M, pH6 - 9 ;洗脫液為0.02 一 0.2M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.5 — 2.0M,pH6 — 9。平衡液優(yōu)選0.02M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.2M，pH7.0，洗脫液優(yōu)選0.02M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為1.0M, ρΗ7.0。
[0018]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明純化的白蛋白與傳統(tǒng)cohn法生產(chǎn)的人血白蛋白理化性質(zhì)、生物學(xué)性質(zhì)完全一
致；
純?nèi)嗽葱援a(chǎn)品，無異源蛋白污染，更安全可靠；
本發(fā)明白蛋白產(chǎn)品幾乎不含多聚體，控制了內(nèi)毒素含量，提高了白蛋白的穩(wěn)定性，純度比cohn法制得血衆(zhòng)白蛋白聞,可達(dá)99%以上，廣品各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)；本發(fā)明利用在線吸附法可富集多種尿蛋白，并通過與烏司他丁、人尿激肽原酶等尿蛋白進(jìn)行聯(lián)產(chǎn)，大幅度降低成本，使其更加具有產(chǎn)業(yè)化基礎(chǔ)；
本發(fā)明操作方便，適用于大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1為本發(fā)明步驟實(shí)施流程圖。
[0020]圖2為本發(fā)明制得的白蛋白純品SDS-PAGE圖。
[0021 ] 圖3為本發(fā)明制得的白蛋白純品HPLC圖。
[0022]圖4為市面上在售的人血白蛋白藥品肽圖。
[0023]圖5為本發(fā)明制得的白蛋白純品肽圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施方式僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。
[0025]一種從尿液中制備人血白蛋白的方法，收集已吸附尿蛋白的樹脂，進(jìn)行清洗、解吸處理。
[0026]a)利用0.5 — 1.5M的NaCl溶液進(jìn)行尿蛋白的解吸附；
b)洗脫峰超濾濃縮后調(diào)節(jié)pH4 — 8,電導(dǎo)0.5 — 10mS/cm,上樣已平衡好的金屬螯合親和層析柱，平衡液為0.02 - 0.2M醋酸鹽或磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.2 — 2.0M，用pH5.0-8.0, NH4Cl濃度≤0.5M的沖洗液沖洗，所述的沖洗液緩沖介質(zhì)為0.02 一 0.2M磷酸鹽或者醋酸鹽；用0.02 - 0.2M磷酸鹽，0.5 - 1.5M NH4Cl, pH6.0 一 8.4洗脫液洗脫，收集洗脫峰；
c)洗脫峰超濾濃縮調(diào)節(jié)pH和電導(dǎo)，pH6— 9,電導(dǎo)0.2 — 2mS/cm,上樣陰離子交換柱，平衡液沖洗，洗脫液洗脫，收集洗脫峰，平衡液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，pH5 - 8 ;洗脫液為0.05 - 1.0M磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，pH4 — 8 ;
d)洗脫峰超濾濃縮，調(diào)節(jié)pH6— 9，電導(dǎo)5.0 — lOmS/cm，上樣疏水層析柱，平衡液沖洗，洗脫液洗脫，收集洗脫峰，平衡液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液，(NH4) 2S04濃度為0.5 一
2.0M，pH6 — 9，洗脫液為 0.02 — 0.2M 磷酸鹽緩沖液，(NH4)2SO4 濃度為 0.2 - 1.0M，pH6 —9 ；
e)洗脫峰超濾后調(diào)節(jié)pH6—9，電導(dǎo)0.5 — 5mS/cm，上陰離子交換層析柱，平衡液沖洗，洗脫液洗脫，收集洗脫峰，平衡液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.1 — 1.0M,PH6 - 9 ;洗脫液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.5 — 2.0M, pH6 — 9。
[0027]步驟d)和步驟e)之間增加一個(gè)去病毒步驟，調(diào)節(jié)步驟d)中的洗脫液蛋白質(zhì)濃度至20% - 25%，加入辛酸鈉作為保護(hù)劑，進(jìn)行60°C加熱病毒滅活處理10小時(shí)。
[0028]實(shí)施例1
a金屬螯合親和層析
收集吸附尿蛋白的樹脂100公斤，用飲用水沖洗干凈，裝柱；用0.5 M的NaCl進(jìn)行洗脫，收集洗脫峰，測(cè)得其中的白蛋白含量為5.60g。
[0029]用截留分子量30K的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，將超濾濃縮液調(diào)節(jié)pH至4.0，電導(dǎo)至0.5mS/cm,上已經(jīng)平衡好的金屬離子為Cu2+的金屬螯合親和層析柱(Chelatingsepharose FF);再用平衡液(平衡液配方:0.2M醋酸鹽緩沖液，2.0MNaCl, pH4.0)沖洗金屬螯合親和層析柱，收集上樣穿透液和沖洗穿透液，用0.2M的磷酸鹽緩沖液，0.1M氯化銨(pH5.0)沖洗，用0.2M磷酸鹽，0.5M氯化銨(pH6.0)洗脫金屬螯合親和層析柱，收集洗脫峰(A 液)。
[0030]b陰離子交換層析
A液上樣DEAE-瓊脂糖凝膠柱，結(jié)合緩沖濃度為0.2M磷酸鹽緩沖液，pH為8.0。洗脫液為1.0M磷酸鹽緩沖液，pH為8.0。
[0031]其中，步驟a中A液調(diào)節(jié)pH和電導(dǎo),pH調(diào)至8.0,電導(dǎo)1.0mS/cm,上陰離子交換柱，平衡液沖洗，洗脫液洗脫，收集洗脫峰(B液)。
[0032]c疏水層析
疏水介質(zhì)為Phenyl—瓊脂糖凝膠柱，平衡液平衡(平衡液配方:0.02M磷酸鹽緩沖液，
0.5M硫酸銨，pH6.0)，將B液調(diào)節(jié)pH至6.0,電導(dǎo)調(diào)至5.0mS/cm，上疏水柱，平衡液沖洗，洗脫液洗脫(洗脫液配方:0.02M磷酸鹽緩沖液，0.2M硫酸銨，pH6.0)，收集洗脫峰，超濾得溶液C。
[0033]d陰離子交換層析
溶液C超濾后調(diào)節(jié)蛋白濃度為20%，加入0.01M辛酸鈉，60°C加熱處理10小時(shí)，調(diào)節(jié)電導(dǎo)至1.0mS/cm，pH至6.0，上樣已平衡好的陰離子交換柱(平衡液配方:0.02M磷酸鹽緩沖液，0.1MNaCl, pH6.0)，平衡液沖洗，洗脫液洗脫(洗脫液配方:0.02M磷酸鹽緩沖液，
`0.5MNaCl, pH6.0)，收集洗脫液，測(cè)得白蛋白總含量為3.48g，純度高于96%。
[0034]實(shí)施例2:
a金屬螯合親和層析
收集吸附尿蛋白的樹脂100公斤，用飲用水沖洗干凈，裝柱；用1.5M的NaCl進(jìn)行洗脫，收集洗脫峰，測(cè)得其中的白蛋白含量為4.Sg。
[0035]用截留分子量30K的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，將超濾濃縮液調(diào)節(jié)pH至8.0，電導(dǎo)至I OmS/cm,上已經(jīng)平衡好的金屬離子為Zn2+的金屬螯合親和層析柱(Chelating sepharoseFF)，再用平衡液(平衡液配方:0.02 M磷酸鹽緩沖液，0.2MNaCl，pH8.0)沖洗金屬螯合親和層析柱，收集上樣穿透液和沖洗穿透液，用0.02M的磷酸鹽緩沖液，0.5M氯化銨(pH8.0)沖洗，用0.02M磷酸鹽，1.5M氯化銨(pH8.4)洗脫金屬螯合親和層析柱，收集洗脫峰(A液)。
[0036]b陰離子交換層析
以DEAE-瓊脂糖凝膠柱為例，對(duì)白蛋白的結(jié)合條件和洗脫條件進(jìn)行優(yōu)化。白蛋白的結(jié)合緩沖濃度為0.02M磷酸鹽緩沖液，pH為5.0。洗脫液為0.05M醋酸鹽緩沖液，pH為4.0。
[0037]步驟a中，A液調(diào)節(jié)pH和電導(dǎo)，pH調(diào)至5.0，電導(dǎo)0.2mS/cm,上陰離子交換柱，平衡液沖洗，洗脫液洗脫，收集洗脫峰(B液)。
[0038]c疏水層析
疏水層析介質(zhì)為Phenyl-瓊脂糖，平衡液平衡(平衡液配方:0.2M磷酸鹽緩沖液，2.0M硫酸銨，PH9.0)，將B液調(diào)節(jié)pH至9.0,電導(dǎo)調(diào)至lOmS/cm，上疏水柱，平衡液沖洗，洗脫液洗脫(洗脫液配方:0.2M磷酸鹽緩沖液，1.0M硫酸銨，pH9.0)，收集洗脫峰，超濾得溶液C。
[0039]d陰離子交換層析溶液C超濾后調(diào)節(jié)蛋白濃度為25%，加入0.01M辛酸鈉，60°C加熱處理10小時(shí)，調(diào)節(jié)電導(dǎo)至5.0mS/cm，pH至9.0，上樣已平衡好的陰離子交換柱(平衡液配方:0.2M磷酸鹽緩沖液，
1.0MNaCl, pH9.0)，平衡液沖洗，洗脫液洗脫(洗脫液配方:0.2M磷酸鹽緩沖液，2.0MNaCl,PH9.0)，收集洗脫峰，測(cè)得白蛋白總量為2.88g，純度高于98%。
[0040]實(shí)施例3:
a金屬螯合親和層析
收集吸附尿蛋白的樹脂5噸，用飲用水沖洗干凈，裝柱；用0.8 M的NaCl進(jìn)行洗脫，收集洗脫峰，測(cè)得其中的白蛋白含量為216.0Ogo
[0041]用截留分子量30K的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，將超濾濃縮液調(diào)節(jié)pH至6.0，電導(dǎo)至5.0mS/cm,上已經(jīng)平衡好的金屬離子為Cu2+的金屬螯合親和層析柱(Chelatingsepharose FF);再用平衡液(平衡液配方:0.1M磷酸鹽緩沖液，1.0MNaCl, pH6.0)沖洗金屬螯合親和層析柱，收集上樣穿透液和沖洗穿透液，用0.1M的磷酸鹽緩沖液，0.3M氯化銨(PH7.0)沖洗，用0.1M磷酸鹽，1.0M氯化銨(pH7.0)洗脫金屬螯合親和層析柱，收集洗脫峰(A 液)。
[0042]b陰離子交換層析
A液上樣DEAE-瓊脂糖凝 膠柱，結(jié)合緩沖濃度為0.1M磷酸鹽緩沖液，pH為7.0。洗脫液為0.5M磷酸鹽緩沖液，pH為6.0。
[0043]其中，步驟a中A液調(diào)節(jié)pH和電導(dǎo),pH調(diào)至7.0,電導(dǎo)2.0mS/cm,上陰離子交換柱，平衡液沖洗，洗脫液洗脫，收集洗脫峰(B液)。
[0044]c疏水層析
平衡液平衡Phenyl-瓊脂糖凝膠柱(平衡液配方:0.1M磷酸鹽緩沖液，1.5 M硫酸銨，PH7.0)，將B液調(diào)節(jié)pH至7.0，電導(dǎo)調(diào)至8.0mS/cm,上疏水柱，平衡液沖洗，洗脫液洗脫(洗脫液配方:0.1M磷酸鹽緩沖液，0.5M硫酸銨，pH7.0)，收集洗脫峰，超濾得溶液C。
[0045]d陰離子交換層析
溶液C超濾后調(diào)節(jié)蛋白濃度為20%，加入0.01M辛酸鈉，60°C加熱處理10小時(shí)，調(diào)節(jié)電導(dǎo)至0.5mS/cm，pH至7.0，上樣已平衡好的陰離子交換柱(平衡液配方:0.1M磷酸鹽緩沖液，
0.5MNaCl，pH7.0),平衡液沖洗，洗脫液洗脫(洗脫液配方:0.1M磷酸鹽緩沖液，1.2MNaCl，pH7.0),收集洗脫液，測(cè)得白蛋白總含量為136.59g，純度高于99%。
【權(quán)利要求】
1.一種從尿液中制備人血白蛋白的方法，收集已吸附尿蛋白的樹脂，進(jìn)行清洗處理，其特征在于，還包括如下步驟: a)尿蛋白解吸附，得到尿蛋白濃縮液； b)采用平衡液平衡好的金屬螯合親和層析柱層析，沖洗液洗脫收集洗脫峰； c)采用平衡液平衡好的陰離子層析柱層析，上樣上一步的洗脫峰，沖洗液洗脫收集洗脫峰； d)采用平衡液平衡好的疏水層析柱層析，上樣上一步的洗脫峰，沖洗液洗脫收集洗脫峰； e)采用平衡液平衡好的陰離子交換層析，上樣上一步的洗脫峰，沖洗液洗脫收集洗脫峰，得到人血白蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟a)利用0.5-1.5M的NaCl溶液進(jìn)行尿蛋白的解吸附。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟d)和步驟e)之間增加一個(gè)去病毒步驟，調(diào)節(jié)步驟d)中的洗脫液蛋白質(zhì)濃度至20% - 25%，加入辛酸鈉作為保護(hù)劑，進(jìn)行60°C加熱處理10小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟b)中金屬螯合親和層析柱的螯合金屬離子是Cu2+、Zn2+、Ni2+、Fe3+中的任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟b)中尿蛋白濃縮液上金屬螯合親和層析柱之前超濾濃縮，調(diào)節(jié)PH4 — 8，電導(dǎo)0.5 — lOmS/cm，平衡液為0.02 — 0.2M醋酸鹽或磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.2 — 2.0M，洗脫液為0.02 一 0.2M磷酸鹽溶液，0.5 - 1.5M NH4Cl, ρΗ6.0 - 8.4。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，在洗脫之前加入沖洗步驟，用pH5.0-8.0, NH4Cl濃度≤0.5Μ的沖洗液沖洗金屬螯合親和層析柱，所述的沖洗液緩沖介質(zhì)為0.02 - 0.2Μ磷酸鹽或者醋酸鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟c)中的陰離子層析柱平衡液為0.02 - 0.2Μ磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，ρΗ5 一 8 ;洗脫液為0.05 - 1.0M磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，ρΗ4 — 8。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟d)中的疏水層析柱平衡液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液，(NH4) 2S04濃度為0.5 — 2.0M，pH6 — 9，洗脫液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液，(NH4) 2S04濃度為0.2 — 1.0M, pH6 — 9。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟e)洗脫峰上陰離子交換柱之前對(duì)洗脫峰進(jìn)行超濾濃縮，調(diào)節(jié)PH6 — 9，電導(dǎo)0.5 — 5mS/cm。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟e)中的陰離子交換層析柱平衡液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.1 — 1.0M, pH6 - 9 ；洗脫液為0.02 - 0.2M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.5 — 2.0M, pH6 — 9。
【文檔編號(hào)】C07K14/765GK103694343SQ201310729720
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月26日
【發(fā)明者】苗丕渠, 侯曉彥, 池正昌, 沈小寧 申請(qǐng)人:揚(yáng)州艾迪生物科技有限公司