一種對可溶性抗體進(jìn)行純化的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種對可溶性抗體進(jìn)行純化的方法。具體步驟為：首先將優(yōu)化條件下誘導(dǎo)表達(dá)的600mL菌液離心后收集菌體，PBS重懸超聲裂解(80W，30min)，離心收集裂菌上清，經(jīng)ProteinL柱純化，10%SDS－PAGE監(jiān)測純化的效果；10%SDS－PAGE分離純化的抗人大腸癌P－gp21Fab抗體，電轉(zhuǎn)至PVDF膜;以HＲP標(biāo)記的山羊抗鼠IgG抗體震蕩孵育后;ECL化學(xué)發(fā)光顯影，定影；同時將人大腸癌P－gp21經(jīng)10%SDS－PAGE電泳，電轉(zhuǎn)至NC膜;純化的Fab抗體作一抗，AP標(biāo)記的馬抗小鼠IgG抗體為二抗，BCIP/NBT顯色。陰性對照為pComb3裂菌上清，陽性對照為抗Histag抗體。本發(fā)明的有益效果是，實驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，可以定性、定量分析，同時為后續(xù)展開的人源化提供依據(jù)和支持。
【專利說明】一種對可溶性抗體進(jìn)行純化的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生化的檢測方法，具體來說，是指一種對可溶性抗體進(jìn)行純化的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]化療是人民目前治療腫瘤尤其是惡性腫瘤的主要方法，在化療過程中出現(xiàn)的多藥耐藥是腫瘤化療的最主要障礙，其中可溶性抗體的過表達(dá)是引發(fā)腫瘤細(xì)胞的最主要原因。 目前用于腫瘤多藥耐藥性檢測和治療的大多為完整抗體，組織穿透能力差，在血液和非瘤組織的清除速度比較慢。本發(fā)明試圖探究一種構(gòu)建大腸癌抗體的原核表達(dá)載體，制備純化處具有一定生物活性的抗體，該抗體的篩選有望為大腸癌等腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性的檢測和治療提供新的選擇。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案:
一種對可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，首先將優(yōu)化條件下誘導(dǎo)表達(dá)的600 mL菌液離心后收集菌體，PBS重懸超聲裂解，離心收集裂菌上清，經(jīng)Protein L柱純化，10%SDS 一 PAGE監(jiān)測純化的效果；10% SDS — PAGE分離純化的抗人大腸癌P — gp21 Fab抗體，電轉(zhuǎn)至PVDF 膜；以H R P標(biāo)記的山羊抗鼠IgG抗體震蕩孵育后；ECL化學(xué)發(fā)光顯影，定影；同時將人大腸癌P — gp 21經(jīng)10%SDS - PAGE電泳，電轉(zhuǎn)至NC膜；純化的Fab抗體作一抗，AP標(biāo)記的馬抗小鼠IgG抗體為二抗，BCIP/NBT顯色。陰性對照為pComb3裂菌上清，陽性對照為抗 His tag 抗體。
[0004]本發(fā)明中，需要28°C表達(dá)8小時。
[0005]本發(fā)明中，PBS重懸超聲裂解時的條件為:80W，時間不少于30min。
[0006]本發(fā)明的有益效果是，實驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，可以定性、定量分析，同時為后續(xù)展開的人源化提供依據(jù)和支持。
【具體實施方式】
[0007]一種對可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，首先將優(yōu)化條件下誘導(dǎo)表達(dá)的600 mL菌液離心后收集菌體，PBS重懸超聲裂解(80W，30min)，離心收集裂菌上清，經(jīng)Protein L柱純化， 10%SDS - PAGE監(jiān)測純化的效果；10% SDS 一 PAGE分離純化的抗人大腸癌P — gp21 Fab抗體，電轉(zhuǎn)至PVDF膜；以H R P標(biāo)記的山羊抗鼠IgG抗體震蕩孵育后；ECL化學(xué)發(fā)光顯影，定影；同時將人大腸癌P — gp 21經(jīng)10%SDS - PAGE電泳，電轉(zhuǎn)至NC膜；純化的Fab抗體作一抗，AP標(biāo)記的馬抗小鼠IgG抗體為二抗，BCIP/NBT顯色。陰性對照為pComb3裂菌上清， 陽性對照為抗His tag抗體。需要28°C表達(dá)8小時；PBS重懸超聲裂解時的條件為:80W， 時間不少于30min。
[0008]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng) 域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種對可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，其特征在于，首先將優(yōu)化條件下誘導(dǎo)表達(dá)的 600 mL菌液離心后收集菌體，PBS重懸超聲裂解，離心收集裂菌上清，經(jīng)Protein L柱純化， 10%SDS - PAGE監(jiān)測純化的效果；10% SDS 一 PAGE分離純化的抗人大腸癌P — gp21 Fab抗體，電轉(zhuǎn)至PVDF膜；以H R P標(biāo)記的山羊抗鼠IgG抗體震蕩孵育后；ECL化學(xué)發(fā)光顯影， 定影；同時將人大腸癌P — gp 21經(jīng)10%SDS - PAGE電泳，電轉(zhuǎn)至NC膜；純化的Fab抗體作一抗，AP標(biāo)記的馬抗小鼠IgG抗體為二抗，BCIP/NBT顯色；陰性對照為pComb3裂菌上清， 陽性對照為抗His tag抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的一種對可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，其特征在于，需要28°C表達(dá)8小時。
3.如權(quán)利要求1所述的一種對可溶性抗體進(jìn)行純化的方法，其特征在于，PBS重懸超聲裂解時的條件為:80W，時間不少于30min。`
【文檔編號】C07K16/18GK103588877SQ201310519952
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】王景文 申請人:王景文