半胱氨酸蛋白酶抑制劑sn與癌胚抗原的聯(lián)合應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN（Cystatin?SN）與癌胚抗原（CEA）的聯(lián)合應用，具體為Cystatin?SN與CEA在制備檢測胃癌或胃腸間質(zhì)瘤標志物中的應用；本發(fā)明還公開了胃癌或胃腸間質(zhì)瘤標志物的捕獲劑和含有該捕獲劑的試劑盒，制得的試劑盒具有特異性好、靈敏度高等優(yōu)點，能夠用于胃癌或胃腸間質(zhì)瘤的早期診斷、治療過程中的療效評估以及治療后的轉(zhuǎn)移復發(fā)監(jiān)控，其診斷結(jié)果早于臨床癥狀。
【專利說明】半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與癌胚抗原的聯(lián)合應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學檢測領域，涉及半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與癌胚抗原的聯(lián)合應用。
【背景技術】
[0002]胃癌是嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，死亡率居各惡心腫瘤的第二位。目前全球每年新發(fā)胃癌九十三萬四千例，其中有近四十萬在中國，患病和死亡率均超過世界平均水平的兩倍。隨著胃鏡及現(xiàn)代影像學技術的應用，早期胃癌的診斷率已提高到百分之十左右，早期治療治愈率達到百分之九十五，但目前中國住院病例中超過九成是中晚期才就醫(yī)，五年生存率不到五分之一。提高胃癌的總體療效很大程度上取決于早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療及治療后的復發(fā)檢測，因此尋找高靈敏度和高特異性的腫瘤標志物對胃癌的早期診斷和復發(fā)監(jiān)控有重大意義。
[0003]據(jù)文獻報道胃腸間質(zhì)瘤(GIST)發(fā)病率為(1-2)/10萬，占胃腸道腫瘤的0.1%-0.3%。在美國每年新發(fā)病例為4000-6000例，年發(fā)病率約為(I 1-14.5)/100萬。發(fā)病高峰位于50-70歲之間人群，40歲以下少見，青少年罕見。GIST大部分發(fā)生于胃(50?70%)和小腸(20?30%)，結(jié)直腸約占10?20%，食道占O?6%，腸系膜、網(wǎng)膜及腹腔后罕見。GIST病人20-30%是惡性的，第一次就診時約有11?47%已有轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移主要在肝和腹腔。胃腸道間質(zhì)腫瘤中存在c-kit基因功能獲得性突變及c-kit蛋白產(chǎn)物⑶117的表達。研究發(fā)現(xiàn)GIST發(fā)生主要與C-KIT基因突變導致酪氨酸激酶持續(xù)活化使突變細胞增殖失控有關。80-88%GIST的發(fā)生源于C-KIT基因功能獲得性突變，即⑶117。據(jù)2008年中國胃腸間質(zhì)瘤診斷治療共識意見，病理診斷流程對疑似GIST應做組織免疫組化檢查，⑶117陽性則可確診，陰性再做C-KIT突變檢測，陽性為GIST，陰性再進行TOGFR基因檢測，陽性可確診，陰性可能為野生型GIST或其它腫瘤，如desmin檢測為陽性則可能為平滑肌瘤；S_100為陽性則考慮神經(jīng)鞘瘤，如二者陰性應進一步做DOGl免疫組化檢測，陽性則可確診GIST。因此，GIST病理確診程序繁復，而且GIST轉(zhuǎn)移復發(fā)率高，特別是沿活檢路徑，或手術時瘤體破潰等極易帶來種植轉(zhuǎn)移。因此，臨床迫切需要高靈敏度的血清檢測標志物來突破GIST診治瓶頸。
[0004]近年來，隨著對腫瘤發(fā)病機理研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)Cystatin家族作為組織蛋白酶主要是半胱氨酸蛋白酶的內(nèi)源性抑制劑，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起著非常重要的作用。研究結(jié)果顯示，Cystatin家族的幾個成員在不同腫瘤中的表達水平有所上升，例如Cystatin C在卵巢癌和頭頸部癌癥中的表達有不同水平的上升,stef in A在非小細胞肺癌中的表達水平有所增加，Cystatin F在多種腫瘤中的表達水平都有顯著增加，很可能是由于在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中需要組織蛋白酶的參與，先誘導其表達量增加，再激活機體本身的應激機制，導致Cystatin的表達量上升以抑制過盛的組織蛋白酶活性。但Cystatin的表達量并不與腫瘤的發(fā)展成正相關關系,例如在膠質(zhì)瘤中，Cystatin C的低表達意味著疾病的晚期，患者的生存期較短，且易于復發(fā)，這可能是到了腫瘤的后期階段，又會有一些其他的機制對Cystatin的水平進行調(diào)控，以促進腫瘤的進一步惡化。半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN (Cystatin SN)是人類Cystatin家族成員，由CSTl基因編碼，含141個氨基酸，分子中有兩個二硫鍵，分子量為16.4Kda,為典型的分泌蛋白，分布于多種體液和分泌物中，如眼淚、唾液、血清、血漿等。文獻報道，CSTl在胃癌組織中的表達量高于正常胃粘膜組織，在胃癌細胞系中的表達部位與胃癌組織較一致，且表達率隨細胞系的分化程度降低而降低；臨床資料分析表明，CSTl的表達與浸潤深度、遠處轉(zhuǎn)移以及TW分期相關；生存分析表明，CSTl表達陽性組的5年生存率顯著高于無表達組；Cox回歸分析表明，CSTl是一個獨立預后因子；從而提示CSTl可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮類似腫瘤抑制因子的作用。
[0005]CEA最初發(fā)現(xiàn)于結(jié)腸癌和胎兒腸組織中，故名癌胚抗原。CEA升高常見于大腸癌、胰腺癌、胃癌、小細胞肺癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌等。但吸煙、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特異性結(jié)腸炎等疾病，15%?53%的病人血清CEA也會升高，所以CEA不是惡性腫瘤的特異性標志，在診斷上只有輔助價值。CEA在胃癌患者血清中檢測的臨床意義是:(1)與進展期低分化腺癌相關-亦與腫瘤大小、漿膜面浸潤和淋巴轉(zhuǎn)移相關；(2)能介導腫瘤細胞與肝實質(zhì)接觸而提示肝轉(zhuǎn)移；(3)可與其它指標聯(lián)合應用，如與腹腔灌洗液中細胞學檢查聯(lián)合提示胃癌的腹膜復發(fā)、腹腔種植，但準確性較CA125差；(4)可與其它指標聯(lián)合應用評價胃癌的化療療效，如CEA水平下降范圍在50%以上或降至正常范圍并持續(xù)4周以上可作為治療有效指標；(5)其與預后的關系尚存在爭議，但多數(shù)結(jié)果認為，如治療后持續(xù)增高提示胃癌患者預后不良。但是，目前未見聯(lián)合Cystatin SN和CEA標志物檢測胃癌或胃腸間質(zhì)瘤的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN (Cystatin SN)和癌胚抗原(CEA)在制備診斷和預示胃癌或胃腸間質(zhì)瘤的標志物中的應用；本發(fā)明的目的之二在于提供胃癌或胃腸間質(zhì)瘤標志物的捕獲劑；本發(fā)明的目的之三在于提供含有上述捕獲劑的檢測試劑盒；本發(fā)明的目的之四在于提供試劑盒建立計算診斷和預示胃癌或胃腸間質(zhì)瘤閾值的方法。
[0007]為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案:
[0008]1.半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原在制備診斷和預示胃癌或胃腸間質(zhì)瘤的標志物中的應用，所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，所述癌胚抗原的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
[0009]優(yōu)選的，所述診斷和預示為診斷、療效評估或轉(zhuǎn)移復發(fā)監(jiān)控。
[0010]2.胃癌或胃腸間質(zhì)瘤標志物的捕獲劑，所述標志物為半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原，所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，所述癌胚抗原的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
[0011]優(yōu)選的，所述捕獲劑為識別半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原的特異性抗體。
[0012]3.含有所述捕獲劑的試劑盒。
[0013]優(yōu)選的，所述試劑盒為檢測血清中半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原濃度的試劑盒。
[0014]更優(yōu)選的，所述試劑盒為酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。[0015]更優(yōu)選的，所述試劑盒含有包被有單克隆抗體的固相載體、生物素標記的多克隆抗體和顯色底物。
[0016]最優(yōu)選的，所述單克隆抗體為鼠抗人Cystatin SN單克隆抗體，所述多克隆抗體為兔抗人Cystatin SN多克隆抗體，所述顯色底物為四甲基聯(lián)苯胺。
[0017]4.利用所述試劑盒計算診斷和預不胃癌或胃腸間質(zhì)瘤閾值的方法，用所述試劑盒檢測半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原濃度，利用P=exp (-6.119-0.053*a+0.509*b) /[1+exp (-6.119-0.053*a+0.509*b)]計算胃癌閾值 P 或利用 P=exp (-8.016-0.027*a+0.613*b) / [1+exp (-8.016-0.027*a+0.613*b)]計算胃腸間質(zhì)瘤閾值P，當P大于或等于0.75時，為陽性；當P小于0.75時，為陰性；
[0018]其中a代表半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN濃度,單位為pg/mL, b代表癌胚抗原濃度，單位為ng/mL。
[0019]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明公開了檢測胃癌或胃腸間質(zhì)瘤的新標志物，即將Cystatin SN和CEA聯(lián)合用于診斷和預示胃癌或胃腸間質(zhì)瘤,利用上述兩個標志物共同檢測胃癌或胃腸間質(zhì)瘤的靈敏度高和特異性均高于檢測單一標志物，檢測胃癌的靈敏度為82.4%，檢測胃腸間質(zhì)瘤的靈敏度為78.3% ;檢測胃癌的特異性為93.9%，檢測胃腸間質(zhì)瘤的靈敏度為84.6%;本發(fā)明還公開了胃癌或胃腸間質(zhì)瘤標志物的捕獲劑和含有該捕獲劑的試劑盒，制成試劑盒具有使用方便，重復性好，便于攜帶等優(yōu)點，能夠用于胃癌或胃腸間質(zhì)瘤的早期診斷、療效評估或移轉(zhuǎn)復發(fā)監(jiān)控等，并且檢測結(jié)果用于判斷胃癌或胃腸間質(zhì)瘤早于臨床癥狀，為醫(yī)生提如治療和干預提供指導。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]為了使本發(fā)明的目的、技術方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖:
[0021]圖1為Cystatin SN酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測Cystatin SN蛋白的標準曲線。
[0022]圖2為CEA酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測CEA蛋白的標準曲線。
[0023]圖3為Cystatin SN-CEA聯(lián)合檢測試劑盒檢測胃癌ROC曲線。
[0024]圖4為Cystatin SN-CEA聯(lián)合檢測試劑盒檢測胃腸間質(zhì)瘤ROC曲線。
【具體實施方式】
[0025]下面將結(jié)合附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。
[0026]本發(fā)明使用的試劑如下:鼠抗人Cystatin SN單克隆抗體購自美國R&D公司(貨號為:MAB1296);兔抗人Cystatin SN多克隆抗體、Cystatin SN蛋白標準品購自北京義翹神州生物技術有限公司。CEA單克隆抗體、CEA多克隆抗體，CEA蛋白標準品購自北京義翹神州生物技術有限公司(CEA單克隆抗體和CEA多克隆抗的貨號分別為:11077-MM08和11077-MM07)。
[0027]實施例1建立Cystatin SN血清檢測反應體系及其優(yōu)化
[0028]用濃度為5 μ g/mL鼠抗人Cystatin SN單克隆抗體包被ELISA板,于4°C條件下包被過夜，洗板；然后在質(zhì)量分數(shù)為2%的BSA中室溫封閉2小時,洗板；將濃度分別為Opg/mL,50pg/mL, 100pg/mL, 200pg/mL, 400pg/mL, 800pg/mL, 1600pg/mL 的 Cystatin SN 蛋白標準品(編碼Cystatin SN蛋白的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示)和血清樣品加入封閉板中，于37°C反應I小時，洗板；然后用濃度為0.5 μ g/mL HRP標記的兔抗人Cystatin SN多克隆抗體，在37 °C條件下反應I小時，洗板；再與四甲基聯(lián)苯胺(TMB )反應2-3分鐘，最后用濃度為2M的硫酸終止反應，并于450nm條件下檢測OD值(圖1)。結(jié)果顯示，Cystatin SN線性范圍為50pg/mL-1600pg/mL，在線性范圍內(nèi)標準品線性相關系數(shù)r≥0.990，回收率在90%~110%范圍內(nèi)。
[0029]檢測體系優(yōu)化，比對分別由美國R&D，英國Abcam和美國NOVUS B10L0GICALS 3個不同公司生產(chǎn)的Cystatin SN單克隆抗體、美國R&D公司和北京義翹神州生物技術有限公司生產(chǎn)的Cystatin SN蛋白標準品和美國R&D,英國Abcam和北京義翅神州生物技術有限公司生產(chǎn)的Cystatin SN多克隆抗體。結(jié)果表明，Cystatin SN單克隆抗體優(yōu)選R&D公司提供的產(chǎn)品，最佳工作濃度為5 μ g/mL ；Cystatin SN蛋白標準品和Cystatin SN多克隆抗體優(yōu)選北京義翹神州生物技術有限公司產(chǎn)品，最佳工作濃度為0.5μ g/mL，在最佳條件下，可實現(xiàn)背景OD值< 0.1，能夠有效區(qū)分陰性組與陽性組，且具有統(tǒng)計學意義。
[0030]固相載體的確定:對美國Corning、德國Greiner、美國Thermo和丹麥Nunc4個不同廠家生產(chǎn)的酶標板進行了比較。結(jié)果顯示，美國corning公司(貨號為:9018)和thermo(貨號為:468667)公司的酶標板符合背景OD值< 0.1，且信噪比較高。
[0031]包被液的選擇:根據(jù)抗體包被于固相載體所需要的緩沖體系，ELISA常用包被液為緩沖鹽溶液，分別用磷酸鹽緩沖液(PH7.5)和碳酸鹽緩沖液(pH9.6)檢測包被環(huán)境對反應體系的影響，結(jié)果顯示碳酸鹽緩沖液(PH9.6)可滿足空白組OD值< 0.1，有效區(qū)分空白組、陰性組和陽性組，信噪比較高。
[0032]稀釋劑的選擇:通過實驗對比了 2種商品化稀釋劑(分別購自天津博美科生物技術有限公司(貨號BMKF017-1)和上海西唐生物科技有限公司(貨號C0901))和自制稀釋劑的稀釋效果，主要從保護蛋 白能力，自身穩(wěn)定性兩方面評價稀釋劑的稀釋效果。結(jié)果顯示自制稀釋劑的效果最佳，自制稀釋劑各組分的濃度如下:3mM EDTA、質(zhì)量分數(shù)為0.5%的BSA、1XPBS、質(zhì)量分數(shù)為0.05%的Tween-20和質(zhì)量分數(shù)為0.02%的硫柳汞(pH6.0)。
[0033]穩(wěn)定劑的選擇:使用3種穩(wěn)定劑(3種穩(wěn)定劑具體如下:穩(wěn)定劑1:質(zhì)量分數(shù)為3%的蔗糖，體積分數(shù)為8%的甘油和質(zhì)量分數(shù)為1.3%的NaCl ;穩(wěn)定劑I1:質(zhì)量分數(shù)為3%的蔗糖，體積分數(shù)為8%的甘油，質(zhì)量分數(shù)為0.1%的EDTA和質(zhì)量分數(shù)為1.3%的NaCl，穩(wěn)定劑III:體積分數(shù)為68.8%的PBS，體積分數(shù)為30%的胎牛血清和質(zhì)量分數(shù)為0.2%的硫柳汞)分別稀釋單克隆抗體、蛋白標準品和多克隆抗體至濃度為0.5mg/mL、0.16ng/mL和50 μ g/mL,使用時按體積比為1:100稀釋。并于第O天、第7天和第14天進行檢測，結(jié)果顯示穩(wěn)定劑III效果最佳，其組分為:體積分數(shù)為68.8%的PBS、體積分數(shù)為30%的胎牛血清、質(zhì)量分數(shù)為0.2%的硫柳萊。
[0034]通過以上研究確定了檢測體系的主要組分，并建立Cystatin SN-CEA血清檢測試劑盒。
[0035]實施例2建立CEA血清檢測體系及其優(yōu)化
[0036]用濃度為3 μ g/mL鼠抗人CEA單克隆抗體包被ELISA板，包被條件是于4°C條件下包被過夜，洗板；然后在質(zhì)量分數(shù)為2%的BSA中室溫封閉2小時,洗板；將濃度分別為Opg/mL,39.0625pg/mL,78.125pg/mL,156.25pg/mL,312.5pg/mL,625pg/mL,1250pg/mL)的 CEA蛋白標準品(編碼CEA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示)和血清樣品加入封閉板中，于37°C反應I小時，洗板；然后加入濃度為0.5 μ g/mL HRP標記的兔抗人CEA多克隆抗體，在37°C條件下反應I小時，洗板；再與四甲基聯(lián)苯胺(TMB)反應2-3分鐘，最后用濃度為2M的硫酸終止反應，并于450nm條件下檢測OD值(圖2)。結(jié)果顯示，CEA線性范圍為39.0625pg/mL-1250pg/mL，在線性范圍內(nèi)線性相關系數(shù)r≤0.990，回收率在90%~110%范圍內(nèi)。
[0037]檢測體系優(yōu)化:比對美國R&D，英國Abcam和美國NOVUS B10L0GICALS 3個不同公司生產(chǎn)的CEA單克隆抗體、美國R&D和北京義翹神州生物技術有限公司生產(chǎn)的CEA蛋白標準品和美國R&D，英國Abcam和北京義翹神州生物技術有限公司生產(chǎn)的CEA多克隆抗體。結(jié)果表明，CEA單克隆抗體優(yōu)選北京義翹神州生物技術有限公司提供的產(chǎn)品(貨號為:11077-麗08)，最佳工作濃度為31^/1!^ ;CEA蛋白標準品和CEA多克隆抗體優(yōu)選北京義翹神州生物技術有限公司提供產(chǎn)品，CEA蛋白標準品的最佳工作濃度為1.6ng/mL，CEA多克隆抗體的最佳工作濃度為0.5μ g/mL。在最佳條件下，可實現(xiàn)背景OD值< 0.1，能夠有效區(qū)分陰性組與陽性組，且具有統(tǒng)計學意義。
[0038]固相載體的確定:對美國Corning、德國Greiner、美國Thermo和丹麥Nunc4個不同廠家的酶標板進行了比較，結(jié)果顯示，美國corning公司(貨號為:9018)和美國Thermo(貨號為:468667)公司的酶標板符合背景OD值< 0.1，且信噪比較高。
[0039]包被液的選擇:根據(jù)抗體包被于固相載體所需要的緩沖體系，ELISA常用包被液為緩沖鹽溶液，分別用磷酸鹽緩沖液(PH7.5)和碳酸鹽緩沖液(pH9.6)檢測包被環(huán)境對反應體系的影響，結(jié)果顯示碳酸鹽緩沖液(PH9.6)可滿足空白組OD值< 0.1，有效區(qū)分空白組、陰性組和陽性組，信噪比較高。
[0040]稀釋劑的選擇:通過實驗對比了 2種商品化稀釋劑(分別購自天津博美科生物技術有限公司(貨號BMKF 017-1)和上海西唐生物科技有限公司(貨號C0901))和自制稀釋劑的稀釋效果，主要從保護蛋白能力，自身穩(wěn)定性兩方面評價稀釋劑的稀釋效果。結(jié)果顯示自制稀釋劑效果最佳，自制稀釋劑各組分的終濃度如下:3mM EDTA、質(zhì)量分數(shù)為0.5%的BSA、1XPBS、質(zhì)量分數(shù)為0.05%的Tween-20和質(zhì)量分數(shù)為0.02%的硫柳汞(pH6.0)。
[0041]穩(wěn)定劑的選擇:使用3種穩(wěn)定劑(穩(wěn)定劑1:質(zhì)量分數(shù)為3%的蔗糖，體積分數(shù)為8%的甘油和質(zhì)量分數(shù)為1.3%的NaCl ;穩(wěn)定劑I1:質(zhì)量分數(shù)為3%的蔗糖，體積分數(shù)為8%的甘油，質(zhì)量分數(shù)為0.1%的EDTA和質(zhì)量分數(shù)為1.3%的NaCl，穩(wěn)定劑II1:體積分數(shù)為68.8%的PBS，體積分數(shù)為30%的胎牛血清和質(zhì)量分數(shù)為0.2%的硫柳汞)分別稀釋單克隆抗體、蛋白標準品和多克隆抗體至濃度為0.5mg/mL、0.16ng/mL和50 μ g/mL，使用時按體積比為1:100稀釋。并于第O天、第7天和第14天進行檢測，結(jié)果顯示穩(wěn)定劑III效果最佳。
[0042]通過以上研究確定了檢測體系的主要組分，并建立CEA血清檢測試劑盒。
[0043]實施例3 Cystatin SN-CEA酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
[0044]根據(jù)實施例1和實施例2中建立Cystatin SN和CEA血清檢測體系構(gòu)建CystatinSN-CEA酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，具體組分如表1所示:
[0045]表1、Cystatin SN-CEA酶聯(lián)免疫檢測試劑盒組分
[0046]
【權(quán)利要求】
1.半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原在制備診斷和預示胃癌或胃腸間質(zhì)瘤標志物中的應用，所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，所述癌胚抗原的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于:所述診斷和預示為診斷、療效評估或轉(zhuǎn)移復發(fā)監(jiān)控。
3.胃癌或胃腸間質(zhì)瘤標志物的捕獲劑，其特征在于:所述標志物為半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原，所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，所述癌胚抗原的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的捕獲劑，其特征在于:所述捕獲劑為識別半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原的特異性抗體。
5.含有權(quán)利要求3或4所述捕獲劑的試劑盒。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒為檢測血清中半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原濃度的試劑盒。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒為酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒含有包被有單克隆抗體的固相載體、生物素標記的多克隆抗體和顯色底物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于:所述單克隆抗體為鼠抗人半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN單克隆抗體，所述多克隆抗體為兔抗人半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN多克隆抗體，所述顯色底物為四甲基聯(lián)苯胺。
10.利用權(quán)利要求5_9任一項所述試劑盒建立計算診斷和預不胃癌或胃腸間質(zhì)瘤閾值的方法，其特征在于:用所述試劑盒檢測半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN和癌胚抗原濃度，利用P=exp (-6.119-0.053*a+0.509*b) /[1+exp (-6.119-0.053*a+0.509*b)]計算胃癌閾值 P 或利用 P=exp (-8.016-0.027*a+0.613*b) / [1+exp (-8.016-0.027*a+0.613*b)]計算胃腸間質(zhì)瘤閾值P，當P大于或等于0.75時，為陽性；當P小于0.75時，為陰性； 其中a代表半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN濃度,單位為pg/mL, b代表癌胚抗原濃度,單位為 ng/mL0
【文檔編號】C07K16/18GK103941016SQ201310164751
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2013年5月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月7日
【發(fā)明者】王弢, 秦勇 申請人:上海良潤生物醫(yī)藥科技有限公司