專利名稱：美伐他汀的分離提取工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種從微生物發(fā)酵液中分離或純化美伐他汀或其藥學上可接受的鹽的方法。
背景技術：
美伐他汀(mevastatin,如式I所示)又叫做康帕丁(compactin)、ML-236B,是一種3-羥基3-甲基戊ニ酰輔酶A 還原酶(HMG-CoA)抑制劑，由日本三共制藥公司生物化學家Endo在真菌(Penicillium Citrinum)培養(yǎng)液中偶然提取得到的，其化學名為2-甲基丁酸-{lS_[la (R), 7 β , 8 β (2S，4S)，8a β ]} _1，2，3，7，8，8a_ 六氫 _7_ 甲基-8{2_[4_ 羥基-6-氧代-2H-四氫吡喃基]-こ基}-I-萘酷，具體結構式如下
H^
ηο^
O
H式へイCH3
I美伐他汀為第一代他汀類物質，現(xiàn)在多被用來作為他汀類活性藥物普伐他汀的前體，因此美伐他汀的收率和質量直接影響著普伐他汀的成本和純度。美伐他汀的傳統(tǒng)分離提取エ藝中，大多采用大孔樹脂吸附結合柱層析的エ藝，該エ藝存在操作繁瑣、提取成本高、生產(chǎn)周期長、收率低等問題，逐漸被溶媒萃取的方法所取代。US6387258(B1)采用調節(jié)pH值的方法，達到分離提取美伐他汀的目的。在該發(fā)明說明書中公開了美伐他汀的分離提取エ藝(I)堿性環(huán)境下預處理發(fā)酵液，以除去雜質；
(2)用疏水性有機萃取劑在酸性環(huán)境下將他汀類物質以羥酸或內酯形式萃取出來；(3)將萃取液與發(fā)酵液分離；(4)濃縮包含他汀類物質的有機萃取劑，同時他汀類形成內酷；(5)堿(pH7. 5-10NH40H、l-5% (w/w) Na2CO3或NaHCO3)溶液預處理，結晶。在此發(fā)明中，發(fā)酵液預處理中沒有包括過濾菌渣，直接在發(fā)酵液中進行萃取，消耗大量的有機溶劑；且調酸耗用的酸量大，水相排放時要用大量的堿中和，給環(huán)保帶來壓力，原材料成本提高。堿性條件下的萃取收率低，給整個的提取精制收率帶來直接的影響。該方法公開的說明書中，最優(yōu)的美伐他汀粗品收率為78%。李敏在《美伐他汀提取エ藝研究》公開了干法和濕法浸提兩種美伐他汀的提取エ藝。干法提取美伐他汀的步驟為發(fā)酵液用稀酸處理后過濾，濕菌絲通過氣流干燥，干燥方式有進風140°C氣流干燥、進風80°C氣流干燥和進風160°C閃蒸三種，美伐他汀的環(huán)化在氣流干燥的同時完成，干燥后的菌渣(含水量低于5% )用于萃取等后續(xù)的エ藝。干法提取美伐他汀所獲得的美伐他汀粗品收率僅為60%。而濕法浸提提取美伐他汀的步驟為發(fā)酵液中的菌絲經(jīng)過濾得到后，用こ酸丁酷，浸提4小時，浸提比例為I : 7;第二次浸提時間為2小時，物料比為I : 4;提取濃縮液真空減壓蒸餾的方式進行，生產(chǎn)過程中適宜的閉環(huán)溫度為70-80°C，時間為6小吋。通過實驗確定浸提的最佳溶劑、最佳條件，所獲得的美伐他汀粗品收率僅為70%。從以上可以看出，現(xiàn)在的美伐他汀分離提取エ藝都存在著從發(fā)酵液中提取美伐他汀總收率低的問題，美伐他汀較低的收率不僅會造成極大的浪費，而且會無形的提高其生產(chǎn)升本，不利于以美伐他汀為前體的他汀類藥物價格的降低，從而増大該類藥物使用者的經(jīng)濟壓力。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種收率高的、生產(chǎn)周期短、適應大規(guī)模生產(chǎn)的從微生物發(fā)酵液中分離提取美伐他汀或其藥學上可接受的鹽的方法。本發(fā)明創(chuàng)造性的在萃取菌渣前，引入吹干菌渣的步驟，驚喜地發(fā)現(xiàn)該步驟可以顯著的提高美伐他汀粗品的收率。過濾后的菌渣殘留水、溶于水的一些親水雜質和容易揮發(fā)的雜質等，這些雜質會直接影響后期的萃取和環(huán)化效率，延長環(huán)化和萃取エ藝的時間。菌渣吹干過程中，溶于水的一些親水雜質和容易揮發(fā)的雜質等隨著水蒸氣被移除，另外，吹干后的菌渣重量減少，可以減少后續(xù)萃取中使用有機溶劑的量，同時縮短萃取環(huán)化的時間。具體的，本發(fā)明的方法包括以下步驟(I)將含美伐他汀的發(fā)酵液用酸進行預處理，過濾，菌渣吹干酸化后的發(fā)酵液pH值優(yōu)選值為2. 0-6. O ;菌渣吹干后，含水量為5% -76%。(2)菌渣與萃取溶劑投入萃取罐中，保溫環(huán)化，過濾洗滌萃取溶劑為疏水性有機溶劑，選自但是不限于こ酸丁酷、こ酸こ酷、こ酸丙酷、甲酸こ酷、己酮、ニ氯甲烷、氯仿、四氯化碳、ニ氯こ烷、甲苯、苯甲醇中的一種或者幾種。萃取溶劑與菌渣的投放比例為，萃取溶劑的總投入量(V/W)相當于菌渣總投入量的 I. 0-10. O 倍(ν/w)。(3)萃取濾液濃縮，結晶，過濾烘干得美伐他汀優(yōu)選的，濃縮和結晶兩個步驟之間，濃縮液中加入同樣溫度的美伐他汀溶解度低的有機溶劑，保溫攪拌，結晶。過濾，烘干粗濕品。美伐他汀溶解度低的有機溶劑，選自丙酮、丁酷、正己烷、こ醇中的ー種或幾種。結晶過濾獲得的濾餅抽真空，用美伐他汀溶解度低的有機溶劑浸泡數(shù)次后抽干，烘干粗濕品。優(yōu)選的，本發(fā)明的方法包括以下步驟(I)將含美伐他汀的發(fā)酵液用酸進行預處理，過濾，菌渣吹干
酸化后的發(fā)酵液pH值為3. 0-4. 5 ;菌渣吹干后，含水量為40% -70%。(2)菌渣與萃取溶劑投入萃取罐中，保溫環(huán)化，過濾洗滌萃取溶劑為疏水性有機溶劑，選自氯仿、四氯化碳、ニ氯こ烷、甲苯、苯甲醇中的一種或者幾種。萃取溶劑與菌渣的投放比例為，萃取溶劑的總投入量(V/W)相當于菌渣總投入量的 3. 0-8. O 倍(V/W)。(3)萃取濾液濃縮，結晶，過濾烘干得美伐他汀優(yōu)選的，濃縮和結晶兩個步驟之間，濃縮液中加入同樣溫度的美伐他汀溶解度低的有機溶劑，保溫攪拌，結晶。過濾，烘干粗濕品。美伐他汀溶解度低的有機溶劑，選自丙酮、丁酷、正己烷、こ醇中的ー種或幾種。 結晶過濾獲得的濾餅抽真空，用美伐他汀溶解度低的有機溶劑浸泡數(shù)次后抽干，烘干粗濕品。更優(yōu)選的，本發(fā)明的方法包括以下步驟(I)將含美伐他汀的發(fā)酵液用酸進行預處理，過濾，菌渣吹干、酸化后的發(fā)酵液pH值為3. 0-4. 5 ;菌渣吹干后，含水量為50% -60%。(2)菌渣與萃取溶劑投入萃取罐中，保溫環(huán)化，過濾洗滌萃取溶劑為疏水性有機溶劑，選自氯仿、甲苯、苯甲醇中的一種或者幾種。萃取溶劑與菌渣的投放比例為，萃取溶劑的總投入量(V/W)相當于菌渣總投入量的 3. 0-8. O 倍(V/W)。(3)萃取濾液濃縮，結晶，過濾烘干得美伐他汀優(yōu)選的，濃縮和結晶兩個步驟之間，濃縮液中加入同樣溫度的美伐他汀溶解度低的有機溶劑，保溫攪拌，結晶。過濾，烘干粗濕品。美伐他汀溶解度低的有機溶劑，選自丙酮、丁酷、正己烷、こ醇中的ー種或幾種。結晶過濾獲得的濾餅抽真空，用美伐他汀溶解度低的有機溶劑浸泡數(shù)次后抽干，烘干粗濕品。


附圖是本發(fā)明方法的エ藝流程圖。
具體實施例方式以下參照具體的實施例來說明本發(fā)明。本領域技術人員能夠理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實施例I實驗A5L的醋酸異丁酯和5L水混合，O. 5h后連續(xù)的向含美伐他汀發(fā)酵液(IOL)中加入。用濃NaOH調節(jié)pH9. 0-9. 6。將混合物加熱到60°C并維持此溫度2小時。有機相和水相用逆流分離法分離。分離的時候加入十二烷基硫酸鈉幫助乳化混合物。用硫酸調節(jié)純化后的發(fā)酵液的pH2. 0-4. 5。連續(xù)的向發(fā)酵液中加入5L醋酸異丁酷，包含美伐他汀的醋酸異丁酯相被連續(xù)的分離。
在真空下將醋酸異丁酯相濃縮到約150mL。將濃縮液稀釋到800mL，用NaHCO3洗滌。洗滌后濃縮液再次濃縮到150mL。濃縮液冷卻到0-5°C。過夜后得到美伐他汀。實驗B5L的醋酸異丁酯和5L水混合，O. 5h后連續(xù)的向含美伐他汀發(fā)酵液(IOL)中加入。將混合物加熱到60°C并維持此溫度2小吋。有機相和水相用逆流分離法分離。分離的時候加入十~■燒基硫酸納幫助乳化混合物。用硫酸調節(jié)純化后的發(fā)酵液的pH2. 0-4. 5。連續(xù)的向發(fā)酵液中加入5L醋酸異丁酷，包含美伐他汀的醋酸異丁酯相被連續(xù)的分離。在真空下將醋酸異丁酯相濃縮到約150mL。將濃縮液稀釋到800mL，用NaHCO3洗滌。洗滌后濃縮液再次濃縮到150mL。濃縮液冷卻到0-5°C。過夜后得到美伐他汀。實驗C 5L的醋酸異丁酯和5L水混合，O. 5h后連續(xù)的向美伐他汀發(fā)酵液(IOL)中加入。用濃NaOH調節(jié)pH9. 0-9. 6。將混合物加熱到60°C并維持此溫度2小時。有機相和水相用逆流分離法分離。分離的時候加入十二烷基硫酸鈉幫助乳化混合物。用硫酸調節(jié)純化后的發(fā)酵液的pH2. 0-4. 5。連續(xù)的向發(fā)酵液中加入5L醋酸異丁酷，包含美伐他汀的醋酸異丁酯相被連續(xù)的分離。在真空下將醋酸異丁酯相濃縮。濃縮液冷卻到0_5°C。過夜后得到美伐他汀粗品。實驗D參照《美伐他汀提取エ藝研究》；李敏；2007年天津大學碩士學位論文中干法提取美伐他汀的流程操作。發(fā)酵液(IOL)中的菌絲經(jīng)過濾得到后，用こ酸丁酷，在溫度35-40°C，浸提4小吋，浸提比例為I : 7;第二次浸提時間為2小時，物料比為I : 4 ;提取濃縮液真空減壓蒸餾的方式進行，生產(chǎn)過程中適宜的閉環(huán)溫度為70-80°C，時間為6小時，包含美伐他汀的こ酸丁酷相被連續(xù)的分離，濃縮液冷卻到0-5°C。過夜后得到美伐他汀粗品。實驗E參照《美伐他汀提取エ藝研究》；李敏；2007年天津大學碩士學位論文中干法提取美伐他汀的流程操作。發(fā)酵液(IOL)中的菌絲經(jīng)過濾得到后，用溫度高于80°C的氣流干燥，干菌絲用こ酸丁酷，在溫度35-40°C，浸提4小時，浸提比例為I : 7;第二次浸提時間為2小時，物料比為I : 4;提取濃縮液真空減壓蒸餾的方式進行，包含美伐他汀的こ酸丁酯相被連續(xù)的分離，濃縮液冷卻到0-5°C。過夜后得到美伐他汀粗品。實驗FIOL發(fā)酵液用磷酸調節(jié)pH值至3. 7，過濾得到的菌渣吹干至菌渣的含水量為13%，濾液檢測后進行處理。將吹干的菌渣與甲苯投入到萃取罐中，甲苯與菌渣的比例為6 I (V/W)，環(huán)化，環(huán)化所花費時間為8. 5小時，過濾，用甲苯洗滌濾渣3次，并將洗滌液與濾液混合并靜置，完成萃取。吹干廢渣，并將廢渣與萃取的廢液進行環(huán)保處理。萃取濾液減壓蒸餾，回收甲苯和水，減壓蒸餾結束后，降低濃縮液溫度至15°C，カロ入同樣溫度的正己烷，保溫攪拌，結晶。過濾，濾餅抽真空，用正己烷浸泡后抽干，50°C左右烘干粗濕品。
實驗A-F美伐他汀粗品收率列表
權利要求
1.一種從發(fā)酵液中離或純化美伐他汀或其藥學上可接受的鹽的方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)將含美伐他汀的發(fā)酵液用酸進行預處理，過濾，菌渣吹干；(2)菌渣與萃取溶劑投入萃取罐中，保溫環(huán)化，過濾洗滌；(3)濃縮，結晶，過濾烘干得美伐他汀粗品。
2.根據(jù)權利要求I所述方法，其特征在于步驟(I)預處理所得的酸化發(fā)酵液PH值為2.0_6· O ο
3.根據(jù)權利要求I所述方法，其特征在于步驟(I)預處理所得的酸化發(fā)酵液PH值為3.0_4· 5 ο
4.根據(jù)權利要求I所述方法，其特征在于步驟(I)菌渣吹干后，含水量為5%-76%。
5.根據(jù)權利要求I所述方法，其特征在于步驟(I)菌渣吹干后，含水量為40%-70%。
6.根據(jù)權利要求I所述方法，其特征在于步驟(I)菌渣吹干后，含水量為50%-60%。
7.根據(jù)權利要求I所述方法，其特征在于步驟(3)結晶后，加入了美伐他汀溶解度低的有機溶劑，選自丙酮、丁酷、正己烷、こ醇中的ー種或幾種。
8.根據(jù)權利要求I所述方法，其特征在于步驟(3)結晶過濾獲得的濾餅抽真空，用有機溶劑浸泡后抽干，烘干粗濕品。
全文摘要
本發(fā)明提供一種從發(fā)酵液中純化提取美伐他汀的方法，其特征在于將含美伐他汀的發(fā)酵液用酸進行預處理，菌渣進行吹干處理。本發(fā)明提供的方法縮生產(chǎn)周期，降低成本，同時美伐他汀粗品收率提升。
文檔編號C07D309/30GK102827123SQ20121028140
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月2日 優(yōu)先權日2012年8月2日
發(fā)明者唐陽剛, 李敬輝, 張起智, 盧創(chuàng), 向雙 申請人:麗珠集團新北江制藥股份有限公司