專利名稱：一種純化特利加壓素的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及多肽純化領域，特別涉及一種純化特利加壓素的方法。
背景技術：
肝硬化(hepatic cirrhosis)是臨床常見的慢性進行性肝病，由一種或多種病因長期或反復作用形成的彌漫性肝損害。在我國大多數(shù)為肝炎后肝硬化，少部分為酒精性肝硬化和血吸蟲性肝硬化。病理組織學上有廣泛的肝細胞壞死、殘存肝細胞結節(jié)性再生、結締
組織增生與纖維隔形成，導致肝小葉結構破壞和假小葉形成，肝臟逐漸變形、變硬而發(fā)展為肝硬化。早期由于肝臟代償功能較強可無明顯癥狀，后期則以肝功能損害和門脈高壓為主要表現(xiàn)，并有多系統(tǒng)受累，晚期常出現(xiàn)上消化道出血、肝性腦病、繼發(fā)感染、脾功能亢進、腹水、癌變等并發(fā)癥。肝硬化的發(fā)病機制為進入門脈循環(huán)的各充血靜脈與體靜脈之間可出現(xiàn)血管吻合、門靜脈壓升高現(xiàn)象。吻合最常出現(xiàn)于奇靜脈與食管下端間，即食管靜脈曲張。它們擴張后變得粗大，可破裂入食管腔，引起嘔血危及生命。特利加壓素(Terli)是一個十二肽，如下所示
H-Gly-Gly -Gly -dys-T yr -Ph e -Gln-A sn -dy s -Pro -Ly s -Gl y -NH)特利加壓素能夠控制出血，引起內(nèi)臟血管劇烈收縮從而降低門靜脈壓，廣泛用于肝硬化并發(fā)癥(食管胃靜脈曲張出血、肝腎綜合癥、腹水)的治療，同時還適用于泌尿生殖道及其他腹腔臟器出血、感染性休克、燒傷、急性肝功能衰竭、心臟驟停等適應癥的治療。但是目前制備獲得的特利加壓素的純度和收率都較低，不能滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需求，特別是無法大規(guī)模純化特利加壓素，制約了特利加壓素的應用。因此，提供一種純化特利加壓素的方法具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明提供一種純化特利加壓素的方法。該方法通過預處理特利加壓素粗品，經(jīng)純化、轉(zhuǎn)鹽后獲得純度達99. 5%以上的特利加壓素。本發(fā)明提供的純化特利加壓素方法操作簡單易行，獲得的特利加壓素純度高(可達99. 5%以上，且最大單雜小于0. 1%)、收率高(純化收率可達85%以上，總收率可達50%以上)，符合產(chǎn)業(yè)化要求，一批次可獲得1000克以上的精肽。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案本發(fā)明提供了一種純化特利加壓素的方法，包括如下步驟步驟I :獲得特利加壓素粗品；步驟2 :取特利加壓素粗品預處理后，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以濃度為0. I 0. 8%的高氯酸和濃度為0. 01 0. 08%硫酸水溶液制得混合溶液，用堿調(diào)節(jié)混合溶液的pH值為2. O 3. 5后作為A相，以乙腈為B相，按照B相為10% 40%的梯度進行洗脫，制得特利加壓素第二粗品；步驟3 :取特利加壓素第二粗品，采用離子交換法轉(zhuǎn)鹽，即得。作為優(yōu)選，特利加壓素粗品由液相合成法或固相合成法合成。作為優(yōu)選，步驟2中預處理為取有機溶劑溶解所述特利加壓素粗品，加入抗氧化劑獲得特利加壓素粗品溶液。作為優(yōu)選，步驟2中有機溶劑的濃度為20 100%。、
作為優(yōu)選，以g/L計，步驟2中特利加壓素粗品與有機溶劑的質(zhì)量體積比為20 100 :1。作為優(yōu)選，步驟2中特利加壓素粗品與抗氧化劑的質(zhì)量比為100:2 8。作為優(yōu)選，步驟2中A相與B相的體積比為10 79:80。作為優(yōu)選，步驟2中預處理還包括取特利加壓素粗品溶液加水獲得特利加壓素粗品第二溶液，特利加壓素粗品第二溶液中有機溶劑的體積百分數(shù)低于20%。作為優(yōu)選，步驟2中有機溶劑為乙腈或甲醇。作為優(yōu)選，步驟2中抗氧化劑為抗壞血酸或抗壞血酸鹽中的一種或兩者以上的混合物。作為優(yōu)選，步驟2中抗壞血酸鹽為抗壞血酸鈉、抗壞血酸鉀。作為優(yōu)選，步驟2中堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氨水中的一種或兩者以上的混合物。作為優(yōu)選，步驟3中轉(zhuǎn)鹽包括如下步驟步驟a :取堿溶液活化樹脂，獲得活化后的樹脂，取特利加壓素第二粗品加入到活化后的樹脂中混合，過濾收集第一濾液；步驟b :收集過濾后的樹脂用水清洗，過濾后收集清洗液；步驟c :取清洗液與第一濾液合并，經(jīng)第一濃縮獲得第一濃縮液，取第一濃縮液重復步驟a、步驟b，獲得第二濾液；步驟d :取第二濾液加入冰醋酸，經(jīng)第二濃縮后獲得第二濃縮液、凍干。作為優(yōu)選，樹脂為強堿型陰離子交換樹脂。作為優(yōu)選，特利加壓素第二粗品與活化后的樹脂的質(zhì)量比為5 15:100。作為優(yōu)選，以g/mL計，第二濾液與冰醋酸的質(zhì)量體積比為1:0. 025 0. I。作為優(yōu)選，第一濃縮液的濃度為20 100mg/mL。作為優(yōu)選，第二濃縮液的濃度為50 200mg/mL。作為優(yōu)選,步驟a中堿溶液為氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液。作為優(yōu)選，步驟a中堿溶液的濃度為0. 2 2mol/L。作為優(yōu)選，步驟a中活化樹脂的次數(shù)為I 2次。作為優(yōu)選，步驟b中過濾后的樹脂用水沖洗的次數(shù)為3 4次。作為優(yōu)選，步驟d中冰醋酸的濃度為40 50%。作為優(yōu)選，純化所用色譜柱(柱子直徑X長度)規(guī)格為5cmX25cm、15cmX25cm、30cmX 25cm 或 45cmX 25cm。本發(fā)明提供了一種純化特利加壓素的方法。該方法通過預處理特利加壓素粗品，經(jīng)純化、轉(zhuǎn)鹽后獲得純度達99. 5%以上的特利加壓素。本發(fā)明提供的純化特利加壓素方法操作簡單易行，獲得的特利加壓素純度高(可達99. 5%以上，且最大單雜小于0. 1%)、收率高(純化收率可達85%以上，總收率可達50%以上)，符合產(chǎn)業(yè)化要求，一批次可獲得1000克以上的精妝。


圖I示實施例I中特利加壓素粗品經(jīng)乙腈水溶液溶解后HPLC譜圖；圖2示實施例I中特利加壓素粗品經(jīng)乙腈水溶液、抗壞血酸溶解后HPLC譜圖；圖3示實施例I中特利加壓素粗品經(jīng)本發(fā)明提供的方法制得的特利加壓素HPLC譜圖，純度大于99. 5%。
具體實施例方式本發(fā)明公開了一種純化特利加壓素的方法，本領域技術人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術。本發(fā)明提供的一種純化特利加壓素的方法中所用原料及試劑均可由市場購得。下面結合實施例，進一步闡述本發(fā)明實施例I
液相合成法獲得特利加壓素。樣品處理用體積比25%的乙腈水溶液按照100g/L的濃度溶解粗肽，攪拌使樣品完全溶解后用濾膜過濾，收集濾液。按照粗肽重量的5%的比例加入抗壞血酸試劑，用水將粗肽溶液中的乙腈的體積比例稀釋到10%備用。純化
純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為5CmX25Cm。流動相A相0. 4%高氯酸和0. 04%硫酸水溶液(v/v)，用50mM的氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值2. 8 ；B相乙腈，流速:80ml/min，梯度B%10% 40%，檢測波長:280nm。進樣量為I. 5g。純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為I. 5g。線性梯度洗脫60min，收集目的峰，將收集的特利加壓素溶液于水溫30°C的條件下減壓旋蒸濃縮至約15mg/mL后備用。轉(zhuǎn)鹽用lmol/L氫氧化鈉溶液沖洗樹脂活化I次，然后按照每克樹脂0. I克的樣品的比例，將特利加壓素樣品溶液加入到活化后的樹脂中，充分攪拌2分鐘，將混合液過濾，將濾除的樹脂再用注射用水清洗4次，收集濾出的溶液，將收集到的濾出液濃縮至30mg/ml后，再重復上述過程一次，將再次得到的濾出液按照每克樣品0. 05ml冰醋酸的比例加入50% (v/v)的冰醋酸水溶液,于水溫30°C條件下減壓旋蒸濃縮至約50-200mg/mL后轉(zhuǎn)至50ml西林瓶。冷凍干燥后即可得到純度大于99. 5%的特利加壓素。實施例2
固相合成法獲得特利加壓素。樣品處理用體積比25%的甲醇水溶液按照100g/L的濃度溶解粗肽，攪拌使樣品完全溶解后用濾膜過濾，收集濾液。按照粗肽重量的5%的比例加入抗壞血酸試劑，用水將粗肽溶液中的甲醇的體積比例稀釋到10%備用。純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為15CmX25Cm。流動相A相0. 4%高氯酸和0. 04%硫酸水溶液(v/v)，用50mM的氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值2. 8 ；Bffi :乙腈，流速:500ml/min，梯度B% : 10% 40%，檢測波長:280nm。進樣量為15-30g。
純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為25g。線性梯度洗脫60min，收集目的峰，將收集的特利加壓素溶液于水溫不超過30°C的條件下減壓旋蒸濃縮至約15mg/ml后備用。轉(zhuǎn)鹽用lmol/L氫氧化鈉溶液沖洗樹脂活化I次，然后按照每克樹脂0. I克的樣品的比例，將特利加壓素樣品溶液加入到活化后的樹脂中，充分攪拌2分鐘，將混合溶液過濾，將濾除的樹脂再用注射用水清洗4次，收集濾出的溶液，將收集到的濾出液濃縮至25mg/ml后，再重復上述過程一次，將再次得到的濾出液按照每克樣品0. 05ml冰醋酸的比例加入50% (v/v)的冰醋酸水溶液,于水溫30°C條件下減壓旋蒸濃縮至約50-200mg/ml后轉(zhuǎn)至50ml西林瓶。冷凍干燥后即可得到純度大于99. 5%的特利加壓素。實施例3液相合成法獲得特利加壓素。樣品處理用體積比25%的甲醇水溶液按照100g/L的濃度溶解粗肽，攪拌使樣品完全溶解后用濾膜過濾，收集濾液。按照粗肽重量的5%的比例加入抗壞血酸試劑，用水將粗肽溶液中的甲醇的體積比例稀釋到10%備用。純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為30CmX25Cm。流動相A相0. 4%高氯酸和0. 04%硫酸水溶液(v/v)，用50mM的氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值2. 8 ；B相乙腈，流速:3000ml/min，梯度B% :10% 40%，檢測波長280nm。進樣量為120g。純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為120g。線性梯度洗脫60min，收集目的峰，將收集的特利加壓素溶液于水溫不超過30°C的條件下減壓旋蒸濃縮至約10-20mg/ml后備用。轉(zhuǎn)鹽用lmol/L氫氧化鈉溶液沖洗樹脂活化I次，然后按照每克樹脂0. I克的樣品的比例，將特利加壓素樣品溶液加入到活化后的樹脂中，充分攪拌2分鐘，將混合溶液過濾，將濾除的樹脂再用注射用水清洗4次，收集濾出的溶液，將收集到的濾出液濃縮至25mg/ml后，再重復上述過程一次，將再次得到的濾出液按照每克樣品0. 05ml冰醋酸的比例加入稀釋后的冰醋酸水溶液，于水溫30°C條件下減壓旋蒸濃縮至約50-200mg/ml后轉(zhuǎn)至50ml西林瓶。冷凍干燥后即可得到純度大于99. 5%的特利加壓素。實施例4固相合成法獲得特利加壓素。
樣品處理用體積比25%的甲醇水溶液按照100g/L的濃度溶解粗肽，攪拌使樣品完全溶解后用濾膜過濾，收集濾液。按照粗肽重量的5%的比例加入抗壞血酸試劑，用水將粗肽溶液中的甲醇的體積比例稀釋到10%備用。純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為45CmX25Cm。流動相A相0. 4%高氯酸水溶液(v/v)，用50mmol的氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值2. 8 ；B相乙腈，流速6000ml/min,梯度B% 10% 40%,檢測波長:280nm。進樣量為 300g。純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為300g。線性梯度洗脫60min，收集目的峰，將收集的特利加壓素溶液于水溫30°C的條件下減壓旋蒸濃縮至約20mg/mL后備用。 轉(zhuǎn)鹽用lmol/L氫氧化鈉溶液沖洗樹脂活化I次，然后按照每克樹脂0. I克的樣品的比例，將特利加壓素樣品溶液加入到活化后的樹脂中，充分攪拌2分鐘，將混合溶液過濾，將濾除的樹脂再用注射用水清洗4次，收集濾出的溶液，將收集到的濾出液濃縮至25mg/ml后，再重復上述過程一次，將再次得到的濾出液按照每克樣品0. 05ml冰醋酸的比例加入稀釋后的冰醋酸水溶液，于水溫30°C條件下減壓旋蒸濃縮至約lOOmg/mL后轉(zhuǎn)至50ml西林瓶。冷凍干燥后即可得到純度大于99. 5%的特利加壓素。實施例5液相合成法獲得特利加壓素。樣品處理用體積比100%的甲醇(乙腈)水溶液按照20g/L的濃度溶解粗肽，攪拌使樣品完全溶解后用濾膜過濾，收集濾液。按照粗肽重量的4%的比例加入抗壞血酸(抗壞血酸鈉、抗壞血酸鉀)，用水將粗肽溶液中的甲醇(乙腈)的體積比例稀釋到1%備用。純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為:30cmX25cm。流動相A相0. 8%高氯酸和0. 01%硫酸水溶液(v/v)，用IOOmM的氫氧化鉀水溶液調(diào)pH值3. 0 ；B相乙腈，流速3000ml/min,梯度B% 10% 40%,檢測波長280nm。進樣量為120g。純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為120g。線性梯度洗脫60min，收集目的峰，將收集的特利加壓素溶液于水溫不超過30°C的條件下減壓旋蒸濃縮至約10-20mg/ml后備用。轉(zhuǎn)鹽用2mol/L氫氧化鉀溶液沖洗強堿型陰離子交換樹脂活化1_2次，然后按照每100克樹脂5克的特利加壓素的比例，將特利加壓素溶液加入到活化后的樹脂中，充分攪拌2分鐘，將混合溶液過濾，將濾除的樹脂再用注射用水清洗3-4次，收集濾出的溶液，將收集到的濾出液濃縮至75mg/ml后，再重復上述過程一次，將再次得到的濾出液按照每克樣品0. 025ml冰醋酸的比例加入濃度為48%的冰醋酸水溶液，于水溫30°C條件下減壓旋蒸濃縮至約50mg/ml后轉(zhuǎn)至50ml西林瓶。冷凍干燥后即可得到純度大于99. 6%的特利加壓素。實施例6固相合成法獲得特利加壓素。樣品處理用體積比20%的甲醇(乙腈)水溶液按照100g/L的濃度溶解粗肽，攪拌使樣品完全溶解后用濾膜過濾，收集濾液。按照粗肽重量的8%的比例加入抗壞血酸(抗壞血酸鈉、抗壞血酸鉀)，用水將粗肽溶液中的甲醇(乙腈)的體積比例稀釋到10%備用。純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為30cmX 25cm。流動相A相0. 1%高氯酸和0. 04%硫酸水溶液(v/v)，用20mM的氨水水溶液調(diào)pH值2. 5 ；B相乙腈，流速:3000ml/min，梯度B%10% 40%，檢測波長:280nm。進樣量為120g。 純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為120g。線性梯度洗脫60min，收集目的峰，將收集的特利加壓素溶液于水溫不超過30°C的條件下減壓旋蒸濃縮至約10-20mg/ml后備用。轉(zhuǎn)鹽用0. 2mol/L氫氧化鉀溶液沖洗強堿型陰離子交換樹脂活化1_2次，然后按照每100克樹脂10克的特利加壓素的比例，將特利加壓素溶液加入到活化后的樹脂中，充分攪拌2分鐘，將混合溶液過濾，將濾除的樹脂再用注射用水清洗3-4次，收集濾出的溶液，將收集到的濾出液濃縮至40mg/ml后，再重復上述過程一次，將再次得到的濾出液按照每克樣品0. Iml冰醋酸的比例加入濃度為45%的冰醋酸水溶液，于水溫30°C條件下減壓旋蒸濃縮至約200mg/ml后轉(zhuǎn)至50ml西林瓶。冷凍干燥后即可得到純度大于99. 5%的特利加壓素。實施例I液相合成法獲得特利加壓素。樣品處理用體積比40%的甲醇(乙腈)水溶液按照60g/L的濃度溶解粗肽，攪拌使樣品完全溶解后用濾膜過濾，收集濾液。按照粗肽重量的2%的比例加入抗壞血酸(抗壞血酸鈉、抗壞血酸鉀)，用水將粗肽溶液中的甲醇(乙腈)的體積比例稀釋到20%備用。純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為30cmX 25cm。流動相A相0. 3%高氯酸和0. 08%硫酸水溶液(v/v)，用200mM的氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值2. 0 ；B相乙腈，流速3000ml/min,梯度B% 10% 40%,檢測波長280nm。進樣量為120g。純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為120g。線性梯度洗脫60min，收集目的峰，將收集的特利加壓素溶液于水溫不超過30°C的條件下減壓旋蒸濃縮至約10-20mg/ml后備用。轉(zhuǎn)鹽用I. 5mol/L氫氧化鈉溶液沖洗強堿型陰離子交換樹脂活化1_2次，然后按照每100克樹脂15克的特利加壓素的比例，將特利加壓素溶液加入到活化后的樹脂中，充分攪拌2分鐘，將混合溶液過濾，將濾除的樹脂再用注射用水清洗3-4次，收集濾出的溶液，將收集到的濾出液濃縮至100mg/ml后，再重復上述過程一次，將再次得到的濾出液按照每克樣品0. 05ml冰醋酸的比例加入濃度為40%的冰醋酸水溶液，于水溫30°C條件下減壓旋蒸濃縮至約100mg/ml后轉(zhuǎn)至50ml西林瓶。冷凍干燥后即可得到純度大于99. 7%的特利加壓素。實施例8固相合成法獲得特利加壓素。
樣品處理用體積比70%的甲醇(乙腈)水溶液按照30g/L的濃度溶解粗肽，攪拌使樣品完全溶解后用濾膜過濾，收集濾液。按照粗肽重量的6%的比例加入抗壞血酸(抗壞血酸鈉、抗壞血酸鉀)，用水將粗肽溶液中的甲醇(乙腈)的體積比例稀釋到5%備用。純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合 硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為30cmX25cm。流動相A相0. 5%高氯酸和0. 05%硫酸水溶液(v/v)，用IOOmM的氫氧化鉀水溶液調(diào)pH值3. 5 ；B相乙腈，流速3000ml/min,梯度B% 10% 40%,檢測波長280nm。進樣量為120g。純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為120g。線性梯度洗脫60min，收集目的峰，將收集的特利加壓素溶液于水溫不超過30°C的條件下減壓旋蒸濃縮至約10-20mg/ml后備用。轉(zhuǎn)鹽用0. 8mol/L氫氧化鉀溶液沖洗強堿型陰離子交換樹脂活化1_2次，然后按照每100克樹脂12克的特利加壓素的比例，將特利加壓素溶液加入到活化后的樹脂中，充分攪拌2分鐘，將混合溶液過濾，將濾除的樹脂再用注射用水清洗3-4次，收集濾出的溶液，將收集到的濾出液濃縮至20mg/ml后，再重復上述過程一次，將再次得到的濾出液按照每克樣品0. 75ml冰醋酸的比例加入濃度為50%的冰醋酸水溶液，于水溫30°C條件下減壓旋蒸濃縮至約150mg/ml后轉(zhuǎn)至50ml西林瓶。冷凍干燥后即可得到純度大于99. 8%的特利加壓素。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。
權利要求
1.一種純化特利加壓素的方法，其特征在于，包括如下步驟 步驟I:獲得特利加壓素粗品； 步驟2 :取所述特利加壓素粗品預處理后，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以濃度為0. I 0. 8%的高氯酸和濃度為0. 01 0. 08%硫酸水溶液制得混合溶液，用堿調(diào)節(jié)所述混合溶液的PH值為2. 0 3. 5后作為A相，以乙腈為B相，按照B相為10% 40%的梯度進行洗脫，制得特利加壓素第二粗品； 步驟3 :取所述特利加壓素第二粗品，采用離子交換法轉(zhuǎn)鹽，即得。
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于，所述特利加壓素粗品由液相合成法或固相合成法合成。
3.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于，步驟2中所述預處理為取有機溶劑溶解所述特利加壓素粗品，加入抗氧化劑獲得特利加壓素粗品溶液。
4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2中所述有機溶劑的濃度為20 100% o
5.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，以g/L計，步驟2中所述特利加壓素粗品與所述有機溶劑的質(zhì)量體積比為20 100 :1。
6.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2中所述特利加壓素粗品與所述抗氧化劑的質(zhì)量比為100:2 8。
7.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2中所述A相與所述B相的體積比為10 79:80。
8.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2中所述預處理還包括取所述特利加壓素粗品溶液加水獲得特利加壓素粗品第二溶液，所述特利加壓素粗品第二溶液中所述有機溶劑的體積百分數(shù)低于20%。
9.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2中所述有機溶劑為乙腈或甲醇。
10.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2中所述抗氧化劑為抗壞血酸或抗壞血酸鹽中的一種或兩者以上的混合物。
11.根據(jù)權利要求10所述的方法，其特征在于，步驟2中所述抗壞血酸鹽為抗壞血酸鈉、抗壞血酸鉀。
12.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于，步驟3中所述轉(zhuǎn)鹽包括如下步驟 步驟a:取堿溶液活化樹脂，獲得活化后的樹脂，取所述特利加壓素第二粗品加入到所述活化后的樹脂中混合，過濾收集第一濾液； 步驟b :收集過濾后的樹脂用水清洗，過濾后收集清洗液； 步驟c :取所述清洗液與所述第一濾液合并，經(jīng)第一濃縮獲得第一濃縮液，取所述第一濃縮液重復步驟a、步驟b，獲得第二濾液； 步驟d :取所述第二濾液加入冰醋酸，經(jīng)第二濃縮后獲得第二濃縮液、凍干。
13.根據(jù)權利要求12所述的方法，其特征在于，所述樹脂為強堿型陰離子交換樹脂。
14.根據(jù)權利要求12所述的方法，其特征在于，所述特利加壓素第二粗品與所述活化后的樹脂的質(zhì)量比為5 15:100。
15.根據(jù)權利要求12所述的方法，其特征在于，以g/mL計，所述第二濾液與所述冰醋酸的質(zhì)量體積比為1:0. 025 0. I。
16.根據(jù)權利要求12所述的方法，其特征在于，所述第一濃縮液的濃度為20 IOOmg/mLo
17.根據(jù)權利要求12所述的方法，其特征在于，所述第二濃縮液的濃度為50 200mg/mLo
全文摘要
本發(fā)明涉及多肽純化領域，特別涉及一種純化特利加壓素的方法。該方法通過預處理特利加壓素粗品，經(jīng)純化、轉(zhuǎn)鹽后獲得純度達99.5%以上的特利加壓素。本發(fā)明提供的純化特利加壓素方法操作簡單易行，獲得的特利加壓素純度高(可達99.5%以上，且最大單雜小于0.1%)、收率高(純化收率可達85%以上，總收率可達50%以上)，符合產(chǎn)業(yè)化要求，一批次可獲得1000克以上的精肽。
文檔編號C07K1/36GK102731625SQ201210214758
公開日2012年10月17日 申請日期2012年6月27日 優(yōu)先權日2012年6月27日
發(fā)明者袁建成, 覃亮政, 趙忠衛(wèi), 馬亞平 申請人:深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司