專利名稱：一種制備高純度黃芩苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本專利涉及的是一種可用做制藥工業(yè)的原料藥的制備方法，具體涉及的是高純度黃芩苷(Baicalin)的制備方法。
背景技術(shù)：
黃芩為唇形科植物黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的干燥根，為常用中藥，其根性寒味苦，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效。臨床上廣泛用于肺熱、咯血、 腸炎痢疾、黃疽、高血壓及化膿性感染等癥。黃芩苷是黃芩中主要的藥用成分，具有多種顯著的生物活性，包括抗炎、抗病毒、抗腫瘤、化學(xué)預(yù)防等。黃芩苷作為藥物在臨床上用于肺炎、肝炎、感染等疾病，如黃芩苷片，黃芩苷膠囊等。黃芩苷的結(jié)構(gòu)式如下
6COOH^^
OH O近年來(lái)文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于黃芩苷制備的方法主要有高速逆流色譜法(Haitao Lu, Yue Jiang. Feng Chen. Journal of Chromatography A,1017(2003) :117-123 ；Sujuan Wu, Ailing Sun, Renmin Liu. Journal ofChromatographyA, 1066 (2005) :243-247.), Sft^ 法的缺點(diǎn)是要求特殊儀器，制備過(guò)程繁瑣，制備大量的目標(biāo)產(chǎn)物所耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)；其次還有 ^0^ - (Huiru Dong, Pengyu Bi, Shihui Wang. Analytical Letters, 38 (2005) 257—270 ；Emika Ohkoshi, Tomomi Nagashima, et al. Journal of Chromatography A, 1216(2009) :2192-2194.),其缺點(diǎn)是制備過(guò)程中需要大量有機(jī)溶劑，會(huì)對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重污染；文獻(xiàn)也報(bào)道了應(yīng)用超臨界流體萃取方法來(lái)制備黃芩中的主要成分(Mei-Chih Lin, Ming-Jer Tsai，Kuo-Ching Wen. Journal of Chromatography A,830 (1999) :387-395.)，但該方法所涉及的儀器昂貴，制約了其應(yīng)用，其次是儀器限流管易堵塞，當(dāng)樣品水分過(guò)大或提取物中有的成分粘度過(guò)高，容易將毛細(xì)管堵塞，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致限流管報(bào)廢；《中華人民共和國(guó)藥典MOlO版第一部記載的黃芩提取物的制備方法是目前較為有效的獲得黃芩苷粗品的方法，但其過(guò)程中涉及到強(qiáng)酸強(qiáng)堿，對(duì)黃芩苷的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性會(huì)有一定的影響，生產(chǎn)過(guò)程會(huì)產(chǎn)生大量的酸堿廢液，且黃芩苷的含量?jī)H為80%左右(中國(guó)藥典委員會(huì)，《中華人民共和國(guó)藥典》，2010版第二部，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，北京，2010 282.)。大孔吸附樹脂是20世紀(jì)70年代末發(fā)展起來(lái)的一類有較好吸附性能的有機(jī)高聚物吸附劑，最早用于廢水處理、化學(xué)工業(yè)、分析化學(xué)、臨床檢定和治療等領(lǐng)域。近年來(lái)大孔吸附樹脂技術(shù)在中藥及中藥復(fù)方化學(xué)成分的提取、分離純化，制劑工藝改革、制劑質(zhì)量分析等方面有了較廣泛的應(yīng)用研究。大孔吸附樹脂具有其獨(dú)特的吸附性能，具有比表面積大，鍵合基團(tuán)的多樣性，操作簡(jiǎn)單，成本低，消耗的有機(jī)溶劑少，且大部分為乙醇，再生能力強(qiáng)，可以反復(fù)利用等特點(diǎn)[7]。近年來(lái)大孔吸附樹脂被廣泛應(yīng)用于多種植物次生代謝產(chǎn)物的富集和分畠中(Bin Zhang, Ruiyuan Yang, Yan Zhao, Chunzhao Liu. Journal of Chromatography B,867 (2008) :253-258 ；Guangtao Jia, Xiuyang Lu.Journal of Chromatography A, 1193(2008) 136-141 ；Chaoyang Ma,Guangjun Tao,et al. Separation and Purification Technology, 69 (2009) :22-28.)，其中包括黃酮類化合物。本課題組前期的實(shí)驗(yàn)主要是對(duì)黃芩水煎液進(jìn)行化學(xué)成分研究。藥材經(jīng)水提取后，利用大孔吸附樹脂吸附，水-乙醇梯度洗脫。我們發(fā)現(xiàn)某幾個(gè)梯度洗脫得到的流分經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后為黃色固體，且量比較大，進(jìn)行高效液相色譜分析后，發(fā)現(xiàn)這幾個(gè)流分主要含有一種成分，與黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照顯示，該成分為黃芩苷。為此我們對(duì)利用大孔吸附樹脂進(jìn)行黃芩苷的制備做了深入的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服以上陳述方法所存在的缺點(diǎn)，提供一種簡(jiǎn)單有效的黃芩苷制備方法。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)用黃芩產(chǎn)地為河北省，購(gòu)于沈陽(yáng)成大方圓醫(yī)藥連鎖店，經(jīng)沈陽(yáng)藥科大學(xué)孫啟時(shí)教授鑒定為唇形科植物黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)，黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)生物藥品制品檢定所(40mg, CAS RegistryNo. 715-200111)。本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的(1)、取黃芩藥材，加入蒸餾水，蒸餾水與藥材體積質(zhì)量比為6-20，加熱至 60-100°C進(jìn)行提取，提取時(shí)間為1-4小時(shí)，提取次數(shù)為1-3次。O)、提取液直接利用大孔吸附樹脂吸附，先用水洗脫，再用低濃度的乙醇水進(jìn)行洗脫除雜質(zhì)，除雜后繼續(xù)用較高濃度的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液。(3)、得到的洗脫液濃縮凍干，進(jìn)行重結(jié)晶。得到的產(chǎn)品經(jīng)高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，純度在98%以上。其中，步驟O)中洗脫除雜所用的乙醇水濃度為10-30%，除雜后繼續(xù)洗脫的乙醇水比例為20-60%。步驟⑵中所述的大孔樹脂選自非極性樹脂、弱極性樹脂、中等極性樹脂、極性樹脂，所述的非極性樹脂選自HPD-100、HPD-300、D-101，弱極性樹脂選自AB_8、HPD-450，中等極性樹脂選自HPD750、DM130極性樹脂選自HPD-500、HPD600。本發(fā)明的內(nèi)容之一是篩選10種不同型號(hào)的大孔吸附樹脂，以期得到一種能夠?qū)S芩苷進(jìn)行選擇性吸附的樹脂。樹脂篩選操作步驟如下將IOOmL樣品溶液(黃芩苷濃度為0. 8580mg/mL)和水飽和的樹脂Ig (干重)置于250mL容量瓶中，置于搖床12h，溫度為 25°C，轉(zhuǎn)速為120rpm。樣品溶液HPLC進(jìn)行分析。樹脂先用水洗，再加入IOOrn 70%乙醇水進(jìn)行解吸附，搖床設(shè)定條件同上，12h后解吸附溶液進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算樹脂的吸附量、解吸附量及其解吸附率，綜合評(píng)定，確定最佳目標(biāo)樹脂型號(hào)為HPD-100，其次為D-101，AB-8, HPD-300 等。本發(fā)明的內(nèi)容之二是制備黃芩苷粗品。將一定量的樣品溶液加入到處理好的樹脂柱，進(jìn)行吸附，流速為2BV/h (BV :bed volume,柱床體積)，吸附完全后，先用5BV的水進(jìn)行洗脫，再用5BV 10-30%的乙醇水洗脫除雜質(zhì)，優(yōu)選濃度為10%，之后用5BV20-60%的乙醇水洗脫，優(yōu)選濃度為40%，得到的洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥，得到黃芩苷粗品。
本發(fā)明的內(nèi)容之三是對(duì)所得到的黃芩苷粗品進(jìn)行重結(jié)晶，所用溶劑系統(tǒng)為乙醇水乙酸混合溶液，其中乙醇與水的比例為1 9至9 1之間的某一比例。重結(jié)晶的產(chǎn)品純度大于98. 0%。綜上所述，我們得到的技術(shù)路線操作簡(jiǎn)單、大孔樹脂可再生利用，成本更低、更綠色環(huán)保、分離效率更高，更適合黃芩苷的工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明中樹脂篩選結(jié)果圖；圖2為本發(fā)明黃芩提取物的高效液相色譜圖；圖3為本發(fā)明黃芩苷粗品的高效液相色譜圖；圖4為本發(fā)明黃芩苷產(chǎn)品的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明可通過(guò)下面的實(shí)施例加以說(shuō)明。本發(fā)明中高效液相測(cè)定方法如下使用儀器類型高效液相色譜洗脫方式梯度洗脫檢測(cè)器紫外檢測(cè)器儀器型號(hào)=Shimadzu LC20檢測(cè)波長(zhǎng)277nm 進(jìn)樣量20μ L 流速lmL/min柱溫室溫柱型號(hào)YMC_pack C18 柱 Q5(toimX4· 6讓 I. D.，5 μ m)積分方法面積歸一法液相色譜梯度洗脫流程
權(quán)利要求
1.一種制備高純度黃芩苷的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)、取黃芩藥材，加入適量水，加熱提取，得提取液；O)、提取液直接用大孔吸附樹脂吸附，用10-30%的乙醇水進(jìn)行洗脫除雜質(zhì)，繼續(xù)用 20-60%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液；(3)、得到的洗脫液濃縮凍干，進(jìn)行重結(jié)晶。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中加熱至60-100°C。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中提取1-4小時(shí)。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中提取次數(shù)為1-3次。
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的大孔樹脂選自非極性樹脂、弱極性樹脂、中等極性樹脂、極性樹脂。
6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述蒸餾水與藥材的體積質(zhì)量比為6-20。
7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的大孔吸附樹脂型號(hào)選自 HPD-100、HPD-300、D-101、HPD-450、AB-8、HPD-750、DM-130, HPD-500、HPD-600。
8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中將樣品溶液加入到處理好的樹脂柱，進(jìn)行吸附，吸附完全后，先用水進(jìn)行洗脫，再用10-30%的乙醇水洗脫除雜質(zhì)，之后用20-60%的乙醇水洗脫，收集洗脫液。
9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，洗脫除雜質(zhì)的乙醇水濃度為10%。
10.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，除雜后洗脫的乙醇水濃度為40%。
11.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的重結(jié)晶溶劑系統(tǒng)為乙醇/水/乙酸的混合溶劑系統(tǒng)，其中乙醇與水的比例為1 9至9 1之間的某一比例。
12.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的重結(jié)晶所用的溶劑系統(tǒng)，其比例為乙醇/水/乙酸G 6 1)，乙醇/水/乙酸(3 7 1)，乙醇/水/乙酸O 8 1)，乙醇/水/乙酸(1 9 1)，乙醇/水/乙酸(5 5 1)，乙醇/水/ 乙酸(6 4 1)，乙醇/水/乙酸(7 3 1)，乙醇/水/乙酸(8 2 1)，乙醇/水 /乙酸(9 1 1)中的一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備高純度黃芩苷(Baicalin)的簡(jiǎn)單有效的方法，該方法涉及一種藥材的提取方法，藥材用水溶液進(jìn)行提取，得到的提取液經(jīng)已篩選好的某一型號(hào)大孔吸附樹脂吸附，用0-30％的乙醇水洗脫除掉雜質(zhì)，繼續(xù)用40-60％的乙醇水洗脫，洗脫液減壓濃縮后冷凍干燥，得到黃芩苷含量大于80％的粗品，該粗品用乙醇/水/乙酸溶劑系統(tǒng)在進(jìn)行重結(jié)晶，得到的產(chǎn)品為淡黃色，經(jīng)高效液相檢測(cè)，純度在98％以上。本發(fā)明所提供的方法工藝簡(jiǎn)單，成本低，條件溫和，環(huán)境友好，更適合于高純度黃芩苷的工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H17/07GK102584918SQ20111046233
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2011年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月31日
發(fā)明者康寧, 杜占權(quán), 王琨, 邱峰, 陳麗霞 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)