專利名稱：一種老鼠瓜苷a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種老鼠瓜苷A的制備方法，特別是涉及一種應(yīng)用高速逆流色譜法純化老鼠瓜苷A的制備方法。
背景技術(shù)：
刺山柑C^TAari1S spinosa L.為白花菜科山柑屬植物，又名老鼠瓜、野西瓜，主要分布于亞洲西部、歐洲、北美和大洋洲，我國(guó)主產(chǎn)西北干旱地區(qū)，新疆各沙漠區(qū)分布較多。其味辛苦，性溫，具有祛風(fēng)散寒、除濕、止痛、調(diào)經(jīng)、消腫的作用，主要用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng)。現(xiàn)代藥理研究表明，老鼠瓜水提物具有保肝、降糖、降血脂、抗菌和清除自由基等作用。其抗菌消炎主要成分為糖苷類化合物，有corchoionoside C, spionoside A、 spionoside B、老鼠瓜苷A等。目前，對(duì)刺山柑的研究仍在起步階段，尚未見老鼠瓜苷A工業(yè)生產(chǎn)方法的相關(guān)專利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種老鼠瓜苷A的制備方法，應(yīng)用高速逆流色譜分離純化老鼠瓜苷A，操作簡(jiǎn)單、產(chǎn)品純度高。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一種老鼠瓜苷A的制備方法，提取、脫色、柱層析、高速逆流色譜分離等步驟，具體步驟如下
(1)提取以刺山柑地上部分為原料，以乙醇溶液為提取溶媒，回流提取2-3次，過濾得到提取液；
(2)脫色提取液中加入活性炭，在70°C下保溫脫色30-60min，濾除活性炭，減壓濃縮， 回收乙醇，得到濃縮液；
(3)柱層析濃縮液通過大孔吸附樹脂柱，用水和40-60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液， 濃縮干燥得到老鼠瓜苷A粗品；
(4)高速逆流色譜分離采用高速逆流色譜法對(duì)所得粗品進(jìn)行分離純化，制備得到老鼠瓜苷A。所述步驟(1)中乙醇溶液濃度為60-75%。所述步驟(2)中活性炭為藥用活性炭，用量為藥材質(zhì)量的2-5%。所述步驟(3)中的大孔吸附樹脂為AB-8、HPD100或ADS-7型。所述步驟(4)中高速逆流色譜法分離溶劑系統(tǒng)選用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水， 體積比為(10-12): (4-6) (5-8) (4-8)，溶劑系統(tǒng)配制后靜置分層，以上相為固定相， 下相為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速控制在1. 5-3ml/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速控制在800-950r/min。本發(fā)明的有益效果是采用大孔吸附樹脂和高速逆流色譜法分離純化，工藝簡(jiǎn)單、 成本低、產(chǎn)品含量高。
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下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施例。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
以刺山柑地上部分為原料，粉碎，取3kg，加入8L75%乙醇溶液，回流提取2次，過濾得到提取液，提取液中加入洲藥材質(zhì)量的藥用活性炭，在70°C下保溫脫色30min，濾除活性炭， 減壓濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用50%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流色譜法對(duì)所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為11 4 7 7配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-7K 溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至800r/min，泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在1.5ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測(cè)，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到老鼠瓜苷A6. 3g，含量97. 8%。實(shí)施例2:
以刺山柑地上部分為原料，粉碎，取3kg，加入7L60%乙醇溶液，回流提取3次，過濾得到提取液，提取液中加入5%藥材質(zhì)量的藥用活性炭，在70°C下保溫脫色60min，濾除活性炭，減壓濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，通過HPD100型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用40%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流色譜法對(duì)所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為10:4:7:5配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至850r/min，泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在3ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測(cè)，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到老鼠瓜苷A5. 2g，含量98. 5%。實(shí)施例3:
以刺山柑地上部分為原料，粉碎，取3kg，加入8L65%乙醇溶液，回流提取2次，過濾得到提取液，提取液中加入2、藥材質(zhì)量的藥用活性炭，在70°C下保溫脫色40min，濾除活性炭， 減壓濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，通過ADS-7型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用50%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流色譜法對(duì)所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為10 5 7 8配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至950r/min，泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在2. 5ml/min,將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測(cè)，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到老鼠瓜苷A5. 4g，含量98. 6%。實(shí)施例4:
以刺山柑地上部分為原料，粉碎，取3kg，加入5L60%乙醇溶液，回流提取3次，過濾得到提取液，提取液中加入5%藥材質(zhì)量的藥用活性炭，在70°C下保溫脫色60min，濾除活性炭， 減壓濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用40%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流
4色譜法對(duì)所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為11 5 5 8配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至800r/min，泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在2ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測(cè)，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到老鼠瓜苷A8. 7g，含量98. 1%。實(shí)施例5:
以刺山柑地上部分為原料，粉碎，取3kg，加入8L60%乙醇溶液，回流提取2次，過濾得到提取液，提取液中加入3%藥材質(zhì)量的藥用活性炭，在70°C下保溫脫色40min，濾除活性炭， 減壓濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，通過ADS-7型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用40%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流色譜法對(duì)所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為12 6 5 8配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至800r/min，泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在2ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測(cè)，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到老鼠瓜苷A9. 0g，含量97. 2%。實(shí)施例6:
以刺山柑地上部分為原料，粉碎，取3kg，加入5L75%乙醇溶液，回流提取3次，過濾得到提取液，提取液中加入5%藥材質(zhì)量的藥用活性炭，在70°C下保溫脫色50min，濾除活性炭，減壓濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，通過HPD100型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流色譜法對(duì)所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為10:4:5:7配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至850r/min，泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在3ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測(cè)，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到老鼠瓜苷A9. 9g，含量96. 3%。
權(quán)利要求
1.一種老鼠瓜苷A的制備方法，提取、脫色、柱層析、高速逆流色譜分離等步驟，具體步驟如下(1)提取以刺山柑地上部分為原料，以乙醇溶液為提取溶媒，回流提取2-3次，過濾得到提取液；(2)脫色提取液中加入活性炭，在70°C下保溫脫色30-60min，濾除活性炭，減壓濃縮， 回收乙醇，得到濃縮液；(3)柱層析濃縮液通過大孔吸附樹脂柱，用水和40-60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液， 濃縮干燥得到老鼠瓜苷A粗品；(4)高速逆流色譜分離采用高速逆流色譜法對(duì)所得粗品進(jìn)行分離純化，制備得到老鼠瓜苷A。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種老鼠瓜苷A的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中乙醇溶液濃度為60-75%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種老鼠瓜苷A的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中活性炭為藥用活性炭，用量為藥材質(zhì)量的2-5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種老鼠瓜苷A的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中的大孔吸附樹脂為AB-8、HPD100或ADS-7型。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種老鼠瓜苷A的制備方法，其特征在于所述步驟(4)中高速逆流色譜法分離溶劑系統(tǒng)選用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為(10-12): (4-6): (5-8): (4-8)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速控制在 1. 5-3ml/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速控制在 800_950r/min。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種老鼠瓜苷A的制備方法，以刺山柑為原料，經(jīng)提取、脫色、柱層析、高速逆流色譜分離等步驟純化制備老鼠瓜苷A。本方法制備的老鼠瓜苷A純度高于96%，且具有簡(jiǎn)便、快速、制備量大、樣品損失少等優(yōu)點(diǎn)，易于推廣使用。
文檔編號(hào)C07H17/02GK102391331SQ20111022658
公開日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2011年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月9日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司