專利名稱：一種特女貞苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從女貞子中提取特女貞苷粗品(> 80% )和高純度特女貞苷(> 98% )的方法。
背景技術(shù)：
女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果實(shí)。女貞子主要含有三萜類、醚萜類、苯乙醇類、黃酮類等化學(xué)成分。特女貞苷，英文名為Specnuezhenide， 為女貞子中一種裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷，特女貞苷作為專屬性較強(qiáng)的一個(gè)成分，首次收載為2010 版中國藥典女貞子藥材含量測定的指標(biāo)成分，其分子式為C31H42O17，分子量為686. 5，它在女貞子中是一個(gè)含量較高的成分，其藥理研究較少，研究發(fā)現(xiàn)其有免疫調(diào)節(jié)、抗突變等藥理作用。目前文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于特女貞苷的分離純化方法較少，見有一項(xiàng)公開的發(fā)明專利 CN101704857A，該項(xiàng)專利涉及從女貞子中分離純化得到高純度特女貞苷的方法，該方法主要為用乙醇提取，然后用石油醚、氯仿、正丁醇、有機(jī)溶劑萃取，經(jīng)大孔樹脂純化，再用反相硅膠純化而得。該方法能分離純化得到高純度的特女貞苷，但是流程和操作相對較為復(fù)雜， 同時(shí)不適合大量制備純度較高的特女貞苷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種規(guī)?；?、流程簡單制備特女貞苷生粗品和高純度特女貞苷的工藝路線和方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為1)粉碎取女貞子藥材，置干燥箱中干燥，取出放冷，粉碎機(jī)粉碎，過三號篩，得女貞子藥材粉末。2)提取取女貞子粉，每次加水5-10倍煎煮池，提取3次，過濾，合并三次濾液。3)大孔樹脂純化取女貞子提取液，濃縮至上樣液濃度約為0. 5g藥材/ml，上樣， 先用水為洗脫液洗脫，棄去水洗脫液，再用20% -40%乙醇洗脫，收集洗脫液。4)乙醇沉淀將大孔樹脂洗脫液濃縮至流浸膏狀，取工業(yè)酒精(95%乙醇)適量調(diào)整乙醇濃度為80% -95%，充分振搖混合，放置沉淀，過濾，取濾液蒸干。5)硅膠柱純化先用正相硅膠柱純化，濕法裝柱，干法上樣，洗脫液為三氯甲烷-甲醇5 1。制得更高純度特女貞苷則需用反向硅膠柱純化，流動(dòng)相為甲醇-水 30 70。


附圖為制備特女貞苷的工藝路線圖。
具體實(shí)施方式
以下參照實(shí)施例來說明本發(fā)明，本實(shí)施例僅用于更好的說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的發(fā)明范圍。下述實(shí)施例中的高效液相含量測定方法的具體方法參照《中國藥典》2010版一部中規(guī)定的含量測定方法，結(jié)合方法學(xué)考察，最終確定的可行的HPLC含量測定條件為色譜柱ZorbaxC18柱(5 μ m, 4. 6 X 150mm)流動(dòng)相甲醇-水(30 70, ν/ν)流速1. Oml · min-1檢測波長2Mnm柱溫35°C。所用女貞子藥材按照《中國藥典》2010版女貞子項(xiàng)下的含量測定方法測得特女貞苷的含量為2. 13%，按照本發(fā)明的提取方法測得女貞子藥材中特女貞苷的含量為3. 23%。實(shí)施例一取女貞子藥材10kg，粉碎，先后加10倍、8倍、8倍藥材量水煎煮3次，每次煎煮 2h，分別每次過濾并合并濾液，濾液適當(dāng)濃縮；濃縮液上樣于D-101大孔樹脂柱上，先以水洗脫，棄去水洗液，再用20%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至流浸膏狀；加甲醇充分?jǐn)嚢瑁胖贸恋?，過濾，濾液蒸干；最后用正相硅膠柱和反向硅膠柱分離純化得到一純度達(dá)到98% 的化合物約^g，結(jié)合核磁共振波譜鑒定結(jié)果和已有文獻(xiàn)研究譜圖數(shù)據(jù)，確定該化合物為特女貞苷。實(shí)施例二取女貞子藥材，粉碎；稱得203g，加水400ml浸泡30min，再加水1200ml提取2h， 過濾，再分別加水1600ml提取兩次，過濾，合并三次濾液，濾液濃縮至約400ml ；上樣于 D-101大孔樹脂柱，先用水洗脫，棄去水洗脫液，再用40%乙醇洗脫，洗脫液濃縮至流浸膏狀(約40ml)；加入工業(yè)酒精(95%乙醇)200ml，充分?jǐn)嚢钃u勻，放置池沉淀，過濾，濾液蒸干；再用正相硅膠色譜柱純化，得到的特女貞苷粗品3. 375g，純度為81. 18%，此時(shí)的收率為63. 61%，再用反向硅膠色譜柱純化，得到的特女貞苷純品1.440g，純度為98. 13%，此時(shí)的收率為21. 55%。實(shí)施例三按照專利CN101704857A制備特女貞苷的方法，取已粉碎女貞子藥材227g，純化得到特女貞苷純品1.853g，HPLC含量測定得其含量為98. 40%，此時(shí)特女貞苷的收率為 20.03%。對比發(fā)現(xiàn)發(fā)明專利CN101704857A制備特女貞苷的收率略低于本專利方法。實(shí)施例二制得特女貞苷純品1.440g，純度為98. 13%，參照實(shí)驗(yàn)室購進(jìn)各試劑和材料的價(jià)格計(jì)算其成本為799. 3元/g ；專禾Ij CN101704857A制備方法制得特女貞苷純品1. 853g， 含量為98. 40%,同實(shí)施例二的成本計(jì)算方法計(jì)算成本為925. 0元/g。當(dāng)加大投藥量至 IOOkg時(shí)，成本進(jìn)一步降低，結(jié)合各試劑和材料的市場價(jià)格進(jìn)一步合理的推算和計(jì)算得本專利制備特女貞苷的成本可降至約608元/g，專利CN101704857A可以降低至約766元/ go由上可知本專利不但能夠制備高純度的特女貞苷，而且收率高，其成本也有明顯的降低。分別對以上三個(gè)實(shí)施例樣品1HNMR譜圖和13C NMR譜圖的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，其譜圖數(shù)據(jù)一致=1H-WR(600MHz，CD30D) δ 7. 58 (1Η, s, H-3)，7. 12 (2H, dd, J = 8. 5，1. 9Hz, H_4"‘ 禾口 H-8" ‘ ) ,6. 76 (2H, dd, J = 8. 5,1. 9Hz, H-5"‘禾口 H—7" ‘ ) ,6. 15 (1H, q, J = 6. 8Hz,H-8), 5. 98(lH,br. s，H_l)，4· 87(lH，d，J = 7. 4Ηζ，Η_1' )，4· 37(lH，d，J = 7. 4Hz，H_l〃 )， 4. 28 (1H, dd, J = 11. 9,5. 8Hz，H_l〃 ' ) ,4. 27 (1H，m，H_5)，3. 94 (1H, dd, J = 12. 2,5. 8Hz, H-I “ ' ) ,4. 42-3. 39 (10H, m, sugars)，3. 75 (3H, s, -0CH3)，3. 61 (1H, m, H_5)，2. 91 (2H, m, H-2" ' ) ,2. 82 (1H, dd, J = 14. 3,4. 9Hz, H_6)，2. 55 (1H，dd, J = 14. 3,4. 9Hz, H_6)， 1. 66 (3H, d, J = 7. 2Hz, H-10) ； 13C-WR(150MHz，CD30D) : δ 173. 2 (C_7)，168. 9 (C-ll)， 156. 9(C-6 " ' )，153.6(C-3)，131. l(C-4 〃 ‘，C_8 〃 ' )，130. 7 (C_8)，125. 1 (C_9)， 116. 3(C-5 “ ‘，C-7 〃 ' )，109. 6(C-4)，104. 5(C-1 〃 ),101. O (C-l ' ) ,95. 3 (C-I), 78. 5 (C-5 ' ) ,78. 1 (C_3 ' ), 78. O (C_3 “ ),75.3 (C_5 “ ),75.1 (C_2 ' ), 74. 9 (C_2 “)， 71. 7(C-4 ' )，72.3(C-4〃 ) ,71. 6 (C-l " ' ),65.2 (C-6 " ) ,62. 8(C-6 ' ),52.1 (OMe), 41.5(C-6)，36.5(C-2" ' )，31. 9 (C_5)，13. 9 (C-10)。其 NMR數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[1]特女貞苷 (Nuezhenide)的波譜數(shù)據(jù)一致，確定該化合物為特女貞苷。
權(quán)利要求
1.一種特女貞苷的制備方法，其特征是包括以下步驟1)粉碎取女貞子，置干燥箱中干燥，放冷，粉碎機(jī)粉碎，過三號篩；2)提取取步驟1)中的女貞子粉，加水煎煮，過濾，濃縮；3)大孔樹脂純化取步驟幻中的濃縮液，上大孔樹脂柱，洗脫，濃縮；4)乙醇沉淀將步驟幻中大孔樹脂洗脫濃縮液進(jìn)行乙醇沉淀，沉淀后過濾，濾液濃縮至干膏；5)硅膠柱純化取步驟4)中干膏，用正相硅膠柱色譜法純化，得到特女貞苷粗品；用反向硅膠柱色譜法進(jìn)行純化得到高純度的特女貞苷。
2.如權(quán)利要求1所述的特女貞苷的制備方法，其特征在于步驟2)的提取方法為加水煎煮3次，每次煎煮池，每次水用量為5-10倍藥材量。
3.如權(quán)利要求1所述的特女貞苷的制備方法，其特征在于步驟3)中大孔樹脂上樣液濃度為0. 3-0. 7g藥材/ml。
4.如權(quán)利要求1所述的特女貞苷的制備方法，其特征在于步驟3)的洗脫順序?yàn)橄扔盟疄橄疵撘合疵摚瑮壢ニ疵撘?，再?0% -40%乙醇洗脫，收集洗脫液。
5.如權(quán)利要求1所述的特女貞苷的制備方法，其特征在于步驟3)的洗脫液濃縮程度為濃縮至流浸膏狀。
6.如權(quán)利要求1所述的特女貞苷的制備方法，其特征在于步驟4)醇沉過程中溶液乙醇濃度為70% -95%。
7.如權(quán)利要求1所述的特女貞苷的制備方法，其特征在于步驟5)用的正相硅膠色譜純化中流動(dòng)相為三氯甲烷-甲醇5 1 3 1。
8.如權(quán)利要求1所述的特女貞苷的制備方法，其特征在于步驟5)用的反相硅膠色譜純化中流動(dòng)相為甲醇-水溶液，甲醇濃度為20% 40%。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從女貞子中提取特女貞苷粗品(＞80%)和高純度特女貞苷(＞98%)的方法。用女貞子為原料，先粉碎藥材，選用水煎煮提取的方法，提取液稍濃縮后用大孔樹脂柱純化，然后進(jìn)行醇沉處理，最后選用正相硅膠柱純化和反向硅膠柱純化來制得含量要求不同的特女貞苷。本方法可以規(guī)?；苽浜柯缘偷奶嘏戃?，收率高，操作簡單，成本低；也可以制備含量很高的特女貞苷，收率略低，成本較高，可以根據(jù)含量需要進(jìn)行選擇，同時(shí)兩種方法制備的原料材料和試劑部分可以重復(fù)利用，制備成本低于現(xiàn)有制備方法。
文檔編號C07H17/04GK102372754SQ201110337108
公開日2012年3月14日 申請日期2011年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月31日
發(fā)明者張國林, 王飛, 章從恩, 陳前鋒 申請人:中國科學(xué)院成都生物研究所