專(zhuān)利名稱(chēng)：治療血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及利用低劑量的解聚素變體治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的組合物和方法。
背景技術(shù)：
整聯(lián)蛋白是異源二聚體的基質(zhì)受體，其將細(xì)胞錨定至底物并且將外形上產(chǎn)生的信號(hào)從質(zhì)膜的一端傳遞至另一端。整聯(lián)蛋白ανβ 3是為玻璃體結(jié)合蛋白的受體的一類(lèi)整聯(lián)蛋白。整聯(lián)蛋白ανβ 3在大多數(shù)正常細(xì)胞包括腸細(xì)胞、血管細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中以低水平表達(dá)。表達(dá)高水平的這一異二聚體分子的細(xì)胞類(lèi)型包括骨吸收破骨細(xì)胞、活化的巨噬細(xì)胞、一小部分嗜中性粒細(xì)胞、血管生成內(nèi)皮細(xì)胞和遷移的平滑肌細(xì)胞。整聯(lián)蛋白ανβ3體內(nèi)和體外都參與破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收，以及新的血管形成。這一異源二聚體分子識(shí)別骨基質(zhì)
解聚素是與血小板和其他細(xì)胞包括血管內(nèi)皮細(xì)胞和一些腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的整聯(lián)蛋白allbi3 3、a5i31和ανβ3特異性結(jié)合的低分子量的包含RGD的肽家族。不同的解聚素是本領(lǐng)域中已知的，包括馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白(rhodostomin)及其變體，其包含但不限于ARLDDL。血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病是與來(lái)自預(yù)先存在的血管的新的血管生長(zhǎng)相關(guān)的眼部疾病。這些疾病包括但不限于年齡相關(guān)的黃斑退行性病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病、角膜新血管形成疾病、視網(wǎng)膜血管瘤增殖、息肉樣脈絡(luò)膜血管病變、缺血誘導(dǎo)的新血管形成視網(wǎng)膜病、高度近視和早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病。因?yàn)楝F(xiàn)有的藥物在血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的治療中并不是令人滿(mǎn)意地有效，所以有對(duì)這些疾病的新的治療的需要。

發(fā)明內(nèi)容
通常，本發(fā)明涉及利用低劑量的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的組合物和方法。術(shù)語(yǔ)“低劑量”是指比常規(guī)用于血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的治療的那些更低的劑量。優(yōu)選地，“低劑量”是每眼約O. OOOlpg至約300ug,更優(yōu)選地每眼約O. 005pg至約200ug以及甚至更優(yōu)選地每眼約O. OOlpg至約IOOug的適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒
蛋白變體。劑量可作為每周一次、每月一次、每季度一次或每年一次的劑量施用于有需要的受治療者。優(yōu)選地，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體與人類(lèi)血清白蛋白(HSA)或HSA的變體融合。如本申請(qǐng)中通篇所使用的，術(shù)語(yǔ)“馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體”涵蓋與可聚乙二醇化或以其他方式修飾的HSA或HSA變體融合的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。適于本發(fā)明中使用的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO :1至SEQ ID NO:16的氨基酸序列或者所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽。SEQ ID NO 1表示“ARGDDP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48ARGDDP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO :2表示“ARGDDV”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48ARGDDV53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO :3表示“ARGDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48ARGDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO :4表示“PRGDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD 基序變體48PRGDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO :5表示“ARGDDM”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48ARGDDM53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO :6表示“PRGDDM”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48PRGDDM53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO :7表示“PRLDMP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48PRLDMP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO :8表示“PRLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48PRLDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO :9表示“ARLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48ARLDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO 10表示“PRIDMP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48PRIDMP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO : 11表示“PRHDMP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48PRHDMP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO 12表示“PRGDNP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48PRGDNP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO 13表示“PRGDGP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其是具有RGD基序變體48PRGDGP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO : 14表示與HSA軛合的“ARLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO : 15表示與HSA變體軛合的“ARLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其中野生型HSA氨基酸序列的位點(diǎn)34處的半胱氨酸殘基已經(jīng)由絲氨酸代替。由SEQID NO : 15表示的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體還可稱(chēng)為HSA(C34S)-ARLDDL融合蛋白。所述蛋白是下列的融合產(chǎn)物a)HSA變體，其中HSA氨基酸序列的位點(diǎn)34處的半胱氨酸殘基已經(jīng)由絲氨酸代替，b)接頭氨基酸序列和c) ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。SEQ ID NO : 16表示與HSA變體軛合的“ARLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列，其中野生型HSA氨基酸序列的位點(diǎn)34處的半胱氨酸殘基已經(jīng)由丙氨酸代替。相應(yīng)地，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的組合物，所述組合物包含約O. OOOlpg至約300ug的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ IDNO :1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。
最優(yōu)選地，適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含SEQ ID NO :9或SEQID NO 15o優(yōu)選地,本發(fā)明的組合物包含約O. 005pg至約200ug以及更優(yōu)選地約O. OOlpg至約IOOug的適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物被配制為局部組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物適于眼內(nèi)注射(即，至眼中)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用所述受治療者的每眼約O. OOOlpg至約300ug的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO :1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用所述受治療者的每眼約O. OOOlpg至約300ug的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 15的氨基酸序列。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用所述受治療者的每眼約O. 0005pg至約200ug的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO :1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用所述受治療者的每眼約O. OOlpg至約IOOug的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO :1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。優(yōu)選地，本發(fā)明的方法包括施用所述受治療者每眼約O. 005pg至約300ug以及更優(yōu)選地約O. OOlpg至約IOOug的適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括通過(guò)對(duì)所述受治療者的玻璃體內(nèi)注射施用適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病選自由年齡相關(guān)的黃斑退行性病變(AMD)、糖尿病性視網(wǎng)膜病、角膜新血管形成疾病、視網(wǎng)膜血管瘤增殖、息肉樣脈絡(luò)膜血管病變、年齡相關(guān)的缺血誘導(dǎo)的新血管形成視網(wǎng)膜病、高度近視和早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病組成的組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法還包括施用治療上有效的量的另一種活性齊U。其他活性劑可在施用適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體之前，之時(shí)或之后施用。優(yōu)選地，其他活性劑選自由VEGF拮抗劑、抗血管發(fā)生劑、抗炎劑和類(lèi)固醇組成的組。本發(fā)明的組合物還可包括藥學(xué)上可接受的載體。從結(jié)合下文附圖的下文不同實(shí)施方案的描述來(lái)看這些和其他方面將是明顯的，盡管其中可進(jìn)行變化和修改而不背離本公開(kāi)內(nèi)容的新的概念的精神和范圍。應(yīng)當(dāng)理解的是前述的一般描述和下文的詳細(xì)描述都僅是示例性和說(shuō)明性的并且不限制所要求的發(fā)明。


圖I是顯示氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中的血管發(fā)生(B)、用ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病小鼠中減少的血管發(fā)生(C)和用HSA-ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病小鼠中減少的血管發(fā)生的一套四張照片。照片(A)是常氧(對(duì)照組)。箭頭指示血管概況(BVP)。圖IB是顯示用ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或HSA-ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中每個(gè)視網(wǎng)膜切片的減少的血管數(shù)目的圖。圖IC是顯示用ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或HSA-ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中每個(gè)視網(wǎng)膜切片的減少的內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目的圖。圖2A是顯示用HSA-ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體以10pg、0. Ipg和O. OOlpg的 量治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中每個(gè)視網(wǎng)膜切片的減少的血管數(shù)目的圖。圖2B是顯示用ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或HSA-ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體以10pg、0. Ipg和O. OOlpg的量治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中每個(gè)視網(wǎng)膜切片的減少的內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目的圖。圖3A是顯示與用Avastin 治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病小鼠相比用HSA-ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中減少的血管數(shù)目/視網(wǎng)膜切片的圖。圖3B是顯示與用Avastin⑧治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠相比用HSA-ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中減少的內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目/視網(wǎng)膜切片的圖。圖4A是顯示與用Avastin 治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠相比用HSA-ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中減少的血管數(shù)目/視網(wǎng)膜切片的圖。圖4B是顯示與用Avastin 治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠相比用HSA-ARLDDL馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中減少的內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目/視網(wǎng)膜切片的圖。發(fā)明詳述現(xiàn)在詳細(xì)描述本發(fā)明的不同實(shí)施方案。如說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中通篇所用的，除非上下文以另外的方式清楚地表明，“一(a)”、“一(an)”和“該(the) ”的含義包括復(fù)數(shù)引用。同樣，如說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中通篇所用的，除非上下文以另外的方式清楚地表明，“在……中”的含義包括“在……中”和“在……上”。此外，下文中更具體地定義本說(shuō)明書(shū)中所使用的一些術(shù)語(yǔ)。定義在本發(fā)明的上下文中以及在每個(gè)術(shù)語(yǔ)所使用的具體的上下文中，本說(shuō)明書(shū)中所使用的術(shù)語(yǔ)通常具有它們?cè)诒绢I(lǐng)域中的普通含義。下文或者在說(shuō)明書(shū)中的其他地方討論了用于描述本發(fā)明的某些術(shù)語(yǔ)，為醫(yī)師提供了關(guān)于本發(fā)明的描述的另外的指導(dǎo)。提供了某些術(shù)語(yǔ)的同義詞。一個(gè)或多個(gè)同義詞的列舉不排除其他同義詞的使用。本說(shuō)明書(shū)中任何地方的實(shí)例(包括本文所討論的任何術(shù)語(yǔ)的實(shí)例)的使用僅為說(shuō)明性的并且不以任何方式限制本發(fā)明或任何示例性的術(shù)語(yǔ)的范圍和含義。本發(fā)明不限于本說(shuō)明書(shū)中所給出的不同實(shí)施方案。除非以另外的方式定義，本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域中的一名一般技術(shù)人員通常所理解的相同的含義。在矛盾的情況下，以本文件包括定義為準(zhǔn)。術(shù)語(yǔ)“左右”、“約”或“近似”通常意指在所給出的值或范圍的20個(gè)百分比之內(nèi)，10個(gè)百分比之內(nèi)，5、4、3、2或I個(gè)百分比之內(nèi)。給出的以數(shù)字表示的數(shù)量是近似的，意指即使沒(méi)有明確表明也可意味著術(shù)語(yǔ)“左右”、“約”或“近似”。本申請(qǐng)通篇中術(shù)語(yǔ)“肽”和“蛋白”可交換使用。
本申請(qǐng)通篇中術(shù)語(yǔ)“低劑量”和“低量”可交換使用。術(shù)語(yǔ)“受治療者”和“哺乳動(dòng)物”包括但不限于人類(lèi)。術(shù)語(yǔ)“治療”是指哺乳動(dòng)物中疾病的救濟(jì)方法的任何施用或應(yīng)用并且包括抑制疾病、停止其發(fā)展、緩解疾病，例如通過(guò)引起退行，或者恢復(fù)或修復(fù)失去缺少的或有缺陷的功能，或者激活無(wú)效的程序。術(shù)語(yǔ)包括在哺乳動(dòng)物中獲得所期望的藥理學(xué)和/或生理學(xué)作用，覆蓋病理病況或病癥的任何治療。作用可以是就完全或部分預(yù)防病癥或其癥狀而言預(yù)防性的和/或可以是就部分或完全治愈病癥和/或可歸因于病癥的不良反應(yīng)而言治療性的。其包括(I)在易感染病癥但是還沒(méi)有癥狀的受治療者中預(yù)防疾病的發(fā)生或復(fù)發(fā)，(2)抑制疾病，例如停止其發(fā)展，(3)結(jié)束或終止病癥或至少其相關(guān)癥狀以使宿主不再遭受所述病癥或其癥狀的痛苦，諸如引起所述病癥或其癥狀的退化，例如，通過(guò)恢復(fù)或修復(fù)失去的、缺少的或有缺陷的功能或激活無(wú)效的程序，或(4)緩解、減輕或改善病癥或與其有關(guān)的癥狀，其中改善以廣義使用以指至少參數(shù)例如炎癥、疼痛和/或腫瘤大小的量值上的減小。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”是指任何常規(guī)類(lèi)型的非毒性的固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、包封材料、制劑助劑或賦形劑。藥學(xué)上可接受的載體在制劑中所使用的給藥量和濃度是對(duì)接受者無(wú)毒性的并且是可與制劑的其他成分相容的。術(shù)語(yǔ)“組合物”是指通常包含載體例如在本領(lǐng)域中常規(guī)的并且適于為了治療、診斷或預(yù)防目的施用至受治療者中的藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的混合物。其可包括細(xì)胞培養(yǎng)物，其中馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體存在于細(xì)胞或培養(yǎng)基中。例如，口服施用的組合物可形成溶液、懸浮液、片劑、丸劑、膠囊、持續(xù)釋放的制劑、口服灌洗劑或粉末。術(shù)語(yǔ)“血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病”是指與來(lái)自預(yù)先存在的血管的新的血管的生長(zhǎng)有關(guān)的任何眼睛的疾病。這些疾病包括但不限于年齡相關(guān)的黃斑退行性病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病、角膜新血管形成疾病、視網(wǎng)膜血管瘤增殖、息肉樣脈絡(luò)膜血管病變、缺血誘導(dǎo)的新血管形成視網(wǎng)膜病、高度近視和早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病。術(shù)語(yǔ)“治療上有效的量”是指當(dāng)施用于活的受治療者時(shí)獲得對(duì)活的受治療者的所期望的作用的量。確切的量將取決于治療的目的并且可由本領(lǐng)域中的一名普通技術(shù)人員使用已知的技術(shù)來(lái)確定。如本領(lǐng)域中已知的，對(duì)于系統(tǒng)遞送對(duì)比局部遞送、年齡、體重、一般健康、性別、飲食、施用時(shí)間、藥物相互作用和病況的嚴(yán)重度的調(diào)整可能是必須的，并且可由本領(lǐng)域那些技術(shù)人員用例行實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。術(shù)語(yǔ)“RGD基序變體”是指包含跨越相應(yīng)的野生型序列的RGD序列的氨基酸序列例如包含馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白中的RGD的序列中的修改的肽。術(shù)語(yǔ)“ARGDDP”是指具有RGD基序變體48ARGDDP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。ARGDDP由SEQ ID NO 1 表示。術(shù)語(yǔ)“ARGDDV”是指具有RGD基序變體48ARGDDV53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。ARGDDV由SEQ ID NO 2 表示。術(shù)語(yǔ)“ARGDDL”是指具有RGD基序變體48ARGDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。ARGDDL由SEQ ID NO 3 表示。術(shù)語(yǔ)“PRGDDL”是指具有RGD基序變體48PRGDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字 “48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。PRGDDL由 SEQ ID NO 4 表示。術(shù)語(yǔ)“ARGDDM”是指具有RGD基序變體48ARGDDM53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。ARGDDM由SEQ ID NO 5 表示。術(shù)語(yǔ)“PRGDDM”是指具有RGD基序變體48PRGDDM53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。PRGDDM由SEQ ID NO 6 表示。術(shù)語(yǔ)“PRLDMP”是指具有RGD基序變體48PRLDMP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。PRLDMP由SEQ ID NO 7 表示。術(shù)語(yǔ)“PRLDDL”是指具有RGD基序變體48PRLDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。PRLDDL由SEQ ID NO 8 表示。術(shù)語(yǔ)“ARLDDL”是指具有RGD基序變體48ARLDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。ARLDDL由SEQ ID NO 9 表示。術(shù)語(yǔ)“PRIDMP”是指具有RGD基序變體48PRIDMP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。PRIDMP由SEQ ID NO 10 表示。術(shù)語(yǔ)“PRHDMP”是指具有RGD基序變體48PRHDMP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。PRHDMP由SEQ ID NO 11 表示。術(shù)語(yǔ)“PRGDNP”是指具有RGD基序變體48PRGDNP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。PRGDNP由SEQ ID NO 12 表示。術(shù)語(yǔ)“PRGDGP”是指具有RGD基序變體48PRGDGP53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。數(shù)字“48”和“53”是指野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白的氨基酸序列中這些氨基酸的位點(diǎn)。PRGDGP由SEQ ID NO 13 表示。 術(shù)語(yǔ)“HSA-ARLDDL”是指一種融合蛋白，其包含a)人類(lèi)血清白蛋白(HSA)變體，b)接頭氨基酸序列和c)具有RGD基序變體48ARLDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。其由SEQ IDNO 14表示。術(shù)語(yǔ)“HSA (C34S) -ARLDDL”是指一種融合蛋白，其包含a)人類(lèi)血清白蛋白(HSA)變體，其中野生型HSA氨基酸序列的位點(diǎn)34處的半胱氨酸已經(jīng)由絲氨酸代替，b)接頭氨基酸序列和c)具有RGD基序變體48ARL DDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。其由SEQ ID NO 15表不。術(shù)語(yǔ)“HSA (C34A) -ARLDDL”是指一種融合蛋白，其包含a)人類(lèi)血清白蛋白(HSA)變體，其中野生型HSA氨基酸序列的位點(diǎn)34處的半胱氨酸已經(jīng)有丙氨酸代替，b)接頭氨基酸序列和c)具有RGD基序變體48ARLDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。其由SEQ ID NO 16表不。應(yīng)當(dāng)理解的是本發(fā)明包括利用其中除了 ARLDDL之外的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體通過(guò)接頭氨基酸序列與HSA變體融合的融合蛋白的組合物和方法。例如，適于本發(fā)明的目的的融合蛋白包括但不限于 HSA-ARGDDP、HSA (C34S) -ARGDDP、HSA (C34A) -ARGDDP、HSA-ARGDDV、HSA (C34S) -ARGDDV、HSA (C34A) -ARGDDV 以及等等。本發(fā)明的組合物和方法本發(fā)明通過(guò)引用清楚地并入專(zhuān)利申請(qǐng)美國(guó)序列號(hào)61/226，945中所公開(kāi)的所有方法和馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。通常，本發(fā)明涉及利用低劑量的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體治療血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的組合物和方法。術(shù)語(yǔ)“低劑量”是指比常規(guī)用于血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的治療的那些更低的劑量。優(yōu)選地，“低劑量”是約O. OOOlpg至約300ug，更優(yōu)選地約O. 005pg至約200ug以及甚至更優(yōu)選地約O. OOlpg至約IOOug的適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。齊[J量可作為單一劑量或分份劑量施用于有需要的受治療者，只要所施用的總劑量在所提供的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體與可聚乙二醇化或以其他方式修飾的人類(lèi)血清白蛋白(HSA)或HSA的變體融合。甚至更優(yōu)選地，適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體選自包含選自SEQ IDNO :1至SEQ ID NO : 16的氨基酸序列的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或者所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體與白蛋白軛合或聚乙二醇化。甚至更優(yōu)選地，適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含SEQ ID NO :9或SEQ ID NO 15用于本發(fā)明的目的的最優(yōu)選的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體是由SEQ ID NO 15表示的HSA (C34S) -ARLDDLo HSA-ARLDDL C34S是包含具有RGD基序48ARLDDL53的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的重組蛋白，其中所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體與人類(lèi)血清白蛋白(HSA)的變體軛合。HSA(C34S)-ARLDDL對(duì)于α νβ 3整聯(lián)蛋白來(lái)說(shuō)是選擇性的并且與野生型馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白相比表現(xiàn)出與a IIbP 3和/或α 5β I整聯(lián)蛋白的減少的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的組合物，所述組合物包含約O. OOOlpg至約300ug的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID N0:1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。優(yōu)選地,本發(fā)明的組合物包含約O. 005pg至約200ug以及更優(yōu)選地約O. OOlpg至約IOOug的適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物被配制為局部組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物適于玻璃體內(nèi)注射(即，至眼中)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用所述受治療者的每眼約O. OOOlpg至約300ug的 馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO :1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用所述受治療者的每眼約O. OOOlpg至約300ug的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 15的氨基酸序列。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用所述受治療者的每眼約O. 0005pg至約200ug的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO :1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用所述受治療者的每眼約O. OOlpg至約IOOug的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO :1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。優(yōu)選地，本發(fā)明的方法包括施用所述受治療者每眼約O. 005pg至約300ug以及更優(yōu)選地約O. OOlpg至約IOOug的適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括通過(guò)對(duì)所述受治療者的眼內(nèi)注射施用適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病選自由年齡相關(guān)的黃斑退行性病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病、角膜新血管形成疾病、視網(wǎng)膜血管瘤增殖、息肉樣脈絡(luò)膜血管病變、年齡相關(guān)的缺血誘導(dǎo)的新血管形成視網(wǎng)膜病、高度近視和早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病組成的組。本發(fā)明的組合物可通過(guò)系統(tǒng)注射例如通過(guò)玻璃體內(nèi)注射或靜脈注射或者通過(guò)注射或應(yīng)用于相關(guān)位點(diǎn)例如通過(guò)當(dāng)所述位點(diǎn)在手術(shù)中暴露時(shí)直接注射或直接應(yīng)用于所述位點(diǎn)或者通過(guò)局部應(yīng)用施用于需要治療的受治療者。本發(fā)明的組合物還可與另一種活性劑組合使用以治療血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法還包括向受治療者施用另一種活性劑。優(yōu)選地，其他活性劑選自由VEGF拮抗劑、抗血管發(fā)生劑、抗炎劑和類(lèi)固醇組成的組?；钚詣┑氖┯每梢圆煌姆绞将@得，包括口服的，含服的，經(jīng)鼻的，直腸的，非胃腸道，腹膜內(nèi)的、皮內(nèi)的、透皮的、皮下的、靜脈內(nèi)的、動(dòng)脈內(nèi)的、心內(nèi)的、心室內(nèi)的、顱內(nèi)的、氣管內(nèi)的以及鞘內(nèi)的注射、肌內(nèi)注射，玻璃體腔注射(即，至眼中)，局部應(yīng)用，包括但不限于滴眼劑、霜?jiǎng)┮约叭橐?、植入物和吸入劑。本發(fā)明的藥物組合物可作為與本領(lǐng)域中已知的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和稀釋劑一起的制劑來(lái)提供。這些藥物載體、賦形劑和稀釋劑包括USP藥物賦形劑列表中所列的那些。USP和NF稀釋劑，由分類(lèi)第2404-2406頁(yè)所列，USP 24NF 19，United StatesPharmacopeial Convention Inc. , Rockville, Md. (ISBN 1-889788-03-1)。藥學(xué)上可接受的賦形劑例如媒介物、佐劑、載體或稀釋劑是公眾可容易地獲得的。而且，藥學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)例如PH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑、張力調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑以及類(lèi)似物是公眾可容易地獲得的。
適合的載體包括但不限于水、葡萄糖、甘油、鹽水、乙醇及其組合。載體可以包含另外的劑，例如濕潤(rùn)劑或乳化劑、pH緩沖劑或可提高制劑的有效性的佐劑。局部載體可包括液體石油、棕櫚酸異丙酯、聚乙二醇、乙醇(95% )、溶于水的聚氧乙烯單月桂酸酯(5% )或溶于水的十二烷基硫酸鈉(5%)。必要時(shí)，可以加入其他材料，例如抗氧化劑、保濕劑、粘度穩(wěn)定以及類(lèi)似的劑。也可以包括經(jīng)皮滲透促進(jìn)劑例如氮酮。適于本發(fā)明的目的的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體可通過(guò)將它們?cè)谒曰蚍撬匀軇├缡卟擞突蚱渌念?lèi)似的油、合成的脂肪酸甘油酯，高級(jí)脂肪酸的酯或丙二醇中溶解、懸浮或乳化并且如果需要與常規(guī)的添加劑例如增溶劑，等滲劑，懸浮劑，乳化劑，穩(wěn)定劑和防腐劑一起配制為用于注射的制品。如本領(lǐng)域中常規(guī)的，也可使用用于口服和非胃腸遞送的其他制劑。本發(fā)明的藥物組合物可配制為固體、半固體、液體或氣體形式的制品，例如片劑、膠囊劑、粉末、粒料、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣溶膠。以藥用劑量形式，本發(fā)明的組合物可以它們的藥學(xué)上可接受的鹽的形式施用，或者它們也可以單獨(dú)或與其他的藥學(xué)上的活性化合物適當(dāng)?shù)年P(guān)聯(lián)以及組合使用。主題組合物根據(jù)可能的施用的方式來(lái)配制。在下文實(shí)施例中更加具體地描述本發(fā)明，所述實(shí)施例預(yù)期僅為示例性的，因?yàn)樵S多修飾和變化對(duì)于本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員來(lái)說(shuō)的顯而易見(jiàn)的。實(shí)施例I在氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠樽型中通過(guò)ARLDDL和HSA-ARLDDL抑制視網(wǎng)膜中的血管如下產(chǎn)生小鼠中氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的動(dòng)物模型。將每組與至少兩只哺乳母鼠一起的7天大的小鼠分配至含有75%氧氣(氧過(guò)多)或室內(nèi)空氣(常氧)的氧氣室中。將小鼠暴露于小于300勒的12小時(shí)循環(huán)廣譜光。如果哺乳母鼠死亡更換代用母鼠。在與具有氧氣和氮?dú)獾腂ird 3-M氧氣混合器(Palm Springs,CA)相連的孵育室中培育氧氣處理的小鼠，允許氧氣濃度調(diào)整至75% ±2%。I. 5L/分鐘的流速每天校驗(yàn)兩次。用Beckman氧氣分析儀(Model 02, Irvine, CA)監(jiān)測(cè)氧氣濃度。籠溫維持在23°C ±2°C。將小鼠置于具有充足食物和水的氧氣室中維持它們5天。從第I天至第5天氧過(guò)多暴露期間不打開(kāi)室,將動(dòng)物返回室內(nèi)空氣7天。一旦氧氣處理的小鼠返回室內(nèi)空氣，在第5天經(jīng)由玻璃體內(nèi)注射施用生理鹽水 2 μ I/ 眼)、ARLDDL (2ng/ 眼或 20pg/ 眼)、HSA-ARLDDL (2ng/ 眼)或抗 VEGF 抗體(2ng/眼或20pg/眼)并且在第12天處死小鼠。將每只動(dòng)物的眼睛中的一只進(jìn)行切片、去石蠟化并且用蘇木精和伊紅染色。在內(nèi)層視網(wǎng)膜內(nèi)將每個(gè)視網(wǎng)膜切片的血管數(shù)目計(jì)數(shù)并且包括附著于內(nèi)界膜的血管。在顯微照相機(jī)(Leica)上以IOOX的放大倍數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果示于圖IB中。結(jié)果證實(shí)與生理鹽水處理的組相比2ng/眼和20pg/眼的劑量的ARLDDL和HSA-ARLDDL減少了每個(gè)視網(wǎng)膜切片的血管數(shù)目。而且，甚至在20pg/眼的非常低的劑量，ARLDDL產(chǎn)生了與2ng/眼的ARLDDL、2ng/眼的HSA-ARLDDL和20pg/眼的抗VEGF抗體相比每個(gè)視網(wǎng)膜切片的血管數(shù)目的更大的減少。由不了解相同身份的人在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的前部中和視網(wǎng)膜的內(nèi)界膜上將內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果示于圖IC中。結(jié)果證實(shí)2ng/眼和20pg/眼兩個(gè)劑量的ARLDDL和HSA-ARLDDL都減少每個(gè)視網(wǎng) 膜切片的內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目。實(shí)施例2在氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中通過(guò)非常低劑暈的ARLDDL和HSA-ARLDDL抑制視網(wǎng)膜中的血管發(fā)生如實(shí)施例I中描述的產(chǎn)生小鼠中的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的動(dòng)物模型。經(jīng)由玻璃體內(nèi)注射施用下列量的HSA-ARLDDL 10pg/眼、O. Ipg/眼和O. OOlpg/眼，并且在第12天處死所處理的小鼠。將來(lái)自每個(gè)動(dòng)物的眼睛中的一只切片、去石蠟化并且用蘇木精和伊紅染色。在內(nèi)層視網(wǎng)膜內(nèi)將每個(gè)視網(wǎng)膜切片的血管數(shù)目計(jì)數(shù)并且包括附著于內(nèi)界膜的血管。在顯微照相機(jī)(Leica)上以100X的放大倍數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果示于圖2A中。結(jié)果證實(shí)與用生理鹽水處理的組相比每眼10pg、0. Ipg和O. OOlpg的HSA-ARLDDL減少每個(gè)視網(wǎng)膜切片的血管數(shù)目。由不了解相同身份的人在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的前部中和視網(wǎng)膜的內(nèi)界膜上將內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果示于圖2B中。結(jié)果證實(shí)與用生理鹽水處理的組相比每眼10pg、0. Ipg和O. OOlpg的HSA-ARLDDL減少每個(gè)視網(wǎng)膜切片的內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目。實(shí)施例3
氣誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的小鼠模型中通過(guò)HSA-ARLDDL對(duì)比Avastin 抑制視網(wǎng)膜中
的血管發(fā)生如實(shí)施例I中描述的產(chǎn)生小鼠中的氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病的動(dòng)物模型。經(jīng)由玻璃體內(nèi)注射施用 ARLDDL(10pg/ 眼或 O. Ipg/ 眼)或 Avastin _ (20pg/ 眼或 O. 2pg/ 眼)并且在第 12天處死所處理的小鼠。將來(lái)自每個(gè)動(dòng)物的眼睛中的一只切片、去石蠟化并且用蘇木精和伊紅染色。在內(nèi)層視網(wǎng)膜內(nèi)將每個(gè)視網(wǎng)膜切片的血管數(shù)目計(jì)數(shù)并且包括附著于內(nèi)界膜的血管。在顯微照相機(jī)(Leica)上以100X的放大倍數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果示于圖3A和4A中。由不了解相同身份的人在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的前部中和視網(wǎng)膜的內(nèi)界膜上將內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果示于圖3B和4B中。結(jié)果證實(shí)所有所施用的給藥量的HSA-ARLDDL在抑制視網(wǎng)膜中的血管發(fā)生上比Avastin . 明顯更加有效。 本串請(qǐng)中所使用的氨基酸和核苷酸序列SEQ ID NO : I表示“ARGDDP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 2表示“ARGDDV”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 3表示“ARGDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 4表示“PRGDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 5表示“ARGDDM”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 6表示“PRGDDM”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 7表示“RRLDMP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 8表示“PRLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 9表示“ARLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 10表示“PRIDMP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 11表示“PRHDMP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 12表示“PRGDNP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 13表示“PRGDGP”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 14表示“HSA-ARLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 15表示“HSA(C34S)-ARLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。SEQ ID NO 16表示“HSA (C34A)-ARLDDL”馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的氨基酸序列。上文本發(fā)明的示例性的實(shí)施方案的描述僅為了說(shuō)明和描述的目的而存在并且不預(yù)期為窮舉的或限制本發(fā)明至所公開(kāi)的精確的形式。根據(jù)以上教導(dǎo)，很多修改和變化是可能的?？紤]到本文公開(kāi)的本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)和實(shí)行，本發(fā)明的其他實(shí)施方案對(duì)本領(lǐng)域中的那些技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。預(yù)期說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例僅被認(rèn)為是示例性的，具有下文權(quán)利要求所指示的本發(fā)明的真實(shí)的范圍和精神。
權(quán)利要求
1.一種用于治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的組合物，所述組合物包含低劑量的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ ID NO :1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。
2.如權(quán)利要求I所述的組合物，其中，所述氨基酸序列選自SEQID NO :9和SEQ ID NO:15。
3.如權(quán)利要求I所述的組合物，其中，所述氨基酸序列是SEQID N0:15。
4.如權(quán)利要求I所述的組合物，其中，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體與白蛋白軛合或聚乙二醇化。
5.如權(quán)利要求I所述的組合物，其中，所述低劑量是從約O.OOOlpg至約300ug的所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。
6.如權(quán)利要求I所述的組合物，其中，所述低劑量是從約O.0005pg至約200ug的所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。
7.如權(quán)利要求I所述的組合物，其中，所述低劑量是從約O.OOlpg至約IOOug的所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體。
8.如權(quán)利要求I所述的組合物，其中，所述組合物被配制為局部組合物。
9.如權(quán)利要求I所述的組合物，其中，所述組合物被配制為可注射的組合物。
10.一種用于治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的組合物，所述組合物包含低劑量的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含SEQ ID NO 15的氨基酸序列。
11.一種用于治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用如權(quán)利要求I所述的組合物。
12.一種用于治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者根據(jù)所述受治療者的每個(gè)眼部施用低劑量的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含選自SEQ IDNO :1至SEQ ID NO 16的氨基酸序列。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病選自由年齡相關(guān)的黃斑退行性病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病、角膜新血管形成疾病、視網(wǎng)膜血管瘤增殖、息肉樣脈絡(luò)膜血管病變、年齡相關(guān)的缺血誘導(dǎo)的新血管形成視網(wǎng)膜病、高度近視和早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病組成的組。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病是年齡相關(guān)的黃斑退行性病變。
15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病是糖尿病性視網(wǎng)膜病。
16.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體與白蛋白軛合或聚乙二醇化。
17.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述受治療者是人類(lèi)并且所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體施用至所述受治療者的眼部。
18.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體被局部應(yīng)用于所述受治療者的眼部。
19.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體經(jīng)由玻璃體內(nèi)注射而應(yīng)用于所述受治療者的眼部。
20.如權(quán)利要求11所述的方法，還包括向所述受治療者施用在治療上有效的量的另一種活性劑。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述另一種活性劑選自由VEGF拮抗劑、抗血管發(fā)生劑、抗炎劑和類(lèi)固醇組成的組。
22.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述另外的活性劑與所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體同時(shí)施用。
23.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述另外的活性劑在施用所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體之前施用。
24.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述另外的活性劑在施用所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體之后施用。
25.一種用于治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的方法，所述方法包括向有需要的受治療者施用所述受治療者每眼低劑量的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體或所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的藥學(xué)上可接受的鹽，所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。
全文摘要
本發(fā)明一般涉及利用低劑量的馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體并且具體地低劑量的包含馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體的融合蛋白治療和/或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)的眼部疾病的組合物和方法，其中所述馬來(lái)蝮蛇蛇毒蛋白變體與人類(lèi)血清白蛋白(HSA)的變體軛合，其中HSA氨基酸序列的位點(diǎn)34處的半胱氨酸殘基由絲氨酸代替。
文檔編號(hào)C07K14/00GK102883738SQ201080059409
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2010年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月23日
發(fā)明者莊韋杰, 傅文美, 黃彥倫 申請(qǐng)人:成功大學(xué), 臺(tái)灣大學(xué)