專利名稱：：一種新型抗生素及其核苷酸序列、制備方法與應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，特別是涉及一種新型抗生素及其核苷酸序列、制備方法與應用。
背景技術：
：自1944年青霉素等抗生素投入使用以來，使細菌，尤其是威脅生命的致病菌，如金葡球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、結核桿菌等已對其產(chǎn)生了耐藥性。據(jù)美國疾病控制中心(CDC)歷年發(fā)表的有關報告預測，再過10年至20年，這些抗生素將可能完全失效。上述抗生素主要通過抑制細胞壁合成、抑制或干擾細菌的核酸和蛋白質代謝與合成途徑來達到抗菌目的。然而這些抗菌方式容易誘導細菌發(fā)生突變而產(chǎn)生耐藥性。因此人們一直在致力于開發(fā)新型的抗生素，模仿同種異株細菌之間互相殺傷的工作方式來開發(fā)新型抗生素是比較有前途的方向之一，自然界中有不少細菌毒素直接在細菌胞膜上形成離子通道來殺死細菌。其模式標本就是大腸桿菌分泌的一種細菌毒素一大腸菌素。其中大腸菌素Ia自1952年被Jacob發(fā)現(xiàn)之后，經(jīng)過數(shù)代人的努力，1996年終于揭示了大腸菌素Ia在人工脂質雙分子膜上所形成離子通道開放和關閉時的跨膜立體結構(Qiuetal，Majortmnsmemebranemovementsooeiatedwithcolicinlachannelgating.J.Gen.Physiology,107:313-328(1996))，為在分子7K平上設計和制備新型的抗菌素奠定了理論基礎。最近，人們發(fā)現(xiàn)細菌分泌信號傳導多肽到體外，這些多肽能夠自動尋找同種細菌胞膜上的相應受體，與受體結合后將信息傳入細菌。這些傳導多肽多由數(shù)個至十數(shù)個氨基酸組成，比如金黃色葡萄球菌的信息素AgrD,就是一個8肽(Jietal,Celldensitycontrolofstaphyliccocalvirulencemediatedbyanoctapeptidepheromone.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,92:12055-12059(1995))。如上所述，大腸菌素是一種理想的離子通道抗生素原型，但野生型大腸菌素只能作用于同種異株的大腸桿菌，因此必須改變它的靶向性，才能使大腸菌素轉而攻擊其它種的致病菌，且野生型大腸菌素的肽鏈中存在容易引起超敏反應的氨基酸殘基；超敏反應指異常的、過高的免疫應答。如能利用致病菌特有的信息素作為誘導物來改變大腸菌素的靶向性，應該是一種理想的抗生素開發(fā)方向，目前本發(fā)明的發(fā)明人獲得將大腸桿菌信息素基因與白色鏈珠球菌信息素基因連接起來表達抗真菌多肽的專利權，專利號為ZL200510020219.9，但由于大腸菌素肽鏈中存在某些可能引起超敏反應的結構域，因此有必要改進。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對上述技術的缺陷與本領域仍然存在的空白，提供一種新型抗生素及其核苷酸序列、制備方法與應用。該抗生素的肽鏈含有大腸菌素，能特異地殺滅該抗生素特異性結合的致病菌而不會傷害人體正常細胞，克服了大腸菌素引起超敏反應的缺陷。一種大腸菌素變構多肽，由能形成離子通道結構域的野生型大腸菌素E1、Ia、Ib、A、B、N或其水性孔道結構域的肽鏈突變了氨基酸殘基G11A、H22R、A26G、V31L和H40K而獲得。所述大腸菌素變構多肽，由野生型大腸菌素Ia變構而來，具有SeqlDN0.36所示的氨基酸序列。編碼所述的大腸菌素變構多肽的核苷酸序列。所述的大腸菌素變構多肽在制備抗菌藥物中的應用。一種新型抗生素，由上述大腸菌素變構多肽和金黃色葡萄球菌信息素AgrDI、AgrDII、AgrDIII、AgrDIV或表皮葡萄球菌信息素的肽鏈線性連接而成。所述大腸菌素變構多肽由野生型大腸菌素Ia變構而來，所述金黃色葡萄球菌信息素AgrDI、AgrDII、AgrDIII、AgrDIV或表皮葡萄球菌信息素的氨基端連接在所述大腸菌素變構多肽的羧基端，連接肽分別具有如SeqlDN0.13、SeqlDN0.15、S叫IDN0.17、SeqlDN0.19、SeqIDNO.21所示的氨基酸序列。所述金黃色葡萄球菌信息素AgrDI的羧基端連接在大腸菌素變構多肽的氨基端，具有如SeqIDNO.23所示的氨基酸序列。編碼上述新型抗生素的核苷酸序列。具有如SeqlDN0.12、SeqlDN0.14、SeqlDN0.16、SeqIDNO.l8、SeqIDNO.20或S叫IDN0.22所示。包含上述核苷酸序列的重組質粒。上述新型抗生素在制備抗菌藥物中的應用。一種新型抗生素的制備方法是指將權利要求9所述的重組質粒轉入表達系統(tǒng)中表達，分離純化表達的多肽而獲得新型抗生素。所述表達系統(tǒng)指大腸桿菌工程菌菌株￡工0//81^21。本發(fā)明為預防臨床使用中大腸菌素氨基端的某些肽鏈片段可能引起宿主的超敏反應，事先選擇性的突變了這些肽鏈片段中的氨基酸殘基G11A、H22R、A26G、V31L和H40K，降低可能的致敏原性，從而獲得了編碼大腸菌素變構多肽的核苷酸序列和該變構多肽的氨基酸序列，變構多肽仍然保留了大腸菌素離子通道活性，能夠將同種異株的大腸桿菌殺死。這些野生型大腸菌素可以選自能形成離子通道結構域的大腸菌素E1、Ia、Ib、A、B、N或其水性孔道結構域。本發(fā)明優(yōu)選突變大腸菌素Ia，將Ia的變構多肽Ia'與其他致病菌信息素的肽鏈可操作地連接，如圖7所示，連接肽可以改變Ia'的靶向性，使該連接肽鏈攻擊其能夠識別的其他致病菌菌株，從而獲得各種新型的抗生素，其機理是可與靶致病菌胞膜受體結合的信息素作為誘導物誘導變構多肽到達靶致病菌胞膜附近，然后變構多肽在靶致病菌胞膜上形成致死性離子通道，使靶致病菌胞內(nèi)容物泄漏而致靶致病菌死亡，從而達到殺菌的目的。本發(fā)明優(yōu)選將Ia'與金黃色葡萄球菌信息素AgrDI、AgrDII、AgrD、AgrDIV以及表皮葡萄球菌信息素的肽鏈線性連接，當金黃色葡萄球菌信息素AgrDI、AgrDII、AgrD、AgrDIV以及表皮葡萄球菌信息素的肽鏈連接在大腸菌素變構多肽Ia'的羧基端，如圖15所示，獲得5種新型抗生素，由實施例4、5、6、7及表1、表2的數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明獲得的這5種新型抗生素的殺菌效果；當葡萄球菌信息素連接在大腸菌素變構多肽Ia'的第1號氨基酸位置即其實密碼子編碼的甲硫氨酸之后獲得的5種連接肽鏈中，經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)僅AgrDI與Ia'的連接肽鏈如圖6所示，對綠膿桿菌有抗菌作用，其核苷酸序列如SeqIDNO23所示。所述編碼本發(fā)明獲得的新型抗生素的核苷酸序列。由于密碼子的簡并性，編碼本發(fā)明獲得的大腸菌素變構多肽、葡萄球菌新型抗生素、綠膿桿菌新型抗生素的氨基酸序列的核苷酸序列是可以調整的，即只要是編碼本發(fā)明新型抗生素的核苷酸序列都屬于本發(fā)明的保護范圍。將編碼本發(fā)明的新型抗生素的核苷酸序列載入骨架質粒中可獲得能在宿主中表達本發(fā)明新型抗生素的重組質粒。本發(fā)明中，構建重組質粒的原始質粒為Promega公司的pSELECTTM-l質粒，向其中裝載大腸菌素變構多肽基因和immunity蛋白基因；按照Strategene公司藥箱操作將編碼葡萄球菌信息素的核苷酸序列經(jīng)雙鏈寡聚核苷酸點突變技術(QdCkChangTMKit，Strategene公司)插入到變構多肽基因的氨基端或羧基端得到本發(fā)明的重組質粒；本發(fā)明優(yōu)選將5種葡萄球菌信息素基因序列插入到Ia'基因的626號氨基酸(即羧基端)位置之后或第1號氨基酸位置即起始密碼子之后而獲得本發(fā)明如圖16所示的六種能表達抗生素的重組質粒。本發(fā)明所指的新型抗生素的制備方法是指將上述重組質粒轉染入大腸桿菌工程菌而獲得可產(chǎn)生新型抗生素的轉基因大腸桿菌，分離純化轉基因大腸桿菌表達的目的蛋白即可得到本發(fā)明的新型抗生素。本發(fā)明優(yōu)選大腸桿菌工程菌菌株BL-21。本發(fā)明獲得的新型抗生素可在制備治療或者預防大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、綠膿桿菌感染的藥中應用?？梢酝ㄟ^將本發(fā)明中獲得的新型抗生素的多肽添加到藥學上可接受的載體或者賦形劑或可選的其它成分而制成臨床上適用的藥物組合物。本發(fā)明的新型抗生素相較于現(xiàn)用抗生素的優(yōu)點在于，其不會誘導細菌產(chǎn)生傳統(tǒng)的耐藥性而且克服了以大腸菌素為抗生素有效結構的重組抗生素會引起超敏反應的缺點，如實施例10的實驗結果顯示，與野生型大腸菌素采用野生型大腸菌素構建的重組抗生素相比，本發(fā)明的大腸菌素變構多肽及新型抗生素免疫小鼠的血清效價要比前者低兩個數(shù)量級；由于細菌可通過突變產(chǎn)生B—內(nèi)酰胺酶、減少攝入、改變藥物作用位點等方式改變其細胞壁結構、蛋白質和核酸代謝等來對傳統(tǒng)抗生素產(chǎn)生耐藥性，但是細菌卻較難以通過突變來修復被本發(fā)明新型抗生素所造成的胞膜完整性的缺損，因為這種缺損往往在數(shù)分鐘內(nèi)即可導致細菌死亡，本發(fā)明的新型抗生素對于耐藥性菌具有其它抗生素難以企及的殺滅作用；實驗數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明獲得的新型抗生素不僅具有極好的殺菌效果，且PMC-SA1，PMC-SA兩種抗生素對于實驗鼠表現(xiàn)出良好的體內(nèi)保護作用。圖l.重組質粒pBHC-SAl的結構；含有金黃色葡萄球菌信息素AgrDI的基因和大腸菌素變構多肽Ia'基因。圖2.重組質粒pBHC-SA2的結構；含有金黃色葡萄球菌信息素AgrDII的基因和大腸菌素變構多肽Ia'的基因。圖3.重組質粒pBHC-SA3的結構；含有金黃色葡萄球菌信息素AgrDIII的基因和大腸菌素變構多肽Ia'的基因。圖4.重組質粒pBHC-SA4的結構；含有金黃色葡萄球菌信息素AgrDIV的基因和大腸菌素變構多肽Ia'的基因。圖5重組質粒pBHC-SE的結構；含有表皮葡萄球菌信息素的基因和大腸菌素變構多肽Ia'的基因。圖6重組質粒pBHC-PA的結構含有金黃色葡萄球菌信息素AgrDI的基因和大腸菌素變構多肽Ia'的基因，其中AgrDI基因連接在大腸菌素變構多肽Ia'的第1位氨基酸的密碼子位置；圖7新型抗生素的結構；T，R，分別是大腸菌素變構多肽Ia'位于氨基端的兩個信號識別結構域，其中T結構域的部分氨基酸殘基已被突變；channel-forming,是大腸菌素變構多肽Ia'位于羧基端的能成離子通道的結構域，信息素連接在大腸菌素變構多肽Ia，的羧基端。圖8為本發(fā)明新型抗生素PMC-SA1對青霉素敏感金葡菌的抑制實驗結果。圖中Com對照；PEN:青霉素；COL:野生型大腸菌素；BL21:無質粒的BL-21工程菌所產(chǎn)蛋白；FP:大腸菌素Ia羧基端連接其它8肽的重組蛋白；PMC:PMC-SA1。各實驗組的藥物用量均為100ng/ml。圖9為PMC-SA1對耐甲氧西林金葡菌(ATCCBAA-42)殺菌效果的透射電鏡觀察(放大25，000倍)。Con,對照組，菌形態(tài)正常；Oxa,苯唑西林500ug/ml處理一個半小時，菌形態(tài)有變化，但菌體仍完整；PMC:PMC-SAl10ug/ml處理半小時，菌破裂，內(nèi)容物泄漏。圖10為本發(fā)明新型抗生素PMC-SAl和PMC-SE對表皮葡萄球菌的抑制作用。表皮葡萄球菌的生長僅被PMC-SA1部分抑制，卻被PMC-SE完全抑制。Con:對照組；PEN:青霉素；PMC:PMC-SAl;PMC-SE:PMC-SE新型抗生素，藥物濃度2ug/ml。圖ll為本發(fā)明各種新型抗生素對耐甲氧西林金葡菌(ATCCBAA-42)的生長抑制作用。表明耐甲氧西林金葡菌的生長幾乎不能被苯唑西林所抑制，PMC-PA的抑菌效果最差，抑制效果最好的是PMC-SAl,其次是PMC-SE和PMC-SA4，PMC-SA2和PMC-SA3再次之；圖中Con:對照；Oxa:苯唑西林；SA1:PMC陽SA1;SA2:PMC-SA2;SA3:PMC-SA3;SA4:PMC-SA4;SE:PMC-SE和PA:PMC-PA，藥物濃度5ug/ml;圖12為本發(fā)明新型抗生素PMC-SAl和PMC-PA對綠膿桿菌的抑制作用。綠膿桿菌的生長僅被PMC-PA完全抑制。Con:對照組；COL:野生型大腸菌素；PMC1:PMC-SAl新型抗生素；PMC2:PMC-PA，藥物濃度5ug/ml。圖13為新型抗生素的多重耐藥綠膿桿菌感染動物體內(nèi)保護試驗結果之小鼠生存曲線。1)對照組，2)哌拉西林50mg/kg組，3)阿米卡星15mg/kg組，4)頭孢他啶50mg/kg組，5)左氧氟沙星5mg/kg組，6)PMC-PA5mg/kg組。具體實施例方式結合附圖，通過對本發(fā)明較佳實施例的描述具體說明本發(fā)明。實施例1表達新型抗生素的質粒的構建和新型抗生素制備原始質粒為裝載了大腸菌素變構多肽Ia'和immunity蛋白基因的pSELECTTM-l質粒(8.3kb)(購于Promega公司)。經(jīng)雙鏈寡聚核苷酸點突變技術(QuickChangeKit，Strategene公司)將編碼葡萄球菌信息素基因序列如SEQIDNOl、3、5、7、9所示，分別插入到大腸菌素變構多肽Ia'基因的626號氨基酸位置之后，獲得制備新型抗生素的一系列重組質粒，pBHC-SAl、pBHC-SA2、pBHC-SA3pBHC-SA4、pBHC-SE，如圖1圖5所示，以及金黃7色葡萄球菌信息素AgrDI的基因序列如SEQIDNO1所示連接在變構多肽la'基因的第1號氨基酸位置前而獲得重組質粒pBHC-PA如圖6所示。重組質粒轉染入五.co/ZBL-21工程菌制備新型抗生素。突變程序按StrategeneQuickChangeSiteDirectedMutagenesisKit(catalog#200518)藥箱手冊進行1.準備點突變反應物5ullOXbuffer2ul(10ng)裝載了大腸菌素變構多肽和immunity蛋白基因的原始質粒pSELECTTM-l。1.25ul(125ng)設計的5'—3'寡聚核苷酸引物(見SEQIDN02434偶數(shù)序列)1.25ul(125ng)設計的3，一5'寡聚核苷酸引物(見SEQIDN02535奇數(shù)序列)1uldNTP雙蒸水50ul1ulpfU(除質粒、引物和雙蒸水外，均為藥箱所備試劑)2.進行PCR擴增，擴增條件變性95。C,35秒，退火53。C，70秒，延伸68。C，17分，共20個循環(huán)；3.加入Dpn1內(nèi)切酶1ul消化母體DNA鏈后(37°C,1小時)，取1ul反應物與XLl-Blue感受態(tài)細胞50ul冰孵30分鐘，熱沖擊42°C，45秒，再置入冰中2分鐘；4.加入NZY培基0.5ml,220rpm,37°(:搖菌1小時，取50—100ul反應物鋪板(LB培基加1%瓊脂，加50ug/ml氨芐青霉素，37"C過夜)；5.18小時后挑菌，提取質粒后測序確定突變成功；6.將突變質粒100ng與制備的BL-21工程菌感受態(tài)細胞40ul冰孵5分鐘，熱沖擊42°C,30秒，再置入冰中2分鐘，加入SOC培基160ul，220rpm,37°C搖菌1小時后鋪板(LB培基加1%瓊脂，加50ug/ml氨芐青霉素，37。C過夜)，挑取單克隆菌落大量增菌；7.大量增菌，8—10升FB培基，250rpm，37。C，3—4小時；加入IPTG，250rpm，28°C再生長4小時；4°C，6000g,20分鐘離心沉淀菌體，取4°<:，50mM硼酸緩沖液(pH9.0,2mMEDTA)80-100ml懸浮菌體，加入PMSF50ug后超聲破碎菌體(4。C，400W，l分鐘，重復4一5次，間歇2—3分鐘確保菌液溫度)，高速離心沉淀破碎的菌體(4°C，75，000g，90分鐘)，取上清加入硫酸鏈霉素500萬單位沉淀DNA(4。C攪拌1小時)，10000g,4°C，10分鐘離心沉淀后，取上清裝入分子量15,000透析袋于4。C，50mM硼8酸緩沖液10升透析過夜后，再次lO,OOOg,4°C，IO分鐘離心沉淀，取上清上樣于CM離子交換柱，充分沖洗后，0.3MNaCl+50mM硼酸緩沖液洗脫即可得到所制備的新型抗生素。對應于以上6種重組質粒，可分別獲得PMC-SA1、PMC-SA2、PMC-SA3、PMC-SA4、PMC-SE以及PMC-PA六種新型抗生素。制備上述6種突變質粒的信息素基因所設計的寡聚核苷酸序列分別如下pBHC-SAl5'—3'(SEQIDN0.24)gcgaataagttctggggtattTATTCCACCTGTGATTTTATAATGtaaataaaatataagacaggc3，—5'(SEQIDN0.25)gcctgtcttatattttatttaCATTATAAAATCACAGGTGGAATAaataccccagaacttattcgcpBHC-SA25，—3，(SEQIDN0.26)gcgaataagttctggggtattGGAGTTAACGCATGTTCTTCCCTGTTTtaaataaaatataagacaggc3，—5，(SEQIDN0.27)gcctgtcttatattttatttaAAACAGGGAAGAACATGCGTTAACTCCaataccccagaacttattcgcpBHC-SA35，—3'(SEQIDN0.28)gcgaataagttctggggtattTATATAAACTGTGATTTTCTTCTGtaaataaaatataagacaggc3,—5，(SEQIDN0.29)gcctgtcttatattttatttaCAGAAGAAAATCACAGTTTATATAaataccccagaacttattcgcpBHC-SA45，_3，(SEQIDNO.30)gcgaataagttctggggtattTATTCCACCTGTTACTTTATAATGtaaataaaatataagacaggc3，一5，(SEQIDN0.31)gcctgtcttatattttatttaCATTATAAAGTAACAGGTGGAATAaataccccagaacttattcgcpBHC-PA5'—3，(SEQIDN0.32)ggatgaaggagataccgaatgTATTCCACCTGTGATTTTATAATGtctgaccctgtacgtattaca3，一5，(SEQIDN0.33)gtgaatacgtacagggtcagaCATTATAAAATCACAGGTGGAATAcatteggtatctcctteatecpBHC-SE5'—3'(SEQIDNO.34)gcgaataagttctggggtattGATTCCGTTTGTGCATCCTATTTTtaaataaaatataagacaggc3，—5，(SEQIDN0.35)gectgtcttatattttatttaAAAATAGGATGCACAAACGGAATCaataccccagaacttattcgc實施例2新型抗生素對青霉素敏感金葡菌的抑制作用細菌為美國標準菌株，ATCC25923青霉素敏感金葡菌，菌液2微升(105CFU/ml)加入1%胰蛋白胨，l%NaCl,0.5%酵母，0.5%葡萄糖，0.1%K2HP04的培養(yǎng)液IO毫升中，共準備6組，第一組加入0.3MNaCl+50mM硼酸緩沖液(即新型抗生素、野生型大腸菌素Ia和無質粒的BL-21工程菌所產(chǎn)蛋白的空白保存液，量與實驗組中加入的新型抗生素液體量相同)作為對照，第二組加入100ng/ml青霉素G鈉，第三組加入100ng/ml野生型大腸菌素la,第四組加入100ng/ml無質粒的BL-21工程菌所產(chǎn)蛋白，第五組加入100ng/ml大腸菌素Ia羧基端連接其它8肽的重組蛋白，第六組加入100ng/mlPMC-SA1新型抗生素。上述各組液體分別置于IOO毫升三角燒瓶中，200rpm,37°C生長，每小時采樣100微升加入96孔酶表板中經(jīng)分光光度計(A595nm)比色測試細菌生長濁度，畫出細菌生長曲線來比較新型抗生素的抑菌效力，結果如圖8所示，顯示青霉素敏感金葡菌只能被青霉素和PMC-SA1所抑制。實施例3新型抗生素PMC-SA1對耐甲氧西林金葡菌(ATCCBAA-42)殺菌效果的透射電鏡觀察(1%磷鎢酸染色，放大25，000倍)。培養(yǎng)液1%胰蛋白胨，l%NaCl,0.5%酵母，0.5%葡萄糖，0.1%K2HPO4.Con:對照組，菌加入前述培養(yǎng)液中和適量0.3MNaCl+50mM硼酸緩沖液中200rpm,37T生長2小時后，菌形態(tài)仍然正常；Oxa:菌加入前述培養(yǎng)液和苯唑西林500ug/ml中200rpm，37。C生長1.5小時后，菌的顏色和形態(tài)有變化，但菌體仍完整；PMC:菌加入前述培養(yǎng)液中和PMC-SA110ug/ml處理半小時后，菌破裂，內(nèi)容物泄漏。如圖9所示，新型抗生素與青霉素的殺菌機制完全不同，500ug/ml苯唑西林可損傷耐甲氧西林金葡菌，而10ug/mlPMC-SAl可有效殺傷耐甲氧西林金葡菌，苯唑西林分子(分子量450左右)和PMC-SA1分子(分子量70,000左右)的分子量相差160倍，本實施例中苯唑西林和PMC-SA1的使用濃度相差50倍，因此PMC-SA1在本實施例中表現(xiàn)出來的10抗菌效力比苯唑西林強八千倍左右。實施例4新型抗生素PMC-SA1的體外抗菌活性一、實驗材料(1)藥物*PMC-SA1:規(guī)格1.5mg/ml*注射用頭孢唑林鈉規(guī)格0.5g/瓶，華北制藥股份有限公司生產(chǎn)。*注射用青霉素鈉規(guī)格80萬單位/瓶，華北制藥股份有限公司生產(chǎn)。注射用氨芐西林鈉規(guī)格lg/瓶，華北制藥股份有限公司生產(chǎn)。*注射用苯唑西林鈉規(guī)格0.5g/瓶，華北制藥股份有限生產(chǎn)。*萬古霉素規(guī)格2.5mg/ml，*以上樣品用無菌水溶解稀釋，藥物終濃度為128mg/L、64mg/L、32mg/L、16mg/L、8mg/L、4mg/L、2mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0.125mg/L、0.06mg/L、0.03mg/L、0.015mg/L。(2)細菌臨床分離菌株所有菌種在收集分離的單位(華西醫(yī)科大學檢驗科細菌室)均經(jīng)鑒定。金黃色葡萄菌28株(MRSA菌株10株，MSSA菌株18株)、表皮葡萄球菌IO株(MRSA菌株5株，MSSE菌株5株)、腸球菌5株、大腸桿菌10株、鮑曼不動桿菌10株，共63株。標準質控菌株:青霉素敏感金黃色葡萄球菌ATCC25923、耐青霉素金黃色葡萄球菌ATCC29213，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌ATCCBAA-42,耐萬古霉素腸球菌ATCC700802。(3)培養(yǎng)基*MH肉湯培養(yǎng)基稱取25g加100ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，高壓滅菌，116°C，20分鐘。MH固體培養(yǎng)基稱取36g，加1000m蒸餾水，高壓滅菌，116°C，20分鐘，用于革蘭氏陽性、陰性需氧菌的藥敏試驗。*腸球菌用血培養(yǎng)基，即在MH培養(yǎng)基中加5-10%脫纖維兔血配置而成，5%(202中37'C培養(yǎng)24小時。二、試驗方法1、最低抑菌濃度MIC的測定采用瓊脂二倍稀釋法測定PMC-SA1的最低抑菌濃度(MIC)。用多點接種儀(DeneleyA400)將細菌接種于含不同藥物濃度的瓊脂平皿表面，每點含菌量為105CFU/ml，37'C孵育18-24小時觀察結果，以無細菌生長平皿培養(yǎng)基中所含藥物的最低濃度為藥物對該菌的最低抑菌濃度(MIC值)。三、結果實驗結果見表1表1PMC-SA的體外抗菌活性比較菌株(株數(shù))藥物MIC50(mg/L)MIC90(mg/L)M工C范圍(mg/L)金黃色葡萄球PMC-SA18—16>16<0.25-64菌頭孢唑林>128>1281-128MRSA菌株青霉素128>1281-128氨芐西林16320.06-64苯唑西林>128>1280.5128萬古霉素0.2510.0042金黃色葡萄球PMC-SA10.5160.06>32菌MSSA菌株頭孢唑林0.1250.25<0.0150.5青霉素8640.125〉128氨芐西林0.251<0.0150.025苯唑西林0.1250.125〈0.0150.25萬古霉素0.510.031表皮葡萄球菌PMC-SA1>64>641>128MRSE菌株頭孢唑林32〉1280.06~>128青霉素〉128>1288~>128氨芐西林16640.0664苯唑西林64〉1280.5>128萬古霉素0.510.252表皮葡萄球菌PMC-SA11320.2564MSSE菌株頭孢唑林0.030.5<0.1250.5青霉素4320.125128氨芐西林0.030.25〈0.1250.25苯唑西林0.030.125〈0.1250.25萬古霉素0.50.50,060.5腸球菌PMC-SA1>64>648〉128頭孢唑林32〉12832>128青霉素326432〉128氨節(jié)西林0.5160.2516苯唑西林16〉1288〉128萬古霉素120.550大腸桿菌PMC-SA116〉324〉16頭孢唑林>128〉128128>128青霉素>128〉128〉128氨節(jié)西林>128〉12816〉128苯唑西林〉128>128〉128萬古霉素>128>128〉128鮑曼不動桿菌PMC-SA132〉640.5〉64頭孢唑林>128〉128〉128青霉素>128>128〉128氨芐西林>128>12816~〉128苯唑西林>128>128〉128萬古霉素>128>128128〉128實施例5新型抗生素的對金葡菌、腸球菌和大腸桿菌感染動物體內(nèi)保護試驗一.實驗材料(1).藥物使用藥物同實施例4。以上樣品用無菌水溶解稀釋，藥物注射濃度為10mg/kg、5mg/kg、2.5mg/kg。(2)細菌耐甲氧西林金葡菌ATCCBAA-42、耐青霉素金葡菌ATCC29213、耐萬古霉素腸球菌ATCC700802、大腸桿菌(臨床分離氨芐青霉素敏感株，32033)。二.實驗方法昆明小鼠340只，雌雄各半，體重1520克，隨機分組為腹腔分別注射金黃色葡萄球菌ATCCBAA-42、ATCC29213、腸球菌ATCC700802和大腸桿菌(臨床分離氨芐青霉素敏感株，32033)四個大組，其中PMC-SA1、青霉素、氨芐西林、頭孢唑林和萬古霉素實驗組分13別為每組小鼠5只，對照組每組小鼠10只。腹腔注射致死劑量的細菌后，各藥物試驗組小鼠分別自靜脈注射10mg、5mg、2.5mg/kg劑量的藥物一次，每24小時觀察結果，連續(xù)觀察7-14天，以小鼠死亡為陽性結果。三.結果5mg、3mg和lmg藥物劑量組結果顯示，PMC-SA1組小鼠存活率在3個劑量組中與萬古霉素組小鼠存活率始終保持了恒定的差距，因此在體內(nèi)試驗中PMC-SA1對抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染的治療效果遠優(yōu)于萬古霉素。這可能是PMC-SA1既殺菌又抑制細菌毒素分泌的雙重效果所致。因而該藥在臨床應用時可能具有其他抗生素無法比擬的治療效果，其他各抗生素小鼠死亡率>80%，己不具備可比性；對照組于48小時內(nèi)全部死亡。試驗結果見表2<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</table由實施例4和5的表1和表2結果可以看出:1.金葡球菌(MRSA)體外抗菌活性比較苯唑西林MIC90測定值比PMC-SA1測定值大8倍。PMC-SA1分子量(70,0000)是萬古霉素分子量(1,400)的49倍，苯唑西林分子量(450)的155倍。按單位體積內(nèi)相同藥物分子數(shù)標定，則PMC-SA1對金葡球菌(MRSA)體外抗菌活性相當于萬古霉素對MRSA體外抗菌活性的3倍，相當于苯唑西林對MRSA體外抗菌活性的l，240倍。2.PMC-SA1感染小鼠體內(nèi)保護實驗中，最小劑藥量(2.5mg/kg)條件下PMC-SA1組的死亡率最低(40%),其他各組死亡率分別為青霉素組60%，氨芐西林組100%，萬古霉素60%，對照組100%。該結果顯示PMC-SA1的保護率最高(60°/。)；青霉素和萬古霉素的保護率次之(鄉(xiāng))。實施例6新型抗生素對表皮葡萄球菌生長的影響細菌為購自中國菌種保存中心(國家醫(yī)藥管理局生物制品檢定所，北京天壇)的表皮葡萄球菌標準菌株，編號26069，菌液3微升(106CFU/ml級菌量)加入1%蛋白胨，l%NaCl，0.5%酵母。0.5%葡萄糖，0.1%K2HPO4的培養(yǎng)液10ml中，共準備4組，第一組加入0.3MNaCI+50mM硼酸緩沖液(量與實驗組中抗菌多肽液體量相同)作為對照，第二組加入2ng/ml青霉素G鈉，余各實驗組加入2ng/mlPMC-SA1和PMC-SE(保存液為0.3MNaCl+50mM硼酸緩沖液)。上述各組液體置于100ml三角燒瓶中，200rpm，37。C生長，每小時采樣10(^1加入96孔酶標板中經(jīng)分光光度計(A595nm)比色測定細菌生長濁度，畫出細菌生長曲線來比較抗菌多肽的抑菌效力，結果見圖IO，由圖中可見，表皮葡萄球菌的生長可被抗金葡多肽部分抑制，可被抗表葡多肽有效的抑制。實施例7幾種新型抗生素抑菌效果的比較以下試驗比較了本發(fā)明制備的6種抗菌多肽的抑菌活性，細菌為美國標準菌株，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌ATCCBAA-42，菌液5微升(106CFU/ml級菌量)加入1%蛋白胨，l%NaCl，0,5°/。酵母。0.5%葡萄糖，1%K2HP04的培養(yǎng)液10m中，共準備8組，第一組加入0.3MnaCl+50mM硼酸緩沖液(量與實驗組中抗菌多肽液體量相同)作為對照，第二組加入5ng/ml青霉素G鈉，余各組加入PMC-SA1、PMC-SA2、PMC-SA3、PMC-SA4、PMC-SE和PMC-PA(保存液為0.3MNaCH50mM硼酸緩沖液)。上述各組液體置于100/nl三角燒瓶中，200rpm，37。C生長，每小時采樣10(H4加入96孔酶標板中經(jīng)分光光度計(A595raO比色測試細菌生長濁度，畫出細菌生長曲線來比較抗菌多肽的抑菌能力，結果見圖11。結果顯示，耐甲氧西林金葡菌的生長幾乎不能被苯嗶西林抑制，PMC-PA的抑菌效果最差，抑制效果最好的是PMC-SA1，其次是PMC-SE和PMC-SA4，PMC-SA2和PMC-SA3再次之。實施例8新型抗生素對綠膿桿菌生長的影響細菌為購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的綠膿桿菌標準菌株(ATCC27853)，菌液5微升(106CFU/ml級菌量)加入MH培養(yǎng)液10ml中，共準備7組，第一組加入0.3MNaCl+50mM硼酸緩沖液(量與實驗組中抗菌多肽液體量相同)作為對照，第二組加入5ng/ml野生型大腸菌素Ia,第三組加入5pg/mlPMC-SA1，第四組加入5pg/mlPMC-PA。上述各組液體置于100ml三角燒瓶中，200rpm,37。C生長，每小時采樣100nl加入96孔酶標板中經(jīng)分光光度計(A595nm)比色測定細菌生長濁度，畫出細菌生長曲線來比較抗菌多肽的抑菌效力，結果見圖12。由圖中可見，實驗中綠膿桿菌的生長僅被PMC-PA完全抑制，而野生型大腸菌素Ia和PMC-SA1均不能有效抑制綠膿桿菌的生長。實施例9新型抗生素的多重耐藥綠膿桿菌感染動物體內(nèi)保護試驗一.實驗材料(1)藥物PMC-PA、哌拉西林、阿米卡星、頭孢他啶、左氧氟沙星。(2)細菌多重耐藥綠膿桿菌(臨床分離株13280，華西醫(yī)科大學檢驗科細菌室)。二.實驗方法昆明小鼠60只，雌雄各半，體重1520克，隨機分組，腹腔注射多重耐藥綠膿桿菌，其中PMC-PA、哌拉西林、阿米卡星、頭孢他啶和左氧氟沙星實驗組分別為每組小鼠10只，對照組每組小鼠IO只。腹腔注射致死劑量的細菌后，各藥物試驗組小鼠分別自靜脈注射上述藥物一次，每24小時觀察結果，連續(xù)10天，以小鼠死亡為陽性結果。三結果如圖13所示小鼠生存曲線，腹腔注射致死劑量多重耐藥綠膿桿菌后，(1)，對照組在2天內(nèi)全部死亡，(2)，哌拉西林50mg/kg組在3天內(nèi)全部死亡，(3)，阿米卡星15mg/kg組在164天內(nèi)全部死亡，(4)，頭孢他啶50mg/kg組的10天存活率為20%，(5)，左氧氟沙星5mg/kg組的10天存活率為40%，(6)PMC-PA5mg/kg組的10天存活率為100%。結果顯示，對多重耐藥綠膿桿菌致死性感染，本發(fā)明的新型抗生素PMC-PA表現(xiàn)出了所試現(xiàn)用抗生素無法比擬的抗菌活性。實施例10大腸菌素變構多肽的免疫效果觀察取大腸菌素Ia變構多肽、實施例1中PMC-SA1及野生型大腸菌素Ia、發(fā)明人前期發(fā)明的抗金葡菌多肽(ZL01128836.1)各一份免疫小鼠上述各蛋白與佐劑混合后，基礎量和追加量為腹腔注射每只50(0.5ml)1次。間隔兩周，免疫5針。ELISA間接法檢測小鼠血清效價(肖毅等，抗金葡菌多肽單克隆抗體制備及初歩測定，陜西醫(yī)學雜志，35(1):6—7，32(2006))。野生型大腸菌素la以及抗金葡菌多肽(ZL01128836.1)所免疫小鼠血清效價為10-4至10-s,而大腸菌素Ia變構多肽以及本發(fā)明PMC-SA1所免疫小鼠血清效價為l(T2至IO-3。因此大腸菌素Ia變構多肽以及本發(fā)明的新型抗生素PMC-SA1造成宿主致敏反應的可能性要比野生型大腸菌素la以及抗金葡菌多肽造成宿主致敏反應的可能性低一至兩個數(shù)量級。以上對本發(fā)明的詳細描述并不限制本發(fā)明，本領域技術人員可以根據(jù)發(fā)明作出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應屬于本發(fā)明所附權利要求的范圍。附錄序列表SEQIDNO,1編碼金黃色葡萄球菌信息素AgrDI的基因片段tattccacctgtgattttataatgSEQIDNO.2金黃色葡萄球菌信息素AgrDI的人工序列TyxSerThrCysAspPhelieMetSEQIDNO.3<213>編碼金黃色葡萄球菌信息素AgrDII的基因片段ggagttaacgcatgttcttccctgtttSEQIDNO.4金黃色葡萄球菌信息素AgrDII的人工序列GlyValAsnAlaCysSerSerLeuPheSEQIDNO.5編碼金黃色葡萄球菌信息素AgrDIII的基因片段tatataaactgtgattttcttctgSEQIDNO.6金黃色葡萄球菌信息素AgrDIII的人.丁.序列TyrlieAsnCysAspPheLeuLeuSEQIDNO.7編碼金黃色葡萄球菌信息素AgrDIV的基因片段tattccGcctgttactttataatgSEQIDNO.8金黃色葡萄球菌信息素AgrDlV的人工序列TyrSerThrCysTyrPhelieMetSEQIDNO9編碼表皮葡萄球菌信息素的基因片段gattccgtttgtgcatcctattttSEQIDNO10表皮葡萄球菌信息素的人T序列AspSerValCysAlaSerTyrPheSEQIDNO11大腸菌素Ia變構多肽基因序列atgtctgaccctgtacgtattacaaatcccggca犯gaaaggtaccccgcgttg￡l"tg3"ttaaaascacgccgcctctctggccggaascgctgagagaatgagagccggatcgttaatcggetgatatgcc"tgg犯aa犯gggcagca.gaaeggaategectgcatggagcccc犯cccgtcagcgcgcaeggegattgecagatgccgcaeggattccgtgctgtUgcaacaggctgattgetgaatatC犯C3犯tCacaaccagcgctggeict3t3ggtg3,g3ettgatgecactcagtgccaagaaaacaggaaatcagtttcaggcta朋gcgggctg織gagtctgtgatatgeaggaacacgg組gattaacaeggecgcctgacggattctattgtcagtcatcgaaacgeaatataaatttataag犯caaatgaatataegtaaatgaactgaacagaaaaatagg犯g犯aat11aacaaaaaagctgtctgaaatttacaagtgatatttatUccttcggg犯gtgatatcgc卿3卿gtgc朋gggaatgatattacatactga犯tctgatgetgataaascggcagegagegcagaagcccttgcccagggecattcegtaatgeaca犯3cg3tatgtgagcggttaaccgtgcatctg犯tgactgctgaagttcscctctgctgcaaaagcatCC3gCtttCCggcaacgaaaacgt犯tgttaattaatgeatatategtettcttgctgacgcagcagaatcgctggggtactcaaccctccacgtgtcgaaacaaaaccatctggggcggaatgag犯taagegtactgaaaagatgaaaacacactgaacgacaggagttcagactcctgeeggatatgacgccctccgtetcttegtatatctccccgaaggatgegeagsaegcagaaaaggtattctggacacccggttcttgatgcacaacaggctcagaggcccggaataaactttaaccagagctgasc犯cagtttcccctgaaaaattcccgatccgagat"ttgeeggtaeaacctgaattatcttctgagcgg犯tccggtggtgacagagctgaatggg自agttacggaatctgeggtaaatteggegcaaatgacgetcttaatgeggcatcaatcagaagatagcgaegcaattaatttcac肌cgctgagcagttagecagagagaagaggcattaa犯acgtaaaagatcgtgcagegattgeaatctgaacagattcagtcgtggatcactgagtttggtaatgattcagattgtctttaaaaaacgagtggcacagcgtacagccgg犯犯aacactccgtgcaggcagaggetgeatacaggaggecaggcaagaaggeegttgtcagagccgtctgctccagttcagtggetgaegcaaggggcgttcagataaaaatcccattccggtggatgtggaagcaaagattgcctgttgaagagagttcctg2427242424tgaaaagtaccgcagcccttgggactgggaggctgtccgg601201802403003604204805406006607207808409009601020108011401200126013201380144。150015601620acagagaactggcgtcctctttttgttaaatcatagcaggcaatgccgca1740acggctcttgtggcactggtcttcagtattettaceggaagcgcUtaggcattateggg1800tatggtttactgstggctgtcaccggtgcgctgattgatgaatcgcttgtgg朋aaagcgI860aataagttctgggg城t1878SEQIDNO:12編碼新型抗生素PMC-SA1的基因序列atgtctgaccctgtacgtattacaaatcccgC3gC3g肌tcgctggggtatgattcagat60ggca肌ga犯ttatgggtgttgatatttatctcaaccctccacgtgtcgatgtcttt犯a120ggtaccccgcctgcatggagttccttcgggtctggggcggaaacgagtgg薦gttg3tg3ttcccc朋cccg犯gtgatatcgaaaaaagggacaaggasstcEicagcgtac240tcagcgcgcaaatgag貼taagegtactga3gccggaaaa300cgcctctctgcggcgaUgcaaagatgaaaacacactgaaaacactccgt360gccggaaacgC3gatgccgctgatattacacgacaggagttcagactcctgcaggcagag420ctgagagaatacggattccgtactgaaatcgeeggatatgacgccctccggetgeataca480gagagccggatgctgtttgctgatgetgattetcttegtatatctccccgggaggecagg540tcgttaatcgascaggctgaaaaacggcag朋gggitgcgcagaaegcagscaagaaggee600gctgstatgcttgctg犯taegagege犯3ggtattctgg3C8CCCggttgtcagag660ctggaaaaaaatggcggggcagcccttgccgttcttgatgcacaacaggcccgtctgctc720gggcagc柳cacggaatgacagggecatttcagaggcccggaat犯3Ctcagttcagtg780acggaatcgcttaacacggcCCgt犯tgC3ttaaccagagctgaacaacagetgaegcaa840cgcctgacggcaaaacgatagtttcccctgaaas^ttcccggggcgttca900attctattgttgtgagcggtgatccgagatttgeeggtaegataaaaatc960acaaccagcgcagtcatcgataaccgtgcaaacctgaattatcttctgagccattccggt1020ctggeictei"t3aacgcaatattctgaatgaceggaatceggtggtg織gaggatgtggaa1080ggtgacaagsaaatttataatgctgaagttgCtg￡L￡ltgggataagttacggcaaagattg1140cttgatgccaga犯t犯aatcacctctgctgaatctgeggtaaatteggegagaaataac1200ctcagtgccagaacaaatgagcaaaagcatgcaaatgacgetcttaatgecctgttgaag1260atatacgtaaccagctttccggcatc肌tcagaageiteigcgg肌gagaaa1320agaaaacaggstgaactgaaggcaacgaaagaegcaattaatttcacsac卿gttcctg1380犯atcagtttgctgagcagttagcc卿gagatggccggg1440caggctaaagggaagaaaatacgtaiatgttga卿ggcattaaaaacgtatgaaaagtac1500cgggctgacsttaacaaaaaaattaatgeaaaagatcgtgcagegattgecgcagccctt1560gagtctgtgaagctgtctgatatategtetaatctgaacagattcagtcggggactggga1620tatgcaggaaaatttacaagtcttgctgsctggatcactgagtttggt朋ggctgtccgg1680ac卿gaactggcgtcctctttttgttaaatcatagcaggcaatgccgca1740acggctcttgtggcactggtcttcagtattettaceggaagegctttaggcattateggg1800tatggtttactg3tggCtgtcaccggtgcgctgattgatgaatcgcttgtggaaaaagcg1860aataagttctggggttattccacctgtgattttataatgattL902SEQIDNO.13新型抗生素PMC-SA1的人工序列SerAspProValArglieThrAsnProAlaAlaGluSerLeuGlyTyrAspSerAspGlyArgGlulieMetGlyValAsplieTyrLeuAsnProProArgValAspValPhelysGlyThrProProAlaTrpSerSerPheGlyAsnLysThrlieTrpGlyGlyAsnGluTrpValAspAspSerProThrArgSerAsplieGluLysArgAspLysGlulieThrAlaTyrLysAsnThrLeuSerAlaGinGinLysGluAsnGluAsnLysArgThrGluAlaGlyLysArgLeuSerAlaAlalieAlaAlaArgGluLysAspGluAsnThrLeuLysThrLeuArgAlaGlyAsnAlaAspAlaAlaAsplieThrArgGinGluPheArgLeuLeuGinAlaGluLeuArgGluTyrGlyPheArgThrGlulieAlaGly丁yrAspAlaLeuArgLeuHisThrGluSerArgMetLeuPheAlaAspAlaAspSerLeuArglieSerProArgGluAlaArgSerLeulieGluGinAlaGluLysArgGinLysAspAlaGinAsnAlaAspLysLysAlaAlaAspMetLeuAlaGluTyrGluArgArgLysGlylieLeuAspThrArgLeuSerGluLeuGluLysAsnGlyGlyAlaAlaLeuAlaValLeuAspAlaGinGinAlaArgLeuLeuGlyGinGinThrArgAsnAspArgAlalieSerGluAlaArgAsnLysLeuSerSerValThrGluSerLeuAsnThrAlaArgAsnAlaLeuThrArgAlaGluGinGinLeuThrGinGinLysAsnThrProAspGlyLysThrlieValSerProGluLysPheProGlyArgSerSerThrAsnHisSerlieValValSerGlyAspProArgPheAlaGlyThrlieLyslieThrThrSerAlaVallieAspAsnArgAlaAsnLeuAsnTyrLeuLeuSer19HisSerGlyLeuAspTyrLysArgAsnlieLeuAsnAspArgAsnProValValThrGluAspValGluGlyAspLys匕yslieTyrAsnAlaGluValAlaGluTrpAspLysLeuArgGinArgLeuLeuAspAlaArgAsnLyslieThrSerAlaGluSerAlaValAsnSerAlaArgAsnAsnLeuSerAlaArgThrAsnGluGinLysHisAlaAsnAspAlaLeuAsnAlaLeuLeu匕ysGlu匕ysGluAsnlieArgAsnGinLeuSerGlylieAsnGinLyslieAlaGluGluLysArgLysGinAspGluLeuLysAlaThr匕ysAspAlalieAsnPheThrThrGluPheLeu匕ysSerValSerGluLysTyrGlyAlaLysAlaGluGinLeuAlaArgGluMetAlaGlyGinAlaLysGlyLysLyslieArgAsnValGluGluAlaLeuLysThrTyrGluLysTyrArgAlaAsplieAsntysLyslieAsnAlaLysAspArgAlaAlalieAlaAlaAlaLeuGluSerValLysLeuSerAsplieSerSerAsnLeuAsnArgPheSerArgGlyLeuGlyTyrAlaGlyLysPheThrSerLeuAlaAspTrplieThrGluPheGlyLysAlaValArgThrGluAsnTrpArgProLeuPheValLysThrGluThrlielieAlaGlyAsnAlaAlaThrAlaLeuValAlaLeuValPheSerlieLeuThrGlySerAlaLeuGlylielieGlyTyrGlyLeuLeuMetAlaValThrGlyAlaLeulieAspGluSerLeuValGluLysAlaAsnLysPheTrpGlylieTyrSerThrCysAspPhelieMetSEQIDNO.14編碼新型抗生素PMC-SA2的基因序列atgtctgeiccctgtacgtattacaaatcccgcagcagaatcgctggggtatgattcagat60ggcaa卿asttatggccgtctcaaccctccacgtgtcgatgtctttaaa120ggtaccccgcctgcatggagUccUcgggtctggggcggaaacgagtgg180gttgatgattcccc犯cccgaagtgatatcgaaaaaagggacaaggaaatcacagcgtac240tcagcgcgcagc卿aagagaatgagaataagegtactgaagccggaa犯300cgcctctctgCggCg3ttgCtgcaagggaaaaagatgaaaacacactg犯aacactccgt360gccgg犯acgcagatgccgctgatattacacgacaggagttcagactcctgc鄉(xiāng)cagag420ctgagagaMacggattccgtactgaaatcgccgg血tgacgccctccggetgeataca480gagagccggstgctgtUgctgatgetgattetcttegtatatctccccgggaggecagg540tcgttaatcgaacaggctgaaa犯cggc3gaaggatgegeagaaegcagacaagaaggee600gctgatatgcttgctgaeitaegagegcagaa犯ggtattctggacacccggttgtcagag660atggcggggcagcccttgccgttcttgatgcacaacaggcccgtctgctc720gggcagc卿C3Cgg犯tgacagggecatttcagaggcccggaataaactcagttcagtg780acggaatcgcttaacacggccegtaatgesttaaccagagc"tgaacaEicagetgaegcaa840cgcctgacggcaaaacgatagtttcccctgaaaaattcccggggcgttcs900tcaacaaatcattctattgttgtgagcggtgatccgagat"ttgeeggtaegataaaaatc960acaaccagcgcagtcatcgataaccgtgcaaacctgaattatcttctgagccattccggt1020ctggactataaacgcaatattctgaatgaceggaatceggtggtgac卿ggatgtgg犯1080ggtgacaagatgctgaagttgctgaatgggataagttacggcaaagattg1140cttgatgccacacctctgctgaatctgeggtaaatteggegagaaataac1200ctcagtgccagcaaaagcatgcaaatgacgetcttaatgecctgttgaag1260gaaaaagagaatatacgtaaccagctttccggcatc犯tcaga卿tagcggaag柳aa1320ag肌犯caggatg犯ctgaaggcaacg犯agaegcaattaatttcacaacagagttcctg1380aaatcagtttcagaaaaatatggtgcaaaagctgagcagttagecagagagatggccggg1440caggctaaagggasgaaaatacgtaa/tgttg8卿ggcatta肌肌cgtatgaaaagtac1500cgggctgacaaatt犯tgca383gatCgtgcagegattgecgcagccctt1560gagtctgtgaagctgtctg￡itatategtetaatctgaacagattcagtcggggactggga1620tatgcaggaa犯tttac犯gtettgetgaetggatcactgagtttggtaaggctgtccgg1680acag卿actggcgtcctctttttgtta犯tcatagcaggcaatgccgca1740acggctcttgtggC3Ctggtcttcagtattettaceggaagegctttaggcattateggg畫tatggtttactgatggctgtcaccggtgcgctgattgatgaatcgcttgtggaaa犯gcg1860aataagttctggggtggagttaacgcatgttcttccctgttttaa1905SEQIDNO.15新型抗生素PMC-SA2的人工序列SerAspProValArglieThrAsnProAlaAlaGluSerLeuGlyTyrAspSerAspGlyArgGlulieMetAlaValAsplieTyrLeuAsnProProArgValAspValPheLysGlyThrProProAlaTrpSerSerPheGlyAsnLysThrlieTrpGlyGlyAsnGluTrpValAspAspSerProThrArgSerAsplieGluLysArgAspLysGlulieThrAlaTyr匕ysAsnThrLeuSerAlaGinGinLysGluAsnGluAsnLysArgThrGlu20AlaGlyLysArg匕euSerAlaAlalieAlaAlaArgGluLysAspGluAsnThrLeuLysThrLeuArgAlaGlyAsnAlaAspAlaAlaAsplieThrArgGinGluPheArgLeuLeuGinAlaGluLeuArgGluTyrGlyPheArgThrGlulieAlaGlyTyrAspAlaLeuArgLeuHisThrGluSerArgMetLeuPheAlaAspAlaAspSerLeuArglieSerProArgGluAlaArgSer匕eulieGluGinAlaGluLysArgGinLysAspAlaGinAsnAlaAspLysLysAlaAlaAspMetLeuAlaGluTyrGluArgArgLysGlylieLeuAspThrArgLeuSerGluLeuGluLysAsnGlyGlyAlaAlaLeuAlaValLeuAspAlaGinGinAlaArgLeuLeuGlyGinGinThrArgAsnAspArgAlalieSerGluAlaArgAsnLysLeuSerSerValThrGluSerLeuAsnThrAlaArgAsnAlaLeuThrArgAlaGluGinGinLeuThrGinGinLysAsnThrProAspGlyLysThrlieValSerProGluLysPheProGlyArgSerSerThrAsnHisSerlieValValSerGlyAspProArgPheAlaGlyThrlieLyslieThrThrSerAlaVallieAspAsnArgAlaAsnLeuAsnTyrLeuLeuSerHisSerGlyLeuAspTyr乙ysArgAsnlieLeuAsnAspArgAsnProValValThrGluAspValGluGlyAsp匕ysLyslieTyrAsnAlaGluValAlaGluTrpAspLysLeuArgGinArgLeuLeuAspAlaArgAsnLyslieThrSerAlaGluSerAlaValAsnSerAlaArgAsnAsnLeuSerAlaArgThrAsnGluGinLysHisAlaAsnAspAlaLeuAsnAlaLeuLeuLysGluLysGluAsnlieArgAsnGinLeuSerGlylieAsnGin乙yslieAlaGluGlu匕ysArg匕ysGinAspGluLeu匕ysAlaThrLysAspAlalieAsnPheThrThrGluPheLeuLysSerValSerGluLys丁yrGlyAlaLysAlaGluGinLeuAlaArgGluMetAlaGlyGinAlaLysGlyLysLyslieArgAsnValGluGluAlaLeuLysThrTyrGluLysTyrArgAlaAsplieAsnLys匕yslieAsnAlaLysAspArgAlaAlalieAlaAlaAlaLeuGluSerValLysLeuSerAsplieSerSerAsnLeuAsnArgPheSerArgGlyLeuGlyTyrAlaGlyLysPheThrSerLeuAlaAspTrplieThrGluPheGlyl>ysAlaValArgThrGluAsnTrpArgProLeuPheValLysThrGluThrlielieAlaGlyAsnAlaAlaThrAlaLeuValAlaLeuValPheSerlieLeuThrGlySerAlaLeuGlylielieGlyTyrGlyLeuLeuMetAlaValThrGlyAlaLeulieAspGluSerLeuValGlu匕ysAlaAsnLysPheTrpGlylieGlyValAsnAlaCysSerSerLeuPheSEQIDNO.16編碼新型抗生素PMC-SA3的基因序列atgtctgaccctgtscgtattacaaatcccgcagcagaatcgctggggtatgattcagat60ggcaaagaaaUatggccgttgatstttatctcaaccctccacgtgtc.gatgtctttaaa120ggtaccccgcctgcatggagttccttcgggtctggggcgga犯cgagtgg180gttgatgattcccc犯cccgaagtgatatcgaaaaaagggacaaggaaatcacagcgtac240貼肌acacgctcagcgcgcaaatgag犯taagegtsctgaagccgg犯犯300cgcctctctgcggcgattgctgcaagggaa3犯gatgaaaacacactg犯aacactccgt360gccgg咖cgcagatgccgctgatattacacgacaggagttcagactcctgcaggcagag420ctgagagaatscggattccgtactg犯atcgeeggatatgacgccctccggetgeataca480g鄉(xiāng)gccggatgctgtttgctgatgetgattctcttcgtatatctccccgggaggecagg540tcgtt犯tcg肪CEiggctgaaaaacggcsg犯ggatgcgcagaaegcagacaagaaggee600gctgatatgcttgctgaataegagegcagaaaaggtattctggacacccggttgtcagag660ctgga犯aaastggcggggcagcccttgccgttcttgatgcacaacaggcccgtctgctc720gggcagc鄉(xiāng)cacggaatgacagggecatttcagaggcccggaataaactcagttcagtg780acggaatcgcttaacacggccegtaatgesttaaccagagctgaacaacagetgaegcaa840cgcctgacggcaaaacgatagtttcccctgaaa犯ttcccggggcgttca900tcaacaaatcattctattgttgtgagcggtgstccgagatUgccggtacgata犯aatc960acaaccagcgcagtcatcgat肌ccgtgcaaacctgaattatcttctgagccattccggt1020ctggactataaacgcaatattctgaatgaceggaatceggtggtgacsgaggatgtgg犯1080ggtgsc犯gaaaatttataatgctg犯gttgctgaatgggataagttacg1140cttgatgccagaaataaaatcacctctgctgaatctgeggtaaatteggegaga犯taac1200ctcagtgccagaacaaatgagcaaaagcatgc犯atgacgetcttaatgecctgttgaag1260ga肌aagagaatatacgtaaccagctttccggcatcaatcgg犯gagaaa1320agaaaacaggatg犯ctgaaggcaacgaaagaegcaattaatttcacaacagagttcctg1380aaatcagtttcag犯犯atatggtgca犯agctgagcagttagecagagagatggccggg1440caggctaaaggg犯g犯aatacgtaeitgttga卿ggcattaaaaacgtatgaaaagtac1500cgggctgacattaacaa膽aaattaatgca犯agatcgtggagtctgtgaagctgtctgatatatcgtctaatctgaacatatgcaggaaaatttacaagtcttgctgactggatcactgacagagaactggcgtcctctttttgttaaaacagaaaccaacggctcttgtggcactggtcttcagtattcttaccggaatatggtttactgatggctgtcaccggtgcgctgattgatg朋taagttctggggtatttatataaactgtgattttcttcSEOIDNO17新型抗生素PMC-SA3的人工序列SerAspProValArglieThrAsnProAlaAlaAspSerAspGlyArgGlulieMetGlyValAspProArgValAspValPhe匕ysGlyThrProProGlyAsnLysThrlieTrpGlyGlyAsnGluTrpThrArgSerAsplieGluLysArgAspLysGluAsnThrLeuSerAlaGinGinLysGluAsnGluAlaGlyLysArgLeuSerAlaAlalieAlaAlaAsnThrLeuLysThrLeuArgAlaGlyAsnAlaThrArgGinGluPheArgLeuLeuGinAlaGluPheArgThrGlulieAlaGly丁yrAspAlaLeuSerArgMetLeuPheAlaAspAlaAspSer乙euGluAlaArgSerLeulieGluGinAlaGluLysGinAsnAlaAspLysLysAlaAlaAspMetLeuArgLysGlylieLeuAspThrArgLeuSerGluGlyAlaAlaLeuAlaValLeuAspAlaGinGinGinGinThrArgAsnAspArgAlalieSerGluSerSerValThrGluSerLeuAsnThrAlaArgAlaGluGinGinLeuThrGinGinLysAsnThrlieValSerProGluLysPheProGlyArgSerlieValValSerGlyAspProArgPheAlaGlyThrSerAlaVallieAspAsnArgAlaAsnLeuHisSerGlyLeuAspl，yrLysArgAsnlieLeuValValThrGluAspValGluGlyAspLysLysValAlaGluTrpAspLysLeuArgGinArgLeuLyslieThrSerAlaGluSerAlaValAsnSerSerAlaArgThrAsnGluGin匕ysHisAlaAsnLeuLeuLysGluLysGluAsnlieArgAsnGinGinLyslieAlaGluGluLysArgLysGinAspLysAspAlalieAsnPheThrThrGluPheLeuLysTyrGlyAlaLysAlaGluGinLeuAlaArgAlaLysGlyLysLyslieArgAsnValGluGluGluLysTyrArgAlaAsplieAsnLysLyslieAlaAlalieAlaAlaAlaLeuGluSerValLysSerAsnLeuAsnArgPheSerArgGlyLeuGlyThrSerLeuAlaAspTrplieThrGluPheGlyGluAsnTrpArgProLeuPheValLysThrGluAsnAlaAlaThrAlaLeuValAlaLeuValPheSerAlaLeuGlylielieGlyTyrGlyLeuLeuAlaLeulieAspGluSerLeuValGluLysAlalieTyrlieAsnCysAspPheLeuLeuSEQIDNO18編碼新型抗生素PMC-SA4的基因序列atgtctgaccctgtacgteittac犯atcccgcagcagaatggcaaagaaattatgggtgttgatatttatctcaaccctcggtaccccgcctgcatggagttccttcgggaacaaaaccagttgatgattccccaacccgaagtgatatcgaaaaaagggaaaaacacgctcagcgcgcagcagaaagagaatgagaatacgcctctctgcggcgattgctgcaagggaaaaagatgaaagccggaaacgcagatgccgctgatattacacgacaggagtctgagagaatacggattccgtactgaaatcgccggatatggagagccggatgctgtttgctgatgctgattctcttcgtatcgtt犯tcg犯caggctg3aaaacggceigaaggatgcgcgctgatatgcttgctgastacgagcgcagaaaaggtattcctggaaaaaaatggcggggcagcccttgccgttcttgatggggcagcagacacggaatgacagggccatttcagaggccccagcgattgccgcagccctt1560gattcagtcggggactggga1620agtttggtaaggctgtccgg1680tcatetgcaggcaatgccgca1740gcgctttsggcattatcggg1800aatcgcttgtggaaaaagcg18601905GlLlSerLeuGlyTyrlieTyrLeuAsnProAlaTrpSerSerPheValAspAspSerProlieThrAlaTyr匕ysAsnLysArgThrGluArgGluLysAspGluAspAlaAlaAsplieLeuArgGluTyrGlyArgLeuHisThrGluArglieSerProArgArgGinLysAspAlaAlaGluTyrGluArgLeuGlu匕ysAsnGlyAlaArgLeuLeuGlyAlaArgAsnLysLeuAsnAlaLeuThrArgProAspGlyLysThrSerThrAsnHisSerThrlie匕yslieThrAsnTyrlxuLeuSerAsnAspArgAsnProlieTyrAsnAlaGluLeuAspAlaArgAsnAlaArgAsnAsnLeuAspAlaLeuAsnAlaLeuSerGlylieAsnGluLeuLysAlaThrLysSerValSerGluGluMetAlaGlyGinAlaLeu匕ysThrTyrAsnAlaLysAspArgLeuSerAsplieSer"TyrAlaGlyLysPheLysAlaValArgThrThrlielieAlaGlySerlieLeuThrGlyMetAlaValThrGlyAsnLysPheTrpGlycgctggggtatgattcagat60C3CgtgtCgatgtctttaaa120tctggggcgga犯cgagtgg180acaaggaaatcacagcgtac240agcgtactgaagccggaaaa雄acacactgaaaacactccgt360tcagactcctgc3ggc3gag420acgccctccggctgC3tsca480tatctccccgggaggccagg540ag犯cgcagac犯gsaggcc600tggacacccggttgtc卿g660cacaacaggcccgtctgctc720ggaataaactcagttcagtg78022acggaatcgcttaacacggcccgtaatgcattaaccagagctgsacaacagctgacgcaa840cgcctgacggcaaaacgatagtttcccctgasasattcccggggcgttca900tcaacaaatcattctattgttgtgagcggtgatccgagatttgccggtacgat朋aaatc960acaaccagcgcagtcatcgataaccgtgca朋cctgaattatcttctgagccattccggt1020ctggactataaacgcaatattctgaatgaccgg犯tccggtggtg隠gaggatgtggaa1080tgctga.agttgctgaatgggata.agttacggcaaagattg1140cttgatgccacacctctgctgaatctgcggtaaattcggcgag肌ataac1200ctcagtgccagaacaaatgagcaasagcatgcaaatgacgctcttaBtgccctgttga.a.g1260gaaaaagagaatatacgtaaccagctttccggcatcaatcagaagatagcggaagag犯a1320agaaaacaggatgaactgaaggcaacgaaagacgcaattaatttcacaacagagttcctg1380aaatcagtttcag犯aaatagctgagcagttagccagetgagatggccggg1440caggctaaaggg犯gaa紐acgtaatgttg,aggcatt犯aaacgtatgaaaagtac1500cgggctgacattaacaaaaaaattastgcaaaagatcgtgcagcgattgccgcagccctt1560agctgtctgatatatcgtctaatctgaacagattcagtcggggactggga1620tatgcaggaaaatttacaagtcttgctgactggatcactgagtttggtaaggctgtccgg1680ac卿gaactggcgtcctctttttgttaaatcatsgcaggcaatgccgca1740acggctcttgtggcactggtcttcagtattcttaccggaagcgctttaggcattatcggg1800tatggtttactgatggctgtcaccggtgcgctgattgatga.atcgcttgtggaaaaagcg1860aat肌gttctggggttattccacctgtgat:tttataatgatt1902SEQIDNO.19新型抗生素PMC-SA4的人工序列SerAspProVaiArglieThrAsnProAlaAlaGluSerLeuGly丁yrAspSerAspGlyArgGlulieMetGlyValAsplieTyrLeuAsnProProArgValAspValPheLysGlyThrProProAlaTrpSerSerPheGlyAsnLysThrlieTrpGlyGlyAsnGluTrpValAspAspSerProThrArgSerAsplieGluLysArgAspLysGlulieThrAlaTyrLysAsnThrLeuSerAlaGinGinLysGluAsnGluAsnLysArgThrGluAlaGlyLysArgLeuSerAlaAlalieAlaAlaArgGlulysAspGluAsnThrLeuLysThrLeuArgAlaGlyAsnAlaAspAlaAlaAsplieThrArgGinGluPheArgLeuLeuGinAlaGluLeuArgGluTyrGlyPheArgThrGlulieAlaGlyTyrAspAlaLeuArgLeuHisThrGluSerArgMetLeuPheAlaAspAlaAspSerLeuArglieSerProArgGluAlaArgSerLeulieGluGinAlaGluLysArgGinLysAspAlaGinAsnAlaAspLysLysAlaAlaAspMetLeuAlaGluTyrGluArgArgLysGlylieLeuAspThrArgLeuSerGluLeuGlulysAsnGlyGlyAlaAlaLeuAlaValLeuAspAlaGinGinAlaArgLeuLeuGlyGinGinThrArgAsnAspArgAlalieSerGluAlaArgAsn匕ysLeuSerSerVaLThrGluSerLeuAsnThrAlaArgAsnAlaLeuThrArgAlaGluGinGinLeuThrGinGinLysAsnThrProAspGlyLysThrlieValSerProGluLysPheProGlyArgSerSerThrAsnHisSerlieValValSerGlyAspProArgPheAlaGlyThrlieLyslieThrThrSerAlaVallieAspAsnArgAlaAsnLeuAsnTyrLeuLeuSerHisSerGlyLeuAsp丁yrLysArgAsnlieLeuAsnAspArgAsnProValValThrGluAspValGluGlyAspLysLyslieTyrAsnAlaGluValAlaGluTrpAspLysLeuArgGiniVrgLeuLeuAspAlaArgAsnLyslieThrSerAlaGluSerAlaValAsnSerAlaArgAsnAsnLeuSerAlaArgThrAsnGluGin匕ysHisAlaAsnAspAlaLeuAsnAlaLeuLeuLysGluLysGluAsnlieArgAsnGinLeuSerGlylieAsnGinLyslieAlaGluGluLysArgLysGinAspGluLeuLysAlaThrLysAspAlalieAsnPheThrThrGluPheLeuLysSerValSerGlutysTyrGlyAlaLysAlaGluGinLeuAlaArgGluMetAlaGlyGinAlaLysGlyLys匕yslieArgAsnValGluGluAlaLeuLysThrTyrGluLysTyrArgAlaAsplieAsnLysLyslieAsnAlaLysAspArgAlaAlalie/ViaiUaAlaLeuGluSerValLysLeuSerAsplieSerSerAsnLeuAsnArgPheSerArgGlyLeuGlyTyrAlaGlyLysPheThrSerLeuAlaAspTrplieThrGluPheGlyLysAlaValArgThrGluAsnTrpArgProLeuPheValLysThrGluThrlielieAlaGlyAsnAlaAlaThrAlaLeuValAlaLeuValPheSerlieLeuThrGlySerAlaLeuGlylielieGlyTyrGlyLeuLeuMetAlaValThrGlyAlaLeulieAspGluSerLeuValGluLysAlaAsnLysPheTrpGlylie丁yrSerThrCysTyrPhelieMet23SEQIDNO.20編碼新型抗生素PMC-SE的基因序列atgtctgaccctgtacgtattacaaatcccgcagcagaatcgctggggtatgattcagat60ttatgggtgttgatatttatctcaaccctccacgtgtcgatgtctttaaa120ggtaccccgcctgcatggagttccttcgggaac犯aaccatctggggcggaeiacgagtgg180gttgatgattcccc犯cccgaagtgatatcg犯犯aagggacaaggaaatcacagcgtac240a肌aacacgctcagcgcgcagcagssagagaatgagaataagcgtactgaagccggaaaa300cgcctctctgcggcgattgctgcaaggg朋aaagatgaaaacac3ctgasaacactccgt360gccggaaacgcagatgccgctgatattacacgacaggagttcagactcctgcaggcagag420ctgagagaatacggattccgt3Ctg338tCgccggatatgacgccctccggctgcataca棚gagagccggatgctgtttgctgatgctgattctcttcgtatatctccccgggaggccagg540tcgttaatcgaacaggctgaaaaBcggcsg犯ggatgcgcagaacgcagacaagaaggcc600gctgatatgcttgctgaatacgagcgcaga犯aggtattctggacacccggttgtc卿g660ctggafm^a3tggcggggcagcccttgccgttcttgatgcacaacaggcccgtctgctc720gggcagcagacacggaatgacagggccatttcagaggcccggaertaaactcagttcagtg780acggaatcgcttaacacggcccgtaatgcattaaccagagCtg犯C33C3gctgacgcaa840cgcctgacggcaaaacgatagtttcccctga犯aattcccggggcgttca■tcaacaaatcattctattgttgtgagcggtgatccgagatttgccggtacgataaaaatc960acaaccagcgceigtcatcgataaccgtgca肪cctgaattatcttctgagccattccggt1020ctggactataaacgcaatattctgaatgaccggaatccggtggtg織gaggatgtggaa1080ggtgacaagaaaatttataatgctgaagttgctgaatgggataagtt8cggca卿attg1140cttgatgccagaaataaaatcacctctgctgaatctgcggtaaattcggcgagaaataac1200ctcagtgccag犯caaatgagcaa犯gc3tgc犯3tgacgctcttaatgccctgttgaag函gaaaaagagsatatacgtaaccagctttccggcatcaatcagaagatagcgg犯gagaaa13203gaa幼caggatgaactgaaggcascg犯3gacgcaattaatttcacaacagagttcctg1380gctgagcagttagccagagagatggccggg1440caggctaaagggaagaaaatacgt33tgttga卿ggcat1500cgggctgacsttaacaaaaaaatt犯tgc3aaagatcgtgcagcgattgccgcagccctt1560gagtctgtga3gCtgtCtg3tatatcgtctaatctgaacagattcagtcggggactggga1620tatgcagg犯aatttacaag"tcttgctgactggatcactgagtttggt犯ggctgtccgg1680acagagaactggcgtcctctttttgtt犯atC由gC3ggcaatgccgca1740acggctcttgtggC3Ctggtcttcagtattcttaccggaagcgctttaggcattatcggg1800tstggtttactgatggctgtcaccggtgcgctgattgatgaatcgcttgtgg幼aaagcg1860ggggtgattccgtttgtgcatcctattttatt1902SEQIDNO.21新型抗生素PMC-SE的人工序列SerAspProValArglieThrAsnProAlaAlaGluSerLeuGlyTyrAspSerAspGlyArgGlulieMetGlyValAsplie丁yrLeuAsnProProArgValAspValPhe匕ysGlyThrProProAlaTrpSerSerPheGlyAsnLysThrlieTrpGlyGlyAsnGluT卬ValAspAspSerProThrArgSerAsplieGluLysArgAspLysGlulieThrAlaTyr匕ysAsnThrLeuSerAlaGinGinLysGluAsnGluAsnLysArgThrGluAlaGlyLysArgLeuSerAlaAlalieAlaAlaArgGluLysAspGluAsnThrLeuLysThrLeuArgAlaGlyAsnAlaAspAlaAlaAsplieThrArgGinGluPheArgLeuLeuGinAlaGluLeuArgGluTyrGlyPheArgThrGlulieAlaGlyTyrAspAlaLeuArgLeuHisThrGluSerArgMetLeuPheAlaAspAlaAspSerLeuArglieSerProArgGluAlaArgSerLeulieGluGinAlaGluLysArgGinLysAspAlaGinAsnAlaAspLys匕ysAlaAlaAspMetLeuAlaGluTyrGluArgArgtysGlylieLeuAspThrArgLeuSerGluLeuGluLysAsnGlyGlyAlaAlaLeuAlaValLeuAspAlaGinGin/UaArgLeuLeuGlyGinGinThrArgAsnAspArgAlalieSerGluAlaArgAsnLysLeuSerSerValThrGluSerLeuAsnThrAlaArgAsnAlaLeuThrArgAlaGluGinGinLeuThrGinGinLysAsnThrProAspGlyLysThrlieValSerProGluLysPheProGlyArgSerSerThrAsnHisSerlieValValSerGlyAspProArgPheAlaGlyThrlieLyslieThrThrSerAlaVallieAspAsnArgAlaAsnLeu/VsnTyrleuLeuSerHisSerGlyLeuAspTyrLysArgAsnlieLeuAsnAspArgAsnProValValThrGluAspValGluGlyAspLysLyslieTyrAsnAlaGluValAlaGluTrpAsptysLeuArgGinArgLeuLeuAspAlaArgAsnLyslieThrSerAlaGluSerAlaValAsnSerAlaArgAsnAsnLeu24SerAlaArgThrAsnGluGinLysHisAlaAsnAspAlaLeuAsnAlaLeuLeu匕ysGluLysGluAsnlieArgAsnGinleuSerGlylieAsnGinLyslieAlaGluGluLysArgLysGinAspGluLeu匕ysAlaThrLysAspAlalieAsnPheThrThrGluPheLeuLysSerValSerGluLys丁yrGlyAlaLysAlaGluGinLeuAlaArgGluMetAlaGlyGinAlaLysGlyLysLyslieArgAsnValGluGluAlaLeuLysThrTyrGluLysTyrArgAlaAsplieAsnLysLyslieAsnAlaLysAspArgAlaAlalieAlaAlaAlaLeuGluSerValLysLeuSerAsplieSerSerAsnLeuAsnArgPheSerArgGlyLeuGlyTyrAlaGlyLysPheThrSerLeuAlaAspTrplieThrGluPheGlyLysAlaValArgThrGluAsnTrpArgProLeuPheValLysThrGluThrlielieAlaGlyAsnAlaAlaThrAlaLeuValAlaLeuValPheSerlieLeuThrGlySerAlaLeuGlylie工leGlyTyrGlyLeuLeuMetAlaValThrGlyAlaLeulieAspGluSerLeuValGluAlaAsnLysPheTrpGlylieAspSerValCysAlaSer丁yrPheSEQIDNO.22編碼新型抗生素PMC-SA的基因序列atgtattcc3cctgtgattttataatgtctgaccctgtacgtattacaaatcccgcagca60gaatcgctggggtatgattcagatggcaaagtgttgatatttatctcaac120cctccacgtgtcgatgtctttaaaggtaccccgcctgcatggagttccttcgggaacaaa180accatctggggcgg犯acgagtgggttgatgattccccaacccgaagtgatatcgaaaaa240agggacaaggaaatcacagcgtacaaaaacacgctcagcgcgcagcagaaagagaatgag300aataagcgtactgaagccggas朋cgcctctctgcggcgattgctgc卿ggaaa犯gat360ga肌acacsctgaaaacactccgtgccgga犯cgca^tgccgctga/tattacacgacag420gagttcagsctcctgcaggcagagctgagatccgtsctgaaMcgccgga480tatgacgccctccggctgcatacagagagccggatgctgtttgctgatgctgattctctt540cgtatatctcCCCggg3ggCcaggtcgttaatcgaacaggctgaaaaacggcagaaggat600gcgcag認gcagacaagaaggccgctgatatgcttgctgwtacgagcgcagaaaaggt660attctggacacccggttgtc柳gctggaaa犯aatggcggggC3gCCCttgccgttctt720aggcccgtctgctcgggcagcagacacggastgacagggccatttcagag780gcccggaataaactcagttcagtgacgg犯tcgcttaacacggcccgtaatgcattaacc840agagctg犯caacagctgacgcaacagaaaaacacgcctgacggc犯aacgatag"tttcc900cctga冊aattcccggggcgttcatcaacaaatcattctattgttgtgagcggtgatccg960agatttgccggtacgataaaaatc8c朋ccagcgcagtcatcgataaccgtgcaaacctg1020犯ttatcttctgagccattccggtctggactataaacgcaatattctgaatgaccgg肌t鵬ccggtggtgac卿ggatgtggaaggtgacaagaaaatttatastgctgaagttgctgaa1140tgggataagttacggcaaagattgcttgatgccagaaataaaatcacctctgctgaatct，gcggt犯attcggcgagaaat犯CCtC3gtgccagaacaaatgagcaaaagcatgcaaat1260gacgctcttaatgccctgttgtaaccagctttccggcatc，tagcgga柳caggatgaactg犯ggc犯cga犯gacgca，attaatttcacaacagagttcctgaaatcagtttcagaaaaatatggtgcaaaagctgag1440cagttagccagagagatggcCgggC8ggCtaaagggaagaaaatacgtaatgttg肌gag1500cgtatgaaaagtaccgggctaaa犯attaatgcaaaagat1560cgtgcagcgattgccgcagcCCUg3gtCtgtgaagctgtctgatatatcgtctaatctg1620aacagattcsgtcggggactgggatatgcaggaa犯tttacaagtcttgctgactggatc鵬actgagtttggt,gctgtCCgg8C柳gaactggcgtcctctttttgttaa肌cagaa1740accatcatagcaggcaatgccgcaacggctcttgtggcactggtcttcagtattcttacc1800ggaagcgctttsggcattatcgggtatggtttactgatggctgtcsccggtgcgctgatt1860gatgaatcgcttgtgg肌犯agcg犯t犯gttctggggtaU1902SEQIDNO,23新型抗生素PMC-SA的肽鏈TyrSerThrCysAspPhelieMetSerAspProValArglieThrAsnProAlaAlaGluSerLeuGlyTyrAspSerAspGlyArgGlulieMetGlyValAsplieTyrLeuAsnProProArgValAspValPheLysGlyThrProProAlaTrpSerSerPheGlyAsnLysThrlieTrpGlyGlyAsnGluTrpValAspAspSerProThrArgSerAsplieGlu匕ysArgAspLysGlulieThrAlaTyrLysAsnThrLeuSerAlaGinGinLysGluAsnGluAsnLysArgThrGluAlaGlyLysArgLeuSerAlaAlalieAlaAlaArgGluLysAspGluAsnThrLeuLysThrLeuArgAlaGlyAsnAlaAspAlaAlaAsplieThrArgGinGluPheArgLeuLeuGinAlaGluLeuArgGiuTyrGlyPheArgThrGlulieAlaGlyTyrAspAlaLeuArgLeuHisThrGluSerArgMetAspSerLeuArglieSerProArgGluAlaArgAlaGlu匕ysArgGinLysAspAlaGinAsnAlaAspMetLeuAlaGluTyrGluArgArg匕ysGlyLeuSerGluLeuGluLysAsnGlyGlyAlaAlaAlaGinGinAlaArgLeuLeuGlyGinGinThrlieSerGluAlaArgAsnLysLeuSerSerValThrAlaArgAsnAlaLeuThrArgAlaGluGin匕ysAsnThrProAspGlyLysThrlieValSerGlyArgSerSerThrAsnHisSerlieValValPheAlaGlyThrlieLyslieThrThrSerAlaAlaAsnLeuAsnTyrLeu乙euSerHisSerGlyAsnliel>euAsnAspArgAsnProValValThrAspLysLyslieTyrAsnAlaGluValAlaGluGinArgLeuLeuAspAlaArgAsnLyslieThrValAsnSerAlaArgAsnAsnLeuSerAlaArgHisAlaAsnAspAlaLeuAsnAlaLeuLeuLysArgAsnGinLeuSerGlylieAsnGinLyslieLysGinAspGluLeuLysAlaThr匕ysAspAlaGluPheLeuLysSerValSerGluLys丁yrGlyLeuAlaArgGluMetAlaGlyGinAla匕ysGlyValGluGluAlaLeuLysThrTyrGluLysTyrLysLyslieAsnAlaLysAspArgAlaAlalieSerValLysLeuSerAsplieSerSerAsnLeuGlyLeuGlyTyrAlaGly匕ysPheThrSerLeuGluPheGlyLysAlaValArgThrGluAsnTrpLysThrGluThrlielieAlaGlyAsnAlaAlaLeuValPheSerlieLeuThrGlySerAlaLeuGlyLeuLeuMetAlaValThrGlyAlaLeulieGluLysAlaAsnLysPheTrpGlylieSEQIDNO.24金黃色葡萄球菌信息素AgrDI基因的5'引物gcgaataagttctggggtatUattccacctgtgattttaacaggcSEQIDNO.25金黃色葡萄球茵信息素AgrDI基因的3'引物gcctgtcttatattttatttacattataaaatcacaggtgattcgcSEQIDNO.26金黃色葡萄球菌信息素AgrDII基因的5'引物gcgaataagttctggggtattggagttaacgcatgttcttaagacaggcSEQIDNO.27金黃色葡萄球菌信息素AgrDII基因的3'引物gcctgtcttatattttatttaaaacagggaagaacatgcgcttattcgcSEQIDNO.28金黃色葡萄球菌信息素AgrD11I基因的5'引物gcgaataagttctggggtatttatataaactgtgattttcacaggcSEQIDNO.29金黃色葡萄球菌信息素AgrD11I基因的3'引物gcctgtcttatattttatttacagaag犯aatcacagtttattcgcSEQIDNO.30金黃色葡萄球菌信息素AgrDIV基因5'引物gcg組aagttctggggtatttattccacctgttacttta濃ggc卿IDNO.31金黃色葡萄球菌信息素AgrDIV基因3'引物gcctgtcttatattttatttacattataaagtaacaggtgLeuPheAlaAspAlaSerLeulieGluGinAspLysLysAlaAlalieLeuAspThrArgLeuAlaValLeuAspArgAsnAspArgAlaThrGluSerLeuAsnGinI,euThrGinGinProGluLysPheProSerGlyAspProArgVallieAspAsnArgLeuAsp丁yr匕ysArgGluAspValGluGlyTrpAsp匕ysLeuArgSerAlaGluSerAlaThrAsnGluGinLysGluLysGluAsnlieAlaGluGluLysArglieAsnPheThrThrAlaLysAlaGluGinLysLyslieArgAsnArgAlaAsplieAsnAlaAlaAlaLeuGluAsnArgPheSerArgAlaAspTrplieThrArgProLeuPheValThrAlaLeuValAlaGlylielieGlyTyrAspGluSerLeuValtaatgtaaataaaatataag6066gaataaataccccagaactt6066ccctgtttta犯ta貼atat6069ttaactccaataccccagaa6069ttctgtaaataaaatataag6066atataaataccccagaactt6066taatgtaaataaaatataag6066gaataaataccccagaactt6026attcgc66SEQIDNO.32用于制備綠膿桿菌抗生素的金黃色葡萄球菌信息素AgrDI基因的5'引物ggatgaaggagataccgaatgtattccacctgtgattttataatgtctgaccctgtacgt603ttaca66SEQIDNO.33<2L3>用于制備綠膿桿菌抗生素的金黃色葡萄球菌信息素AgrDI基因的3'引物gtgaatfcicgtacagggtcagacattataaaatcacaggtggaatacattcggtatctcct60tcatcc66SEQIDNO.34表皮葡萄球菌信息素基因的5'引物gcgaataagttctggggtattgattccg"tgtgcatcctatttttaaataaaatataag60acaggcSEQIDNO.35〈表皮葡萄球菌信息素基因的3'引物gcctgtcttatattttatttaaaaataggatgcacaaacgattcgcSEQIDNO.36大腸桿菌Ia變構多肽序列SerAspProValArglieThrAsnProAlaAlaAspSerAspGlyArgGlulieMetGlyValAspProArgValAspValPheLysGlyThrProProGlyAsnLysThrlieTrpGlyGlyAsnGluTrpThrArgSerAsplieGluLysArgAspLysGlugastcsataccccag貼cttGluSerLeuGlyTyrlieTyrLeuAsnProAlaTrpSerSerPheValAspAspSerProlieThrAlaTyrLysAsnThrLeuSerAlaGinGinLysGluAsnGluAsnLysArgThrGluAlaGlyLysArgLeuSerAlaAlalieAlaAlaArgGluLysAspGluAsnThrLeuLysThrl>euArgAlaGlyAsnAlaAspAlaAlaAsplieThrArgGinGluPheArgLeuLeuGinAlaGluLeuArgGluTyrGlyPheArgThrGlulieAlaGlyTyrAspAlaLeuArgLeuHisThrGluSerArgMetLeuPheAlaAspAlaAspSerLeuArglieSerProArgGluAlaArgSerLeulieGluGinAlaGluLysArgGinlysAspAlaGinAsnAlaAspLysLysAlaAlaAspMetLeuAlaGluTyrGluArgArgLysGlylieLeuAspThrArgLeuSerGluLeuGluLysAsnGlyGlyAlaAlaLeuAlaValLeuAspAlaGinGinAlaArgLeuLeuGlyGinGinThrArgAsnAspArgAlalieSerGluAlaArgAsnLysLeuSerSerValThrGluSerLeuAsnThrAlaArgAsnAlaLeuThrArgAlaGluGinGinLeuThrGinGinLysAsnThrProAspGlyLysThrlieValSerProGlu匕ysPheProGlyArgSerSerThrAsnHisSerlieValValSerGlyAspProArgPheAlaGlyThrlieLyslieThrThrSerAlaVallieAspAsnArgAlaAsnLeuAsnTyrLeuleuSerHisSerGlyLeuAspTyrLysArgAsnlieLeuAsnAspArgAsnProValValThrGluAspValGluGlyAspLys匕yslieTyrAsnAlaGluValAlaGluTrpAsp匕ysLeuArgGinArgLeuLeuAspAlaArgAsnLyslieThrSerAlaGluSerAlaValAsnSerAlaArgAsnAsnLeuSerAlaArgThrAsnGluGinLysHisAlaAsnAspAlaLeuAsnAlaLeuleuLysGluLysGluAsnlieArgAsnGinLeuSerGlylieAsnGinLyslieAlaGluGluLysArgLysGinAspGluLeuLysAlaThrLysAspAlalieAsnPheThrThrGluPheLeuLysSerValSerGluLysTyrGlyAlaLysAlaGluGinLeuAlaArgGluMetAlaGlyGinAlaLysGlyLysLyslieArgAsnValGluGluAlaLeuLysThrTyrGluLysTyrArgAlaAsplieAsnLysLyslieAsnAlaLysAspArgAlaAlalieAlaAlaAlaLeuGluSerValLysLeuSerAsplieSerSerAsnLeuAsnArgPheSerArgGlyLeuGlyTyrAlaGly匕ysPheThrSerLeuAlaAspTrplieThrGluPheGlyLysAlaValArgThrGluAsnTrpArgProLeuPheValLysThrGluThrlielieAlaGlyAsnAlaAlaThrAlaLeuValAlaLeuValPheSerlieLeuThrGlySerAlaLeuGlylielieGlyTyrGlyLeuLeuMetAlaValThrGlyAlaLeulieAspGluSerLeuValGluLysAlaAsnLysPheTrpGlylie66606權利要求1.一種大腸菌素變構多肽，由能形成離子通道結構域的野生型大腸菌素E1、Ia、Ib、A、B、N或其水性孔道結構域的肽鏈突變了氨基酸殘基G11A、H22R、A26G、V31L和H40K而獲得。2.根據(jù)權利要求1所述的大腸菌素變構多肽，由野生型大腸菌素Ia變構而來，具有SeqIDN0.36所示的氨基酸序列。3.編碼權利要求1或2所述的大腸菌素變構多肽的核苷酸序列。4.根據(jù)權利要求3所述的核苷酸序列，如SeqIDNO.U所示。5.權利要求1或2所述的大腸菌素變構多肽在制備抗菌藥物中的應用。6.—種新型抗生素，由權利要求1或2所述的大腸菌素變構多肽和金黃色葡萄球菌信息素AgrDI、AgrDII、AgrDIII、AgrDIV或表皮葡萄球菌信息素的肽鏈線性連接而成。7.根據(jù)權利要求6所述的新型抗生素，所述金黃色葡萄球菌信息素AgrDI、AgrDII、AgrDIII、AgrDIV或表皮葡萄球菌信息素的氨基端連接在所述大腸菌素變構多肽的羧基端，連接肽分別具有如SeqlDN0.13、SeqlDN0.15、SeqlDN0.17、SeqIDN0.19、SeqIDNa21所示的氨基酸序列。8.根據(jù)權利要求6所述的新型抗生素，所述金黃色葡萄球菌信息素AgrDI的羧基端連接在大腸菌素變構多肽的氨基端，具有如SeqIDNO.23所示的氨基酸序列。9.編碼權利要求6至8任一所述的新型抗生素的核苷酸序列。10.根據(jù)權利要求9所述的核苷酸序列，如SeqlDN0.12、SeqlDNCU4、SeqlDN0.16、SeqIDN0.18、SeqIDNO.20或SeqIDN0.22所示。11.包含權利要求9或10所述的核苷酸序列的重組質粒。12.權利要求6至8任一所述新型抗生素在制備抗菌藥物中的應用。13.—種新型抗生素的制備方法是指將權利要求11所述的重組質粒轉入表達系統(tǒng)中表達，分離純化表達的多肽而獲得新型抗生素。14.根據(jù)權利要求13所述的制備方法，所述表達系統(tǒng)指大腸桿菌工程菌菌株￡.^81^-21。全文摘要本發(fā)明涉及“一種新型抗生素及其核苷酸序列、制備方法與應用”，屬于生物醫(yī)藥領域，包括大腸菌素變構多肽與葡萄球菌信息素肽鏈，能特異地殺滅該抗生素特異性結合的致病菌而不會傷害人體正常細胞，大腸菌素變構多肽與葡萄球菌信息素線性聯(lián)接，產(chǎn)生了抗金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌以及綠膿桿菌的新型抗生素，抗菌效果是傳統(tǒng)抗生素的千倍以上，而且不易產(chǎn)生耐藥性，同時該新型抗生素克服了野生型大腸菌素使人體產(chǎn)生超敏反應的缺陷，使用起來更安全。文檔編號C07K14/195GK101643501SQ20091015756公開日2010年2月10日申請日期2009年7月14日優(yōu)先權日2008年11月7日發(fā)明者丘小慶申請人:畿晉慶三聯(lián)(北京)生物技術有限公司