專利名稱：：肽、組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及肽、組合物和其應(yīng)用。本發(fā)明尤其涉及基于大蹼鈴蟾緩激肽(maximakinin)(同義詞鈴蟾緩激肽M(bombinakininM))的N-末端六肽并具有細(xì)胞生長(zhǎng)刺激活性，尤其是促進(jìn)血管發(fā)生的肽，以及其在治療方法中的應(yīng)用。引言來(lái)自兩棲動(dòng)物尤其是無(wú)尾動(dòng)物的皮膚顆粒腺或毒腺的防御性分泌物是含有蛋白、生物胺、生物堿和過(guò)量生物活性肽的復(fù)雜分子混合物(Lazarus,L.H.和Atilla,M.(1993)Prog.Neurobiol.41,473-507)。i午多皮膚肽展示與內(nèi)源脊推動(dòng)物調(diào)節(jié)肽的高度結(jié)構(gòu)相似性，但作為發(fā)生在保守的生物活性的核心序列之外的結(jié)構(gòu)修飾的結(jié)果通常更具生物活性，這是其天然選擇外源遞送方式產(chǎn)生的特征(Erspamer等人(1985)尸ep^ifes6，7-12)。蛙皮素、鈴蟾肽、皮啡肽和5啡肽是兩棲動(dòng)物皮膚肽的實(shí)例，分別對(duì)內(nèi)源脊推動(dòng)物縮膽嚢素(CCK)、胃泌素釋放肽(GRP)和p-和S阿片樣受體展示增強(qiáng)的活性(Anastasi等人(1971)Experientia27,166-167;Anastasi等人(1968)Archs.Biochem.Biophys.125,57-68;Broccardo等人(1981)Br.J.Pharmacol.73,625-631;Kreil等人(1989)Eur.J.Pharmacol.162,123-12810)。已從兩棲動(dòng)物皮膚分泌物分離大量緩激肽樣肽，認(rèn)為其中一些與兩棲綱的防御機(jī)制相關(guān)(Conlon和Aronsson(1997)Peptides18,361-365;Yasuhara等人(1979)Chem.Pharm.Bull.(Tokyo)27,486-491;Nakajima，T.(1968)Chem.Ph諷Bull.(Tokyo)16,769-774;Anastasi等人(1966)Br.J.Pharmacol.27,479-485;Yasuhara等人(1973)Chem.Pharm.Bull.(Tokyo)21,138-139)。Lai等人(2001)Biochem.Biophys,Res.Commun.286,259-263描述從蟾蜍大蹼鈴蟾(Sow/)/w"wox7附a)的皮膚分泌物分離緩激肽相關(guān)肽。盡管發(fā)現(xiàn)稱為鈴蟾緩激肽M的該肽對(duì)豚鼠回腸平滑肌具有收縮活性，該文獻(xiàn)的作者表示不清楚該肽的生理作用。在與本申請(qǐng)共有主要發(fā)明人的WO2004/069857中，描述了N-末端延伸的緩激肽大蹼鈴蟾緩激肽。大蹼鈴蟾緩激肽氨基酸序列為Asp-Leu-Pro-Lys隱Ile-Asn-Arg-Lys-Gly-Pro隱Arg-Pro誦Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg(SEQIDNO:1)。發(fā)現(xiàn)與鈴蟾緩激肽M(Lai等人(2001)Biochem.Biophys.Res.Commun.286,259-263)具有相同氨基酸序列的大蹼鈴蟾緩激肽證實(shí)其對(duì)平滑肌作用的組織選擇性。在WO2004/069857中還鑒定了大蹼鈴蟾緩激肽的大量C-末端活性片段。發(fā)明概述本發(fā)明人研究了大蹼鈴蟾緩激肽的N-末端片段，并令人驚訝地證實(shí)，與預(yù)期相反，大蹼鈴蟾緩激肽的N-末端片段對(duì)平滑肌展示有效的組織選擇性作用。具體地，發(fā)現(xiàn)盡管不存在大蹼鈴蟾緩激肽的C-末端殘基(此前認(rèn)為對(duì)其活性是必需的)，本文稱為QUB698.8的N-末端六肽證實(shí)對(duì)動(dòng)脈平滑肌超過(guò)小腸平滑肌的高度選擇性，導(dǎo)致有效地松弛動(dòng)脈平滑肌，同時(shí)導(dǎo)致較不有效地收縮回腸平滑肌。而且，這種N-末端片段不僅保持大蹼鈴蟾緩激肽的組織選擇性，還比大蹼鈴蟾緩激肽顯著更有效。而且，本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，盡管此前關(guān)于大蹼鈴蟾緩激肽的研究表示該分子和其片段的促血管發(fā)生效應(yīng)還依賴于大蹼鈴蟾緩激肽C-末端殘基的存在，N-末端六肽QUB698.8證實(shí)了有效的促血管發(fā)生活性。因此，在第一方面，本發(fā)明提供一種促血管發(fā)生肽，其中所述促血管發(fā)生肽是QUB698.8或其生物活性片段或衍生物。QUB698.8的^4酸序列為Asp-Leu-Pro-Lys-Ile國(guó)Asn(SEQIDNO:2)。在一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的促血管發(fā)生肽由氨基酸序列Asp-Leu誦Pro陽(yáng)Lys-Ile-Asn(SEQIDNO:2)組成。在本發(fā)明上下文中，QUB698.8的片段是具有至少五個(gè)連續(xù)M酸的肽，對(duì)應(yīng)具有相同的五個(gè)連續(xù)氨基酸的QUB698.8區(qū)段。QUB698.8的衍生物包括氨基酸序列為帶有一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氛基酸取代、插入、缺失或其組合的SEQIDNO:2的肽。在一個(gè)實(shí)施方案，衍生物包含QUB698.8的至少五個(gè)連續(xù)氨基酸。具體的衍生物包括Leu-Pro-Lys-Ile-Asn(SEQIDNO:3)Asp-Leu誦Pro-Lys-Ile(SEQIDNO:4)Asp-Leu-Pro-Lys-Ile-Asn-Arg-Lys(SEQIDNO:5)Leu-Pro-Lys-Ile-Asn-Arg-Lys-Gly(SEQIDNO:6)Asp陽(yáng)Leu-Pro畫Lys畫Ile隱Asn-Arg-Lys-Gly(SEQIDNO:7)Leu-Pro-Lys-Ile-Asn-Arg-Lys-Gly-Pro(SEQIDNO:8)。而且，衍生物可在N-和/或C-末端包含附加的氨基酸。在這種實(shí)施方案，該衍生物優(yōu)選地包含一至十一個(gè)附加的氛基酸，例如，兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、/\個(gè)、九個(gè)、十個(gè)或十一個(gè)氛基酸。在本申請(qǐng)的上下文中，這種衍生物不包括具有大蹼鈴螗緩激肽自身氨基酸序列的肽。這種片段和衍生物優(yōu)選地保持促血管發(fā)生活性。除非上下文另外要求，否則對(duì)本發(fā)明肽的提及包括這種衍生物和片段。根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供編碼根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽的多核苷酸，其中所述多核苷酸不編碼包含序列IDNo:1所示的氨基酸序列的多肽。根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供引起動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞或組織松弛的方法，所述方法包括向所述細(xì)胞或組織施用根據(jù)本發(fā)明第一方面的促血管發(fā)生肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核普酸。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的促血管發(fā)生肽或用于本發(fā)明的促血管發(fā)生肽對(duì)動(dòng)脈平滑肌的EC50小于大蹼鈴蟾緩激肽對(duì)動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的EC50,和/或本發(fā)明的促血管發(fā)生肽對(duì)小腸細(xì)胞的EC50大于大蹼鈴蟾緩激肽對(duì)小腸細(xì)胞的EC50。令人驚訝地證實(shí)本發(fā)明的肽對(duì)平滑肌受體展示這種有效又選擇性的效應(yīng)，使得這種肽能夠用來(lái)治療心血管系統(tǒng)疾病同時(shí)將使用較不選擇性的藥劑帶來(lái)的副作用減到最低。因此，在本發(fā)明的第五方面，提供促進(jìn)組織中血管舒張的方法，包括向所述組織施用根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核普酸。本發(fā)明的肽、多核苷酸和方法可對(duì)治療心血管疾病特別有用，同時(shí)將例如對(duì)胃腸系統(tǒng)的有害副作用減到最低。因此，在本發(fā)明的第六方面，提供治療心血管疾病的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治療有效量的根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸?？墒褂帽景l(fā)明的心血管疾病包括血管舒張對(duì)其可有用的任何心血管疾病、病癥或癥狀。例如，在一個(gè)實(shí)施方案，心血管疾病是高血壓。在另一實(shí)施方案，心血管疾病是肺動(dòng)脈高壓。在進(jìn)一步的實(shí)施方案，心血管疾病是冠狀動(dòng)脈疾病。在進(jìn)一步的實(shí)施方案，心血管疾病是外周血管疾病。在進(jìn)一步的實(shí)施方案，心血管疾病是缺血性病癥，例如心絞痛或和中風(fēng)?？墒褂帽景l(fā)明的肽和方法的其它疾病包括治療血管痙攣，例如手術(shù)中或手術(shù)后的，以及勃起功能障礙。本發(fā)明可用于治療其中急性血管舒張可有益的急性病癥。如上所述，本發(fā)明人還已經(jīng)令人驚訝地顯示，本發(fā)明的肽證實(shí)了有效的促血管發(fā)生效應(yīng)。因此本文公開的數(shù)據(jù)表示本發(fā)明的肽在促進(jìn)新血管生長(zhǎng)中的有效作用。因此，根據(jù)本發(fā)明的第七方面，提供根據(jù)本發(fā)明第一方面的促血管發(fā)生肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苦酸在生物樣品中促進(jìn)血管發(fā)生的應(yīng)用。在本發(fā)明上下文中，提到促進(jìn)血管發(fā)生應(yīng)理解為指引起或加速血管發(fā)生毒性響應(yīng)(taxicresponse)或引起或加速血管發(fā)生本身，即形成血管。根據(jù)本發(fā)明的第八方面，提供刺激細(xì)胞中血管發(fā)生毒性響應(yīng)的方法，包括向所述細(xì)胞施用根據(jù)本發(fā)明第一方面的促血管發(fā)生肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核普酸。培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞中的血管發(fā)生毒性響應(yīng)涉及產(chǎn)生細(xì)胞之間棒樣突起介導(dǎo)的粘附的位點(diǎn)和細(xì)胞定向到血管發(fā)生前管中。其可使用顯微鏡目視地評(píng)價(jià)。本發(fā)明的方法可在體外或體內(nèi)實(shí)踐。在體內(nèi)實(shí)踐時(shí)，本發(fā)明的方法可用在治療動(dòng)物或人類的方法。根據(jù)本發(fā)明的第九方面，提供促進(jìn)血管發(fā)生的方法，包括向需要其的患者施用治療有效量的根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核香酸的步驟。促進(jìn)血管發(fā)生可對(duì)大量臨床病癥有用。例如，本發(fā)明的促血管發(fā)生肽可在缺血性疾病、心肌梗塞期間或之后或在冠狀動(dòng)脈旁路手術(shù)之后用于促進(jìn)心肌組織中側(cè)支脈管系統(tǒng)的血管發(fā)生。通過(guò)提供本發(fā)明的肽可治療的其它疾病或病癥包括導(dǎo)致外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理學(xué)的血管疾病和/或缺血性疾病。這種病癥/疾病可包括腦血管意外，如凝塊閉塞或動(dòng)脈瘤破裂導(dǎo)致的腦血管意外，或造成神經(jīng)元死亡或外周功能損傷諸如運(yùn)動(dòng)或感覺(jué)功能或語(yǔ)言損傷的全身性/局部缺血。因此，在一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的肽、方法和應(yīng)用用于治療腦血管意外。在另一實(shí)施方案，本發(fā)明的肽、方法和應(yīng)用用于治療可為全身性或局部的缺血性疾病。而且，本發(fā)明的肽的促血管發(fā)生特征可用于促進(jìn)組織修復(fù)，例如，創(chuàng)傷愈合。因此，在本發(fā)明的第七方面提供本發(fā)明的肽在促進(jìn)組織修復(fù)和/或治療創(chuàng)傷中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明的第十方面，提供促進(jìn)組織修復(fù)的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治療有效量的根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸的步驟。本發(fā)明的肽和方法可用于修復(fù)需要其的任何適合組織。例如，肽可用于修復(fù)任何損傷的組織或愈合其中期望血管的血管發(fā)生和/或再血管化的任何創(chuàng)傷。例如，在一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的肽和方法可用于治療的創(chuàng)傷包括潰瘍，諸如皮膚潰瘍，例如壓瘡、靜脈潰瘍和糖尿病性潰瘍。在另一實(shí)施方案，該方法和肽可用于治療組織外傷。在一個(gè)實(shí)施方案，組織外傷是創(chuàng)傷諸如撕裂。在另一實(shí)施方案，本發(fā)明可用于治療的組織外傷是燒傷。該肽和方法可特別有用于其中移植的組織，例如，皮膚移植物用于修復(fù)這種創(chuàng)傷的應(yīng)用場(chǎng)合。在血管移植手術(shù)中，本發(fā)明的肽和方法可用于促進(jìn)內(nèi)皮化。當(dāng)使用移植的或合成的材料的血管移植物纟皮使用時(shí)，可向移植物的表面施加該肽以促進(jìn)血管平滑肌和連接內(nèi)皮細(xì)胞的外膜細(xì)胞生長(zhǎng)。而且，當(dāng)天然或合成的材料將^f皮移植到身體中時(shí)，本發(fā)明的肽可用于包裹該材料以減少和/或最小化移植材料的排斥并刺激移^i材料的血管形成。因此，在第十一方面，本發(fā)明提供治療或預(yù)防受治療者移植排斥的方法，所述方法包括向所述受治療者施用根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸的步驟。這種肽還可用于修復(fù)動(dòng)脈硬化造成的血管損傷或氣嚢血管成形術(shù)造成的損傷。通過(guò)促進(jìn)修復(fù)這種組織，可將損傷減到最少并可防止再狹窄。因此在本發(fā)明的進(jìn)一步實(shí)施方案，提供治療受治療者血管損傷的方法，所述方法包括向所迷受治療者施用根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核香酸的步驟。進(jìn)一步，更通常地，本發(fā)明的肽還展示影響細(xì)胞生長(zhǎng)的效力；例如位于身體表面或內(nèi)部的細(xì)胞。尤其是本發(fā)明的肽如QUB698.8可用于促進(jìn)皮膚細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此，本發(fā)明還可用于治療病癥諸如燒傷。本發(fā)明的肽的該特征還可用于促進(jìn)移植再血管化并促進(jìn)手術(shù)后、例如美容手術(shù)后愈合。根據(jù)本發(fā)明的第十二方面，提供包^^艮據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸和藥物上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物。而且，在第十三方面，提供用于藥物的根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸在藥物。本發(fā)明的第十四方面提供用于治療心血管疾病的根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸。本發(fā)明的第十五方面提供用于治療創(chuàng)傷或用于組織修復(fù)的根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核普酸。本發(fā)明的第十六方面提供用于預(yù)防或抑制移植物排斥(graftrejection)或移植排斥(transplantrejection)的根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸。本發(fā)明的第十七方面提供根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸制備用于治療心血管疾病的藥物。本發(fā)明的第十八方面提供根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸在制備用于治療創(chuàng)傷或用于組織修復(fù)的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的第十九方面提供根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸在制備用于治療移植物排斥(graftrejection)或移植排斥(transplantrejection)的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的第二十方面是包含根據(jù)本發(fā)明第一方面的肽或根據(jù)本發(fā)明第二方面的多核苷酸的創(chuàng)傷敷料。本發(fā)明每個(gè)方面的優(yōu)選特征加以必要變更而適用每個(gè)其他方面。詳述本發(fā)明的肽和用于本發(fā)明的肽包括QUB698.8(SEQIDNO:2)、其衍生物和片段，尤其是上述的衍生物和片段。本文中術(shù)語(yǔ)衍生物與類似物可互換使用。在一個(gè)實(shí)施方案，QUB698.8的"片段"或衍生物或用于本發(fā)明的"片段"或衍生物保持QUB698.8的松弛動(dòng)脈平滑肌的能力，具有小于其對(duì)回腸肌肉的收縮(constrictory)效應(yīng)的EC50的EC50。在另一實(shí)施方案，QUB698.8的片段或衍生物保持促進(jìn)血管發(fā)生的能力。這種能力可使用任何已知技術(shù)評(píng)價(jià)，例如使用內(nèi)皮細(xì)胞血管發(fā)生小管形成檢測(cè)、內(nèi)皮細(xì)胞創(chuàng)傷刮擦檢測(cè)(essay)或MTT檢測(cè)，例如實(shí)施例中所述的。在一個(gè)實(shí)施方案本發(fā)明的片段或衍生物保持如上定義的動(dòng)脈平滑肌血管舒張(dilatory)能力和促血管發(fā)生能力。其它衍生物包括多聚肽或融合肽，所述多聚肽或融合肽包括本發(fā)明的QUB698.8肽、類似物或片段，和包含這種序列的前藥，該肽連接于偶聯(lián)配偶體，如效應(yīng)分子、標(biāo)記、藥物、毒素和/或載體或轉(zhuǎn)運(yùn)分子。將本發(fā)明的肽偶聯(lián)于肽基和非肽基的偶聯(lián)配偶體的技術(shù)是本領(lǐng)域中熟知的。本發(fā)明的衍生物和用于本發(fā)明的衍生物進(jìn)一步包括QUB698.8肽的反向類4以4勿(reverse-analogue)或向后類4以4勿(retro-analogue)或其合成彩f生4勿。參見(jiàn)例如，EP0497366、美國(guó)專利第5,519,115號(hào)、和Merrifield等人，1995,PNAS,92:3449-53，其公開內(nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。如EP0497366所述，通過(guò)逆轉(zhuǎn)天然存在肽或合成肽的氨基酸序列而產(chǎn)生反向肽。這種反向肽與母體肽保持相同的總體三維結(jié)構(gòu)(如a螺旋)，除了內(nèi)部蛋白酶-敏感位點(diǎn)周圍的構(gòu)象和N-和C-末端的特征。據(jù)說(shuō)反向肽不僅保持非反向的"正常"肽的生物活性，還可具有增強(qiáng)的特征，包括生物活性增加。(參見(jiàn)Iwahori等人，1997,Biol.Pharm.Bull.20:267-70)。因此本發(fā)明的衍生物和用于本發(fā)明的衍生物可包含天然和合成的QUB698.8肽的反向肽。事實(shí)上，這種反向QUB698.8肽和其衍生物和片,更構(gòu)成本發(fā)明的進(jìn)一步獨(dú)立方面。優(yōu)選地這種反向QUB698.8肽保持諸如引起細(xì)胞和組織內(nèi)的促血管發(fā)生響應(yīng)的能力和/或選擇性地松弛動(dòng)脈平滑肌的能力等生物活性。在一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的反向肽具有SEQ1DNO.2所示的肽的反向氛基酸序列。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，反向肽具有氨基酸序列Asn-Ile-Lys-Pro-Leu陽(yáng)Asp(SEQIDNO:9)ii本發(fā)明的和用于本發(fā)明的肽(包括任一種肽的衍生物、反向肽和片段)可完全或部分地通過(guò)化學(xué)合成或通過(guò)從核酸表達(dá)來(lái)產(chǎn)生。例如，本發(fā)明的肽和用于本發(fā)明的肽可容易地根據(jù)本領(lǐng)域中已知的完善的標(biāo)準(zhǔn)液相肽合成方法或優(yōu)選地，固相肽合成方法來(lái)制備(參見(jiàn)例如，J.M.Stewart和J.D.Young,SolidPhasePeptideSynthesis(固相肽合成)，第2版，PierceChemicalCompany,Rockford,Illinois(1984)、M.Bodanzsky和A.Bodanzsky,ThePracticeofPeptideSynthesis(肽合成的實(shí)踐)，SpringerVerlag,NewYork(1984))。多聚狀如上所述，本發(fā)明的肽可以是多聚物形式。因此多聚物(例如2、3或更多單獨(dú)QUB698.8類似物單體單元或片段的多聚物)在本發(fā)明的范圍內(nèi)。通過(guò)制備包含單體單元和裂解位點(diǎn)(即酶促裂解位點(diǎn))的多聚肽，并隨后裂解多聚物以產(chǎn)生期望單體，這種多聚物可用于制備單體肽。使用多聚物可增加對(duì)受體的結(jié)合親合力。因此，在這種情況，本發(fā)明的肽對(duì)其受體的結(jié)合親合力可通過(guò)使用2-5、例如2-3個(gè)受體結(jié)合部分的多聚物來(lái)增加。多聚物可為同聚體或異聚體。本文所用的術(shù)語(yǔ)同聚體是指僅包含對(duì)應(yīng)SEQIDNO.2的氨基酸序列的多肽或其片段、或本文所述的其它QUB698.8衍生物的多聚物。這些同聚體可包含具有相同或不同氨基酸序列的本發(fā)明的促血管發(fā)生肽。例如，多聚物可僅包括具有相同氨基酸序列的本發(fā)明的促血管發(fā)生肽，或可包括促血管發(fā)生肽的片段或衍生物。多聚物可為同二聚體(如，包含具有相同或不同tt酸序列的促血管發(fā)生肽)、同三聚體或同四聚體。本文所用的術(shù)語(yǔ)異聚體是指多聚物除了本文所述的QUB698.8肽、其片段或衍生物，還包含一種或多種異源多肽(即，不是QUB698.8肽、其片段或衍生物的肽)。多聚物可為疏水、親水、離子和/或共價(jià)締合的結(jié)果和/或可通過(guò)例如形成脂質(zhì)體間接連接。因此，在一個(gè)實(shí)施方案，當(dāng)本文所述的本發(fā)明的促12血管發(fā)生肽在溶液中互相接觸時(shí)可形成多聚物。在另一實(shí)施方案，當(dāng)本發(fā)明的促血管發(fā)生肽和不是QUB698.8肽、其片段或衍生物的肽在溶液中接觸針對(duì)本文所述的多肽的抗體(包括針對(duì)本文所述的融合蛋白中異源多肽序列的抗體)可形成異多聚物。在其它實(shí)施方案，通過(guò)與本文所述的本發(fā)明的促血管發(fā)生肽(且任選地不是QUB698.8肽、其片^R或衍生物的肽)共價(jià)締合和/或本文所述的本發(fā)明的促血管發(fā)生肽(且任選地不是QUB698.8肽、其片段或衍生物的肽)之間共價(jià)締合，可形成本文所述的多聚物。這種共價(jià)締合可涉及QUB698.8序列包含的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(如，SEQIDNO.2中所列的)。在一個(gè)實(shí)施方案，共^介締合是化學(xué)或重組操縱的結(jié)果?？蛇x地，這種共價(jià)締合可涉及QUB698.8融合蛋白中的異源多肽序列包含的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。在一個(gè)實(shí)例中，共價(jià)締合是在本文所述的融合蛋白中包含的異源序列之間(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利第5,478,925號(hào))。在具體實(shí)例，共價(jià)締合是在本文所述的QUB698.8-Fc融合蛋白中包含的異源序列之間。在另一具體實(shí)例，本文所述的融合蛋白的共價(jià)締合是在來(lái)自能夠形成共價(jià)締合的多聚物的另一蛋白(例如骨保護(hù)素(oseteoprotegerin))的異源多肽序列之間，(參見(jiàn)例如WO98/4930"。在另一實(shí)施方案，兩種或多種本文所述的多肽由肽接頭連接。實(shí)例包括美國(guó)專利第5,073，627號(hào)中描述的肽接頭。包括多個(gè)被肽接頭間隔的QUB698.8肽的蛋白可使用常規(guī)重組DNA技術(shù)產(chǎn)生。多聚物還可通過(guò)融合本發(fā)明的促血管發(fā)生肽到亮氨酸拉鏈或異亮氨酸拉鏈多肽序列而制備。在已知的亮氨酸拉鏈有天然存在的肽和其二聚或三聚的衍生物。適于產(chǎn)生本文所述的可溶多聚蛋白的亮氨酸拉鏈域的實(shí)例是WO94/10308中描述的。包括與在溶液中二聚或三聚的多肽序列融合的本文所述多肽的重組融合蛋白可在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)，且所得的可溶多聚融合蛋白可使用本領(lǐng)域已知技術(shù)從培養(yǎng)物上清液回收。多聚物還可使用本領(lǐng)域已知的化學(xué)技術(shù)產(chǎn)生。例如，期望包含在本文所述的多聚物中的多肽可使用本領(lǐng)域已知的接頭分子和接頭分子長(zhǎng)度優(yōu)化技術(shù)化學(xué)地交聯(lián)(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利第5,478,925號(hào))。此外，可使用本領(lǐng)域已知技術(shù)產(chǎn)生多聚物以在位于期望包含在多聚物中的多肽的序列中的半胱氨酸殘基之間形成一個(gè)或多個(gè)分子間交聯(lián)(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利第5,478,925號(hào))。進(jìn)一步地，通過(guò)向N-末端或C-末端添加半胱氨酸，或向位于本發(fā)明的肽的N-末端或Lys殘基(例如在SEQIDNO:2的Lys-4)的側(cè)鏈的適合氨基基團(tuán)添加生物素，可常規(guī)地修飾本文所述的多肽。可應(yīng)用本領(lǐng)域已知技術(shù)以產(chǎn)生含有一種或多種這些修飾的多肽的多聚物(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利第5，478,925號(hào))。此外，本領(lǐng)域已知技術(shù)可用于制備含有期望包含在多聚物中的兩種或多種本發(fā)明的肽的脂質(zhì)體(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利第5,478,925號(hào))?？蛇x地，使用本領(lǐng)域已知的遺傳工程技術(shù)可形成僅包含天然存在的氨基酸的多聚物。可選地，通過(guò)重組技術(shù)和化學(xué)修飾的聯(lián)合可制備包括翻譯后或其它修飾的多聚物。在一個(gè)實(shí)施方案，使用本文所述的融合蛋白技術(shù)或本領(lǐng)域已知的其它技術(shù)重組地產(chǎn)生本發(fā)明的促血管發(fā)生肽(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利第5,478,925號(hào)，其通過(guò)引用的方式并入本文)。例如，通過(guò)將編碼本文所述的本發(fā)明的促血管發(fā)生肽的多核苦酸序列連接于編碼接頭多肽的序列，并隨后進(jìn)一步連接于編碼從原始C-末端至N-末端的反向定位的多肽翻譯產(chǎn)物(缺少前導(dǎo)序列)的合成多核苷酸，可產(chǎn)生編碼本文所述的同二聚體的多核苷酸(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利第5,478,925號(hào))。本文所述的重組技術(shù)或本領(lǐng)域已知的其它技術(shù)可應(yīng)用于產(chǎn)生本發(fā)明的重組的促血管發(fā)生肽，該肽包含跨膜域(或疏水或信號(hào)肽)并可通過(guò)膜重構(gòu)技術(shù)并入脂質(zhì)體中(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利第5,478,925號(hào))。前藥至少在一些實(shí)施方案，本文所述的肽預(yù)期施用于人類或其它哺乳動(dòng)物用于醫(yī)學(xué)治療。肽通常腸胃外施用，并可容易被質(zhì)膜蛋白酶代謝。可能是最有吸引力的施用途徑的口服施用可能是甚至更有問(wèn)題的。在胃中，酸降解和酶分解肽。幸存而完整地進(jìn)入腸的那些肽在持續(xù)地:帔多種酶阻擋時(shí)經(jīng)受另外的蛋白水解，所述酶包括胃和胰腺酶、外肽酶和內(nèi)肽酶、和刷狀緣肽酶。因此，狀從腸腔到血流的穿過(guò)可被嚴(yán)格限制。然而，已經(jīng)開發(fā)了使得能夠腸胃外和口服施用治療肽的各種前藥。肽可軛合至各種部分，諸如聚合部分，以修飾肽藥物的物理化學(xué)特征，例如，以增加對(duì)酸降解和酶降解的抵抗并增強(qiáng)這種藥物跨粘膜的滲透。例如，Abuchowski和Davis已描述衍生化酶的各種方法以提供水溶的、非免疫原性、體內(nèi)穩(wěn)定的產(chǎn)物("Solublepolymers-Enzymeadducts(水溶性聚合物-酶加合物),"EnzymesasDrugs(作為藥物的酶)，Holcenberg和Roberts編輯，J.WileyandSons,NewYork,N.Y(1981))。Abuchowski和Davis討論了軛合酶與聚合材料諸如葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、糖肽、聚乙二醇和聚氨基酸的各種方式。所得的輒合的多肽保持其生物活性和水溶性用于腸胃外應(yīng)用。美國(guó)專利第4,179,337號(hào)教導(dǎo)將肽偶聯(lián)于具有500至20,000道爾頓的分子量的聚乙二醇或聚丙二醇(polypropropyleneglycol)以提供生理活性的非免疫原性水溶性多肽組合物。聚乙二醇或聚丙二醇保護(hù)多肽不失去活性且該組合物可注射到哺乳動(dòng)物循環(huán)系統(tǒng)而基本沒(méi)有免疫原性響應(yīng)。美國(guó)專利第5,681,811、5,438,040和5,359,030號(hào)公開穩(wěn)定的、軛合的多肽復(fù)合體，其包括偶聯(lián)于包含親脂和親水部分的寡聚物的治療劑。Garmen等人描述一種蛋白-PEG前藥(Garman,A丄和Kalindjian,S.B.,丄幼.，1987,223,361-365)。使用該化學(xué)可制備前藥，通過(guò)首先從多分散的MPEG5000制備馬來(lái)酸酐反應(yīng)物并隨后將該反應(yīng)物鈪合于本文公開的肽。氨基酸與馬來(lái)酸酐的反應(yīng)是熟知的。水解馬來(lái)?；?酰胺4走以重新形成含胺藥物被相鄰自由羧基基團(tuán)的存在所幫助，且攻擊的幾何學(xué)被雙鍵設(shè)定。該肽可在生理?xiàng)l件下釋放(通過(guò)水解前藥)。該肽還可經(jīng)由可降解的鍵合偶聯(lián)于聚合物諸如多分散的PEG,例如經(jīng)由在Roberts,M丄等人,爿dv.Drag&//ve^Wev.,2002,5《459-476所示的可降解的鍵合(關(guān)于聚乙二醇化的干擾素a-2b)。該肽還可連接于聚合物諸如PEG，使用1,6或1,4千基消除(BE)策略(參見(jiàn)例如，Lee,S.等人，5,oco"jwgfl,eC/^w.,(2001),12,163-169;Greenwald,R.B.等人,美國(guó)專利第6,180,095號(hào)，2001;Gree腿ld,R.B.等人,J.Med.Chem.,1999,42,3657-3667.);使用三甲基鎖內(nèi)酯化(TML)(Greenwald,R.B.等人，J.Med.Chem.,2000,43,475-48";偶聯(lián)PEG羧酸于羥基-末端的羧酸接頭(Roberts,M丄，丄Pharm.Sci.,1998,87(11),1440-1445)，和包括經(jīng)由芳基氨基甲酸酯連接于含胺藥物的MPEG苯基醚和MPEG苯酰胺家族的PEG前藥(Roberts,M丄等人，Adv.DrugDeliveryRev.,2002,54,459-476)，包括包含氛基曱酸酯和PEG酰胺或醚之間的間位關(guān)系的前藥結(jié)構(gòu)(美國(guó)專利第6,413,507號(hào))；和包括與水解機(jī)制相反的還原機(jī)制的前藥(Zaiipsky,S.等人,BioconjugateChem.,1999,10(5),703-707)。一些方法包括1'吏用酶抑制劑來(lái)減'f曼胃腸道中蛋白和肽的降解速率；操縱pH以使局部消化酶失活；使用滲透促進(jìn)劑通過(guò)增加其細(xì)胞間和跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)以改善肽的吸收；使用納米顆粒作為微粒載體以促進(jìn)被腸道上皮尤其是派伊爾氏淋巴集結(jié)完整地吸收，并增加對(duì)酶降解的抗性；液態(tài)乳化劑以保護(hù)藥物免受腸腔中化學(xué)和酶促的破壞；和對(duì)水溶性差的藥物的膠束制劑。在一些情況，該肽可以適合的膠嚢或帶有腸溶衣的片劑提供，以使該肽不在胃里釋放?？蛇x地，或此外，該肽可以前藥提供。在一個(gè)實(shí)施方案，該肽以前藥存在于這些藥物遞送裝置中。該肽的自由氨基、羥基、或羧酸基團(tuán)可用于將肽轉(zhuǎn)化為前藥。前藥包括其中氨基酸殘基、或兩個(gè)或多個(gè)(如，兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè))氨基酸殘基的多肽鏈經(jīng)由肽鍵共價(jià)連接于各種聚合物例如聚烷撐二醇諸如聚乙二醇的自由氨基、羥基、或羧酸基團(tuán)的化合物。前藥還包括其中碳酸酯、M甲酸酯、酰胺和烷基酯通過(guò)C-末端羧酸共價(jià)結(jié)合于上述肽的化合物。包含本發(fā)明的肽的前藥或本發(fā)明的肽(包括類似物和片段)從其釋放或可從其釋放的前藥被認(rèn)為是本發(fā)明的衍生物。同位素標(biāo)記的肽或肽前藥也被本發(fā)明包括。這種肽或肽前藥與本發(fā)明的肽或肽前藥相同，只是一個(gè)或多個(gè)原子被具有不同于自然界常見(jiàn)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子代替?？刹⑷氡景l(fā)明的肽或前藥的同位素實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分別諸如2H、3H、13C、14C、15N、180、170和353。本發(fā)明的肽、其前藥、和/或含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的前藥在本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明的一些同位素標(biāo)記的化合物，例如其中并入放射活性同位素諸如3H和14C的化合物可用于藥物和/或基底組織分布檢測(cè)。氖化的即3H和碳-14即14C同位素由于其易于制備和^r測(cè)是特別優(yōu)選的。進(jìn)一步地，以較重同位素諸如氘即2H取代可因?yàn)檩^大的代謝穩(wěn)定性而提供一些治療益處，例如增加體內(nèi)半衰期或減少需要的劑量，并因此在一些情形可為優(yōu)選的。同位素標(biāo)記的肽和其前藥通常可通過(guò)進(jìn)行易于知道的方案制備，包括以易于獲得的同位素標(biāo)記的反應(yīng)物(如標(biāo)記的氨基酸)取代非同位素標(biāo)記的反應(yīng)物。本發(fā)明進(jìn)一步包括可用作治療肽的QUB698.8的肽模擬物。模擬QUB698.8肽是才莫擬QUB698.8的生物活性的短肽。這種肽才莫擬物可從本領(lǐng)域已知方法獲得，所述方法包括但不限于，噬菌體展示或組合化學(xué)反應(yīng)。例如，Wrighton等人，Sc,朋ce273:458-463(1996)公開的方法可用于產(chǎn)生模擬QUB698.8肽。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，術(shù)語(yǔ)衍生物包括這種才莫擬QUB698.8肽。核酸本發(fā)明的肽和用于本發(fā)明的肽可通過(guò)表達(dá)系統(tǒng)中使用核酸而產(chǎn)生。因此本發(fā)明還提供編碼本發(fā)明的第一方面的肽的分離的多核苷酸。根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸可以分離物、以分離的和/或純化的形式才是供，或不含或基本不含其天然伴隨的材料，諸如不含或基本不含在蟾蜍基因組中基因側(cè)翼的核酸，除了可能用于表達(dá)的一種或多種調(diào)節(jié)序列。核酸可完全或部分地合成并可包括基因組DNA、cDNA或RNA。本領(lǐng)域技術(shù)人員使用本文包含的信息和參考文獻(xiàn)以及本領(lǐng)域已知技術(shù)可易于制備編碼根據(jù)本發(fā)明的肽的核酸序列?？蓪?duì)序列進(jìn)行修飾，如使用定點(diǎn)誘變，以導(dǎo)致表達(dá)修飾的肽或以考慮到用于表達(dá)該核酸的宿主細(xì)胞中的密碼子偏好。在一個(gè)實(shí)施方案，該核酸包含如下核酸序列-GATTTGCCTAAGATCAAC-(SEQIDNO:10)。然而，編碼本發(fā)明第一方面的肽的任何多核苷酸也被本發(fā)明包括。例如，由于遺傳密碼子的簡(jiǎn)并性，可使用編碼具有氨基酸序列SEQIDNO:2的QUB698.8肽但具有不同于SEQIDNO:10的核酸序列的多核普酸。17然而，為了避免任何疑慮，在本發(fā)明上下文中，編碼大蹼鈴蟾緩激肽即具有序列IDNo:1的氨基酸序列的多核苷酸不被本發(fā)明的多核苷酸包括。本發(fā)明的和用于本發(fā)明的多核普酸可包含其序列反映遺傳密碼子的簡(jiǎn)并性和其堿基組成將反映核酸類型的DNA或RNA。這些可重組地、合成地、或通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員可得的任何方式產(chǎn)生，包括使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)克隆。多核苷酸可插入任何合適載體。本發(fā)明的進(jìn)一步方面是包含本發(fā)明的核酸的這種載體。任何適合的載體可用于本發(fā)明。例如，該栽體可為病毒(如牛痘病毒、腺病毒等)、質(zhì)粒、或粘粒DNA、桿狀病毒；酵母載體、噬菌體、或染色體，例如人工染色體。該核酸可可操作地連接于能夠在宿主細(xì)胞中提供核酸表達(dá)的控制序列。用于本發(fā)明的適合的宿主細(xì)胞可為真核或原核細(xì)胞，并包括細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞?？墒褂玫牟溉閯?dòng)物細(xì)胞系包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞、幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞、NSO小鼠黑素瘤細(xì)胞、猴和人類細(xì)胞系和其衍生物、以及許多其它細(xì)胞系。可使用調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物表達(dá)、修飾基因產(chǎn)物、和/或具體地加工基因產(chǎn)物的宿主細(xì)胞4朱系。這種加工可包括糖基化、泛素化、形成二好u鍵和總的翻譯后修飾。因此，本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的一種或多種核酸或載體的宿主細(xì)胞。本發(fā)明還包括產(chǎn)生本發(fā)明的促血管發(fā)生肽的方法，該方法包括在發(fā)生從多核苷酸表達(dá)肽的情況下培養(yǎng)包含本發(fā)明的多核苷酸(polynuceotide)的宿主細(xì)胞，并任選地分離和/或純化該肽。關(guān)于操縱核酸的已知技術(shù)和方案的進(jìn)一步細(xì)節(jié)，例如，制備核酸構(gòu)建體、誘變、測(cè)序、將DNA引入細(xì)胞和基因表達(dá)、以及分析蛋白，參見(jiàn)例如，CurrentProtocolsinMolecularBiology(分子生物學(xué)最新方案)，第5版,Ausubel等人編輯，JohnWiley&sons,2005，和MolecularCloning:aLaboratoryManual(分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè))第3版Sambrook等人，ColdSpringHarborLaboratoryPress,2001。18施用本發(fā)明的肽和用于本發(fā)明的肽可單獨(dú)施用，但優(yōu)選地作為藥物組合物施用，所述藥物組合物將通常包含依據(jù)預(yù)期施用途徑選擇的合適的藥物賦形劑、稀釋劑或載體。肽可以通過(guò)任何合適的途徑對(duì)需要治療的患者施用。一些合適的施用途徑包括(但不限于)口服、直腸、鼻、局部(包括頰和舌下)、陰道或腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈、皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外)施用。對(duì)于靜脈注射或患處注射，活性成分將是腸胃外可接受的水溶液的形式，它不含熱原，具有合適的pH、等滲性和穩(wěn)定性。使用例如等滲賦形劑，如氯化鈉注射液、林格注射液、乳酸鹽林格注射液，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠制備合適的溶液。需要時(shí)可以含有防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖液、抗氧化劑和/或其他添加劑。用于口服施用的藥物組合物可以是片劑、膠嚢、粉末或液體形式。片劑可以包含固體載體，如明膠或佐劑。液體藥物組合物通常含有液體載體，如水、石油、動(dòng)物油或植物油、礦物油或合成油。可以含有生理鹽水溶液、葡萄糖或其他糖溶液，或二醇，如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。組合物還可經(jīng)微球、脂質(zhì)體、其他微粒遞送系統(tǒng)或置于包括血液的某些組織的緩釋制劑來(lái)施用。緩釋載體的適合實(shí)例包括分份產(chǎn)品(sharedarticles)形式的半透性聚合物基質(zhì)，如栓劑或微膠嚢?？芍踩氲幕蛭⒛z嚢化的緩釋基質(zhì)包括聚交酯(美國(guó)專利第3,773,919號(hào)；EP-A-0058481)、L-谷氨酸和？谷氨酸乙酯的共聚物(Sidman等人，Biopolymers22(1):547-556,1985)、聚(2-異丁烯酸羥乙酯)或乙烯醋酸乙烯酯(Langer等人，J.Biomed.Mater.Res.15:167-277,1981和Langer,Chem.Tech.12:98-105,1982)。含有多肽的脂質(zhì)體由以下熟知的方法制備DE3,218,121A;Epstein等人，PNASUSA,82:3688-3692,1985;HWang等人，PNASUSA，77:4030-4034,1980;EP-A-0052522;E-A-0036676;EP-A-0088046;EP-A-0143949;EP-A-0142541;JP-A-83國(guó)11808;美國(guó)專利第4,485,045和4,544,545號(hào)。通常，脂質(zhì)體是小(約200-800埃)的單層型，其中脂質(zhì)含量超過(guò)約30mol.%膽固醇，調(diào)節(jié)選擇的比例至多肽滲漏的最佳速率。本發(fā)明的肽和多核苦酸可提供在創(chuàng)傷敷料中。任何適合的創(chuàng)傷敷料可用于遞送這種肽或多核苷酸。如本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，許多類型的創(chuàng)傷敷料是常規(guī)已知的并可與本發(fā)明的肽或多核苷酸一起使用。這些可包括但不限于基于水膠體的創(chuàng)傷敷料、基于水凝膠的創(chuàng)傷敷料、基于藻酸鹽的創(chuàng)傷敷料、基于泡沫的敷料、或抗菌敷料?；谒z體的敷料通常包含結(jié)合于半透膜載體或泡沫片的羧甲基纖維素鈉、明膠、膠質(zhì)、彈性體和粘合劑以形成平的、咬合的、粘性敷料。敷料在創(chuàng)傷表面上形成凝膠，從而促進(jìn)潮濕的創(chuàng)傷愈合。水膠體纖維可以水纖維(hydrofibre)敷料提供，其中纖維接觸滲出液后從干燥敷料轉(zhuǎn)變?yōu)檐浀恼辰Y(jié)的凝膠片。基于水凝膠的敷料促進(jìn)創(chuàng)傷清創(chuàng)并由具有高的水含量的不溶聚合物的基質(zhì)組成?；谠逅猁}的創(chuàng)傷敷料包含藻酸鈣、任選地帶有藻酸鈉。接觸創(chuàng)傷液后藻酸鹽部分地溶解以形成親水凝膠。它們很適合高度滲出的創(chuàng)傷。泡沫敷料可包含聚氨基曱酸酯或硅氧烷泡沫?？咕罅峡砂咕鷦?，諸如含銀或含碘化合物。使用本領(lǐng)城通常已知的技術(shù)，本發(fā)明的肽或多核苷酸可用于聯(lián)合這種敷料和并入這種敷料。以上提及的技術(shù)和方案以及根據(jù)本發(fā)明可以使用的其它技術(shù)和方案的實(shí)例參見(jiàn)Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(雷明頓氏藥學(xué)原理和實(shí)踐)，第21版，GennaroAR等人編輯，.LippincottWilliams&Wilkins,2005。通過(guò)使用靶向系統(tǒng)諸如抗體或細(xì)胞特異性配體，靶向治療可用于向靶如動(dòng)脈平滑肌遞送活性劑。劑量本發(fā)明的肽、多核苷酸和/或組合物優(yōu)選以"治療有效量"施用于個(gè)體，所述治療有效量足以對(duì)個(gè)體顯示益處。施用的實(shí)際量和施用速率和時(shí)間進(jìn)程將取決于所治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性。諸如劑量的確定等治療處方最終由醫(yī)師負(fù)責(zé)和判斷，并且通常考慮待治療的疾患、具體患者的病癥、遞送部位、施用方法以及醫(yī)生所知的其他因素。治療應(yīng)用"治療"或"療法"包括可有益于人類或非人類動(dòng)物的任何方法。所述治療可以是針對(duì)已存在的病癥或可以是預(yù)防性的(預(yù)防性治療)。治療可以包括治愈、緩解或預(yù)防效應(yīng)。子有用的任何病癥或疾患。如上所述，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的肽具有有效的促血管發(fā)生作用。因此，本發(fā)明的肽可用于治療新血管形成改善或治愈癥狀的任何病癥。這種病癥可包括冠狀動(dòng)脈疾病、外周血管疾病、缺血性心臟病、其它器官或器官系統(tǒng)例如外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的缺血性疾病、血管狹窄、如四肢的外周血管閉塞、和中風(fēng)。本發(fā)明還可用于治療組織選擇性緩激肽受體激動(dòng)劑可有用的任何病癥。如上所述，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的肽具有有效的血管舒張作用。因此，本發(fā)明的肽可用于治療血管舒張改善或治愈癥狀的任何病癥。這種病癥可包括高血壓、肺動(dòng)脈高壓、冠狀動(dòng)脈疾病、外周血管疾病、缺血性心臟病、其它器官或器官系統(tǒng)的缺血性疾病、血管狹窄、如四肢的外周血管閉塞、和中風(fēng)?？蓱?yīng)用本發(fā)明的其它情況包括治療血管痙攣，例如手術(shù)中或手術(shù)后的血管痙攣、和勃起功能障礙。在一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的肽的促血管發(fā)生效應(yīng)可在缺血性疾病、心肌梗塞期間或之后或在冠狀動(dòng)脈旁路手術(shù)之后用于促進(jìn)心肌組織中側(cè)支脈管系統(tǒng)的血管發(fā)生。系統(tǒng)病理學(xué)的血管疾病和/或缺血性疾病。這種疾病可包括凝塊閉塞或動(dòng)脈瘤破裂導(dǎo)致的腦血管意外，或造成神經(jīng)元死亡或外周功能損傷諸如運(yùn)動(dòng)或感覺(jué)功能或語(yǔ)言損傷的全身性/局部缺血。如本文所述的，本發(fā)明的肽將可用于組織^^復(fù)，例如創(chuàng)傷愈合，尤其是用于再血管化受損組織或在缺血期間和期望新的毛細(xì)管血管發(fā)生時(shí)刺激旁系血流。該肽可用于其中期望血管的血管發(fā)生和/或再血管化的任何受損組織的修復(fù)或任何創(chuàng)傷的愈合。因此本發(fā)明的肽和方法可用于治療，例如潰瘍，諸如皮膚潰瘍，例如壓瘡、靜脈潰瘍和糖尿病性潰瘍、撕裂、燒傷、和其它組織外傷。該肽和方法可特別有用于移植的組織例如皮膚移植物用于修復(fù)這種創(chuàng)傷的應(yīng)用中。在血管移植手術(shù)中，本發(fā)明的肽和方法可用于促進(jìn)內(nèi)皮化。當(dāng)使用移植的或合成的材料的血管移植物時(shí)，可向移植物的表面施加該肽以促進(jìn)血管平滑肌和連接內(nèi)皮細(xì)胞的外膜細(xì)胞生長(zhǎng)。而且，當(dāng)天然或合成的材料將被移植到身體中時(shí)，本發(fā)明的肽可用于包裏該材料以減少和/最小化移植材料的排斥并刺激移植材料的血管形成。這種激動(dòng)劑還可用于修復(fù)動(dòng)脈硬化造成的血管損傷或氣囊血管成形術(shù)造成的損傷。通過(guò)促進(jìn)修復(fù)這種組織，可將損傷減到最少并可防止再狹窄?？蛇x地，肽可用于促進(jìn)或加速內(nèi)部和外部的細(xì)胞生長(zhǎng)。尤其是該肽可用于促進(jìn)或加速血管或外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的皮膚細(xì)胞生長(zhǎng)。這可特別有用于促進(jìn)移植再血管化，例如治療燒傷時(shí)或美容手術(shù)后。本發(fā)明進(jìn)一步延伸至使用編碼本發(fā)明的肽的核酸的基因治療方法。本發(fā)明現(xiàn)在在下面的非限制性實(shí)施例中進(jìn)一步描述。參照附圖，其中圖1顯示QUB698.8肽對(duì)分離的平滑肌制品的相對(duì)摩爾效力；圖la顯示QUB698.8肽對(duì)大鼠動(dòng)脈的效應(yīng)，圖lb顯示QUB698.8肽對(duì)小腸的效應(yīng)。圖2a顯示QUB698.8肽對(duì)創(chuàng)傷刮擦^r測(cè)中人類微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMEC-1)遷移的效應(yīng)。圖2b顯示與非處理對(duì)照相比，lxl(T8M的濃度的QUB698.8肽對(duì)創(chuàng)傷檢測(cè)中HMEC-1時(shí)間依賴性遷移的效應(yīng)。圖3說(shuō)明QUB698.8肽對(duì)HMEC-1在基質(zhì)月t基質(zhì)上形成小管的能力的效應(yīng)。圖4說(shuō)明與非處理對(duì)照相比，QUB698.8肽對(duì)HMEC-1的72小時(shí)增殖的效應(yīng)。實(shí)施例材料和方法郝力粉/踏從商業(yè)來(lái)源獲得四只成年大蹼鈴蟾樣本，并以22。C、12h/12h的光/暗周期圏養(yǎng)在動(dòng)物飼養(yǎng)所，每周三次喂食帶有多種維生素的蟋蟀。在這些條件下，蟾蜍在3年中保持好的健康狀態(tài)。以兩種方法獲得防御性皮膚分泌物，且在這兩種條件設(shè)定下，分泌物主要來(lái)自成對(duì)的腮腺(paratoid)和脛腺。首先，以蒸餾水潤(rùn)濕皮膚表面，隨后是各持續(xù)10秒的三個(gè)周期的經(jīng)皮電刺激(5V、100Hz、140ms脈沖寬度)(Tyler等人(l992)丄Pharmacol.Toxicol.Lett.28,199-200)。以蒸餾水從背部皮膚洗去皮膚分泌物，快速冷凍于液氮并凍千。第二種和優(yōu)選的技術(shù)包括以戴乳膠手套的手指輕輕按摩背部皮膚表面，發(fā)現(xiàn)這種方法在干重分泌物產(chǎn)量方面同等有效。兩種技術(shù)都對(duì)動(dòng)物不造成傷害和造成最少的刺激。發(fā)'應(yīng)0t/56站.S。在與人類唾液一起培養(yǎng)2小時(shí)的大蹼鈴蟾緩激肽的反相HPLC級(jí)分中鑒定出QUB698.8。通過(guò)唾液中存在的蛋白酶混合物的組合連續(xù)蛋白水解，QUB698.8從其母體肽大蹼鈴蟾緩激肽產(chǎn)生。雄性白化Wistar大鼠(200-350g)通過(guò)窒息隨后頸脫位使其安樂(lè)死。如以前描述的制備尾動(dòng)脈(Hirst等人(1994)&,ito^o/.67,795-799)。培養(yǎng)緩沖液是95%02/5%C02充氧的Krebs'溶液(NaCl118mM、KC14.7mM、NaHC0325mM、NaH2P041.15mM、CaCl22.5mM、MgCl21.1mM、葡萄糖5.6mM)。使用連才妻于MacLab系統(tǒng)(ADInstrumentsPtyLtd.Australia)的壓力傳感器通過(guò)水柱代替(displacement)產(chǎn)生的壓力增加或減少而檢測(cè)動(dòng)脈平滑肌制品的收縮或膨脹。在Macintosh計(jì)算機(jī)上用圖表展示數(shù)據(jù)。通過(guò)使用一定范圍的推注去氧腎上腺素(5^M)接觸來(lái)確定生存力并以氧氣鼓泡10s而除去動(dòng)脈內(nèi)皮層。以去氧腎上腺素(IO,)預(yù)收縮后缺少響應(yīng)于30min灌注乙酰膽堿(50,)的松弛來(lái)證實(shí)不存在內(nèi)皮層。對(duì)于腸平滑肌制品，將1cm厚的回腸環(huán)小心地;故到MacLab力傳感器的別針上，一個(gè)別針作為靜止的固定點(diǎn)而第二個(gè)別針是自由的，允許向平滑肌施加張力。將肌肉環(huán)逐漸地接觸O.lg的靜止張力增量直到來(lái)自0.5g靜止張力的自發(fā)收縮。應(yīng)用肽之前允許收縮肌肉制品穩(wěn)定25min。以10去氧腎上腺素灌注動(dòng)脈制品以獲得收縮坪后，記錄應(yīng)用范圍為lxl(r5-lxlO-1GM的肽后的相對(duì)杠、弛。將腸平滑肌環(huán)制品^接觸如上述的肽劑量，并記錄張力的相對(duì)變化。結(jié)果1.向大鼠尾動(dòng)脈平滑肌制品應(yīng)用QUB698.8產(chǎn)生劑量依賴性松弛。與緩激肽和大蹼鈴蟾緩激肽相比詳細(xì)的響應(yīng)概括于表1A和圖la。在該生物檢測(cè)中，QUB698.8與緩激肽幾乎效力相當(dāng)，但比大蹼鈴蟾緩激肽更有效。2.向大鼠回腸平滑肌環(huán)制品應(yīng)用QUB698.8產(chǎn)生劑量依賴性收縮。與緩激肽和大蹼鈴蟾緩激肽相比詳細(xì)的響應(yīng)概括于表1A和圖lb。在該生物檢測(cè)中，QUB698.8比緩激肽和大蹊鈴蟾緩激肽較不有效。這些組合的數(shù)據(jù)顯示與回腸平滑肌相比，QUB698.8引起動(dòng)脈最大效應(yīng)的最優(yōu)濃度低兩個(gè)數(shù)量級(jí)。3.選擇性動(dòng)脈平滑肌擴(kuò)張劑通常具有促血管發(fā)生特征，因此對(duì)QUB698.8進(jìn)行一定范圍的適合的生物檢測(cè)以確定活性譜。4.在人類微血管內(nèi)皮細(xì)胞創(chuàng)傷刮擦檢測(cè)中，細(xì)胞生長(zhǎng)在載玻片上至融合，以移液器的槍頭制造標(biāo)準(zhǔn)大小的創(chuàng)傷并測(cè)量修復(fù)裂口需要的時(shí)間。在10納摩爾的最優(yōu)效應(yīng)濃度，QUB698.8比非處理對(duì)照促進(jìn)創(chuàng)傷閉合快42%。(表lB和圖2a和b)。5.使用體外內(nèi)皮細(xì)胞血管發(fā)生小管形成檢測(cè)(基質(zhì)膠)，在l納摩爾的最優(yōu)濃度，QUB698.8比時(shí)間匹配的對(duì)照引起多75%的小管(表IB和圖3)。6.使用標(biāo)準(zhǔn)MTT檢測(cè)來(lái)監(jiān)控有效的細(xì)胞增殖效應(yīng)，與非處理對(duì)照相比，24h后QUB698.8導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目增加70%，盡管48h后無(wú)顯著差異。(表1B和圖4)。這可表示對(duì)細(xì)胞周期同步化的快速作用。總之，這些數(shù)據(jù)表示QUB698.8以致使該肽成為目前已知的最有效的藥劑之一的濃度促進(jìn)新血管生長(zhǎng)的有效作用。結(jié)果還表示影響加速創(chuàng)傷閉合中的其它皮膚細(xì)胞類型生長(zhǎng)的效力。QUB698.8、其片段和衍生物將因此在促進(jìn)血管發(fā)生以及表面和內(nèi)部的組織中創(chuàng)傷和組織修復(fù)具有臨床效力。本發(fā)明的肽施加其血管發(fā)生效應(yīng)的作用機(jī)制可為通過(guò)結(jié)合受體或可牽涉在實(shí)際意義上不是受體的結(jié)合位點(diǎn)。不受限于任何一種具體理論，認(rèn)為由于其與緩激肽受體配體結(jié)構(gòu)完全不相似，該肽的靶不可能是緩激肽受體。其不明顯地直接通過(guò)細(xì)胞骨架修飾來(lái)起作用。這將其促血管發(fā)生效應(yīng)與大蹼鈴蟾緩激肽的C-末端片段區(qū)別開，后者的確經(jīng)由緩激肽受體起作用。而且，本文的有效的選擇性血管舒張效應(yīng)支持肽用在其中期望血管舒張的應(yīng)用中。本說(shuō)明書中涉及的所有文件在此通過(guò)引用并入。描述的本發(fā)明實(shí)施方案的各種修飾和改變對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是明顯的，不脫離本發(fā)明的范圍和精神。盡管已經(jīng)結(jié)合特定優(yōu)選實(shí)施方案描述了本發(fā)明，但是應(yīng)當(dāng)理解，要求保護(hù)的本發(fā)明不應(yīng)不恰當(dāng)?shù)叵抻谶@些特定實(shí)施方案。實(shí)際上，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員明顯的所述發(fā)明實(shí)施方式的各種修飾預(yù)期在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。表1A)生理篩選謬逸名祐QUB698.8EC5025<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>權(quán)利要求1.一種促血管發(fā)生肽，其中所述促血管發(fā)生肽是QUB698.8或其生物活性片段或衍生物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述肽由氨基酸序列Asp-Leu-Pro畫Lys-Ile畫Asn(SEQIDNO:2)組成。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述肽由氨基酸序列Asn-Ile-Lys-Pro-Leu-Asp(SEQIDNO:9)組成。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽對(duì)動(dòng)脈平滑肌受體的EC50小于大蹼鈴蟾緩激肽對(duì)動(dòng)脈平滑肌受體的EC50。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽對(duì)小腸受體的EC50大于大蹼鈴蟾緩激肽對(duì)小腸受體的EC50。6.—種編碼根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的肽的多核香酸，其中所述多核苷酸不編碼包含序列IDNo:1所示氛基酸序列的多肽。7.—種促進(jìn)組織中血管舒張的方法，其包括向所述組織施用根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸。8.—種治療心血管疾病的方法，其包括向需要其的患者施用根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸。9.一種促進(jìn)組織中血管發(fā)生的方法，其包括向所述組織施用根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸的步驟。10.—種促進(jìn)或加速組織修復(fù)或創(chuàng)傷愈合的方法，其包括向需要其的受治療者施用根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸。11.一種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸和藥物上可接受的載體或賦形劑。12.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核普酸，其用于藥物。13.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸，其用于治療心血管疾病。14.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸，其用于促進(jìn)或加速組織修復(fù)或創(chuàng)傷愈合。15.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸，其用于治療、預(yù)防或抑制移植物排斥或移植排斥。16.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苦酸在制備用于治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。17.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸在制備用于促進(jìn)或加速組織修復(fù)或創(chuàng)傷愈合的藥物中的應(yīng)用。18.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苦酸在制備用于治療、預(yù)防或抑制移植物排斥或移植排斥的藥物中的應(yīng)用。19.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法、根據(jù)權(quán)利要求13所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其中所述心血管疾病是缺血性疾病。20.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法、根據(jù)權(quán)利要求13所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其中所述心血管疾病是血管疾病或血管損傷。21.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法、根據(jù)權(quán)利要求14所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其中所述組織修復(fù)或創(chuàng)傷愈合是潰瘍的修復(fù)或愈合。22.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法、根據(jù)權(quán)利要求14所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其中所述組織修復(fù)或創(chuàng)傷愈合是燒傷的修復(fù)或愈合。23.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法、根據(jù)權(quán)利要求14所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其中所述組織修復(fù)或創(chuàng)傷愈合是撕裂的修復(fù)或愈合。24.—種創(chuàng)傷敷料，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的肽或根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸。全文摘要描述了大蹼鈴蟾緩激肽(maximakinin)的N-末端六肽片段QUB698.8，其展示對(duì)平滑肌有效的組織選擇性作用。證明它對(duì)動(dòng)脈平滑肌超過(guò)小腸平滑肌的高度選擇性，導(dǎo)致有效地松弛動(dòng)脈平滑肌，同時(shí)導(dǎo)致較不有效地收縮回腸平滑肌。它可用于治療心血管系統(tǒng)疾病和促進(jìn)血管發(fā)生。文檔編號(hào)C07K7/18GK101657465SQ200880011959公開日2010年2月24日申請(qǐng)日期2008年3月7日優(yōu)先權(quán)日2007年3月7日發(fā)明者克里斯多佛·肖,大衛(wèi)·赫斯特,布萊恩·沃克,陳天寶,馬丁·奧羅克申請(qǐng)人:英國(guó)貝爾沃斯特女王大學(xué)