專利名稱：用于口服給藥的皮膚增白組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及適于以食品和飲料等形式口服給藥的皮膚增白組合物。此外，本發(fā)明還涉及含有所述組合物的用于口服給藥的皮膚增白劑及其用途。
背景技術(shù)：
白皙的皮膚通常被認(rèn)為是美麗的皮膚，以前曾建議使用含有具有酪氨酸酶抑制活性的物質(zhì)例如氫醌及其衍生物(例如熊果苷)、曲酸及其衍生物、抗壞血酸及其衍生物、硫醇化合物以及各種動(dòng)物和植物提取物的皮膚增白化妝品來預(yù)防或治療色斑(mospatche)和雀斑以獲得白皙的皮膚。
此外，火棘(Pyracantha fortuneana)和窄葉火棘(Pyracanthaangusutifolia)的提取物具有酪氨酸酶抑制活性，已知可將這些提取物用于皮膚增白的化妝品組合物并具有極佳的皮膚增白作用(日本專利號(hào)2749218)。
近年來，人們對(duì)皮膚增白的意識(shí)越來越強(qiáng)，除了使用常規(guī)的化妝品外，人們又開始需要易于以食品和飲料等形式口服吸收的皮膚增白劑。
但是，人們還不清楚哪一種常用于皮膚增白化妝品的物質(zhì)在口服吸收時(shí)具有與化妝品相當(dāng)?shù)淖饔?，已知可以在口服吸收時(shí)具有皮膚增白作用的唯一物質(zhì)是維生素C制劑和硫醇化合物。此外，由于這些物質(zhì)存在穩(wěn)定性和吸收性的問題，通常認(rèn)為它們不能顯示充分的作用。
本發(fā)明的公開因此，本發(fā)明的發(fā)明人準(zhǔn)備提供一種在口服給藥時(shí)有效并且安全的皮膚增白組合物。
通過對(duì)那些曾經(jīng)安全地用于飲食的植物中在口服給藥時(shí)顯示皮膚增白作用的植物進(jìn)行的認(rèn)真研究，我們發(fā)現(xiàn)薔薇科火棘屬(Rosaceae Pyracantha)的植物是有效的。更具體地講，我們發(fā)現(xiàn)薔薇科火棘屬的火棘和窄葉火棘的果實(shí)的水、乙醇或它們的混合物的提取物在口服給藥時(shí)顯示皮膚增白作用，由此完成了本發(fā)明。
此外，盡管很清楚由于將具有皮膚增白作用的物質(zhì)以化妝品等形式直接涂抹在皮膚上和以食品或飲料的形式口服給藥的給藥形式上的差異會(huì)造成效力上的差異，但仍給出如下簡(jiǎn)要描述來說明該差異。
化妝品直接涂抹在皮膚表面，大部分化妝品成分保留在皮膚表面并顯示化妝品固有的功能而不會(huì)損害皮膚的生理功能。
相反，當(dāng)口服給藥時(shí)，具有皮膚增白作用的物質(zhì)首先溶解在消化道內(nèi)的液體中，然后從胃或小腸吸收。從小腸吸收的物質(zhì)主要從門靜脈進(jìn)入肝臟，然后進(jìn)入靜脈并在通過心臟后通過在體內(nèi)的循環(huán)最后到達(dá)身體的各個(gè)位點(diǎn)。
因此，并不清楚哪一種在化妝品中有效的物質(zhì)會(huì)在口服給藥時(shí)顯示與化妝品類似的效果。
事實(shí)上，盡管熊果苷和抗壞血酸具有酪氨酸酶抑制活性，并在以前用作具有極佳皮膚增白作用的化妝品，但由于它們?cè)诳诜o藥時(shí)的皮膚增白作用很低，所以在口服給藥和化妝品之間存在著明顯的效果差異。
此外，本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)在體外具有很強(qiáng)的酪氨酸酶抑制活性的火棘成分在口服給藥時(shí)僅有很弱的皮膚增白活性，相反，在體外具有弱的酪氨酸酶抑制活性的成分在口服給藥時(shí)卻顯示皮膚增白活性，由此完成了本發(fā)明。完成本發(fā)明的實(shí)施方案已知本發(fā)明所用的Pyracantha fortuneana(其中文名為“火棘(Kakyoku)”)的果實(shí)(其中藥名為“赤陽子(Sekiyoshi)”)可以健脾并可治療消化不良。此外，窄葉火棘是與火棘相同的來自中國(guó)的灌木，在日本用作花園植物。
雖然在本發(fā)明中使用這些植物的溶劑提取物，但優(yōu)選使用這些植物的果實(shí)的溶劑提取物。
盡管對(duì)于從植物中萃取活性成分時(shí)所用的溶劑沒有特別的限制，只要這些溶劑可以有效地提取活性成分即可，但從安全性來講，優(yōu)選使用水、甲醇、乙醇或其它低級(jí)醇或它們的混合物，更優(yōu)選使用水、乙醇或它們的混合物。
當(dāng)用水進(jìn)行提取時(shí)，雖然可以使用常溫下的水，但優(yōu)選使用熱水，例如60-100℃的水。此外，當(dāng)使用有機(jī)溶劑如甲醇或乙醇時(shí)，可以在常溫下進(jìn)行提取，或在所述有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)或低于沸點(diǎn)的溫度下進(jìn)行熱提取。此外，當(dāng)使用有機(jī)溶劑如甲醇或乙醇和水的混合物時(shí)，提取可以在常溫下進(jìn)行，或在低于所述溶劑沸點(diǎn)的溫度下進(jìn)行熱提取。
此外，可將提取物在通過例如濃縮、液-液分配或吸附色譜純化后使用以便將活性成分在高濃度下混合。例如，當(dāng)對(duì)本發(fā)明的提取物進(jìn)行吸附色譜時(shí)，可以用合成的吸附劑例如芳香族合成吸附劑如苯乙烯-二乙烯基苯作為吸附劑。芳香族合成吸附劑的具體例子是Diaion HP-20(商標(biāo)名，Mitsubishi Kasei Kogyo)。另外，也可使用Diaion HP-21(商品名，Mitsubishi Kasei Kogyo)、AmberliteXAD2和XAD4(商品名，Rohm and Hass)等，芳香族合成吸附劑不限于此。
當(dāng)使用Diaion HP-20時(shí)，優(yōu)選將提取物上到用該吸附劑填充的柱子上，使用已經(jīng)流過該柱子的液體并通過用水洗滌柱子得到級(jí)份。此外，當(dāng)用有機(jī)溶劑洗脫時(shí)，可以使用的級(jí)份是通過用有機(jī)溶劑和水的混合物例如20-80％甲醇或乙醇水溶液洗脫得到的級(jí)份。
由此方式得到的本發(fā)明的用于口服給藥的皮膚增白組合物是一種可以有效預(yù)防或治療mospatches和雀斑等并具有極佳的皮膚增白效果的用于口服給藥的組合物。該組合物可以以片劑、膠囊或顆粒的形式攝取或通過混入到食品或飲料如糖果、口香糖或飲料中來攝取，對(duì)它的形式?jīng)]有限制。
此外，盡管本發(fā)明所用的提取物的成人每日攝入量隨著年齡、健康狀況、體重等而改變，但優(yōu)選攝入0.01-20.0g、更優(yōu)選0.1-10.0g，以粗品提取物的固體成分的量計(jì)。
實(shí)施例1火棘果實(shí)的熱水提取物將5.00g干的火棘果實(shí)浸泡在50m190℃的熱水中，煮沸3小時(shí)后過濾，然后將得到提取物減壓過濾得到粗品提取物(1.33g固體)。
實(shí)施例2火棘果實(shí)的水/乙醇混合物提取物將5.00g干的火棘果實(shí)在50ml 50％乙醇水溶液中浸泡1周后過濾，然后將得到的提取物減壓過濾得到粗品提取物(1.08g固體)。
實(shí)施例3窄葉火棘果實(shí)的熱水提取物將5.00g干的窄葉火棘果實(shí)浸泡在50ml 90℃的熱水中，煮沸3小時(shí)后過濾，然后將得到提取物減壓過濾得到粗品提取物(1.21g固體)。
實(shí)施例4火棘果實(shí)的熱水提取物級(jí)份將按照實(shí)施例1的方法得到的火棘果實(shí)的粗品提取物(6.09g固體)溶于600ml水，在上到Diaion BP-20柱子(3cm直徑×11cm，Vt＝80ml)上后，將柱子用800ml水洗滌。收集流過柱子的液體和洗滌液并減壓過濾后，將得到的產(chǎn)物冷凍干燥得到5.13g固體(級(jí)份1)。
然后，將柱子用400ml 20％乙醇水溶液洗脫并將洗脫液減壓過濾后，將得到的產(chǎn)物冷凍干燥得到0.22g固體(級(jí)份2)。
然后，將柱子用400ml 40％乙醇水溶液洗脫并將洗脫液減壓過濾后，將得到的產(chǎn)物冷凍干燥得到0.49g固體(級(jí)份3)。
然后，將柱子用400ml 80％乙醇水溶液洗脫并將洗脫液減壓過濾后，將得到的產(chǎn)物冷凍干燥得到4mg固體(級(jí)份4)。
級(jí)份1至4的回收率總和為96％。
實(shí)施例5酪氨酸酶抑制活性的測(cè)量按照如下描述測(cè)量酪氨酸酶抑制活性。
將1.00ml 50mM磷酸鉀緩沖液(pH6.8)、0.25ml 0.5mg/ml L-酪氨酸水溶液(Nakarai Tesque)(1)和1.00ml樣品水溶液(2)(將實(shí)施例1至4的樣品和熊果苷制備成各種不同的濃度)充分混合并在30℃放置10分鐘后，加入0.25ml 0.1mg/ml來自蘑菇的酪氨酸酶水溶液(Sigma)。于30℃反應(yīng)約12分鐘后(對(duì)照的吸光度為大約0.5)，于475nm測(cè)定吸光度A。同時(shí)測(cè)定用水代替樣品水溶液(2)時(shí)的吸光度B以及用水代替L-酪氨酸水溶液(1)時(shí)的吸光度C。用如下方程式從A、B和C的吸光度計(jì)算出抑制率。
抑制率(％)＝(B－(A－C))/B×100用該測(cè)量方法測(cè)定各樣品的酪氨酸酶抑制活性，抑制率為50％時(shí)的樣品濃度(IC50值)如表1中所示。從表1可以看出，除實(shí)施例4的級(jí)份1外，所有的樣品均顯示酪氨酸酶抑制活性。表1提取物和級(jí)份的酪氨酸酶抑制活性

實(shí)施例6用小鼠研究皮膚增白作用(1)將0.04、0.12、0.40或10mg實(shí)施例1得到的粗品提取物溶于水(0.2ml)，將上述水溶液每天一次向小鼠(每組6只)口服給藥，然后曝露于180mJ/cm2紫外線(UVB)下。用水代替火棘提取物向?qū)φ战M的小鼠給藥。此外，用0.67mg抗壞血酸作為比較例。持續(xù)給藥10天后，對(duì)小鼠耳廓的一部分進(jìn)行取樣，然后通過用多巴染色表皮制備玻片樣品。表2給出了在各樣品的5個(gè)區(qū)域?qū)Χ喟完栃缘暮谒丶?xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果。
如表2所示，火棘提取物造成了多巴陽性黑素細(xì)胞數(shù)量的減少(在0.12mg或更高的劑量下與對(duì)照有顯著差異，P＜0.05)?；谶@些結(jié)果，口服攝入火棘提取物的確顯示出皮膚增白作用。此外，以前常用作皮膚增白化妝品的抗壞血酸盡管也顯示出多巴陽性黑素細(xì)胞數(shù)量的減少，但與對(duì)照之間沒有顯著性差異。表2暴露于UVB(180mJ/cm2)10天后多巴陽性黑素細(xì)胞數(shù)量的比較(判斷5％的顯著性水平)

實(shí)施例7用小鼠研究皮膚增白作用 (2)將實(shí)施例4得到的火棘的級(jí)份以它們?cè)诖制诽崛∥镏械慕票壤?10∶1∶1)、即10mg級(jí)份1、1mg級(jí)份2和1mg級(jí)份3溶于水(0.2m1)，將上述水溶液每天一次向小鼠(每組6只)口服給藥，然后曝露于180mJ/cm2紫外線(UVB)。用水代替火棘提取物的各級(jí)份向?qū)φ战M的小鼠給藥。此外，用12mg熊果苷作為比較例。持續(xù)給藥10天后，對(duì)小鼠耳廓的一部分進(jìn)行取樣，然后通過用多巴染色表皮制備玻片樣品。表3給出了在各樣品的5個(gè)區(qū)域?qū)Χ喟完栃缘暮谒丶?xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果。
在實(shí)施例5中未顯示酪氨酸酶抑制活性的火棘提取物的級(jí)份1明顯減少了多巴陽性黑素細(xì)胞的數(shù)量(P＜0.05的顯著性差異)。另一方面，雖然級(jí)份2和3(它們顯示很強(qiáng)的酪氨酸酶抑制活性)以及熊果苷有減少多巴陽性黑素細(xì)胞數(shù)量的傾向，但并未觀察到顯著性差異。
基于這些結(jié)果，可以清楚地證實(shí)通過口服給藥火棘提取物所引起的皮膚增白作用的主要成分主要包含在級(jí)份1中。此外還可以看出，酪氨酸酶抑制活性的程度并不與口服攝取所引起的皮膚增白活性的程度相一致。
此外，由于實(shí)施例6中的火棘粗品提取物(10mg/天)和實(shí)施例7中的火棘粗品提取物的級(jí)份1(10mg/天)顯示幾乎相同的活性，我們認(rèn)為除級(jí)份1之外的其它級(jí)份并不影響口服攝取時(shí)的皮膚增白活性。因此，在以下實(shí)施例中，我們決定使用實(shí)施例1獲得的提取物。表3暴露于UVB(180mJ/cm2)10天后多巴陽性黑素細(xì)胞數(shù)量的比較(判斷5％的顯著性水平)

實(shí)施例8火棘提取物粉末的形成將2重量份糊精加入到1重量份按照實(shí)施例1的方法過濾所得到的提取物的固體中，然后噴霧干燥得到火棘粉末。然后，將火棘粉末填充到00號(hào)硬膠囊中使每粒膠囊含有0.5g。
實(shí)施例9片劑的制備將70重量份實(shí)施例8制得的火棘粉末、26重量份結(jié)晶纖維素和4重量份蔗糖脂肪酸酯充分混合并用制片機(jī)(Hata Seisakusho Ltd.)制成每片含250mg的片劑。
實(shí)施例10糖果的制備將98g糖、90.7g稠麥芽糖漿(75％固體)和75g從火棘制備的濃縮物(40％固體)充分混合然后煮沸至水分含量為2％以制備每粒重2g的糖果(含0.3g火棘提取物固體)。
濃縮物在減壓條件下從由實(shí)施例1的提取物制備的液體提取物制得。
實(shí)施例11用人研究皮膚增白作用讓5名健康的成年男性每天早晨、下午和晚上各服用兩粒實(shí)施例8制得的膠囊，然后在第8天讓他們后背的左下方區(qū)域暴露于紫外線。與紫外線的暴露于通過用治療用紫外線照射系統(tǒng)(Dermaray)以168.6mJ/cm2紫外線(UVB)照射直徑為18mm的圓形區(qū)域來進(jìn)行。作為對(duì)照，對(duì)同一受試者在不服用試驗(yàn)物質(zhì)時(shí)用等劑量的紫外線在該受試者后背的右下方區(qū)域進(jìn)行照射。照射7天后，用皮膚光譜計(jì)(Cortex Technology)測(cè)定照射部位的黑色素值。用對(duì)色素沉著的抑制作用作為指標(biāo)，將服用火棘期間的黑色素值比對(duì)照期間的黑色素值低2或更多的受試者評(píng)估為○，將與對(duì)照期間的黑色素值沒有顯著性差異的受試者評(píng)估為△。結(jié)果如表4所示。
如表4所示，本發(fā)明的組合物的確可以在口服給藥時(shí)有效地改善皮膚的顏色。表4 UVB(168.6mJ/cm2)照射7天后黑色素值的比較

本發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，提供了用于口服給藥的皮膚增白組合物，該組合物很容易以食品、飲料等形式口服攝取并且可以通過抑制色譜沉著顯示極佳的皮膚增白作用，從而可用于預(yù)防或治療mospatches、雀斑等。
權(quán)利要求
1.用于口服給藥的皮膚增白組合物，該組合物含有薔薇科火棘屬植物的溶劑提取物。
2.權(quán)利要求1所述的用于口服給藥的皮膚增白組合物，該組合物使用薔薇科火棘屬植物的果實(shí)。
3.權(quán)利要求1或2所述的用于口服給藥的皮膚增白組合物，其中所述的薔薇科火棘屬植物是火棘或窄葉火棘。
4.權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的用于口服給藥的皮膚增白組合物，其中所述的溶劑是水、甲醇、乙醇或其混合物。
5.權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的用于口服給藥的皮膚增白組合物，所述組合物含有火棘的熱水提取物。
6.權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的用于口服給藥的皮膚增白組合物，所述組合物含有將火棘的所述熱水提取物上到吸附色譜柱上后通過所述吸附色譜柱的級(jí)份以及用水洗滌柱子所得到的級(jí)份。
7.權(quán)利要求6所述的用于口服給藥的皮膚增白組合物，其中所述吸附色譜柱的吸附劑是合成吸附劑。
8.權(quán)利要求7所述的用于口服給藥的皮膚增白組合物，其中所述的合成吸附劑是芳香族合成吸附劑。
9.含有權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)所述的組合物的用于口服給藥的皮膚增白劑。
10.權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)所述的組合物的用作口服給藥的皮膚增白劑的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了含有薔薇科火棘屬植物的溶劑提取物的用于口服給藥的皮膚增白組合物及其用途。
文檔編號(hào)A61Q19/02GK1336826SQ00802731
公開日2002年2月20日 申請(qǐng)日期2000年11月10日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月12日
發(fā)明者飯野妙子, 巖澤律夫, 木曾良信, 辻村英雄 申請(qǐng)人:三得利株式會(huì)社