專利名稱：：新型血管活性腸肽類似物的制作方法新型血管活性腸肽類似物首次從豬腸發(fā)現(xiàn)、分離和純化了血管活性腸肽(VIP)[US3，879,371]。該肽具有二十八(28)個氨基酸，并帶有對促胰液素和胰高血糖素廣泛的同源性。[Carlquist等，激素和代謝研究(Horm.Metab.Res.),14,28-29(1982)]。VIP的氨基酸序列如下His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gin-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQIDNO:1)已知VIP表現(xiàn)出遍及腸胃道和循環(huán)系統(tǒng)的廣泛范圍生物學(xué)活性。根據(jù)其與腸胃激素的相似性，發(fā)現(xiàn)VIP剌激胰腺和膽汁分泌、肝糖原水解、胰高血糖素和胰島素分泌，并活化胰腺碳酸氫鹽釋放。已知并從人、大鼠、小鼠、雞、魚和青蛙中克隆了兩種類型的VIP受體。目前將它們確定為VPAC1和VPAC2，并響應(yīng)具有相似親和性的天然VIP。VPAC2受體mRNA存在于人呼吸道，包括氣管和支氣管上皮、腺細(xì)胞和免疫細(xì)胞、肺泡壁和巨噬細(xì)胞中。[Groneberg等，實驗室研究(Lab.Invest)81:749-755(2001)和Laburthe等，受體和通道(ReceptorsandChannels)8:137-153(2002)]。己通過免疫測定將含有VIP的神經(jīng)細(xì)胞定位在內(nèi)分泌和外分泌系統(tǒng)、腸和平滑肌的細(xì)胞內(nèi)。發(fā)現(xiàn)VIP是神經(jīng)效應(yīng)子，其引起若干激素包括催乳激素、甲狀腺素、和胰島素和胰高血糖素的釋放。還發(fā)現(xiàn)VIP刺激由腎體內(nèi)和體外釋放腎素。發(fā)現(xiàn)VIP存在于多種動物物種和人呼吸道中的神經(jīng)和神經(jīng)末梢中。VIP的心血管和支氣管肺效應(yīng)是感興趣的，因為發(fā)現(xiàn)VIP是強(qiáng)血管擴(kuò)張劑和強(qiáng)平滑肌弛緩劑，其作用于外周、肺部、和冠狀血管床。發(fā)現(xiàn)VIP具有對腦血管的血管擴(kuò)張作用。體外研究證明外源應(yīng)用于腦動脈的血管活性腸肽誘導(dǎo)血管舒張，這提示VIP作為可能的腦血管舒張遞質(zhì)。據(jù)此，也顯示出VIP是強(qiáng)血管擴(kuò)張劑。VIP可以對免疫系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)作用，例如，VIP能夠調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。已顯示出天然VIP抑制在LPS-刺激的巨噬細(xì)胞中生成IL-12,影響IFNY合成。VIP抑制在鼠科巨噬細(xì)胞中生成TGF-pi，并抑制在人單核細(xì)胞中經(jīng)過NFkB生成IL-8。[Sun等，神經(jīng)免疫性雜志(J.Neuroimmunol.)107:88-99(2000)和Delgado和Ganea,生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究專欄(Biochem.Biophys.Res.Commun.)302:275-283(2003)]。由于發(fā)現(xiàn)VIP松弛平滑肌，并且其通常存在于呼吸道組織中，如上所示，假設(shè)了VIP可能是內(nèi)源的支氣管平滑肌松弛介質(zhì)。顯示出來自在哮喘患者的組織，與來自正?；颊叩慕M織相比，不含免疫反應(yīng)性VIP。這可能指示出與哮喘疾病相關(guān)的VIP或VIPergic神經(jīng)纖維的缺乏。體外和體內(nèi)檢驗顯示VIP松弛氣管平滑肌并保護(hù)以避免支氣管收縮劑諸如組胺和前列腺素F^。當(dāng)靜脈內(nèi)給藥時，發(fā)現(xiàn)VIP保護(hù)以避免支氣管收縮劑諸如組胺、前列腺素F2a、白三烯、血小板活化因子以及抗原-誘導(dǎo)的支氣管收縮。還發(fā)現(xiàn)VIP體外抑制人呼吸道組織中的粘液分泌。呼吸道病癥具有多種原因，但是共有若干病理生理和臨床特征。這些病癥的特征是由呼吸道阻塞、呼吸道壁變厚，炎癥或間質(zhì)組織彈性缺乏引起的氣流限制。共同-病狀可以包括粘液分泌過多、呼吸道超反應(yīng)性、和氣體交換異常，這可以引起咳嗽、痰產(chǎn)生、喘息和呼吸困難。常見呼吸道病癥包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性支氣管炎、肺氣腫、和肺部高血壓。[Mayer等，呼吸生理學(xué)(RespirationPhysiol.)128:3-11(2001)]。COPD是一組由肺呼吸道阻塞定義的慢性病癥。COPD包括兩種主要的呼吸疾病，即慢性(阻塞性)支氣管炎和肺氣腫。這兩種疾病均與呼吸困難和不呼吸相關(guān)。COPD可以伴隨著肺病高血壓。長期吸煙是COPD的主要風(fēng)險因素。通常認(rèn)為與COPD相關(guān)的呼吸道限制是不能逆轉(zhuǎn)的。慢性支氣管炎是累進(jìn)的炎性疾病。與該疾病相關(guān)的是呼吸道中粘液產(chǎn)量的增多和細(xì)菌感染發(fā)生率的增高。該慢性炎性病癥誘導(dǎo)支氣管壁的加厚，從而引起增加充血和呼吸困難。肺氣腫是通過利用擴(kuò)大氣體空間和減小肺泡表面積而損傷肺組織的潛在COPD病理學(xué)。肺損傷是由弱化和破壞肺內(nèi)的氣囊所引起的。肺組織的天然彈性也降低，從而導(dǎo)致過度伸展和破裂?？梢該p傷較小的支氣管管，這能夠?qū)е滤鼈兤扑椴⒆枞麣饬鳎瑥亩鸷粑蛔?。COPD，在其基本醫(yī)學(xué)意義中，通常伴隨著支氣管阻塞。因此，最常見的COPD癥狀包括呼吸缺乏、慢性咳嗽、胸緊、更努力去呼吸、增多的粘液產(chǎn)量和頻繁清喉嚨?；颊卟荒苓M(jìn)行它們平常的日常活動。單獨形成慢性支氣管炎和肺氣腫是可能的，但是大多數(shù)患有COPD的人具有這些病癥的組合。分解肺實質(zhì)中結(jié)締組織，具體地彈性蛋白，導(dǎo)致許多呼吸道疾病中存在的彈性降低。己在肺氣腫和COPD中顯示出了彈性蛋白降解的證據(jù)。認(rèn)為嗜中性彈性蛋白酶是造成彈性蛋白破壞的主要蛋白酶。[Bames等，歐洲呼吸作用雜志(Eur.Respir.J.)22:672-688(2003)]。顯示出在COPD患者的肺中，嗜中性彈性蛋白酶的產(chǎn)量增多。[Higashimoto等，呼吸作用(Respiration)72:629-635(2005)]。由于令人感興趣的和潛在的VIP臨床有效生物學(xué)活性，所以該肽一直是若干報告的合成程序的目標(biāo)，目的是增強(qiáng)該分子一種或多種性質(zhì)。Takeyama等報告了在位置8處具有谷氨酸取代天冬氨酸的VIP類似物。發(fā)現(xiàn)該化合物沒有天然VIP有效。[化學(xué)和制藥學(xué)期刊(Chem,Pharm.Bull.)28:2265-2269(1980)]。Wendlberger等公開了制備在位置17處具有正亮氨酸取代甲硫氨酸的VIP類似物。[肽程序(PeptideProc.)第16界歐洲肽研i寸會(16thEur.Pept.Symp.),290-295(1980)]。發(fā)現(xiàn)該肽在從肝膜制品中轉(zhuǎn)移放射性碘標(biāo)記的VIP的能力上與天然VIP均等。Watts和Wooton報告了一系列線性和環(huán)狀VIP片段，其包含6-12個來自天然序列的殘基。[EP184,309,EP325,044;US4,737,487,US4,866,039]。Turner等報告了片段VIP(10-28)是VIP的拮抗齊!J[肽(Peptides)7:849-854(1986)]。還報告了取代的類似物[4-Cl-D-Phe氣Leu口]-VIP與VIP受體結(jié)合，并對抗VIP的活性[Pandol等，胃腸和肝生理學(xué)(Gastrointest.LiverPhysiol.)13:G553-G557(1986)]。Gozes等報告了類似物[Lys',Pro2,Arg3,Arg4,Pro5,Tyr6]-VIP是VIP的競爭性抑制劑，從而與其在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞上的受體相結(jié)合。[內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)125:2945-2949(1989)]。Robberecht等報告了若干在天然VIPN-末端中具有D-殘基取代的VIP類似物。[肽(Peptides)9:339-3456(1988)]。全部這些類似物較不緊密地與VIP受體結(jié)合，并在c-AMP活化中顯示出比天然VIP低的活性。Tachibana和Ito報告了前體分子的若干VIP類似物。[在:月太化學(xué)(PeptideChem.)中，Shiba和Sakakibara(版本),保護(hù)研究基礎(chǔ)(Prot.Res.Foundation),1988,481-486,JP1083012,US4,822,774]。這些化合物顯示出是比VIP1-3倍更有效的支氣管擴(kuò)張劑，并具有1-2倍更高的低血壓活性。Musso等還報告了若干VIP類似物在位置6-7、9-13、15-17、和19-28處具有取代。[生物化學(xué)(Biochem)27:8174-8181(1988);US4,835,252]。發(fā)現(xiàn)這些化合物在與VIP受體結(jié)合和生物學(xué)響應(yīng)中與天然VIP等效或不如其有效。Bartfai等報告了一系列多重取代的[Leu17]-VIP類似物[WO89/05857]。Gourlet等報告了具有對VIP受體親和性的[Arg"]-VIP衍生物[BBA1314:267-273(1996)]。Onoue等報告了VIP的一系列精氨酸衍生物和平截體[Onoue等，生命科學(xué)(LifeSci.)74:1465-77(2004)和Ohmori等,調(diào)節(jié)肽(Regul.Pept.)123:201-207(2004)]。還報告了一系列聚-丙氨酸衍生物[Igarashi等，藥理學(xué)和實驗治療學(xué)雜志(J.Pharm.Exper.Ther.)鄧:3:445-460(2002)和Igarashi等，制藥學(xué)和實驗治療學(xué)雜志(J.Pharm.Exper.Ther.)315:370-81(2005)]。在US20050203009中，描述了具有選擇性VPAC1激動劑活性的VIP類似物。報告了VIP類似物和C-末端加入聚乙二醇的衍生物一直用于治療代謝病癥，包括糖尿病[例如，WO2006042152]。識別了具有VPAC2激動劑活性的肽，其包括PACAP和VIP類似物[Gourlet等，肽(peptides)18:403-408;Xia等，藥理學(xué)和實驗治療學(xué)雜志(J.Pharmacol.Exp.Ther.)281:629-633(1997)]。報告了VIP環(huán)狀類似物具有提高的穩(wěn)定性和活性[Bolin等,生物多聚體(Biopolymers)37:57-66(1995)，US5,677，419]。在人中，當(dāng)通過靜脈內(nèi)灌輸對哮喘患者給藥時，VIP顯示出引起峰呼氣流速的增高，并保護(hù)以避免組胺-誘導(dǎo)的支氣管舒張。[Morice和Sever,肽(peptides)7:279-280(1986);Morice等，TheLancet,II1225-1227(1983)]。然而，通過該靜脈內(nèi)灌輸VIP觀察到的肺部作用伴隨著心血管的副作用，最顯著地，血壓過低和心動過速，以及臉紅。當(dāng)以不引起心血管作用的靜脈內(nèi)劑量給藥時，VIP不改變特定的呼吸道電導(dǎo)率。[Palmer等，胸(Thorax)41:663-666(1986)]。將活性的缺乏解釋為是由于施用了低劑量和可能由于該化合物的快速降解。當(dāng)通過氣霧劑向人給藥時，天然VIP在保護(hù)以避免組胺-誘導(dǎo)的支氣管收縮中僅具有或多或少的效力。[AMeri等，藥理學(xué)家(Pharmacologist)25:123(1983)]。發(fā)現(xiàn)當(dāng)通過吸入對人給藥時，VIP對基線呼吸道參數(shù)沒有顯著影響，但確實具有抗組胺-誘導(dǎo)的支氣管收縮的保護(hù)作用。[Barnes禾nDbcon,美國呼吸疾病綜述(Am.Rev.Respir.Dis.),130:162-166(1984)]。報告了當(dāng)通過氣霧劑給藥時，VIP不表現(xiàn)出與支氣管舒張一起的心動過速或血壓過低作用。[Said等，在血管活性腸肽(VasoactiveIntestinalPeptide),所述]版本)中，Raven出版社(RavenPress),紐約，1928,185-191]。報告了VIP衍生物，即RO25-1553，在輕度哮喘病中，具有臨床前和臨床支氣管擴(kuò)張劑的功效。[KallstromandWaldeck,歐洲制藥學(xué)雜志(Eur.丄Pharm.)430:335-40(2001)和Linden等，胸(Thorax)58:217-21(2003)]。報告了天然VIP有效治療COPD、肺病高血壓和其他呼吸道病癥[WO03061680,WO0243746和WO2005014030]。然而，存在對新型血管活性腸肽類似物的需要，所述新型血管活性腸肽類似物具有對VPAC2受體的選擇性，同時具有比現(xiàn)存VPAC激動劑同等或更好的潛力、藥物動力學(xué)性質(zhì)和藥理學(xué)性質(zhì)。優(yōu)選地，存在對這樣的化合物的需要，所述化合物具有比先前可獲得的那些更長的活性持續(xù)時間。本發(fā)明包括式(I)的VPAC-2受體激動劑X-His-R2-Asp-Ala-R5-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-R16-Me-R18-Ala-Lvs-Lvs21-Tvr-Leu-Asn-Asp25-Leu-R27-R28-Gly-Gly-Thr-Y[X匿(SEQIDNO:2)-Yj其中，X是組氨酸N-末端氨基的氫，其可以任選地被能水解的氨基保護(hù)基團(tuán),最優(yōu)選地，被乙?；娲?，Y是蘇氨酸C-末端羧基的羥基，其可以任選地被能水解的羧基保護(hù)基團(tuán)，最優(yōu)選地，被NH2替代，下劃線標(biāo)識的殘基表示片段內(nèi)第一(Lys")和最后(Asp,氨基酸的側(cè)鏈與側(cè)鏈的共價連接，R2是Ser或Ala,R5是Thr,Ser,Asp,Gin,Pro或CaMeVal,R"是Gin,Ala，或Arg,R's是Ala,Lys或Glu，R27是Lys或Leu，除了當(dāng)R5是CaMeVal且R16是Arg時，R27必須是Lys以外，R"是Lys或Asn,或其藥用鹽。本發(fā)明的化合物是VPAC2受體的活性激動劑，并具有提高的針對人嗜中性彈性蛋白酶的穩(wěn)定性。因此，該化合物，作為具有針對人肺中存在的彈性蛋白酶作用的改良抗性的天然VIP選擇性穩(wěn)定類似物，應(yīng)該有效地治療呼吸道病癥，包括COPD。按照通常的慣例書寫本文中提及的全部肽序列，由此N-末端氨基酸位于左側(cè)，且C-末端氨基酸位于右側(cè)，除非另外注明。兩個氨基酸殘基之間的短線表示肽鍵。下劃線標(biāo)識的氨基酸片段表示該片段內(nèi)第一和最后氨基酸的側(cè)鏈與側(cè)鏈的共價鍵。典型地，其為酰胺鍵。當(dāng)氨基酸具有同分異構(gòu)形式時，代表的是氨基酸的L形式，除非另外特別指出。為了方便地描述本發(fā)明，使用了多種氨基酸的常規(guī)和非常規(guī)縮寫。這些縮寫是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的，但是為了清楚，如下列出Asp:D-天冬氨酸；Ala二A二丙氨酸；Arg二I^精氨酸；Asr^N:天冬酰胺；GlyK^甘氨酸；Gli^E二谷氨酸；Gln-(^谷氨酰胺；His^H^組氨酸；化=1=異亮氨酸；Lei^I^亮氨酸；Lys:K^賴氨酸；Met二M二甲硫氨酸；MeVal=MeV=CaMeVal;Nle-正亮氨酸；Phe二F二苯丙氨酸；Pro:P,甫氨酸；Se產(chǎn)S-絲氨酸；ThFT:蘇氨酸；1^=\￥=色氨酸；Tyr^^酪氨酸；和Va卜V^領(lǐng)氨酸。關(guān)于術(shù)語"能水解的氨基保護(hù)基團(tuán)"和"能水解的羧基保護(hù)基團(tuán)"，按照本發(fā)明能夠使用任何能夠通過水解去除的常規(guī)保護(hù)基團(tuán)。在下文中顯示所述基團(tuán)的實例。優(yōu)選的氨基保護(hù)基團(tuán)是?；涫饺缦缕渲?，《是低級烷基或鹵代低級垸基。在這些保護(hù)基團(tuán)中，其中X3是d-C3烷基或鹵代-C,-C3烷基的那些是特別優(yōu)選的。優(yōu)選的羧基保護(hù)基團(tuán)是低級垸基酯，NH2和低級烷基酰胺，其中CVC3垸基酯、NH2和C,-C3垸基酰胺是特別優(yōu)選的。也為了方便，且本領(lǐng)域技術(shù)人員容易知道地，下列縮寫或符號用于代表本發(fā)明中使用的部分、試劑等Nle:正亮氨酸；CaMeVal:Qx-甲基-L-纈氨酸；MeVal:Ca-甲基-L-纈氨酸；CH2C12:二氯甲烷；Ac:乙?；?；Ac20:乙酐；AcOH:乙酸；ACN:乙腈；DMAc:二甲基乙酰胺；DMF:二甲基甲酰胺；DIPEA:N,N-二異丙基乙胺；TFA:三氟乙酸；HOBT:N-羥基苯并三唑;DIC:N,N，-二異丙基碳二亞胺；BOP:苯并三唑-l-基氧-三-(二甲基氨基)轔-六氟磷酸鹽；HBTU:2-(lH-苯并三唑-l-基H,l,3,3-四甲基尿鐵-六氟磷酸鹽；NMP:l-甲基-2-吡咯烷酮；MALDI-TOF:矩陣輔助激光解吸附離子化-飛行時間；FAB-MS:快原子轟擊質(zhì)譜法；ES-MS:電噴質(zhì)譜法；RT:室溫o用于本文時，術(shù)語"烷基"意指支鏈或者直鏈的、環(huán)狀或無環(huán)的、飽和或不飽和的(例如，鏈烯基或炔基)的烴基，其可以是取代的或未取代。當(dāng)是環(huán)狀的時候，烷基優(yōu)選地是c3-c12,更優(yōu)選地CrC1Q,更優(yōu)選地C5-C7.當(dāng)是無環(huán)的時候，烷基優(yōu)選地是C,-d。，更優(yōu)選地，CPC6,更優(yōu)選地，甲基、乙基、丙基(正丙基或異丙基)、丁基(正丁基，異丁基或叔丁基)或戊基(包括正戊基和異戊基)，更優(yōu)選地，甲基。用于本文時，術(shù)語"低級烷基"意指支鏈或者直鏈的、環(huán)狀或無環(huán)的、飽和或不飽和的(例如，鏈烯基或炔基)烴基，其中所述環(huán)狀低級垸基是C5、Q或C7,且其中所述無環(huán)低級垸基是d、C2、C3或Q，且優(yōu)選地選自甲基、乙基、丙基(正丙基或異丙基)或丁基(正丁基，異丁基或叔丁基)。用于本文時，術(shù)語"?；?意指任意取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)的、通過羰基鍵合的芳基或雜芳基，并包括諸如乙酰基、丙酰基、苯甲?；?、3-吡啶羰基、2-嗎啉代羰基、4-羥基-丁酰基、4-氟苯甲酰基、2-萘甲酰基、2-苯乙?；?-甲氧乙?；然鶊F(tuán)。用于本文時，術(shù)語"芳基"意指取代的或未取代的碳環(huán)芳香基團(tuán)，諸如苯基或萘基，或取代的或未取代的雜芳香基團(tuán)，其包含一個或多個，優(yōu)選地一個，雜原子。垸基和芳基可以是取代的或未取代的。當(dāng)是取代的時候，通常存在1-3個取代基，優(yōu)選地l個取代基。取代可以包括含碳基團(tuán)，諸如垸基、芳基、芳烷基(例如，取代的和未取代的苯基、取代的和未取代的芐基)；鹵原子和含鹵基團(tuán)，諸如鹵代烷基(例如，三氟甲基)；含氧基團(tuán)，諸如醇(例如，羥基、羥垸基、芳基(羥基)烷基)，醚(例如，烷氧基，芳氧基，垸氧基-烷基，芳氧基垸基)，醛(例如甲醛)，酮(例如烷基羰基，烷基羰基垸基，芳基羰基，芳基烷基羰基，芳基羰基烷基)，酸(例如羧基，羧基烷基)，酸衍生物如酯(例如垸氧羰基，垸氧羰基烷基，烷基羰氧基，烷基羰氧基垸基)，酰胺(例如氨基羰基，單-或者二-垸基氨基羰基，氨基羰基垸基，單-或二-烷基氨基羰基垸基，芳基氨基羰基)，氨基甲酸酯(例如烷氧基羰基氨基，芳氧羰基氨基，氨基羰氧基，單-或二-烷基氨基羰氧基，芳基氨基羰氧基(arylminocarbonloxy))和脲(例如單-或二-烷基氨基羰基氨基或者芳基氨基羰基氨基)；含氮基團(tuán)如胺(例如氨基，單-或二-垸基氨基，氨基垸基，單-或二-烷基氨基烷基)，疊氮化物，腈(例如氰基，氰基烷基)，硝基；含硫基團(tuán)如硫醇、硫醚、亞砜和砜(例如烷硫基，烷基亞磺酰基，烷基磺?；?，垸基硫代垸基，烷基亞磺?；榛?，垸基磺酰基垸基，芳硫基，芳基亞磺酰基，芳基磺?；?，芳硫基垸基，芳基亞磺?；榛蓟酋；榛?；和含有一個或多個，優(yōu)選一個雜原子的雜環(huán)基團(tuán)。用于本文時，術(shù)語"卣素"是指氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氟、氯或溴，并且更優(yōu)選為氟或氯。"藥用鹽"指常規(guī)酸式加成鹽或堿式加成鹽，其保持式I化合物的生物有效性和性質(zhì)，并由合適的非毒性有機(jī)或無機(jī)酸或有機(jī)或無機(jī)堿形成。樣品酸式加成鹽包括源自無機(jī)酸，諸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些；和源自有機(jī)酸，諸如對甲苯磺酸、水楊酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸等的那些。樣品堿式加成鹽包括源自銨、鉀、鈉、和氫氧化季銨的那些，諸如例如，四甲基11氫氧化銨。將藥物化合物(即，藥物)化學(xué)修飾為鹽是眾所周知的技術(shù)，其用于試圖改良涉及化合物物理或化學(xué)穩(wěn)定性的性質(zhì)，例如吸濕性、流動性或溶解性。見例如，Ansel等，制藥劑量形式和藥物遞送系統(tǒng)(PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems)(第6版，1995)在第196頁和第1456-1457頁。"藥用酯"指具有羧基的常規(guī)酯化式I化合物，所述酯保持式I化合物的生物有效性和性質(zhì)，并在體內(nèi)(生物體內(nèi))分裂為相應(yīng)的活性羧酸。體內(nèi)分裂(在該情形中是水解)為相應(yīng)羧酸的酯基團(tuán)實例是其中分裂的氫被低級垸基取代的那些，所述低級烷基任選地被雜環(huán)、環(huán)烷基，等取代。取代的低級烷基酯的實例是其中的低級垸基被吡咯烷、哌啶、嗎啉、N-甲基哌嗪，等取代的那些。體內(nèi)分裂的基團(tuán)可以是例如乙基、嗎啉代乙基、和二乙基氨基乙基。連同本發(fā)明，也認(rèn)為-CONH2是酯，因為-NH2體內(nèi)分裂，并被羥基替代，從而形成相應(yīng)的羧酸。前藥設(shè)計(DesignofProdrugs),Bundgaard(版本)(Elsevier,1985)中可以獲得關(guān)于遞送藥物化合物的酯的實例和應(yīng)用的其他信息。也見，Ansel等，制藥劑量開試和藥物遞送系統(tǒng)(PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems)(第6版，1995)在第108-109頁；Krogsgaard-Larsen等,藥物設(shè)計與開發(fā)教禾斗書(TextbookofDrugDesignandDevelopment)(第2版，1996)在第152-191頁。在一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中X是組氨酸N-末端氨基的氫或其中所述氫被乙?；娲?。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中X是組氨酸N-末端氮基的氫。在一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中Y是蘇氨酸C-末端羧基的羥基或其中所述羥基被NH2替代。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中Y是蘇氨酸C-末端羧基的羥基。在一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中W是Ser。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中W是Ala。在一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中RS是Thr、Ser或CocMeVal。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中R5是Thr。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中RS是Ser。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中RS是CaMeVal。在一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中R"是Gln或Arg。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中R"是Gln。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中R"是Arg。在一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中R's是Ala。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中R"是Lys。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中R's是Glu。在一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中R^是Lys。在一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中R"是Lys。在一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中X是組氨酸N-末端氨基的氫或所述氫被乙?；娲?，Y是蘇氨酸C-末端羧基的羥基或所述羥基被NH2替代，R2是Ser或Ala,R5是Thr、Ser或CaMeVal，R"是Gln或Arg,R's是Ala、Lys或Glu,R27是Lys或Leu，除了當(dāng)R5是CaMeVal且R16是Arg時，R27必須是Lys以外,禾口R28是Lys。另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中X是組氨酸N-末端氨基的氫或所述氫被乙?；娲琘是蘇氨酸C-末端羧基的羥基或所述羥基被NH2替代，R2是Ser或Ala,R5是Thr,Ser或CaMeVal,R"是Gln或Arg,R"是Ala、Lys或Glu，R27是Lys或Leu，除了當(dāng)R5是CaMeVal且R16是Arg時，R27必須是Lys以外,和R28是Lys。另一個實施方案中，本發(fā)明提供式I的化合物，其中X是組氨酸N-末端氨基的氫或所述氫被乙酰基替代，Y是蘇氨酸C-末端羧基的羥基或所述羥基被NH2替代，R2是Ser或Ala,R5是Ser或CaMeVal,R"是Gln,R's是Ala，R"是Lys或Leu,和R28是Lys。可以通過任何已知的形成氨基酸間肽鍵的常規(guī)程序，容易地合成本發(fā)明典型的化合物。所述常規(guī)程序包括，例如任何溶液相程序，其允許氨基酸或其具有其羧基和其他受保護(hù)反應(yīng)基的殘基的游離a氨基與另一個氨基酸或其具有其氨基或其他受保護(hù)反應(yīng)基的游離伯羧基(primarycarboxygroup)之間的縮合。所述合成本發(fā)明新型化合物的常規(guī)程序包括，例如，任何固相肽合成方法。在這樣的方法中，新型化合物的合成能夠通過按照固相方法的普遍原理將理想的氨基酸殘基逐個順序引入到生長肽鏈中而進(jìn)行。所述方法公開在，例如Merrifield,美國化學(xué)界雜志(J.Amer.Chem.Soc.)85:2149-2154(1963);Barany等，肽、分析、合成和生物學(xué)(ThePeptides,Analysis,SynthesisandBiology)，巻2，Gross禾HMeienhofer,(版本)科學(xué)出版社(AcademicPress)1-284(1980)中，將其引入本文作為參考。可以手工或利用自動化裝置進(jìn)行肽合成。還可以利用微波-輔助的合成。通常肽化學(xué)合成是用合適保護(hù)基團(tuán)保護(hù)多種氨基酸部分的反應(yīng)性側(cè)鏈基團(tuán)，這將保護(hù)在該位點不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，直到最終去除保護(hù)基團(tuán)。通常還常見的是保護(hù)氨基酸或片段上的a氨基，同時該實體在羧基上反應(yīng)，隨后選擇性去除a氨基保護(hù)基團(tuán)，從而容許在該位點處發(fā)生隨后的反應(yīng)。雖然關(guān)于固相合成方法公開了具體保護(hù)基團(tuán)，但是應(yīng)該注意到，每種氨基酸能夠受到對溶液相合成中的各種氨基酸常規(guī)使用的保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)。a氨基可以受到合適保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)，所述合適保護(hù)基團(tuán)選自芳香尿烷-型保護(hù)基團(tuán)、諸如烯丙氧基羰基、芐氧基羰基(Z)和取代的芐氧基羰基,諸如，對-氯芐氧基羰基、對-硝基芐基-氧羰基、對-溴芐氧基羰基、對-聯(lián)苯-異丙基氧基羰基、9-芴基-甲氧基羰基(Fmoc)和對-甲氧基芐氧基羰基(Moz);脂肪族尿烷-型保護(hù)基團(tuán)，諸如叔-丁氧基羰基(Boc)、二異丙基甲氧基羰基、異丙基氧基羰基、和烯丙氧基羰基。在此，F(xiàn)moc對a氨基的保護(hù)是最優(yōu)選的。胍基可以受到合適保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)，所述合適保護(hù)基團(tuán)選自硝基、對-甲苯磺?；?Tos),(Z，)2，2，5,7,8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；?Pmc);4-甲氧基-2,3,6,-三甲基苯磺酰基(Mtr)。Pmc和Mtr是對精氨酸(Arg)最優(yōu)選的。s-氨基可以受到合適保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)，所述合適保護(hù)基團(tuán)選自2-氯-芐氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴-芐氧基羰基(2-Br-Z)-和Boc。Boc對(Lys)最優(yōu)選。羥基(OH)可以受到合適保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)，所述合適保護(hù)基團(tuán)選自芐基(Bzl)、2，6二氯芐基(2,6-二Cl-Bzl)、和叔-丁基(t-Bu).tBu是對(Tyr),(Ser)和(Thr)最優(yōu)選的。(3-和Y-酰胺基可以受到合適保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)，所述合適保護(hù)基團(tuán)選自4-甲基三苯甲基(Mtt)、2，4,6-三甲氧基芐基(Tmob)、4,4-二甲氧基二苯甲基(dityl)/二-(l甲氧基苯基)-甲基(Dod)和三苯甲基(Trt)。Trt是對(Asn)和(Gln)最優(yōu)選的。吲哚基團(tuán)可以受到合適保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)，所述合適保護(hù)基團(tuán)選自甲酰基(For),mesityl-2-磺?；?Mts)和Boc。Boc是對(Trp)最優(yōu)選的。(3-和Y-羧基可以受到合適保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)，所述合適保護(hù)基團(tuán)選自叔-丁基(tBu)、和2-苯基異丙基酯(2Pip)。tBu是對(Glu)最優(yōu)選的，且2Pip是對(Asp)最優(yōu)選的。咪唑基團(tuán)可以受到合適保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)，所述合適保護(hù)基團(tuán)選自芐基(Bzl)、Boc、和三苯甲基(Trt)。Trt是對(His)最優(yōu)選的。所有的溶劑,即異丙醇(iPrOH)、二氯甲烷(CH2C12)、DMF和NMP購自Fisher、JTBaker或Burdick&Jackson，并在不另外蒸餾的條件下使用。TFA購自Halocarbon,Aldrich或Fluka，并在不進(jìn)一步純化的條件下使用。DIC和DIPEA購自Fluka或Aldrich，并在不進(jìn)一步純化的條件下使用。HOBT、二甲硫(DMS)和1,2-乙二硫醇(EDT)購自Aldrich、SigmaChemicalCo.或Anaspec，并在不進(jìn)一步純化的條件下使用。受保護(hù)的氨基酸通常具有L構(gòu)型且商購自Bachem、AdvancedChemTech、CEM或Neosystem。使用前，由薄層色譜法、NMR和熔點證實這些試劑的純度。二苯甲基胺樹脂(BHA)是獲自Bachem,Anaspec或AdvancedChemtech的苯乙烯一1%二乙烯基苯的共聚物(100-200或200-400網(wǎng)孔)。這些樹脂的總氮含量通常是0.3-1.2m叫/g。在LDC設(shè)備上進(jìn)行高通量液相色譜法(HPLC)，所述LDC設(shè)備由ConstametricI和III泵、梯度主溶劑程序設(shè)計器和混合器(GradientMastersolventprogrammerandmixer)、和具有可變波長UV檢測器的光譜監(jiān)測儀III組成。利用PursuitC,8柱(4.5x50mm)，反相進(jìn)行分析HPLC。在Pursuit柱(50x250mm)上進(jìn)行制備型HPLC分離。在優(yōu)選的實施方案中，通過由Merrifield(美國化學(xué)界雜志(J.Amer.Chem.Soc.)85:2149(1963))概括描述的方法，利用固相合成法制備肽，盡管如前所述地，能夠使用本領(lǐng)域中已知的其他等價化學(xué)合成法。固相合成法通過偶聯(lián)受保護(hù)的a-氨基酸和合適樹脂，起始自肽的C-末端。這樣的起始物能夠通過酯鍵將a-氨基-保護(hù)的氨基酸附著到對-芐氧基芐基醇(Wang)樹脂上，或由Fmoc-連接體，諸如對-((R,S)-cx-(l-(9H-芴-9-基)-甲氧基甲酰胺基)-2，4-二甲氧基芐基)-苯氧基乙酸(Rink連接體)之間的酰胺鍵將(x-氨基-保護(hù)的氨基酸附著到二苯甲基胺(BHA)樹脂上。羥基甲基樹脂的制備在本領(lǐng)域中眾所周知。Fmoc-連接體-BHA樹脂支持體是可商購的，且通常，當(dāng)理想的合成肽在C-末端具有未取代的酰胺時使用。典型地，利用氨基酸或模仿物的Fmoc保護(hù)形式，用l-5個氨基酸等價物和適合偶聯(lián)試劑將氨基酸或模仿物偶聯(lián)在Fmoc-連接體-BHA樹脂上。偶聯(lián)后，可以在真空下清洗和干燥樹脂。將氨基酸加載到樹脂上可以由Fmoc-氨基酸樹脂等分試樣的氨基酸分析，或由UV分析確定Fmoc基團(tuán)來確定?？梢栽诙燃淄榛駾MF中，通過用乙酐和二異丙基乙基胺處理樹脂，而對任何未反應(yīng)的胺基加帽。樹脂經(jīng)歷若干重復(fù)循環(huán)，以順序加入氨基酸。在堿性條件下去除a氨基Fmoc保護(hù)基團(tuán)。為了該目的，可以使用DMF中的哌啶，哌嗪或嗎啉(20-40%v/v)。優(yōu)選地，典型使用40。/。哌啶的DMF溶液。在去除(X氨基保護(hù)基團(tuán)后，隨后保護(hù)的氨基酸以理想順序逐漸偶聯(lián)，以獲得中間產(chǎn)物，即受保護(hù)的肽-樹脂。用于在肽的固相合成中偶聯(lián)氨基酸的活化試劑是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，對所述合成合適的試劑是BOP、溴-三-吡咯烷子基-轔六氟磷酸鹽(PyBroP)、HBTU和DIC。此處優(yōu)選的是HBTU和DIC?？梢允褂糜葿arany和Merrifield(在肽(ThePeptides),巻2,Meienhofer(版本)，科學(xué)出版社(AcademicPress)，1979,第1-284頁)描述的其他活化試劑?？梢詫⒉煌噭T如HOBT、N-羥基琥珀酰亞胺(HOSu)和3，4-二氫-3-羥基-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪(HOOBT)加入到該偶聯(lián)混合物中，從而最優(yōu)化合成循環(huán)。在此優(yōu)選的是HOBT。典型的合成循^^方案如下:方案1步驟試劑時間1DMF2x30秒220%哌啶/DMFl分鐘20%哌啶/DMF15分鐘4DMF2x30秒iPrOH2x30秒6DMF3x30秒7偶聯(lián)的60分鐘-18小時8DMF2x30秒9iPrOH1x30秒10DMF1x30秒11CH2C122x30秒稱量體積為10-20ml/g樹脂的所有清洗和偶聯(lián)溶劑。偶聯(lián)反應(yīng)在合成全過程中由Kaiser茚三酮檢驗監(jiān)測，從而確定完成的程度[Kaiser等，分析生物化學(xué)(Anal.Biochem.)34:595-598(1970)]。任何不完全的偶聯(lián)反應(yīng)與新鮮配制的活化氨基酸再偶聯(lián)或如上所述通過用乙酐處理肽樹脂而被加帽。在真空中干燥完整組裝的肽-樹脂若干小時。可以利用應(yīng)用生物系統(tǒng)433A合成器(AppliedBiosystem433Asynthesizer)(FosterCity,CA)，進(jìn)行肽合成。對樹脂取樣或非樹脂取樣，1741mL反應(yīng)容器，使用FastMoc0.25mmole循環(huán)。用DMF中的2.1gNMP、2g0.45MHOBT/HBTU，和2MDIEA溶解Fmoc-氨基酸樹脂，然后將其移至反應(yīng)容器中?；綟astMoc偶聯(lián)循環(huán)由模塊"BADEIFD"代表，其中每個字母代表一個模塊。例如B代表利用20%哌啶/NMP的Fmoc去保護(hù)和相關(guān)清洗和讀數(shù)30分鐘的模塊(UV監(jiān)測或傳感性)；A代表在盒內(nèi)用0.45MHBTU/HOBt和2.0MDIEA活化氨基酸并與N2泡混合的模塊；D代表在反應(yīng)容器中NMP清洗樹脂的模塊；E代表將活化的氨基酸移至反應(yīng)容器中從而偶聯(lián)的模塊；I代表10分鐘等待時期的模塊，其中渦旋攪拌反應(yīng)容器或不攪拌反應(yīng)容器；和F代表清潔盒、偶聯(lián)約10分鐘并排空反應(yīng)容器的模塊。典型地，通過一次或多次添加模塊"I"來擴(kuò)大偶聯(lián)。例如，通過進(jìn)行程序"BADEIIADEIFD"來進(jìn)行雙偶聯(lián)。還存在其他模塊，諸如c關(guān)于二氯甲垸清洗，和"C"關(guān)于用乙酐加帽。還可以通過，例如改變不同活動的時間，諸如轉(zhuǎn)移時間來改良各個模塊，從而改變轉(zhuǎn)移的溶劑或試劑的量。以上循環(huán)典型地用于偶聯(lián)一個氨基酸。然而，為了合成四肽，重復(fù)所述循環(huán)，并將其連在一起。例如，使用BADEIIADEIFD偶聯(lián)第一氨基酸，隨后使用BADEIIADEIFD偶聯(lián)第二氨基酸，隨后使用BADEIIADEIFD偶聯(lián)第三氨基酸，隨后使用BADEIIADEIFD偶聯(lián)第四氨基酸，隨后為了最后的去保護(hù)和清洗而進(jìn)行BIDDcc?？梢岳梦⒉暮铣善?，即Liberty(CEM公司(Corporation),Matthews,NC)進(jìn)行肽合成。將該合成器程序設(shè)計為通過改良預(yù)加載的0.25mmol循環(huán)而雙偶聯(lián)和加帽。使用微波編輯器對微波功率方法進(jìn)行編程，從而在Fmoc去保護(hù)、氨基酸偶聯(lián)和用乙酐加帽過程中使用。這種類型的微波控制容許創(chuàng)建這樣的方法，即將反應(yīng)控制在一組溫度和進(jìn)行一組時間段。Liberty自動地調(diào)節(jié)遞送到反應(yīng)中的功率的量，從而將溫度保持在設(shè)置點。在循環(huán)編輯器中選擇氨基酸添加和最終去保護(hù)的默認(rèn)循環(huán)，并在形成肽時對其進(jìn)行自動的加載。利用Fmoc-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)，以0.25mmol規(guī)模進(jìn)行合成。將樹脂加入到裝有10mLDMF的30mL反應(yīng)容器中。利用DMF溶液中的20%哌啶進(jìn)行Fmoc的去保護(hù)。對于每個氨基酸偶聯(lián)，將Fmoc保護(hù)的氨基酸溶于DMF中，以制成0.2M溶液，并將其加入到反應(yīng)容器中。利用0.5MHOBT/HBTU和2MDIEA/NMP進(jìn)行所有的偶聯(lián)反應(yīng)。任何不完全的偶聯(lián)反應(yīng)與新鮮配制的活化氨基酸再偶聯(lián)或通過用DMF中25%乙酐處理肽樹脂而被加帽。利用微波，在70。C，在50瓦功率和氮起泡條件下，進(jìn)行各個去保護(hù)、偶聯(lián)和加帽反應(yīng)300秒。對于每個氨基酸偶聯(lián)，使用了下列0.25mmol偶聯(lián)循環(huán)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>為了合成在此出現(xiàn)的化合物，在流程圖1中顯示了優(yōu)選的合成程序。流程圖1Fmoc-Rink-MBHA-樹脂1)哌啶/DMF2)Fmoc-AA(P)31/DIC,'BOP或HBTUFmoc-AA(P)31-Rink-MBHA-樹脂2重復(fù)以上步驟1和2Ac-AA(P)1-M(P)2-AA(P)3-AA(P)4-AA(P)5-AA(P)6-AA(P)7-AA(P)8-AA(P)g-AA(P)10-AA(P)"-AA(P)12"AA(P)13-AA(P)14-AA(P)15-AA(P"6-AA(P)17-AA(P)1B-M(P)19-AA(P)2。-AA(P)21-AA(P)22-AA(P)23-AA(P)24-AA(P—-AA(P)26-AA<P)27-AA(P)28-AA(P)29-AA(P嚴(yán)-AA(P)"-Rink-MBHA-樹脂3"2%TFA/CH2CI22)PdCI2/Bu3SnH''.3)BOP細(xì)MAc-AA(P)1-AA(P)2-AA(P)3-AA(P)4-AA(P)5-AA(P)6-AA(P)LAA(P)8-AA(P)9-AA(P)10-AA(P)"-AA(P),乙AA(P)"-AA(P)"-AA(PP-AA(P)化-AA(P)"-AA(P)，8-AA(P)"-AA(P嚴(yán)-入A"-AA(P)22曙AA(P)23-AA(P)24-AA25-AA(P)26-AA(P)27-AA(P)28-AA(P)29-AA(P)30-AA(P)31-Rhk-MBHA-樹脂497%TFA/H20/TIPSAC-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AAg-AA10-AA11-AA12-AA13-AA"-AA15-AA16-AA17-AA18—AA19-AA20-AA21-AA22-AA23-AA24-AA25-AA26-AA27-AA28-AA29-AA30-AA31-NH25用哌啶/DMF處理Fmoc-Rink-MBHA樹脂1，隨后在試劑諸如DIC、BOP或HBTU存在下與Fmoc-AA(P)31偶聯(lián)，生成Fmoc-AA(Pf-Rink-樹脂2，其中AA31代表第31個氨基酸殘基，且P代表合適的保護(hù)基團(tuán)。通過在每次循環(huán)時加入合適的保護(hù)氨基酸重復(fù)30次步驟1和2的循環(huán)，生成肽樹脂3。通過用CH2Cl2中2。/。TFA和PdCl2/nBu3SnH分別處理，去除AA25和AA21上的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)。通過利用DMF中的BOP和NMM的處理，環(huán)化AA"和AA"的側(cè)鏈胺和羧基，從而生成4。對于每種化合物，去除封閉基團(tuán)，并且.肽在相同步驟中從樹脂中分裂出來。例如，可以用100乙二硫醇、100nl二甲硫、300inL茴香醚、和9.5mLTFA/克樹脂，在RT處理肽-樹脂180分鐘?；騻溥x地，可以用1.0mL三異丙基硅烷和9.5mLTFA/克樹脂，在RT處理肽-樹脂180分鐘。濾掉樹脂，在冷乙醚中沉淀濾出液。離心沉淀，并倒出醚層。用2或3倍體積的Et20清洗剩余物，并再-離心。在真空下干燥粗產(chǎn)物5。通過反相PursuitC-l8柱(50x250mm.300A,10)im)上的高效液相色譜法(HPLC)，在ShimadzuLC-8A系統(tǒng)上進(jìn)行粗肽的純化。將肽溶解在最小體積的水和乙腈中，并將其注射到柱中。梯度稀釋通常從2%B緩沖液開始，處于2%-70%B/70分鐘(緩沖液A:0.1%TFA/H20，緩沖液B:0.1%TFA/CH3CN)，流速50ml/分鐘。在220/280nm處進(jìn)行UV檢測。分離含有產(chǎn)物的組分，并利用處于流速2.5ml/分鐘，梯度(2-70%)/10分鐘的反相PursuitC-18柱(4.6x50mm)，在ShimadzuLC-10AT分析系統(tǒng)上鑒定它們的純度。[緩沖液A:0.1%TFA/H20，緩沖液B:0.1%TFA/CH3CN)]。收集并凍干被鑒定具有足夠純度的級分。如上所述，在反相柱上，通過分析HPLC檢查最終產(chǎn)物的純度。還對所有最終產(chǎn)物進(jìn)行快速原子轟擊質(zhì)譜(FAB-MS)或電噴質(zhì)譜(ES-MS)。在實施例中，所有產(chǎn)物適度有限地生成預(yù)期的起源M+H離子。本發(fā)明中所述的VIP類似物是如實施例25中所述的VPAC2受體激動劑。按照實施例25中的彈性蛋白酶穩(wěn)定性實驗，該化合物具有針對人嗜中性彈性蛋白酶的增強(qiáng)的穩(wěn)定性。因此，這些VPAC2受體激動劑的施用應(yīng)該對于治療呼吸道病癥，諸如COPD是有效的?？梢砸运幱名}的形式提供本發(fā)明的化合物。優(yōu)選的鹽的實例是利用藥用有機(jī)酸，例如乙酸、乳酸、馬來酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸、水楊酸、甲磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、或雙羥萘酸，以及聚合酸，諸如丹寧酸或羧甲基纖維素形成的那些，和與無機(jī)酸，諸如氫鹵酸(例如，鹽酸)、硫酸、或磷酸等形成的鹽。能夠使用技術(shù)人員己知的任何獲得藥用鹽的程序。在實施本發(fā)明的方法中，可以將有效量的任何一種本發(fā)明肽，或者本發(fā)明任何肽的組合，或者其藥用鹽，通過本領(lǐng)域已知的常用和可接受的方法中的任何一種，單獨或組合地給藥。因此，可以將化合物或組合物經(jīng)口給藥(例如，口腔)，舌下給藥，腸胃外給藥(例如，肌肉內(nèi)，靜脈內(nèi)或者皮下)，直腸給藥(例如，由栓劑或洗劑)，透皮給藥(例如，皮膚電穿孔)或者通過吸入給藥(例如，通過氣霧劑)，并且以固體、液體或氣態(tài)劑型的形式，包括片劑和混懸劑?？梢栽谶B續(xù)治療下，以單一單位劑型，或以隨意的單一劑量治療，進(jìn)行給藥。治療組合物還可以為油乳劑或分散劑的形式，其結(jié)合有親脂性鹽如雙羥萘酸，或者為可生物降解的持續(xù)釋放組合物的形式，其用于皮下或者肌肉內(nèi)給藥。因此，當(dāng)減輕癥狀是明確必需的或或許緊急的時候，實施本發(fā)明的方法。備選地，本發(fā)明的方法有效地作為連續(xù)的或預(yù)防的治療來實施。用于制備其組合物的有用藥物載體可以是固體、液體或氣體；因此，組合物可以釆用的形式有片劑，丸劑，膠囊劑，栓劑，散劑，腸包衣的或者其它保護(hù)制劑(例如結(jié)合在離子交換樹脂上或者包封在脂-蛋白囊中)，持續(xù)釋放制劑，溶液，混懸劑，酏劑，氣霧劑等。載體可以選自各種油，包括石油、動物、植物或合成來源的那些油，例如，花生油，豆油，礦物油，芝麻油等。水，鹽水，葡萄糖水溶液和二元醇是優(yōu)選的液體載體，特別是(當(dāng)與血液等滲時)用于可注射的溶液。例如，用于靜脈內(nèi)給藥的制劑包含一種或多種活性成分的無菌水溶液，其是通過將一種或多種固體活性成分溶解于水中以制備水溶液，并且使該溶液無菌而制備的。適宜的藥物賦形劑包括淀粉、纖維素、滑石、葡萄糖、乳糖、明膠、麥芽、大米、面粉、白堊、二氧化硅、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、干脫脂乳、甘油、丙二醇、水、乙醇等。組合物可以加入常規(guī)的藥物添加劑如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤或乳化劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽、緩沖劑等。適宜的藥物載體和它們的制劑描述于雷明頓制藥科學(xué)(Remington'sPharmaceuticalSciences),E.W.Martin著。在任何情況下，這樣的組合物將含有與適宜的載體在一起的有效量的活性化合物，以制備用于給受試者適宜給藥的適宜劑型。本發(fā)明化合物的劑量取決于許多因素，例如給藥方式、受試者的年齡和體重以及待治療的患者的癥狀，并且最終將由主治醫(yī)生或獸醫(yī)確定?；钚曰衔镉芍髦蔚尼t(yī)生或獸醫(yī)確定的這樣的量在本文中并且在權(quán)利要求書中稱作"有效量"。例如，吸入給藥的劑量典型地在約0.5-約100^g/kg體重的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，以約lpg/kg-約50pg/kg/天的劑量速度施用本發(fā)明的化合物。代表性的遞送方案包括口服、腸胃外(包括皮下、肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi))、直腸、口腔(包括舌下)、透皮、肺部和鼻內(nèi)。優(yōu)選給藥途徑是通過口腔吸入進(jìn)行肺部給藥。肺部給藥的方法可以包括氣霧化本發(fā)明的環(huán)狀肽水溶液或吸入微粉化的千燥粉末劑。氣霧化的組合物可以包括包裝在反向膠束或脂質(zhì)體中(reversemicelles)的化合物。制備微粉化的適當(dāng)受控顆粒尺寸的粉末，以有效提供肺泡遞送是眾所周知。將指定劑量的所述制劑直接遞送到肺中的吸入器(定量劑量吸入器或"MDI")是本領(lǐng)域中眾所周知的。因此，本發(fā)明還包括含有所述激動劑的藥物組合物，和所述激動劑治療肺部疾病包括COPD的應(yīng)用。在--個實施方案中，本發(fā)明提供用于吸入給藥的溶液或微粉化干燥粉末形式的藥物組合物，其包括式I的化合物和至少一種藥用載體或賦形劑，其中所述化合物以肺部遞送所述組合物的藥理學(xué)有效濃度存在。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供用于吸入給藥的溶液或微粉化干燥粉末形式的藥物組合物，其包括式I的化合物和至少一種藥用載體或賦形劑，其中所述化合物的濃度足以在單次吸入劑量中遞送約1叫/kg-約50嗎/kg的所述化合物。在一個實施方案中，本發(fā)明提供用于治療肺部阻塞性病癥，例如COPD的方法，該方法包括通過吸入對例如患有所述病癥的人施用有效量，例如約1)ig/kg/天-約50)ig/kg/天的用于吸入給藥的溶液或微粉化干燥粉末形式的藥物組合物，所述藥物組合物包括式I的化合物和至少一種藥用載體或賦形劑，其中所述化合物以肺部遞送所述組合物的藥理學(xué)有效濃度存在?，F(xiàn)將在下列實施例中進(jìn)一步描述本發(fā)明，這些實施例僅意欲作為舉例說明，而非限制本發(fā)明的范圍。實施例實施例1:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Thr-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lvs-Lys-Tvr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH2[Ac-(SEQIDNO:3)-NH2]，即式I的混合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是Thr，R16是Gin,R18是Ala，R27是Lys且R28是Lys在應(yīng)用生物系統(tǒng)433A或微波肽合成器上，利用Fmoc化學(xué)合成上述肽。將合成器程序設(shè)計為了利用以上方案1或2中所述的模塊進(jìn)行雙偶聯(lián)。利用Fmoc-Rink連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)，以0.25mmol規(guī)模進(jìn)行合成。在合成結(jié)束時，將樹脂移至搖動器上的反應(yīng)容器中。過濾并用CH2C12清洗DMF中的肽樹脂。用CH2C12中2%TFA處理樹脂5次，每次3分鐘。立即用5%DIPEA/CH2C12處理樹脂2次，并用CH2C12和DMF清洗。將肽樹脂混懸于裝在搖動器容器中的DMF中，所述搖動器容器是用橡膠隔片牢固固定的。向其中加入60mgPdCl2(Ph3P)2、150)ul嗎啉和300|li1AcOH。用Ar凈化該容器。然后通過注射器加入nBu3SnH。搖動黑色溶液30-45分鐘，用DMF進(jìn)行清洗，并重復(fù)。在第二次Pd處理后，用DMF、2xiPrOH、DMF、5%DIPEA/DMF和DMF清洗該樹脂。在DMF中，通過利用BOP和NMN處理過夜來環(huán)化肽樹脂。用DMF和CH2C12清洗樹脂，并然后在真空下進(jìn)行干燥。在RT下，使用13.5mL97%TFA/3%H20和1.5mL三異丙基硅烷180分鐘，使肽從樹脂中分裂出來。將去保護(hù)溶液加入到100mL冷Et2O中，并用1mLTFA和30mL冷Et20清洗，從而沉淀肽。在2個50mL聚丙烯管中離心所述肽。將來自各個管的沉淀組合到單一管中，用冷Et20清洗3次，并在家用真空下的干燥器中干燥。通過在PursuitC18-柱(250x50mm,10顆粒尺寸)上的制備型HPLC純化粗材料，并利用90分鐘內(nèi)，流速60mL/分鐘的線性梯度2-70。/。B(緩沖液A:0.1%TFA/H20;緩沖液B:0.1%TFA/CH3CN)對其進(jìn)行洗脫，并在220/280nm檢測。收集級分并通過分析型HPLC進(jìn)行檢測。合并和凍干含有純產(chǎn)物的級分，以生成106mg(9.7%)白色無定形粉末。Cl59H256N46047的(ES)十-LCMSm/e計算值為3565.05，實際值為3563.7。實施例2:審"備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lvs-Lvs-Tvr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-麗[Ac-(SEQIDNO:4)-NH2]，即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser，R5是Ser,R16是Gin,R18是Ala,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成28mg(2.5%)白色無定形粉末。C158H254N4604J^ES)+-LCMSm/e計算值為3551.02，實際值為3548.7。實施例3:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Asp-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NTHb[Ac-(SEQIDNO:5)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是Asp,R16是Gin,R18是Ala,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成9.2mg(1%)白色無定形粉末。C159H254N46048的(ES)十-LCMSm/e計算值為3579.03，實際值為3577.8。實施例4:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Gin-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle25-Ala-Ala-Lvs-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lvs-Lys-Gly-Glv-Thr-NH[Ac一(SEQIDNO:6)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是Gin,R16是Gin,R18是Ala,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成9.8mg(1%)白色無定形粉末。C160H257N47O47的(￡8)+丄0^8m/e計算值為3592.07，實際值為3589.5。實施例5:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Pro-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lvs-Lys-Tvr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH[Ac-(SEQIDNO:7)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是Pro,R16是Gin,R18是Ala,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成15.2mg(1.4%)白色無定形粉末。016(^256>446046的(ES)十-LCMSm/e計算值為3561.06，實際值為3560.0。實施例6:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-MeVal-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH.[Ac-(SEQIDNO:8)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是MeVal,R16是Gln，R18是Ala,R27是Lys且R28是Lys<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg:0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成40mg(3.6%)白色無定形粉末。C161H260N46O46的(ES)十-LCMSm/e計算值為3577.10，實際值為3576.8。實施例7:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser陽Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Glu-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH.[Ac-(SEQIDNO:9)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2，R2是Ser,R5是Ser,R16是Gln，R18是Glu,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成126mg(11.4%)白色無定形粉末。C腦H256N46049的@8)+丄0^8m/e計算值為3609.06，實際值為3609.2。實施例8:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lvs-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Leu-Lys-Gly-Gly-Thr-NH.[Ac-(SEQIDNO:10)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2，R2是Ser,R5是Ser,R16是Gin,R18是Ala,R27是Leu且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成77mg(7.3%)白色無定形粉末。Cl58H253N45047的(ES)屮-LCMSm/e計算值為3536.00，實際值為3534.95。實施例9:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Lvs-Ala-Lvs-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lvs-Gly-Gly-Thr-NH[Ac-(SEQIDNO:ll)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser，R5是Ser,R16是Gin,R18是Lys，R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成79mg(7.5%)白色無定形粉末。C161H261N47047的(ES)十-LCMSm/e計算值為3608.11，實際值為3607.6。實施例10:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Ala-Nle-Glu-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH.[Ac-(SEQIDNO:12)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser，R5是Ser,R16是Ala,R18是Glu，R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成65mg(6%)白色無定形粉末。對Cl58H253N45048的(ES)+丄CMSm/e計算值為3552.00，實際值為3551.2。實施例11:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Leu-Asn-Gly-Gly-Thr-NH7[Ac-(SEQIDNO:13)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是Ser,R16是Gln，R18是Ala,R27是Leu且R28是Asn通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成109mg(10.6%)白色無定形粉末。(21561124^45048的(ES)十-LCMSm/e計算值為3521.93，實際值為3520.5。實施例12-:制備Ac-His-Ala-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-LYS-Lys-Tvr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-LYS-Gly-Gly-Thr-NH[Ac-(SEQIDNO:14)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ala,R5是Ser，R16是Gin,R18是Ala,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成20mg(1.8%)白色無定形粉末。C158H254N46046的@8)+丄0/[8m/e計算值為3535,02，實際值為3533.4。實施例13:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Nle-Ala-Ala-Lvs-Lys-TYr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH7[Ac-(SEQIDNO:15)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是腿2,R2是Ser,R5是Ser,R16是Arg,R18是Ala,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg:0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成60mg(5.3%)白色無定形粉末。C159H258N48046的@8)+丄0\^111/6計算值為3579.08，實際值為3577.8。實施例14:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Leu-Asn-Gly-Gly-Thr-NH.[Ac-(SEQIDNO:16)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是Ser,R16是Arg，R18是Ala,R27是Leu且R28是Asn通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成40mg(3.7%)白色無定形粉末。C,57H25,N47047的(ES)十-LCMSm/e計算值為3549.99，實際值為3549.2。實施例15:制備Ac陽His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe陽Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Nle-Glu-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH[Ac-(SEQIDN0:17)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是Ser,R16是Arg,R18是Glu,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg，0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成36mg(3.6%)白色無定形粉末。C16lH260N48O48的(ES)十-LCMSm/e計算值為3637.11，實際值為3636.4。實施例16:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Nle-Lvs-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH[Ac-(SEQIDNO:18)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是Ser,R16是Arg,R18是Lys，R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg:0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成51mg(4.4%)白色無定形粉末。C162H265N49046的(ES)十-LCMSm/e計算值為3636.17，實際值為3634.8。實施例17:制備Ac-His-Ala-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Nle-Glu-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH[Ac-(SEQIDNO:19)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ala,R5是Ser,R16是Arg,R18是Glu,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成27mg(2.7%)白色無定形粉末。C161H260N4SO』(ES)+-LCMSm/e計算值為3621.11，實際值為3620.4。實施例18:制備Ac-His-Ala-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Nle-Lvs-Ala-Lys-Lvs-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Glv-Gly-Thr-NH[Ac-(SEQIDNO:20)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ala,R5是Ser,R16是Arg，R18是Lys,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成53.5mg(4.6%)白色無定形粉末。Cl62H265N49045的(ES)十-LCMSm/e計算值為3620.17，實際值為3618.8。實施例19:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Nle-Glu-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Leu-Lys-Gly-Gly-Thr-NH.[Ac-(SEQIDNO:21)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是Ser,R16是Arg,R18是Glu,R27是Leu且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成33mg(3.3%)白色無定形粉末。C161H259N47048的(ES)十-LCMSm/e計算值為3622.10，實際值為3620.8。實施例20:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-MeVal-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-NlG-Ala—Ala-Lys—Ly^zIildLltA5IkA^2—Leu-Leu-Lys—Gly-Gly-Thr—NH2[Ac-(SEQIDNO:22)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ser,R5是MeVal,R16是Gln，R18是Ala,R27是Leu且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg:0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成55mg(5.2%)白色無定形粉末。C16lH259N45046的(ES)十-LCMSm/e計算值為3562.09，實際值為3561.09。實施例21:制備Ac-His-Ala-Asp-Ala-MeVal-Phe-Thr-GIu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH7[Ac-(SEQIDNO:23)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2，R2是Ala,R5是MeVal,R16是Gin,R18是Ala,R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg，0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成49mg(4.5%)白色無定形粉末。Cl6lH260N46O45的(ES)+-LCMSm/e計算值為3561.10，實際值為3560.0。實施例22:制備Ac-His-Ser-Asp-Ala-MeVal-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH.[Ac-(SEQIDNO:24)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2，R2是Ser,R5是MeVal,R16是Arg，R18是Ala，R27是Lys且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-Rink-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成13.8mg(1.2%)白色無定形粉末。C162H264N48045的(ES)+-LCMSm/e計算值為3605,16，實際值為3604.0。實施例23:制備Ac-His-Ala-Asp-Ala-MeVal-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Leu-Lys-Gly醫(yī)Gly-Thr-NH.[Ac-(SEQIDNO:25)-NH2],即式I的化合物，其中X是Ac，Y是NH2,R2是Ala，R5是MeVal,R16是Gin,R18是Ala,R27是Leu且R28是Lys通過按照實施例1中的程序，對Fmoc-RinJc-連接體-BHA樹脂(450mg,0.25mmol)進(jìn)行固相合成和純化，從而生成30.2mg(2.8%)白色無定形粉末。C16lH259N47045的(ES)+-LCMSm/e計算值為3546.09，實際值為3544.8。實施例24:超-TlcAMP激動劑測定表達(dá)VPAC2受體的人T-淋巴細(xì)胞系超-Tl獲自美國典型培養(yǎng)物保藏(ATCC,CRL-1942),并將其以0.2-2x106細(xì)胞/ml的密度，保持在處于37°CC02培養(yǎng)箱中的生長培養(yǎng)基中。該生長培養(yǎng)基是增補(bǔ)了25mMHEPES緩沖液禾口10%月臺牛血清(GeminiBioproducts)的RPMI1640(Invitrogen)。為了評估VPAC2激動劑化合物活性，在RT下，用生長培養(yǎng)基清洗對數(shù)生長期的細(xì)胞一次，并將其以150W生長培養(yǎng)基中4乂104細(xì)胞/孔的密度接種到96-孔板中。然后，將生長培養(yǎng)基中處于合適濃度的50pl待測試化合物加入到指定的孔中。在RT下5分鐘后，通過向每個孔中加入25pl裂解試劑1A(cAMPBiotrakEIA系統(tǒng)，Amersham生物科學(xué)(AmershamBiosciences),RPN225)，而裂解細(xì)胞。將該96-孔板在RT下伴隨著搖動保持10分鐘，并然后保存在4°C直到分析cAMP(2小時內(nèi))。利用cAMPBiotrak酶免疫測定(EIA)試劑盒，按照制造商的說明書(AmershamBiosciences,RPN225)，在100pi各種細(xì)胞溶解產(chǎn)物中確定環(huán)狀A(yù)MP水平。通過將7-濃度劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)擬合到由GraphPadPrism程序(GraphPad軟件公司(GraphPadSoftware,Inc.))提供的S性劑量-響應(yīng)等式中，來估算各種VPAC2激動劑化合物的活性(EC5o值)。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>實施例25:肽針對嗜中性彈性蛋白酶的穩(wěn)定性利用反相高壓液相色譜(RPHPLC)電噴離子化質(zhì)譜(ESIMS)確定肽類似物的蛋白水解穩(wěn)定性。用人嗜中性彈性蛋白酶培育肽類似物，并在合適的時間點，通過ESIMS確定未消化的類似物的量。一個實驗中可以包括多種肽類似物，只要它們能夠通過HPLC保留時間和/或通過分子量區(qū)別開。在全部實驗中使用Ac-HisAc-His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr-NH7作為對照并作為參考標(biāo)準(zhǔn)。同時使用多種肽類似物以及參考標(biāo)準(zhǔn)容許補(bǔ)償多個實驗間酶蛋白水解保真度的變化。使用針對各種未消化的肽獲得的整合離子電流進(jìn)行定量。為了計算半衰期，設(shè)定了第一-級動力學(xué)行為，并將所有的計算都針對參考標(biāo)準(zhǔn)的半衰期進(jìn)行規(guī)格化。在水中配制濃度為2.5mg/mL的肽儲液。除非在使用中，將全部儲液保存在-20。C。為了確定制備的儲液中的相對肽含量，對等分試樣進(jìn)行反相HPLC，并且將觀察到的UV吸光率與來自參考標(biāo)準(zhǔn)的相似等分試樣進(jìn)行比較。相應(yīng)地調(diào)節(jié)肽類似物的濃度。為了進(jìn)行蛋白水解消化，將肽溶于磷酸鹽緩沖液(PBS)中，至濃度為O.lmg/mL。將多至6種的不同肽類似物混合為一個50)iL反應(yīng)體積中。將參考標(biāo)準(zhǔn)加入所有實驗中，作為參考和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)。加入來自彈性蛋白酶儲液中的彈性蛋白酶(人嗜中性，Calbiochem,Cat#324681)，直至濃度為1-2pg/mL。選擇了不同量的酶，以補(bǔ)償肽類似物蛋白水解穩(wěn)定性的不同。先前，在水中配制濃度為1mg/mL的彈性蛋白酶儲液。將酶儲液的小等分試樣保存在-20。C，從而通過限制解凍和冷凍循環(huán)的次數(shù)，更好地維持酶活性。在HPLC系統(tǒng)(Agilent1100系列)的自動取樣器中的自動取樣器管中，在環(huán)境溫度下，進(jìn)行消化。關(guān)于時間段，以70分鐘的間隔，向反相HPLC柱(Phenomenex,LunaC18,3|i，IOOA,150x2.00mm)上注射5iiL等分試樣。關(guān)于起始時間點，在即將添加蛋白水解酶之前注射等分試樣。由一個實驗?zāi)軌蛴涗浛偣?個時間點，包括起始點。在具有5%-30%有機(jī)相的50分鐘梯度的反相柱上分離肽。水相是水中的0.05。/。(v/v)三氟乙酸，且有機(jī)相是乙腈中的0.045%(v/v)三氟乙酸。分別在214和280nm處記錄吸光率。將全部柱流出物引入到電噴離子化質(zhì)譜(ABI4000QTrapLC/MS/MS系統(tǒng))的渦輪V源中。在包括全部非降解的肽類似物的三重帶電離子的質(zhì)量范圍內(nèi)，以Q3MS模式獲得質(zhì)譜。進(jìn)行了努力，以確保肽類似物能夠通過色譜保留時間或通過分子量的不同而被明顯區(qū)分開。由整合的總離子電流計算各種未消化的肽類似物的相對量。選擇了2.5Da的窗口，并使用制造商的軟件整合各個離子電流。通過設(shè)定第一-級動力學(xué)行為計算各種肽類似物的總半衰期，并相對參考標(biāo)準(zhǔn)的半衰期進(jìn)行規(guī)格化。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>實施例26:化合物對雄性C57BL/6小鼠中由LPS-誘導(dǎo)的肺炎的作用氣^^/L尸S:在氣霧劑暴露于脂多糖(LPS,在無菌鹽水中500嗎/ml)之前，用媒介物或藥物預(yù)處理C57bl/6小鼠15-30分鐘。所述氣霧劑由Pari超尖端噴射噴霧器(PariUltranebjetnebulizer)生成，其出口與容納動物的小透明塑料室[HxWxD,10.7x25.7x11cm(4x10x4.5英寸)]相連。24小時后進(jìn)行支氣管小泡灌洗(BAL)，以確定細(xì)胞炎性的強(qiáng)度。如下所述，進(jìn)行BAL程序。潷/^^H尸S:在鼻內(nèi)施用脂多糖(在無菌鹽水中0.05-0.3mg/kg;總體積5025nl/鼻孔)之前，用媒介物或藥物預(yù)處理小鼠。通過利用25-50pieppendorff吸移管向鼻孔遞送劑量溶液小滴，進(jìn)行鼻內(nèi)給藥。在如上所述LPS攻擊后3-24小時進(jìn)行BAL，從而確定細(xì)胞炎性的強(qiáng)度。支氣,V、泡蘑應(yīng)LPS暴露后24小時，用戊巴比妥(80-100mg/kg,i.p.)、氯胺酮/xyzaline(80-120mg/kg/2-4mg/kg,i.p.)或尿垸(1.5-2.4g/kg，i.p.)麻醉動物；并且通過小中線頸部切口(15-20mm)，暴露氣管，并插入20-口徑管狀接合器。用2x1ml不含Ca十+和Mg十+的無菌Hanks平衡鹽溶液(HBSS)灌洗肺。30秒后，針對每只動物，通過輕輕吸取，收集灌洗液，并匯聚。然后在2000rpm，5°C，離心樣品10分鐘。吸出上清液，并且在通過加入5mlHBSS恢復(fù)對剩余細(xì)胞的同滲容摩之前，使用0.5ml蒸餾水30秒，以將紅血細(xì)胞從產(chǎn)生的沉淀中溶解出來。在2000rpm，5°C，再離心樣品10分鐘，并吸出上清液。將生成的沉淀重新混懸在lmlHBSS中。通過利用血細(xì)胞計或coulter計數(shù)器從細(xì)胞混懸液等分試樣，通過錐蟲藍(lán)(SigmaChemical,St.Louis,MO)排除，確定總細(xì)胞數(shù)量。對于不同的細(xì)胞i十?dāng)?shù)，在Cytospin(5分鐘,1300rpm;ShandonSouthernInstruments,Sewickley,PA)中離心細(xì)胞混懸液的等分試樣，并用改良的瑞氏染液(Hema3染液試劑盒,FisherScientific)固定和染色切片。在光學(xué)顯微鏡下，使用標(biāo)準(zhǔn)的形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)分類至少300個細(xì)胞。針對嗜中性粒細(xì)胞和總細(xì)胞，表3中的數(shù)據(jù)表述為BAL細(xì)胞X104/動物，或LPS誘導(dǎo)的BAL流體嗜中性響應(yīng)的百分比抑制。,表3<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>實施例27:化合物對小鼠中由乙酰甲膽堿-誘導(dǎo)的支氣管痙攣的作用利用來自BUXCO電子公司(BUXCOElectronics,Inc.)(Troy,NY)的全身體積描記器(WBP)，測量有意識、自由移動小鼠的呼吸功能。WBP室容許在測量呼吸功能時，動物在該室內(nèi)自由移動。同時使用8個室，這樣同時可以測量8只小鼠。每個WBP室與偏流量調(diào)節(jié)器相連，從而在測試過程中提供流暢恒定的新鮮氣流。安裝在每個室上的傳感器檢測動物呼吸時的壓力變化。由MAXII張力計前置放大器放大壓力信號，并通過由所述系統(tǒng)(BUXCO電子公司(BUXCOElectronics,Inc.))提供的BiosystemXA軟件對其進(jìn)行分析。測試前，通過經(jīng)由注射端口注射正好lml空氣，校準(zhǔn)每個室中的壓力變化，并相應(yīng)地調(diào)節(jié)計算機(jī)信號。將小鼠置于WBP室中，并在測試前容許其適應(yīng)10分鐘。測試是通過容許動物自由移動和呼吸15分鐘并同時測量下列參數(shù)進(jìn)行的潮汐體積(ml)、呼吸速率(呼吸/分鐘)、分鐘體積(潮汐體積乘以呼吸速率，ml/min)、吸氣時間(秒)、呼氣時間(秒)、峰吸氣流(ml/秒)、和峰呼氣流(ml/秒)。在軟件數(shù)據(jù)庫中捕獲關(guān)于以上列出的每個參數(shù)的原始數(shù)據(jù)，并每分鐘平均一次，從而給出總共15個數(shù)據(jù)點/參數(shù)。報告了這15個數(shù)據(jù)點的平均值。積聚體積(ml)是累計值(非平均的)，并且代表15分鐘測試時間段全部潮汐體積之和。定制方案，以包括在致痙藥攻擊之前，之中，和之后的測量，從而確定Penh。通過以約5-10分鐘間隔給藥霧化氣霧劑(30-60秒暴露)獲得具體致痙藥(即，乙酰甲膽堿(MCh)、乙酰膽堿、等)的劑量-響應(yīng)作用。在致痙藥攻擊前，如上所述，通過氣霧劑，用媒介物(H2()中的2%DMSO)或溶于4ml媒介物的藥物處理小鼠(balb/c)20分鐘。在攻擊后5、30和60分鐘時確定Penh。將數(shù)據(jù)表示為相對于媒介物的Penh百分比抑制。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>權(quán)利要求1.式I的環(huán)狀血管活性腸肽類似物X-His-R2-Asp-Ala-R5-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-R16-Nle-R18-Ala-Lys-<u>Lys</u><u>21</u><u>-Tyr-Leu-Asn-Asp</u><u>25</u>-Leu-R27-R28-Gly-Gly-Thr-Y[X-(SEQIDNO2)-Y]其中X是組氨酸N-末端氨基的氫，其可以任選地被能水解的氨基保護(hù)基團(tuán)，最優(yōu)選地，被乙?；娲?，Y是蘇氨酸C-末端羧基的羥基，其可以任選地被能水解的羧基保護(hù)基團(tuán)，最優(yōu)選地，被NH2替代，下劃線標(biāo)識的殘基表示片段內(nèi)第一(Lys21)和最后(Asp25)氨基酸的側(cè)鏈與側(cè)鏈共價連接，R2是Ser或Ala，R5是Thr，Ser，Asp，Gln，Pro或CαMeVal，R16是Gln，Ala，或Arg，R18是Ala，Lys或Glu，R27是Lys或Leu，除了當(dāng)R5是CαMeVal且R16是Arg時，R27必須是Lys以外，R28是Lys或Asn，或其藥用鹽。2.權(quán)利要求1的化合物，其中R5是Ser或CaMeVal。3.權(quán)利要求2的化合物，其中R"是Lys。4.選自由下列各項組成的組中之一的化合物His-Ser匈-Ala-Thr-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lvs-Tvr-Leu-Asn-Asp-Leu:Lys-Lys-Glv-Glv-Thr(SEQIDNO:3)，His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly-Gly-Thr(SEQIDNQ:4),His-Ser-Asp-Ala-MeVal-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lvs-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asi-Leu-Lys-Lys-Glv-Glv-Thr(SEQIDNO:8)，His-Ser-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Lys-Ala-Lys-Lvs-Tvr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lvs-Gly-Glv-Thr(SEQIDNO:11),His-Ala-Asp-Ala-Ser-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Nle-Glu-Ala-Lys-Lvs-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-Lys-Gly匿Gly-Ttir(SEQIDNO:19),His-Ala-Asp-Ala-MeVal-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr-Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Asp-Leu-Lys-T.ys-Gly-Gly-TVir(SEQIDNO:23),禾卩His-Ala-Asp-AIa-MeVal-Phe-Thr-Glu-Asn-Tyr畫Thr-Lys-Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Ala-Lys-Lys-TvT-Leu-Asn-Asp-Leu-Leu.-T,y.s-Gly-niy-Tlir(SEQIDNO:25)，5.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物是X-(SEQIDNO:8)-Y。6.藥物組合物，包括權(quán)利要求1的化合物和至少一種藥用載體或賦形劑。7.治療肺部阻塞性病癥的方法，包括通過吸入有效量的組合物對患有所述病癥的人給藥，所述組合物包括權(quán)利要求1的化合物和至少一種藥用載體或賦形劑。8.權(quán)利要求l的化合物在制備用于治療肺部阻塞性病癥的藥物中的應(yīng)用。9.制備權(quán)利要求1的化合物的方法。10.以上所述的發(fā)明。全文摘要例如，通過吸入給藥式[X-(SEQIDNO2)-Y]的VPAC-2受體激動劑而治療肺部阻塞性病癥，例如，COPD。文檔編號C07K14/435GK101484468SQ200780025494公開日2009年7月15日申請日期2007年6月26日優(yōu)先權(quán)日2006年7月6日發(fā)明者戴維·羅伯特·博林,漢斯彼得·米歇爾,瓦吉哈·卡恩申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司