專利名稱：：苯氧基吡啶衍生物的鹽和其結(jié)晶及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種具有肝細(xì)胞生長因子受體(Hepatocytegrowthfactorreceptor;以下簡稱為"HGFR")抑制作用、作為抗腫瘤劑、癌轉(zhuǎn)移抑制劑有用的苯氧基吡啶衍生物的鹽或其結(jié)晶及它們的制備方法。具體而言，本發(fā)明涉及N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌噪-1-基)哌咬-1-基]羰基}氨基)p比咬-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺(下式(1);以下稱為"化合物1")的酸加成鹽或其結(jié)晶及N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁垸-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺(下式(2);以下稱為"化合物2")的鹽或其結(jié)晶及它們的制備方法。
背景技術(shù)：
：已有報道指出在胰腺癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、腎癌、腦腫瘤、卵巢癌等各種腫瘤中HGFR過量表達(dá)(非專利文獻(xiàn)l)。一般認(rèn)為上述腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的HGFR通常情況下或被肝細(xì)胞生長因子(Hepatocytegrowthfactor;以下簡稱"HGF，，)刺激，在細(xì)胞內(nèi)區(qū)域引起酪氨酸激酶自身磷酸化，因此與癌惡化(異常增殖、浸潤或轉(zhuǎn)移功能亢進(jìn))有關(guān)。另外，有報道指出HGFR在血管內(nèi)皮細(xì)胞也表達(dá)，HGF刺激HGFR,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及游走，因此與腫瘤血管新生有關(guān)(非專利文獻(xiàn)2)。進(jìn)而，有報道指出作為HGF拮抗肽的NK4通過阻斷HGF-HGFR信號，抑制癌細(xì)胞的浸潤，阻礙腫瘤血管新生(非專利文獻(xiàn)3、4)。所以，人們期待具有HGFR抑制作用的化合物作為抗胂瘤劑、血管新生抑制劑或癌轉(zhuǎn)移抑制劑有用。然而，專利文獻(xiàn)1中已公開了具有HGFR抑制作用的苯氧基吡啶衍生物及其制備方法，但是，未公開或暗示化合物1及化合物2,以及本發(fā)明涉及的化合物1及化合物2的鹽或其結(jié)晶及它們的制備方法。專利文獻(xiàn)l:國際公開第2005/082855號說明書非專利文獻(xiàn)1:OncologyReports,5，1013-1024(1998)非專利文獻(xiàn)2:AdvancesinCancerResearch,67,257-279(1995)非專利文獻(xiàn)3:BritishJournalofCancer,84,864-873(2001)非專利文獻(xiàn)4:CancerSci.,94,321-327(2003)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種具有HGFR抑制作用、作為抗腫瘤劑、癌轉(zhuǎn)移抑制劑有用的、且在物性方面優(yōu)異的、作為醫(yī)藥品的有用性高的苯氧基吡啶衍生物的鹽或其結(jié)晶及它們的制備方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供<1〉一種酸加成鹽，是N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌嗪-1-基)哌咬-1-基]羰基)氨基)吡啶_4-基]氧基)苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺的酸加成鹽，該酸選自由鹽酸、氫溴酸、硫酸、富馬酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸及酒石酸組成的組；<2〉N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌噢-l-基)6哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-l，1-二曱酰胺蘋果酸鹽的結(jié)晶；<3〉如<2>所述的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中，于衍射角度(26±0.2°)17.7。、19.0。及23.5。處具有衍射峰。<4〉N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]羰基)氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺酒石酸鹽的結(jié)晶；<5〉如<4〉所述的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中，于衍射角度(26±0.2°)12.2。、17.7。及23.4°處具有衍射峰；<6〉如<4〉所述的結(jié)晶，在13C固體核》茲共振光譜中，于化學(xué)位移(士0.5ppm)175.7ppm、166.7ppm、154.9ppm及45.7ppm處具有峰；<7〉一種酸加成鹽，是N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺的酸加成鹽，該酸選自由鹽酸、氫溴酸、硫酸、曱磺酸、乙磺酸、苯磺酸及4-曱基苯磺酸組成的組；<8>—種酸加成鹽的結(jié)晶，是N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷_1-基)羰基]氨基}吡啶_4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺的酸加成鹽的結(jié)晶，該酸選自鹽酸、氫溴酸、碌u酸、乙》黃酸及苯石黃酸組成的組；<9〉N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺曱磺酸鹽的結(jié)晶；<10〉如<9>所述的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中，于衍射角度(26±0.2°)17.7°、20.4°及21.7°處具有書亍射峰；<11〉N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺4-曱基苯磺酸鹽的結(jié)晶；7<12〉如<11〉所述的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中，于衍射角度(26±0.2°)7.2。、17.3。及23.6。處具有衍射峰；<13〉N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-甲基哌溱_1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺蘋果酸鹽的結(jié)晶的制備方法，其特征在于，將N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌。秦-1-基)哌口定-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,l-二曱酰胺、選自酮類及醇類中的溶劑及蘋果酸混合，形成溶液后，使結(jié)晶析出；〈14〉一種N—(2-氟-4-{[2—({[4-(4-甲基p底。秦一1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺酒石酸鹽的結(jié)晶的制備方法，其特征在于，將N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌。秦-1-基)哌咬-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺、選自酮類及醇類中的溶劑、水及酒石酸混合，形成溶液后，使結(jié)晶析出；〈15〉一種N—(2—氟—4—{[2—({[4-(4-曱基p底。秦一1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺酒石酸鹽的結(jié)晶的制備方法，其特征在于，將N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌。秦-1-基)哌咬-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，l-二曱酰胺、水及酒石酸混合，形成溶液后，加入選自酮類及醇類中的溶劑，使結(jié)晶析出；〈16〉一種N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺酸加成鹽的結(jié)晶的制備方法，其特征在于，將N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，l-二甲酰胺、選自酮類及醇類中的溶劑及選自由鹽酸、氫溴酸、硫酸、曱磺酸、乙磺酸、苯磺酸及4-曱基苯磺酸組成的組中的酸混合，形成溶液后，使結(jié)晶析出；<17〉一種藥物組合物，所述藥物組合物含有<2>至<6〉中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶；<18〉一種抗腫瘤劑，所述抗腫瘤劑含有<2〉至<6〉中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶；<19〉一種癌轉(zhuǎn)移抑制劑，所述癌轉(zhuǎn)移抑制劑含有<2〉至<6>中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶；<20〉一種藥物組合物，所述藥物組合物含有<8〉至<12>中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶；〈21〉一種抗腫瘤劑，所述抗腫瘤劑含有<8>至<12>中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶；<22〉一種癌轉(zhuǎn)移抑制劑，所述癌轉(zhuǎn)移抑制劑含有<8>至<12〉中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶；<23〉一種預(yù)防或治療癌癥的方法，所述方法給與患者藥理學(xué)有效量的<2〉至<6〉中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶；<24>—種<2〉至<6>中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶的應(yīng)用，用于制備癌癥的預(yù)防或治療劑；<25>—種預(yù)防或治療癌癥的方法，所述方法給與患者藥理學(xué)有效量的<8〉至<12>中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶；<26〉一種<8〉至<12〉中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶的應(yīng)用，用于制備癌癥的預(yù)防或治療劑。本發(fā)明涉及的苯氧基吡啶衍生物的鹽或其結(jié)晶在物性方面(溶解性、穩(wěn)定性等)具有優(yōu)異的性質(zhì)，作為對胰腺癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、腎癌、腦腫瘤及卵巢癌等各種腫瘤的抗腫瘤劑、血管新生抑制劑或癌轉(zhuǎn)移抑制劑有用。圖1圖1表示實(shí)施例1-7(方法1)中所得的化合物1的蘋果酸鹽的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖案。圖2圖2表示實(shí)施例1-8(方法1)中所得的化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖案。圖3圖3表示實(shí)施例2-1中所得的化合物2的鹽酸鹽的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖案。圖4圖4表示實(shí)施例2-2中所得的化合物2的氫溴酸鹽的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖案。圖5圖5表示實(shí)施例2-3中所得的化合物2的1/2硫酸鹽的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖案。圖6圖6表示實(shí)施例2-4(方法1)中所得的化合物2的曱磺酸鹽的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖案。圖7圖7表示實(shí)施例2-5中所得的化合物2的乙磺酸鹽的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖案。圖8圖8表示實(shí)施例2-6中所得的化合物2的苯磺酸鹽的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖案。圖9圖9表示實(shí)施例2-7(方法1)中所得的化合物2的4-曱基苯磺酸鹽的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖案。圖10圖IO表示實(shí)施例1-7(方法2)中所得的化合物1的蘋果酸鹽的無定形物的粉末X射線衍射圖案。圖11圖11表示實(shí)施例1-8(方法5)中所得的化合物1的酒石酸鹽的無定形物的粉末X射線衍射圖案。圖12圖12表示實(shí)施例2-4(方法2)中所得的化合物2的甲磺酸鹽的無定形物的粉末X射線衍射圖案。圖13圖13表示實(shí)施例2-7(方法2)中所得的化合物2的4-曱基苯磺酸鹽的無定形物的粉末X射線衍射圖案。圖14圖14表示實(shí)施例1-8(方法4)中所得的化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶的13C固體NMR光譜。具體實(shí)施方式以下，詳細(xì)地"i兌明本發(fā)明的內(nèi)容。本發(fā)明的酸加成鹽是l)酸加成鹽，所述酸加成鹽是N-(2-氟-4-{[2-(H4-(4-甲基哌溱-1-基)哌咬-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺(化合物1)的酸加成鹽，該酸選自由鹽酸、氫溴酸、石克酸、富馬酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸及酒石酸組成的組；及2)酸加成鹽，所述酸加成鹽是N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物2)的酸加成鹽，該酸選自由鹽酸、氫溴酸、硫酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸及4-曱基苯磺酸組成的組。需要說明的是，本發(fā)明的酸加成鹽可以是無溶劑合物也可以是水合物等溶劑合物，加成的酸的分子數(shù)也沒有限定。并且，本發(fā)明的酸加成鹽中不僅含有下述本發(fā)明的結(jié)晶，而且含有化合物1的酸加成鹽的無定形物及化合物2的酸加成鹽的無定形物。本發(fā)明的結(jié)晶為l)N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-甲基哌。秦-1-基)哌啶-1-基]羰基)氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，l-二曱酰胺(化合物l;以下相同)的蘋果酸鹽的結(jié)晶、2)化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶、3)N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，l-二甲酰胺(化合物2;以下相同)的鹽酸鹽的結(jié)晶、4)化合物2的氫溴酸鹽的結(jié)晶、5)化合物2的1/2硫酸鹽的結(jié)晶、6)化合物2的曱磺酸鹽的結(jié)晶、7)化合物2的乙磺酸鹽的結(jié)晶、8)化合物2的苯磺酸鹽的結(jié)晶及9)化合物2的4-甲基苯磺酸鹽的結(jié)晶。需要說明的是，化合物1的蘋果酸鹽的結(jié)晶中含有化合物1的D-蘋果酸鹽的結(jié)晶及L-蘋果酸鹽的結(jié)晶，化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶中含有化合物1的D-酒石酸鹽的結(jié)晶及L-酒石酸鹽的結(jié)晶?；衔?的蘋果酸鹽的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中于衍射角度(2ii6±0.2。)17.7。、19.0°及23.5。處具有衍射峰，優(yōu)選于10.8。、12.3°、14.3°、17.7°、19.0°、19.7°、21.7°、22.0°、23.5°及24.7°處具有衍射峰?；衔?的酒石酸鹽的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中于衍射角度(26±0.2°)12.2。、17.7。及23.4。處具有衍射峰，優(yōu)選于10.7。、12.2°、14.3°、17.7。、19.0。、19.6°、21.4。、22.1。、23.4°及24.8°處具有衍射峰?；衔?的鹽酸鹽的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中于衍射角度(26±0.2°)7.4°、10.3°、12.0°、13.9°、15.0°、16.5°、24.7°、25.1°、25.9。及26.6。處具有衍射峰。化合物2的氫溴酸鹽的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中于衍射角度(26±0.2°)8.3°、10.4°、12.2°、14.0°、16.2°、17.7°、19.5°、20.4。、25.3。及28.0。處具有衍射峰。化合物2的1/2硫酸鹽的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中于衍射角度(26±0.2°)6.5°、6.9°、9.3°、16.0°、18.7°、19.5°、22.0°、22.9°、23.9°及26.7°處具有衍射峰?；衔?的曱磺酸鹽的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中于衍射角度(26±0.2。)17.7。、20.4°及21.7。處具有衍射峰，優(yōu)選7.9°、9.9°、13.9。、17.7°、19.1°、20.4°、21.7。、22.4°、23.3。及25.8°處具有衍射峰?；衔?的乙磺酸鹽的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中于衍射角度(26±0.2°)6.7°、10.1。、12.7°、13.7°、16.9°、18.5°、19.4°、21.5。、22,1。及23.4°處具有衍射峰?；衔?的苯磺酸鹽的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中于衍射角度(26±0.2°)7.8°、8.3°、8.8°、13.7°、17.4°、18.5°、19.7°、20.8。、24.3。及24.6。處具有衍射峰?；衔?的4-甲基苯磺酸鹽的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中于衍射角度(26±0.2°)7.2°、17.3。及23.6。處具有衍射峰，優(yōu)選7.2°、13.4°、17.3°、18.8°、19.3°、20.6°、21.1。、23.6。、24.6。及26.1°處具有衍射峰。一般而言，粉末X射線衍射中的衍射角度(26)在±0.2°范圍內(nèi)出現(xiàn)誤差，因此應(yīng)當(dāng)理解為上述衍射角度的值也包含±0.2。左右的范圍內(nèi)的數(shù)值。所以，本發(fā)明不僅包括粉末X射線衍射中峰的衍射角度完全一致的結(jié)晶，而且也包括衍射角度以±0.2。的誤差一致的結(jié)曰曰曰。化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶，在13C固體核磁共振光譜(以下，13C固體NMR光譜)測定中，于化學(xué)位移(土0.5ppm)175.7ppm、166.7ppm、154.9ppm及45.7ppm處具有峰。一般而言，13C固體NMR光譜中化學(xué)位移(ppm)產(chǎn)生一定程度的誤差，因此，不僅指13C固體NMR光譜中的峰(化學(xué)位移)完全一致的結(jié)晶，也指在通常測定條件下、或者在與說明書實(shí)質(zhì)相同的條件下進(jìn)行"C固體NMR光譜測定、具有化學(xué)位移實(shí)質(zhì)同等的峰的結(jié)晶，具體而言，理解為也包括士0.5ppm左右的范圍內(nèi)的數(shù)值。具體而言，例如，本發(fā)明中不僅包括與13C固體NMR光譜中的峰(化學(xué)位移)完全一致的結(jié)晶，也包括峰(化學(xué)位移)以士0.5ppm左右的誤差一致的結(jié)晶。[一般制備方法]以下詳細(xì)說明本發(fā)明涉及的化合物1及化合物2的鹽的結(jié)晶的制備方法。l.化合物1的蘋果酸鹽的結(jié)晶的制備方法將化合物1、溶劑及蘋果酸混合，形成溶液后，使結(jié)晶析出，由此能夠制備化合物1的蘋果酸鹽的結(jié)晶。更詳細(xì)而言，例如，在室溫下將化合物1及溶劑混合，在室溫或加熱條件下加入蘋果酸形成溶液后，將此溶液緩緩地冷卻至4。C左右室溫使結(jié)晶析出，由此能夠制備化合物1的蘋果酸鹽的結(jié)晶。需要說明的是，優(yōu)選在緩緩冷卻時攪拌溶液。作為溶劑，例如可以使用丙酮等酮類、乙醇、l-丙醇、2-丙醇等醇類，優(yōu)選乙醇。溶劑量沒有特殊的限制，優(yōu)選使用化合物1的5~30倍量。蘋果酸的量可以使用相對于化合物1為1.0當(dāng)量~1.5當(dāng)量。加熱溫度沒有特殊的限制，優(yōu)選為40°C~60°C。從加熱溫度至室溫(至4。C左右)的緩緩冷卻，可以進(jìn)行5分鐘~24小時。2.化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶的制備方法將化合物1、溶劑及酒石酸混合，形成溶液后，使結(jié)晶析出，由此能夠制備化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶。更詳細(xì)而言，例如，l)在室溫下混合化合物1及溶劑，在室溫或加熱條件下加入水及酒石酸形成溶液后，將此溶液緩緩地冷卻至4。C左右~室溫使結(jié)晶析出，由此能夠制備化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶。需要說明的是，優(yōu)選在緩緩冷卻時攪拌溶液?；蛘摺?)在室溫下混合化合物l及水，在室溫下加入酒石酸形成水溶液后，在攪拌下向該水溶液中加入溶劑使結(jié)晶析出，由此能夠制備化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶?；蛘?、3)向酒石酸水溶液中加入化合物1的溶液，在攪拌下向此溶液中加入溶劑使結(jié)晶析出，由此能夠制備化合物1的酒石酸鹽的結(jié)晶。作為溶劑，例如可以使用丙酮等酮類、乙醇、1-丙醇、2-丙醇等醇類，優(yōu)選為丙酮、乙醇。溶劑量沒有特殊的限制，優(yōu)選使用化合物1的5~30倍量。酒石酸的量，可以使用相對于化合物1為1.0當(dāng)量~1.5當(dāng)量。加熱溫度沒有特殊的限制，優(yōu)選為40°C~60°C。從加熱溫度至室溫(至4。C左右)的緩緩冷卻可以進(jìn)行5分鐘~24小時。3.化合物2的酸加成鹽的結(jié)晶的制備方法將化合物2、溶劑及酸混合，形成溶液后，使結(jié)晶析出，由此制備化合物2的酸加成鹽的結(jié)晶。更詳細(xì)而言，例如，在室溫下混合化合物2及溶劑，在室溫或加熱條件下加入選自由鹽酸、氫溴酸、硫酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸及4-甲基苯磺酸組成的組中的酸，形成溶液后，將此溶液緩緩冷卻至4。C左右~室溫使結(jié)晶析出，由此能夠制備化合物2的酸加成鹽的結(jié)晶。需要說明的是，優(yōu)選在緩緩冷卻時攪拌溶劑。作為溶劑，例如可以z使用丙酮等酮類、乙醇、l-丙醇、2-丙醇等醇類，優(yōu)選為乙醇。另外，根據(jù)情況也可以向溶劑中加入水進(jìn)行使用。溶劑量沒有特殊的限制，優(yōu)選使用化合物2的10~20倍量。酸的量可以使用相對于化合物2為1.0當(dāng)量~1.5當(dāng)量。加熱溫度沒有特殊的限制，優(yōu)選為40°C~60°C。從加熱溫度至室溫(至4。C左右)的緩緩冷卻可以進(jìn)行5分鐘~24小時本發(fā)明的結(jié)晶作為藥物使用時，通常將本發(fā)明的結(jié)晶和適當(dāng)?shù)奶砑觿┗旌?，使用制劑化得到的物質(zhì)。但并未否定前述本發(fā)明的結(jié)晶原體直接作為藥品使用。作為上述添加劑，可以舉出通常用于藥物的賦形劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、矯味矯臭劑、乳化劑、表面活性劑、助溶劑、懸浮劑、等滲劑、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、吸收促進(jìn)劑等，根據(jù)期望，也可以將上述添加劑適當(dāng)組合使用。作為上述賦形劑，例如可以舉出乳糖、白糖、葡萄糖、玉米淀#分、甘露醇、山梨醇、淀粉、a化淀粉、糊精、結(jié)晶纖維素、輕質(zhì)硅酸酐、硅酸鋁、硅酸釣、偏硅鋁酸鎂、磷酸氫4丐等；作為上述粘合劑，例如可以舉出聚乙烯醇、甲基纖維素、乙基纖維素、阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、蟲膠、羥丙基曱基纖維素、羥丙基纖維素、羧曱基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；作為上述潤滑劑，例如可以舉出硬脂酸鎂、硬脂酸4丐、富馬酸硬脂酸鈉、滑石、聚乙二醇、膠體二氧化硅等；作為上述崩解劑，例如可以舉出結(jié)晶纖維素、瓊脂、明膠、碳酸鈣、碳酸氫鈉、檸檬酸鈣、糊精、果膠、低取代羥丙基纖維素、羧曱基纖維素、羧甲基纖維素釣、交聯(lián)羧曱基纖維素鈉、羧甲基淀粉、羧曱基淀粉鈉等；作為上述著色劑，例如可以舉出三氧化二鐵、黃色三氧化二鐵、卡紅、焦糖、卩-胡蘿卜素、氧化鈦、滑石、磷酸核黃素鈉、黃色鋁沉淀色料等、允許添加到醫(yī)藥品中的著色劑；作為上述矯味矯臭劑，可以舉出可可粉、薄荷醇、芳香散、薄荷油、龍腦、桂皮末等；。作為上述乳化劑或表面活性劑，例如可以舉出硬脂酸三乙醇胺、月桂基硫酸鈉、月桂基氨基丙酸、卵磷脂、單硬脂酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯等；作為上述助溶劑，例如可以舉出聚乙二醇、丙二醇、苯曱酸芐基酯、乙醇、膽固醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉、聚山梨酸酯80、煙酰胺等；作為上述懸浮劑，除上述表面活性劑之外，例如可以舉出聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、曱基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素等親水性高分子；作為上述等滲劑，例如可以舉出葡萄糖、氯化鈉、甘露醇、山梨醇等；作為上述緩沖劑，例如可以舉出磷酸鹽、乙酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽等緩沖液；作為上述防腐劑，例如可以舉出對羥基苯曱酸甲酯、對羥基苯曱酸丙酯、氯丁醇、苯曱醇、苯乙醇、脫氫乙酸、山梨酸等；作為上述抗氧化劑，例如可以舉出亞碌u酸鹽、抗壞血酸、a-生育酚等；另外，作為上述制劑，可以舉出片劑、散劑、顆粒劑、膠嚢劑、糖漿劑、糖錠劑、吸入劑之類口服制劑；栓劑、軟膏劑、眼軟膏劑、貼劑、滴眼劑、滴鼻劑、滴耳劑、巴布劑、洗劑之類外用劑或注射劑；上述口服制劑可以適當(dāng)組合上述添加劑進(jìn)行制劑化。需要說明的是，根據(jù)需要，也可以對上述劑型的表面進(jìn)行包衣。上述外用劑可以適當(dāng)組合上述添加劑、特別是賦形劑、粘合劑、矯味矯臭劑、乳化劑、表面活性劑、助溶劑、懸浮劑、等滲劑、防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、吸收促進(jìn)劑，進(jìn)行制劑化。上述注射劑可以適當(dāng)?shù)亟M合上述添加劑、特別是乳化劑、表面活性劑、助溶劑、懸浮劑、等滲劑、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、吸收促進(jìn)劑，進(jìn)行制劑化。本發(fā)明的結(jié)晶作為藥物使用時，其使用量根據(jù)癥狀或年齡而不同，但通常情況下，為口服制劑時，每日O.lmg至10g(優(yōu)選lmg至2g)、為外用劑時每日0.01mg至10g(優(yōu)選O.lmg至2g)、為注射劑時每日0.01mg至10g(優(yōu)選O.lmg至2g),以上給藥l次使用或分2至4次使用。本發(fā)明的結(jié)晶作為抗腫瘤劑、血管新生抑制劑或癌轉(zhuǎn)移抑制劑有用。需要說明的是，本發(fā)明的結(jié)晶作為抗腫瘤劑使用時，作為腫瘤，例如可以舉出胰腺癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、腎癌、腦腫瘤或卵巢癌，特別優(yōu)選胃癌。實(shí)施例本發(fā)明涉及的化合物的鹽或其結(jié)晶，可以通過例如下述制備例、實(shí)施例所述的方法進(jìn)行制備。但，這些例子只是舉例說明，任何情況下，本發(fā)明的化合物均不限定于以下具體例。制備例中，在沒有特殊記載的情況下，作為精制用硅膠使用YMCSIL-60-400/230W。(制備例1-1)4-氯吡啶-2-曱酸乙酯氮?dú)夥障?、?00。C下將4-氯吡啶-2-甲酸(39.4g)和亞硫酰氯(64ml)的混合物加熱攪拌6小時。將反應(yīng)液冷卻至室溫。將其減壓濃縮，在曱苯中共沸。向冰浴冷卻攪拌的乙醇中每次少量地加入此殘?jiān)?。在室溫下攪拌反?yīng)液25.5小時。減壓濃縮反應(yīng)液。向殘?jiān)屑尤腼柡吞妓釟溻c水溶液，將其用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥。將干燥后的有機(jī)層減壓濃縮，得到為褐17色油狀物的標(biāo)題化合物(38.8g、83.6%)。力-NMR光諳(CDC13)5(ppm):1.46(3H，t,J=7.2Hz),4.50(2H,q,J=7.2Hz),7.49(1H,dd，J=2.0,5,2Hz),8.15(1H,d,J=2.0Hz),8.67(1H,d,J=5.2Hz).(制備例1-2)4-(3-氟-4-硝基苯氣基)吡啶-2-甲酸乙酯向4一氯他咬-2—甲酸乙酉旨(19.4g)中力口入3-氟-4-硝基苯酚(24.7g)、氯苯(7.0ml),將其在氮?dú)夥障?、?20。C下加熱攪拌4小時。將反應(yīng)液冷卻至室溫。向其中加入乙酸乙酯(400ml)、飽和碳酸鈉水溶液(400ml),將其在室溫下攪拌27小時。停止攪拌，分離水層。再向有機(jī)層中加入飽和碳酸鈉水溶液，將其在室溫下攪拌2天。停止攪拌，分離水層。將水層用乙酸乙酯(300ml)萃取。合并有機(jī)層，將其用飽和食鹽水洗滌。將有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，將其減壓濃縮。采用硅膠柱色譜法(洗脫液；庚烷乙酸乙酯=2:1~1:1乙酸乙酯)精制殘?jiān)?。濃縮目標(biāo)成分，得到為褐色油狀物的標(biāo)題化合物(12.9g、40.2%)。力-畫R光語(CDC13)5(ppm):1.45(3H，t，J=7.2Hz),4.49(2H,q,J=7.2Hz)，6.97-7.01(2H，m),7.16(1H,dd，J=2.4,5.6Hz),7.79(1H,d，J=2.4Hz),8.20(1H,m),8.76(m,d,J=5.6Hz).ESI-MS(m/z):329[M+Na]+.(制備例1-3)4-(4-芐基氧基羰基氨基_3-氟苯氧基)吡啶-2-曱酸向4-(3-氟-4-硝基苯氧基)p比，定-2-曱酸乙酯(8.56g)的乙醇(150ml)溶液中加入20%氫氧化鈀炭(l.Og),氫氣氛下在室溫下攪拌反應(yīng)液9.5小時。濾去催化劑。向?yàn)V液中加入4N鹽酸-乙酸乙酯溶液(14ml),將其濃縮。干固之前停止?jié)饪s。向其中加入水(75ml)、丙酮(150ml)、碳酸氫鈉(11.8g)。將其在冰浴冷卻下攪拌，加入千基氧基甲酰氯(6.00ml)。將反應(yīng)液在室溫下攪拌4小時。減壓濃縮反應(yīng)液。用乙酸乙酯萃取殘?jiān)⒂袡C(jī)層用飽和食鹽18水洗滌，用無水硫酸鈉干燥。將其減壓濃縮，采用硅膠柱色譜法(洗脫液；庚烷乙酸乙酯=1:1~1:2~乙酸乙酯)精制殘?jiān)?。減壓濃縮目標(biāo)成分。向所得的固體中加入己烷，使固體懸浮。靜置片刻后，用移液管除去上清液。將此殘?jiān)稍铮玫綖榈S色固體的4-(4-節(jié)基氧基羰基氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-甲酸乙酯(7.51g,65.4%)。^-NMR光語(CDC13)5(ppm):1.43(3H,m),4.45-4.52(2H，m)，5.24(2H,s),6.87-6.92(2H,m),6.99(1H,dd，J=2.4，5.6Hz)，7.35—7.45(6H，m)，7.65(1H,d,J=2.4Hz),8.19(1H,m),8.60(1H,d,J=5.6Hz).使4-(4-節(jié)基氧基羰基氨基-3-氟苯基)吡啶-2-曱酸乙酯(7.95g)溶解于乙醇(120ml),加入水(25ml)。在室溫下于攪拌條件下向其中加入氫氧化鋰(783mg),在室溫下攪拌l小時。向反應(yīng)液中加入1N鹽酸(60ml)后，減壓下濃縮。濃縮后，濾取反應(yīng)液中析出的結(jié)晶，用水洗滌。將結(jié)晶溶解于乙酸乙酯-四氫呋喃中，將其用無水硫酸鈉干燥。將干燥后的溶液減壓濃縮。使所得的結(jié)晶懸浮于己烷中，濾取此結(jié)晶。將此結(jié)晶干燥，得到為淡黃色結(jié)晶的目標(biāo)物(5.04g，72.0%)。&-NMR光語(DMSO-d6)5(ppm):5.18(2H,s)，7.08(1H，m)，7.23(1H,m),7.24-7.46(8H,m),7.75(1H,m),8.59(1H,d，J=5.6Hz)，9.59(1H,s).(制備例1-4)[4-(4-芐基氧基羰基氨基-3-氟苯氣基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁基酯在室溫下向4-(4-爺基氧基羰基氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-曱酸(5.04g)的叔丁醇(50ml)懸浮液中加入三乙胺(4.6ml)攪拌。在室溫下向其中加入疊氮基磷酸二苯酯(3.13ml)，氮?dú)夥障略谑覝叵聰嚢?0分鐘。然后，在90。C下加熱攪拌30分鐘、在100。C下加熱攪拌4小時。將反應(yīng)液冷卻至室溫。向其中加入乙酸乙酯(25ml),冰浴冷卻下將反應(yīng)液攪拌30分鐘。濾取析出的結(jié)晶，將其用乙醚洗滌。將其在室溫下通氣千燥1小時，得到作為無色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(3.92g、65.5%)。力-NMR光傳(DMSO-d6)5(ppm):1.42(9H,s),5.17(2H，s)，6.62(1H，dd，J=2.4，5.6Hz),7.01(1H,dd,J=2.2，8.8Hz),7.21(1H,dd，J=2.2,11.2Hz),7.35-7.42(6H,m),7.70(1H，m),8.14(1H，d,J=5.6Hz),9.53(1H,s),9.83(1H，s).(制備例1一5)[4-(2—氛基p比口定一4一基氣基)-2—氟笨基]氛基曱酸爺基酯將4N鹽酸-乙酸乙酯溶液(120ml)在冰浴上冷卻。在攪拌下向其中加入[4-(4-芐基氧基羰基氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-基]氨基曱酸叔丁酯(3.92g)，在冰浴上攪拌10分鐘。然后，在室溫下攪拌反應(yīng)液3.5小時。減壓濃縮反應(yīng)液。向其中加入乙酸乙酯(150ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(70ml),進(jìn)行分配。用乙酸乙酯(50ml)萃取水層。將合并的有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥。將干燥后的有機(jī)層減壓濃縮。使所得的結(jié)晶懸浮于己烷-乙酸乙酯混合溶劑(5:1)中。濾取結(jié)晶，用己烷-乙酸乙酯混合溶劑(5:1)洗滌。將其在室溫下抽吸干燥，得到為淡黃色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(2.93g、95.9%)。丄H-NMR光譜(CDC13)5(ppm):4.49(2H,m),5.23(2H,s)，5.95(1H，d，J=2.0Hz),6.26(1H,dd，J=2.0,6.0Hz),6.84-6.90(2H,m)，7.00(1H,m)，7.34-7.42(5H，m),7.94(1H，d，J=6.0Hz),8.10(1H,m).ESI-MS(m/z):354[M+H]+.(制備例1-6)N-[4-(3-氟-4-{[1-(4-氟苯基氨曱?；?環(huán)丙烷羰基]氨基}苯氣基)吡啶-2-基]-N-苯氣基羰基氨基曱酸苯酯向[4-(2-氨基吡啶-4-基氧基)-2-氟苯基]氨基甲酸芐基酯U.25g)的四氫呋喃(100ml)溶液中加入三乙胺(1.48ml)、氯曱酸苯酯(l.llml),在室溫下攪拌l小時。將反應(yīng)液分配于乙酸乙酯、1N氫氧化鈉水溶液。將有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥。蒸餾除去溶劑，得到為褐色油狀物的N-[4-(4-芐基氧基羰基氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-基]-N-苯氧基羰基氨基曱酸苯基酯的粗體(ESI-MS(m/z):616[M+Na]+)。使其溶解于四氫呋喃(200ml),加入20%氫氧化4巴(497mg),氫氣氛下在室溫下攪拌4小時。濾去催化劑。將其用四氫呋喃洗滌。將濾液濃縮至20ml，得到N-[4-(4-氨基-3-氟苯氧基)p比咬-2-基]-N-苯氧基羰基氨基甲酸苯基酯(ESI-MS(m/z):482[M+Na]+、941[2M+Na]+)的四氫吹喃溶液。4吏其溶解于N,N-二曱基甲酰胺(50ml)。向其中加入1-(4-氟苯基氨曱?；?環(huán)丙烷曱酸(1.58g)、苯并三唑-1-基氧基三(二曱基氨基)鱗六氟磷酸鹽(3.13g)、三乙胺(0.987ml)，在室溫下攪拌13.5小時。將反應(yīng)液分配至乙酸乙酯、飽和食鹽水中。將有機(jī)層依次用1N氫氧化鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉千燥。將其濃縮，采用硅膠柱色鐠法(庚烷乙酸乙酯=3:2~1:1~1:2)精制殘?jiān)?，得到為無色泡狀物的標(biāo)題化合物(940mg、40.0%)。力一NMR光譜(CDC13)5>(ppm):1.68-1.76(4H，m),6.90(1H,dd,J=2.4，5.6Hz),6.95(1H，m),6.98(1H,m),7.03-7.07(3H,m)，7.18(4H,d,J=8.4Hz)，7.25(2H，m),7.38(4H,m),7.48(2H,m),8.27(1H,m),8.46(1H,d，J=5.6Hz),8.75(1H,s)，9.40(1H,s).ESI-MS(m/z):687[M+Na]+.(制備例l)N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-甲基哌嗪-l-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺(化合物l)向N-[4-(3-氟-4-{[1-(4-氟苯基氨甲?；?環(huán)丙烷羰基]氨基}苯氧基)吡啶-2-基]-N-苯氧基羰基氨基曱酸苯基酯(50.0mg)的N,N-二甲基甲酰胺(2.0ml)溶液中加入1-曱21基-4-(哌咬-4-基)哌溱(68.7mg),在室溫下攪拌12小時。將反應(yīng)液分配至乙酸乙酯和1N氫氧化鈉水溶液中。將有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥。蒸餾除去溶劑，采用硅膠柱色譜法(FUJISILYAIANH,乙酸乙酯乙酸乙酯曱醇=20:1~10:1)精制殘?jiān)?。濃縮目標(biāo)成分。向殘?jiān)屑尤胍颐鸭和?1:3，濾取析出的沉淀。將其用己烷洗滌，通氣干燥，得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(34.6mg、72,8%)。力—NMR光i普(CDC13)5(ppm):1.44(2H，m)，1.68(2H,m),1.75(2H，m)，1.90(2H,m)，2.32(3H,s),2.39-2.71(9H，m),2.90(2H，m)，4.11(2H,m),6.55(1H，dd,J=2.0，5.6Hz),6.92(2H，m),7.04(2H,m)，7.26(1H,尋皮CDC13々奄蓋)，7.50(2H，dd,J=4.8,9.2Hz)，7.62(1H,d,J=2.0Hz)，8.06(1H,d，J=5.6Hz),8.20(1H,m)，8.84(1H，s)，9.20(m,s).ESI-MS(m/z):634[M+H]+,656[M+Na]+.(實(shí)施例1—1)N-(2-氟—4—{[2-({[4—(4-曱基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺鹽酸鹽使N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基嗛喚-l-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)處咬-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺(63.4mg)懸浮于丙酮(0.634ml)中，在室溫下加入5N鹽酸(0.020ml)、水(0.0117ml)形成溶液。在室溫下攪拌溶液一晚。濾取析出物，用丙酮(0.317ml、2次)洗滌。在室溫下通氣干燥30分鐘，在60。C下溫風(fēng)干燥1天，由此可以得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(43.3mg)。力-畫R光i脊(DMSO-d6)5(ppm):1.40-1.80(6H,m)，2.00-3.80(16H，m)，4.20-4.40(2H，m),6.93(1H,m)，7.12(1H，m)，7.18(2H,m),7.25(1H,m)，7.37(1H,m),7.59—7.63(2H,m)，8.04(1H,m)，8.13(1H,d，J=6.4Hz)，9.24(1H,s),9.91(1H,brs),10.76(1H,brs).(實(shí)施例1-2)N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌。秦-1-基)哌咬-1-基]羰基}氨基)吡啶_4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺氫溴酸鹽(方法1)使N-(2-氟-4-{[2-({[4—(4—曱基哌。秦-1—基)哌啶-1-基]羰基}氨基)他咬-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺(55.7mg)懸浮于丙酮(0.557ml)中，在室溫下加入48%氫溴酸水溶液(O.OlOml)、水(0.0178ml),形成溶液。將溶液在室溫下攪拌一晚。濾取析出物，用丙酮(0.557ml、2次)洗滌。在室溫下通氣干燥30分鐘，在60。C下溫風(fēng)干燥2天，由此得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(62.9mg)。(方法2)使N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌溱-l-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(55.7mg)懸浮于水(1.67ml)中，在室溫下加入48%氫溴酸水溶液(O.OlOml)形成水溶液。使用千冰/乙醇浴使水溶液凍結(jié)后，減壓下凍結(jié)干燥27小時，由此得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(70.7mg)。丄H-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.40-1.80(6H,m)，2.00-3.80(16H,m)，4.10—4.30(2H,m),7.02(1H,m)，7.07(1H，m),7.10-7.20(4H,m),7.40(1H,m),7.58-7.62(2H,m)，8.08(1H，m)，8.26(1H，d，J=6.4Hz),9.86(1H,s)，10.81(1H，brs).(實(shí)施例1—3)N—(2-氟—4-{[2-({[4—(4-曱基哌。秦-1-基)哌咬-1-基]羰基}氨基)吡啶_4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷.-1,1-二曱酰胺硫酸鹽使N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌漆-l-基)哌啶-1-基]羰基)氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(31.7mg)懸浮于乙醇(0.317ml)-水(0.0058ml)中，在室溫下加入2.5M硫酸(0.010ml)形成溶液。將溶液在室溫下攪拌一晚。濾取析出物，用乙醇(0.158ml、2次)洗滌。在室溫下通氣干燥30分鐘，在60。C下溫風(fēng)干燥1天，由此得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(26.5mg)。力-NMR光鐠(DMSO-d6)5(ppm):1.35(2H,m)，1.50-1.70(4H，m),1.82(2H,m),2.20-4.00(14H，m),4.15(2H，m),6.73(1H，m),7.00-7.30(6H，m),7.59—7.63(2H，m)，7.98(1H，m),8.17(1H，m),9.92(1H,s),10.65(1H，brs).(實(shí)施例1-4)N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺富馬酸鹽使N—(2-氟—4-{[2-({[4—(4—曱基哌。秦—1—基)哌啶_1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(65.3mg)懸浮于2-丙醇(0.653ml)中，向其中加入富馬酸(6.0mg)。對此懸浮液進(jìn)行超聲波處理后，將其在50。C下攪拌5分鐘。向其中加入水(0.0327ml)，在相同溫度下攪拌。向其中加入2-丙醇(0.653ml)、水(0.0327ml),在相同溫度下攪拌。向其中加入富馬酸(6.0mg)，在相同溫度下攪拌，形成溶液后，在室溫下整夜攪拌。氮?dú)夥障聻V取析出物。將其通氣干燥2小時，得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(26.0mg、34%)。&-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.28(2H,m)，1.58(4H，m)，1.73(2H，m)，2.25(3H,s)，2.26-2.63(9H,m)，2.74(2H,m)，4.10(2H,m),6.59(2H,s)，6.60(1H,m)，247.01(1H,m)，7.17(2H，m),7.23(1H，m),7.40(1H,d，J=2.0Hz)，7.59—7.63(2H,m),7.93(1H,m),8.13(1H，d，J=5.6Hz)，9.23(1H,s)，9.97(1H，m),10.55(1H，m).(實(shí)施例1-5)N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺琥珀酸鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>使N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基旅漆-l-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(31.7mg)懸浮于乙醇(0.317ml)中，在室溫下加入琥珀酸(5.7mg),在室溫下攪拌3天。濾取析出物，用乙醇(0.158ml)洗滌。在室溫下通氣干燥30分鐘，在60。C下溫風(fēng)干燥4小時，由此得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(12.0mg、32%)。力-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.27(2H,m),1.50-1.70(4H,m)，1,72(2H,m),2.20(4H,s),2.30-2.80(14H,m),4.10(2H,m),6.61(1H,m)，7.01(1H,m)，7.14—7.25(3H,m)，7.39(1H,m),7.59-7.64(2H,m),7.93(1H,m)，8.13(1H，d,J=5,6Hz),9.22(1H，s),9.96(1H，m),10.53(1H,s).(實(shí)施例1-6)N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺馬來酸鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>使N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌漆-1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(65.3mg)懸浮于丙酮(1.306ml)中，向其中加入馬來酸(12.0mg)。對此懸浮液進(jìn)行超聲波處理后，將其在50。C下攪拌5分鐘，形成溶液。將此溶液在室溫下攪拌16小時，在4°C下攪拌4天。在氮?dú)饬飨拢瑸V取析出物。將其用丙酮(0.020ml)洗滌后，在室溫下通氣干燥2小時，得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(15.1mg、20%)。-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.30(2H,m)，1.69(4H，m),1.74(2H,m)，2.14-3.50(14H，m)，4.34(2H，m),6.04(2H,s)，6.62(1H，d，J=5.6Hz)，7.01(1H,m)，7.17(2H，m),7.23(1H，m),7.40(1H,s)，7.61(2H,m)，7.94(1H,m)，8.14(1H，d，J=5.6Hz),9.28(1H，brs),9.94(1H,m),10.58(1H，m).(實(shí)施例1-7)N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基)苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺(2S)-蘋果酸(方法1)使N-(2-氟-4一{[2-({[4-(4—曱基哌喚-l-基)哌啶-l-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺(31.4mg)懸浮于乙醇(0.317ml)中。在室溫下向此懸浮液中加入(2S)-蘋果酸(5.7mg)，在50。C下攪拌形成溶液。將反應(yīng)液恢復(fù)室溫攪拌18小時。濾取析出物，用乙醇(0.158ml、2次)洗滌。在室溫下通氣干燥30分鐘，在6(TC下溫風(fēng)干燥1天，由此得到為白色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(26.0mg、68。/0)。(方法2)使N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌口秦-1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺(2S)-蘋果酸鹽的結(jié)晶(36.9mg)溶解于水(0.740ml)中。使用干冰/乙醇浴使水溶液凍結(jié)后，在減壓下凍結(jié)干燥67小時，由此得到為白色無定形物的標(biāo)題化合物(34.2mg、93%)。力-NMR光鐠(DMSO-d6)5(ppm):1,29(2H,m)，1.50-1.70(4H,m),1.74(2H,m),2.20-2.80(16H，m),4.03(1H，m),4.12(2H,m)，6.61(1H，dd,J=2.4,6.0Hz)，7.01(1H,m),7.17(2H,m)，7.23(1H,m),7.40(1H,d，J=2.4Hz),7.59-7.63(2H，m)，7.93(1H,m),8.13(1H,d，J=6.0Hz),9.24(1H,s),9.95(1H，m),10.55(1H,s).(實(shí)施例1-8)N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌。秦-1-基)哌咬-1-基]羰基)氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(2R，3R)-酒石酸鹽(方法1)使N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌喚-l-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺(63.4mg)懸浮于丙酮(1.268ml)中，向此懸浮液中加入水(0.1268ml)、L-(+)-酒石酸(15mg)。將其在40。C下攪拌5分鐘形成溶液，將此溶液在室溫下攪拌23.5小時。濾取析出物，用丙酮(l.Oml)洗滌。將其在室溫下干燥6.5小時，27得到為無色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(69.1mg、88%)。(方法2)使N-(2-氟一4-{[2—({[4—(4-曱基哌喚-1—基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺(634mg)懸浮于乙醇(11.7ml)中，向此懸浮液中加入1ML-(+)-酒石酸乙醇溶液(l.Oml)。將其加熱至50。C,加入水(1.27ml),在50。C下攪拌IO分鐘形成溶液。一邊將此溶液緩緩冷卻至室溫一邊攪拌16小時。濾取析出物，用乙醇(2.0ml)洗滌。將其在室溫下通氣干燥，得到為無色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(550mg、70%)。(方法3)向N—(2-氟—4-{[2—({[4—(4—甲基卩底。秦—1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺(600mg)和L-(+)-酒石酸(142mg)的混合物中加入水(1.20ml)進(jìn)行攪拌。確認(rèn)溶解后，加入丙酮(3.6ml)。添加N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌嗪-1-基)哌，定-1-基]羰基)氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(2R,3R)-酒石酸鹽的晶種，攪拌1小時30分鐘后，再加入丙酮(2.4ml)。在室溫下攪拌13小時28分鐘后加入丙酮(2.4ml),再攪拌1小時30分鐘后加入丙酮(2.4ml),攪拌5小時32分鐘。濾取析出物，用丙酮和水的混合溶劑(9:1、2ml)洗滌。將其在室溫下通氣干燥，得到為無色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(673mg、90%)。(方法4)向L-(+)-酒石酸(472mg)中加入水(2.4ml)，在室溫下攪拌。向此溶液中加入丙酮(8ml)后，加入N-(2-氟-4-{[2一({[4_(4-甲基哌漆-1_基)哌咬-1_基]羰基}氨基)p比咬-4—基]氧基}苯基)-N，一(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1一二甲酰胺(2g)，在室溫下攪拌使其溶解。向此溶液中加入水(0.5ml)、丙酮(1.5ml),再加入丙酮(8ml)后，加入N-(2-氟-4-{[2—({[4-(4-曱基哌噪-1-基)哌咬-1-基]羰基}氨基)處咬—4—基]氧基)苯基)—N，—(4—氟苯基)環(huán)丙烷一1,l一二曱酰胺(2R,3R)-酒石酸鹽的晶種(2mg),在室溫下攪拌19小時。加入丙酮(14ml)，在室溫下攪拌2小時后，將結(jié)晶過濾、干燥，由此得到為無色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(2.22g)。(方法5)使N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-甲基咪喚-l-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺(2R，3R)-酒石酸鹽的結(jié)晶(50mg)溶解于水(2.5ml)中。使用干冰/乙醇浴，使水溶液凍結(jié)后，減壓下凍結(jié)干燥30小時，由此得到標(biāo)題化合物(44.2mg、88%)的白色無定形物。&-NMR光語(DMSO-d6)5(ppm):1.29(2H,m),1.68(4H，m)，1.74(2H,m),2.35(3H,s)，2.40-2.70(9H,m),2.77(2H，m),4.07(2H，s)，4.12(2H,m),6.61(1H,dd，J=2.4，6.0Hz),7.01(1H,m)，7.17(2H,m)，7.23(1H,m)，7.40(1H，d，J=2.4Hz)，7.59-7.63(2H,m),7.92(1H,m)，8.14(1H，d,J=6.0Hz),9.24(1H，s),9.96(1H,m)，10.56(1H,s).(實(shí)施例1-9)N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺(2S，3S)-酒石酸鹽向D-(-)-酒石酸(284mg)中加入水(1.44ml),在室溫下使其溶解。在室溫攪拌下，向此溶液中加入丙酮(4.8ml)、N-(2一氟—4—{[2—({[4-(4-曱基哌"秦—1一基)。底咬—1—基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基)苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(1220mg)使其溶解，在室溫下攪拌6分鐘。向此溶液中加入水(0.3ml)、丙酮(5.7ml)，在室溫下攪拌1小時。冰浴冷卻下攪拌1小時、4。C下攪拌15小時。加入水U.5ml),將反應(yīng)混合物減壓濃縮。將向所得的殘?jiān)屑尤氡?5ml),減壓濃縮，重復(fù)操作2次。然后加入丙酮(9.6ml),在4。C下攪拌24小時。濾取析出的結(jié)晶，用丙酮(2.4ml)洗滌。通過將其干燥，得到為無色結(jié)晶的標(biāo)題化合物U.36g、92%)。(制備例2-1)1-(芐基氣基)-2，5-二氟-4-硝基苯在2，4，5-三氟硝基苯(9.48g)和千醇(5.54ml)的N，N-二甲基甲酰胺(40ml)溶液中加入碳酸鉀(ll.lg),在室溫下攪拌60小時。在0。C下向反應(yīng)液中加入水(120ml),在4。C下攪拌24小時。濾取析出的結(jié)晶，用水洗滌。使此結(jié)晶減壓下干燥，得到為淡黃色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(11.5g、81%)。力_NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):5.35(2H,s)，7.40—7.50(5H,m),7.64(1H，dd,J=7.2，13.2Hz),8.20(1H，dd，J=7.2,10.8Hz).(制備例2-2)4-氨基-2，5-二氟苯酚向1-(芐基氧基)-2,5-二氟-4-硝基苯(9.21g)的曱醇(300ml)溶液中加入10%4巴炭(921mg),在氫氣氛下，于室溫下攪拌24小時20分鐘。使燒瓶內(nèi)為氮?dú)夥障拢Ｖ狗磻?yīng)后，使用硅藻土過濾催化劑。在減壓下蒸餾除去濾液，得到為褐色固體的標(biāo)題化合物(4.96g、99%)。力-NMR光譜(DMSO—d6)5(ppm):4.67(1H，s),6.53-6.64(1H，m),9.03(1H,s).(制備例2-3)4-(4-氨基一2,5-二氟苯氧基)p比口定一2—曱酰胺氮?dú)饬飨拢?-氨基-2,5-二氟苯酚(4.95g)溶解于二曱基亞砜(50ml)中，在室溫下加入叔丁醇鉀(4.05g)攪拌25分鐘。向此溶液中加入4-氯吡啶-2-甲酰胺(2.70g),在8(TC下攪拌2.5小時。將反應(yīng)液冷卻至室溫后，加入1N氫氧化鈉水溶液(74.25ml),攪拌10小時。濾取析出的固體，用水洗滌所得的固體。將此固體在100。C下溫風(fēng)干燥24小時，由此得到為紫色粉末的標(biāo)題化合物(3.38g、74%)。!H-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):5.57(2H，d,J=6.0Hz),6.75-6.80(1H，m),7.17-7.20(1H，m)，7.26(1H,dd，J=7.2,10.8Hz)，7.38(1H，m)，7.73(1H,s)，8.14(1H，s),8.52(1H，d,J=5.6Hz).ESI-MS(m/z):288[M+Na]+.(制備例2-4)N-(4-{[2-(氨基羰基)他咬-4-基]氣基}-2,5-二氟苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-曱酰旌在氮?dú)夥障?，?-(4-氟苯基氨基羰基)環(huán)丙烷曱酸(1.35g)溶解于四氫呋喃(25.0ml)后，在冰水浴冷卻下，滴入三乙胺(1.06ml)攪拌15分鐘。然后，在相同溫度下加入亞硫酰氯(0.439ml)，攪拌1.5小時。在相同溫度下向此反應(yīng)液中滴入4-(4-氨基-2,5-二氟苯氧基)吡啶-2-曱酰胺(l.Og)和四氫呋喃(12ml)、三乙胺(1.06ml)的混合物，在0。C下攪拌24小時45分鐘。將反應(yīng)液分配到乙酸乙酯(70ml)和2N氫氧化鈉水溶液(15ml)中。將有才幾層依次用2N氫氧化鈉水溶液(15ml)洗滌2次、用IN鹽酸水溶液(15ml)洗滌3次、再用飽和碳酸氬鈉水溶液(10ml)洗滌后，用無水石危酸鈉干燥。減壓下蒸餾除去溶劑。采用硅膠柱色語法(FujiSilysiaNH，洗脫液；庚烷乙酸乙酯=1:1~1:2~乙酸乙酯)精制所得的殘?jiān)?，減壓下濃縮目標(biāo)成分。減壓干燥殘?jiān)?，由此得到為白色固體的標(biāo)題化合物(372.8mg、21%)。^-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.28-1.33(4H,m)，317.12-7.22(2H,m)，7.22-7.28(1H,m),7.41(1H,d,J=2.4Hz)，7.59-7.67(3H，m),7.75(1H,m),8.10-8.17(2H,m)，8.56(1H，d，J=5.6Hz)，9.80(1H，m)，11.02(1H,m).(制備例2-5)N-(4-{[2-(氨基吡啶-4-基)氧基]-2,5_二氟苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺使N-(4-{[2-(氨基羰基)p比咬-4-基]氧基}-2，5-二氟苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺(372.8mg)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(5.0ml)中。在室溫下向其中依次加入水(0.0713ml)、[雙(三氟乙酰氧基)碘]苯(679mg)、吡啶(0.384ml)攪拌3小時。將反應(yīng)液分配至乙酸乙酯(30ml)和1N氫氧化鈉水溶液(9ml)中。分離有機(jī)層，用飽和食鹽水洗滌，用無水碌u酸鈉干燥。減壓濃縮溶劑，采用硅膠柱色譜法(FujiSilysiaNH,洗脫液；庚烷乙酸乙酯=1:3~乙酸乙酯)精制殘?jiān)?。減壓濃縮目標(biāo)成分，將殘?jiān)鼫p壓干燥，由此得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(301.0mg、86%)。力-NMR光鐠(DMSO-d6)5(ppm):1.54-1.68(4H，m),5.83(1H，d,J-2.4Hz),5.99(2H，d，J=5.2Hz),6.17(1H,dd,J=2.4,5.6Hz),7.16-7.20(2H，m),7.47-7.53(1H,m),7.57—7.62(2H,m)，7.81(1H,d,J=5.6Hz),8.02-8.10(1H,m),9.77(1H，m)，10.99(1H，m).ESI-MS(m/z):443[M+H]+.(制備例2)N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氣基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-l，1-二曱酰胺在氮?dú)夥障拢筃-{4-[(2-氨基吡啶-4-基)氧基]-2,5-二氟苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(100.0mg)溶解于四氬呋喃(lml)后，在0。C下依次滴入三乙胺(0.0630ml)、氯曱酸苯酯(0.0624ml)，攪拌30分鐘。向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯(5ml)和飽和碳酸氬鈉水溶液(5ml)攪拌。分離有機(jī)層，用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥。減壓濃縮溶劑。使殘?jiān)芙庥贜,N-二曱基曱酰胺(1.0ml)中。在室溫下加入3-羥基氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽(99.0mg)、三乙胺(0.315ml),攪拌22小時5分鐘。將反應(yīng)液分配至乙酸乙酯(10ml)和飽和^友酸氳鈉水溶液(5ml)中。一夸有機(jī)層依次用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥。減壓濃縮溶劑。向所得的殘?jiān)屑尤胍宜嵋阴?lml)、庚烷(lml)，使固體沉淀。濾取固體。采用硅膠柱色譜法(FujiSilysiaNH,洗脫液；乙酸乙酉旨乙酸乙酯曱醇=10:l)精制所得固體，減壓下濃縮目標(biāo)成分，得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(71.1mg、58%)。力-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.55-1.68(4H,m),3.68(2H,dd，J=4.4,8.4Hz),4.10-4.14(2H,m),4,34-4,40(1H,m),5.60(1H,d，J=6.4Hz)，6.64(1H,dd,J=2.4，5.6Hz),7.15-7.20(2H，m),7.50(1H,d，J=2.4Hz),7.52-7.62(3H，m),8.05-8.14(1H,m)，8.13(1H，d,J=5.6Hz),9.20(1H，s),9.81(1H，m),10.99(1H，m).ESI-MS(neg.)(m/z):540[M-H]—.(實(shí)施例2-1)N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}p比夂-4-基)氣基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺鹽酸鹽使N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺(32.5mg)懸浮于丙酮(0.325ml)中。在室溫下加入5N鹽酸(0.012ml)。加入水(0.151ml)后，在50°C下加熱攪拌5分鐘形成溶液。在室溫下攪拌此溶液30分鐘后，加入丙酮(0.325ml)攪拌26小時。濾取析出物，用丙酮(0.163ml、2次)洗滌。在室溫下通氣干燥1小時后，在60。C下溫風(fēng)干燥12小時，由此得到為白色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(27.6mg、80%)。33力-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.50-1.80(4H,m),3.50-4.30(4H,m),4.45(1H,m),7.02(1H,m),7.10-7.25(3H,m),7.55—7.65(2H，m),7.68(1H，m),8.18(1H,dd,J=7.2,12.0Hz)，8.25(1H，d,J=6.4Hz),9.78(1H,s),10.29(1H,br)，11.20(1H，brs).(實(shí)施例2-2)N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}p比咬-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺氫溴酸鹽使N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基}他咬-4-基)氧基]苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(32.5mg)懸浮于乙醇(0.325ml)中。在室溫下加入48%氬溴酸水溶液(0.010ml),形成溶液后，在室溫下攪拌23小時。濾取析出物，用乙醇(0.163ml、2次)洗滌。在室溫下通氣干燥l小時后，在60。C下溫風(fēng)干燥12小時，由此得到為白色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(30.7mg、82%)。力-麗R光傳(DMSO-d6)5(ppm):1.50-1.75(4H,m)，3.50—4.30(4H,m)，4.45(1H，m),7,00(1H,m)，7.08(1H,m),7.16-7.21(2H,m)，7.55—7.65(2H，m),7.68(1H，m)，8.17(1H，dd,J=7.2，12.0Hz),8.23(1H，d,J=6.8Hz),9.76(1H，s)，10.02(1H,br),11.17(1H,brs).(實(shí)施例2-3)N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氣基]苯基}-N'-(4-氟苯基)環(huán)丙垸-1，1-二曱酰胺1/2硫酸鹽使N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺(32.5mg)懸浮于乙醇(0.325ml)中。在室溫下加入2.5M硫酸(0.012ml)，形成溶液后，在室溫下攪拌24小時。濾取析出物，用乙醇(0.163ml、2次)洗滌。在室溫下通氣干燥l小時后，在60。C下溫風(fēng)干燥12小時，由此得到為白色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(31.2mg、88%)。-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.50-1.75(4H,m),3.50-4.25(4H,m),4.43(1H,m),6.92(1H,m),7.10-7.30(3H,m)，7.50-7.70(3H,m),8.15(1H，dd，J=6.8,12.0Hz)，8.21(1H,d，J=6.4Hz),9.77(1H，s)，11.13(1H,brs).(實(shí)施例2-4)N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁垸-1-基)羰基]氨基}他，定-4-基)氣基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺曱磺酸鹽(方法1)使N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}他咬-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷_1,1-二甲酰胺(30.0mg)懸浮于乙醇(0.300ml)中。在室溫下加入甲磺酸(0.004ml),形成溶液后，在室溫下攪拌90小時50分鐘。加入乙醇(lml)后，濾取析出物，用叔丁基甲基醚(lml、3次)洗滌。在室溫下通氣千燥l小時，由此得到為白色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(26.3mg、75%)。(方法2)在室下向N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-l,1-二甲酰胺甲磺酸鹽的結(jié)晶(50.0mg)中加入水(1.0ml)、叔丁醇(1.0ml),使其溶解。使用干冰/乙醇浴使溶液凍結(jié)后，在減壓下凍結(jié)干燥6天，由此得到為白色無定形物的標(biāo)題化合物(47.1mg、94%)。NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.52-1.76(4H,m),2.31(3H，s),3.70-3.84(2H,m),4.15-4.30(2H，m)，4.41-4.50(1H,m),6.96-7.12(2H，m),7.14-7.25(2H，m),7.55—7.63(2H,m)，7.64—7.76(1H,m),8.18(1H,dd,J=7.2,12,0Hz)，8.26(1H，d，J=6.8Hz),9.75(1H,s)，10.12(1H,brs),11.19(1H，brs).(實(shí)施例2-5)N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}他咬-4-基)氣基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺乙磺酸鹽使N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(32.5mg)懸浮于乙醇(0.325ml)中。在室溫下加入乙磺酸(0.006ml),形成溶液后，在室溫下攪拌25小時。濾取析出物，用乙醇(0.163ml、2次)洗滌。在室溫下通氣千燥1小時后，在60。C下溫風(fēng)干燥12小時，由此得到為白色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(25.5mg、65%)。力一NMR光譜(DMSO—d6)5(ppm):1.05(3H,t，J=7.2Hz),1.50-1.75(4H，m)，2.37(2H,q，J=7.2Hz)，3.70-4.30(4H，m),4.44(1H,m),6.99(1H，m),7.11(1H,m)，7.15-7.25(2H,m),7,55-7.63(2H,m)，7.67(1H,m),8.17(1H,dd，J=7.2,12.0Hz),8.24(1H,d，J=6.8Hz),9.76(1H，s)，9.96(1H，br),11.16(1H,brs).(實(shí)施例2-6)N-{2,5-二氟_4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶_4-基)氣基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺苯磺酸鹽使N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺(31.6mg)懸浮于乙醇(0.316ml)中。在室溫下加入苯^^黃酸(10.2mg)，形成溶液后，在室溫下攪拌17小時50分鐘。加入乙醇(0.5ml)后，濾取析出物，用叔丁基甲基醚(lml、3次)洗滌。在室溫下通氣干燥l小時，由此得到為白色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(30.4mg、74%)。力-NMR光譜(DMSO-d6)5(ppm):1.55-1.72(4H,m),3.70-3.81(2H,m)，4.15-4.26(2H，m)，4.40-4.49(1H,m),7.00(1H,m)，7.08(1H,m)，7,14-7.23(2H,m)，7,28-7.35(3H,m),7.55—7.63(4H，m)，7.67(1H,dd，J=7.2,10.0Hz),8.13-8.22(1H，m)，8.24(1H,d,J=6.4Hz),9.75(1H，s),10.01(1H,brs)，11.17(1H，brs).(實(shí)施例2-7)N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氣基]苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺4-甲基苯磺酸鹽(方法1)使N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺(34.2mg)懸浮于乙醇(0.342ml)中。在室溫下加入對甲苯石黃酸一水合物(13.2mg)，形成溶液后，在室溫下攪拌90小時25分鐘。加入乙醇(lml)后，濾取析出物，用叔丁基曱基醚(lml、3次)洗滌。在室溫下通氣干燥1小時，由此得到為白色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(33.0mg、73%)。(方法2)向N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基)吡啶-4-基)氧基]苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺4-曱基苯磺酸鹽的結(jié)晶(50.0mg)中加入水(6.0ml)、叔丁醇(6.0ml)使其溶解。使用干冰/乙醇浴使溶液凍結(jié)后，在減壓下凍結(jié)干燥6天，得到為白色無定形物的標(biāo)題化合物(45.1mg、90%)。H-NMR光語(DMSO-d6)5(ppm):1.55-1.72(4H,m),2.29(3H，s),3.70-3.84(2H,m),4.14-4.26(2H，m),4.40—4.49(1H,m),7.01(1H，m),7.07(1H，m),7.11(2H,d，J=8.0Hz)，7.15—7.24(2H,m),7.47(2H,d,J=8.0Hz)，7.55—7.64(2H，m),7.64—7.72(1H,m)，8.13-8.21(1H,m)，8.24(1H,d,J=6.8Hz),9.75(1H，s),10,04(1H,brs),11.17(1H，brs).(粉末X射線衍射測定)對于實(shí)施例1-7(方法1)、1-8(方法1)、2-1、2-2、2-3、2-4(方法1)、2-5、2-6及2-7(方法1)中所得的各結(jié)晶及實(shí)施例1-7(方法2)、1-8(方法5)、2-4(方法2)及2-7(方法2)中所得的各無定形物，用乳缽粉碎約5mg試樣，后，置于測定用鋁盤中，在以下條件下測定。使用裝置X射線DSC系統(tǒng)TTR-III(理學(xué)電機(jī)林式會社制)使用X射線CuKa線測角器TTR-III水平測角器計數(shù)管閃爍計數(shù)管管電壓50kV管電流300mA38掃描速度5°/分鐘掃描軸2e/e掃描范圍26=5。~35°發(fā)散狹縫0.5°限制縱向發(fā)散的狹縫2mm散射狹縫開放受光狹縫開放取樣寬度0.02。累積次數(shù)1實(shí)施例l一7(方法1)、1_8(方法1)、2—1、2—2、2-3、2-4(方法1)、2-5、2-6及2-7(方法1)中得到的各結(jié)晶及實(shí)施例1-7(方法2)、1-8(方法5)、2_4(方法2)及2-7(方法2)中得到的各無定形物的粉末X射線衍射圖案分別如圖1~圖13所示，上述各結(jié)晶的衍射角(26)的代表的峰及相對強(qiáng)度分別如表1~表9所示。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表2<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表3<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表4<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表5<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>表6<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>表7<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>表8<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>(13C固體NMR光譜的測定)按照下述測定條件，測定實(shí)施例1-8(方法4)中得到的結(jié)晶的3C固體NMR光譜。測定裝置AVANCE400MHz(布魯克(Bruker))探針7mm-CP/MAS(布魯克)NMR池直徑7mm池旋轉(zhuǎn)數(shù)5000轉(zhuǎn)/秒觀J定法CPTOSS法測定核"C(共振頻率100.6248425MHz)等待時間3秒接觸時間1000微秒累積次數(shù)5910次外部標(biāo)準(zhǔn)以甘氨酸的羰基碳的化學(xué)位移為176.03ppm。實(shí)施例1-8(方法4)中得到的結(jié)晶的13C固體NMR光譜如圖14所示，化學(xué)位移如表10所示。表10化學(xué)位移(ppm)180.5122.561.2179.5120.852.1175.7119.749.0172.1115.446.8166.7114.445.7157.1109.443.3154.997.141,5151.175.628.7148.174.828.0135.273.626.9125.463.620.8采用以下方法評價化合物1及化合物2的生物化學(xué)活性及作為藥物的作用效果(肝細(xì)胞生長因子受體抑制活性、抗胂瘤活性、血管新生抑制活性及癌轉(zhuǎn)移抑制活性)。需要說明的是，以下藥理試驗(yàn)例中使用的簡寫符號或用語的一覽表^口下戶斤示。<簡寫符號一覽表>HGFR(Hepatocytegrowthfactorreceptor、肝細(xì)胞生長因子受體)DNA(Deoxyribonucleicacid、脫氧核糖核酸)Humanplacenta(人月臺盤)PCR(Polymerasechainreaction、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))VEGFR2(Vascularendothelialgrowthfactorreceptor2、血管內(nèi)皮生長因子受體2)FGFRl(Fibroblastgrowthfactorreceptor1、成纖維細(xì)月包生長因子受體1)PDGFR(3(PlateletderivedgrowthfactorreceptorP、血小才反書亍生生長因子受體P)43EGFR(Epidermalgrowthfactorreceptor、表皮細(xì)胞生長因子受體)FBS(Fetalbovineserum、月臺牛血;青)PBS(Phosphatebufferedsaline、磷酸緩沖生理鹽水)Tris(三(羥甲基)氨基曱烷，Tris(hydroxymethyl)aminomethane、Tris(緩沖液))PMSF(Phenylmethylsulfonylfluoride、苯甲基磺酰氟)NP-40(NonidetP-40、諾納德P-40)EGTA(O,O-Bis(2-ami畫thyleneglycol)-N,N,N，，N，_Tetraaceticacid、乙二醇二乙醚二胺四乙酸)SDS(SodiumDodecylsulfate、十二烷基硫酸鈉)BSA(BovineSerumAlbumin、牛血清白蛋白)Hepes(N-[2-羥基乙基]艱溱一N，-[2—乙磺酸]，N-[2-Hydroxyethyl]piperazine-N，-[2-ethanesulfonicacid]、Hepes(緩沖液))ATP(Adenosine5，-Triphosphate、腺苷5，-三磷酸)EDTA(Ethylenediaminetetraaceticacid、乙二胺四乙酸)HTRF(HomogenousTime-ResolvedFluorescence,時間分辨熒光)HRP(Horseradishperoxidase、,束才艮過fU匕物酵)ELISA(Enzyme-linkedimmunosorbentassay、酶聯(lián)免疫法)藥理試驗(yàn)例1:對受體型酪氨酸激酶活性的抑制作用1.受體型酪氨酸激酶的克隆及重組桿狀病毒溶液的配制HGFR(Genbank荻取號J02958)的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域是起始于賴氨酸974、且包含終止密碼子的1.3kb的DNA片段，由Park等(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.M(18)、6379-6383、1987)記載。將此DNA片段從人胎盤的cDNA文庫(購自Clontech公司)中通過2種引物(序歹'j號1:5，_CCGGCCGGATCCAAAAAGAGAAAGCAAATTAAA-3'及序歹'J號2:5'-TTAATTCTGCAGCTATGATGTCTCCCAGAAGGA-3，、購自Invitrogen公司)采用PCR法(TaKaRaExTaqKit、購自TaKaRa)進(jìn)行分離。將此DNA片革殳克隆到桿狀病毒置換型載體(pFastBac-HT(購自GIBCOBRL公司))，得到重組構(gòu)筑物。將其轉(zhuǎn)染到昆蟲細(xì)胞(Spodopterafrugiperda9(Sf9))中，配制HGFR重組桿狀病毒溶液(重組桿狀病毒的配制，可參見標(biāo)準(zhǔn)教科書(Bac—to-BacBaculovirusExpressionSystem(GIBCOBRL公司))。其它受體型酪氨酸激酶的克隆及重組桿狀病毒溶液如下配制，即，在上述方法中使用起始于賴氨酸791的細(xì)胞質(zhì)片段(VEGFR2、Genbank獲取號L04947)、起始于賴氨酸398的細(xì)胞質(zhì)片段(FGFR1、Genbank獲取號X52833)或起始于賴氨酸558的細(xì)胞質(zhì)片段(PDGFRP、Genbank獲取號M21616)代替HGFR進(jìn)行配制。需要說明的是，EGFR購自Sigma乂>司(制品編號E-2645)。2.受體型酪氨酸激酶的表達(dá)及純化在懸浮于含有2%FBS的SF-9001I培養(yǎng)基(購自Invitrogen公司)的Sf9纟田月包(3xl08個)中，加入上述HGFR重組桿狀病毒溶液(4ml),在27。C下振蕩培養(yǎng)48小時。將此HGFR重組桿狀病毒感染細(xì)胞在4。C下以1000rpm離心5分鐘，除去上清液。將沉淀的感染細(xì)胞懸浮于80ml冰浴冷卻的PBS中，于4。C下以1000rpm離心5分鐘，除去上清液。將沉淀的感染細(xì)胞懸浮于40ml水浴冷卻的Lysis緩沖液(50mMTris-HC1(pH8.5)、5mM2-巰基乙醇、100mMKCl、lmMPMSF、1%(v/v)NP-40)。將此懸浮液在4°C下以12000rpm離心30分鐘，得到上清液。將此上清液加到用30ml緩沖液A(20mMTris-HC1(pH8.5)、5mM2-巰基乙醇、500mMKCl、20mM咪唑、10%(v/v)甘油)平衡化的Ni-NTA瓊脂柱(3ml、購自QIAGEN公司)中。將此柱依次用30ml緩沖液A、6ml緩沖液B(20mMTris-HC1(pH8.5)、5mM2-巰基乙醇、1MKC1、10%(v/v)甘油)、6ml緩沖液A洗滌。然后，向其中加入6ml緩沖液C(20mMTris-HCl(pH8.5)、5mM2-巰基乙醇、100mMKCl、100mM咪唑、10%(v/v)甘油)，得到洗脫液。將此洗脫液加入透析膜(購自SpectrumLaboratories7>司)，用1升透析緩沖液(20mMTris-HCl(pH7.5)、10%(v/v)甘油、lmM二石克蘇糖醇、O.lmMNa3V04、O.lmMEGTA)在4°C下透析一晚后，使用前于-8(TC下保存。將部分透析后的洗脫液供給于SDS電泳，將考馬斯亮藍(lán)染色中檢測分子量約60kDa的重組蛋白質(zhì)(His6-HGFR、N末融合6個組氨酸的HGFR的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域)，以BSA(購自Sigma公司)為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對蛋白進(jìn)行定量。VEGFR2的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，F(xiàn)GFR1的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域或PDGFR(3的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域也采用相同的方法，得到N末融合6個組氨酸的各個重組蛋白質(zhì)(His6-VEGFR2、His6-FGFR1或His6-PDGFR|3)。3.對HGFR酪氨酸激酶活性的抑制作用的測定向96孔圓底培養(yǎng)板(購自NUNC公司，制品編號163320)的各孔中加入lOjil激酶反應(yīng)液(200mMHepes(pH7.4)、80mMMgCl2、16mMMnCl2、2mMNA3V04)、250ng結(jié)合有生物素的聚(Glu4:Tyrl)(biotin—poly(GT)、購自日本Schering^>司)(6^1用蒸4留水稀釋15倍的物質(zhì))、30ngHis6-HGFR(lO(il用0.4。/。BSA溶液稀釋60倍的物質(zhì))及溶解于二曱基亞^5風(fēng)的受試物質(zhì)(4pl用0.1%BSA稀釋IOO倍的物質(zhì))，總量為30^1。向其中加入10pl用蒸餾水稀釋的4(iMATP(購自Sigma公司)，在3(TC下培育10分鐘后，加入10jil500mMEDTA(pH8.0)(購自和光純藥工業(yè))，得到激酶反應(yīng)溶液。酪氨酸磷酸化biotin-poly(GT)的檢測，釆用均相時間分辨熒光(HTRF)法(AnalyticalBiochemistry,巡、94—104、1999)。即，向96孔半?yún)^(qū)域黑色板(blackhalfplate)(購自COSTAR公司，制品編號3694)的各孔中加入20jil上述激酶反應(yīng)溶液及30W稀釋溶液(50mMHepes(pH7.4)、20mMMgCl2、4mMMnCl2、0.5mMNa3V04、0.1%BSA、100mMEDTA)。向各孔中加入7.5ng標(biāo)記銪配合物(Europiumcryptate)的抗磷酸化酪氨酸抗體(Eu(K)-PY20,購自日本Schering公司)(25jal用20mMHepes(pH7.0)、0.5MKF、0.1%BSA稀釋250倍的稀釋液)及250ng標(biāo)記XL665的鏈霉親合素(XL665-SA、購自日本Schering/>司)(25pl用20mMHepes(pH7.0)、0.5MKF、0.1%BSA稀釋62.5倍的稀釋液)，直接采用DiscoveryHTRF微孔板分析儀(Packard公司制)，測定用激發(fā)波長337nm照射各孔時的665nm及620nm的熒光強(qiáng)度。Biotin-poly(GT)的酪氨酸磷酸化率使用日本Schering公司的HTRF標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)法教科書中記載的deltaF。/。值計算。即，以未加受試物質(zhì)、加入His6-HGFR的孔的deltaF。/。值為100%,以未加受試物質(zhì)及His6-HGFR的孔的deltaF。/。值為0%，求出加入受試物質(zhì)的各孔的deltaF。/o值的比率(％)。根據(jù)此比率(％)計算將HGFR激酶活性抑制50%所必要的受試物質(zhì)的濃度(IC50)?；衔?的ICs。為0.053fiM，化合物2的ICs。為0.004^M。4.對HGFR以外的受體型酪氨酸激酶活性的抑制作用的測定對VEGFR2、FGFR1或EGFR酪氨酸激酶活性的抑制作用如下測定，即分別使用15ngHis6-VEGFR2、15ngHis6-FGFR1或23ngEGFR代替HGFR,采用與對上述HGFR酪氨酸激酶活性的抑制作用相同的方法測定。另一方面，對PDGFR(3酪氨酸激酶活性的抑制作用使用50ngHis6-PDGFRP,采用上述方法得到激酶反應(yīng)液后，采用以下方法才全測酪氨酸磷酸化biotin-poly(GT),進(jìn)行評價。向96-孔《連霉抗生物素包^皮^！(購自PIERCE^^司，制品編號15129)的各孔中加入34iil激酶反應(yīng)液及16fxl稀釋溶液，在室溫下培育30分鐘。然后,將各孔用150^1洗滌液(20mMTris-HCl(pH7.6)、137mMNaCl、0.05%Tween-20、0.1%BSA)洗滌3次，加入70jil抗磷酸化酪氨酸(PY20)-HRP偶聯(lián)物(購自TransductionLaboratories公司，制備編號P-11625)(用20mMTris-HCl(pH7.6)、137mMNaCl、0.05%Tween-20、1%BSA稀釋2000倍)，在室溫下培育1小時。然后，將各孔用150pl洗滌液洗滌3次，加入100|ilTMB膜過氧化物酶底物(購自Funakoshi公司，制備編號50-5077-03)。將其在室溫下培育10分鐘后，向各孔中加入100^11M磷酸，直接采用平板讀取器MTP-500(CoronaElectric公司制)測定450nm的吸光度。以未加受試物質(zhì)、加入His6-PDGFR(3的孔的吸光度為100%,以未加受試物質(zhì)及His6-PDGFRP的孔的吸光度為0%,求出加入受試物質(zhì)的各孔的吸光度率(％)。根據(jù)此吸光度率(％)計算將PDGFR(3激酶活性抑制50%所必要的受試物質(zhì)的濃度(IC50)。藥理試驗(yàn)例2:對人胃癌細(xì)胞(MKN-45)的增殖抑制作用將人胃癌細(xì)胞(MKN-45)懸浮于含有1%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基(購自Sigma公司)中。將此細(xì)胞懸浮液(1x104個/ml)以0.1ml/孔加到細(xì)胞培養(yǎng)用96孔培養(yǎng)板(購自NUNC公司，制品編號167008)中，在5o/。C02培養(yǎng)箱中(37。C)培養(yǎng)一晚。培養(yǎng)后，向各孔中加入O.lml用含有1%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基稀釋的檢測物質(zhì)，再于5%(:02培養(yǎng)箱中(37°C)中培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后，向各孔中加入10|al細(xì)胞計數(shù)試劑盒-8(CellCountingKit-8)(購自DOJINDO公司，制品編號343-07623)，在5%(:02培養(yǎng)箱中(37°C)中培育約1.5小時。培育后，在測定波長為450nm、對照波長為660nm的條件下，使用平板讀取器MTP-500(CoronaElectric公司制)測定各孔的吸光度。求出加入檢測物質(zhì)的各孔的吸光度相對于未加檢測物質(zhì)的孔的吸光度的比率(％),根據(jù)此比率求出將細(xì)胞增殖抑制50%所必要的檢測物質(zhì)的濃度(IC5())?；衔?的ICso為0.017^iM,化合物2的IC5o為0.005pM。藥理試驗(yàn)例3:采用ELISA法的HGFR自身磷酸化抑制作用1.細(xì)胞提取液的配制將人胃癌細(xì)胞(MKN-45)懸浮于含有1%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基(購自Sigma公司)中。將此細(xì)胞懸浮液(1x105個/ml)以O(shè).lml/孔加到細(xì)胞培養(yǎng)用96孔培養(yǎng)板(購自NUNC公司，制品編號167008)中，在5%(302培養(yǎng)箱中(37°C)中培養(yǎng)一晚。培養(yǎng)后，從各孔中除去上清液，加入0.05ml含有1%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基。向其中加入0.05ml溶解于二曱基亞砜的檢測物質(zhì)(用含有1%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基稀釋)，在5。/。C02培養(yǎng)箱中(37°C)培養(yǎng)1小時。從各孔中除去上清液，用150filPBS洗滌各孔，向其中加入100[xl可48溶緩沖液(50mMHepes(pH7.4)、150mMNaCl、10%(v/v)甘油、1%TritonX-100、1.5mMMgCl2、lmMEDTA(p跳0)、lOOmMNaF、lmMPMSF、10(ig/ml抑肽酶、50fig/ml亮抑肽酶、lpg/ml胃蛋白酶抑制素A、lmMNa3V04)。將此培養(yǎng)板在4。C下振蕩1小時，配制細(xì)胞提取液。2.抗磷酸化酪氨酸抗體固相化培養(yǎng)板的制作向ELISA用96孔培養(yǎng)板(購自COSTAR公司，制品編號3369)中加入50^1含有50jig/ml抗磷酸化酪氨酸抗體(PY20、購自TransductionLaboratory公司，制品編號P-11120)的60mM碳酸氬鹽緩沖液(pH9.6)。將此培養(yǎng)板在4。C下培育一晚。3.HGFR自身磷酸化抑制作用的測定將2.中配制的培養(yǎng)板的各孔用200^1PBS洗滌3次，向其中加入150ji13%BSA/PBS,在室溫下培育2小時。將各孔用200fxlPBS洗滌3次，向其中加入50^1上述細(xì)胞提取液，在4。C下培育一晚。培育后，將各孔用250^1洗滌液(0.1%BSA、20mMTris-HC1(pH7.6)、137mMNaCl、0.05%Tween-20)洗滌3次，加入70(il用反應(yīng)液(1%BSA、20mMTris—HC1(pH7.6)、137mMNaCl、0.05%Tween-20)稀釋2000倍的抗HGFR抗體(h-Met(C-12),購自SantaCmz,制品編號sc-10)。將其在室溫下培育1小時，用250(^1洗滌液洗滌3次后，加入70|il用反應(yīng)液稀釋2000倍的過氧化物酶標(biāo)記抗家兔Ig抗體(購自Cellsignaling公司，制品編號7074)。進(jìn)而，將其在室溫下培育l小時，將各孔用250pl洗滌液洗滌3次后，加入70ji1TMB膜過氧化物酶底物(購自Funakoshi公司，制備編號50-5077-03)。將其在室溫下培育10分鐘后，向各孔中加入70^dlM磷酸，直接用平板讀取器MTP-500(CoronaElectric公司制)測定450nm的吸光度。以加入未添加檢測物質(zhì)的細(xì)胞提取液的孔的吸光度為100%的HGFR自身磷酸化活性，添加50^1可溶緩沖液的孔的吸光度為0%HGFR自身磷酸化活性，求出各孔的HGFR自身磷酸化活性(％)。將檢測物質(zhì)的濃度改變?yōu)槎鄠€等級，求出各個情況下的HGFR自身磷酸化活性(％),求出將檢測物質(zhì)的HGFR自身磷酸化活性抑制50%所必要的檢測物質(zhì)的濃度(IC50)。化合物1的ICso為0.016jiM,化合物2的IC5。為0扁4一。產(chǎn)業(yè)上的可利用性本發(fā)明涉及的苯氧基吡啶衍生物的鹽或其結(jié)晶在物性方面具有優(yōu)異的性質(zhì)，作為對胰腺癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、腎癌、腦腫瘤及卵巢癌等多種腫瘤的抗腫瘤劑、血管新生抑制劑或癌轉(zhuǎn)移抑制劑有用。權(quán)利要求1、N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N’-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺的酸加成鹽，所述酸選自由鹽酸、氫溴酸、硫酸、富馬酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸及酒石酸組成的組。2、N-(2—氟—4—{[2-({[4-(4-曱基哌。秦—1一基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺蘋果酸鹽的結(jié)晶。3、如權(quán)利要求2所述的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中，于衍射角度(26±0.2。)17.7。、19.0。及23.5。處具有衍射峰。4、N—(2-氟-4一{[2-({[4-(4-甲基哌。秦一1-基)哌啶-1-基]羰基}氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺酒石酸鹽的結(jié)晶。5、如權(quán)利要求4所述的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中，于衍射角度(26±0.2°)12.2°、17.7。及23.4°處具有衍射峰。6、如權(quán)利要求4所述的結(jié)晶，在13C固體核磁共振光譜中，于化學(xué)位移(士0.5ppm)175.7ppm、166.7ppm、154.9ppm及45.7ppm處具有峰。7、N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基}他咬-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-l,l-二甲酰胺的酸加成鹽，所述酸選自由鹽酸、氫溴酸、硫酸、曱磺酸、乙磺酸、苯磺酸及4-曱基苯磺酸組成的組。8、N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二曱酰胺的酸加成鹽的結(jié)晶，所述酸選自由鹽酸、氫溴酸、；琉酸、乙^5黃酸及苯石黃酸組成的組。9、N-{2，5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基}處咬-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺甲磺酸鹽的結(jié)晶。10、如權(quán)利要求9所述的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中，于衍射角度(26±0.2。)17.7。、20.4。及21.7。處具有衍射峰。11、N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-l，1-二曱酰胺4-甲基苯磺酸鹽的結(jié)晶。12、如權(quán)利要求11所述的結(jié)晶，在粉末X射線衍射中，于衍射角度(26±0.2。)7.2°、17.3。及23.6°處具有衍射峰。13、N—(2-氟—4-{[2—({[4-(4—曱基哌溱-1一基)哌啶-1-基]羰基)氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺蘋果酸鹽的結(jié)晶的制備方法，其特征在于，將N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌咬-1-基]羰基}氨基)p比咬-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺、選自酮類及醇類中的溶劑及蘋果酸混合，形成溶液后，使結(jié)晶析出。14、N—(2—氟—4-{[2—({[4—(4—曱基哌。秦—1-基)哌啶-1-基]羰基)氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺酒石酸鹽的結(jié)晶的制備方法，其特征在于，將N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-甲基哌嗪_1-基)哌咬-1-基]羰基}氨基)他咬-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，l-二甲酰胺、選自酮類及醇類中的溶劑、水及酒石酸混合，形成溶液后，使結(jié)晶析出。15、N—(2—氟-4-{[2-({[4一(4—甲基哌。秦一1一基)哌啶-1-基]羰基)氨基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺酒石酸鹽的結(jié)晶的制備方法，其特征在于，將N-(2-氟-4-{[2-({[4-(4-曱基哌嗪-1-基)派咬-1-基]羰基}氨基)p比咬-4_基〗氧基}苯基)-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，l-二甲酰胺、水及酒石酸混合，形成溶液后，加入選自酮類及醇類中的溶劑，使結(jié)晶析出。16、N-{2,5-二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二曱酰胺酸加成鹽的結(jié)晶的制備方法，其特征在于，將N-{2,5_二氟-4-[(2-{[(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-基)羰基]氨基}吡啶-4-基)氧基]苯基}-N，-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺、選自酮類及醇類中的溶劑及選自由鹽酸、氫溴酸、硫酸、曱磺酸、乙磺酸、苯磺酸及4-曱基苯磺酸組成的組中的酸混合，形成溶液后，使結(jié)晶析出。17、一種藥物組合物，含有權(quán)利要求2至6中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶。18、一種抗肺瘤劑，含有權(quán)利要求2至6中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶。19、一種癌轉(zhuǎn)移抑制劑，含有權(quán)利要求2至6中任一項(xiàng)所述的結(jié)曰曰曰。20、一種藥物組合物，含有權(quán)利要求8至12中任一項(xiàng)所述的結(jié)曰曰曰。21、一種抗胂瘤劑，含有權(quán)利要求8至12中任一項(xiàng)所述的結(jié)晶。22、一種癌轉(zhuǎn)移抑制劑，含有權(quán)利要求8至12中任一項(xiàng)所述的々士日結(jié)曰曰。全文摘要本發(fā)明提供一種式(1)或(2)表示的化合物的酸加成鹽或其結(jié)晶及它們的制備方法。上述鹽或結(jié)晶具有HGFR抑制作用、具備優(yōu)異的物性(溶解性、安全性等)，因此作為對各種腫瘤的抗腫瘤劑、血管新生抑制劑或癌轉(zhuǎn)移抑制劑有用。文檔編號C07D401/12GK101454311SQ200780019200公開日2009年6月10日申請日期2007年8月21日優(yōu)先權(quán)日2006年8月23日發(fā)明者坂口貴久,松島知廣,白鳥修司,若杉和紀(jì),鐮田厚,高橋惠子申請人:衛(wèi)材R&D管理有限公司