專利名稱：分級恒溫結(jié)晶法提純共軛亞麻酸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種兩級恒溫結(jié)晶提純得到高純度的共軛亞麻酸方法。
背景技術(shù)：
近幾年來的研究表明，共軛亞麻酸(CLnA)具有抗癌、降血脂等許多有益的生物活性，在 醫(yī)藥、保健品等方面有廣泛的應(yīng)用前景。目前大量合成CLnA還有困難，而在石榴籽油、苦 瓜籽油和桐油等天然產(chǎn)物中含有豐富的CLnA，因而從這類種籽油中提純是目前獲取大量
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CLnA的主要方法。如何得到高純度的CLnA ，以滿足生物活性實驗以及開拓其在醫(yī)藥、保 健品等領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用是人們十分關(guān)心的問題。 一般油脂的提純方法有有機溶劑萃取法、柱 層析法、銀離子樹脂層析法、真空精餾法、冷凍結(jié)晶法、尿素包合法以及超臨界二氧化碳萃 取法等。其中低溫結(jié)晶法、尿素包合法和超臨界二氧化碳萃取法操作簡便，易于規(guī)?；?廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)，但是用這些方法提純CLnA時，都有一定的缺點，不能令人滿意。
尿素包合法的原理在于尿素的結(jié)晶呈四方體，當其與直鏈脂肪酸共存時變?yōu)榱骟w晶 體。直鏈飽和脂肪酸最容易進入六面體晶體的管道內(nèi)，形成尿素的包合物。而不飽和脂肪酸 中的t雙鍵越多，越難進入晶體的管道內(nèi)，雙鍵使分子體積增大，較難形成尿素的包合物。根 據(jù)這個性質(zhì)，可以將高不飽和脂肪酸與飽和及單不飽和脂肪酸分開。但是該法收率較低，成 本較高，不適合工業(yè)化提純。
超臨界流體萃取是最近二十年來新興的化工分離技術(shù)。處于臨界點附近的超臨界流體對 溶質(zhì)具有獨特的溶劑優(yōu)點，不僅對溶質(zhì)具有極高的溶解能力，而且通過改變溫度或壓力即可 容易的改變?nèi)苜|(zhì)的溶解度，從而達到選擇性地萃取分離化合物的目的。由于是在超臨界狀態(tài) 下進行分離提純，所以在分離過程中CLnA不易出現(xiàn)氧化變質(zhì)等情況。然而工業(yè)用超臨界流 體萃取儀器較貴，分離純化的成本較高。
、氐溫結(jié)晶法是利用飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸凝固點上的差異進行分離提純的方法。飽 和脂肪酸在室溫下通常呈固態(tài)，因此通過讓其在室溫或低于室溫時在乙醇、甲醇等溶液中結(jié)
晶，過濾使其結(jié)晶體與母液分離，從而達到飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸分離的目的。低溫
結(jié)晶可使不飽和脂肪酸結(jié)晶的更為充分。這種低溫結(jié)晶法的收率較高，生產(chǎn)設(shè)備不復(fù)雜，成 本較低，因而是大規(guī)模提純CLnA的有效方法，但是經(jīng)由一步冷藏結(jié)晶法得到CLnA的純度還 達^\到要求。
本研究采用的分級恒溫結(jié)晶法即通過分次調(diào)節(jié)溫度變化，使物料在兩個串聯(lián)的間歇式結(jié) 晶箱中結(jié)晶，經(jīng)兩步結(jié)晶處理，即可得到純度接近100%的CLnA，這對CLnA生物活性及 應(yīng)用開發(fā)研究具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種分級恒溫結(jié)晶從種籽油中提純得到高純度共軛亞麻酸的簡 便、高效方法，得到純度接近100%的CLnA。即以石榴籽為原料，采用有機溶劑萃取的方 法從石榴籽中提取石榴籽油脂；將石榴籽油脂皂化、酸化得到的粗制石榴籽油充氮氣密封之
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后置于20 36'C水浴鍋中保存3小時，將石榴籽油底部出現(xiàn)的晶體，迅速抽濾，收集該晶體； 把所收集的晶體溶于丙酮溶液中，置于一15 10'C冷藏結(jié)晶，收集該晶體，室溫真空干燥IO 小時后冷凍保存。 具體的制備步驟如下-
1. 將種籽粉碎并用有機溶劑提取種籽油脂。
2. 將種籽油脂用堿溶液皂化、酸化得到粗制的種籽油。
3. 將粗制的種籽油充氮氣密封之后于20 36。C恒溫保存3小時結(jié)晶。
4. 將出現(xiàn)的大量淡黃色的針狀晶體迅速抽濾，收集晶體。
5. 將第四步收集的晶體溶于丙酮溶液中，置于一15 10'C恒溫結(jié)晶。
6. 收集晶體、室溫真空干燥10小時，將得到的高純度共軛亞麻酸冷凍保存。 本發(fā)明具有的有益的效果是
分級恒溫結(jié)晶法操作簡便、成本低、提純效果好，經(jīng)過二次結(jié)晶以后，CLnA的純度接 近100% 。因此我們認為分級恒溫結(jié)晶法是提純CLnA的有效方法，這對CLnA生物活性及 應(yīng)用開發(fā)研究具有重要意義。 具體實施例子1
1.將1.8kg石榴籽粉碎后，用3000mL正己烷浸泡一個小時，共浸泡三次，以將種籽中的油 脂完全提取出來。
2. 將327.7g石榴籽油脂用2 g/mL氫氧化鉀溶液43.2mL皂化后，再用2M的硫酸酸化，用 分液漏斗分離得到粗制的石榴籽油。
3. 取上述31.8g石榴籽油，充氮氣密封之后降溫結(jié)晶，27'C恒溫保存3小時。
4. 將出現(xiàn)的大量淡黃色針狀晶體迅速抽濾，收集晶體。
5. 把收集的晶體1.5g溶于3mL丙酮溶液中，置于一7'C恒溫結(jié)晶4小時。
6. 將出現(xiàn)的大量淡黃色針狀晶體迅速抽濾，得到晶體。
7. 將晶體室溫真空干燥10小時后冷凍保存。 GC分析，確定其純度為99.9%。
具體實施例子2
一步傳統(tǒng)恒溫結(jié)晶實施例子
1. 將1.8kg石榴籽粉碎后，用3000mL正己烷浸泡一個小時，共浸泡三次，除去溶劑，得到 油脂。
2. 將327.7g石榴籽油脂用2g/mL氫氧化鉀溶液43.2mL皂化后，再用2M的硫酸酸化，用 分液漏斗分離得到粗制石榴籽油。
3. 取粗制石榴籽油149.1 g緩慢的倒入223 mL丙酮中并充分攪拌。
4. 將溶解的石榴籽油充氮氣密封之后置于一7'C恒溫結(jié)晶4小時。
5. 將出現(xiàn)的大量淡黃色針狀結(jié)晶迅速抽濾，收集晶體。
6. 在室溫下真空干燥10小時冷凍保存。 GC分析，確定其純度為71.2%。


圖1是本發(fā)明實例1分級恒溫結(jié)晶法在27'C結(jié)晶提純后的石榴籽油酸甲酯的GC色譜圖，圖 中17: O為內(nèi)標樣品峰，CLnA純度為78.8%。
圖2是本發(fā)明實例1分級恒溫結(jié)晶法在一7'C重結(jié)晶的石榴籽油酸甲酯的GC色譜圖，圖中 17: O為內(nèi)標樣品峰，CLnA純度接近99.9% 。
圖3是本發(fā)明實例2—步冷藏結(jié)晶提純后的石榴籽油酸甲酯的GC色譜圖，圖中17: O為內(nèi) 標樣品峰，CLnA純度為71,2X。
權(quán)利要求
1. 一種分級恒溫結(jié)晶提純共軛亞麻酸的簡便高效方法，其特征在于以石榴籽等天然種籽為原料，采用有機溶劑萃取的方法從石榴籽中提取油脂；然后用氫氧化鉀溶液皂化、硫酸酸化；將酸化得到的石榴酸充氮氣密封置于27℃恒溫結(jié)晶3小時，收集淡黃色的針狀晶體；把所收集的晶體溶于丙酮溶液中，置于—7℃二次恒溫結(jié)晶，最后收集晶體；室溫真空干燥10小時后產(chǎn)品冷凍保存。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分級恒溫結(jié)晶提純共軛亞麻酸的簡便高效方法，其特征在于結(jié)晶步 驟為兩級恒溫，不是在一個溫度下一步完成的。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分級恒溫結(jié)晶提純共軛亞麻酸的簡便高效方法，其特征在于原料可 以是石榴籽、苦瓜籽和桐油等。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分級恒溫結(jié)晶提純共軛亞麻酸的簡便高效方法，其特征在于用于從 石榴籽中萃取石榴籽油的有機溶劑可以是氯仿/甲醇、正己垸、乙醚、石油醚、丙酮/乙醇等。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述分級恒溫結(jié)晶提純共軛亞麻酸的簡便高效方法，其特征在于第一級結(jié)晶溫度為20-36'C。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分級恒溫結(jié)晶提純共軛亞麻酸的簡便高效方法，其特征在于溶解第 一級結(jié)晶后晶體的溶劑可以是丙酮、乙醇、苯等有機溶劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l所述分級恒溫結(jié)晶提純共軛亞麻酸的簡便高效方法，其特征在于第二級 結(jié)晶溫度為一15 1(TC。
全文摘要
本發(fā)明涉及分級恒溫結(jié)晶法從種籽中提純得到高純度的共軛亞麻酸。其特征在于以石榴籽為原料，將石榴籽粉碎后，用有機溶劑浸泡，將種籽中的油脂萃取出來。然后用氫氧化鉀溶液皂化、硫酸酸化分離得到粗制石榴籽油。將粗制得到的石榴籽油置于27℃恒溫結(jié)晶，之后得到石榴籽油晶體，再將此晶體溶解于丙酮溶液于-7℃結(jié)晶，二次結(jié)晶即可得到高純度的共軛亞麻酸。本發(fā)明具有操作簡便、成本低、提純效果好，最終得到的共軛亞麻酸CLnA的純度接近100％，這對CLnA生物活性及應(yīng)用開發(fā)研究具有重要意義。
文檔編號C07C27/02GK101386577SQ20071014541
公開日2009年3月18日 申請日期2007年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月11日
發(fā)明者張保芳, 瑩 曹, 林 楊, 高紅麗 申請人:河南師范大學(xué)