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純化替加環(huán)素的方法

文檔序號:3580567閱讀:667來源:國知局

專利名稱::純化替加環(huán)素的方法純化替加環(huán)素的方法本申請要求了于2005年5月27日提交的美國臨時申請No.60/685,626的權(quán)益,將該文獻(xiàn)的內(nèi)容引入本文作為參考。本文公開了制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法,其中Rt和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NRsR4,其中R3和Rj各自獨立地選自氬、直鏈和支鏈(Ci-C4)烷基;且n為l-4。在一項實施方案中,Ri為氫,R2為叔丁基,R為-NR3Rt,其中Rs為甲基且R4為甲基,且n為1,例如替加環(huán)素(tigecycline)。替加環(huán)素,(9-(叔丁基-甘氨酰^J+米諾環(huán)素,TBA-MINO),(4S,4a5,5a及,12a5)-9-[2-(叔丁基氨基)乙酰氨基]-4,7-雙(二甲基氨基)-l,4,4a,5,5a,6,ll,12a-八氫-3,10,12,12a-四羥基-l,ll-二氧代-2-并四苯甲酰胺,其中&為氫,R2為叔丁基,Rs為甲基,R4為甲基,且n為l。替加環(huán)素是甘氨酰環(huán)素抗生素,并且是半合成四環(huán)素一米諾環(huán)素一的類似物。替加環(huán)素是米諾環(huán)素的9-叔丁基甘氨酰M衍生物,如下述結(jié)構(gòu)所示替加環(huán)素替加環(huán)素是響應(yīng)于對抗生素出現(xiàn)耐藥性的世界性威脅而研發(fā)的。替加環(huán)素具有被擴(kuò)展的體外及體內(nèi)廣譜抗菌活性。甘氨酰環(huán)素抗生素象四環(huán)素抗生素那樣通過抑制細(xì)菌中的蛋白質(zhì)翻譯來起作用。替加環(huán)素是四環(huán)素家族中已知的抗生素,并且是米諾環(huán)素的化學(xué)類似物。其可用作對抗耐藥性細(xì)菌的治療,并且其在其它抗生素?zé)o效的情況下已經(jīng)顯示出有作用。例如,其具有對抗下述的活性耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(5top/y;/tf、耐青霉素肺炎鏈球菌(S^印tococc附/we"附o"/—和耐萬古霉素腸球菌(e"tewcocci)(D.J.Beidenbach等人,D/"g/io幼'c緒cro6/o/ogj;朋d/"/e"/o"sD/se做e40:173-177(2001);H.W.Boucher等人,^4/^/附/"06/"/々朋&在C/i柳0狄mi/^44:2225-2229(2000);P.A.BradfordC//w.Af/crMiV)/:iVews/e汰26:163-168(2004);D.Milatovic等人,爿wft附/c/Y^.^ge"toC^e附WA欲47:400-404(2003);R.Patel等人,Z)/嘆"osric腸'm)6/o/ogj;朋rf/w/e"/o"sD/se肪e38:177-179(2000);P.J.Petersen等人,jgewtoC/re附o^e/:46:2595-2601(2002);和P.J.Petersen等人,^w,i附iciy^.^4gewfcC7^附o^c43:738-744(1999)),并且具有對抗攜帶四環(huán)素耐藥性的兩種主要形式一外流和核糖體保護(hù)一之一的生物體的活性(C.Betriu等人,爿wftwwc/y^.C7^附W/r欲48:323-325(2004);T.Hirata等人,爿/ift附/cw6.C%e/m>^c48:2179-2184(2004);和P.J.Petersen等人,爿wft附/cw6.^ge"teC/re附W/^/:43:738-744(1999))。替加環(huán)素可用于治療多種細(xì)菌感染,例如復(fù)雜性腹腔內(nèi)感染(cIAI)、復(fù)雜性皮膚及皮膚結(jié)構(gòu)感染(cSSSI)、社區(qū)獲得性肺炎(CAP)和醫(yī)院獲得性肺炎(HAP)征候,其可由革蘭氏陰性和革蘭氏陽性病原體、厭氧菌以及對甲氧苯青霉素敏感的和對甲氧苯青霉素有耐藥性的金黃色葡萄球菌菌抹(MSSA和MRSA)引起。此外,替加環(huán)素可用于治療或控制溫血動物中由具有TetM及TetK耐藥性決定子的細(xì)菌引起的細(xì)菌感染。而且,替加環(huán)素可用于治療骨和關(guān)節(jié)感染、與導(dǎo)管有關(guān)的中性白細(xì)胞減少癥、產(chǎn)科及婦科感染或者用于治療其它耐藥性病原體如VRE、ESBL、腸的、快速生長的分枝桿菌等。替加環(huán)素具有一些缺點,即可能通過差向異構(gòu)化而降解。差向異構(gòu)化通常是四環(huán)素類已知的降解途徑,雖然降解速率可以隨四環(huán)素的不同而改變。比較而言,替加環(huán)素的差向異構(gòu)化可能是快速的,即使例如在稍微酸性的條件和/或稍微升高的溫度下亦如此。有關(guān)四環(huán)素的文獻(xiàn)報道了數(shù)種已經(jīng)被科學(xué)家嘗試并使得四環(huán)素類的差向異構(gòu)體形成最小化的方法。在一些方法中,當(dāng)在堿性pH下、在非水溶液中進(jìn)行時,與四環(huán)素類形成鈣、鎂、鋅或鋁金屬鹽限制了差向異構(gòu)體的形成(Gordon,P.N,StephensJr,C.R.,Noseworthy,M.M.,Teare,F.W.,英國專利No.卯1,107)。在其它方法中(Tobkes,美國專利No.4,038,315),金屬復(fù)合物的形成在酸性pH下進(jìn)行,隨后制備藥物的穩(wěn)定固體形式。替加環(huán)素僅僅在一個方面在結(jié)構(gòu)上區(qū)別于其差向異構(gòu)體。在替加環(huán)素中,4位碳上的N-二曱勤目對于相鄰的氫為順式,如上文式I中所示,而在差向異構(gòu)體(即cv差向異構(gòu)體)式n中,它們以所示的方式相互為反式。雖然據(jù)信替加環(huán)素差向異構(gòu)體是無毒的,但是在某些條件下其可能缺乏替加環(huán)素的抗菌功效,因此可能是不希望的降解產(chǎn)物。而且,當(dāng)大規(guī)模合成替加環(huán)素時,差向異構(gòu)化的量可能^U欠大。減少差向異構(gòu)體形成的其它方法包括:在加工期間維持pH高于約6.0;避免與弱酸共軛物如甲酸根、乙酸根、磷酸根或硼酸根接觸;和避免與潮濕、包括基于水的溶液接觸。關(guān)于防潮,Noseworthy和Spiegel(美國專利No.3,026,248)以及Nash和Haeger(美國專利No.3,219,529)已經(jīng)提出在非7JC媒介物中配制四環(huán)素類似物,以提高藥物穩(wěn)定性。然而,在這些公開文獻(xiàn)中所包括的媒介物大都更適合于局部使用勝于胃腸道外使用。四環(huán)素差向異構(gòu)化還已知是溫度依賴性的,因此在低溫下生產(chǎn)和儲存四環(huán)素類也可以降低差向異構(gòu)體形成的速率(Yuen,P.H.,Sokoloski,T.D.,/.i^w附.5W.66:1648-1650,1977;Pawelczyk,E.,Matlak,B,Pol./泡簡腳/.泡簡.34:409-421,1982)。已經(jīng)將這些方法中的一些嘗試用于替加環(huán)素,但是顯然沒有一種能成功地既減少差向異構(gòu)體形成又減少氧化降解并且不引入另外的降解物(degradants)。例如,發(fā)現(xiàn)金屬絡(luò)合作用通常在堿性pH下對差向異構(gòu)體形成或降解幾乎沒有影響。雖然磷酸鹽、乙酸鹽和檸檬酸鹽緩沖液的使用提高了溶液狀態(tài)的穩(wěn)定性,但是它們似乎加速了替加環(huán)素在冷凍干燥狀態(tài)下的降解。但是,即使沒有緩沖劑,差向異構(gòu)化對替加環(huán)素而言比對其它四環(huán)素類如米諾環(huán)素而言更為嚴(yán)重。除了C4-差向異構(gòu)體,其它雜質(zhì)包括氧化副產(chǎn)物。這些副產(chǎn)物中的一些通過分子的D環(huán)(為氨基苯酚)氧化獲得。式3化合物(參見下述流程I)在C-ll和C-12a位置可容易地被氧化。采用非溶劑沉淀法分離式3化合物可具有氧化副產(chǎn)物和金屬鹽與產(chǎn)物共沉淀、導(dǎo)致純度非常低的問題。式3化合物的核的氧化和降解在堿性反應(yīng)條件下可更明顯,并且在大規(guī)模操作時,由于加工時間通常較長以及化合物與堿接觸更長時間,因而氧化和降解更為明顯。而且,在流程的每個不同合成步驟期間都可能獲得降解產(chǎn)物,并且使所需化合物與這些降解產(chǎn)物分離可能A^煩的。例如,常規(guī)純化技術(shù)(例如硅膠色語法或制備型HPLC)由于其螯合特性不能用于容易地純化這些化合物。雖然已經(jīng)通過采用硅藻土柱浸潤含有多價螯合劑如EDTA的緩沖固定相的分配色鐠法純化了一些四環(huán)素,但是這些技術(shù)的分離度、重現(xiàn)性和生產(chǎn)力非常低。這些缺點可以妨礙大目合成。HPLC也已經(jīng)用于純化,但是各種組分在HPLC柱子上的足夠分離度要求流動相中存在離子對試劑。將終產(chǎn)物與流動相中的多價螫合劑和離子對試劑分離可能是困難的。雖然在小規(guī)模中,通過沉淀獲得的不純化合物可通過制備型反相HPLC來純化,但是當(dāng)處理公斤級的材料時,通過反相液相色傳法進(jìn)行純化是效率低的和昂貴的。因此,仍然需要以比以往更純的形式獲得至少一種式l化合物。還需要新的合成法以盡量避免用色鐠法來進(jìn)行純化。本文^Hf了制備四環(huán)素類如替加環(huán)素的方法,其大致如下文流程I所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>流程I&和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者&和112與N—起形成雜環(huán);且R為-NR3Rt,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且n為1-4。式2化合物也被稱為米諾環(huán)素或米諾環(huán)素衍生物。式2化合物與至少一種硝化劑反應(yīng),產(chǎn)生-N02取代基,從而形成式3化合物。式3中的-N02取代基隨后可以被還原為氛基,例如通過氫化還原為氛基,以形成式4化合物。最后,式4化合物?;?,產(chǎn)生式l化合物。本文公開了進(jìn)行制備式1化合物的反應(yīng)例如硝化、還原和?;磻?yīng)的方法。本文還公開了純化式1化合物的方法。本文所-&開的方法可形成所需產(chǎn)物,并且減少終產(chǎn)物中存在的至少一種雜質(zhì)的量,例如差向異構(gòu)體形成、起始反應(yīng)物的存在和氧化副產(chǎn)物。這類雜質(zhì)減少可以在合成的至少一個階段期間、即在硝化、還原和?;磻?yīng)任一者期間達(dá)成。本文所公開的方法也能使大規(guī)模合成具有適宜純度的終產(chǎn)物變得容易。附l描述了制備替加環(huán)素的示例性流程。圖2描述了制備替加環(huán)素的示例性流程。圖3描述了制備替加環(huán)素的示例性流程。定義應(yīng)注意的是,除非上下文清楚說明并非如此,否則本說明書和所附的權(quán)利要求中所用的單數(shù)形式"一個"、"一種"和"該"等包括復(fù)數(shù)指代物。因此,例如,對含有"一種化合物"的組合物的提及包括兩種或多種化合物的混合物。還應(yīng)當(dāng)注意的是,除非上下文清楚說明并非如此,否則術(shù)語"或(者)"一般以包括"和/或"的含義被采用。本文所用的"替加環(huán)素"包括游離堿形式和鹽形式的替加環(huán)素,例如任意可藥用的鹽、對映異構(gòu)體和差向異構(gòu)體。本文所用的替加環(huán)素可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法來配制。本文所用的"化合物"指中立(neutral)的化合物(例如游離堿)和其鹽形式(例如可藥用鹽)。化合物可以以無水形式存在,或者作為水合物或作為溶劑化物存在?;衔锟梢砸粤Ⅲw異構(gòu)體(例如對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體)的形式存在,并且可以分離為對映異構(gòu)體、外消旋混合物、非對映異構(gòu)體及其混合物。固體形式的化合物可以以各種結(jié)晶形式和無定形形式存在。本文所用的"可藥用"指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范疇內(nèi)適用于與患者的組織接觸而沒有過度的毒性、刺激性、過敏反應(yīng)或其它與合理的風(fēng)險/益處比相稱的問題或并發(fā)癥的那些化合物、物質(zhì)、組合物和/或劑型。本文所用的"環(huán)烷基"指具有3至6個環(huán)成員的飽和碳環(huán)環(huán)系。本文所用的"雜環(huán)"指含有至少一個氮環(huán)成員且每個環(huán)具有3至6個環(huán)成員的單環(huán)雜環(huán)基,其中每個環(huán)是飽和的并且不是另外祐:取代的。硝化一項實施方案公開了制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>其中Ri和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中Rs和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(CrC4)烷基;且n為l-4。一項實施方案公開了其中不分離硝化產(chǎn)物的硝化反應(yīng)。因此,在一項實施方案中,該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng),以生成包含中間體的反應(yīng)混合物;和(b)進(jìn)一步使中間體反應(yīng),以形成至少一種式1化合物。在一項實施方案中,中間體未從反應(yīng)混合物中分離出來。所述的至少一種式2化合物可以是游離堿形式或鹽形式。在一項實施方案中,所述的至少一種式2化合物是鹽。本文所用的"鹽"可原位制備或通過使游離堿與適宜的^A應(yīng)來單獨地制備。示例性的鹽包括但不限于鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、乙酸鹽、苯曱酸鹽、檸檬酸鹽、半胱氨酸鹽、富馬酸鹽、乙醇酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、石危酸鹽和氯笨璜酸鹽。在另一項實施方案中,鹽可以選自烷基磺酸鹽和芳基磺酸鹽。在一項實施方案中,所述的至少一種式2化合物是鹽酸鹽形式或硫酸鹽形式。本文所用的"硝化劑"指可以給化合物加上-]\02取代基或者可以將現(xiàn)有取代基轉(zhuǎn)化為-N02取代基的試劑。示例性的硝化試劑包括硝酸和硝酸鹽,例如堿金屬鹽,例如KN03。當(dāng)硝化劑為硝酸時,硝酸的濃度可以為至少80%,例如85%、88%、90%、95%、99%或甚至是100%。硝化劑可以在任意被本領(lǐng)域技術(shù)人員視為適宜的溶劑中與所述的至少一種式2化合物反應(yīng)。在一項實施方案中,反應(yīng)在疏酸和/或硫酸鹽的存在下進(jìn)行。在一項實施方案中,所用的硫酸為濃的硫酸,例如濃度為至少50%、60%、70%、80%、85%、卯%或至少95%。在一項實施方案中,所述的至少一種硝化劑相對于所述的至少一種式2化合物而言以摩爾過量提供。適宜的摩爾過量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員來決定,可以包括但不限于諸如至少1.05的值,例如摩爾過量為1.05至1.75當(dāng)量,例如摩爾過量為1.05至1.5當(dāng)量、1.05至1.25當(dāng)量或者1.05至1.1當(dāng)量。在另一項實施方案中,摩爾過量為1.05、1.1、1.2、1.3或1.4當(dāng)量。在一項實施方案中,通過歷經(jīng)一段時間加入所述的至少一種硝化劑來使所述的至少一種硝化劑與所述的至少一種式2化合物反應(yīng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定加入全部量的硝化劑的時間段以使反應(yīng)條件最優(yōu)化。例如,硝化試劑的加入可通過例如HPLC來監(jiān)測,以控制所述至少一種硝化劑的用量.在一項實施方案中,所述至少一種硝化劑的總量歷經(jīng)至少1小時的一段時間、例如至少2小時、至少3小時、至少5小時、至少10小時、至少24小時的一段時間或者1小時至1周、l小時至48小時、l小時至24小時、1小時至12小時的一段時間加入。所述的至少一種硝化劑可以;故連續(xù)地加入。在一項實施方案中,硝化劑可與所述的至少一種式2化合物在0至25'C、例如5至15匸、5至10n或10至15C的溫度下反應(yīng)。本文所用的"中間體"指在原料和終產(chǎn)物之間作為中間產(chǎn)物形成的化合物。在一項實施方案中,中間體為所述至少一種式2化合物硝化的產(chǎn)物。例如,中間體可以為至少一種式3化合物或其鹽。中間體可以以游離堿或鹽、例如本文公開的任意鹽的形式存在。在一項實施方案中,中間體為硫酸鹽。在一項實施方案中,中間體未從反應(yīng)混合物中分離出來。本文所用的"反應(yīng)混合物"指包含反應(yīng)物之間的化學(xué)反應(yīng)的至少一種產(chǎn)物以及副產(chǎn)物如雜質(zhì)(包括具有所不希望的立體化學(xué)的化合物)、溶劑和任意殘余的反應(yīng)物如原料的溶液或漿狀液。在一項實施方案中,中間體為硝化產(chǎn)物且存在于反應(yīng)混合物中,所述反應(yīng)混合物還可以含有起始反應(yīng)物(例如硝化劑和/或至少一種式2化合物)、副產(chǎn)物(例如式2或式3的CV差向異構(gòu)體)。在一項實施方案中,反應(yīng)混合物為漿狀液,其中漿狀液可以是包含至少一種固體和至少一種液體(例如水、酸或溶劑)的組合物,例如固體的混懸液或分散液。在一項實施方案中,硝化反應(yīng)產(chǎn)生中間體,同時產(chǎn)生低量的相應(yīng)C4-差向異構(gòu)體。例如,當(dāng)中間體為至少一種式3化合物時,硝化導(dǎo)致以通過高效液相色鐠法測定的低于10%的量形成式3的C4-差向異構(gòu)體。在另一項實施方案中,C4-差向異構(gòu)體的存在量低于5%、低于3%、低于2%、低于1%或低于0.5%。各步驟即硝化、還原和酰化的HPLC參數(shù)在實施例章節(jié)中提供。在一項實施方案中,進(jìn)行硝化反應(yīng)以便原料如所述的至少一種式2化合物的量是低的。在一項實施方案中,所述的至少一種式2化合物在硝化產(chǎn)物中的存在量通過HPLC測定低于10%或者低于5%、低于3%、低于2%、4氐于1%或{氐于0.5%。在一項實施方案中,硝化可以大規(guī)模地進(jìn)行。在一項實施方案中,"大M^莫"指使用至少1克式2化合物,例如使用至少2克、至少5克、至少10克、至少25克、至少50克、至少100克、至少500克、至少lkg、至少5kg、至少10kg、至少25kg、至少50kg或至少100kg。在一項實施方案中,還原反應(yīng)形成至少一種式4化合物或其鹽,在一項實施方案中,(b)中的進(jìn)一步反應(yīng)包括將中間體還原。在另一項實施方案中,該方法進(jìn)一步包括將還原的中間體進(jìn)行酰化。本文公開的另一項實施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法,其中R!為氫,R2為叔丁基,R為-NR3R4,其中R3為曱基且Rt為甲基,且n為1,該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng),以生成包含中間體的反應(yīng)混合物,(b)進(jìn)一步使中間體反應(yīng),以形成至少一種式1化合物。在一項實施方案中,中間體未從反應(yīng)混合物中分離出來。在一項實施方案中,所述的至少一種式l化合物為替加環(huán)素。本文公開的另一項實施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽其中&和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中Rs和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(CVC4)烷基;且n為l匪4,該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng),以產(chǎn)生漿狀液,的方法,和(b)進(jìn)一步使?jié){狀液反應(yīng),以形成至少一種式1化合物。在一項實施方案中,Ri為氫,R2為叔丁基,R為-NRsR4,其中R3為曱基且R4為甲基,且n為l。在另一項實施方案中,所述的至少一種式l化合物為替加環(huán)素。本文公開的另一項實施方案是制備至少一種式3化合物或其鹽的方法,其中R為-NR3Rj,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Ct)烷基,該方法包括使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng),其中該反應(yīng)在5至15'C的溫度下進(jìn)行。本文公開的另一項實施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>其中Ri和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NRsR4,其中R3和Rt各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且n為l-4,該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng),以生成包含中間體的反應(yīng)混合物;和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>(b)進(jìn)一步使中間體反應(yīng),以形成至少一種式l化合物,其中(a)中的反應(yīng)在5至15。C的溫度下進(jìn)行。在一項實施方案中,Ri為氫,R2為叔丁基,R3為甲基,R4為曱基,且n為1。還原一項實施方案公開了制備至少一種式4化合物或其鹽的方法,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>其中11=^113114,其中Rs和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Q)烷基,該方法包括將至少一種還原劑與反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液合并,所述反應(yīng)混合物包含由至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽在一項實施方案中,該方法描述了"單罐(one-spot)"方法,其中硝化和還原步驟在未v^Uf化反應(yīng)混合物中分離出硝化產(chǎn)物的情況下進(jìn)行。在一項實施方案中,Ri為氫,R2為叔丁基,Rs為甲基,R4為曱基,且n為1。本文所用的"還原劑"指給化合物加氫的化學(xué)物質(zhì)。在一項實施方案中,還原劑為氫氣。還原可以在如本領(lǐng)域技術(shù)人員所確定的適宜壓力的氳氣氛中進(jìn)4亍。在一項實施方案中,氫氣以1至75psi的壓力、例如1至50psi的壓力或1至40psi的壓力提供。在另一項實施方案中,還原劑在至少一種催化劑的存在下^皮提供。示例性的催化劑包括但不限于稀土金屬氧化物、含有第VIII族金屬的催化劑以及含有第VIII族金屬的催化劑的鹽。含有第VIII族金屬的催化劑的實例為把,例如披4巴碳。當(dāng)催化劑為披把碳時,在一項實施方案中,催化劑相對于在與所述至少一種硝化劑反應(yīng)前存在的所述至少一種式2化合物的量而言以0.1份至1份的量存在。在一項實施方案中,中間體為至少一種式3化合物。在一項實施方案中,在式3化合物中,Ri為氫,R2為叔丁基,Rs為甲基,R4為甲基,且n為1。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定用于還原反應(yīng)的適宜溶劑。在一項實施方案中,在合并之前,例如在還原反應(yīng)之前,將反應(yīng)混合物與包含至少一種(d-Cs)醇的溶劑合并。所述的至少一種(d-Cs)醇可以選自例如曱醇和乙本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定用于還原反應(yīng)的適宜溫度。在一項實施方案中,合并例如還原在0。C至50t:的溫度、例如20'C至40。C的溫度或26°C至28X:的溫度下進(jìn)行。在一項實施方案中,在合并之后,例如在還原反應(yīng)之后,將所得反應(yīng)混合物加入溶劑系統(tǒng)中或與溶劑系統(tǒng)合并,所述溶劑系統(tǒng)包含(d-Q)支鏈醇和(d-Cs)烴。在一項實施方案中,(d-C8)支鏈醇為異丙醇。在一項實施方案中,(C廣Cs)烴選自己烷、庚烷和辛烷。在一項實施方案中,在合并之后,例如在還原反應(yīng)之后,將所得反應(yīng)混合物在0"C至50。C的溫度、例如0"C至10匸的溫度下加入溶劑系統(tǒng)中。在一項實施方案中,該方法進(jìn)一步包括分離出固體形式或固體組合物形式的所述的至少一種式4化合物。在一項實施方案中,所述的至少一種式4化合物以鹽、例如本文所述的任意鹽形式被沉淀或分離出來。在一項實施方案中,固體組合物包含通過高效液相色鐠法測定的低于10%的量的式4的C4-差向異構(gòu)體。在另一項實施方案中,CV差向異構(gòu)體以低于5%、低于3%、低于2%、低于1%或低于0.5%的量存在。在一項實施方案中,固體組合物包含通過高效液相色語法測定的低于2%的量、例如低于1%或低于0.5%的量的所述的至少一種式2化合物。在一項實施方案中,還原可以大規(guī)模地進(jìn)行。在一項實施方案中,"大規(guī)模"指使用至少1克式2化合物,例如使用至少2克、至少5克、至少10克、至少25克、至少50克、至少100克、至少500克、至少lkg、至少5kg、至少10kg、至少25kg、至少50kg或至少100kg。本文7>開的另一項實施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法,其中Rt和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者R!和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3Rt,其中議3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-CO烷基;且n為l-4,該方法包括(a)將至少一種還原劑與反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液合并,所述的反應(yīng)混合物包含由至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽之間的反應(yīng)制備的中間體,以形成第二中間體;和(b)進(jìn)一步使反應(yīng)混合物中的第二中間體反應(yīng),以制備至少一種式1化合在一項實施方案中,Ri為氫,R2為叔丁基,R3為甲基,R4為曱基,且n為1。在一項實施方案中,中間體為至少一種式3化合物或其鹽,且第二中間體為至少一種式4化合物或其鹽,在一項實施方案中,(b)中的進(jìn)一步反應(yīng)包括將第二中間體酰化。在一項實施方案中,在?;埃诙虚g體可以以鹽的形式被沉淀或分離出來。本文公開的另一項實施方案是制備至少一種式4化合物或其鹽的方法,其中R=-NR3R4,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Ct)烷TI)TOH[f0HOOHO基,該方法包括將式3中間體或其鹽還原,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>在一項實施方案中,式3的中間體可以存在于反應(yīng)混合物漿狀液中。在一項實施方案中,還原包括將至少一種還原劑與反應(yīng)混合物合并。本文公開的另一項實施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>其中R1和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NRsR4,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(CrQ)烷基;且n為l-4,該方法包括(a)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng),以制備反應(yīng)混合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>(b)在^反應(yīng)混合物中分離出或沉淀出任意固體的情況下,將至少一種還原劑與反應(yīng)混合物合并,以制備中間體;和(c)由中間體制備至少一種式1化合物。本文7>開的另一項實施方案是制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法,其中Ri和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Rt和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR;jR4,其中議3和Rj各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且n為l-4,該方法包括(a)在氫存在下,將至少一種含有第VIII族金屬的催化劑與反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液合并,所述的反應(yīng)混合物是由至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽之間的反應(yīng)制備的,在一項實施方案中,所述的至少一種含有第VIII族金屬的催化劑相對于在與所述至少一種硝化劑反應(yīng)前存在的所述至少一種式2化合物的量而言以0.1份至1份的量存在。本文公開的另一項實施方案是包含至少一種式4化合物或其鹽的組合物其中R為-NRsR4,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-Ct)烷基,其中式4的CV差向異構(gòu)體以通過高效^目色鐠法測定的低于10%的量存在。在一項實施方案中,Ri為氫,R2為叔丁基,R3為曱基,Rt為甲基,且n為1。?;_內(nèi)容的一項實施方案提供了制備至少一種式l化合物或其可藥用鹽的方法M1、CH2)n1其中&和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,如(C3-C6)環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán),如5元環(huán);R為-NR3R4,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(CrCO烷基;且n為1-4,該方法包括在反應(yīng)介質(zhì)中使至少一種式4化合物或其鹽4與至少一種氨基?;衔锓磻?yīng)。在一項實施方案中,反應(yīng)介質(zhì)可選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時至少一種堿性溶劑。在一項實施方案中,制備式1化合物的方法為制備替加環(huán)素或其可藥用鹽的方法替加環(huán)素在一項實施方案中,變量n為l,Ri為氫,R2為叔丁基,且R3和Rt各自為曱基。在另一項實施方案中,變量n為l,Ri和R2與N—起形成吡咯烷基,且R3和R4各自為甲基。所述的至少一種式4化合物的鹽可以為卣化鹽,例如鹽酸鹽。反應(yīng)介質(zhì)可以是選自極性非質(zhì)子溶劑的溶劑或這些溶劑的混合物。在一項實施方案中,極性非質(zhì)子溶劑選自乙腈、1,2-二曱氧基乙烷、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、六甲基磷酰胺、N,N,-二甲基亞乙基脲、N,N,-二甲基亞丙基脲、二氯甲烷、N-甲基吡咯烷酮、四氫呋喃及其混合物。在另一項實施方案中,極性非質(zhì)子溶劑選自乙腈、二甲基甲酰胺、N,N,-二甲基亞丙基脲、N-甲基吡咯垸酮、四氫呋喃及其混合物。所述的至少一種堿性溶劑可以為乙腈與N,N,-二甲基亞丙基脲的混合物。在另一項實施方案中,所述的至少一種堿性溶劑可以為水與N,N,-二甲基亞丙基脲的混合物。在另一項實施方案中,所述的至少一種堿性溶劑為N,N,-二甲基亞丙基脲。反應(yīng)介質(zhì)可以為水性介質(zhì)。在另一項實施方案中,所述的在沒有堿存在時的至少一種堿性溶劑為在沒有堿存在時的水。在另一項實施方案中,反應(yīng)介質(zhì)可以為在沒有反應(yīng)物堿存在時的至少一種堿性溶劑。堿性溶劑為能夠部分或完全接受質(zhì)子的溶劑。反應(yīng)物堿指在反應(yīng)開始時加入的、無論是與所述的至少一種式4化合物和所述的至少一種M?;衔锿瑫r加入的還是依次加入的并且能夠部分或完全接受質(zhì)子的堿。反應(yīng)物堿也指在反應(yīng)期間加入的堿。所述的至少一種氨基?;衔锟蛇x自氨基?;栈铩?;约盎旌系陌被;?。在一項實施方案中,M?;衔餅橹辽僖环N式6的氨基酰基卣化物或其鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>其中Ri和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Rt和R2與N—起形成雜環(huán);n為l-4;且其中Q為選自氟、溴、氯和碘的鹵素。在另一項實施方案中,Q為氯。式6化合物的鹽可選自卣化鹽。卣化鹽指與卣素陰離子相互作用所形成的任意鹽,例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽和氫碘酸鹽。在一項實施方案中,卣化鹽為鹽酸鹽。所述的至少一種式6的氨基跣基離化物可通過包括如下步驟的方法來A)使至少一種式7的酯或其鹽與至少一種胺RiR2NH反應(yīng),以制備至少一種羧酸,其中R!和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);X為選自溴、氯、氟和硤的卣素;A為-OR。其中選自直鏈或支鏈(d-C6)烷基和芳基烷基,例如芳基(d-Q)烷基,例如其中芳基為苯基;n為14;和B)使所述的至少一種羧酸與至少一種氯化劑反應(yīng),得到至少一種式6的氨基酰基化合物或其鹽。在一項實施方案中,Ri和R6可以各自為叔丁基。在另一項實施方案中,Ri和R2與N—起可以形成雜環(huán),例如吡咯烷,且R6可以為芳基烷基,例如節(jié)基。在另一項實施方案中,n為l。在另一項實施方案中,X為溴。在另一項實施方案中,所述的至少一種式7的酯為鹽酸鹽。反應(yīng)中可以存在與式7的酯相比而言過量的胺RiR2NH以制備至少一種羧酸。在一項實施方案中,所述的至少一種氯化劑可以為亞硫酰氯。在另一項實施方案中,所述的至少一種羧酸與至少一種氯化劑的反應(yīng)包括加入催化量的二甲基甲酖胺。反應(yīng)中可以存在相對于所述的至少一種羧酸而言過量的氯化劑,以獲得至少一種式6的M?;衔铩.?dāng)R6為芳基烷基時,所述至少一種式7化合物的芳基烷基可以在與所述的至少一種胺反應(yīng)后通過氬化裂解,以獲得所述的至少一種羧酸。所述至少一種羧酸與氯化劑的反應(yīng)可以在55t;至85°C、例如80。C至85。C、進(jìn)一步例如55匸的溫度下進(jìn)行。在一項實施方案中,可以向反應(yīng)中加入另外量的氯化劑以使反應(yīng)完全,例如達(dá)到低于4%羧酸的水平。在使至少一種羧酸與至少一種氯化劑反應(yīng)后,可以過濾所得的混懸液以分離出鹽,例如叔丁胺鹽酸鹽。式6的^J^酰基鹵化物可以以鹽酸鹽的形式被分離或者用無機(jī)酸如鹽酸進(jìn)行處理,以制備M酰基離化物鹽。在另一項實施方案中,至少一種式6的M?;u化物通過包括如下步驟的方法獲得使至少一種式8的羧酸或其鹽其中R5選自直鏈或支鏈(d-C6)烷基,且n為1至4,與至少一種氯化劑反應(yīng),獲得至少一種式6的U?;栈锘蚱潲}。在另一項實施方案中,所述的至少一種式8的羧酸為鹵化鹽,例如鹽酸鹽。至少一種式8化合物與至少一種氯化劑的反應(yīng)時間可以為1至50小時、例如2至45小時、進(jìn)一步例如1至3小時。所述的至少一種式8的羧酸的粒徑低于150微米、例如低于110微米、進(jìn)一步例如為50至100微米。具有給定粒度的式8化合物可通過碾磨化合物來獲得。至少一種式4化合物與所述至少一種M酰基化合物的反應(yīng)可以在0'C至30'C、例如20r至25'C、例如10t:至17X:、例如0C至6'C、進(jìn)一步例如2X:至8匸的溫度下進(jìn)行。反應(yīng)時間可以為1小時至24小時、例如0.5小時至4小時、進(jìn)一步例如2小時至8小時。在反應(yīng)中可以使用相對于式4化合物的量而言過量的JL^酰基化合物。在一項實施方案中,過量可以為3當(dāng)量#^酰基化合物對比于1當(dāng)量的所迷至少一種式4化合物。在另一項實施方案中,水性介質(zhì)與至少一種式4化合物的比例可以為6:1w/w或5:1體積比。在一項實施方案中,#^酰基化合物#皮加入至少一種式4化合物在水性介質(zhì)中的溶液中或者與之合并。在一項實施方案中,當(dāng)反應(yīng)介質(zhì)為水性介質(zhì)時,水性介質(zhì)的pH可調(diào)節(jié)至pH為4至9、例如5至7.5、例如6.3至6.7、例如7.0至7.5、進(jìn)一步例如6.5、還進(jìn)一步例如7.2。水可以在調(diào)節(jié)pH之前加入。調(diào)節(jié)pH可以包括加入堿,包括但不限于氫氧化銨。氫氧化銨的濃度可以為25%至30%。在另一項實施方案中,酸如鹽酸可用于調(diào)節(jié)pH。在pH調(diào)節(jié)期間反應(yīng)介質(zhì)的溫度可以為-5匸至25匸、例如5匸至8t:、進(jìn)一步例如0。C至51C。在pH調(diào)節(jié)后,可以將至少一種有機(jī)溶劑或溶劑混合物加入水性介質(zhì)中。在一項實施方案中,所迷的至少一種有機(jī)溶劑混合物可以包含甲醇和二氯曱烷。甲醇的濃度可以為5%至30%,包括但不限于20%和30%。在另一項實施方案中,所述的至少一種有機(jī)溶劑或溶劑混合物包含四氫呋喃。混合物的溫度可以為15'C至25X:。在一項實施方案中,水性介質(zhì)可以用至少一種極性質(zhì)子溶劑和至少一種極性非質(zhì)子溶劑的混合物來萃取。在一項實施方案中,所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑包括二氯甲烷,且所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑包括甲醇。在另一項實施方案中,水性介質(zhì)用至少一種極性非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷來萃取。萃取可以在-5。C至25。C、進(jìn)一步例如在0C至5'C的溫度下進(jìn)行。在另一項實施方案中,在各萃取之后,將水性介質(zhì)的pH調(diào)節(jié)至7.0至7.5、例如7.2。萃取操作可以重復(fù),例如重復(fù)最高達(dá)10次。在一項實施方案中,所合并的有機(jī)萃取物可以用干燥劑如硫酸鈉進(jìn)行處理。有機(jī)萃取物還可以用活性碳如NoritCA-l進(jìn)行處理。通過過濾分離出固體以獲得溶液。在一項實施方案中,溶液可以被濃縮以獲得式l化合物。由該反應(yīng)獲得的式1化合物可以在至少一種有機(jī)溶劑或溶劑混合物中結(jié)晶。在一項實施方案中,有機(jī)溶劑混合物包含甲醇和二氯甲烷。結(jié)晶可以例如在-15。C至155。C、例如0X:至15。C、進(jìn)一步例如2。C至5。C的溫度下發(fā)生。在另一項實施方案中,在萃取之后,可以將所得的至少一種極性質(zhì)子溶劑和至少一種極性非質(zhì)子溶劑的有機(jī)混合物濃縮以獲得漿狀液,并過濾以獲得所迷的至少一種式1化合物。濃縮和過濾可以例如在O'C至5'C的溫度下發(fā)生。制備式1化合物的方法可采用高于5克、例如高于10克、例如高于50克、例如高于100克、例如高于500克、例如高于l公斤、進(jìn)一步例如高于10公斤的式4的胺來進(jìn)行。一項實施方案公開了通過本文所述的任一種方法制備的化合物,包括但不限于式l化合物、式4化合物、式6化合物、式7化合物、式8化合物及其鹽。另一項實施方案包括包含通過本文所述的任一種方法制備的化合物的組合物。該組合物還可以包含可藥用載體。在一項實施方案中,組合物可包含至少一種式1化合物或其可藥用鹽其中n為l,Ri和R2與N—起形成叔丁基,且R3和Rj各自為甲基。在另一項實施方案中,組合物可以包含至少一種式1化合物或其可藥用鹽和低于0.5%的所述至少一種式1化合物或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體其中Ri和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中議3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且n為1-4。在另一項實施方案中,組合物可包含替加環(huán)素或其可藥用鹽和低于0.5%的替加環(huán)素或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體在一項實施方案中,通過本文公開的任一種方法所制備的式1化合物含有通過高效液相色譜法測定的低于10.0%的雜質(zhì)、例如低于5%的雜質(zhì)、例如低于2%的雜質(zhì)、進(jìn)一步例如1-1.4%的雜質(zhì)。在另一項實施方案中,替加環(huán)素式1化合物含有通過高效液相色鐠法測定的低于1.0%的量的Cr差向異構(gòu)體、例如低于0.5%的Cr差向異構(gòu)體、進(jìn)一步例如低于0.2%的Cr差向異構(gòu)體。在一項實施方案中,式1化合物含有通過高效、^目色鐠法測定的低于1%的米諾環(huán)素、例如低于0.6%的米諾環(huán)素。在另一項實施方案中,式1化合物含有低于5%的二氯甲烷、例如低于2-3%的二氯甲烷。^^開內(nèi)容的一項實施方案包括制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法其中R!和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者R!和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3Rj,其中113和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且ii為l-4,該方法包括A)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng),式2以制備包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液,式3B)將至少一種還原劑與反應(yīng)混合物漿狀液合并,以制備至少一種式4化合物或其鹽,式4C)使至少一種式4化合物與至少一種M?;衔镌诜磻?yīng)介質(zhì)中反應(yīng),所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時至少一種堿性溶劑。通過該方法制備的式1化合物可以是替加環(huán)素。^^開內(nèi)容的另一項實施方案包括制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法其中Ri和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NRsR4,其中議3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-CO烷基;且n為l-4,該方法包括A)將至少一種還原劑與包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液合并,式3以制備至少一種式4化合物或其鹽,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>式4B)使所述的至少一種式4化合物與至少一種氨基酰基化合物在反應(yīng)介質(zhì)中反應(yīng),所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時至少一種堿性溶劑。在另一項實施方案中,通過上述方法制備的式1化合物可以為替加環(huán)素。純化;^^開內(nèi)容的一項實施方案提供了純化至少一種式l化合物或其可藥用鹽的方法,式l其中Ri和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NRsR4,其中113和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(CVC4)烷基;且ii為l-4,該方法包括A)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,以獲得第一混合物,B)在0C至40。C的溫度下,將第一混合物混合至少一段時間,例如15分鐘至2小時,和C)獲得所述的至少一種式1化合物。本文所用的術(shù)語"獲得"指以有用的純度水平、包括但不限于高于90%、95%、96%、97%、98%和99%的純度水平分離化合物。純度水平可通過高壓液相色諳法來測定。在一項實施方案中,純化至少一種式l化合物的方法包括下述步驟A)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,以獲得第一混合物,B)在30'C至40X:的溫度下,將第一混合物混合一段時間,C)將第一混合物冷卻至15C至25X:的溫度,在不混合的情況下使混合物靜置第二段時間,D)將第一混合物冷卻至on至6'C的溫度,在不混合的情況下使混合物靜置第三段時間,和E)獲得所述的至少一種式1化合物。在一項實施方案中,該方法可以包括至少一種式l化合物,其中n為1,Rn為氫,R2為叔丁基,R3和R4各自為曱基。另一項實施方案包括至少一種式l化合物,其中n為l,Ri和R2與N—起形成吡咯烷基,R3和R4各自為甲基。與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并的至少一種式l化合物可以以選自固體、漿狀液、混懸液和溶液的形式被提供。在一項實施方案中,所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑可以選自丙酮、1,2-二氯乙烷、乙酸甲酯、甲基乙基酮、曱基異丁基酮、二氯甲烷和乙酸乙酯。在另一項實施方案中,所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑可以選自丙酮和二氯曱烷。在另一項實施方案中,所述至少一種極性質(zhì)子溶劑可以選自甲醇、乙醇、異丙醇和叔丁醇。在另一項實施方案中,所述至少一種極性質(zhì)子溶劑可以為甲醇。所述至少一種極性非質(zhì)子溶劑與至少一種極性質(zhì)子溶劑的組合可包括丙酮和甲醇。另一項實施方案提供了至少一種極性非質(zhì)子溶劑"二氯甲烷,,與至少一種極性質(zhì)子溶劑"甲醇"的組合。在另一項實施方案中,至少一種極性非質(zhì)子溶劑與至少一種極性質(zhì)子溶劑的組合可以包括乙酸甲酯和曱醇。式1化合物可以例如與等體積的至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并。在一項實施方案中,第一混合物可以例如混合30分鐘至2小時的第一段時間,此時溫度為15"C至25X:,然后混合30分鐘至2小時的第二段時間,此時溫度為or至2t:。在一項實施方案中,第一段時間和第二段時間各自為1小時。在另一項實施方案中,該方法可以包括在15t:至25'C的溫度下將第一混合物混合至少一段時間,所述的至少一段時間為30分鐘至2小時,然后過濾第一混合物以獲得固體。該方法還可以包括在15匸至25"C的溫度下將固體與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并、例如以等體積合并達(dá)30分鐘至2小時的第一段時間和過濾以獲得第二固體。在另一項實施方案中,這些合并和過濾步驟可重復(fù)二至十五次。純化式l化合物的方法可以進(jìn)一步包括由第一混合物獲得固體,將固體與至少一種極性質(zhì)子溶劑和至少一種極性非質(zhì)子溶劑合并以獲得第二混合物。第二混合物可以例如包含甲醇和二氯曱烷,其中甲醇:二氯甲烷的體積比為1:5至1:15。在一項實施方案中,第二混合物可以在30'C至36t:的溫度下混合,然后過濾以獲得溶液。在另一項實施方案中,溶液中極性質(zhì)子溶劑的濃度可以被降低至低于5%的水平,并且可以將溶液混合、例如在O匸至6t:的溫度下混合一段時間、例如30分鐘至2小時的一段時間,然后過濾。在一項實施方案中,混合第一混合物可以在10至20分鐘、例如15分鐘的一段時間期間發(fā)生。在一項實施方案中,將第一混合物冷卻至15'C至25。C的溫度和使混合物在不混合的情況下靜置可以在30分鐘至3小時、例如1小時至2小時的第二段時間期間發(fā)生。第一混合物可進(jìn)一步被冷卻至0。C至6。C的溫度并使其在不混合的情況下靜置30分鐘至2小時、例如1小時的第三段時間。獲得式1化合物可以包括通過至少一種選自減熱原過濾器和澄清過濾器的濾器來過濾本文所述的任意混合物。如本文所公開的那樣,混合可以通過釆用機(jī)械混合裝置如攪拌器或攪動器來進(jìn)行?;旌线€可通過將式l化合物溶解在溶劑系統(tǒng)中來實現(xiàn)。升高溫度可以增加溶解度。在一項實施方案中,當(dāng)至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并時,所述的至少一種式1化合物可以以其可藥用鹽的形式,皮使用。當(dāng)至少一種式1化合物作為本發(fā)明方法的產(chǎn)物被獲得時,所述的至少一種式l化合物可以以其可藥用鹽的形式被回收。在另一項實施方案中,當(dāng)式l化合物通過本發(fā)明的方法獲得時,該化合物可以通過加入酸而被轉(zhuǎn)化為其可藥用鹽。在一項實施方案中,所述的至少一種式1化合物可以為[4S-(4a,12aa)l-4,7-雙(二甲基氨基)-9-(叔丁基氨基)乙?;鵯氨基H,4,4a,5,5a,6,ll,12a-八氬-3,10,12,12a-四羥基-l,ll-二氧^Rr2-并四苯-甲酰胺,例如可藥用鹽,例如HC1鹽。在另一項實施方案中,所述的至少一種式1化合物可以為4S-(4a,12aa)-4,7-雙(二甲基氨基)-9-[(吡咯烷基)乙酰基氨基-1,4,4a,5,5a,6,ll,12a-八氫-3,10,12,12a-四羥基-l,ll-二氧代-2-并四苯-甲酰胺,例如可藥用鹽,例如HC1鹽。純化至少一種式1化合物的方法可以是純化替加環(huán)素的方法,該方法包括A)將替加環(huán)素與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,以獲得第一混合物,B)使第一混合物在On至40t:的溫度下混合至少一段時間,例如15分鐘至2小時,和C)獲得替加環(huán)素。與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并的替加環(huán)素可以以選自固體、漿狀液、混懸液和溶液的形式被提供。在一項實施方案中,由該方法獲得的替加環(huán)素可以含有通過高壓液相色鐠法(HPLC)測定的低于1%的替加環(huán)素或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體。由該方法獲得的至少一種式1化合物可以含有通過HPLC測定的低于3.0%的雜質(zhì)、例如低于1.0%的雜質(zhì)、例如低于0.7%的雜質(zhì)。在另一項實施方案中,至少一種式1化合物可以含有通過HPLC測定的低于2%的式1化合物或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體、例如低于1%的C-4差向異構(gòu)體、例如^f氐于0.5%的C-4差向異構(gòu)體。該方法可以在高于5克、例如高于50克、例如高于100克、例如高于500克、例如高于l公斤、進(jìn)一步例如高于IO公斤的至少一種式I化合物的水平上進(jìn)行。一項實施方案公開了通過本文所述的任一種方法制備的化合物,包括但不限于式1化合物和替加環(huán)素。另一項實施方案包括包含通過本文所述的任一種方法制備的化合物的組合物。該組合物可進(jìn)一步包含可藥用載體。在一項實施方案中,該組合物可包含至少一種式1化合物或其可藥用鹽式l其中n為l,Ri為氫,R2為叔丁基,且R3和R4各自為甲基。^^>開內(nèi)容的一項實施方案包括制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法其中&和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中Rs和Rt各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且n為l-4,該方法包括A)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng),式2以制備反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液,其包含中間體、例如至少一種式3化合物或其鹽,式3B)將至少一種還原劑與反應(yīng)混合物漿狀液合并,以制備第二中間體,例如至少一種式4化合物或其鹽,C)使第二中間體與至少一種氨基?;衔镌诜磻?yīng)介質(zhì)中反應(yīng),以獲得至少一種式l化合物。在一項實施方案中,反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時至少一種堿性溶劑。另外的步驟可以包括例如下述步驟中的至少一個步驟D)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,以獲得第一混合物,E)在例如0。C至40匸的溫度下,將第一混合物混合至少一段時間、例如15分鐘至2小時,和F)獲得所述的至少一種式l化合物。在一項實施方案中,所公開方法的任意中間體可以4皮分離或沉淀出來。在另一項實施方案中,所公開方法中的任意方法的兩個或多個步驟為"單罐"操作。;^^開內(nèi)容的另一項實施方案包括制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法其中Ri和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者I^和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中113和Ri各自獨立地選自氳、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且n為l-4,該方法包括A)將至少一種還原劑與包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物、例如反應(yīng)混合物漿狀液合并,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>B)使中間體與至少一種氨基?;衔镌谶x自水性介質(zhì)的反應(yīng)介質(zhì)中反應(yīng),以獲得式l化合物。在一項實施方案中,在沒有反應(yīng)物堿存在時反應(yīng)介質(zhì)可以選自至少一種堿性溶劑。另外的步驟可以包括例如下述步驟中的至少一個步驟C)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,以獲得第一混合物,D)在例如0'C至40t:的溫度下,將第一混合物混合至少一段時間、例如15分鐘至2小時,和E)獲得所述的至少一種式1化合物。4^>開內(nèi)容的另一項實施方案包括制備至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>式l其中1^和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者I^和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中議3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(CrC4)烷基;且n為l-4,該方法包括A)使至少一種式4化合物或其鹽與至少一種M酰基化合物在反應(yīng)介質(zhì)中反應(yīng),以獲得式l化合物,所述反應(yīng)介質(zhì)例如選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時至少一種堿性溶劑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>式4另外的步驟可以包括下述步驟中的至少一個步驟B)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,以獲得第一混合物,c)在例如on至4ox:的溫度下,將第一混合物混合至少一段時間、例如15分鐘至2小時,和D)獲得所述的至少一種式1化合物。所公開的制備式1化合物的這些方法中的任一種可以是制備其中n為1、Ri為氫、R2為叔丁基且R3和R4各自為甲基的式1化合物的方法。藥物組合物本文所用的"藥物組合物"指醫(yī)藥組合物。藥物組合物可含有至少一種可藥用栽體。本文所用的"可藥用賦形劑"指適于施用本文所提供的化合物的藥用載體或賦形劑,包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知適于特定施用方式的任意這類載體。例如,用于胃腸道外、真皮內(nèi)、皮下或局部應(yīng)用的溶液或混懸液可包括無菌稀釋液(例如注射用水、鹽水溶液、不揮發(fā)油等);天然存在的植物油(例如芝麻油、椰子油、花生油、棉籽油等);合成脂肪載體(例如油酸乙酯、聚乙二醇、甘油、丙二醇等,包括其它合成溶劑);抗微生物劑(苯甲醇、尼泊金甲酯等);抗氧化劑(例如抗壞血酸、亞硫酸氫鈉等);螯合劑(例如乙二胺四乙酸(EDTA)等);緩沖劑(例如乙酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽等);和/或用于調(diào)節(jié)張力的物質(zhì)(例如氯化鈉、右旋糖等);或其混合物。進(jìn)一步舉例而言,當(dāng)靜脈內(nèi)施用時,適宜的載體包括生理鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)以及含有增稠和增溶物質(zhì)如葡萄糖、聚乙二醇、聚丙二醇等及其混合物的溶液。作為非限制性的實例,替加環(huán)素可任選與一種或多種可藥用賦形劑合并,并且可以以諸如片劑、膠嚢劑、可M粉末、顆粒或含有例如約0.05至5%助懸劑的混懸劑或者含有例如約10至50%糖的糖漿劑和含有例如約20至50%乙醇的酏劑等的形式口月施用,或者以無菌可注射溶液或含有在等張介質(zhì)中的約0.05至5%助懸劑的混懸液的形式胃腸道外施用。這些藥物制劑可含有與載體組合的例如約25至約卯%重量的活性成分、更通常是約5%至60%重量。其它制劑在美國專利No.5,494,903和5,529,990中有討論,將其引入本文作為參考。術(shù)語"可藥用鹽"指本公開內(nèi)容中的化合物的酸加成鹽或堿加成鹽??伤幱名}是保留母體化合物的活性并且對施用其的受治療者以及在施用其的背景中不產(chǎn)生任何有害或不希望的作用的鹽??伤幱名}包括金屬復(fù)合物以及無機(jī)酸和有機(jī)酸的鹽。可藥用鹽包括金屬鹽如鋁鹽、4丐鹽、鐵鹽、鎂鹽、錳鹽和復(fù)合物鹽。可藥用鹽包括酸的鹽,例如乙酸鹽、天冬氨酸鹽、垸基磺酸鹽、芳基磺酸鹽、醋氧乙鹽(axetil)、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、丁酸鹽、乙二胺四乙酸鉤鹽、樟腦磺酸鹽(camsylic)、碳酸鹽、氯苯甲酸鹽、環(huán)庚賽鹽(cilexetil)、檸檬酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽(edisylic)、十二烷基磺酸鹽(estolicacid)、esyl、乙磺酸鹽(esylic)、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽(gluceptic)、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酸鹽、羥乙酰基氨苯胂酸鹽、環(huán)己磺酸鹽、己基間苯二甲酸鹽(hexylresorcinoic)、哈酸鹽(hydrabamic)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫捵酸鹽、羥萘?xí)跛猁}、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硝酸鹽、曱基硫酸鹽、粘酸鹽、粘康酸鹽、M酸鹽(napsylic)、硝酸鹽、草酸鹽、對硝基甲磺酸鹽、樸酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、鄰苯二曱酸鹽、聚半乳糖醛酸、丙酸鹽、7jC楊酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、M磺酸鹽、對#^^*酸鹽、磺酸鹽、硫酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、teoclic、甲苯磺酸鹽等??伤幱名}可衍生自氨基酸,包括但不限于半胱氨酸。其它可接受的鹽可以例如在Stahl等人,戶/rw附"ceMfcr/5Vito../Vv/^,/es,5^/ecftVfi,肪</f/se,Wiley-VCH;第1版(2002年6月15日)中找到。除了在實施例中以及另有指示時,說明書和權(quán)利要求書中所用的所有數(shù)值應(yīng)被理解為在所有實例中以術(shù)語"約,,進(jìn)行修飾。因此,除非有相反指示,否則本說明書和所附的權(quán)利要求中所給出的數(shù)值參數(shù)是近似值,其可以根據(jù)通過本^^開內(nèi)容所尋求獲得的所需性質(zhì)而改變。最起碼地,并且不是意欲限制等同原則對權(quán)利要求范圍的應(yīng)用,每個數(shù)值參數(shù)應(yīng)當(dāng)考慮有效數(shù)字的數(shù)和常規(guī)四舍五入方法來解釋。雖然設(shè)定公開內(nèi)容的寬范圍的數(shù)值范圍和M是近似值,但是在具體實施例中所給出的數(shù)值被盡可能精確地報道。然而,任意數(shù)值本質(zhì)上包含某些由在它們各自的測試測定中發(fā)現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差所必然產(chǎn)生的誤差。下述實施例用于以非限制性的方式解釋說明本發(fā)明。實施例硝化米諾環(huán)素是根據(jù)美國專利No.3,226,436所述的方法制備的。HPLC分析在下述條件下進(jìn)行柱I證tsilODS35fim,25x0.46cm流動相80%A+20%B,其中A-90%(0.05MKH2P04+5mL三乙胺/L(磷酸鹽+11304至pH6)/10%乙腈,用H3P04調(diào)節(jié)至pH3.0B-乙腈流速l.OmLymin檢測250nm比較例l:9-硝基米諾環(huán)素的制備該比較例描述了米諾環(huán)素的硝化,其中硝化產(chǎn)物被分離出。在攪拌下將13.44g對氯苯磺酸米諾環(huán)素(即對氯苯磺酸[4S畫(4a,12aa)-4,7-雙(二曱基氨基)-l,4,4a,5,5a,6,ll,12a-八氫-3,10,12,12a國四羥基-l,ll-二氧代-2-并四苯甲酰胺)緩慢加入50mL濃硫酸中。將溶液冷卻至0-15匸。緩慢加入硝酸(90%,0.6mL),于0-15。C攪拌溶液1至2小時直至通過HPLC測定反應(yīng)完全。在攪拌下,歷經(jīng)20分鐘將含有中間體9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽(即[4S-(4a,12aa)-9-硝基-4,7-雙(二甲基氨基)-l,4,4a,5,5a,6,ll,12a-八氫-3,10,12,12a-四羥基-l,ll-二氧代-2-并四苯甲酰胺硫酸鹽)的溶液轉(zhuǎn)移至300g冰水混合物中。采用28%氫氧化銨水溶液調(diào)節(jié)淬滅物的pH至5.0-5.5,同時維持溫度在0-8匸之間。過濾沉淀物,用水洗滌(2xl0mL)。在氮氣流下真空干燥固體,獲得9g粗的9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽。HPLC分析(面積%)顯示純度為卯%,C4-差向異構(gòu)體含量為1.5%。MS(FAB):m/z503(M+H),502(M+)。產(chǎn)物通過在其等電點從水溶液中沉淀而分離出。硫酸鹽粗品的摩爾產(chǎn)率為45%。下表1列出了其它硝化操作的數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>可以看出,9-硝基米諾環(huán)素的分離導(dǎo)致高含量的雜質(zhì)。比較例2:9-硝基米諾環(huán)素的制備該比較例描述了米諾環(huán)素的硝化,其中硝化產(chǎn)物被分離出。將2升多頸玻璃燒瓶裝配機(jī)械攪拌器、熱電偶、液體加料管、氮氣管線和連接至30。/。(wt)堿洗滌器的氣體出口。向燒瓶中裝入石危酸66°Be(l,507g,819mL,15moles)。將溶液冷卻至0至2匸。在攪拌下,于0至14。C歷經(jīng)0.7小時將米諾環(huán)素.HC1(效價92.7%,311g,0.58moles)加入硫酸中。在加入后,混合物于0"C攪拌0.5小時,獲得黃色溶液。歷經(jīng)3小時加入硝酸(95.9。/o硝酸根含量,48g,32mL,0.73moles,1.25摩爾當(dāng)量),同時保持混合物在0至2"C。將混合物于0匸攪拌0.3小時(暗紅色/黑色溶液)。HPLC分析(面積%)顯示0%米諾環(huán)素,75.6%9-硝基米諾環(huán)素,8.2%最大單項雜質(zhì)(LSI);對米諾環(huán)素而言的相對保留時間(RRT)=2.08。將22升多頸玻璃燒瓶裝配機(jī)械攪拌器、熱電偶和具有氮氣保護(hù)的冷凝器。向燒瓶中裝入6,704g(8,540mL)異丙醇(IPA)和1,026g(1,500mL)庚烷。然后將溶液冷卻至0-5C。在0-39"C下,歷經(jīng)2小時將9-硝基米諾環(huán)素反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至22升燒瓶中,以產(chǎn)生黃色漿狀液。漿狀液溫度在34-39。C維持2小時,然后冷卻至20-34TC并在20-34"C下攪拌14.6小時。制備異丙醇3,028g(3,857mL)和庚烷660g(965mL)的溶液并維持在20-25。C(IPA:庚烷的體積比為4:1)。將漿狀液采用1號Whatman濾紙在真空和氮氣保護(hù)下經(jīng)直徑30cm的布氏漏斗過濾。將所得的濕濾餅轉(zhuǎn)移至裝配有機(jī)械攪拌器和氮氣保護(hù)的4升玻璃錐形瓶中。在23-26'C下通過歷經(jīng)0.5小時加入1,608mL所制備的IPA/庚烷溶液使濾餅形成漿狀液。將漿狀液再次如上所述過濾。濕濾餅如上所述重新制成漿狀液二次(總共重新制成漿狀液三次)。最后一次過濾后,將濾餅在氮氣保護(hù)下在真空中維持0.2小時。產(chǎn)物在40'C和在23至llmmHg的真空下干燥48小時,至干燥失重(LOD,80°C,1小時,>49mmHg真空)值為1.54。所得9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽的重量為380.10g,HPLC強(qiáng)度=76.3%(作為硫酸氬鹽),總雜質(zhì)=34.6%,最大單項雜質(zhì)(LSI)9.46%(RRT=0.94)。自米諾環(huán)素.HC1的產(chǎn)率=86%。針對產(chǎn)物和原料濃度進(jìn)行了校正的產(chǎn)率=71%??梢钥闯觯趸字Z環(huán)素化合物的分離導(dǎo)致具有高百分比雜質(zhì)的產(chǎn)物。實施例1下表2概括了采用比較例2所概述的操作進(jìn)行的硝化實驗,其中修改下述變量硝酸加入時間;反應(yīng)溫度;硝酸(相對于米諾環(huán)素HC1)的摩爾當(dāng)量;和攪拌速率。根據(jù)本文公開的方法,這些反應(yīng)物中沒有一者被淬滅或進(jìn)行后處理以分離產(chǎn)物。所用的唯一分析工具是HPLC分析。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>由于容器尺寸,在這些反應(yīng)中僅監(jiān)測浴溫。反應(yīng)在50wt%初始米諾環(huán)素濃度下進(jìn)行。相對于所有其它實驗而言,攪拌是劇烈的。4HN03以50wt。/o(在H2SO4中)的形式加入。可以看出,盡管所采用的M不同,起始米諾環(huán)素的量以低于10%的量存在,并且在某些條件下基本上被除去。實施例2實驗還進(jìn)行修改的硝化反應(yīng)、反應(yīng)物淬滅和硝化反應(yīng)物的后處理。采用比較例2中所概述的操作進(jìn)行實驗,其中修改下述變量硝酸加入時間;反應(yīng)溫度;硝酸(相對于米諾環(huán)素HC1)的摩爾當(dāng)量;淬滅溫度;淬滅溶液的組成;將反應(yīng)混合物加入淬滅溶液的時間;和所分離濾餅的洗滌方法。數(shù)據(jù)顯示于下表3。所用的唯一分析工具是HPLC分析。表3加入時間(小時)反應(yīng)溫度(。c)1摩爾當(dāng)量HN03強(qiáng)疼"H2S04鹽,%)總雜質(zhì)(%)LSI(%)淬滅溶液的組成2淬滅溫度(。c),滅溶液加入時間(小時)洗滌方法3產(chǎn)率(校正的,。/。)44.651.6762.740.121.6lPA/庚坑00.11604.651.6761.039.718.8PA/庚烷340.11555.151.7555.836.218.3IPA00.21565.151.7556.038.918.2IPA340.2152351.6375.429.519.1IPA/庚烷01170351.6374.827.818.9IPA/庚坑341179351.5183.622.213.0IPA01164.351.5184.822.412.9IPA34111023.5-51.3884.37.77.2IPA/庚坑0s21963.5-5'1.38101.811,48.3IPA/庚烷0622104由于容器尺寸,在這些反應(yīng)中僅監(jiān)測浴溫。當(dāng)IPA用作淬滅物時,隨后加入庚烷以獲得原始淬滅混合物的組合物。洗滌方法1:將濕濾餅在濾器上用4:1的IPA:庚烷(體積比)洗滌。洗滌方法2:將濕濾餅用4:1的IPA:庚烷(體積比)形成漿狀液三次。洗滌方法弁2比洗滌方法#1多使用20%的洗滌溶液。針對產(chǎn)物和原料的強(qiáng)度對產(chǎn)率進(jìn)行了校正。淬滅在0C開始,然后立即加熱至34C并在淬滅的剩余時間保持在34X:。由表3的數(shù)據(jù)可以看出,產(chǎn)率至少為50%。實施例3該實施例顯示了改變硝化步驟所需的硝酸量(以當(dāng)量計)的結(jié)果。硝酸經(jīng)滴定為89.5%,相應(yīng)地校正用量。進(jìn)行三項試驗。試驗l使用1.25當(dāng)量的硝酸,試驗2使用1.09當(dāng)量硝酸,且試驗3使用1.00當(dāng)量的硝酸。試驗1的HPLC完全測試顯示沒有米諾環(huán)素的信號,而試驗2的完全測試顯示有2.5%未反應(yīng)的原料。采用SLP操作,將兩種反應(yīng)物均進(jìn)行氫化、然后轉(zhuǎn)化為氛基米諾環(huán)素鹽酸鹽。氫化產(chǎn)物1(來自試驗l)顯示米諾環(huán)素含量為0.37%;強(qiáng)度=83.0%,總雜質(zhì)=3.20%;單項雜質(zhì)=0.52%;差向異構(gòu)體含量=1.1%。氫化產(chǎn)物2(來自試驗2)顯示米諾環(huán)素含量為1.6%;強(qiáng)度=84.2%;總雜質(zhì)=4.00%;單項雜質(zhì)=0.35%;差向異構(gòu)體含量=1.0%。試驗3:強(qiáng)度=83.0%;總雜質(zhì)=5.0%;單項雜質(zhì)=2.7%;差向異構(gòu)體含量=1.1%。還原HPLC分析在下述條件下進(jìn)行:<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>實施例1該實施例描述了氫化反應(yīng),其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。在攪拌下,將lO.lg對氯苯磺酸米諾環(huán)素緩慢加入27mL濃硫酸中。將溶液冷卻至0-:2。C。緩慢加入硝酸(0.6mL,90%),將溶液在0-2。C下攪拌1至2小時直至通過HPLC測定反應(yīng)完全。在硝化完全后,在攪拌下將含有中間體9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽的溶液轉(zhuǎn)移至150mL異丙醇和1200mL甲醇中,同時保持溫度低于10-15n。將溶液在26-28r和40psi下、在10%披^催化劑(50%濕)的存在下氬化3小時。氫化完成后,濾除催化劑,于0-5X:將溶液在攪拌下緩慢倒入250mL異丙醇。濾出固體(3.4g)。HPLC(面積%)測得粗品純度為卯%。<:4-差向異構(gòu)體存在的量為0.9%。MS(FAB):m/z473(M+H),472(M+)。實施例2該實施例描述了氫化反應(yīng),其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。在攪拌下,將84.38對氯苯磺酸米諾環(huán)素緩慢加入3688濃硫酸中。將溶液冷卻至10-15"C。緩慢加入硝酸(0.6mL,發(fā)煙)。將溶液于10-15。C攪拌1至2小時直至通過HPLC測定反應(yīng)完全。在硝化完全后,將含有中間體9-硝基米諾環(huán)素石克酸鹽的溶液在攪拌下轉(zhuǎn)移至0.3kg甲醇中,同時保持溫度低于10-15n。將溶液在26-28"C和50psi下、在10%披把碳催化劑(50%濕)的存在下氫化2-3小時。氫化完成后,濾除催化劑,在攪拌下于0-5匸將溶液緩'隻倒入0.6kg異丙醇和0.3kg正庚烷中。濾出固體。將濕固體溶于0-5'C的100g水中。攪拌混合物,分離并棄去有機(jī)相。向7jC相中加入14.4g濃HC1。采用氫氧化銨將溶液的pH調(diào)節(jié)至4.0士0.2。加入100mg亞硫酸鈉,溶液用100mg9-氨基米諾環(huán)素進(jìn)行接種。將混合物在0-5X:下攪拌4小時,過濾產(chǎn)物并千燥,獲得28.5g固體。HPLC(面積%)測定純度為96.5%,含有0.9%C4-差向異構(gòu)體。MS(FAB):m/z473(M+H),472(M+)。產(chǎn)率54.2%。比較例1該比較例描述了氫化反應(yīng),其中9-硝基米諾環(huán)素中間體被分離。將5丄0kg米諾環(huán)素.HCl(效價92.4%)倒入在300加侖容器中的0至l5"C的4.8份(251kg)硫酸66。Be中,攪拌以除去HC1。歷經(jīng)3小時20分鐘加入7.48kg硝酸(發(fā)煙100%,95.9%硝酸根含量,1.26當(dāng)量)。HPLC分析顯示殘佘>1%的米諾環(huán)素。因此,加入0.31kg硝酸(發(fā)煙100%,95.5%硝酸根含量,0.05當(dāng)量)。HPLC分析仍顯示殘余〉l。/o的米諾環(huán)素。另外加入0.74kg硝酸(發(fā)煙100%,95.5%硝酸根含量,0.12當(dāng)量)。由于HPLC測試再次顯示殘余>1%的米諾環(huán)素,因此另外加入l.llkg硝酸(發(fā)煙100%,95.5%硝酸根含量,0.19當(dāng)量),之后顯示殘余<1%的米諾環(huán)素。在0至36X:下,將硝化反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至21.5份IPA/3.3份庚烷(1120kgIPA/171kg庚烷)的溶液中。過濾漿狀液(過濾時間冗長),用IPA/庚烷4:1洗滌、在NMT上于40匸干燥至NMT的LOD為6%,生成70.9kg硫酸鹽(97%粗產(chǎn)率),供還原反應(yīng)使用。實施例3該實施例描述了氬化反應(yīng),其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。將25.0kg米諾環(huán)素.HC1(效價94.4%)倒入在100加侖容器中的5至15'C的7.3份(183kg)硫酸66°Be中,攪拌以除去HC1。于9至15'C歷經(jīng)78分鐘向容器內(nèi)加入2.5015kg硝酸(85%,86.6%硝酸才艮含量,1.25當(dāng)量)。HPLC分析顯示殘余>1%的米諾環(huán)素。另外加入0.261kg硝酸(85%,86.6%硝酸根含量,0.13當(dāng)量)。HPLC再次顯示殘余>1%的米諾環(huán)素,另外加入0.261kg硝酸(850/。,86.6%硝酸根含量,0.13當(dāng)量)。由于HPLC仍顯示殘余>1%的米+若環(huán)素,加入另外的0.174kg硝酸(85%,86.6。/。硝酸根含量,0.09當(dāng)量),之后顯示反應(yīng)在1.7%米諾環(huán)素原料處到達(dá)平臺。在-20至10。C下,將硝化反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至4.2份(106kg)曱醇中。將淬滅的批料調(diào)節(jié)至4至iox:,原樣用于還原反應(yīng)。比較例2該比較例描述了氬化反應(yīng),其中9-硝基米諾環(huán)素中間體被分離。將104kg米諾環(huán)素.HCl(效價90.3%)倒入在300加侖容器中的0至10"C的4.8份(502kg)硫酸66。Be中,攪拌以除去HC1。于0至6*€和100rpm歷經(jīng)3小時加入15.2kg發(fā)煙硝酸(100.4%,1.25當(dāng)量)。由于HPLC測試顯示殘余>1%的米諾環(huán)素,加入另外的0.69kg發(fā)煙硝酸(100.4%,0.06當(dāng)量),之后米諾環(huán)素<1%。在0至36X:下,將硝化反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至21.5份1~3.3份庚烷的溶液中。過濾漿狀液(過濾時間冗長),用IPA/庚烷4:1洗滌、在NMT上于40'C干燥至NMT的LOD為6%,生成140kg硫酸鹽(95%粗產(chǎn)率),供還原反應(yīng)使用。實施例4該實施例描述了氫化反應(yīng),其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。將104kg米諾環(huán)素.HCl(效價90%)倒入5至15°C的7.3份(763kg)硫酸66°Be中,攪拌以除去HC1。于5至15。C和120rpm歷經(jīng)1小時加入14.9kg發(fā)煙硝酸(100.4%,1.25當(dāng)量)。由于HPLC測試顯示殘余>1%的米諾環(huán)素,加入另外的0.69kg發(fā)煙硝酸(100.4%,0.06當(dāng)量),之后顯示米諾環(huán)素<1%。在-10至-20n下,將硝化反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至4.2份(440kg)甲醇中。將淬滅的批料調(diào)節(jié)至4至10'C,原樣用于還原反應(yīng)。比較例3該比較例描述了氫化反應(yīng),其中9-硝基米諾環(huán)素中間體被分離。溶劑/反應(yīng)試劑的比例是相對于硝化反應(yīng)之前的米諾環(huán)素初始加入量而言的。歷經(jīng)1小時將比較例4的9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽反應(yīng)混合物淬滅入2240kg(21.5份)異丙醇和342kg(3.3份)庚烷中,同時維持批料溫度在0至36'C。將所得漿狀液在30至36。C下攪拌2小時,然后冷卻,并在19至25。C下攪拌1小時。過濾一半漿狀液,用3x加SkgIPA/庚烷0:1)v/v洗滌,在NMT上于40。C干燥至NMT的LOD為6%。過濾和干燥花費16天(其中7天在預(yù)定的工廠停工期間濕濾餅在氮氣下閑置),生成58kg硫酸鹽。將另一半漿狀液滾筒轉(zhuǎn)動(drummed)并冷凍以待進(jìn)^f亍過濾。冷凍12天,然后倒回容器中,于0至6。C攪拌2天,然后調(diào)節(jié)至19至過濾,用3x205kgIPA/庚烷(4:1)v/v洗滌,在NMT上于40。C干燥至NMT的LOD為6%。過濾和干燥花費6天,生成82kg硫酸鹽。于19至25。C將亞-批料(lot)的9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽溶于672kg(6.5份)甲醇和8.4kg(0.08份)注射用水(USP)中,采用70psig氫氣和2.74kg(0.026份)披把碳(濕10。/。(w/w))還原為9-#^米諾環(huán)素硫酸鹽。氫化反應(yīng)花費10.5小時,導(dǎo)致沒有可檢測的原料。過濾9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽反應(yīng)混合物以除去催化劑,歷經(jīng)1小時淬滅入0至27X:的1660kg(16份)IPA/710(6.8份)庚烷的溶液中。將所得混合物調(diào)節(jié)至19至25'C并攪拌1小時。將9-氨基米i若環(huán)素石危酸鹽漿狀液在Nutsche濾器上過濾,用2xl62kg(每次1.5份)IPA/庚烷(4:l)v/v洗滌,在40。C下干燥至LOD低于4。/。。過濾、洗滌和干燥花費10天,得到94.0kg9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽。過濾后,在母液中觀察到固體。過濾這些固體,用113kgIPA/庚烷(4:1)v/v洗滌,在40。C下干燥至LOD低于4。/。?;厥?4.1kg。保留作為分離的批料(lot)。由米諾環(huán)素得到9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽的總粗產(chǎn)率為84%。將94.0kg"第一批收獲物,,干燥的9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽和0.084kg(0.0008份)亞硫酸鈉溶于5Mkg(5.17份)注射用水(USP)中,冷卻至0至6匸。需要Okg鹽酸20°Be以使9-M米諾環(huán)素硫酸鹽的pH為l.l士O.l,因為初始pH為1.16。將48.3kg((U6份)鹽i^A應(yīng)試劑加入9-氨基米諾環(huán)素溶液中,形成9-#^米諾環(huán)素HC1。將56kg(0.54份)氫氧化銨、28%和4.0kg(0.039份)鹽^A應(yīng)試劑加入溶液中,獲得批料pH為4.0±0.2。然后將批料在0至6'C下攪拌90分鐘,同時確保pH維持在4.0±0.2。最終pH讀數(shù)為4.05pH單位。將批料在Nutsche濾器上過濾,用2x33kg(每次0.3份)預(yù)冷至2-8"C的注射用水(pH調(diào)至4.0)洗滌,然后通過2x26.1kg(0.25份)丙酮(預(yù)冷至2-8。C)洗滌,在NMT上于40匸干燥至NMT的水份含量為7.0%。分離43.2kg9-氨基米諾環(huán)素HC1,由米諾環(huán)素HC1開始的產(chǎn)率為40%。類似于前四個段落所述的方法,釆用成比例量的反應(yīng)試劑,進(jìn)行24.1kg"第二批收獲物"千燥的9-氨基米諾環(huán)素>5克酸鹽通過鹽變化的加工。回收另外的9.9kg9-氛基米諾環(huán)素HCl,代表9.2。/。的額外增加產(chǎn)率。包括兩批收獲物的總批料產(chǎn)率為53.1%。實施例5該實施例描述了氫化反應(yīng),其中未分離9-硝基米諾環(huán)素中間體。溶劑/反應(yīng)試劑的比例是相對于硝化反應(yīng)之前的米諾環(huán)素初始加入量而言的。歷經(jīng)90分鐘將來自實施例7的9-硝基米諾環(huán)素硫酸鹽反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至440kg(4.2份)甲醇中,同時維持批料溫度在-20至-10"C、攪拌速率為130RPM。將淬滅的批料調(diào)節(jié)至4至10°C,采用50psig氫氣和52kg(0.5份)披把碳(濕10。/。(w/w))還原為9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽。氬化反應(yīng)花費5小時,導(dǎo)致沒有可測得的原料。將9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽反應(yīng)混合物過濾以除去催化劑,歷經(jīng)30分鐘淬滅入17-23n的1241kg(12份)IPA/537kg(5.2份)庚烷溶液中。然后將所得混合物冷卻至-18至-12X:并攪拌1小時。將所得9-氬基米諾環(huán)素硫酸鹽漿狀液分兩批在Nutsche濾器上過濾,用總共3.6份預(yù)冷至0-6。C的IPA/庚烷(2:1)v/v和506kg(4.9份)冷庚烷洗滌。兩批的過濾和洗滌花費99小時(由于濾器尺寸的限制分兩批過濾)。將9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽濕濾餅溶于150kg(1.4份)0-6'C的注射用水(USP)中,分離出上層有機(jī)層作為廢液。將25.7kg(0.3份)鹽酸20°Be加入0-6'C的9-氨基米諾環(huán)素硫酸鹽溶液中,以供轉(zhuǎn)化為9-氨基米諾環(huán)素HC1。將28%氫氧化銨加入反應(yīng)混合物中,獲得批料的pH為4.0±0.2;這花費49.5kg((U8份)。將O.lSkg亞硫酸鈉(0.0014份)加入反應(yīng)混合物中。將批料用5g9-氨基米諾環(huán)素HCl進(jìn)行接種,攪拌3小時,同時采用28%氫氧化銨(花費0.05份)維持pH為4.0±0.2。將批料在Nutsche濾器上過濾,用l份預(yù)冷至2-8'C的注射用水(pH調(diào)節(jié)至4.0)洗滌,然后用0.2份異丙醇(預(yù)冷至2-8匸)洗滌,在NMT上于50"C干燥至NMT的LOD為10.0%和NMT的水份含量為8.0%。分離出63.1kg9-氨基米諾環(huán)素HC1,由米諾環(huán)素HC1開始的產(chǎn)率為59%。下表4列出了比較數(shù)據(jù)。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>1循環(huán)時間是由米諾環(huán)素.11<:1至9-氨基米諾環(huán)素11<:1。2第一批和第二批收獲物的組合產(chǎn)率。3不包括在加工期間的7天工廠停工,包括加工第二批收獲物的時間。表4顯示,在未分離情況下的反應(yīng)混合物的氫化產(chǎn)生了具有較低量雜質(zhì)和cv差向異構(gòu)體的產(chǎn)物。?;疕PLC分析在下述條件下進(jìn)行:<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>實施例1N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽在45-50。C下,向叔丁胺(1.57L)和曱苯(1.35L)的混合物中加入溴乙酸叔丁酯(420mL)。將混合物在50-60"C下攪拌1小時,溫度歷經(jīng)1小時增加至75C在75C下2小時后,將混合物冷卻至-12士3X:,靜置1小時。過濾收集固體,通過蒸鎦(30-40X:,25-35mmHg)濃縮濾液至體積為825mL。將所得濃縮液冷卻至,加入6NHC1(1.45kg)。3小時后,進(jìn)行相分離,水相通過蒸餾(30-40X:,25-35mmHg)濃縮至體積為590mL。加入異丙醇(2.4L),混合物通過蒸餾(15-20"C,10-20mmHg)濃縮至體積為9卯mL。將所得漿狀液歷經(jīng)30分鐘冷卻至-12士3'C,靜置1小時。過濾收集固體,用i-PrOH洗滌,干燥24小時(45±3'C,lOmmHg),得到(407.9g,86%)所需產(chǎn)物。實施例2N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽歷經(jīng)20分鐘向經(jīng)過碾磨的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(250.0g)、曱苯(1.14L)、DMF(7.1g)中加入亞硫酰氯(143mL)。使混合物溫度為80-85。C并在攪拌下加熱3小時。冷卻至20X:后,在N2下過濾收集固體,用甲苯洗滌,干燥16小時(40。C,lOmmHg),得到所需產(chǎn)物(260.4g,93.8%)。用HPLC面積%表示的純度98.12%。實施例3替加環(huán)素歷經(jīng)15分鐘在攪拌下向9-氨基米諾環(huán)素.HCl(140.0g)和冷(0-4X:)水(840mL)的混合物中加入N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽(154.0g)。將混合物在0-4。C下攪拌1-3小時。加入氫氧化銨(126g,30。/。)使pH為7.2,同時維持溫度為0-10。C。加入甲醇(930mL)和CH2a2(840mL),混合物在20-25匸下攪拌1小時,通過加入氫氧化銨(13,5g,30%)維持pH為7.2。進(jìn)行相分離,將固體與有機(jī)層合并。用CH2C12(lx840mL,3x420mL)萃取水層,混合物的pH在每次萃取期間調(diào)節(jié)至7.2。向合并的有機(jī)層中加入甲醇(200mL),得到溶液。用水洗滌溶液(2xi40mL),然后在攪拌下經(jīng)硫酸鈉(140g)干燥30分鐘。過濾混合物,通過蒸餾(20'C,15-25mmHg)濃縮濾液至體積為425mL。向該混合物中加入CH2Cl2(1.4L),重復(fù)蒸餾兩次。將所得混懸液冷卻至o-2x:,攪拌i小時。過濾收集固體,用0-5c的ch2ci2(2xl50mL)洗滌,干燥24小時(65-70"C,lOmmHg),得到所需產(chǎn)物(120.0g,75%)。用HPLC面積%表示的純度98.9%和C-4差向異構(gòu)體0.12%。實施例3A替加環(huán)素歷經(jīng)50分鐘在攪拌下向9-氨基米諾環(huán)素.HCl(100.0g)和冷(0-4匸)水(600mL)的混合物中加入N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽(110.0g)。將混合物在0-4匸下攪拌1.5小時。加入氫氧化銨(112g,28%)使pH為7.2,同時維持溫度為0-5。C。加入二氯甲烷(600ml),然后加入甲醇(440mL),混合物在0-5"C下攪拌30分鐘,同時通過加入氫氧化銨(10.0g,28。/。)維持pH為7.2。歷經(jīng)15分鐘將混合物加熱至20-25匸。加入甲醇(244ml),進(jìn)行相分離。用CH2C12(lx600mL,3x300mL)萃取水層,混合物的pH在每次萃取期間調(diào)節(jié)至7.2。向合并的有機(jī)層中加入甲醇(144mL),得到溶液。用水洗滌溶液(2xlOOmL),然后在攪拌下經(jīng)硫酸鈉(100g)干燥30分鐘。過濾混合物,通過蒸餾(20'C,80-120mmHg)濃縮濾液至體積為400mL。向混合物中加入CH2C12(1.0L),重復(fù)蒸餾量次。將所得混懸液冷卻至0-2",攪拌1小時。過濾收集固體,用0-5'C的CH2C12(2xll0mL)洗滌,干燥(65-70'C,于20mmHg進(jìn)行18小時,然后于3-5mmHg進(jìn)行16小時),得到所需產(chǎn)物(82.4g,71.7%)。用HPLC面積%表示的純度98.5%和C-4差向異構(gòu)體0.28%。實施例4N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽將叔丁胺(88g)溶于300mL甲苯中。將混合物加熱至45-50C,歷經(jīng)1小時加入117.5g溴乙酸叔丁酯,同時維持溫度50-60X:。將反應(yīng)物于75。C加熱2小時。然后將反應(yīng)混合物冷卻至12-15r,攪拌1小時。濾出固體,用冷甲苯洗滌。棄去固體,其為叔丁胺氫溴酸鹽。將濾液冷卻至10-12'C,通入HC1氣體0.5小時。將混合物在10-12。C下攪拌3小時,然后過濾收集產(chǎn)物,用冷甲苯洗滌。將產(chǎn)物在真空下于40-50C千燥,獲得107gN-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽。MS:m/z187(M+)將來自如上述制備的材料的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(7g)加入35mL曱苯中。加入亞硫酰氯(11.6mL),將漿狀液在75-80E下加熱1小時。將混懸液冷卻至20t:,過濾收集固體,用2xl5mL甲苯洗滌。將所得固體在真空中于40r干燥,獲得4.4g(產(chǎn)率65。/。)產(chǎn)物,保護(hù)其免于與潮濕接觸,并立即用于下一步驟。實施例5替加環(huán)素在0-5。C下,將9-tJ^米諾環(huán)素(10.00g)分批加入60mL水中。分批加入叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽(10.98g),保持溫度為0-5X:。攪拌40-60分鐘后,向反應(yīng)混合物中滴加30。/。氫氧化銨以調(diào)節(jié)pH至7.2,同時保持溫度在0-5。C。向溶液中加入83mL甲醇,然后加入60mL二氯曱烷。攪拌15分鐘后,進(jìn)行相分離。7JC相用4x40mL二氯甲烷萃取,在每次萃取之前調(diào)節(jié)pH至7.2。向合并的有機(jī)物中加入10mL甲醇,溶液經(jīng)硫酸鈉干燥。過濾后,將溶液濃縮,得到混懸液(凈重51g)。將混懸液在5-10"C下攪拌l小時,然后過濾。用2xl0mL冷二氯甲烷洗滌固體,然后干燥,獲得8.80g產(chǎn)物(產(chǎn)率76.8%)。用HPLC面積%表示的純度98.4%和C-4差向異構(gòu)體0.1%。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實施例6N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽將叔丁胺(1.5kg)溶于1.35L甲苯中。將混合物加熱至45-50。C,歷經(jīng)1小時加入548g溴乙酸叔丁酯,同時維持溫度為50-60n。將混合物在75。C下加熱3小時。然后將反應(yīng)混合物冷卻至12-15'C,攪拌1小時。濾出固體,用冷曱苯洗滌。棄去固體,其為叔丁胺氫溴酸鹽。通過蒸餾除去溶劑將濾液濃縮至800mL。將濃縮物冷卻至25°C,向混合物中加入900mL6NHC1。于20-25C攪拌3小時后,進(jìn)行相分離。棄去有機(jī)相,7JC相濃縮至體積為600mL。向濃縮物中加入異丙醇(2.4L)。將漿狀液冷卻至-12至-9",并維持0,5小時。過濾收集產(chǎn)物,用冷異丙醇洗滌,然后在真空和40-50'C下干燥,獲得408g固體。通過NMR測定純度〉95。/0。MS:m/z187(M+)。將來自如上述制備的材料的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(250g)加入1.3L甲苯和7.5mLDMF中。加入亞硫酰氯(143mL),將漿狀液在80-85n下加熱3-4小時。將混懸液冷卻至20X:,過濾收集固體,用2x250mL甲苯洗滌。在真空和40匸下干燥固體,獲得260g(產(chǎn)率82%)的產(chǎn)物。用HPLC面積%表示的純度98.2%實施例7替加環(huán)素在0-4"C下,將9-#^米諾環(huán)素.1:1(140.0g)分批加入840mL水中。歷經(jīng)15分鐘在充分?jǐn)嚢柘录尤胧宥』拾滨B塞}酸鹽(154g),同時維持溫度為0-4X:。將溶劑攪拌1-3小時。用30%氫氧化銨將混合物的pH調(diào)節(jié)至7.2±0.2,同時維持溫度為0-10X:。將甲醇(930mL)和840mL二氯甲烷加入溶液中,其在20-25X:下攪拌1小時。分離相。水相用3x600mL二氯甲烷萃取,合并有機(jī)相,干燥,濃縮至體積為約500mL。將所得混懸液于0-2'C冷卻1小時。過濾并干燥固體,獲得120g產(chǎn)物(產(chǎn)率75%)。用HPLC面積%表示的純度98%,C-4差向異構(gòu)體0.1%。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實施例8吡咯烷基乙酸鹽酸鹽將吡咯烷(14,2g)溶于40mL甲基叔丁基醚中。將溶液冷卻至0至-5匸。在攪拌下滴加溴乙酸千基酯(22.9g)。將濃稠白色漿狀液在0-5"C下攪拌0.5小時。過濾除去固體,用甲基叔丁基醚洗滌。將濾液濃縮,獲得21.3g乙酸吡咯烷基節(jié)基酯。將爺基酯(21.0g)溶于200mL甲醇中,加入4.0g10%Pd/C催化劑(濕50。/。)。將溶液在40psi下氳化6小時。濾除催化劑,用甲醇洗滌。濃縮濾液,獲得11.8g吡咯烷基乙酸,為無色油。使15.8g吡咯烷基乙酸在15mL甲基-叔丁基醚中形成漿狀液。加入乙腈(15mL),將混懸液冷卻至0-5*C。攪拌下加入乙醚HC1(120mL,1.0M)。過濾所得白色沉淀,用甲基叔丁基醚洗滌,干燥,獲得15g吡咯烷基乙酸鹽酸鹽。GC/MS面積%的純度:98%。MS:m/z129(M+)。實施例94S-(4(U2aa)l-4,7-雙f二曱基氨基)-9-K吡咯烷基)乙?;鵯氨基卜l,4,4a,5,5a,6,ll,12a陽八氫國3,10,12,12a-四羥基-l,ll-二氧代-2-并四苯-甲酰胺使吡咯烷基乙酸(7.7g)混懸于7mL乙腈中。冷卻至0-5"C后,攪拌下緩慢加入5.3mL亞硫酰氯。將混懸液加熱至55"C。將深色溶液于55'C保持0.5小時,然后冷卻至室溫,得到吡咯烷基乙酰氯鹽酸鹽。將如上文實施例4所述制備的9-氨基米諾環(huán)素鹽酸鹽(5.0g)混懸于5.0mL水中。將混懸液冷卻至-15。C。向混懸液中滴加如上文所述制備的吡咯烷基乙酰氯鹽酸鹽的溶液,保持溫度在22X:以下。將深色反應(yīng)混合物在22-25。C下攪拌3小時。向混合物中加入水(2mL),用30%氬氧化銨調(diào)節(jié)pH至6.5±0.2。用6x15mLCH2Cl2萃取溶液。合并有機(jī)萃取物,在40X:下濃縮。向濃縮物中加入無水乙醇(10mL),將漿狀液在5-7t!下攪拌l小時。過濾固體并在真空和40。C下干燥,得到3,5g產(chǎn)物。用HPLC面積%表示的純度98.7。/。,C-4差向異構(gòu)體0.4%。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實施例10替加環(huán)素在10-15。C下,將9-氨基米諾環(huán)素(4.0g)分批加入10mL乙腈和5mLDMPU中。分批加入叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽(4.4g),保持溫度為10-15°C。攪拌2小時后,向反應(yīng)混合物中緩慢加入10mLMeOH和17mL水,保持溫度為10-17°C。將氫氧化銨(30%)滴加至反應(yīng)混合物中以調(diào)節(jié)pH至7.2,保持溫度為5-8。C。向溶液中加入15mL二氯甲烷。攪拌15分鐘后,進(jìn)行相分離。用2x20mL二氯甲烷萃取7jC相,在每次萃取之前調(diào)節(jié)pH至7.2。向合并的有機(jī)物中加入700mgNoritCA-l(活性碳)和10g硫酸鈉,然后過濾混合物。用2x20mL二氯曱烷洗滌濾餅。濃縮溶液,將所得混懸液在5-8匸下攪拌16小時。過濾后,用2xl0mL冷二氯甲烷洗滌固體,然后干燥,獲得2.38產(chǎn)物(產(chǎn)率50%)。用HPLC面積%表示的純度95.2%,C-4差向異構(gòu)體0.5%。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實施例11-19替加環(huán)素實施例11-19按照實施例10的操作,溶劑修改如下所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table>通過HPLC面積評估的純度。sm=原料9-氨基米諾環(huán)素。反應(yīng)混合物用異丙醇-乙酸乙酯淬滅,然后在水和CH2Cl2之間分配。濃縮有機(jī)相,然后在分離產(chǎn)物前用甲苯稀釋。實施例20N-^k丁基甘氨酰氯鹽酸鹽向裝配有機(jī)械攪拌器、熱電偶、具有連接至30。/。(wt)堿洗滌器的氮氣管線的冷凝器和250mL壓力均衡加料漏斗的5升多頸燒瓶中加入經(jīng)過研磨的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(436g,2.60moles,d(0.5)=103jim)、甲苯(l,958g,2,263mL)和N,N-二甲基甲酰胺(13.6g,14.4mL,0.19moles)。在20-23"C下,歷經(jīng)33分鐘使用250mL加料漏斗將亞硫酰氯(405g,248mL,3.40moles)加入灰白色漿狀液中。歷經(jīng)i小時將漿狀液緩慢加熱至8ot;,然后于8ox:攪拌3小時。3小時后,通過薄層色鐠法測得反應(yīng)完全(<2%原料)。歷經(jīng)32分鐘將橘黃色混懸液冷卻至,然后在15-20C下攪拌32分鐘。通過采用42號Whatman濾紙的15cm布氏漏斗真空過濾收集固體。在20-25"C用三份甲苯(每次洗滌用272g,314mL)洗滌濾餅。將濕濾餅在氮氣保護(hù)下抽濾千燥20分^K然后在烘箱中以23mmHg真空和38"C下將產(chǎn)物干燥21.2小時,產(chǎn)生干燥失重為1.23%。所得叔丁胺乙酰氯HCl的重量-462g,GC強(qiáng)度=91.0%,IR鑒定4日性。由叔丁胺乙酸HCl開始的產(chǎn)率-96。/。。針對產(chǎn)物和原料濃度進(jìn)行了校正的產(chǎn)率=87%。實施例21N-叔丁基甘氨酰氯鹽酸鹽向裝配有機(jī)械攪拌器、熱電偶、具有連接至25。/。(wt)堿洗滌器的氮氣管線的冷凝器和250mL壓力均衡加料漏斗的5升多頸燒瓶中加入經(jīng)過研磨的N-叔丁基甘氨酸鹽酸鹽(450g,2.68moles,d(0.5)=664jim)、甲苯(2,863g,3,310mL)和N,N誦二曱基甲酰胺(15g,15mL,0.21moles)。在19曙22匸下,歷經(jīng)19分鐘使用250mL加料漏斗將亞石危酰氯(422g,259mL,3.54moles)加入灰白色漿狀液中。歷經(jīng)7.1小時將漿狀液緩慢加熱至79'C,然后于79-82。C攪拌44小時。于3小時通過薄層色鐠法(TLC)檢查反應(yīng),發(fā)現(xiàn)反應(yīng)未完全。加入另外的26mL(42g,0.35moles)亞硫酰氯??偣?7小時后,通過TLC測得反應(yīng)仍未完全,加入另外的26mL(42g,0.35moles)亞硫酰氯??偣?4小時后,在79-82'C下通過TLC測得反應(yīng)完全(〈4。/。的起始叔丁胺乙酸HC1)。歷經(jīng)17分鐘將深棕色混懸液冷卻至25°C,然后在21-25C攪拌37分鐘。通過2升粗玻璃燒結(jié)漏斗真空過濾收集固體。在20-25'C用六份甲苯(每次洗滌用282g,325mL)洗滌濾餅。將濕濾餅在氮氣保護(hù)下抽濾干燥16分鐘。然后在烘箱中以23mmHg真空和38。C下將產(chǎn)物干燥26.1小時,產(chǎn)生干燥失重為0.75%。所得叔丁胺乙酰氯HCl的重量-395g,GC強(qiáng)度=89.5%,IR鑒定-陽性。由叔丁胺乙酸HCl開始的產(chǎn)率-79%。針對產(chǎn)物和原料強(qiáng)度進(jìn)行了校正的產(chǎn)率=71%。實施例22替加環(huán)素在0至下,將9-tJ^米諾環(huán)素HC1(43.0kg)溶于258kg(6.0份)注射用水中。將N-叔丁基甘氨酰氯HC1(47.3kg,1.1份,3.01當(dāng)量)緩慢加入批料溶液中,同時維持批料溫度為0至6'C。將反應(yīng)混合物攪拌1小時,測定含有0.2%原料(不需要另外的N-叔丁基甘氨酰氯HC1)。然后采用32kg(0.7份)28%氫氧化銨和2kg試劑鹽酸(回調(diào)過量狀況M吏GAR-936反應(yīng)混合物的pH為7.2±0.2。初始pH等于0.42且最終pH等于7.34。在0至7C將二氯曱烷(342kg,8份)和148kg(3.4份)甲醇加入反應(yīng)混合物中。由于pH為7.09,因此不需要調(diào)節(jié)。將批料溫?zé)嶂?9-25。C。加入甲醇(83kg,1.9份),分離下部有枳4目。然后用lx342kg(8份)和3xl72kg(4份)二氯曱烷將保留在7M目中的產(chǎn)物萃取至有機(jī)相中,同時用28。/。氫氧化銨維持pH為7.2±0.2。向所得二氯甲烷/甲醇溶液中加入甲醇(49kg,1.14份),用2x43kg(1份)注射用水洗滌,然后用43kg(l份)硫酸鈉干燥。然后進(jìn)行三次真空蒸餾以除去甲醇,在第二次和第三次蒸餾之前加入568kg(13.2份)二氯甲烷。母液中甲醇的殘余水平為0.21%。過濾批料,用2x60kg(1.4份)預(yù)冷(O至6'C)的二氯甲烷洗滌。所得粗物質(zhì)未進(jìn)行干燥,而是以濕濾餅(72.5kg,由干燥失重計算的干重為38.2kg)形式分離,由9-氨基米諾環(huán)素HC1開始的產(chǎn)率為77%。濕濾餅分析結(jié)果米諾環(huán)素=1.26%;最大單項雜質(zhì)-0.37%,C-4差向異構(gòu)體=0.50%。實施例23替加環(huán)素在0至6"C下,將9-氨基米諾環(huán)素HC1(61.0kg)溶于258kg(6.0份)注射用水中。將N-叔丁基甘氨酰氯HC1(67.1kg,1.1份,3.01當(dāng)量)緩慢加入批料溶液中,同時維持批料溫度為0至6X:。將反應(yīng)混合物攪拌3.5小時,測定含有0.13y。原料(不需要另外的N-叔丁基甘氨酰氯HCl)。然后采用45kg(0.7份)28。/o氫氧化銨^A應(yīng)混合物的pH為7.2±0.2。初始pH等于0.82且最終pH等于7.07。在0至6X:將二氯甲烷(485kg,8份)和210kg(3.4份)曱醇加入反應(yīng)混合物中。由于pH仍然在范圍內(nèi)(7.04),因此不需要調(diào)節(jié)。將批料溫?zé)嶂?9-25X:。加入甲醇(118kg,1.9份),分離下部有才M目。然后用lx485kg(8份)和3x244kg(4份)二氯甲烷將保留在水相中的產(chǎn)物萃取至有機(jī)相中,同時用28%氫氧化銨維持pH為7.2±0.2。向所得二氯甲烷/甲醇溶液中加入曱醇(70kg,1.14份),然后用2x61kg(1份)注射用水洗滌,然后用61kg(1份)硫酸鈉干燥。然后進(jìn)行三次真空蒸餾以除去甲醇,在第二次和第三次蒸餾之前加入805kg(13.2份)二氯甲烷。母液中甲醇的殘余水平為0.05%。過濾批料,用2x85kg(1.4份)預(yù)冷(0至6X:)的二氯甲烷洗滌。所得粗物質(zhì)未進(jìn)行干燥,而是以濕濾餅(103kg,由干燥失重計算的干重為53.4kg)形式分離,由9-氨基米諾環(huán)素HC1開始的產(chǎn)率為76%。比較例24替加環(huán)素單鹽酸鹽化較辨2^4.'9-乙教減差|諾豕將二氯甲烷(1,3L)在裝配有機(jī)械攪拌器、溫度計和1升加料漏斗的3升圓底燒瓶中冷卻至0-2。C。攪拌下分批加入重結(jié)晶的9-氨基米諾環(huán)素鹽酸鹽(400g)。歷經(jīng)10分鐘加入三乙胺(428mL),同時保持溫度在0-2'C之間。將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘,然后冷卻至-22'C。然后以使得溫度上升不超過5'C的速率加入280g氯乙酸酐在540mL二氯甲烷中的溶液。使用另外的132mL二氯甲烷沖洗加料漏斗。在加入酸酐開始后15分鐘,通過HPLC分析反應(yīng)混合物。當(dāng)原料的存在量低于2%時,用680mL0.05M碳酸氫鈉溶液使反應(yīng)物淬滅。攪拌混合物15分鐘,然后轉(zhuǎn)移至5升分液漏斗中。進(jìn)行相分離。分離二氯曱烷相,用另外的680mL0.05M碳酸氬鈉溶液洗滌。將經(jīng)洗滌的二氯甲烷溶液滴加至17升正庚烷和異丙醇的10:1混合物(15.4升正庚烷和1.54升異丙醇)中。將漿狀液攪拌5分鐘,然后靜置10分鐘。傾析上層液,經(jīng)粗多孔玻璃燒結(jié)漏斗過濾沉淀物。用2L10:1正庚烷:異丙醇洗滌固體。將固體在真空和40'C下干燥,得到550g粗產(chǎn)物。在裝配有攪拌器和溫度計的l升雙頸圓底燒瓶中,于室溫(25-28X:)在有效的攪拌下將9-氯乙酰氨基米諾環(huán)素粗品(100g)緩慢加入500mL叔丁胺中。加入碘化鈉(10g),將反應(yīng)混合物于室溫攪拌7.5小時。通過HPLC監(jiān)測反應(yīng),當(dāng)殘余<2%的原料時,加入100mL甲醇,并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40'C除去溶劑。向殘余物中加入420mL甲醇和680mL水。將溶液冷卻至0-2"C,用濃HC1(91ml)調(diào)節(jié)至pH7.2,得到體積為1300mL的反應(yīng)混合物。用7JC稀釋為6.5L,用濃HCl(12mL)調(diào)節(jié)至pH至4.0-4.2。向溶液中加入經(jīng)洗滌的Amberchrom(CG161cd)(860g),將混合物攪拌30分鐘,調(diào)節(jié)pH至4.0-4.2。過濾除去樹脂,通過HPLC分析廢水溶液中的產(chǎn)物,于4-8匸儲存。將樹脂在4.8L的20%曱醇在水中的溶液(化甲醇+16L水)中形成漿狀液。攪拌混懸液15分鐘,調(diào)節(jié)pH4.0-4.2。過濾除去樹脂,分析濾液中的產(chǎn)物。用4.8L的20%甲醇的水溶液重復(fù)樹脂萃取3次。合并所有的樹脂萃取物和來自上述的廢水溶液,用30。/o氫氧化銨調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2。用6x2.8L二氯甲烷萃取水溶液,在萃取之間調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2。將合并的二氯甲烷萃取物經(jīng)250g無JO克酸鈉過濾,濃縮至500mL,冷卻至0-3C。在產(chǎn)物結(jié)晶后,將漿狀液于0-3X:攪拌l小時。過濾固體,用2x50mL冷二氯甲烷洗滌,在40'C和真空下干燥,獲得26g固體?;栟k^/Cz夢>豕##_^磁崖在攪拌下,將替加環(huán)素(49g,0.084moles)分批溶于500mL注射用水中。經(jīng)中型多孔漏斗過濾溶液,用420mL注射用水洗滌。將溶液冷卻至0-2。C,滴加5.6mL濃HC1,同時維持溫度在0-2。C之間。初始pH為8.0,最終pH為6.0。通過將樣品于-30t:冷凍和于-15'C冷凍干燥來冷凍干燥溶液。將儲存溫度升高至21C達(dá)2小時。研磨所得固體(49.6g),于4-5。C儲存。元素分析C(理論值52.92%,實測值51.75%);H(理論值6.73%,實測值6.75%);N(理論值10.65%,實測值10.32%);Cl(理論值5.4%,實測值5.5%)。比較例25替加環(huán)素單鹽酸鹽^較^^5^;9-歲乙凝減差|諾環(huán)#將二氯曱烷(325ml)冷卻至-5至0X:,歷經(jīng)10分鐘分批加入9-氨基米諾環(huán)素鹽酸鹽(100g)。加入三乙胺(77.6g),同時保持溫度為-10至-5。C。通過于20-25'C攪拌制得97。/。氯乙酸酐(70g)在二氯甲烷(133mL)中的溶液,并在45分鐘內(nèi)加A^應(yīng)混合物中,同時維持混合物溫度為-10至-2匸。用31mL二氯甲烷洗滌含有氯乙酸酐溶液的燒瓶,將洗滌液加入反應(yīng)混合物中。攪拌30分鐘后,通過HPLC分析反應(yīng)物以確定反應(yīng)是否完全。歷經(jīng)30分鐘加入碳酸氬鈉水溶液(185mL,0.05M),同時維持反應(yīng)混合物溫度為0至5'C。攪拌10分鐘后,使各層分離,將硫酸鈉(15g)加入有機(jī)層中。將混合物于0至5'C攪拌15分鐘,過濾。用二氯曱烷(2x38mL)沖洗所得濾餅,歷經(jīng)20分鐘將合并的濾液轉(zhuǎn)移至4.19L10:1庚烷:異丙醇中,然后用15mL二氯甲烷沖洗濾液燒瓶。將所得混懸液于20至25t:攪拌15分鐘,然后過濾。濾餅用680mL10:l庚烷:異丙醇沖洗,于37至40匸(5-10mmHg)干燥24小時。用HPLC面積%表示的純度78.1。在裝配有攪拌器、溫度計和冷凝器的2升多頸圓底燒瓶中,在劇烈攪拌下于0-10。C將9-氯乙酰氨基米諾環(huán)素(100g)加入483mL叔丁胺中。加入硤化鈉(16g),于33-38'C攪拌反應(yīng)混合物4小時。反應(yīng)混合物通過HPLC分析反應(yīng)完全,然后冷卻至5-10。C。歷經(jīng)10分鐘加入甲醇(300mL),然后通過蒸餾(10-17。C,68mmHg)濃縮反應(yīng)溶液至350mL。將第二部分甲醇(600mL)加入濃縮物中,通過蒸餾濃縮混合物至350mL。加入甲醇(46mL)和冷水(565mL),同時維持反應(yīng)溫度低于30X:。將溶液冷卻至0-5"C,用100mLHC120°Be調(diào)節(jié)pH至4.0。將溶液轉(zhuǎn)移至5升多頸燒瓶中,用500mL水沖洗,然后用1升水稀釋。于0-5。C攪拌1小時后,加入經(jīng)洗滌的Amberchrom⑤(CG161)樹脂3,將所得混懸液于20-25匸攪拌30分鐘。過濾混懸液,將所得濕濾餅加入340mL5:l水:甲醇溶液中。將濾液放置一旁。于20-25C攪拌30分鐘后,過濾混懸液,將所得濕濾餅加入第二份340mL5:1水:甲醇溶液中。將該第二份濾液放置一旁。過濾混懸液,將所得濕濾餅加入第三份340mL5:l水:曱醇溶液中。過濾后,將第三份濾液與第一份和第二份濾液合并,冷卻至0-5"C。用llmL28%氫氧化銨將pH調(diào)節(jié)至7.0。將溶液于0-5'C攪拌16小時,同時酌情調(diào)節(jié)pH至7.0,于22-25X:下攪拌1小時,同時酌情調(diào)節(jié)pH至7.0。用二氯甲烷(5x980mL)萃取水溶液,對每次萃取而言調(diào)節(jié)pH至7.0。將合并的有機(jī)相轉(zhuǎn)移至分液漏斗,分離水層。將有機(jī)層與100g石危酸鈉合并,于20-25'C攪拌l小時。經(jīng)硅藻土墊過濾混懸液,用250mL二氯甲烷沖洗濾餅。通過蒸餾(-5至5X:,150mmHg)濃縮濾液至150mL,然后于0-5匸冷卻l小時。過濾所得混懸液,用0-5匸的二氯曱烷(2x30mL)洗滌濾餅。將濕濾餅于26-32"C在二氯曱烷(335mL)和甲醇(37mL)中攪拌,直至獲得溶液。經(jīng)硅藻土過濾溶液,用二氯甲烷(2xl5mL)沖洗硅藻土,通過蒸餾(-5至5'C,150mmHg)濃縮至54mL。濃縮操作重復(fù)兩次,首先加入335mL二氯甲烷并減少體積至55-70mL,然后加入254mL二氯甲烷并減少體積至卯-105mL。將所得混懸液于0-5t:攪拌l小時,然后過濾,用-10n的二氯甲烷(2x25mL)洗滌。將固體于35-40匸干燥16小時,然后于45-50C干燥27小時。用HPLC面積%表示的純度97.7%,C-4差向異構(gòu)體1.23%。3經(jīng)洗滌的Amberchrom(CG161M)樹脂如下制備將183g過濾的勻化Amberchrom(CG161M)樹脂加入340mL5:1水:甲醇溶液中。于22-25'C攪拌1小時后,過濾混懸液,獲得濕濾餅,將其抽濾干燥。將濕濾餅于20匸在340mL5:1水:曱醇溶液中攪拌l小時,然后過濾。再重復(fù)該操作一次,獲得經(jīng)洗滌的樹脂。純化實施例1替加環(huán)素攪拌替加環(huán)素粗品(110.0g)與乙酸曱酯(1.65L)的混合物,加熱至30-35r,歷經(jīng)15分鐘加入甲醇(550mL)。于30-35n保持后,在珪藻土(36g)上過濾溫?zé)崛芤海瑸V餅用乙酸曱酯(2xl06g)洗滌。通過蒸餾(20C,150mmHg)濃縮濾液至550mL。加入乙酸曱酯(1.1L),通過蒸餾(20。C,150mmHg)將所得混懸液濃縮至550mL。重復(fù)該步驟,然后將濃縮物冷卻至0-4"C達(dá)l小時。過濾收集所得固體,用0-5'C乙酸甲酯(2xl50mL)洗滌。將固體在真空中干燥(65-70X:,10mmHg)100小時,獲得98.0g(產(chǎn)率89.1%)所需產(chǎn)物。用HPLC面積%表示的純度98.8%和C-4差向異構(gòu)體0.55%。實施例2替加環(huán)素在0-4'C下,將9-#^米諾環(huán)素.11<:1(140.0g)分批加入840mL水中。歷經(jīng)15分鐘,在充分?jǐn)嚢柘录尤胧宥』拾滨B塞}酸鹽(154g),同時維持溫度為0-4'C。將溶液攪拌1-3小時。用30%氫氧化銨將混合物的pH調(diào)節(jié)至7.2±0.2,同時維持溫度為0-10匸。將甲醇(930mL)和840mL二氯甲烷加入溶液中,將其在20-25C下攪拌1小時。進(jìn)行相分離。用3x600mL二氯甲烷萃取7K相,合并有機(jī)相,干燥,濃縮至體積為約500mL。將所得混懸液冷卻至0-2。C達(dá)1小時。過濾固體,干燥,獲得120g產(chǎn)物(產(chǎn)率75%)。用HPLC面積%表示的純度98%,C-4差向異構(gòu)體0.1%。MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。實施例3替加環(huán)素將如實施例2所述制備的替加環(huán)素(15.00g)加入113mL丙酮和113mL甲醇中。將混懸液在20-25X:下攪拌l小時,然后冷卻至0-2X:。攪拌l小時后,過濾混懸液,洗滌,獲得12.55g產(chǎn)物(產(chǎn)率83.7。/。)。用HPLC面積%表示的純度>99%,C-4差向異構(gòu)體0.4%。實施例4替加環(huán)素將如實施例2所述制備的替加環(huán)素(105g)加入800mL丙酮和800mL甲醇中。攪拌混懸液,加熱至30-35n達(dá)15分鐘,然后冷卻至20-25匸。于20-25tM呆持1小時后,將混懸液冷卻至0-4匸并保持1小時。過濾固體,洗滌,干燥,獲得83g產(chǎn)物(產(chǎn)率79。/。)。用HPLC面積。/o表示的純度>99%,C-4差向異構(gòu)體0.4%。實施例5替加環(huán)素向裝配有機(jī)械攪拌器和氮氣保護(hù)的1升多頸燒瓶中加入94.3g濕的替加環(huán)素粗品4、甲醇(305g,386mL)和丙酮(291g,368mL)。將混合物于16-23匸攪拌4小時。將漿狀液通過具有#1Whatman濾紙的9cm布氏漏斗過濾。將濕濾餅于20-25r用曱醇(87g,110mL)洗滌。將濕濾餅在氮氣保護(hù)下抽濾干燥0.1小時。將濕濾餅(75,3g)轉(zhuǎn)回至1升多頸燒瓶中,加入甲醇(233g,295mL)和丙酮(244g,309mL)的溶液。將漿狀液于15-20。C攪拌5.5小時。通過具有#1Whatman濾紙的9cm布氏漏斗過濾漿狀液。濕濾餅于18-24t)用甲醇(70g,88mL)洗滌。將濕濾餅在氮氣保護(hù)下抽濾干燥0.1小時。將濕濾餅(59.0g)轉(zhuǎn)回至1升多頸燒瓶中,加入甲醇(195g,247mL)和丙酮(187g,236mL)的溶液。在18-24。C下攪拌漿狀液3小時。通過具有#1Whatman濾紙的9cm布氏漏斗過濾漿狀液。將濕濾餅于20-25"C用甲醇(55g,70mL)洗滌。將濕濾餅在氮氣保護(hù)下抽濾干燥0.1小時。對濕濾餅(48.9g)取樣進(jìn)行高壓液相色鐠法(HPLC)分析(總雜質(zhì)-0.62%,米諾環(huán)素=0.17%,C-4差向異構(gòu)體=0.35%,最大其它單項雜質(zhì)=0.05%)。4替加環(huán)素粗品由從供應(yīng)商Interchem獲得的米諾環(huán)素鹽酸鹽制得將濕濾餅(48.9g)轉(zhuǎn)移至具有真空蒸餾設(shè)備的2升多頸燒瓶中。向濕濾餅中加入預(yù)混合的甲醇(90g,114mL)和二氯曱烷(l,023g,772mL)溶液中。將漿狀液在15-20n下攪拌,獲得紅色溶液。將溶液歷經(jīng)0.8小時在13-17"C和330mmHg真空下蒸餾至160mL,產(chǎn)生橙色漿狀液。向2升燒瓶中加入二氯甲烷(818g,617mL),將漿狀液于6-13C和817mmHg真空下歷經(jīng)0.7小時蒸餾至183mL。加入二氯甲烷(635g,479mL),將漿狀液在6-7'C和817mmHg真空中歷經(jīng)0.6小時重蒸餾至183mL。將所得橙色漿狀液冷卻至0-5n并于0-5r保持2小時,同時進(jìn)行攪拌。通過具有#1Whatman濾紙的7cm布氏漏斗過濾漿狀液。濕濾餅用兩份O'C的69g(52mL)的二氯甲烷洗滌。在氮氣保護(hù)下,將濕濾餅抽濾干燥5分鐘。對濕濾餅(48.7g)取樣進(jìn)行HPLC分析(總雜質(zhì)=0.49%,米諾環(huán)素=0.12%,C-4差向異構(gòu)體-0.32%,其它雜質(zhì)=0%)。然后將濕濾餅在25t:和《10mmHg的真空下干燥57.5小時至二氯甲烷水平為2.2%,獲得32.3g替加環(huán)素(產(chǎn)率34.2%)。采用已經(jīng)由從供應(yīng)商Hovione和NipponKayaku獲得的米諾環(huán)素.HC1制得的替加環(huán)素粗品進(jìn)行該操作。表1和2給出了釆用每種來源的米諾環(huán)素.HCl原料由上述方法獲得的替加環(huán)素中存在的雜質(zhì)比較。這些^明該方法提供了具有低水平雜質(zhì)的具有良好產(chǎn)率的替加環(huán)素。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>1.以無水物為基礎(chǔ),不含溶劑。2.排除差向異構(gòu)體。3.最大單項雜質(zhì)(LSI),排除C-4差向異構(gòu)體和米諾環(huán)素。相對于GAR-936的相對保留時間(RRT)。4.brl:低于HPLC的報告限0.05%。5.0.0005%的brl。6.0.0003%的brl。7.0.0030%的bii(單樣品)。8.2ppm的brl。9.63ppm的brl。10.針對原料和產(chǎn)物的強(qiáng)度進(jìn)行了校正。實施例6替加環(huán)素將替加環(huán)素粗品的濕濾餅(72.5kg,干重38.2kgS)在191kg(5份)丙酮和191kg(5份)甲醇中攪拌并形成漿狀液。然后將漿狀液溫?zé)嶂?0至36r:,立即冷卻至19至25X:,于19至25XM呆持2小時。然后將漿狀液冷卻至0至6"C,于0至6匸保持1小時。過濾和用2x34kg(0.9^^)丙酮/曱醇(l:l)洗滌后,然后測試濕濾餅中的米諾環(huán)素(0.23%)、9-氨基米諾環(huán)素(0%)、最大單項雜質(zhì)(除了C-4差向異構(gòu)體以外)(0.09%)。C-4差向異構(gòu)體含量為1.12%。根據(jù)分析數(shù)據(jù),未進(jìn)行另外的重新制漿狀液。向濕濾餅中加入440kg(11.5份)二氯甲烷和39,3kg(l.O份)甲醇,將混合物加熱至30至36X:以溶解。將溶液批料經(jīng)過0.3微米減熱原過濾器和0.2微米澄清過濾器過濾。然后進(jìn)行三次真空蒸餾以除去甲醇,在第二次和第三次蒸餾之前補添二氯甲烷(分別為440kg和339kg)。殘余的曱醇水平為0.3%。將批料冷卻至0至6匸并攪拌1小時。過濾批料,用2x42.1kg(l.l份)預(yù)冷卻(-13至-7'C)的二氯甲烷洗滌,在不超過60'0的溫度下干燥至千燥失重<2.5%。將物質(zhì)研磨,獲得22.3kg替加環(huán)素(產(chǎn)率58%)。用HPLC面積%表示的純度98.2%,C-4差向異構(gòu)體1.55%,米諾環(huán)素0.1%,9-氬基米諾環(huán)素0%,最大單項其它雜質(zhì)=0.08%。5由干燥失重數(shù)據(jù)計算的干重實施例7替加環(huán)素將替加環(huán)素粗品的濕濾餅(103.5kg,干重53.4kg"在191kg(5份)丙酮和191kg(5份)甲醇中攪拌并形成漿狀液。然后將漿狀液溫?zé)嶂?0至36X:,立即冷卻至19至25t:,于19至25。C保持2小時。然后將漿狀液冷卻至0至6。C,于0至6。C保持1小時。過濾和用2x34kg(0.9份)丙酮/曱醇(l:l)洗滌后,然后測試濕濾餅中的米諾環(huán)素(0.12%)、9-氨基米諾環(huán)素(0%)、最大單項雜質(zhì)(除了C-4差向異構(gòu)體以外)(0.13%)。C-4差向異構(gòu)體含量為0.37%。根據(jù)分析數(shù)據(jù),未進(jìn)行另外的重新制漿狀液。向濕濾餅中加入440kg(U.7份)二氯甲烷和55.7kg(l.O份)甲醇,將混合物加熱至30至36'C以溶解。將溶液批料經(jīng)過0.3微米減熱原過濾器和0.2微米澄清過濾器過濾。然后進(jìn)行三次真空蒸餾以除去甲醇,在第二次和第三次蒸餾之前補添二氯曱烷(分別為624kg和481kg)。殘余的甲醇水平為1.07%。將批料冷卻至0至6'C并攪拌1小時。過濾批料,用3x59.7kg(1.1份)預(yù)冷卻(-13至-7匸)的二氯甲烷洗滌,在不超過60'C的溫度下干燥至干燥失重〈.5。/。。將物質(zhì)研磨,獲得31.7kg替加環(huán)素,為第一批收獲物。由結(jié)晶器中的剩余產(chǎn)物組成的第二批收獲物提供了另外的2.5kg,這兩批收獲物代表自替加環(huán)素粗品開始的產(chǎn)率64%。6由千燥失重數(shù)據(jù)計算的干重雖然本發(fā)明已通過討論本發(fā)明的實施方案及其非限制性的實施例進(jìn)行了描述,但是本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀本說明書和權(quán)利要求書后可預(yù)見其它也落入本發(fā)明的預(yù)期范圍內(nèi)的實施方案和變體,因此本發(fā)明的范圍應(yīng)當(dāng)僅由所附的權(quán)利要求書的范圍來解釋和定義。權(quán)利要求1.純化至少一種式1化合物或其可藥用鹽的方法式1其中R1和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(C1-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者R1和R2與N一起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(C1-C4)烷基;且n為1-4,該方法包括A)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,B)在0℃至40℃的溫度下混合至少一段時間,以得到第一混合物,所述的至少一段時間為15分鐘至2小時,和C)獲得所述的至少一種式1化合物。2.純化至少一種式l化合物或其可藥用鹽的方法其中R!和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NRsR4,其中113和114各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且n為l-4,該方法包括A)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,b)在30。C至WC的溫度下混合一段時間,以得到第一混合物,C)將第一混合物冷卻至15。C至25。C的溫度,在不混合的情況下使混合物靜置第二段時間,D)將第一混合物冷卻至oc至6t:的溫度,在不混合的情況下使混合物靜置第三段時間,和E)獲得所述的至少一種式1化合物。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法,其中n是l,Ri是氫,R2是叔-丁基,R3和R4各自是曱基。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中n是1,&和R2與N—起形成吡咯烷基,R3和R4各自是甲基。5.根據(jù)權(quán)利要求1、3或4的方法,其中與至少一種極性非質(zhì)子溶液和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并的至少一種式1化合物以選自固體、漿狀液、混懸液和溶液的形式被提供。6.根據(jù)權(quán)利要求l、3、4或5所述的方法,其中由所述方法獲得的至少一種式1化合物含有低于1%的式1化合物或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體。7.根據(jù)權(quán)利要求l、3、4、5或6所述的方法,其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑選自丙酮、1,2-二氯乙烷、乙酸甲酯、曱基乙基酮、甲基異丁基酮、二氯曱烷和乙酸乙酯。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑選自丙酮和二氯甲烷。9.根據(jù)權(quán)利要求l、3、4、5、6、7或8所述的方法,其中所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇和叔-丁醇。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑是甲醇。11.根據(jù)權(quán)利要求l、3、4、5或6所述的方法,其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑包含丙酮,所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑包含甲醇。12.根據(jù)權(quán)利要求l、3、4、5或6所述的方法,其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑包含二氯甲烷,所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑包含甲醇。13.根據(jù)權(quán)利要求l、3、4、5或6所述的方法,其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑包含乙酸甲酯,所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑包含甲醇。14.根據(jù)權(quán)利要求1和3至13中任意一項所述的方法,其中式1化合物與等體積的至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并。15.根據(jù)權(quán)利要求1和3至14中任意一項所述的方法,其中將第一混合物在15X:至25X:的溫度下混合30分鐘至2小時的第一段時間,然后在01;至2'C的溫度下混合30分鐘至2小時的第二段時間。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法,其中第一段時間和第二段時間各自為l小時。17.根據(jù)權(quán)利要求1和3至14中任意一項所述的方法,其中所述的至少一段時間為30分鐘至2小時,溫度為15。C至25。C,并且進(jìn)一步包括在混合后過濾第一混合物,以獲得固體。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法,其進(jìn)一步包括下列步驟A)將所述固體與等體積的至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑在15'C至25'C的溫度下合并30分鐘至2小時的第一段時間,和B)過濾,以獲得第二固體。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中將A和B重復(fù)二至十五次。20.根據(jù)權(quán)利要求1和3至14中任意一項所述的方法,其進(jìn)一步包括由第一混合物獲得固體,和將所述固體與至少一種極性質(zhì)子溶劑和至少一種極性非質(zhì)子溶劑合并,以獲得合并物。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法,其中所述的合并物包含甲醇和二氯曱烷,甲醇:二氯曱烷的體積比為1:5至1:15。22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法,其進(jìn)一步包括將第二混合物在30。C至36X:的溫度下混合,然后過濾,以獲得溶液。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法,其進(jìn)一步包括將溶液中極性質(zhì)子溶劑的濃度降低至〗氐于5%的水平和在O'C至6C的溫度下混合30分鐘至2小時的一段時間,然后過濾。24.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其中所述的一段時間為10至20分鐘。25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法,其中所述的一段時間為15分鐘。26.根據(jù)權(quán)利要求2、24或25所述的方法,其中第二段時間為30分鐘至3小時。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法,其中第二段時間為1小時至2小時。28.根據(jù)權(quán)利要求2和24至27中任意一項所述的方法,其中第三段時間為30分^l中至2小時。29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法,其中第三段時間為1小時。30.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中式1化合物是48-(4(£,1230[)卜4,7-雙(二甲基氨基)-9-U(叔丁基氨基)乙?;被?l,4,4a,5,5a,6,ll,12a-八氫-3,10,12,12&-四羥基-1,11-二氧代-2-并四苯-甲酰胺或其可藥用鹽。31.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中式1化合物是[4S-(4a,12aa)-4,7-雙(二甲基氨基)-9-[[(吡咯烷基)乙?;被鵯-l,4,4a,5,5a,6,ll,12a-八氫-3,10,12,12a-四羥基-l,11-二氧代-2-并四苯-甲酰胺或其可藥用鹽。32.純化替加環(huán)素或其可藥用鹽的方法該方法包括A)將替加環(huán)素與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,B)在0匸至40。C的溫度下混合至少一段時間,以得到第一混合物,所迷的至少一段時間為15分鐘至2小時,和C)獲得替加環(huán)素。33.根據(jù)權(quán)利要求32的所述方法,其中與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并的替加環(huán)素以選自固體、漿狀液、混懸液和溶液的形式被提供。34.根據(jù)權(quán)利要求32或33所述的方法,其中由所述方法獲得的替加環(huán)素含有低于1%的式1化合物或其可藥用鹽的C-4差向異構(gòu)體。35.根據(jù)權(quán)利要求32、33或34所述的方法,其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑包含丙酮,所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑包含甲醇。替加環(huán)素36.才艮據(jù)權(quán)利要求32、33或34所述的方法,其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑包含二氯甲烷,所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑包含甲醇。37.用權(quán)利要求l的方法制備的化合物。38.包含至少一種權(quán)利要求1的化合物的組合物。39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的組合物,其進(jìn)一步包含至少一種可藥用載體。40.根據(jù)權(quán)利要求38所述的組合物,其中所述的至少一種權(quán)利要求l的化合物是至少一種式1化合物或其可藥用鹽其中Ri和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且ii為l-4,該方法包4舌A)使至少一種硝化劑與至少一種式2化合物或其鹽反應(yīng),以制備包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液,式l其中l(wèi)l是l,R是氫,R2是叔-丁基,R3和R4各自是甲基。41.制備至少一種式l化合物或其可藥用鹽的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式3B)將至少一種還原劑與反應(yīng)混合物漿狀液合并,以制備至少一種式4化合物或其鹽,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>C)使至少一種式4化合物與至少一種M?;衔镌诜磻?yīng)介質(zhì)中反應(yīng),所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時至少一種堿性溶劑,以獲得至少一種式1化合物,D)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并;E)在0。C至40'C的溫度下混合至少一段時間,以得到第一混合物,所述的至少一段時間為15分鐘至2小時,和F)獲得所述的至少一種式l化合物。42.制備至少一種式l化合物或其可藥用鹽的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式1其中R1和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-CO烷基;且n為l-4,該方法包括A)將至少一種還原劑與包含至少一種式3化合物或其鹽的反應(yīng)混合物漿狀液合并,以制備至少一種式4化合物或其鹽,B)使至少一種式4化合物與至少一種氨基?;衔镌诜磻?yīng)介質(zhì)中反應(yīng),以獲得式l化合物,所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時至少一種堿性溶劑,C)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,D)在0。C至糾C的溫度下混合至少一段時間,以得到第一混合物,所述的至少一段時間為15分鐘至2小時,和E)獲得所述的至少一種式l化合物。43.制備至少一種式l化合物或其可藥用鹽的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>式1其中&和R2各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C6)烷基以及環(huán)烷基,或者Ri和R2與N—起形成雜環(huán);R為-NR3R4,其中R3和R4各自獨立地選自氫、直鏈和支鏈(d-C4)烷基;且n為l-4,該方法包括A)使至少一種式4化合物或其鹽與至少一種M?;衔镌诜磻?yīng)介質(zhì)中反應(yīng),以獲得式l化合物,所述反應(yīng)介質(zhì)選自水性介質(zhì)以及在沒有反應(yīng)物堿存在時至少一種堿性溶劑,B)將至少一種式1化合物與至少一種極性非質(zhì)子溶劑和至少一種極性質(zhì)子溶劑合并,C)在0n至40'C的溫度下混合至少一段時間,以得到第一混合物,所述的至少一段時間為15分鐘至2小時,和D)獲得所述的至少一種式l化合物。44.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法,其中n是l,&是氫,R2是叔-丁基,R3和R4各自是甲基。45.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法,其中n是l,Ri是氫,112是叔-丁基,R3和Rt各自是甲基。46.根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法,其中n是l,Ri是氫,112是叔-丁基,R3和R4各自是甲基。47.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法,其中式1化合物是[4S畫(4a,12aa)-4,7誦雙(二甲基氨基)國9國[(叔丁基氨基)乙?;被鵠國l,4,4a,5,5a,6,ll,12a誦八氫畫3,10,12,12a-四羥基-l,ll國二氧代畫2陽并四苯曙曱酰胺鹽酸鹽。48.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法,其中替加環(huán)素是替加環(huán)素鹽酸鹽。49.根據(jù)權(quán)利要求2和24至29中任意一項所述的方法,其中所述的至少一種極性非質(zhì)子溶劑選自丙酮、l,2-二氯乙烷、乙酸甲酯、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、二氯甲烷和乙酸乙酯。50.根據(jù)權(quán)利要求2、24至29和49中任意一項所述的方法,其中所述的至少一種極性質(zhì)子溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇和叔-丁醇。全文摘要本發(fā)明公開了制備和純化四環(huán)素如替加環(huán)素的方法。本發(fā)明還公開了通過這些方法制備的四環(huán)素組合物如替加環(huán)素組合物。文檔編號C07C231/24GK101228114SQ200680026792公開日2008年7月23日申請日期2006年5月25日優(yōu)先權(quán)日2005年5月27日發(fā)明者A·J·圖佩爾,A·P·米肖,A·S·皮爾徹,J·J·麥考利三世,J·M·奧爾內(nèi),L·克里什楠,M·貝納池茨,P-E·薩姆,S·戴格內(nèi)奧特申請人:惠氏公司
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