專利名稱：：抗微生物六肽的制作方法抗微生物六肽優(yōu)先權要求本申請要求2005年2月9日提交的美國臨時申請60/651,270的優(yōu)先權，該臨時申請的完整內(nèi)容在此引入作為參考。發(fā)明領域本發(fā)明涉及含表現(xiàn)出期望生物特性的抗微生物六肽的組合物和方法。更具體地說，所述六肽表現(xiàn)出期望的抗真菌活性，并可選地表現(xiàn)出抗細菌活性。具體地說，公開了以下六肽其在1和3位具有帶電(親水)殘基；在2、4和6位具有疏水殘基；在5位具有萘丙氨酸、脂肪族殘基(例如脯氨酸)或芳香族殘基(例如苯丙氨酸)；一般以式XBXBOB表示。通過向這些肽中的某些肽的N-端加入脂質(zhì)部分可進一步增強活性，尤其是在血清中。另外，在C-端酰胺化似乎增強活性。相關技術的描述數(shù)十年來研究人員一直在開發(fā)抗微生物的療法和藥劑。近來，需要新的抗微生物藥來治療數(shù)量漸增的抗藥性細菌、病毒和真菌感染。在科學文獻和已頒發(fā)專利中均已報告了各種各樣的生物活性肽。肽在過去分離自天然來源，最近已成為了結(jié)構-功能相關性研究的目標。另外，天然肽已用作合成肽類似物的設計起點。肽類抗生素的綜述在l"7年由R.E.W.Hancock發(fā)表(丄a"c"349:418-422)。討論了各種類型肽的結(jié)構、功能和臨床應用。陽離子型肽類抗生素的其它綜述在1998年發(fā)表(Hancock,R.E.W.和Lehrer，R.7VemfeBz'ofec/7"o/.16:82-88)。這些肽通常為12-45個氨基酸長的陽離子兩性分子。這些肽能穿透細胞膜，導致對微生物因子的防治。1999年R.E.W.Hancock(/>鄉(xiāng)57(4):469-473;爿油Wcra6fa/C/7ewoAera;^43(6):1317-1323)論述了宿主防御性陽離子肽的臨床潛力。討i侖了該類肽的抗細菌、抗真菌、抗病毒、抗癌癥和傷口愈合特性。已公開(參見例3口Dathe，M.和Wieprecht,T.5z'oc/nVw'caef_6zb_p/z;^/ca/祉77-S7(1999);Epand,R.M.和VogelHJ.5/oc/n>w'cfl"所op/2;^ca^cto1462:11-28(1999》。據(jù)認為能夠調(diào)節(jié)活性和選擇性的結(jié)構參數(shù)包括螺旋性、疏水矩、疏水性、親水/疏水螺旋表面對向角和電荷。業(yè)已報道了一系列廣泛的天然a螺旋肽。本文描述了該領域中許多參考文獻中的幾個代表性文獻。天蠶素是一個分離自昆蟲的a-螺旋肽家族。已知天蠶素的抗細菌特性，如美國專利第4，355,104和4,520,016號所述。一般來說發(fā)現(xiàn)天蠶素具有抗某些革蘭氏陰性細菌的活性。已發(fā)現(xiàn)天蠶素對真核細胞不具有活性(Andreu等，歷oc/7e/w;^724:163-188(1985);Boman等,Deve/qpwe"to/a"<iComparaHve/www"o/.9:551-558(1985);Steiner等，淑鮮292:246-248(1981))。得自果蠅(Draso;/n7a)和大蠶蛾(//;/"http://^(^")的天蠶素表現(xiàn)出具有抗各種真菌菌才朱^^舌'l"生(Ekengren，S.禾口Hultmark，D"http://wecfSz'oc/zem.a"c/7Wb/ec.Sfo/.29:965-972(1999))。據(jù)報道，得自埃及伊蚊(^4^fesaegy/")的天蠶素A與大部分昆蟲天蠶素的不同之處在于其沒有色氨酸和C端酰胺化(Lowenberger,C.等，/Bz.o/.Ozem.274(29):20092-20097(1999))。蛙屬(ia"a)蛙在其皮膚中產(chǎn)生一組廣泛的抗微生物肽(Goraya,J.等，/歷oc/ze肌267:894-900(2000))。^艮道了短至13個氨基酸的肽，并將其分類為多個結(jié)構家族。所述序列基本沒有或沒有顯示出與分離自其它屬蛙的肽(如爪蟾抗菌肽(magainin)和蛙皮抗菌肽(dermaseptin))有序列同一性。爪蟾抗菌肽是一種23個氨基酸的a-螺旋肽，分離自非洲蛙有爪蟾蜍(Zewopws/。ev&)的皮膚(Zasloff，M.Proc.脂/.".S.vl84:5449-5453(1987》。美國專利第5，962,410號公開了用裂解肽如天蠶素和麻蠅毒素(sarcotoxin)抑制真核病原體以及刺激淋巴細胞和成纖維細胞。提出的各種肽包括天蠶素B、天蠶素SB-37、天蠶素A、天蠶素D、Shiva-l、Lepidopteran、麻錄毒素1A、麻錄毒素1B和麻錄毒素1C。Reed,W.A.等，Trarage"/c/仏6:337-347(1997)報道了生產(chǎn)Shiva-l天蠶素類裂解肽的轉(zhuǎn)基因小鼠。用流產(chǎn)布魯氏菌(SraceZ/a"Zw/^)挑戰(zhàn)感染轉(zhuǎn)基因小鼠導致細菌數(shù)相對于非轉(zhuǎn)基因小鼠的感染減少。與前抗微生物肽(cathelin)相關的23-38個氨基酸的a螺旋肽存在于綿羊、人、牛、豬、小鼠和兔的血液細胞中(Zanetti，M.等，月^SZe".374:1-5(1995))。Giacomette,A.等，(尸ep"cfes20:1265-1273(1999))報道了buforinII、天蠶素P1、indolicidin、爪蟾抗菌肽II、乳鏈菌肽(nisin)和ranalexin的抗《斂生物活性。這些肽顯示出抗細菌和酵母的可變活性。已在體外和體內(nèi)制備和測定了各種合成肽。例如，美國專利第5,861,478號公開了采用ot-螺旋構象的約20-40個氨基酸的合成裂解肽。這些肽有效治療微生物感染、傷口和癌癥。公開的肽包括天蠶素B、SB-37*、LSB陽37、SB-37、Shiva1和10-12、P-纖維蛋白信號肽、Manitoul-2、Hecatel陽3、Anubis1畫5和8以及Vishnu1-3和8。Baghian，A.等，(尸印"Vfes18(2):177-183(1997))將Hecate描述為蜂毒溶血肽(melittin)的合成肽類似物。所述肽在其電荷分布方面有差異，但在其兩性ct-螺旋構象方面沒有差異。Hecate抑制單純皰滲病毒(HSV-1)，但對細胞生長和蛋白合成沒有不利影響。合成肽D2A21、D4E1、D2A22、D5C、D5C1、D4E和D4B描述于Schwab，U.等,爿ge"/sC72ewo//2e;-"/_y43(6):1435-1440(1999)。描述了抗各種細菌菌抹的活性。Juwadi,P.等，(/Pepfefei^s.53:244-251(1999))制備并測定了由天蠶素和蜂毒溶血肽組成的雜種肽。合成雜種以研究序列、酰胺鍵方向(螺旋偶極)、電荷、兩親性和疏水性對通道形成能力和抗細菌活性的影響。已提出序列和酰胺4定方向是雜種活性的重要結(jié)構條件。在抗鹽性研究中描述了一種26個氨基酸的昆蟲天蠶素-蜜蜂蜂毒溶血月太雜種及其類^以凈勿(Friedrich,C.等,爿wdw/crohz'"/爿ge"toC/^woAera;^43(7):1542-1548(1999))。已發(fā)現(xiàn)第二位中的色氨酸殘基對活性是關鍵的。發(fā)現(xiàn)序列的適度變化導致肽特性顯著改變。脯氨酸殘基對oc-螺旋肽的抗細菌特性的影響業(yè)已公開(Zhang，L.等，歷oc/^肌38.'8102-8111(1999))。據(jù)報道加入脯氨酸改變了膜插入特性，替換單個脯氨酸可將抗微生物肽改變?yōu)榱呀舛舅亍Ｖ苽淞艘幌盗芯哂?8-30個氨基酸的肽，以便測試序列和電荷改變對抗細菌特性的影響(Scott,M.G.等，/n/ecf./mmim.67(4):2005-2009(1999))。未發(fā)現(xiàn)長度、電荷或疏水性與肽的抗微生物活性之間的顯著關聯(lián)。發(fā)現(xiàn)的總的趨勢是較短的肽比較長的肽活性低，但要指出的是，該作用可能會M列依賴性的。制備和測定了一組合成肽"Moddlin",以比較序列和結(jié)構關系(Bessalle，R.等,/Ozem.36:1203-1209(1993))。具有疏水性和親水性相對面的16和17個氨基酸的肽是高度溶血性的和抗細菌的。較小的狀趨向于具有較低生物活性。已發(fā)現(xiàn)天蠶素-蜂毒溶血肽雜種肽和酰胺化鰈肽保護鮭魚免遭體內(nèi)縵弧菌(F,6n'oawgwz'〃an/m)感染(Jia,X.等，^pp/.iWifcra&'o/.66(5):1928-1932(2000))。滲透泵用于傳遞連續(xù)劑量的4壬一種肽給所述魚。業(yè)已報道了兩親性肽能夠增強傷口愈合并刺激成纖維細胞和角質(zhì)細胞體內(nèi)生長(美國專利第6,001,805號和5，561,107號)。據(jù)報道已制備了表達裂解肽(為與遍在蛋白融合的融合蛋白)的轉(zhuǎn)基因植物(美國專利第6,084,156號)。據(jù)報道制備了富含甲基化賴氨酸的裂解肽，其表現(xiàn)出提升的蛋白水解抗性(美國專利第5,717,064號)。受讓人HelixBioMedix,Inc.是講述裂解肽及其使用方法的幾個另外的已頒發(fā)專利和專利出版物的擁有者。美國專利第6,440,935號描述了具有至少部分地以oc-螺旋構象排列的約30個至約40個氨基酸的肽的刺激性和增殖性應用。美國專利第6,303,568號描述了治療真菌或革蘭氏陰性細菌感染動物的方法。所述治療包括施用諸如天蠶素C-37的肽。美國專利第6,255,282號描述了殺死微生物的方法，包括施用各種肽。所述肽由其構象和序列特性限定。已公開的美國專利申請第20020025918號描述了相似的肽在植物中的應用。已公開的美國專利申請第20030廳52每和2GQ2Mm4^號描述了短的生物活性"FLAK"肽及其使用方法。有各種專利描述了含短肽的化裝品用組合物。例如，美國專利第6,492,326號提出制備和使用含五肽和護膚活性成分的護膚用組合物。Strom等，2003(Jbwr"a/o/A/ed/cz'wfl/C/2em&fr746:1567-1570)4苗述了主要集中于含化學修飾的非常短的肽(二聚體和三聚體)的抗細菌短肽。還描述了某些六肽。但是，沒有測試或論述這些六肽的抗凝:生物性，或者更具體地說，沒有測試或論述這些六肽的任何抗真菌活性。LopezGarcia等，Jbwma/o/jFoodM/craW。/.89:163-170(2003)以及v4/^/^d""d五"v/ro".i^/croWo/.68:2453-2460,(2002))描述了合成肽組合文庫的篩選，導致鑒別出具有抗作物的植物致病性真菌病原體活性的抗真菌六肽。這些抗真菌肽包含RKT或RKK基序作為前三個殘基。抗有臨床意義的病原體(包括真菌病原體)的抗微生物活性的測試或論述沒有描述。同樣，未討論六肽的穩(wěn)定性或毒性特性。因此，有需要開發(fā)具有廣譜有效抗微生物活性的肽，所述活性針對多種微生物，包括革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細菌、原生動物、病毒等，尤其是針對真核病原體如真菌。因為真菌病原體是真核的，所以相對比原核細菌更類似于人宿主，傳統(tǒng)上更難以開發(fā)沒有毒性的針對真核病原體的有效療法。開發(fā)抗真菌肽也是這樣的情況。另外，抗真菌肽趨向于相對較長(>15個氨基酸)，因此伴有毒性，還表現(xiàn)出高蛋白酶敏感性、低組織穿透性和高成本。另外，抗微生物肽盡管是局部應用的良好候選藥物，但傳統(tǒng)上與會伴隨系統(tǒng)施用的系統(tǒng)循環(huán)不相適。發(fā)明概述本發(fā)明提供抗微生物六肽，其包含在1和3位的親水帶電殘基(X);在2、4和6位的疏水殘基(B);以及在5位的萘丙氨酸、脂肪族殘基或芳香族殘基(O);其中，所述六肽結(jié)構表示為式XBXBOB。在某些實施方案中，所述六肽將包含以下的氨基酸，其中X選自精氨酸(R)和賴氨酸(K);B選自苯丙氨酸(F)和色氨酸(W);而O選自萘丙氨酸(Nal)、脯氨酸(P)和苯丙氨酸(F)。在其它實施方案中，所述六肽可選自KFKWPW-NH2(SEQIDNO:l)、KWRWPW-NH2(SEQIDNO:2)、KWKWFW-NH2(SEQIDNO:3)、RWRWPW-NH2(SEQIDNO:4)、KFKWFW-NH2(SEQIDNO:6)、RFKWFW-NH2(SEQIDNO:7)、OCT-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:55)、OCT-KWKWFW-NH2(SEQIDNO:56)、KWKWUW-NH2(SEQIDNO:62)和KWKWZW-NH2(SEQIDNO:63)。在某些實施方案中，所述六肽是SEQIDNO:1。在其它實施方案中，所述六肽是修飾過的。這些修飾可包括脂質(zhì)化或酰胺化。在其它實施方案中，所述六肽是脂質(zhì)化的，所述脂質(zhì)選自庚酸、壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、十一烷酸、十三烷酸或辛酸。在另外的實施方案中，所述六肽選自Hep-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:69)、Non-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:70)、Lau-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:72)、Myr-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:77)、Pen-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:78)、Und-KPKWPW-NH2(SEQIDNO:79)、Tri-KFKWPW-麗2(SEQIDNO:80)、Oct-kfkwpw-NH2(SEQIDNO:81)、Lau-kfkwpw-NH2(SEQIDNO:83)和Oct-KFKWPw-NH2(SEQIDNO:84)。在另外的實施方案中，所述六肽在水性溶液中是可溶的。在某些實施方案中，所述六肽連同藥學可接受的載體一起存在于組合物中。在某些實施方案中，所述六肽以治療有效濃度存在于組合物中。此治療有效濃度可在約0.0002%至約90%的范圍內(nèi)。在其它實施方案中，所述治療有效濃度在約0.5%至約10%的范圍內(nèi)。在某些實施方案中，所述組合物還包含一種皮下傳遞系統(tǒng)。在其它實施方案中，所述傳遞系統(tǒng)可為局部傳遞系統(tǒng)。局部傳遞系統(tǒng)可為選自以下的任何形式化妝品制劑、粉劑、乳劑、洗劑、噴霧劑、軟膏、氣溶膠、乳膏和泡沫劑。在另一個實施方案中，治療有效量的六肽用于在哺乳動物中治療或預防真菌或細菌感染。本發(fā)明提供用于治療哺乳動物組織的組合物，所述組合物一般包含六肽，所述六肽含在1和3位的帶電殘基；在2、4和6位的疏水殘基；以及在5位的萘丙氨酸、脂肪族殘基或芳香族殘基；其中，所述六肽結(jié)構表示為式XBXBOB。在又一個實施方案中，提供用于治療微生物感染的組合物，所述組合物包含選自以下的六肽KFKWPW-NH2(SEQIDNO:l)、KWRWPW-NH2(SEQIDNO:2)、KWKWFW-NH2(SEQIDNO:3)、RWRWPW-NH2(SEQIDNO:4)、KFKWFW-NH2(SEQIDNO:6)、RFKWFW-NH2(SEQIDNO:7)、OCT-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:55)、OCT-KWKWFW-NH2(SEQIDNO:56)、KWKWUW-NH2(SEQIDNO:62)、KWKWZW-NH2(SEQIDNO:63)、Hep-KFK，W-NH2(SEQIDNO:69)、Non-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:70)、Lau-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:72)、Myr-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:77)、Pen-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:78)、Und-KFK，W-NH2(SEQIDNO:79)、Tri-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:80)、Oct-kfkwpw-NH2(SEQIDNO:81)、Lau-kfkwpw-NH2(SEQIDNO:83)和Oct-KFKWPw-NH2(SEQIDNO:84)。該組合物還可含有一種藥物傳遞系統(tǒng)。本發(fā)明還提供在哺乳動物中治療或預防微生物感染的方法，所述方法包括施用治療有效濃度的至少一種本發(fā)明的六肽。在某些實施方案中，所述六肽選自KFKWPW-NH2(SEQIDNO:l)、KWRWPW-NH2(SEQIDNO:2)、KWKWFW-NH2(SEQIDNO:3)、RWRWPW-NH2(SEQIDNO:4)、KFKWFW-NH2(SEQIDNO:6)、RFKWFW-NH2(SEQIDNO:7)、OCT-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:55)、OCT-KWKWFW-NH2(SEQIDNO:56)、KWKWUW-NH2(SEQIDNO:62)、KWKWZW-NH2(SEQIDNO:63)、Hep-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:69)、Non-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:70)、Lau-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:72)、Myr-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:77)、Pen-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:78)、Und-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:79)、Tri-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:80)、Oct-kfkwpw-NH2(SEQIDNO:81)、Lau-kfkwpw-NH2(SEQIDNO:83)和Oct-KFKWPw-NH2(SEQIDNO:84)。當微生物感染為真菌感染時，這些方法是有用的。當微生物感染為混合的真菌和細菌感染時，這些方法也是有用的。當真菌感染由選自白色念J朱菌(Ga"(^(iafl/Wc"ra),紅色毛褲菌(7Wc/2o//^to"rw6raw)和須褲毛褲菌(7>7'c/o//2_ytowme"togro;/^fey)的真菌引起時,這些方法可特別有用。當細菌感染由選自銅綠假單胞菌(尸.aewragiwosa)、大腸^干菌(￡co/Z)和金黃色葡萄5求菌awrew》的纟田菌引起時，這些方法也可以是有用的。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供抑制真菌細胞生長的方法，所述方法包括使所述真菌細胞與至少一種本發(fā)明的六肽沖妾觸，使^尋真菌細胞的生長被抑制。在某些實施方案中，所述真菌細胞是植物病原體，選自蕓苔生^求月空菌0^ycosp/za^^/aZra^/"'co/")、蕓苔核盤菌(尸,ewopez&a6ra肌'cae)、戶m"osporacfesfnfc欣和5ofryfe在再一個實施方案中，本發(fā)明提供在哺乳動物中預防微生物感染的方法，所述方法包括施用治療有效濃度的六肽，所述六肽選自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:55、SEQIDNO:56、SEQIDNO:62、SEQIDNO:63、SEQIDNO:69、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:77、SEQIDNO:78、SEQIDNO,79、SEQIDNO:80、SEQIDNO:81、SEQIDNO:83和SEQIDNO:84。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含選自以下的六肽SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:55、SEQIDNO:56、SEQIDNO:62、SEQIDNO:63、SEQIDNO:69、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:77、SEQIDNO:78、SEQIDN0.79、SEQIDNO:80、SEQIDNO:81、SEQIDNO:83和SEQIDNO:84。附圖描述以下附圖構成了本說明書的一部分，納入這些附圖是為了進一步論證本發(fā)明的某些方面。參考這些附圖中的一個或多個連同本文提出的具體實施方案的詳述可更好地理解本發(fā)明。圖1顯示了SEQIDNO:l(P0666)的圓二色性圖，表明在所迷肽與在此情況下由脂質(zhì)體提供的脂質(zhì)環(huán)境相互作用時的結(jié)構變化。圖2顯示了在陰道刺激物中實施的殺菌曲線，表明肽SEQIDNO:55(P1032)在該環(huán)境中殺死細菌(金黃色葡萄球菌(5:awew力)和酵母(白色念珠菌(C."/Wcfl"力)。圖3顯示了在80%血清中實施的殺菌曲線，表明了SEQIDNO.55(P103"在該環(huán)境中殺死金黃色葡萄球菌(51."wre船)的能力。圖4A和4B圖示了萘丙氨酸-1和萘丙氨酸-2的結(jié)構，表明了其相似性和其芳香特性。圖5顯示了在10%血清中實施的殺菌曲線，表明脂質(zhì)化肽SEQIDNO:55(P1032)在該環(huán)境中殺死細菌(金黃色葡萄球菌OS.aw^us))的能力相對于其未脂質(zhì)化母體SEQIDN0:1(P0666)增加。圖6顯示了在10%血清中實施的殺菌曲線，表明了與SEQIDNO:56(P1033)和P50(—種活性17聚體)相比的SEQIDNO:55(P1032)的活性。圖7顯示了LTA結(jié)合測定，表明SEQIDNO:72(P1148)以和P50(一種活性17聚體)相同的程度結(jié)合LTA。圖8顯示了在10。/。血清中實施的殺菌曲線，表明了與P64(—種傳統(tǒng)的陽離子抗微生物肽)相比的SEQIDNO:55(P1032)的活性。圖9提供了通過H-NMR測定的SEQIDNO:l(P0666)的結(jié)構，電荷以黑色表示，疏水性以白色表示。圖IO顯示了在80%血清環(huán)境中實施的殺菌曲線，表明了SEQIDNO:72(Pl148)、SEQIDNO:83(P1343)、SEQIDNO:79(P1275)和SEQIDNO:80(P1276)的活性。圖11顯示了在1mg/ml脂質(zhì)和10%血清環(huán)境中實施的殺菌曲線，表明了與P64(—種傳統(tǒng)的陽離子抗微生物肽)相比的SEQIDNO:55(P1032)的活性。序列表描述以下的氨基酸序列表構成了本說明書的一部分，納入這些序列表是為了進一步論述本發(fā)明的某些方面。參考這些序列的一個或多個連同本文提出的具體實施方案的詳述可更好地理解本發(fā)明。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>氨基酸特征詞(featurekey):OCT表示使用標準肽化學經(jīng)酰胺鍵:向肽加入辛酸。COOH表示C-端未酰胺化；J是氟化苯丙氨酸的符號；U表示l-Nal-OH，而Z表示2-Nal-OH,其中Nal是萘丙氨酸，它是一種非天然氨基酸，為苯丙氨酸和丙氨酸的類似物。脂質(zhì)用縮寫在上文列出，并類似于OCT偶合myr-肉豆蔻酸、und-十一烷酸、pen-十五烷酸、pal-棕櫚酸、ste-硬脂酸、lau=月桂酸、tri=十三》完酸、cap-己酸、ole-油酸、non-壬酸、hep=庚f復、aca=8-氨基辛酸，而deca-癸酸。氨基酸的小寫字母表示D-型殘基。發(fā)明詳述為了可更完整地理解本文描述的本發(fā)明，提出以下的詳述。本發(fā)明總的來講涉及含表現(xiàn)出期望生物特性的抗微生物六肽的組合物和方法。本發(fā)明涉及具有抗一系列抗微生物病原體的抗微生物活性的六肽。這些病原體可包括革蘭氏陽性或陰性細菌、耐酸細菌如分枝細菌、寄生物、皮膚真菌或真菌病原體。典型的真菌病原體包括白色念J朱菌(Ca"fifefaa/Wcara)，而典型的皮膚真菌包括紅色毛褲菌(7Wc/zc;p一o"rwZ^廳)和須褲毛褲菌(Jh'c/zo//^to"mewtagrqp/jytes1)。此六肽的一個實例是SEQIDNO:l(P0666),其具有以下有用且令人驚奇的利益無系統(tǒng)毒性、對蛋白酶降解的敏感性降低、穿透受感染組織部位(或區(qū)域)的能力增加以及生產(chǎn)成本節(jié)省。術語皮膚真菌不是指具體的真菌，而是指對通常在人和動物中引起皮膚病的一組3個真菌屬的常用簡略稱號。這些真菌屬包括表皮褲菌屬CE//cfem。p/^to")、毛褲菌屬(7Wc/zo//^。")和小孑包子菌屬(M/cmspor蘭)。關于配制和施用藥物的技術細節(jié)可見于最新版的Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPublishingCo,EastonPa.)。盡管期望區(qū)域性的局部傳遞，但存在其它傳遞方法，例如口服、胃腸外、氣溶膠、肌內(nèi)、皮下、經(jīng)皮、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或鼻內(nèi)施用。本發(fā)明可在多種載體介質(zhì)中配制，例如在噴霧劑、氣溶月交、7K詳口油型(awaterandanoil-type)乳'液、油禾口7K型(anoilandwater-type)乳液、面霜或體霜、防曬乳或曬后乳或者其它局部施用載體中配制。本文使用的術語"治療劑"指用于治療、對抗、緩解、預防或改善患者的不想要的病癥或疾病的藥劑。在本發(fā)明中待治療的病癥包括通常侵襲哺乳動物如人的各種真菌疾病，包括通常由白色念珠菌(Ua"^a^fl/6z'ca"力引起的酵母感染，以及通常由紅色毛褲菌(JWc/70//z;ytonn^7-wm)和須褲毛褲菌(7Wc/20//^towmewtogro//2少fey)引起的皮膚感染，例如足癬。另外，本發(fā)明的六肽和包含其的組合物可提供對摻入一般的護膚品和化妝品制劑中有用的特征，所述護膚品和化妝品制劑例如為各種皮膚化妝品、護力夫霜、乳液、防曬劑和治療性洗劑或乳膏劑，如抗痤瘡制劑。I.肽合成所有六肽都使用標準Fmoc(9-芴基曱氧羰基)化學法在AdvancedChemTechApex396MultiplePepetideSynthesizer(肽合成4義)上合成。Apex396配有40孔反應單元，用于以0.15mmol規(guī)模同時生產(chǎn)達40種肽。所述肽可使用標準氨基酸制備為酰胺化序列或游離酸序列。首先清洗樹脂，用N,N-二曱基曱酰胺(DMF)預溶脹。對于Rink酰胺或Wang樹脂，溶脹時間在3分鐘至1小時的范圍內(nèi)。用25%哌啶的DMF溶液去除Fmoc保護基達25分鐘。然后徹底清洗樹脂，以去除痕量的哌啶。Fmoc氨基酸單體在等摩爾的HOAt或HOBt的DMF溶液中預活化。所述溶液為0.5M濃度。使用HATUPyBop或HBTU作為活化劑，使用2.5-5倍摩爾過量的氨基酸，在使用位阻堿(二異丙基乙胺)的堿性條件下，進行酰胺偶聯(lián)。偶聯(lián)時間為1-1.5小時，接著清洗和再偶聯(lián)，以實現(xiàn)雙偶聯(lián)或三偶聯(lián)，然后去保護和繼續(xù)增長肽鏈。偶聯(lián)效率使用標準Kaiser測試監(jiān)測。一旦在樹脂上完成了肽合成，如上去除最后的Fmoc基團，留下的序列成為游離堿。脂質(zhì)作為有機酸使用標準肽化學如上所述連接至N端或側(cè)鏈胺。使用95。/。三氟乙酸(TFA)和水連同加入的適宜清除劑實現(xiàn)肽與酸不穩(wěn)定接頭的裂解。裂解時間在30分鐘至1小時的范圍內(nèi)。立即由裂解單元中取出經(jīng)裂解的肽，并轉(zhuǎn)移至用于去除TFA的管中。TFA在減壓下被去除。然后所述肽準備用于經(jīng)使用反相C-18柱的HPLC和質(zhì)譜測定法實施的純化和分析。一級序列構象和制備型純化使用LC/MS/MS系統(tǒng)(ABIAPI2000)完成。本發(fā)明的六肽可使用多種氨基酸前體構建。所述肽可為僅含D-、L-或環(huán)狀(非外消旋的)氨基酸的均一組合物。不考慮立體異構構型，這些氨基酸(本文使用的該術語包括亞氨基酸)的化學結(jié)構可基于19或20種天然氨基酸的化學結(jié)構丙氨酸(Ala;A)、精氨酸(Arg;R)、天冬酰胺(Asn;N)、天冬氨酸(Asp;D)、谷氨酰胺(Gln;Q)、谷氨酸(Glu;E)、甘氨酸(Gly;G)、組氨酸(His;H)、異亮氨酸(Ile;1)、亮氨酸(Leu;L)、賴氨酸(Lys;K)、甲碌,氨酸(Met;M)、脯氨酸(Pro;P)、苯丙氨酸(Phe;F)、絲氨酸(Ser;S)、蘇氨酸(Thr;T)、色氨酸(Trp;W)、酪氨酸(Tyr;Y)和纈氨酸(Val;V)。半胱氨酸(Cys;C)被排除在外是為了防止產(chǎn)物中的二硫鍵問題。本發(fā)明的組合物還可為非均一的，例如含D-、L-和/或環(huán)狀氨基酸。六肽組合物還可含為非天然氨基酸的氨基酸，例如正亮氨酸、高苯丙氨酸、鳥氨酸等。這些非天然氨基酸可選自含氨基和羧酸官能團的化合物，但不可為a氨基酸。一些六肽可用不同的氨基酸模擬物或非天然氨基酸修飾，這可提供特別有用的六肽，因為它們趨向于表現(xiàn)出增加的體內(nèi)穩(wěn)定性。更具體地說，非關鍵氨基酸不必限于蛋白中的那些天然氨基酸，例如L-a-氨基酸或其D-異構體，而是還可包括非天然氨基酸，例如氨基酸模擬物，例如D-或L-萘丙氨酸、D-或L-苯甘氨酸、D-或L-厶噻吩基丙氨酸、D-或L-l-，2-,3-或4-芘丙氨酸、D-或L-3-噻吩基丙氨酸、D-或L-(2-吡咬基)-丙氨酸、D-或L-(3-他咬基)-丙氨酸、D-或L-(2-吡嗪基)-丙氨酸、D-或L-(4-異丙基)-苯甘氨酸、D-(三氟甲基)-苯甘氨酸、D-(三氟曱基)-苯丙氨酸、D-p-氟苯基丙氨酸、D-或L-p-聯(lián)苯基(biphenyl)苯丙氨酸、D-或L-p-曱氧基聯(lián)苯基苯丙氨酸、D-或L-2-吲哚(烷基)丙氨酸和D-或L-烷基丙氨酸，其中所述烷基可為取代的或未取代的甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、異丙基、異丁基、仲異丁基(sec-isotyl)、異戊基或非酸性氨基酸。非天然氨基酸的芳環(huán)包括例如噻唑基、噻吩基、吡唑基、苯并咪哇基、萘基、呋喃基、吡咯基和吡啶基芳環(huán)。六肽穩(wěn)定性可以多種方式測定。例如，肽酶和各種生物介質(zhì)如血漿和血清已用于測試穩(wěn)定性。參見例如Verhoef等，Eur.J.DrugMetab.Pharmacokinetics11:291(1986)。所述肷的半衰期可4吏用典型的25%血清(體積/體積)實驗方便地測定。本領域技術人員會認識到，一旦選擇了本發(fā)明的六肽，就可對其修飾，以含有功能等同的氨基酸置換，但仍保留相同或相似的抗真菌或抗細菌特征。Kyte和Doolittle(1982)已一般性地i侖述了賦予蛋白生物功能的氨基酸的親水指數(shù)(hydropathicindex)的重要性。這些研究人員和其它人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，某些氨基酸可被其它具有相似親水指數(shù)或得分的氨基酸置換，而仍保留即便不同也相似的生物活性。如下表2所展示的，根據(jù)氨基酸的疏水性和電荷特征指定氨基酸的親水指數(shù)。一般認為，氨基酸的相對親水特征決定了所獲蛋白的二級結(jié)構，二級結(jié)構又限定了蛋白與底物分子的相互作用。同樣，在其二級結(jié)構不是肽相互作用的主要方面的肽中，氨基酸殘基在肽中的位置和特征決定了所述肽在生物系統(tǒng)中具有的相互作用。有人提出，通?？杀Ａ羯锕δ艿韧?，其中交換所具有的指數(shù)值的差值不超過±1-2的氨基酸，更優(yōu)選差值在士l之內(nèi)的氨基酸。表2氨基酸親水指數(shù)異亮氨酸纈氨酸亮氨酸苯丙氨酸半胱氨酸/胱氨酸曱硫氨酸1.9丙氨酸甘氨酸蘇氨酸-0.7色氨酸-0.94.23.82.82.51.8-0.4絲氨酸-0.8酪氨酸-1.3脯氨酸-1.6組氨酸-3.2谷氨酸-3.5谷氨酰胺-3.5天冬氨酸-3.5天冬酰胺-3.5賴氨酸-3.9精氨酸-4.5因此，例如具有+4.5親水指數(shù)的異亮氨酸可被纈氨酸(+4.2)或亮氨酸(+3.8)取代，而仍產(chǎn)生具有相似生物活性的蛋白?；蛘?，在數(shù)值范圍的另一側(cè)，賴氨酸(-3.9)可被精氨酸(-4.5)置換，諸如此類。因此，這些氨基酸置換一般來說基于R基團取代基例如在大小、親電特征、電荷等方面的相對相似性。一般來說，盡管不僅僅有這些置換，但考慮了各種前述特征的優(yōu)選置換包括以下置換表3原始殘基代表性的殘基置換丙氨酸giy;scr精氨酸lys天冬酰胺gln;his天冬氨酸glu半胱氨酸S6r谷氨酸asp谷氨酰胺3sn甘氨酸ala組氨酸asn;gin異亮氨酸1SU;val亮氨酸ile;val賴氨酸arg;gin;甲疏氨酸met;leu:絲氨酸t(yī)hr蘇氨酸ssr色氨酸t(yī)yr酪氨酸t(yī)rp;phe纈氨酸ile;leuA.穩(wěn)定肽修飾可對所述六肽實施各種修飾，只要保留需要的抗微生物活性。某些修飾可用于增加所述六肽的固有抗微生物特性。其它修飾可有利于所述六肽的處理。通?？杀恍揎椀碾墓倌軋F包括羥基、氨基、胍鏡、羧基、酰胺、苯酚、咪唑環(huán)或巰基。這些基團的典型反應包括但不限于用烷基卣將羥基乙?；ｔ然甚セ?、酰胺化或還原為醇。碳二亞胺或其它催化劑可用于催化羧基的酰胺化。天冬酰胺或谷氨酰胺的酰胺基可在酸性或》成性條件下被去酰胺化。肽的伯氨基或賴氨酸殘基的氨基之類的氨基容易發(fā)生乙?；?、烷基化、芳基化或酰胺化反應。酪氨酸的酚基可被卣化或硝化。其中肽的溶解性可被降低的實例包括使帶電賴氨酸殘基?；蚴固於彼岷凸劝彼岬聂然阴；?。六肽可綴合至可溶性或不溶性載體分子，以根據(jù)需要修飾其溶解性特性和增加六肽在其目標區(qū)域中的局部濃度。本發(fā)明的六肽組合物還可注射入植物的維管系統(tǒng)中。溶解性載體分子的實例包括聚乙二醇和聚乙烯吡咯烷酮的聚合物。不溶性聚合物的實例包括砂或其它硅酸鹽或聚苯乙烯、纖維素等。六肽還可被-徵嚢化，以增強其在種子、土壤或植林施用當中的穩(wěn)定性。植物施用對治療各種植物真菌疾病可能特別有用。典型的真菌植物病原體包括以下實例例如小麥病原體穎枯殼多孢(Stogo"ospora禾口小麥殼針孢(&pton'aW"c/),以及半活體營養(yǎng)病原體，例如刺盤孢屬(Co〃etoWchm)種，特別是豆炭疽病病原體豆刺盤孢(C.//"cfewi^/a"wm)。其它常見的植物真菌病原體包括諸如蕓苔生球腔菌(Mycasp/7aere//a6ra肌'c/co/")、蕓莒核盤菌(P,e"o/ez/z"Zjras5/c"e)、/Vra"as/7。racfes^wctor和萬o^yfew^wzosa的那些病原體。典型i也，聚酯孩丈5求用于嚢化和穩(wěn)定所述肽。B.大鄉(xiāng)肽合成一旦選定了整體4吏用的具體肽組合物，就在溶液相或固相中實現(xiàn)大規(guī)模(達60kg)肽合成。此合成需要仔細選擇保護基和縮合法。由諸如Sigma-Aldrich，Inc的化學供應商處可獲得具有良好純度的所有起始材料和試劑。另外，可由諸如Bachem或Novabiochem⑧的供應商處獲得氨基酸。通過使用新一代試劑，即HOBt、HOAt、HBTU或HATU,可極大地抑制或消除氨基酸結(jié)構單元在偶聯(lián)條件下的外消旋。連固相法目前都被適宜地開發(fā)成以至少10kg/批重復地生產(chǎn)藥用肽。C.肽在溶液中的大規(guī)^合成溶液相合成使得容易針對基團保護策略、片段選擇和片段偶聯(lián)方法進行設計，以使外消旋最小化。中間體有時可簡單地通過結(jié)晶技術分離，這可消除對通過柱層析純化的需求，因此提升了按比例放大的潛力。同時生產(chǎn)的片段的量可在每一步容易地控制。D.肽的大規(guī)模固相合成用于固相合成的更高級聚合物的成本通常較高。支持體中有一些不能大量獲得。但是，其特性在錨定肽的可及性以及由樹脂釋放完全被保護、去保護或修飾形式的肽方面起重要作用。由實驗室過渡到生產(chǎn)規(guī)模的固相肽合成(SPPS)明顯是有利的，原因在于以下事實整個合成工藝可容易地自動化，合成步驟的效率可監(jiān)測和優(yōu)化。生產(chǎn)規(guī)模的活化工藝是眾所周知的，對環(huán)境無害。另外，SPPS允許以生產(chǎn)規(guī)模由廢棄的濾液直接回收和再循環(huán)過量的氨基酸結(jié)構單元。以下的參考文獻在此具體地引入作為參考BorisGroup,"Productionoflarge-scalepeptidesinsolution."Biochem.Soc.Trans"18(6),1299-306;ChristianBirr，"Thetransitiontosolid-phaseproductionofpharmaceuticalpeptides."Biochem.Soc.Trans"18(6)，1313-16;和PaulLloyd-Williams,FernandoAlbericioandErnestGiralt，"Convergentsolid-phasepeptidesynthesis."Tetrahedron49(48)，11065-11133。在要嘗試大規(guī)模合成本發(fā)明的肽組合物的情況下，應遵循在這些參考文獻中提及的方法和材料。當然，在已確定L-氨基酸肽具有足夠抑制性(或者穩(wěn)定化或者未穩(wěn)定化)的情況下，有可能按照本領域技術人員眾所周知的技術應用重組DNA表達以大規(guī)模量來生產(chǎn)這種肽。在生產(chǎn)重組肽的情況下和需要這種肽的穩(wěn)定性的情況下，可通過使用肽化學領域技術人員已知的技術將D-氨基酸共價連接至一個或另一個或兩個末端來保護所述肽，以防止在每個末端的攻擊。E.肽的微球嚢化可根據(jù)待嚢化的肽組合物的親水或疏水性質(zhì)使用各種微球制備方法。就其提供本文未提到的方法和材料而言，Wang,H.T.等，1991,"Influenceofformulationmethodsontheinvitrocontrolledreleaseofproteinfrompoly(ester)microspheres,"J.ofControlledRelease17:23-25在此具體地引入。(l)o/o乳液法。為了有效攪拌，將在此方法中使用TTA-60滴定裝置(Radiometer,Copenhagen,Denmark)。將聚(DL-丙交酉旨/乙交酯，50:50，Dupont)(0.5g)溶解在二氯甲烷(3.3ml)中。然后可通過在超聲清洗機(Branson3200,BransonCleaningCompany,Shelton，Conn.)中施加30秒的超聲將噴物干燥的肽(25mg)分散在該溶液中。然后可通過帶有220號針頭的注射器將此懸浮液逐滴地通入到充分攪拌的乳液中，所述懸浮液含硅油(20-30ml)、CH2C12(30-40ml)和Span85(2ml)。然后可將石油醚(30ml)滴加入以上分散液中。然后可繼續(xù)攪拌2小時。然后過濾以此方式產(chǎn)生的微球，用石油醚清洗，并真空千燥72小時。(2)oAv乳液法。噴霧干燥的肽(25mg)、聚(DL-丙交酯/乙交酯，50:50)(Dupont或BirminghamPolymers)(0.5g)和CH2C12(2ml)的超聲懸浮液與含油酸鈉(0.2g)的水溶液(50ml)—起在TTA-60中滴定裝置中乳化5分鐘。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(120rpm)以360Torr(1小時，2^C)、160Torr(0.5小時、22。C)以及160Torr和40°C(1小時)去除二氯甲烷。過濾所獲得的樣"求體，用水清洗，于室溫真空干燥。(3)(w/o)/w乳液法。通過使用探頭超聲儀(Branson,Danbury，Conn.)以125W和40。/。工作循環(huán)、脈沖模式將肽(2.6mg)的蒸餾水(100ml)溶液與聚(DL-丙交酯/乙交酯，50:50，HenleyChemical,RG503)的二氯曱烷溶液(0.5g/2ml)—起乳化。該乳液(w/o)將在含0.1%聚乙烯醇的水溶液(50ml，35。C)中用勻漿器(5000rpm,ESGEHandmixerM122,BiospecProducts,Bartlesville，Okla)乳化5分鐘。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上以300Torr和34°C(120rpm)、1小時將二氯甲烷由所獲的(w/o)/w乳液中去除。過濾所獲得的微球，用水清洗，于室溫真空干燥或凍干(Consol4.5，VirtisCo.,Gardiner,N.Y.)。聚合物分子量可通過凝月交滲透層析法測定。微球的粒度可通過掃描電子顯微鏡(SEM,HitachiS-570,Tokyo,Japan)測定。還可進行體外肽釋放研究。將微球(200mg)懸浮在pH7.2的磷酸緩沖鹽水(PBS)(2.5ml)中，并在環(huán)境溫育振蕩器(G-24，NewBrunswickScientificCo.，Edison,N丄)中于37°C和100rpm攪拌。在特定的取樣時間(在研究的前4天每天取樣，在研究的余下天數(shù)每隔一天取樣)完全去除緩沖溶液，用新鮮PBS替換。使用Bradford法或其它合適的定量測定檢測PBS中的肽含量。微嚢化的其它方法是已知的，可在某些情況下發(fā)現(xiàn)其可用性。參見例如美國專利第4,324,683號。II.使用方法本發(fā)明的其它實施方案涉及使用上述六肽的方法。使用方法優(yōu)選對正常的、未感染的哺乳動物細胞不引起損傷或殺傷。在治療劑量水平的使用方法優(yōu)選對正常的、未感染的哺乳動物細胞不引起損傷或殺傷。所述使用方法可包括使用一種六肽，或者可包括使用多種六肽。對于本發(fā)明而言，"活性成分"指能夠抑制靶微生物生長的六肽。耙微生物包括但不限于動物和人的病原體，例如引起酵母感染和各種皮膚感染(如足齊和其它皮膚真菌病癥)的那些病原體。靶微生物還可包括那些引起根腐病、猝倒病、系統(tǒng)感染、維管疾病以及才直物的某些表面區(qū)域感染的真菌。a.動物真菌疾病(腐霉屬(w/n'Mw)、念珠菌屬(aw力Wfl))可以預見，本發(fā)明還可用于治療各種哺乳動物感染。以下的表4顯示了各種哺乳動物真菌疾病，所述哺乳動物包括可接受本發(fā)明的組合物和方法的動物和人。本發(fā)明提供了可用于治療細菌和/或真菌感染的藥物組合物。此藥物組合物包含有效量的抗所述微生物劑和藥學可接受載體。用本文詳細描述的六肽組合物測試本文列出的某些致病生物。藥學可接受載體是本領域已知的，公開于美國藥典和國家處方集，本發(fā)明的六肽可在所述載體中傳遞。表4真菌系統(tǒng)性的:皮炎芽生菌(萬/"加"CejA/7W加'礎51)42J求孑包子菌(Cocc/^ofi/es/mm/to)莢膜組織孢漿菌(My鄉(xiāng)/(zy應c，wtoww)腐霉(尸-細卿.)接合菌(Z膽o輝cefey5^/7.)希伯氏鼻孑包子蟲(朋!'"os/on-^/腦化e6erg)中克孑包子絲菌妳(ra/^rixsc/e"c嗣皮膚細胞犬小孑包子菌(M'cnw/or簡cam's)歪斜小孢子菌(Micro5porMmcfoto"畫)石膏狀小孢子菌(M/cro5por,gy戸e廳)豬小孢子菌(Mcmypor膽"朋膽)須齊毛齊菌(TWc&op/z少to"we"togrop/i[y^力馬毛齊菌(7Wc/zop一o"e一tt謂)疾狀毛褲菌(7Wc/zo;一onverrwcay畫)雞毛褲菌(ZWc/2op一o"g"〃細e)人系統(tǒng)性真菌院內(nèi)感染發(fā)病率(病例/年)念珠菌(Ca"c/油柳.)(以頻率下降的感染病因列出的物種)白色念珠菌(Camfe/aAfZ&fcam1)熱帶念珠菌(Ca"淑a近平滑念珠菌(Ca"c/油戸m戸7(wv'力克魯斯念珠菌(Ca"(i油^rw"/)假熱帶念珠菌(Ca"ii油j^wdo^"o/7/cflfe)星開j念珠菌(Ca"淑a欲/toof'tfea)季也蒙念珠菌(Ca"d油gw////er附o"必)葡萄牙念珠菌(Ca"d油/z^婦'ae)目標人、狗人、狗、牛、馬、貓、綿羊、嚙齒動物(已在疫苗方面進行了幾次嘗試)人、狗、貓、馬狗、馬豬、山羊、牛、鹿、馬、狗、貓狗、馬、人貓、狗、馬、人貓、狗、人、馬狗哺乳動物豬狗、貓、牛、馬、人馬牛、人(在歐洲有疫苗)鳥202,000鼓褶念珠菌(Ca"Wdarwgcwa)曲霉04印wgj//1^^p.)43,000光滑球擬酵母(rora/o;w"g/Wwto)18,000接合菌綱(Zygomycetes)7,000根據(jù)設想的具體應用，本發(fā)明提供的藥物組合物可配制為溶液、混懸劑、胃腸外制劑、軟膏劑、乳膏劑、洗劑、噴霧劑、粉劑或片劑、膠嚢劑。胃腸外制劑可包含溶媒如特別蒸餾的無熱源水、磷酸鹽緩沖液或生理鹽水。軟膏劑、乳膏劑、洗劑和噴霧劑可包含載體，如植物油或礦物油、白礦脂或高分子量醇，即大于C^的醇。片劑或膠嚢劑可包含稀釋劑(例如乳糖)、粘合劑、潤滑劑(例如硬脂酸)和崩解劑(例如玉米淀粉)。還提供了治療患有真菌感染的患者的方法，其包括給所述對象施用有效殺細菌或真菌量的本發(fā)明藥物組合物。用于治療或預防粘膜的細菌或真菌感染的施用方式在本領域眾所周知?？墒购钚猿煞值娜楦鄤⑺▌┗蛉芤簞┡c感染區(qū)域接觸。當感染處于外部時，可每日兩次將乳膏劑按摩入感染區(qū)域和周圍區(qū)域，直至感染已被根除之后。在需要陰道內(nèi)使用的情況下，應使用常規(guī)涂藥器將約5g乳膏劑高位注射入陰道宵窿。此治療應每日重復兩次，直至感染已4皮根除?；蛘?，可每日一次或兩次將陰道栓劑高位插入陰道穹窿，持續(xù)治療，直至感染已一皮才艮除為止?？赡苄枰渲坪行Я康谋景l(fā)明六肽或其組合的常規(guī)假牙(dentoe)膠粘糊劑。典型的濃度在每100g糊劑0.0125%至1.5%重量的抗微生物劑的范圍內(nèi)。以常規(guī)方式將約2g糊劑施加于假牙的接觸面，然后嵌裝入嘴中。此施加應在于假牙清潔劑中過夜浸泡后進行?？赏ㄟ^向約3-3.5g片劑加入有效量的抗微生物劑配制假牙清潔劑。此片劑溶解在水中，產(chǎn)生用于清潔假牙的抗微生物溶液。在優(yōu)選的使用模式中，在假牙由患者嘴中取出后，將假牙浸泡在此清潔劑中達約8小時至約12小時。如果有需要，還可用本發(fā)明的抗樣i生物劑配制假牙粘合粉，代替使用假牙粘合劑。還可用本發(fā)明的一種或多種六肽配制含有效量的活性藥劑的口噴霧劑。該材料可作為抗微生物劑以0.25-0.5ml等份每天1-3次被噴霧到各個象限的牙齒和牙齦表面上。對于假牙佩帶者來說，可在每日嵌裝假牙之前將噴霧劑直接用在假牙表面上。如果有需要，可提供含有效量的所述抗微生物劑的漱口制劑。所述抗微生物劑可以有效量使用，包括在系統(tǒng)施用時約1至約500mg/kg宿主重量的范圍內(nèi)的劑量?；钚运巹┛膳渲圃诹姿峋彌_鹽溶液中。氣溶膠噴霧劑也是已知的，可通過其導入本發(fā)明的抗微生物六肽組合物。將抗微生物肽制備為藥物組合物的代表性方法可見于美國專利第5,126,257號，該專利全文在此引入作為參考。本發(fā)明的一個實施方案是使用一種或多種本發(fā)明的六肽抑制或殺死微生物細胞(微生物)。所述微生物可為細菌細胞、真菌細胞、原生動物、病毒或病原樣i生物感染的真核細胞。所述方法一般來i兌涉及使微生物與一種或多種本發(fā)明的六肽接觸。接觸步驟可在體內(nèi)、在體外、局部、口服、經(jīng)皮、系統(tǒng)或本領域技術人員已知的任何其它方法實施。接觸步驟優(yōu)選以足以抑制或殺死樣i生物的濃度實施。所述六肽的濃度可為至少約0.1^M、至少約0.5pM、至少約1^M、至少約10|iM、至少約20(iM、至少約50pM或至少約100^M。使用方法可涉及抑制或殺死微生物，例如細菌、革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌、分枝細菌、酵母、真菌、藻類、原生動物、病毒和胞內(nèi)生物。具體實例包括但不限于葡萄球菌屬OStop/^/ococcw)、金黃色葡萄J求菌(Stop/z7/0c0ccus(3wreiw)、，支單月包菌屬(i^ewcfomowas)、4同鄉(xiāng)錄4艮單月包菌(/^eM(icwo"ayflerwg7'"oy")、大腸才干菌(Eyc/zerz'c/zz'aco/Z)、衣原體屬(C7z/am少Wa)、白色念珠菌(Ca"d油"/6z'C(my)、酵母屬(Sacc/wramyc&s)、酉良酒酵母(5"acc/w;-owycaycerev/w'ae)、粟酒裂殖酵母(Sc/2&ayacc/wrcwy;cas戶om6e)、克氏錐蟲(TJ^pawasomacn/z()或惡、'l"生癡原蟲CP/aswoAwm/a/cz>aram)。才妄觸步驟可通過系統(tǒng)注射、口月良、皮下、IP、IM、IV注射或通過局部施用來實施。對注射來說，劑量.可在以下的任一個濃度之間約1mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、約25mg/kg、約50mg/kg、約75mg/kg和約100mg/kg。接觸步驟可對哺乳動物、貓、狗、母牛、馬、豬、鳥、雞、植物、魚或人實施。目前用于抗細菌應用的優(yōu)選六肽包括SEQIDNO:l、SEQIDNO:55、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:79和SEQIDNO:80。目前用于抗真菌應用的優(yōu)選六肽包括SEQIDNO:l、SEQIDNO:55、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:79和SEQIDNO:80。目前用于抗細菌和抗真菌應用的優(yōu)選六肽包括SEQIDNO:l、SEQIDNO:55、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:79和SEQIDNO:80。B.六肽與抗真菌劑或抗細菌劑的協(xié)同作用本發(fā)明的再一個實施方案涉及加性或協(xié)同增強治療劑活性的方法。該方法可包括制備一種組合物，其中所述組合物包含至少一種本發(fā)明的六肽和治療劑(例如抗生素，諸如青霉素)。備選地，該方法可包括采用與其它治療劑聯(lián)用的六肽(或六肽組合物)的聯(lián)合治療。所述六肽或六肽組合可為列于表1中的任一種多肽。優(yōu)選地，所述方法包括施用以下的至少一種六肽SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:55、SEQIDNO:56、SEQIDNO:62、SEQIDNO:63、SEQIDNO:69、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:77、SEQIDNO:78、SEQIDNO:79、SEQIDNO:80、SEQIDNO:81、SEQIDNO:83和SEQIDNO:84。例如，如在以下實驗中的描述，SEQIDNO:55(S35-2)與治療劑克霉唑一起表現(xiàn)出對唑抗性菌抹白色念珠菌(C.a/^ca"力的協(xié)同作用。<吏用分級抑制濃度(fractionalinhibitoryconcentration)(FIC)指凄史確定抗微生物劑之間的協(xié)同作用。在單獨的情況下測定抗測試微生物的肽MIC3次。在等于肽MIC的1/4的恒定量的肽存在下測試2倍連續(xù)稀釋度的萘啶酮酸或氯霉素。如下計算FIC指數(shù)FIC=0.25+MIC(組合中的抗生素)/MIC(單獨的抗生素)，其中025為組合中的肽的MIC與肽自身的MIC的比率。低于0.5的FIC指數(shù)被認為是表現(xiàn)出協(xié)同作用。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>所有菌抹都是得自TedWhite教授(SeattleBiotechnologyResearchInstitute,Seattle)的哇4元性臨床分離才朱。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>在又一個實例中，SEQIDNO:55(S35-2)與治療劑多粘菌素B(PXB)—起表現(xiàn)出對抗藥性細菌(例如描述于表7的銅綠4艮單胞菌(尸.aen^/朋sa))的協(xié)同作用。表7顯示了所述六肽提升常少見抗生素如多粘菌素B(PXB)對抗藥性細菌(如銅綠假單胞菌(尸."en^z'"oy"))的殺菌活性的潛力。正如所示，SEQIDNO:55(S35-。與多粘菌素B組合展現(xiàn)出協(xié)同活性(由FIC指數(shù)<0.5指示)。表7SEQIDNO:55(S35-2)與多粘菌素B(PXB)的協(xié)同作用銅綠假單胞菌(p.MIC-1032MIC-PXBMIC-NO:55MIC-PXB-FIC*aeragz'/7CWfl0菌抹Og/ml)(Hg/ml)組合的組合的Og/ml)(嗎/ml)H187320.580.060.37100609640.520.1250.28H401640.2520.06250.28M917641160.250.266銅綠假單胞菌CP.^n^"oya)H187—野生型銅綠假單胞菌(尸."en^/"osa)100609—妥布霉素抗性銅綠假單胞菌CP.H401—粘液樣臨床分離抹銅綠假單胞菌(尸."erwg/"ora)M917—多重抗藥性臨床分離林*FIC=(MIC-NO:55-組合的)/(MIC-NO:55)+(MIC-PXB-組合的)/(MIC-PXB)*FIC<0.5指示協(xié)同性治療劑一般可為任意治療劑，優(yōu)選為抗生素、抗^f效生物劑、生長因子、趨化因子、抗微生物劑、溶菌酶、螯合劑或EDTA。優(yōu)選地，組合物的活性高于含治療劑但沒有六肽的相同組合物的活性。組合物或聯(lián)合治療可在體外、在體內(nèi)、局部、口服、IV、IM、IP和經(jīng)皮施用來使用。相比于單獨的治療劑的活性，含治療劑和六肽的組合物的活性的增強優(yōu)選為至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、125%、150%、175%或200%。一般來說，在獨立的基礎上對靶有活性的任意六肽優(yōu)選用于加性地或協(xié)同地增加抗該靶的另一種治療劑的活性。如果幾種六肽是已知協(xié)同應用的候選物，那么考慮毒性較低的六肽應當更有利。本發(fā)明的另外的實施方案涉及治療診斷為嚢性纖維化(CF)的患者的方法。CF連同其它作用一起在肺中引起炎癥和感染。上述本發(fā)明六肽可用于治療這種經(jīng)常由銅綠假單胞菌(尸"wGfowo"asaerag/"osa)引起的肺感染。本發(fā)明六肽可具有有用的抗微生物特性，該特性應使它們有效治療CF患者中的肺感染。六肽或六肽組合可通過任意可接受的方法施用給CF患者，所述方法包括吸入或系統(tǒng)傳遞。六肽或六肽組合可以單劑、多劑施用，或作為連續(xù)送遞施用。本發(fā)明的另一個實施方案涉及治療性傳播疾病(STD)的方法。通過施用表1的一種或多種本發(fā)明六肽有可能抑制或殺死引起STD的許多真菌物種。這些物種的實例包括白色念珠菌(C.a/h'c朋力、光滑念珠菌(C.g/a6rata)和熱帶念珠菌(C.froj9/ca/^)。本發(fā)明的六肽可另外用于抗其它引起STD的因子，包括病毒和細菌。所述六肽可通過任意可接受的方法施用于S丁D患者，例如局部、口服或系統(tǒng)傳遞。所述六肽可以單劑、多劑施用，或作為連續(xù)送遞施用。所述六肽可以任意可接受的形式施用，例如乳膏、凝膠或液體。圖2顯示了在陰道環(huán)境中本發(fā)明六肽活性可能性的指示，其中在殺菌曲線中顯示了SEQIDNO:55抗白色念珠菌(C.力Wc朋力和金黃色葡萄球菌CS.的活性。本發(fā)明的組合物還可包括藥學或皮膚學可接受的載體。載體的實例包括乳液和凝爿交。乳液經(jīng)常是油相和水相的混合物。所述組合物還可包含去角質(zhì)(exfoliant)磨料。所述組合物還可含有穩(wěn)定劑。所述組合物還可含有控制泡沫的化合物。所述組合物還可包括一種或多種額外的護膚活性成分。護"夫活性成分的實例包括脫皮活性物、抗痤瘡活性物、維生素B3化合物、類視色素(retinoids)(包括視黃醇、視黃醛、視黃醇酯、丙酸視黃酯、視黃酸和椋櫚酸視黃酯)、羥酸、自由基清除劑、螯合劑、抗炎劑、局部麻醉劑、曬黑活性物、亮膚劑、抗脂肪劑(anti-celluliteagent)、類黃酮化合物、抗微生物活性物、皮膚愈合劑、抗真菌活性物、法呢醇、植烷三醇、尿嚢素、水楊酸、煙酰胺、右泛醇、醋酸生育酚和葡糖胺。所述組合物還可包括防曬化合物。防曬化合物的實例包4舌無枳」防曬化合物和有機防曬化合物。無機防曬化合物可包括金屬氧4b物，例如氧化鋅、氧化鈦和氧化鐵。有機防曬化合物可包括辛基甲氧基肉桂酸鹽、水楊酸辛酯、對苯二亞曱基二樟腦磺酸、阿伏苯宗和奧克立寧。本發(fā)明的另一個實施方案涉及使用表1的一種或多種六肽來促進傷口愈合。在某些實施方案中，所述六肽具有抗微生物的高效力，所述微生物包括最經(jīng)常與傷口感染相關的細菌金黃色葡萄球菌CS."wrew力、化膿性4連^求菌0S./joge"es)和銅綠作i單胞菌(尸.flerag/"os")。某些六肽還促進傷口愈合和炎癥的減輕。所述六肽可以任意可接受的形式施用，例如乳膏、凝膠或液體。所述六肽可以任意可接受的方式施用，例如局部施用或系統(tǒng)施用。C.微生物菌林下表列出了在實施例中使用的各種微生物。表8微生物~~~~參考文獻或來源大腸桿菌(Esc/zm'c/n'aco//)UB1005D.Clark,i^MSMkro6.21:189-195,1984鼠傷寒沙門氏菌(5^wo"eWfl妙/n',n.wm)14028SFields等，S"'e"ce243:1059-1062，1989金黃葡萄球菌(S啤/i!盧COCCW51SAP0017得自VancouverGeneralhospital的T.Chow教授的抗曱氧西林臨床分離林銅綠假單胞菌(尸MMtomcwasaerwg/wo一H187Angus等,WC21:299-309，1982白色念珠菌(Ca"<iz't/aa仿Zcara)105得自BarbaraDill教授(UBC)銅綠假單胞菌CPwwtfonowwaerag/mra)100609妥布霉素抗性UniversityofCalgary)銅綠假單胞菌CPwwdono"asaeragz'wo加)H401粘液樣臨床分離抹UniversityofBritishColumbia銅綠假單胞菌(i^ewdowo"a5aeragimwa)M917多重抗藥性臨床分離抹UniversityofBritishColumbiaD.抗樣i(:生物活性使用如以前所述(Steinberg等，AAC41:1738,1997)的NCCLS(美國臨床實馬^r標準委員會(NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStabdards))的微量肉湯稀釋法的略微修改形式測定目標六肽的MIC(最小抑制濃度)。簡而言之，在最合適的溶劑中以iox濃度制備抗微生物劑。對于所述六肽，使用含0.2%牛血清白蛋白作為載體蛋白的0.01%乙酸。通過將來自BAP(血液瓊脂)的菌落再懸浮在培養(yǎng)基中并調(diào)整懸浮液至匹配0.5McFariand標準來制備接種物。將懸浮液稀釋入新鮮培養(yǎng)基(根據(jù)NCCLS對該生物體的推薦)，對細菌獲得2x10s至7xl05CFU/ml，或?qū)δ钪榫@得2xl03至7xl03CFU/ml。在將100jul等份的微生物懸浮液分裝入96孔聚丙烯微量滴定板的每個孔中后，加入llpl的測試化合物。Mic定義為于:3s。c在i6^o小時(細菌)或46-50小時(念珠菌)后防止可見濁度的最低藥物濃度。在表9中，抗一組擴大范圍的金黃色葡萄球菌(S.aweMs)的選定六肽的MIC顯示了其抗特別難對付的臨床菌林的有效活性。表9抗一組擴大范圍的金黃色葡萄球菌(S.fl"fews)的六肽的MIC<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>nd—未測定/未檢測細菌菌林索引#82:金黃色葡萄球菌(51.做rew力，燒二傷分離林弁84:MRSA#86:表皮葡萄球菌(S.ep/cferw/cfo)ATCC12228#88:金黃色葡萄球菌(51.flw^w力，痰分離林#89:金黃色葡萄球菌(S.m^ew)ATCC29213#92:金黃色葡萄球菌(S.tmre,:阮曱氧芐啶(trimethoporin)#93:金黃色葡萄球菌"wre,臨床分離林#13:金黃色葡萄球菌(S.flwre^)SAP0017,MRSA#12:金黃色葡萄球菌(S.m^ew)ATCC25923表IO最小抑制濃度(Mic)/Mg/MlSEQP#序列(N-C)銅綠假單胞金黃色葡萄白色念珠ID菌菌林H187球菌菌株菌菌林105NO:SAP00171P0666KFKWPW-NH23216322P0665KWRWPW-NH21286464SEQIDNO:序列(N-C)銅綠假單胞菌菌林H187金黃色葡萄球菌菌林SAP0017白色念珠菌菌^朱1053P0736KWKWFW-NH212832-6464-644P0735RWRWPW-NH2>1286464-1285*P0633RWRWRW-NH212832646P0734KFKWFW-NH212864647P0737RFKWFW-NH212864-12864-12818承P0634RRRWWW-NH2>128〉128>1289*P0635KFKFKF-NH212812812810*P0636KYKYKY-NH2>128>128>12811*P0637FKFKFK-NH2128646412*P0661FKFKPV-NH2>128>128>12813*P0662VKVKPV-NH2>128>128>12814*P0663FALKKL-NH2〉128>128>12815*P0664RKTWPW-NH2>128>128>12816*P0667FKLAPW-NH2>128>128>12817*P0668KWKKPV-NH2>128>128>12818*P0669FRHFRW-NH2>128>128>12819*P0670VAKLAK-NH2>128>128>12820*P0671FAKLAK-NH2>128>128>12821*P0672KFKSFK-NH2>128>128>12822*P0673KWKKLA-NH2>128〉128>12823*P0699KWKFKF-NH2>128>12812824*P0700KWKVFK-NH2>128>128>12825*P0701VAKKWK-NH2>128>128>12826*P0671FAKLAK-NH2>128>128>12827*P0712KLAKLL-NH2>128>128>12828*P0713IAKLAK-NH2>128>128>12829*P0714KPWKFK-NH2>128>128>12830*P0715KPVWPW-NH2>128>128>12831*P0716KPVKFK-NH2>128>128>12832*P0717KFVWPW-NH2>128>128>12833*P0718IXKWPW-NH2>128>128>12834*P0719FPWKFK-NH2>128>128>12835*P0720KPVWPF-NH2>128>128>12836*P0721KFFWPF-NH2>128〉128>12837*P0738KAKFPF-NH2>128>128>12838*P0739KFKPFW-NH2>128>128〉12839*P1030KUKWPW-NH2128643240*P1013KFKLPW-NH2>128>128>12841P1014KFKWPW隱COOH>128>128>128SEQ序列(N-C)IDNO:42P1016KWKWPW國COOH43P1017KWKWFW-COOH44P1018KFKWFW-COOH45*PI020FAKWPW-COOH46*PI022VAKWPW-COOH47PI023KWKWPW-NH248*PI024FAKWPW-NH249*P簡VAKWPW-NH250PI026KWKPPF-NH251*PI027KWKWGW-NH252*P1028KLKWPW-NH253*P1029KWKLAL-NH254*P1031OCT-FALLKL-NH255PI032OCT-KFKWPW-NH256P,OCT-KWKWFW-NH257P1034OCT-KFKWFW-NH258*P1035BAIXKX-NH259*P1036KBKWPW-NH260*P1037KWKWBW-NH261*P1038KBKWBW-NH262P1085KWKWUW-NH263P1087KWKWZW-NH264*PI007KWKWLPW-NH265*P1008KWKWPPW-NH266*PI109KWKWPGW-NH267*P1011KPKWPPW-NH268*P1012KFKWPPW-NH269P1145Hep-KFKWPW-NH270P1146Non-KFKWPW-NH271PI147Cap-KFKWPW-NH272P1148Lau-KFKWPW-NH273PI149Pal-KFKWPW-NH274PI150Ste-KFKWPW-NH275P115101e-KFKWPW-NH276P1258Aca-KFKWPW-NH277P1273Myr-KFKWPW-NH278PI274Pen-KFKWPW-NH279P1275Und-KFKWPW-NH280PI276Tri-KFKWPW-NH2銅綠假單胞金黃色葡萄白色念珠菌菌林H187球菌菌抹菌菌林105SAP0017>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128〉128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128>128〉128>128>128>128>128>128>128>12832323232416>128>128>128>128>128>128>128>128>1281283264>1281286416864886412864128>128>128>128>128>128〉128>128>128>128>128>128>1281281286432-641616>128128128324-88>12812832>128>128128>128128128>128>128〉12864-1288-〗64-812832-6488-1644-8322-44<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>*表示非XBXBOB六肽；ND—未測定/未檢測SEQIDNO:5(RWRWRW)和SEQIDNO:8(RRRWWW)是Strom等，(2003)描述的非XBXBOB六肽。這兩種六肽表現(xiàn)出的活性均低于本發(fā)明的XBXBOB家族六肽如SEQIDNO:l(P0666)的活性。認為XBXBOB家族六肽的活性提升至少部分歸因于對抗微生物活性有益的某些結(jié)構特性。不在XBXBOB式范圍內(nèi)的六肽幾乎沒有或沒有表現(xiàn)出抗微生物活性。對于XBXBOB家族內(nèi)的最優(yōu)活性，我們已由結(jié)構和活性研究確定在該模型中優(yōu)選2位為F和5位為P。我們已證明，2位為F的結(jié)構可能是重要的，因為用相似的氨基酸如W置換實際上消除了活性，參見表9中針對SEQIDNO:47(P10B)的MIC數(shù)據(jù)。用非天然氨基酸(例如l-萘基-L-丙氨酸(本文稱為"U")，即1-Nal,其在結(jié)構上比W更接近F)置換在2位具有F的XBXBOB六肽，產(chǎn)生中間活性(參見表10中針對SEQIDNO:39(P1030)的數(shù)據(jù))。E.細菌細胞壁組分脂磷壁酸的結(jié)合脂磷壁酸(LTA)是革蘭氏陽性細菌(包括諸如金黃色葡萄球菌(S.awMW)和齊皰丙酸桿菌CP.ac"ey)的生物體)的常見細胞壁組分。在感染過程中LTA的釋放可導致宿主炎癥反應介質(zhì)的釋放，這又可導致膿毒病(膿毒性休克)。例如，當注射入動物中時，LTA可激發(fā)膿毒性休克的許多特征，包括產(chǎn)生細月包因子、白細胞減少、循環(huán)衰竭、多器官功能障礙綜合征和死亡。Scott等，(InfectAndImmun.67:6445-6453(1"9))表明，陽離子肽(長26_29個殘基)結(jié)合LTA可降低LTA將細胞為轉(zhuǎn)化炎癥^^應的能力。如圖7所示，六肽可分為兩組(1)不結(jié)合LTA的那些肽(SEQIDNO:55)和(2)確實結(jié)合LTA的那些肽(SEQIDNO:72)。使用Scott等，(InfectAndImmun.67:6445-6453(1999))描述的LTA結(jié)合測定，人們可證實(圖7)，SEQIDNO:72以和典型的高電荷oc-螺旋兩性肽如P50(VAKKLAKLAKKLAKLAL-麗2)相同的程度結(jié)合LTA。這對于這種短肽是出乎意料的，為某些六肽提供了潛在的治療價值。相比之下，SEQIDNO:83和SEQIDNO:55不能結(jié)合LTA(圖7)。F.抗疳皰丙酸桿菌(尸.Jcww)的活性生物活性短肽的一種非常有前景的應用是針對皮膚學適應癥，例如痤瘠。為確定一系列瘡皰丙酸桿菌(戶.acne"菌林之間的脂-六肽活性是否一致以及該活性是否與傳統(tǒng)的較長抗微生物肽相當，針對SEQIDNO:72、SEQIDNO:55和SEQIDNO:81測試該生物體的10種菌抹(ATCC菌抹)，并與P50相比。結(jié)果(表ll)表明為等同，在某些情況下相對于較長的高電荷肽有所提升。表ll針對一組擴大范圍的瘡皰丙酸桿菌的活性肽ATCC6921ATCC6922ATCC6923ATCC11828ATCC12930ATCC25746ATCC29399ATCC33179ATCC49929ATCC51277P504816420.1258160.2516SEQIDNO:72ND11NDND121ND1SEQIDNO:5548888116160.1254SEQID488820.258160.1258NO:81參考圖8,脂質(zhì)化不僅提升了血清中六肽的活性，其還提升了在模擬人痤瘡病灶環(huán)境的脂質(zhì)環(huán)境中的活性。人皮脂腺分泌物也叫做皮脂，含角鯊烯、膽固醇、膽固醇酯、蠟酯和甘油三酯，其中掩皰丙酸桿菌(尸."C"")大濾泡群似乎利用了該環(huán)境，并水解某些皮脂脂質(zhì)。青春期前和青春期的皮脂分泌增加幾乎必定涉及青年期痤瘠的發(fā)病。研究該環(huán)境中的SEQIDNO:55的活性，與一種傳統(tǒng)陽離子抗微生物肽P64對比。由于大部分脂質(zhì)是水不溶性的這一事實，使用鹽水中由摩爾比率7:2:1的磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油和膽固醇組成的脂質(zhì)體，并在有或沒有血清的情況下評價肽的殺菌動力學。使用的細菌是金黃色葡萄球菌(6".MRSA,在兩種情況下測試0.5mg/ml濃度的肽，表明是有效的(圖8)。III.結(jié)構和抗真菌活性因素A.XBXBOB六肽表現(xiàn)出抗真菌活性的六肽遵循上式，其中X是帶電的(親水的)，O可為一系列殘基，但優(yōu)選可為萘丙氨酸、脂肪族殘基(例如脯氨酸)或芳香族殘基(例如苯丙氨酸)，而B是疏水殘基。另外，似乎在C-末端酰胺化提升活性，在某些情況下是活性所需的。這些六肽的代表性實例如下SEQIDNO:l:KFKWPW+^最具活性SEQIDNO:2:KWRWPW^有活性SEQIDNO:3:KWKWFW沐有活性由結(jié)構活性關系(SAR)明顯可見，在1位和3位的帶正電荷殘基是期望的抗微生物活性所需的。顯然還可看出，在1位和可選的3位賴氨酸(K)可能好于精氨酸(R)。如下文的更詳細描述，其它殘基組合不提供相同的活性分布。由以上表10提出的數(shù)據(jù)可見，大部分測試的六肽基本沒有或沒有表現(xiàn)出抗微生物活性。但是，通用結(jié)構XBXBOB的所有六肽都表現(xiàn)出某一期望水平的抗;徵生物活性。總的來i兌，在XBXBOB六肽家族中，有兩個亞組表現(xiàn)出期望活性。令人感興趣的是，某些六肽尤其有活性，被看作是總XBXBOB家族的亞組1的一部分。特別有活性的代表性六肽是KFKWPW-NH2(SEQIDNO:l)。重要的是，如以下的表12所示，SEQIDNO:l在血清中也是有效和有活性的。對于亞組1中的六肽，當2位為W時，例如SEQIDNO:47(1023);當5位是F時，例如SEQIDNO:6(0734);或者當2位氟化時，例如SEQIDNO:59;或者如果當2位是W而4位和6位被變?yōu)镕時，例如SEQIDNO:50(1026),活性降低。應當指出的是，序列表中的字母"J"表示氟化的苯丙氨酸。令人感興趣的是，將脂質(zhì)加入亞組1的代表性成員如SEQIDNO:l中不影響MIC，但顯著增加在生物環(huán)境如血清中的活性，參見例如SEQIDNO:55(1032)和表12。所有亞組1六肽的非XBXBOB類似物大部分無活性(參見以下表12的具體實例)。XBXBOB六肽家族的另一亞組稱為亞組2,活性略低，但表現(xiàn)出其它期望的性狀；此亞組2的一個代表性成員是SEQIDNO:3(KWKWFW-NH2;(0736))。亞組2成員的活性通過增加殘基5的芳香族特性而增加，例如，SEQIDNO:62和63已通過加入1-Nal-OH(在本序列表中稱為"U")(l-萘丙氨酸)或2-Nal-OH(在本序列表中稱為"Z")(2-萘丙氨酸)而得以修飾，參見表10的活性。縮寫Nal在本文用于表示1-Nal-OH或2-Nal-OH。另外，在某些情況下通過^f吏亞組2六肽成員脂質(zhì)化而獲得中度活性。但是，與SEQIDNO:55(1032)不同，SEQIDNO:56(簡)在生物環(huán)境中表現(xiàn)得不好。在亞組2六肽中，5位的W、2位的F、5位F的氟化以及采用XBXBOB式之外的序列的任意改變一般使活性降低。如果5位是帶電殘基，則大部分情況下所述肽是相對無活性，例如SEQIDNO:9(KFKFKF-NH2)、SEQIDNO:10(KYKYKY-NH#SEQIDNO:23(KWKFKF-NH2)。此論斷的一個例外是RWRWRW(SEQIDNO:5)，但該肽在與最高活性肽如SEQIDNO:l、SEQIDNO:62、SEQIDNO:63的活性相比時表現(xiàn)出非常低的活性。盡管一般來說XBXBOB六肽對一系列微生物靶有活性，但并不是所有的六肽都等同地對所有微生物有效。要指出的是，SEQIDNO:32畫33對銅綠假單胞菌(/5."wwg/"os")、白色念3朱菌(Ca/Z)/co"j)和金黃色葡萄球菌(S.aw"w力的活性差，如表10和13所示。令人感興趣的是，將脂質(zhì)加入SEQIDNO:3(KWKWPW-NH2),形成在血清中六肽活性增強的SEQIDNO:55(Oct-KWKWPW-NH2),如圖5-6和表9和12所示。另夕卜，如表9、圖2-3和圖5-6所示，SEQIDNO:55(Oct-KWKWPW-NH2)有效抗廣譜唑抗性臨床分離抹，例如白色念珠菌(C.a/6/ca"力和金黃色葡萄球菌(5".m^ew力。令人感興趣的43最后，如果XBXBOB六肽是非酰胺化的，則其無活性，例如表10中的SEQIDNO:41-46。表12A-B短肽和脂質(zhì)化形式在10%綿羊血清-磷酸緩沖液中對MRSA的活性P0666陽P0666-P0666-P1032-P1032-血清-血清-緩沖液-血清-緩沖液-lmg/ml2mg/ml2mg/ml0.5mg/mllmg/ml0685757685730min102300980099200101001小時99600320062800101002小時151106309920010103小時120802509920010104小時5020709920010105小時257050992001010P1032-血清-P1032-P50-0.51mg/ml血清2mg/ml血清對照mg/ml57686868390010000006838]0011001000000683780010010000006813340301000000681241020100000068139206010000006811970扁030min、、y、、12345是，SEQIDNO:55在生理環(huán)境如陰道模擬培養(yǎng)基和血清中也有活性，如圖2-3所示。B.SEOIDNO:l(P0666)的結(jié)構研究使用1mm光程長度的石英比色皿在J-810型分光偏振計(Jasco)上記錄了如圖1所示的CD光i普。于室溫以50nm/分鐘的掃描速度和每個樣品總共10次掃描，檢測190nm-250nm之間的光譜。記錄100iug/ml肽濃度在3種環(huán)境中的光譜lOmMTris緩沖液，pH7.5;50%TFE的水溶液；以及在POPC:POPG(1:1重量:重量，2mM)的脂質(zhì)體中。在所有情況下，都通過扣除沒有肽時溶液組分的光譜獲得肽光語。SEQIDNO:l(P0666)在與脂質(zhì)體環(huán)境相互作用時似乎經(jīng)歷了顯著的變化，如圖1所示。這與在含50%TFE的緩沖液中觀察到的不顯著變化相反。在相對短的肽中誘導的特定結(jié)構可能對活性具有顯;^"忍。當置換某些六肽中的丙氨酸模擬物萘丙氨酸時獲得有趣的結(jié)果。例如，用l-Nal-OH(在本序列表中稱為"U")(l-萘丙氨酸)置換SEQIDNO:l中的F降低了SEQIDNO:l的活性。同樣，用2-Nal-OH(在本序列表中稱為"Z，，，為立體異構體2-萘丙氨酸)置換SEQIDNO:l中的F也降低了SEQIDNO:l的活性。但是，用l-Nal-OH(萘丙氨酸)置換SEQIDNO:3中的F產(chǎn)生增強的活性和一種新的六肽SEQIDNO:62(KWKWUW-NH2)，其中U為l-Nal-OH。通過用2-Nal-OH(—種不同的萘丙氨酸異構體)置換SEQIDNO:3中的F也獲得相似的結(jié)果，產(chǎn)生SEQIDNO:63(KWKWZW-NH2),其中Z是2-Nal-OH。推測l-Nal-OH和2-Nal-OH置換在物理上以額外的稠合芳香環(huán)形式補充了六肽的體積(bulk)，與取代的苯丙氨酸相比，這又增加了所述結(jié)構的疏水性和芳香性。因此，看起來體積和/或疏水性在SEQIDNO:3和取代的SEQIDNO:62和63中的5位是重要的，而在SEQIDNO:1的2位具有不利作用。通過'H-NMR在DPC膠束中測定核心肽KFKWPW-NH2(SEQIDNO:l)的溶液結(jié)構。圖9顯示了相對于平均值具有最低RMSD(均方根偏差)的結(jié)構，電荷用藍色表示，白色表示疏水性。值得注意的是，肽釆用由非常有序的疏水部分和不太有序的電荷區(qū)組成的結(jié)構。這種兩親性可對肽活性和作用機制具有重要意義。脯氨酸明顯在保持疏水結(jié)構域中的結(jié)構方面起關^t作用。在開發(fā)和研究本發(fā)明六肽的過程中，鑒別、評價了許多非XBXBOB六肽的實例，并發(fā)現(xiàn)它們基本沒有或沒有表現(xiàn)出抗微生物活性，這些六肽一4W皮認為是"無活性的"。無活性的非XBXBOB六肽的代表性實例示于表13。表13表現(xiàn)出低抗微生物活性或沒有表現(xiàn)出微生物活性的非XBXBOB六肽<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>c.酰化的結(jié)構活性關系先前已表明，抗孩支生物肽的?；梢皇巧浠钚浴Ｈ鏡adzishevsky等，(Antimicrob,AgentsChemother.49:2412-2420(2005))所述，該活性提升取決于核心肽、所連脂質(zhì)的長度，在某些情況下取決于所連脂質(zhì)的類型。在采用核心肽SEQIDNO:1時，我們連接了長度由6個碳至18個碳的一系列脂質(zhì)，包括氨?；被了?。連接通過標準肽化學法實施。由該工作證實，涉及抗微生物活性的所連脂質(zhì)的最佳長度是8-14個碳(表14)。應當指出的是，對SEQIDNO:76而言加入氨?；绨被了岵⑽刺嵘钚?，與以Radzishevsky等，(Antimicrob.AgentsChemother.49:2412-2420(2005))描述的該方式修飾的肽相反。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>應當指出的是，除了MIC凄t據(jù)以外，脂質(zhì)-六肽還可由其在生物成分如血清存在下殺死細菌的能力來辨別。在這些環(huán)境下可見，SEQIDNO:79(P1275)和SEQIDNO:83(P1343)均表現(xiàn)得非常好(圖10)。該活性作為治療潛力的指標，由單獨的MIC數(shù)據(jù)不能明顯看出。D.脂質(zhì)-六肽的作用;f/L制抗微生物肽的傳統(tǒng)作用機制是其破壞細胞膜的能力。使用代表性肽SEQIDNO:1(P0666)和SEQIDNO:55(P1032)作為典型，評價六肽和脂質(zhì)六肽與脂質(zhì)膜相互作用的能力，其中所述脂質(zhì)膜由脂質(zhì)組成，模擬細菌或人細胞。在這些測定中，常規(guī)的抗微生物肽(15-40個氨基酸長)通過破壞膜雙層引起胞質(zhì)滲漏而導致細胞死亡來賦予殺傷作用。為確定六肽P0666及其脂質(zhì)化類似物P1032是否遵循相似的作用機制，對它們進行diSC35熒光去猝滅實驗。DiSC35是一種膜電位敏感染料，由供能細胞按照膜電位梯度吸收，集中于細胞膜中，導致猝滅染料熒光。當膜電位被破壞時，染料被釋放，不再被猝滅，因此熒光增加。在此情況下，使用活金黃色葡萄球菌OS.m/^w)細菌細胞作為靶生物體。檢測各種肽使胞質(zhì)膜電位去極化的能力，該能力導致diSC35由細胞流失到緩沖液中，相應地熒光增加。與破壞膜的傳統(tǒng)肽P50(VAKKLAKLAKKLAKLAL-NH2)不同，P0666和P1032均不能引起金黃色葡萄球菌CS.細胞膜透化。在金黃色葡萄球菌(S.awew)中沒有觀察到膜破壞，這與脂質(zhì)體實驗產(chǎn)生的數(shù)據(jù)有良好的關聯(lián)。構建脂質(zhì)體，以模擬細菌細胞(POPC:POPG，3:l)或真核細胞(POPC:膽固醇，3:1)的脂質(zhì)組成。4嗎/ml的六肽或脂質(zhì)六肽均不能引起從脂質(zhì)體(POPC:POPG，3:1)釋放染料(鈣熒光素)，與2嗎/ml的P50相反。兩種六肽即便在128嗎/ml也未引起從脂質(zhì)體(POPC:膽固醇，3:l)釋放顯著量的鈣焚光素。E.抗性出現(xiàn)對于新的作用機制，總是應考慮抗性的出現(xiàn)。在半MIC濃度的P1032和P1032d存在下，每日連續(xù)地轉(zhuǎn)移MRSA(菌林SAP0017)和金黃色葡萄球菌(Saw/^^)(菌林ATCC21923)。在連續(xù)30次傳代后，MIC變化在起始MIC的2倍稀釋度之內(nèi)。這樣的抗性被證實是瞬時適應，因為在沒有肽的情況下各個抗性菌林的單次傳代導致回復至原初MIC。納入以下實施例是為了i正實本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。本領域才支術人員應當認識到，實施例中公開的技術符合發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的在本發(fā)明實施中良好運行的代表性技術，因此可被認為構成了用于本發(fā)明實施的優(yōu)選方式。但是，根據(jù)本發(fā)明的公開內(nèi)容，本領域技術人員應認識到，在不偏離本發(fā)明范圍的情況下，可對所公開的具體實施方案中實施許多改變，仍獲得同樣或相似的結(jié)果。F.4十對皮趺真菌紅色毛癬菌(7Vy^op/i.vtowJ"Anwi)和須癬毛褲菌(7Vyc/t叩/^towAfg/i/tf^YW^fe"的抗微生物六肽的最小抑制濃度(MIC)評價為了對比各種抗微生物肽(包括六肽SEQIDNO:l(P0666))的活性，測定針對皮膚真菌紅色毛瓣菌(r^yc/zc^/3[yto"iw^ww)和須褲毛褲菌(7^c/zo;/^towAfe"tosrav/^tes)的MIC。所研究樣品的濃度分別為2000、1000、500、250和125|iig/ml。所使用的培養(yǎng)基是無瓊脂的改良型Sabouraud氏培養(yǎng)基。對于100mL改良型Sabouraud培養(yǎng)基將3gSabouraud氏葡萄糖肉湯(Difco)混合入100mL去離子水中。用0.1NNaOH將pH調(diào)節(jié)至7.0。將溶液高壓蒸汽滅菌30分鐘。將940pL培養(yǎng)基傾倒入帶塑料帽的無菌20mL測試管中，令其冷卻。將50fiL鹽水加入各20mL的測試管中，以制備所需濃度。對照管由無樣品的50fiL鹽水組成。對于MIC實驗，將10懸浮在鹽水中的生物體加入各20mL的測試管中，輕微渦旋。各個測試管都用Parafilm封口，并于27。C以約100rpm的速度保持在振蕩器上。每天觀察生物體的生長/抑制。在第5天和第10天觀察到生物體生長，示于表12。以125ppm重復MIC實驗，因為大部分生物體的生長在第5天于250ppm時凈皮抑制。在10天時抗真菌紅色毛癬菌(7>yc/zop/z_ytoniw6ram)和須辨毛褲菌(7>yc/zo/7/z_ytowjWewto^srov/^tor)的化合物Fl至F10的最小抑制濃度(MIC柳)。表15<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>發(fā)現(xiàn)SEQIDNO:l(P0666KFKWPW-NH2)對紅色毛癬菌(^iw6nw7)和須癬毛癉菌(^Me"tosrav/y;te"最具活性。在第10天于125ppm僅有些^敖生長。G.毒性測試為了評價系統(tǒng)施用本發(fā)明六肽的潛在毒性作用，通過尾靜脈注射將一系列表現(xiàn)出抗真菌活性的肽以20mg/Kg的劑量導入小鼠血液系統(tǒng)中。由以下表13的數(shù)據(jù)可見，與其它測試肽不同，SEQIDNO:l(參考名P0666;KFKWPW-NH2)未激發(fā)系統(tǒng)毒性。表16<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>H.細胞毒性研究I.P01032的體內(nèi)毒小生測試0.1mg/ml和0.5mg/ml濃度的SEQIDNO:55(S35-2)樣品的細胞毒性，發(fā)現(xiàn)在24小時和48小時的測試中無細胞毒性，其中評價了細胞匯合、皺縮、空泡形成和細胞裂解。先前的研究已記載了，抗微生物肽P-50(—種17聚體)在減少部分厚傷口表面的金黃色葡萄球菌(S.awrew)細菌污染方面具有預防性利益。SEQIDNO:55(P-1032)也已顯示出相似的體外抗微生物活性。相比于P-50評價SEQIDNO:55(P-1032)的體內(nèi)抗孩么生物活性的研究用以下參數(shù)進行。所有測試劑都由HelixBioMedix，Inc提供。在該研究中評價兩個治療組I.包含在4。/。HEC溶液中的1%P-50肽；和II.包含在4%HEC凝膠中的1%SEQIDNO:55(P-1032)肽。使用無菌技術將兩種測試劑轉(zhuǎn)移至3ml注射器中。在研究期間，將0.5ml的適宜藥劑分配至各個傷口。該量以薄層溶液或凝膠覆蓋整個傷口表面。測試細菌是金黃色葡萄球菌CS，aw"w)(ATCC12600)。這些研究的結(jié)果示于表14-16。麻醉12只Sprague-Dawley雌性大鼠(250-280g)，準備進行手術。用Brown植皮刀在每只大鼠的背部建立一個l"xl"部分厚度皮膚傷口。每個傷口均用3.1xl05/0.05ml金黃色葡萄球菌OS."w謂)(LOG5.49)污染。讓傷口干燥30分鐘，然后將動物等分為4個治療組。各組中的傷口接受0.5ml適宜的測試劑。每個傷口均用透明膜繃帶遮蓋、用網(wǎng)墊覆蓋并用膠帶穩(wěn)固。在首次治療后24小時，麻醉動物，并取下其繃帶。用濕潤紗布輕輕清潔傷口表面，施加新的等份(0.5ml)局部藥劑。再如前所述包扎動物。再于48小時時實施繃帶更換和再施用局部藥劑。因此，每只動物接受了3次局部治療。在手術后72小時，使大鼠安樂死，由傷口中心獲得全厚度的8mm鉆取活檢品。將活檢品置于含5ml無菌鹽水的預稱重管中并再稱重，以測定樣品重量。使用組織研磨機勻漿活檢品，并連續(xù)稀釋和平板接種，以確定每克組織的細菌凄史。在手術前18小時，通過無菌環(huán)將單菌落金黃色葡萄球菌(51.awws)由原種平板轉(zhuǎn)移至胰胨豆胨肉湯中。將肉湯培養(yǎng)物在37。C水浴中攪拌18小時，然后通過以3200rpm離心10分鐘收集細菌。細菌沉淀在無菌0.9%鹽水溶液中清洗兩次，再通過離心收集入沉淀中。將沉淀重懸浮在2ml無菌鹽水中，徹底地混合，產(chǎn)生母液。然后由母液制備由10—i至10-8范圍的一系列1:10稀釋度。使用標準平板接種技術定量母液中的細菌數(shù)，隨后定量各個1:10稀釋度的細菌數(shù)。使用的接種物經(jīng)計算為3.1xl05CFU/0.05ml(LOG5.49)。接種物管保持在冰上，輕輕搖動，臨使用前吸入無菌吸管尖頭中。使用12只雌性Sprague-Dawley大鼠(250-280g)。用氯胺酮(50mg/kg)和賽拉嗪(10mg/kg)的混合物肌內(nèi)麻醉它們。用電剪刀修剪它們背部的毛發(fā)，用Nair為皮膚脫毛。使用抗乙醇標記在背部中心畫一個l"xl"模板。然后用碘伏(iodophor)擦洗后接70%異丙醇、碘伏溶液和70%乙醇處理皮膚。在移植區(qū)域和植皮刀上涂抹Shur-Clens以便潤滑。然后使用氣動Brown植皮刀取出l"xl"標記區(qū)域中的標準部分厚度皮膚移植物(0.015"厚度)。在用干燥紗布實現(xiàn)止血后，使用Eppendorf移液器向每個傷口精確地施加0.05ml接種物。讓傷口干燥30分鐘，然后每個傷口接受0.5ml局部藥劑。然后用透明傷口繃帶(Teqaderm,3M，St.Paul,MN)包裹每個傷口。用無菌紗布和2個3"布帶圓周包套包扎動物。給予它們丁丙諾啡鎮(zhèn)痛，由麻醉中復蘇，并回到標準圈養(yǎng)和護理狀態(tài)。在手術后24和48小時，通過吸入異氟烷再麻醉所有大鼠，去除其繃帶。小心地取下繃帶，用無菌紗布吸掉存在的任何液體。然后將0.5ml等份的指定治療凝膠均勻地涂抹至整個傷口表面，和手術時一樣再包扎動物并讓其復蘇。2.傷口外觀分析觀察每個傷口的每次包扎變化，評價傷口表面和組織反應。有5個要檢查的傷口狀態(tài)參數(shù)i.傷口膜穩(wěn)固性一用于覆蓋傷口的膠粘膜仍完全附著于傷口周圍的皮膚嗎？ii.傷口表面一傷口表面的確切目測外觀怎么樣？滲出液的量一在膜下捕捉了多少滲出液？在許多情況下,累積的滲出液引起膜失去粘性，滲出液將漏出。iv.組織反應的嚴重性一按照1(最小)、2(中等)和3(廣泛)的尺度對組織反應程度主觀分級。v.所涉及組織的百分率一在某些情況下,傷口表面含變性的、易碎的組織，可壓著紗布擦去。該測試用于更好地分辨變性組織和粘性滲出液。3.細菌計數(shù)的評價在手術后72小時，麻醉大鼠，去除其繃帶，由各個傷口的中心取下8mm的全厚度鉆取活檢品，將其置于含5ml無菌鹽水的預稱重管中。再稱重含樣品的管，確定樣品重量。勻漿樣品，然后連續(xù)稀釋4次，平板接種在胰胨豆胨瓊脂上。過夜溫育平板，計數(shù)菌落，計算每克組織的細菌計數(shù)，并轉(zhuǎn)換為以10為底的對數(shù)。計算各組的平均值和標準偏差，使用ANOVA(方差分析)測定3個治療組之間的任意顯著性差異。4.術后并發(fā)癥所有動物在研究中都存活，無并發(fā)癥。在12個治療傷口的11個中未檢測到細菌(表17-18)。在用1%P-50治療的1個傷口中，檢測到很少的金黃色葡萄球菌(51.flwew力(表18)。5.組織反應一般來說，對肽SEQIDNO:55(P-1032)的組織反應是輕微的，而對P-50的組織反應是輕微至中等的(如表19中的結(jié)果所示)。6.結(jié)果概述1%SEQIDNO:55(P-1032)的4%HEC溶液似乎提供了與1%P-50相同水平的抗金黃色葡萄球菌(S.awwws)(ATCC12600)的抗微生物作用(表17-18)。表17LOG接種物=5.49黃色葡萄球菌CS",(ATCC12600)<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>s.d.0.450.02040.500.000.02330.06備注除了#9以外，所有樣品都具有表明該樣品無可見生長的log計數(shù)或最低細菌檢測限度。An弁=動物數(shù)量。表19<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>觀測注解未密封的膜:Y:是；一不是傷口狀況:l-正常；2=有些部位顯示出組織反應；3=明顯的變性組織；y=淺黃色；r=凝:紅色；b=褐色滲出液的量:-=沒有；S-少量；L=大量組織反應嚴重性:1=最??；2=中等；3=大本文公開的并要求保護的所有組合物和/或方法和/或過程可按照本文的公開內(nèi)容制備和實施，無需過多的實驗。盡管已就優(yōu)選實施方案描述了本發(fā)明的組合物和方法，但對本領域技術人員顯而易見的是，可在不偏離本發(fā)明的構思和范圍的情況下，對本文描述的組合物和/或方法和方法的步驟或步驟順序進行改變。更具體地說，顯然，在化學上和生理上均相關的某些藥劑可替代本文描述的藥劑，而獲得相同或相似的結(jié)果。所有這些對本領域技術人員顯而易見的相似替代和修改被認為屬于本發(fā)明的范圍和構思。權利要求1.抗微生物六肽，所述抗微生物六肽包含在1和3位的親水帶電殘基(X)；在2、4和6位的疏水殘基(B)；以及在5位的萘丙氨酸、脂肪族殘基或芳香族殘基(O)；其中，所述六肽結(jié)構表示為式XBXBOB。2.權利要求1的六肽，其中X選自精氨酸(R)或賴氨酸(K);B選自苯丙氨酸(F)和色氨酸(W);和O選自萘丙氨酸(Nal)、脯氨酸(P)和苯丙氨酸(F)。3.權利要求2的六肽，其中萘丙氨酸(Nal)是l-Nal-OH(U)或2-Nal-OH(Z)。4.權利要求2的六肽，其中所述六肽選自KFKWPW-NH2(SEQIDNO:l)、KWRWPW-NH2(SEQIDNO:2)、KWKWFW-NH2(SEQIDNO:3)、RWRWPW-NH2(SEQIDNO:4)、KFKWFW-NH2(SEQIDNO:6)、RFKWFW-NH2(SEQIDNO:7)、OCT-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:55)、OCT-KWKWFW-NH2(SEQIDNO:56)、KWKWUW-NH2(SEQIDNO:62)和KWKWZW-NH2(SEQIDNO:63)。5.權利要求1的六肽，其中所述六肽是SEQIDNO:l。6.權利要求l的六肽，其中所述六肽是修飾過的。7.權利要求6的六肽，其中所述修飾為脂質(zhì)化或酰胺化。8.權利要求7的六肽，其中所述脂質(zhì)選自庚酸、壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、十一烷酸、十三烷酸或辛酸。9.權利要求8的六肽，其中所述六肽選自Hep-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:69)、Non-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:70)、Lau-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:72)、Myr-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:77)、Pen-KPKWPW-NH2(SEQIDNO:78)、Und-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:79)、Tri-KFKWPW-NH2(SEQIDNO:80)、Oct畫kfkwpw-NH2(SEQIDNO:81)、Lau-kfkwpw-NH2(SEQIDNO:83)和Oct-KFKWPw-NH2(SEQIDNO:84)。10.組合物，所述組合物含權利要求1的六肽和藥學可接受的載體。11.權利要求10的組合物，其中所述六肽在水性溶液中是可溶的。12.權利要求10的組合物，其中所述六肽以約0.0002%至約90%范圍的有效濃度存在。13.權利要求10的組合物，其中所述有效濃度在約0.5%至約10%的范圍內(nèi)。14.權利要求10的組合物，所述組合物為溶液、化妝品制劑、粉劑、乳劑、洗劑、噴霧劑、軟膏、氣溶膠、乳膏或泡沫劑形式。15.權利要求10的組合物，其中所述六肽是脂質(zhì)化的或酰胺化的。16.權利要求15的組合物，其中所述脂質(zhì)選自庚酸、壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、十一烷酸、十三烷酸或辛酸。17.在哺乳動物中治療或預防微生物感染的方法，所述方法包括給所述哺乳動物施用治療有效量的權利要求1的六肽。18.權利要求17的方法，其中所述微生物感染為真菌感染、細菌感染或混合的真菌和細菌感染。19.權利要求18的方法，其中所述真菌感染由選自以下的真菌引起白色念珠菌(C""d^""/Wc""j)、紅色毛褲菌(7Wc/20—少to"n^謂)和須褲毛褲菌(TWcAop/zyto","tograp一as)。20.權利要求18的方法，其中所述細菌感染由選自以下的細菌引起銅綠假單胞菌(尸.aewogz'"cwa)、大腸桿菌CE.co/z')和金黃色葡萄球菌(S.awrew力。21.抑制真菌細胞生長的方法，所述方法包括-使所述真菌細胞與權利要求1的六肽接觸，使得所述真菌細胞的生長被抑制。22.權利要求21的方法，其中所述真菌細胞是選自以下的植物病原體蕓莒生3求月空菌(綺<:05;/^^6//"6ra^/dco/a)、蕓苔核盤菌(P,ewc;pezfz(36m^cae)、尸era"osporadesrwctor和Bof7jfewwamosa。23.權利要求21的方法，其中所述真菌細胞選自紅色毛癬菌(7>/c/zo//z>to"rwferw附)禾口》頁齊毛褲菌(7V7'c/zo//zyto"附e"fagrop/2j^es)。全文摘要本發(fā)明包括由交替的2、4和6位的疏水殘基(B)、1和3位的親水帶電殘基(X)以及5位的萘丙氨酸(Nal)、脂肪族殘基或芳香族殘基(O)組成的六肽，一般表示為式XBXBOB，其表現(xiàn)出抗各種病原體所致感染的抗微生物活性。這些病原體可包括革蘭氏陽性或陰性細菌、耐酸細菌如分枝細菌、寄生物、皮膚真菌或真菌病原體。典型的真菌病原體包括白色念珠菌(Candidaalbicans)，典型的皮膚真菌包括紅色毛癬菌(Trichophytonrubrum)和須癬毛癬菌(Trichophytonmentagrophytes)。本發(fā)明的六肽表現(xiàn)出抗真菌活性、抗細菌活性、期望的穩(wěn)定性，且對接受治療的哺乳動物沒有毒性。文檔編號C07K7/06GK101155825SQ200680011180公開日2008年4月2日申請日期2006年2月7日優(yōu)先權日2005年2月9日發(fā)明者S·M·哈里斯,T·J·法拉,張麗娟申請人:赫里克斯生物醫(yī)療公司