專利名稱：：用于抑制cdk和gsk的吡唑衍生物的制作方法激酶(GSK)的激酶活性的吡唑化合物、此類化合物在治療或預(yù)防由激酶介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥中的用途和具有激酶抑制或調(diào)節(jié)活性的新化合物。還提供了包含此類化合物的藥物組合物和新的化學(xué)中間體。發(fā)明背景負(fù)責(zé)控制細(xì)胞內(nèi)的多種信號傳導(dǎo)過程的蛋白激酶構(gòu)成了一個結(jié)構(gòu)上相關(guān)的大的酶家族。(Hardie，G.和Hanks,S.(1995)TheProteinKinaseFactsBook.IandII.AcademicPress,SanDiego,CA)。激酶可以才艮據(jù)其砩酸化的底物(例如，蛋白質(zhì)-酪氨酸、蛋白質(zhì)-絲氨酸/蘇氨酸、脂類等)而分成不同的家族。已經(jīng)鑒定出了通常對應(yīng)于各個激酶家族的序列模體(例如，Hanks,S.K.，Hunter,T"FASEBJ"9:576-596(1995);Knighton等人，Science,253:407-414(1991);Hiles等人，Cell,70:419-429(1992);Kunz等人，Cell,73:585-596(1993);Garcia-Bustos等人，EMBO丄，13:2352-2361(1994))。蛋白激酶可根據(jù)其調(diào)節(jié)機(jī)制來進(jìn)行表征。這些機(jī)制包括，例如，自身磷酸化作用、通過其它激酶的轉(zhuǎn)磷酸化作用、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)交互作用、蛋白質(zhì)-脂類交互作用和蛋白質(zhì)-多核苷酸交互作用。一種蛋白激酶可能會受到一個以上機(jī)制的調(diào)節(jié)。激酶通過將磷^團(tuán)添加至靶蛋白來調(diào)節(jié)許多不同的細(xì)胞過程，包括但不限于增殖、分化、細(xì)胞凋亡、運(yùn)動性、轉(zhuǎn)錄、翻譯和其它發(fā)信號過程。這些磷酸化事件起著調(diào)節(jié)或調(diào)控靶蛋白生物功能的分子ON/OFF開關(guān)的作用。靶蛋白響應(yīng)各種細(xì)胞外信號(激素、神經(jīng)遞質(zhì)、生長和分化因子等)、細(xì)胞周期事件、環(huán)境或營養(yǎng)脅迫等而發(fā)生磷酸化作用。合適的蛋白激酶在信號通路中的作用是激活或滅活(直接地或間接地)例如代謝酶、調(diào)節(jié)蛋白、受體、細(xì)胞骨架蛋白、離子通道或泵或轉(zhuǎn)錄因子。由蛋白質(zhì)磷酸化作用的控制缺陷引起的不受控的信號已經(jīng)涉及許多疾病，包括，例如炎癥、癌、變態(tài)反應(yīng)/哮喘、免疫系統(tǒng)的疾病和病癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病和病癥，以及血管生成。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶真核細(xì)胞分裂的過程可被廣義地分成稱為Gl、S、G2和M的一系列連續(xù)的時相。已經(jīng)證實(shí)，通過細(xì)胞周期不同時相的正確進(jìn)程關(guān)鍵依賴于被稱為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(cdks)的蛋白質(zhì)家族和稱為細(xì)胞周期蛋白的不同組的其同源蛋白伙伴的空間和時間上的調(diào)控。Cdks是cdc2(也被稱為cdkl)的同源絲氨酸-蘇氨酸激酶蛋白質(zhì)，其在序列依賴性背景的不同多肽的磷酸化作用中能夠利用ATP作為底物。細(xì)胞周期蛋白是一個以包含大約100個氨基酸的同源區(qū)為特征的蛋白質(zhì)家族，該同源區(qū)被稱為"細(xì)胞周期蛋白盒"，其用于同特異性cdk伙伴蛋白質(zhì)結(jié)合和定義選擇性。各種cdks和細(xì)胞周期蛋白在整個細(xì)胞周期的表達(dá)水平、降解速率和活化水平的調(diào)節(jié)導(dǎo)致一系列cdk/細(xì)胞周期蛋白復(fù)合物的循環(huán)形成，其中cdks為酶促活化。這些復(fù)合物的形成經(jīng)由不連續(xù)的細(xì)胞周期檢查點(diǎn)控制傳代，由此使細(xì)胞分裂的過程能夠繼續(xù)。在給定的細(xì)胞周期檢查點(diǎn)不能滿足必要的生物化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，即無法形成必需的cdk/細(xì)胞周期蛋白復(fù)合物，可導(dǎo)致細(xì)胞周期中止和/或細(xì)胞凋亡。異常的細(xì)胞增殖，如癌中所顯示，?？蓺w因于正確的細(xì)胞周期控制的缺失。因此抑制cdk酶活性提供了一種使異常分裂的細(xì)胞停止分裂和/或被殺死的方法。cdks和cdk復(fù)合物的多樣性以及它們在介導(dǎo)細(xì)胞周期中的決定性角色，提供了基于所定義的生物化學(xué)理論來選擇的廣譜的潛在治療靶標(biāo)。從細(xì)胞周期的Gl期到S期的進(jìn)程主要由cdk2、cdk3、cdk4和cdk6通過與D和E型細(xì)胞周期蛋白成員的結(jié)合而調(diào)節(jié)。D型細(xì)胞周期蛋白似乎有助于不通過Gl限制點(diǎn)進(jìn)行傳代，而cdk2/細(xì)胞周期蛋白E復(fù)合物是從Gl到S期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵。隨后通過S期和進(jìn)入G2的進(jìn)程被認(rèn)為需要cdk2/細(xì)胞周期蛋白A復(fù)合物。有絲分裂，和觸發(fā)它的G2到M期的轉(zhuǎn)換，兩者均受到cdkl及A和B型細(xì)胞周期蛋白復(fù)合物的調(diào)節(jié)。在Gl期，視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白(Rb)和相關(guān)的袋狀蛋白(pocketprotein)例如pl30，是cdk(2、4和6)/細(xì)胞周期蛋白復(fù)合物的底物。通過Gl的進(jìn)程由于Rb和p130被cdk(4/6)/細(xì)胞周期蛋白-D復(fù)合物過度磷酸化從而失活而部分地促進(jìn)。Rb和p130的過度磷酸化造成轉(zhuǎn)錄因子例如E2F的釋放，并因此導(dǎo)致通過Gl和進(jìn)入S期的進(jìn)程所必需的基因，例如細(xì)胞周期蛋白E的基因的表達(dá)。細(xì)胞周期蛋白E的表達(dá)促進(jìn)cdk2/細(xì)胞周期蛋白E復(fù)合物的形成，其通過Rb的進(jìn)一步磷酸化作用而放大或維持E2F水平。cdk2/細(xì)胞周期蛋白E復(fù)合物也磷酸化其它DNA復(fù)制所需的蛋白質(zhì)，例如NPAT，其涉及組蛋白生物合成。Gl的進(jìn)程和Gl/S的轉(zhuǎn)換也受到包含在cdk2/細(xì)胞周期蛋白E途徑中的有絲分裂原刺激的Myc途徑的調(diào)節(jié)。Cdk2還經(jīng)由p21水平的p53調(diào)節(jié)與p53介導(dǎo)的DNA損傷應(yīng)答途徑有聯(lián)系。p21為cdk2/細(xì)胞周期蛋白E的蛋白抑制劑，因此能夠阻斷或延遲Gl/S轉(zhuǎn)換。cdk2/細(xì)胞周期蛋白E復(fù)合物因此可表示來自Rb、Myc和p53途徑的生物化學(xué)刺激在一定程度上被整合的點(diǎn)。因此Cdk2和/或cdk2/細(xì)胞周期蛋白E療靶點(diǎn)。cdk3在細(xì)胞周期中的確切角色并不清楚。目前為止還沒有同源的細(xì)胞周期蛋白伙伴被鑒定，但是cdk3的顯性負(fù)調(diào)節(jié)形式延遲Gl期細(xì)胞，因此暗示cdk3具有調(diào)節(jié)Gl/S轉(zhuǎn)換的作用。雖然大多數(shù)的cdks參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)，但有證據(jù)表明某些cdk家族成員參與了其它生物化學(xué)過程。以cdk5為例，它是神經(jīng)元正確發(fā)育所必需的，而且也參與了幾種神經(jīng)元的蛋白質(zhì)例如Tau、NUDE-1、synapsinl、DARPP32和Muncl8/SyntaxinlA復(fù)合物的褲酸化作用。神經(jīng)元的cdk5通常通過與p35/p39蛋白質(zhì)的結(jié)合而活化。然而，Cdk5活性可通過結(jié)合p25(一種p35的截短類型)來去調(diào)節(jié)。p35到p25的轉(zhuǎn)化和隨后cdk5活性的去調(diào)節(jié)可由局部缺血、興奮性中毒和j3-淀粉樣肽誘發(fā)。因而p25已經(jīng)牽涉到神經(jīng)變性性疾病例如阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)制，因此作為針對這些疾病的治療靶點(diǎn)引起了人們的興趣。Cdk7是一種具有cdc2CAK活性并且結(jié)合細(xì)胞周期蛋白H的核蛋白。Cdk7已被鑒定為TFIIH轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的成分，其具有RNA聚合酶II的C-末端結(jié)構(gòu)域(CTD)活性。這和由Tat介導(dǎo)的生物化學(xué)途徑的HIV-1轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)有關(guān)。Cdk8結(jié)合細(xì)胞周期蛋白C并參與RNA聚合酶II的CTD的磷酸化作用。同樣地，cdk9/細(xì)胞周期蛋白-Tl復(fù)合物(P-TEFb復(fù)合物)參與RNA聚合酶II對延伸的控制。HIV-1基因組通過病毒反式作用因子Tat經(jīng)由其與細(xì)胞周期蛋白Tl的交互作用的轉(zhuǎn)錄活化也需要PTEF-b。因此cdk7、cdk8、cdk9和P-TEFb復(fù)合物是抗病毒治療的潛在靼點(diǎn)。在分子水平上，cdk/細(xì)胞周期蛋白復(fù)合物活性的介導(dǎo)需要一系列刺激性和抑制性的磷酸化或去磷酸化事件。Cdk磷酸化作用由一組cdk活化激酶(CAK)和/或諸如weel、Mytl和Mikl的激酶來完成。去磷酸化作用由磷酸酯酶例如cdc25(a&c)、pp2a或KAP來完成。Cdk/細(xì)胞周期蛋白復(fù)合物的活性可進(jìn)一步由兩個家族的內(nèi)源性細(xì)胞蛋白質(zhì)抑制劑調(diào)節(jié)Kip/Cip家族或INK家族。INK蛋白特異性地結(jié)合cdk4和cdk6。P16i^(也被稱為MTS1)是潛在的腫瘤抑制基因，其在大量原發(fā)癌中發(fā)生突變或缺失。Kip/Cip家族包含諸如p21Ciplwafl、p27Kipl和p57叫2等蛋白質(zhì)。如先前所討論的，p21被p53誘導(dǎo)且能夠滅活cdk2/細(xì)胞周期蛋白(E/A)和cdk4/細(xì)胞周期蛋白(Dl/D2/D3)復(fù)合物。在乳腺癌、結(jié)腸癌和前列腺癌中已經(jīng)觀察到非典型的低水平p27表達(dá)。相反，細(xì)胞周期蛋白E在實(shí)體瘤中的過表達(dá)顯示與患者預(yù)后不良相關(guān)。細(xì)胞周期蛋白Dl的過表達(dá)與食道癌、乳腺癌、鱗狀細(xì)胞癌和非小細(xì)胞肺癌相關(guān)。上面已概述了Cdks及其相關(guān)蛋白質(zhì)在增殖細(xì)胞中協(xié)調(diào)和驅(qū)動細(xì)胞周期的關(guān)鍵性角色。還描述了一些其中cdks起關(guān)鍵作用的生化途徑。因此，開發(fā)一種采用靶向一類cdks或特定cdks的治療法來治療增殖疾病如癌癥的單一療法可能是非常需要的。還可以考慮將cdk抑制劑用于治療其它病癥例如病毒感染、自身免疫疾病和神經(jīng)變性疾病。當(dāng)與現(xiàn)存的或新的治療劑組合治療時，靶向Cdk的治療在前述疾病的治療中也可提供臨床益處。以Cdk為靶點(diǎn)的抗癌治療可能具有優(yōu)于多種現(xiàn)有抗腫瘤劑的優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樗鼈儾慌cDNA直接作用，因此降低了繼發(fā)腫瘤發(fā)展的危險(xiǎn)。糖原合成酶激酶糖原合成酶激酶-3(GSK3)是一種絲氨酸-蘇氨酸激酶，在人類中以兩種廣泛表達(dá)的同種型存在(GSK3a&pGSK3p)。GSK3參與胚胎發(fā)育、蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、微管動力學(xué)、細(xì)胞運(yùn)動性和細(xì)胞凋亡。因而GSK3涉及疾病狀態(tài)的進(jìn)程，例如糖尿病、癌、阿爾茨海默病、中風(fēng)、癲癇、運(yùn)動神經(jīng)元疾病和/或頭部外傷。系統(tǒng)發(fā)育的GSK3與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)密切相關(guān)。被GSK3識別的肽底物共有序列為(Ser/Thr)-X-X-X-(pSer/pThr)，其中X為任意氨基酸(在(n+l)、(n+2)、(n+3)位)，pSer和pThr分別是磷酸化絲氨酸和磷酸化蘇氨酸(n+4)。GSK3在(n)位磷酸化第一個絲氨酸或蘇氨酸。第(n+4)位的磷酸-絲氨酸或磷酸-蘇氨酸是啟動GSK3以得到最大底物轉(zhuǎn)換所必需的。GSK3a在Ser21，或GSK3j3在Ser9的磷酸化引起GSK3的抑制作用。突變和肽竟?fàn)幯芯恳呀?jīng)引出了GSK3磷酸化的N末端通過自動抑制機(jī)制能夠與磷酸化的肽底物(S/TXXXpS/pT)竟?fàn)幍哪Ｐ?。也有資料提出GSK3a和GSKp可以分別由酪氨酸279和216的磷酸化作用進(jìn)行精細(xì)地調(diào)節(jié)。這些殘基向Phe的突變引起體內(nèi)激酶活性的降低。GSK3卩的X射線晶體結(jié)構(gòu)有助于揭示GSK3激活和調(diào)節(jié)的所有方面。GSK3構(gòu)了哺乳動物胰島素應(yīng)答途徑的一部分且能夠磷酸化和因此滅活糖原合成酶。由此，通過抑制GSK3而增量調(diào)節(jié)糖原合成酶活性并由此增量調(diào)節(jié)糖原合成已被視為對抗II型或非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)的可能手段，該病癥是一種其中機(jī)體組織變得對胰島素刺激有耐受性的病癥。肝、脂肪或肌肉組織中的細(xì)胞對胰島素的應(yīng)答被結(jié)合于細(xì)胞外胰島素受體的胰島素觸發(fā)。它造成胰島素受體底物(IRS)蛋白質(zhì)的磷酸化和隨后向細(xì)胞膜的募集。IRS蛋白質(zhì)的進(jìn)一步磷酸化啟動了磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)向細(xì)胞膜的聚集，其能夠釋放出第二信使磷脂酰肌醇3，4，5-三磷酸。它促進(jìn)3-肌醇磷脂依賴性蛋白質(zhì)激酶l(PDKl)和蛋白激酶B(PKB或Akt)在膜上的共定位，在那里PDK1激活PKB。PKB能分別通過Ser9或ser21的磷酸化來磷酸化并借此抑制GSK3al或GSKP。GSK3的抑制接著觸發(fā)糖原合成酶活性的上調(diào)。能抑制GSK3的治療劑因此能夠誘發(fā)類似于在胰島素刺激中觀察到的那些細(xì)胞應(yīng)答。GSK3的另一個體內(nèi)底物是真核細(xì)胞蛋白質(zhì)合成起始因子2B(elF2B)。elF2B通過磷酸化而失活，因此能夠抑制蛋白質(zhì)生物合成。因此，GSK3的抑制，例如通過"哺乳動物雷帕霉素靶蛋白"(mTOR)的失活，可上調(diào)蛋白質(zhì)生物合成。最后，有一些通過促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)路徑，使GSK3被激酶例如促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶l(MAPKAP-Kl或RSK)磷酸化而調(diào)節(jié)GSK3活性的證據(jù)。這些資料提示GSK3活性可受到細(xì)胞分裂、胰烏素及氨基酸刺激的調(diào)控。已知GSK3p也是脊推動物Wnt信號途徑中的一種重要成分。已經(jīng)證實(shí)這條生物化學(xué)途徑對于正常胚胎發(fā)育#重要且可調(diào)節(jié)正常組織中的細(xì)胞增殖。GSK3對于Wnt刺激的應(yīng)答是被抑制。這可導(dǎo)致GSK3底物例如Axin、腺瘤性結(jié)腸息肉病(APC)的基因產(chǎn)物和p-連環(huán)蛋白的去磷酸化。Wnt途徑的異常調(diào)節(jié)與許多癌有關(guān)。APC和/或P-連環(huán)蛋白中的突變常見于結(jié)腸直腸癌和其它的腫瘤中。p-連環(huán)蛋白也已顯示出在細(xì)胞附著中的重要性。因此GSK3也可在一定程度上調(diào)節(jié)細(xì)胞附著過程。除了已描述的生化途徑外，也有GSK3通過細(xì)胞周期蛋白Dl的磷酸化來參與細(xì)胞分裂的調(diào)節(jié)、參與轉(zhuǎn)錄因子例如c-Jun、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白a(C/EBPa)、c-Myc和/或其它底物如激活T細(xì)胞核因子(NFATc)、熱休克因子-l(HSF-l)和c-AMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB)的磷酸化的資料。GSK3還顯示出在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡中起作用，雖然有組織特異性。GSK3經(jīng)由促細(xì)胞凋亡機(jī)理在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡中的作用可能與其中可發(fā)生神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的醫(yī)學(xué)病癥密切相關(guān)。這些病癥的例子是頭部外傷、中風(fēng)、癲癇、阿爾茨海默病和運(yùn)動神經(jīng)元疾病、進(jìn)行性核上性麻痹、皮質(zhì)基底核變性和皮克氏病。在體外已經(jīng)證實(shí)GSK3能夠過度磷酸化微管體相關(guān)蛋白Tau。Tau的過度磷酸化破壞了它與微管的正常結(jié)合，而且可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Tau微絲的形成。據(jù)信這些微絲的不斷蓄積可最終導(dǎo)致神經(jīng)元功能障礙和變性。因此通過抑制GSK3來抑制Tau的磷酸化可提供一種限制和/或預(yù)防神經(jīng)變性效應(yīng)的方法。彌漫型大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)細(xì)胞周期的進(jìn)程是由細(xì)胞周期蛋白、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)和作為細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控蛋白的CDK抑制因子(CDKi)的聯(lián)合作用來調(diào)控的。p27KIPl是細(xì)胞周期調(diào)控中關(guān)鍵的CDKi,其降解是G1/S的轉(zhuǎn)換所必需的。盡管在增殖的淋巴細(xì)胞中缺乏p27KIPl的表達(dá)，但已經(jīng)報(bào)道了一些侵襲性B細(xì)胞淋巴瘤顯示出反常的p27KIPl染色。在此類型的淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)了p27KIPl異常的高表達(dá)。在單變量及多變量分析中，這些發(fā)現(xiàn)的臨床相關(guān)性分析顯示，在此類型腫瘤中高水平的p27KIPl的表達(dá)是不良的預(yù)后指標(biāo)。這些結(jié)果顯示彌漫型大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)中有異常的p27KIPl表達(dá)，具有不良的臨床特征，提示通過與其它細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子蛋白的交互作用可導(dǎo)致該異常的p27KIPl蛋白質(zhì)失去功能。(Br.J.Cancer.1999Jul;80(9):1427-34.p27KIPl在彌漫型大B細(xì)胞淋巴瘤中異常表達(dá)并且與不良的臨床結(jié)果有關(guān)。SaezA，SanchezE，Sanchez-BeatoM，CruzMA，ChaconI，MunozE，CamachoFI，Martinez-MonteroJC，MollejoM，GarciaJF，PirisMA.DepartmentofPathology,VirgendelaSaludHospital,Toledo,Spain.)慢性淋巴性白血病B細(xì)胞慢性淋巴性白血病(CLL)是西半球最常見的白血病，且每年約有10,000個新病例被診斷(ParkerSL，TongT，BoldenS，WingoPA:Cancerstatistics,1997.Ca.Cancer.J.Clin.47:5，(1997))。相對于其它形式的白血病，CLL的總的預(yù)后良好，即使是最晚期的患者也有3年的存活中位值。與先前使用的以烷化劑為基礎(chǔ)的治療相比，加入氟達(dá)拉濱(fludarabine)作為CLL癥狀患者的起始治療可導(dǎo)致較高比率的完全響應(yīng)(27%對3%)和無進(jìn)展的存活期(33對17個月)。雖然在治療后達(dá)到臨床上的完全響應(yīng)是改進(jìn)CLL存活率的最初步驟，但多數(shù)患者并未達(dá)到完全緩解或?qū)Ψ_(dá)拉濱沒有反應(yīng)。再者，所有用氟達(dá)拉濱治療的CLL患者最后都復(fù)發(fā)，因而使其只能用作單純的舒緩性藥劑(RaiKR，PetersonB，EliasL，ShepherdL，HinesJ，NelsonD，ChesonB，KolitzJ，SchifferCA:Arandomizedcomparisonoffludarabineandchlorambucilforpatientswithpreviouslyuntreatedchroniclymphocyticleukemia.ACALGBSWOG，CTG/NCI-CandECOGInter-GroupStudy.Blood88:141a,1996(摘要552，suppl1)。因此，如果想實(shí)現(xiàn)該疾病治療的進(jìn)一步改進(jìn)，必需鑒定具有補(bǔ)充氟達(dá)拉濱的細(xì)胞毒性和去除由固有的CLL耐藥性因子誘發(fā)的耐藥性的新作用機(jī)制的新藥劑。關(guān)于CLL患者對治療反應(yīng)較差和不良存活率的研究得最為廣泛的標(biāo)準(zhǔn)預(yù)測因子是異常的p53功能，其以點(diǎn)突變或染色體17pl3缺失為特征。的確，事實(shí)上對烷化劑或嘌呤類似物的治療沒有反應(yīng)已在那些具有異常p53功能的CLL患者的多種單一機(jī)構(gòu)的病例系列中被證明。一種有能力克服與CLL的p53突變有關(guān)的抗藥性的治療劑的引入，將可能為成為該病治療的重要進(jìn)步。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的抑制劑福拉利多(flavopiridol)和CYC202在體外可誘發(fā)來自B細(xì)胞慢性淋巴性白血病(B-CLL)的惡性細(xì)胞的凋亡。福拉利多給藥造成對caspase3活性的刺激和p27(kipl)的caspase-依賴性的分解，p27是一種細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控因子，其在B-CLL中過表達(dá)。(Blood.1998Nov15;92(10):3804-16Flavopiridolinducesapoptosisinchroniclymphocyticleukemiacellsviaactivationofcaspase-3withoutevidenceofbcl-2modulationordependenceonfunctionalp53.ByrdJC，ShinnC，WasdenkoJK，F(xiàn)uchsEJ,LehmanTA，NguyenPL,FlinnIW，DiehlLF，SausvilleE，GreverMR)。現(xiàn)有技術(shù)來自DuPont的WO02/34721公開了一種作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的茚并l，2-c吡唑-4-酮。來自BristolMyersSquibb的WO01/81348描述了5-石克-、亞磺酰基-和磺?；吝虿3，4-b-吡咬作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的用途。同樣來自BristolMyersSquibb的WO00/62778公開了一種蛋白酪氨酸激酶抑制劑。來自Cydacel的WO01/72745A1描述了2-取代的4-雜芳基-嘧咬及其制備、包含它們的藥物組合物和其作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)抑制劑的用途以及其在治療增殖性疾病例如癌癥、白血病、4艮屑病等中的用途。來自Agouron的WO99/21845描述了一種用于抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)，例如CDK1、CDK2、CDK4和CDK6的4-氨基噢唑衍生物。該發(fā)明還涉及包含該化合物的藥物組合物的治療或預(yù)防用途，和通過給予有效量的該化合物來治療惡性病和其它疾病的方法。來自Agouron的WO01/53274公開了一種作為CDK激酶抑制劑的化合物，其可包含連接到含N雜環(huán)基團(tuán)的被酰胺取代的苯環(huán)。WO01/98290(Pharmacia&Upjohn)公開了一種作為蛋白激酶抑制劑的3-氨基羰基-2-酰氨基-噻吩衍生物。來自Agouron的WO01/53268和WO01/02369公開了通過抑制蛋白激酶例如細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶或酪氨酸激酶來調(diào)節(jié)或抑制細(xì)胞增殖的化合物。Agouron的化合物具有直接地或經(jīng)由CH-CH或CH=N基團(tuán)連接至吲唑環(huán)的3-位的芳基或雜芳基環(huán)。WO00/39108和WO02/00651(兩者皆屬于DuPont醫(yī)藥)描迷了雜環(huán)化合物，它是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶，尤其是Xa因子和凝血酶的抑制劑。據(jù)稱該化合物可用作抗凝血劑或用于預(yù)防血栓栓塞癥。US2002/0091116(Zhu等人)、WO01/19798和WO01/64642各自公開了作為Xa因子抑制劑的不同組的雜環(huán)化合物。公開和例舉了一些l-取代的吡唑甲酰胺類化合物。US6,127,382，WO01〃0668、WO00/68191、WO97/48672，WO97/1卯52和WO97/1卯62(均屬于Allergan)各自公開了用于治療包括癌在內(nèi)的各種過度增殖疾病的具有類視色素活性的化合物。WO02/070510(Bayer)描述了一種用于治療心血管疾病的氨基-二羧酸化合物。雖然一般性地提及了吡唑類，但在此份文件中沒有吡唑的特定實(shí)施例。WO97/03071(KnollAGy^開了一種用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥的雜環(huán)基-甲酰胺衍生物。一般性地提及了吡唑作為雜環(huán)基的例子，但是沒有公開或例舉具體的吡唑化合物。WO97/40017(NovoNordisk)描述了作為蛋白酪氨酸磷酸酶的調(diào)節(jié)劑的化合物。WO03/020217(Univ,Connecticut)公開了一種用于治療神經(jīng)病癥的大;^(cannabinoid)受體調(diào)節(jié)劑吡唑3-酰胺。其中描述了(第15頁)該化合物可被用于癌癥化療中，但并不清楚該化合物作為抗癌劑是否有效或其是否為了其它目的而給藥。WO01/58869(BristolMyersSquibb)公開了可用于治療多種疾病的大麻堿受體調(diào)節(jié)劑。所預(yù)見的主要用途為治療呼吸疾病，盡管提及了癌的治療。WO01/02385(AventisCropScience)公開了作為殺真菌劑的l-(會啉-4-基)-111-吡唑衍生物。其中公開了作為合成中間體的l-未取代的吡唑。WO2004/039795(Fujisawa)公開了作為栽脂蛋白B分泌抑制劑的包含1-取代的吡唑基團(tuán)的酰胺。據(jù)稱該化合物可用于治療高血脂等病癥。WO2004/000318(CellularGenomics)公開了作為激酶調(diào)節(jié)劑的各種氨基-取代的單環(huán)類。無吡唑類的例舉化合物。我們早先的待批申請WO2005/012256，其在本申請的優(yōu)先權(quán)日之后公開，公開了作為CDK和GSK-3激酶抑制劑的3,4-二取代的吡唑化合物。發(fā)明概述本發(fā)明提供具有細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制或調(diào)節(jié)活性以及糖原合成酶激酶-3(GSK3)抑制或調(diào)節(jié)活性的化合物，且預(yù)期其可用于預(yù)防或治療由激酶介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥。因此，例如，可預(yù)見本發(fā)明化合物將可用于減輕或降低癌癥的發(fā)生率。在第一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其鹽、互變異構(gòu)物、溶劑合物和N-氧化物;其中R1為2，6-二氯苯基；R2a和R2b均為氫；且R"為下式的基團(tuán)其中W為C^烷基。術(shù)語"烷基"包括直鏈和支鏈烷基基團(tuán)。Q—4烷基基團(tuán)可為d、C2、C3或Q烷基基團(tuán)。在Cw烷基基團(tuán)組中可包括下列亞組.Cw烷基基團(tuán)；.d.2烷基基團(tuán)；NH.<:2.3烷基基團(tuán)；和.C2—4烷基基團(tuán)。一個具體的亞組是d.3烷基。具體的d—4烷基基團(tuán)是甲基、乙基、異丙基、正丁基、異丁基和叔丁基。另一個c"烷基基團(tuán)的亞組包括甲基、乙基、異丙基和正丙基。一個優(yōu)選的基團(tuán)是甲基。其它具體的R4基團(tuán)是乙基和異丙基。因此，本發(fā)明的優(yōu)選化合物是4-(2，6-二氯-苯曱酰氨基)-lH-吡唑-3-甲酸(l-甲磺?；?哌啶-4-基)-酰胺。本發(fā)明還提供了.如本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗溆糜陬A(yù)防或治療由細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶或糖原合成酶激酶-3介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥。.一種預(yù)防或治療由細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶或糖原合成酶激酶-3介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥的方法，該方法包括將本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗o予需要它們的患者。導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥發(fā)生率的方法，該方法包括將本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗o予需要它們的患者。.一種在哺乳動物中治療包含或起因于異常細(xì)胞生長的疾病或病癥的方法，該方法包括給予哺乳動物抑制異常細(xì)胞生長有效量的本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗?。病癥發(fā)生率的方法，該方法包括給予哺乳動物抑制異常細(xì)胞生長有效量的本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗?一種在哺乳動物中治療包含或起因于異常細(xì)胞生長的疾病或病癥的方法，該方法包括將抑制cdk激酶(例如cdkl或cdk2)或糖原合成酶'激酶-3活性有效量的本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗o予哺乳動物。.一種在哺乳動物中減輕或降低包含或起因于異常細(xì)胞生長的疾病或病癥發(fā)生率的方法，該方法包括將抑制cdk激酶(例如cdkl或cdk2)或糖原合成酶激酶-3活性有效量的本文所定義式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗o予哺乳動物。.一種抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶或糖原合成酶激酶-3的方法，該方法包括使激酶與本文所定義的式(I)的激酶抑制性化合物或其任何亞組或?qū)嵗佑|。.一種調(diào)節(jié)細(xì)胞過程(例如細(xì)胞分裂)的方法，該方法通過使用本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗种萍?xì)胞周期蛋白依賴性激酶或糖原合成酶激酶-3的活性來實(shí)現(xiàn)。.本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗?，其用于預(yù)防或治療文中所定義的疾病狀態(tài)。.本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗糜谏a(chǎn)藥物的用途，其中該藥物用于任意一種或多種本文所定義的用途。.一種藥物組合物，其包含本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗涂伤幱幂d體。.一種適于口服給藥形式的藥物組合物，其包含本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗涂伤幱幂d體。.用于藥物的本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗?一種診斷和治療由細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥的方法，該方法包括(i)篩選患者以確定該患者正在患有或可能罹患的疾病治療敏感；(ii)當(dāng)患者的疾病或病癥被指示是敏感的時，給予患者本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗?本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗谏a(chǎn)用于治療或預(yù)防患者的疾病狀態(tài)或病癥的藥物中的用途，其中所述患者已被檢查并確定為患有對用具有抗細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶活性的化合物進(jìn)行的治療敏感的疾病狀態(tài)或病癥或者有罹患這些疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)。.用于抑制哺乳動物腫瘤生長的本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗?用于抑制肺瘤細(xì)胞生長(如在哺乳動物中)的本文所定義的式(I)化合物或其^:何亞組或?qū)嵗?用于抑制哺乳動物(如人類)中腫瘤生長的方法，該方法包括給予哺乳動物(如人類)抑制腫瘤生長有效量的本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗?用于抑制腫瘤細(xì)胞(諸如存在于哺乳動物例如人類中的腫瘤細(xì)胞)生長的方法，該方法包括^f吏腫瘤細(xì)胞接觸抑制腫瘤生長有效量的本文所定義的式(I)化合物或其任何亞組或?qū)嵗?用于任何上面所述和本文別處所述的用途和方法的本文所定義的化合物。一般優(yōu)選和定義在本申請中，除非上下文中另有指示，所指式(I)化合物包括如本文所定義的式(I)的所有亞組并且術(shù)語'亞組，包括在本文中所定義的所有優(yōu)選選擇、具體實(shí)施方案、實(shí)施例和具體化合物。任何在本文中所指式(I)也指在式(I)范圍內(nèi)的化合物的任何亞組和其任何優(yōu)選選擇和實(shí)施例，除非上下文另有指示。鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體、異構(gòu)體、N-氧化物、酯、前藥和同位素對式(I)化合物和其亞組的提及也包括其離子形式、鹽、溶劑合物、異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、N-氧化物、酯、前藥、同位素和被保護(hù)的形式，例如下文所討論的那些。優(yōu)選其鹽或互變異構(gòu)體或異構(gòu)體或N-氧化物或溶劑合物；更優(yōu)選其鹽或互變異構(gòu)體或N-氧化物或溶劑合物。許多式(I)化合物可以以鹽、例如酸加成鹽的形式存在，或者在某些情況下可以以有機(jī)或無機(jī)堿的鹽如羧酸鹽、磺酸鹽和磷酸鹽的形式存在。所有這類鹽均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，對式(I)化合物的提及包括化合物的鹽形式?？梢杂贸Ｒ?guī)的化學(xué)方法如PharmaceuticalSalts:Properties,Selection,andUse,P.HeinrichStahl(編輯)，CamilleG.Wermuth(編輯)，ISBN:3-卯639-026-8，Hardcover,388頁，2002年8月中所述的方法由含有堿性或酸性部分的母體化合物合成本發(fā)明的鹽。一般而言，這類鹽可以通過使這些化合物的游離酸或堿形式與適當(dāng)?shù)膲A或酸在水中或在有機(jī)溶劑中或在二者的混合物中進(jìn)行反應(yīng)來制備；一般使用非水性介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈?？梢杂酶鞣N酸(無機(jī)酸和有機(jī)酸)形成酸加成鹽。酸加成鹽的例子包括與選自下組的酸形成的鹽乙酸、2，2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、抗壞血酸(例如L-抗壞血酸)、L-天冬氨酸、笨璜酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、丁酸、(+)樟腦酸、樟腦-磺酸、(+)-(15)-樟腦-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、檸檬酸、環(huán)己烷氨基磺酸、十二烷基疏酸、乙烷-l，2-二磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、甲酸、富馬酸、半乳糖二酸、2，5-二羥基苯曱酸、葡庚糖酸、D-葡糖酸、葡糖醛酸(例如D-葡糖醛酸)、谷氨酸(例如L-谷氨酸)、a-氧代戊二酸、乙醇酸、馬尿酸、氫溴酸、鹽酸、氫碘酸、羥乙磺酸、(+)-L-乳酸、(士)-DL-乳酸、乳糖酸、馬來酸、蘋果酸、(-)-L-蘋果酸、丙二酸、(士)-DL-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-l，5-二磺酸、l-羥基-2-萘甲酸、煙酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕櫚酸、樸姆酸、磷酸、丙酸、L-焦谷氨酸、水楊酸、4-氨基-水楊酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、對-甲苯磺酸、十一碳烯酸和戊酸，以及?；臍寤岷完栯x子交換樹脂。鹽的一個具體的組由與乙酸、鹽酸、氫碘酸、磷酸、硝酸、疏酸、檸檬酸、乳酸、琥珀酸、馬來酸、蘋果酸、鞋乙磺酸、富馬酸、M酸、甲苯磺酸、曱磺酸(甲烷磺酸)、乙磺酸、萘磺酸、戊酸、乙酸、丙酸、丁酸、丙二酸、葡糖醛酸和乳糖酸形成的鹽組成。鹽的一個亞組由與鹽酸、乙酸、甲磺酸、己二酸、L-天冬氨酸和DL-乳酸形成的鹽組成。鹽的另一個亞組由乙酸鹽、曱磺酸鹽、乙磺酸鹽、DL-乳酸鹽、己二酸鹽、D-葡糖醛酸鹽、D-葡糖酸鹽和鹽酸鹽組成。用于制備本文所述的式(I)化合物及其亞組和實(shí)例的液體(例如水性)組合物的優(yōu)選的鹽是在給定液體載體(例如7K)中具有大于10嗎/ml液體載體(例如7K)、更通常大于0.5mg/ml、優(yōu)選大于lmg/ml的溶解度的鹽。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了一種藥物組合物，其包含含有濃度大于10jig/ml液體栽體(例如水)、通常大于0.5mg/ml、優(yōu)選大于lmg/ml的鹽形式的本文所述的式(I)化合物及其亞組和實(shí)例的水性溶液。如果化合物是陰離子性的，或者具有可以是陰離子性的官能團(tuán)(例如-COOH可以是-COO-)，則可以與合適的陽離子形成鹽。合適的無機(jī)陽離子的例子包括但不限于堿金屬離子如Na+和K+、堿土金屬陽離子如Ca2+和Mg"以及其它陽離子如Al3+。合適的有機(jī)陽離子的例子包括但不限于銨離子(即，NH4+)和被取代的銨離子(例如，NH:jR+、NH2R2+、NHR3+、NR4+)。一些合適的凈皮取代的銨離子的例子是衍生自以下物質(zhì)的那些乙胺、二乙胺、二環(huán)己基胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、派溱、千胺、苯基爺基胺、膽堿、葡甲胺和氨基丁三醇，以及氨基酸，如賴氨酸和精氨酸。常見季銨離子的一個例子是N(CH3)4+。在式(I)化合物含有胺官能團(tuán)的情況下，這些化合物可以形成季銨鹽，例如通過按照本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法與烷基化劑反應(yīng)來形成季銨鹽。這類季銨化合物在式(I)的范圍內(nèi)。本發(fā)明的化合物的鹽形式通常是可藥用鹽，可藥用鹽的例子在Berge等，1977,"PharmaceuticallyAcceptableSalts,"/./^"/tw.5W"第66巻，第l-19頁中有討論。然而，不可藥用的鹽也可以以中間體形式^C制備，然后可以將其轉(zhuǎn)化成可藥用鹽。這類不可藥用的鹽形式可用于例如純化或分離本發(fā)明的化合物，它們也形成了本發(fā)明的一部分。含有胺官能團(tuán)的式(I)化合物也可以形成N-氧化物。本文對含有胺官能團(tuán)的式(I)化合物的提及也包括N-氧化物。在化合物含有數(shù)個胺官能團(tuán)的情況下，一個或一個以上的氮原子可以被氧化形成N-氧化物。N-氧化物的具體例子有叔胺或含氮雜環(huán)的氮原子的N-氧化物?？梢酝ㄟ^用氧化劑如過氧化氫或過酸(例如過氧羧酸)處理相應(yīng)的胺來形成N-氧化物，參見例如v4^/v朋"d6Vg朋/c0le附/s^v，JerryMarch,第4版，WileyInterscience，頁。更具體地，可以通過L.W.Deady0Syw.CVwi附.1977，7，509-514)的操作方法制備N-氧化物，其中胺化合物與間-氯過苯甲酸(MCPBA)反應(yīng)，例如在惰性溶劑如二氯甲烷中反應(yīng)。式(I)化合物可以以許多不同的幾何異構(gòu)形式和互變異構(gòu)形式存在，對式(I)化合物的提及包括所有這類形式。為了避免疑慮，在化合物可以以數(shù)種幾何異構(gòu)形式或互變異構(gòu)形式之一存在并且僅具體描述或給出了一種的情況下，所有其它幾何異構(gòu)形式或互變異構(gòu)形式也包括在式(I)中。例如，在式(I)化合物中，吡唑環(huán)可以以下列兩種互變異構(gòu)形式A和B的形式存在。為了簡便，通式(I)給出了形式A，但是應(yīng)認(rèn)為所述通式包括兩種互變異構(gòu)形式?；プ儺悩?gòu)形式的其它例子包括例如酮基-、烯醇-和烯醇化物-形式，例如在下列互變異構(gòu)體對中酮基/烯醇(在下面給出)、亞胺/烯胺、酰胺/亞氨基醇、脒/脒、亞硝基/將、硫酮/烯硫醇和硝基/酸式-硝基(aci-nitro)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>酮基烯醇烯醇化物除非上下文另有要求，否則在式(I)化合物含有一個或多個手性中心(例如在其中的W是2-丁基的化合物的情況中)并且可以以兩種或多種旋光異構(gòu)體的形式存在的情況下，對式(I)化合物的提及包括其所有旋光異構(gòu)形式(例如對映體、差向異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體)，所述旋光異構(gòu)形式為單一的旋光異構(gòu)體或者兩種或多種旋光異構(gòu)體的混合物(例如外消旋混合物)?？梢杂闷湫饣钚詠肀碚骱丸b別旋光異構(gòu)體(即，為+和-異構(gòu)體，或d和/異構(gòu)體)或者可以根據(jù)其絕對立體化學(xué)用Cahn、Ingold和Prelog建立的"R和S"命名法來表征它們，參見/^v"wcWOgwi/cC%e//^y，JerryMarch,第4版，JohnWiley&Sons,NewYork,1992，第109-114頁，還參見Cahn,Ingold&Prelog，爿"，.￡>ig/"1966，5，385-415?？梢杂冒ㄊ中陨V法(在手性栽體上進(jìn)行的色譜法)在內(nèi)的許多技術(shù)對旋光異構(gòu)體進(jìn)行分離，這類技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。作為手性色i普法的替代選擇，可以通過以下方法分離旋光異構(gòu)體與手性酸如(+)-酒石酸、(-)-焦谷氨酸、(-)-二-甲苯?；?L-酒石酸、(+)-扁桃酸、(-)-蘋果酸和(-)-樟腦磺酸形成非對映異構(gòu)體鹽，用選擇結(jié)晶(preferentialcrystallisation)分離非對映異構(gòu)體，然后將鹽解離成游離堿的單一對映體。在式(I)化合物以兩種或多種旋光異構(gòu)體形式存在的情況下，一對對映體中的一種對映體可以優(yōu)于另一種對映體，例如，在生物學(xué)活性方面優(yōu)于另一種對映體。因此，在某些情況下，可能需要僅用一對對映體中的一種或僅用多種非對映異構(gòu)體中的一種作為治療劑。因此，本發(fā)明提供了含有具有一個或多個手性中心的式(I)化合物的組合物，其中至少55%(例如至少60%、65%、70%、75°/。、80%、85%、90%或95%)的式(1)化合物以單一旋光異構(gòu)體(例如對映體或非對映異構(gòu)體)的形式存在。在一個一般的實(shí)施方案中，式(I)化合物總量的99%或更多(例如基本上全部)可以以單一旋光異構(gòu)體(例如對映體或非對映異構(gòu)體)的形式存在。本發(fā)明的化合物包括具有一個或多個同位素取代的化合物，對具體元素的提及在其范圍內(nèi)包括該元素的所有同位素。例如，對氫的提及在其范圍內(nèi)包括111、2H(D)和SH(T)。類似地，對碳和氧的提及在其范圍內(nèi)分別包括12<:、13c和"c與16o和18o。同位素可以是放射性的或非放射性的。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，化合物不含有放射性同位素。優(yōu)選將這類化合物用于治療用途。然而，在另一個實(shí)施方案中，化合物可以含有一種或多種放射性同位素。含有這類放射性同位素的化合物在診斷的情況下可能是有用的。酯如帶有羧酸基團(tuán)或羥基的式(I)化合物的羧酸酯和酰氧基酯也包括在式(I)范圍內(nèi)。酯的例子有含有基團(tuán)-C(-O)OR的化合物，其中R是酯取代基，例如Cw烷基、C3-20雜環(huán)基或Cs-20芳基，優(yōu)選d.7烷基。酯基團(tuán)的具體例子包括但不限于-C(-0)0CH3、-C(=0)OCH2CH3、-C(=0)OC(CH3)3和-C(-O)OPh。酰氧基(反向酉旨)基團(tuán)的例子用-OC(-O)R表示，其中R是酰氧基取代基，例如Cw烷基、C3-20雜環(huán)基或Cs-2。芳基，優(yōu)選Cw烷基。酰氧基的具體例子包括但不限于-OC(=0)CH3(乙酰氧基)、-OC(=0)CH2CH3、-OC(=0)C(CH3)3、-OC(-O)Ph和-OC(-0)CH2Ph。式(I)還包括化合物的任何多晶型物、化合物的溶劑合物(例如水合物)、復(fù)合物(例如與諸如環(huán)糊精等化合物的包合配合物或包合物或與金屬的復(fù)合物)和化合物的前藥。"前藥"意指例如在體內(nèi)被轉(zhuǎn)化成式(I)的生物學(xué)活性化合物的任何化合物。例如，一些前藥是活性化合物的酯(例如，生理學(xué)可接受的易于代謝的酯)。在代謝過程中，酯基團(tuán)(-C(-O)OR)被裂解產(chǎn)生活性藥物。這類酯可以通過例如母體化合物中的任何羧g團(tuán)(-C(=0)OH)的酯化來形成，在適宜的情況下，對母體化合物中的任何其它活性基團(tuán)事先進(jìn)行保護(hù)，如果需要，之后再進(jìn)行去保護(hù)。這類易于代謝的酯的例子包括式-C(-O)OR的那些，其中R是(例力口，-Me、-Et、畫nPr、-iPr、-nBu、-sBu、畫iBu、-tBu);d-7氨基烷基(例如，氨基乙基；2-(N，N-二乙基氨基)乙基；2-(4-嗎啉代)乙基)；和酰氧基-Cw烷基(例如，酰氧基甲基；酰氧基乙基；新戊酰氧基甲基；乙酰氧基甲基；l-乙酰氧基乙基；甲氧基-l-甲基)乙基-羰基氧基乙基；l-(苯甲酰氧基)乙基；異丙氧基-羰基氧基甲基；l-異丙氧基-羰基氧基乙基；環(huán)己基-羰基氧基甲基；l-環(huán)己基-羰基氧基乙基；環(huán)己基氧基-羰基氧基甲基；l-環(huán)己基氧基-羰基氧基乙基；(4-四氫吡喃基氧基)羰基氧基曱基；1(4-四氬喃基氧基)羰基氧基乙基；(4-四氫吡喃基)羰基氧基甲基；和1_(4-四氬吡喃基)羰基氧基乙基)。另外，一些前藥被酶促活化產(chǎn)生活性化合物或是經(jīng)進(jìn)一步化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生活性化合物的化合物(例如，在ADEPT、GDEPT、LIDEPT等中)。例如，前藥可以是糖衍生物或其它糖苷結(jié)合物，或者可以是氨基酸酯衍生物。生物活性式(I)化合物和其亞組是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的抑制劑。例如，本發(fā)明的化合物是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶、特別是選自CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6和CDK9、更特別是選自CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5和CDK9的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的抑制劑。優(yōu)選的化合物是抑制一種或多種選自CDK1、CDK2、CDK4和CDK9的CDK激酶、例如CDK1和/或CDK2的化合物。本發(fā)明的化合物還具有抗糖原合成酶激酶-3(GSK3)的活性。由于它們在調(diào)節(jié)或抑制CDK和糖原合成酶激酶中的活性，預(yù)計(jì)本發(fā)期的控制的手段。因此，預(yù)計(jì)所述化合物將可用于治療或預(yù)防增殖性疾病如癌癥。還預(yù)計(jì)本發(fā)明的化合物將可用于治療諸如病毒感染、II型或非胰島素依賴型糖尿病、自身免疫性疾病、頭部外傷、中風(fēng)、癲癇、神經(jīng)變性疾病如阿爾茨海默病、運(yùn)動神經(jīng)元疾病、進(jìn)行性核上麻痹、皮質(zhì)基底核變性和皮克氏病(Pick'sdisease)等病癥，例如自身免疫性疾病和神經(jīng)變性疾病。預(yù)計(jì)本發(fā)明的化合物在其中有用的一個疾病狀態(tài)和病癥亞組由病毒感染、自身免疫性疾病和神經(jīng)變性疾病組成。CDK在細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄、分化和CNS功能的調(diào)節(jié)中起作用。因此，CDK抑制劑可用于治療其中存在增殖、細(xì)胞凋亡或分化異常的疾病例如癌癥。特別是RB+ve腫瘤可能對CDK抑制劑特別敏感。RB-ve腫瘤也可能對CDK抑制劑敏感?？杀灰种频陌┌Y的例子包括但不限于癌，例如膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌(例如結(jié)腸直腸癌如結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤)、腎癌、表皮癌、肝癌、肺癌，例如腺癌、小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌、食道癌、膽嚢癌、卵巢癌、月夷腺癌例:ft口夕卜分》必腹腺癌(exocrinepancreaticcarcinoma)、胃癌、宮多貞癌、甲狀腺癌、前列腺癌或皮膚癌，例如鱗狀細(xì)胞癌；淋巴譜系的造血系統(tǒng)腫瘤(hematopoietictumorsoflymphoidlineage),例i口白血病、急小生淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、B-細(xì)胞淋巴瘤(如彌漫型大B細(xì)胞淋巴瘤)、T-細(xì)胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛細(xì)胞淋巴瘤或伯基特淋巴瘤；骨髓鐠系的造血系統(tǒng)腫瘤(hematopoietictumourofmyeloidlineage),例如急性和慢性髓性白血病、骨髓發(fā)育不良綜合征或早幼粒細(xì)胞白血病；甲狀腺濾泡狀癌；間充質(zhì)起源的腫瘤，例如纖維肉瘤或橫紋肌肉瘤；中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，例如星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或神經(jīng)鞘瘤；黑素瘤；精原細(xì)胞瘤；畸胎癌；骨肉瘤；著色性干皮病；角化棘皮瘤(keratoctanthoma);甲狀腺濾泡狀癌；或卡波西肉瘤。癌癥可以是對任何一種或多種選自CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5和CDK6的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶、例如一種或多種選自CDK1、CDK2、CDK4和CDK5的CDK激酶、例如CDK1和/或CDK2的抑制敏感的癌癥?？梢岳孟挛膶?shí)施例中給出的細(xì)胞生長測定法或標(biāo)題為"診斷方法，，的部分中給出的方法來確定一種特定的癌癥是否是對細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的抑制敏感的癌癥。還已知CDK在細(xì)胞凋亡、增殖、分化和轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮作用，因此CDK抑制劑還可用于治療癌癥以外的下列疾病病毒感染，例如皰滲病毒、痘病毒、EB病毒、辛德比斯病毒、腺病毒、HIV、HPV、HCV和HCMV;在HIV-感染的個體中預(yù)防AIDS發(fā)生；慢性炎性疾病，例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫介導(dǎo)的腎小球腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、炎癥性腸病和自身免疫性糖尿??；心血管疾病例如心臟肥大、再狹窄、動脈粥樣硬/f匕；神經(jīng)變性疾病，例如阿爾茨海默病、與AIDS有關(guān)的癡呆、帕金森病、肌萎縮性側(cè)索硬化、色素性視網(wǎng)膜炎、脊髓性肌萎縮和小腦變性；腎小球腎炎；骨髄增生異常綜合征、與缺血性損傷有關(guān)的心肌梗死、中風(fēng)和再灌注損傷、心律失常、動脈粥樣硬化、毒素-誘發(fā)的或與酒精有關(guān)的肝病、血液學(xué)疾病，例如慢性貧血和再生障礙性貧血；肌肉骨骼系統(tǒng)的變性疾病，例如骨質(zhì)疏松和關(guān)節(jié)炎、阿司匹林敏感性鼻竇炎、嚢性纖維化、多發(fā)性硬化、腎臟疾病和癌癥疼痛。還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑可與其它抗癌劑組合使用。例如，細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑福拉利多(flavopiridol)已經(jīng)與其它抗癌劑一起用于組合治療。因此，在本發(fā)明的用于治療包括異常細(xì)胞生長的疾病或病癥的藥物組合物、用途或方法中，包含異常細(xì)胞生長的疾病或病癥在一個實(shí)施方案中是癌癥。一組癌癥包括人乳腺癌(例如原發(fā)性乳腺癌、淋巴結(jié)陰性乳腺癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管腺癌、非子宮內(nèi)膜樣乳腺癌(non-endometrioidbreastcancers));和套細(xì)胞淋巴瘤。另外，其它癌癥有結(jié)腸直腸癌和子宮內(nèi)膜癌。癌癥的另一個亞組包括淋巴鐠系的造血系統(tǒng)腫瘤，例如白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、套細(xì)胞淋巴瘤和B-細(xì)胞淋巴瘤(如彌漫型大B細(xì)胞淋巴瘤)。一種具體的癌癥是慢性淋巴細(xì)胞白血病。另一種具體的癌癥是套細(xì)胞淋巴瘤。另一種具體的癌癥是彌漫型大B細(xì)胞淋巴瘤。癌癥的另一個亞組包括乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、食道癌、鱗狀細(xì)胞癌和非小細(xì)胞肺癌?？梢杂孟挛膶?shí)施例中給出的測定法來測量本發(fā)明的化合物作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶和糖原合成酶激酶-3的抑制劑的活性，給定化合物所表現(xiàn)出的活性水平可以用ICso值來定義。優(yōu)選的本發(fā)明化合物是ICso值小于1微摩爾、更優(yōu)選小于0.1微摩爾的化合物。本發(fā)明化合物的優(yōu)點(diǎn)本文所定義的式(I)的化合物和其亞組例如化合物4-(2，6-二氯-苯甲酰氨基)-111-吡唑-3-甲酸(l-甲烷磺酰基-哌咬-4-基)-酰胺具有優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)的化合物的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明化合物可能具有適于口服接觸的理化性質(zhì)。本發(fā)明化合物在HCT-116細(xì)胞中對轉(zhuǎn)錄作用的ICso高于對增殖作用的ICso:因此，例如，對轉(zhuǎn)錄作用的ICso高于對增殖作用的IQo約100倍。這是有利的，因?yàn)榛衔锟梢愿玫啬褪軓亩试S其在較高的水平下給藥和給藥較長的時間。具體而言，相對于現(xiàn)有技術(shù)的化合物，式(I)化合物顯示出改進(jìn)的口服生物利用度?？诜锢枚瓤啥x為以百分比表示的通過口服途徑給藥時化合物的血漿暴露值與通過靜脈內(nèi)(i.V.)途徑給藥時化合物的血漿暴露值的比(F)。口服生物利用度(F值)大于30%、更優(yōu)選大于40%的化合物特別有利，因?yàn)樗鼈兛杀豢诜┯枚俏改c外施用，或者既可被口服施用又可被胃腸外施用。例如，化合物4-(2，6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-甲酸(l-甲烷磺?；?哌啶-4-基)-酰胺在以口服途徑對小鼠給藥時具有40-50%生物利用度。本發(fā)明的化合物，例如化合物4-(2，6-二氯-苯曱酰氨基)-lH-吡唑-3-甲酸(l-甲烷磺?；?哌啶-4-基)-酰胺，具有較高的激酶(CDK2)體外抑制活性并且對癌細(xì)胞系具有更強(qiáng)的抗增殖效果。此外，化合物對GSK3p具有較低活性且對CDK2的選擇性超過GSK3p。因此化合物的作用主要是通過抑制CDK來影響細(xì)胞周期，而并不伴有由于GSK3p抑制例如胰島素敏感性、生長因子作用而產(chǎn)成的額外結(jié)果?；衔锞哂懈宄募?xì)胞周期抑制作用特征和更少的來自經(jīng)由GSK3卩的額外結(jié)果的副作用。化合物4-(2，6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-甲酸(l-甲烷磺酰基-哌啶-4-基)-酰胺與其2，6-二氟苯甲酰氨基類似物的生物學(xué)特性的比較列于以下實(shí)施例11中。制備式(I)化合物的方法在該部分以及本申請的所有其它部分中，除非上下文另有提示，所指式(I)也包括所有本文所定義的其亞組和實(shí)施例。當(dāng)提到Ri和RS基團(tuán)或任何其它"R"基團(tuán)時，所述基團(tuán)的定義如上所述和如本申請以下段落所述，除非上下文另有要求。式(I)化合物可根據(jù)技術(shù)人員已知的合成方法制備，和通過下述和如我本文中)所描述的方法制備。、*''例如，式(I)化合物可通過流程1中所示的反應(yīng)順序進(jìn)行制備。用于流程1中所示的合成路徑的原料是4-硝基-吡唑-3-羧酸(X)，其可從商業(yè)途徑獲得或者可以通過相應(yīng)的4-未取代的吡唑羧基化合物的硝化作用制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>(XIV)流程1通過在酸催化劑或亞硫酰氯的存在下與適當(dāng)?shù)拇祭缫掖挤磻?yīng)，將硝基-吡唑羧酸(X)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的S旨(XI)，例如甲酯或乙酯(所示為其乙酯)。反應(yīng)可在室溫下使用用于酯化的醇作為溶劑來進(jìn)行。硝基-酯(XI)可通過用于將辨基轉(zhuǎn)化成氨基的標(biāo)準(zhǔn)方法還原成相應(yīng)的胺(XII)。因此，例如，硝基基團(tuán)可通過用鈀/炭催化劑進(jìn)行氫化而被還原成胺。氫化反應(yīng)可在室溫下于溶劑例如乙醇中進(jìn)行。所產(chǎn)生的胺(XII)可通過與式Wcoci的酰氯在非干擾性堿例如三乙胺的存在下反應(yīng)轉(zhuǎn)化成酰胺(XIII)。反應(yīng)可在約室溫下于極性溶劑例如二惡烷中進(jìn)行。酰氯可通過用亞硫酰氯處理羧酸！^C02H，或通過在催化量的二甲基曱酰胺存在下與乙二酰氯反應(yīng)，或通過酸的鉀鹽與乙二酰氯的反應(yīng)來制備。作為上述使用酰氯的方法的替代方法，胺(Xn)可通過與羧酸RiC02H在通常用于形成肽鍵類型的酰胺偶合試劑存在下的反應(yīng)而轉(zhuǎn)化成酰胺(XIII)。這些試劑的例子包括1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(Sheehan等人，J.Amer.OiemSoc.1955，77，1067)、l-乙基-3-(3，-二曱氨基丙基)-碳二亞胺(在本文中稱為EDC或EDAC，但在本領(lǐng)域中也稱為EDCI和WSCDI)(Sheehan等人，J.Org.Chem.，1961，26,2525)、基于脲陽離子(uronium)的偶合劑例如0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-N，N，N，，N，-四曱基脲六氟磷酸鹽(HATU)和基于鎮(zhèn)的偶合劑例如l-苯并三唑氧基三-(吡咯烷-l-基)鎮(zhèn)六氟磷酸鹽(PyBOP)(Castro等人，TetrahedronLetters，19卯，31，205)?；谔级啺返呐己蟿┯欣嘏cl-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)(LA.Carpino，J.Amer.Chem.Soc.，1993，115，4397)或l-羥基苯并三唑(HOBt)(Konig等人，Chem.Ber.，103，708，2024-2034)組合使用。優(yōu)選的偶合劑包括與HOAt或HOBt組合的EDC(EDAC)和DCC。偶合反應(yīng)通常在非水性的非質(zhì)子溶劑，例如乙腈、二惡烷、二甲亞砜、二氯甲烷、二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷中，或任選地含有一種或多種可混溶的共溶劑的水性溶劑中進(jìn)行。反應(yīng)可在室溫下進(jìn)行，或者當(dāng)反應(yīng)物的反應(yīng)性較低時(例如在具有吸電子基團(tuán)例如磺酰胺基團(tuán)的缺電子的苯胺的情況下)，在適當(dāng)升高的溫度下進(jìn)行。反應(yīng)可在非千擾性堿，例如叔胺如三乙胺或N，N-二異丙基乙胺存在下進(jìn)行。酰胺(XIII)隨后通過用水性堿金屬氫氧化物例如氫氧化鈉處理而水解成羧酸(XIV)。皂化反應(yīng)可用有機(jī)共溶劑例如醇(例如甲醇)進(jìn)行且反應(yīng)混合物通常被加熱到非極端溫度，例如最高約50-60X:。羧酸(XIV)然后可通過使用上述酰胺形成條件與胺R3-NH2反應(yīng)而轉(zhuǎn)化成式(I)的化合物。因此，例如，酰胺偶合反應(yīng)可在EDC和HOBt存在下于極性溶劑如DMF中進(jìn)行。另一個合成其中R化為氫的式(I)化合物的通用途徑顯示于流程2中。流程2在流程2中，使用上述酰胺形成條件將硝基-吡唑-羧酸(X)或其活化的衍生物例如?；扰c胺R、NH2反應(yīng)以產(chǎn)生硝基-吡唑-酰胺(XV)，其接著用還原硝基基團(tuán)的標(biāo)準(zhǔn)方法，例如上述使用Pd/C催化劑的氫化方法還原成相應(yīng)的氨基化合物(XVI)。然后將胺(XVI)與式R、C02H的羧酸或其活化的衍生物例如?；然蛩狒谝陨详P(guān)于流程l所述的酰胺形成條件下偶合。因此，例如，作為使用?；鹊奶娲椒?，偶合反應(yīng)可在EDAC(EDC)和HOBt存在下于溶劑例如DMF中進(jìn)行以產(chǎn)生式(I，)化合物，其相當(dāng)于其中R"是氫的式(I)化合物。式(I)化合物也可通過與適當(dāng)?shù)幕酋；噭缁酋Ｂ壤鐣跬榛酋Ｂ确磻?yīng)而從式(XVII)化合物制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>顯示式(XVII)的化合物轉(zhuǎn)化成式(I)的磺酰基衍生物的說明性反應(yīng)順序列于流程3中。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>(XVII)流程3如流程3所示，其中議3為具有磺?；鶊F(tuán)-802114的哌啶環(huán)的式(1)化合物(即式(XIX)的化合物)可通過將式(XVII)的化合物與磺酰氯R4S02C1(例如曱烷磺酰氯)在干擾性堿例如二異丙基乙胺的存在下進(jìn)行反應(yīng)來制備。反應(yīng)通常在室溫下于非水性非質(zhì)子溶劑例如二惡烷和二氯甲烷中進(jìn)行。式I^S02C1的磺酰氯可從商業(yè)來源獲得，或可通過多種方法制得。例如，烷基磺酰氯可通過如下方法制得將卣代垸與亞硫酸鈉反應(yīng)并在水性有機(jī)溶劑例如水/二惡烷中加熱以形成相應(yīng)的磺酸，接著在DMF存在下用亞>5克酰氯處理以產(chǎn)生磺酰氯。在一個可選的制備方法中，硫醇R4SH/R4aSH可與硝酸鉀和硫酰氯反應(yīng)以產(chǎn)生所需的磺酰氯。在許多上述反應(yīng)中，可能需要保護(hù)一個或多個基團(tuán)以防止在分子的不希望的位置上發(fā)生反應(yīng)。保護(hù)基團(tuán)的例子，以及保護(hù)和去保護(hù)官能團(tuán)的方法，可見于/Vo,"rive/w^S)7i說es/s(T.GreenandP.Wuts;3rdEdition;JohnWileyandSons,1999)。例如，胺基團(tuán)可被保護(hù)成例如酰胺(-NRCO-R)或氨基甲酸乙酯(-NRCO-OR),例如，被保護(hù)成甲基酰胺(NHCO-CH3);苯甲氧基酰胺(-NHCO-OCH2C6H5、-NH-Cbz);被保護(hù)成叔丁氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)3、-NH-Boc);2-聯(lián)苯-2-丙氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)2C6H4C6H5、-NH-Bpoc),被保護(hù)成9-芴基甲氧基酰胺(-NH-Fmoc)，被保護(hù)成6-硝基藜蘆氧基酰胺(-NH-Nvoc)，被保護(hù)成2-三甲基硅烷基乙氧基酰胺(-NH-Teoc),被保護(hù)成2，2，2-三氯乙氧基酰胺(-NH-Troc)，被保護(hù)成烯丙氧基酰胺(-NH-Alloc)，或被保護(hù)成2(-苯基磺酰基)乙氧基酰胺(-NH-Psec)。胺(例如環(huán)胺和雜環(huán)的N-H基團(tuán))的其它保護(hù)基例如對-甲氧基苯甲基(PMB)基團(tuán)。羧酸基團(tuán)可被保護(hù)成酯，例如，被保護(hù)成d.7烷基酯(例如，甲酯；^又丁酯)；d_7卣代烷基酯(例如，Cw三卣代烷基酯)；三Cw烷基硅烷基-d々烷基酯；或C5—2o芳基-C,.7烷基酯(例如，苯甲酯；硝基苯甲酯)；或被保護(hù)成酰胺，例如，甲基酰胺。硫醇基團(tuán)可被保護(hù)成例如硫醚(-SR)，例如，保護(hù)成苯甲基硫醚；乙酰氨基甲基醚(S-CH2NHC(=0)CH3)。上述方法和實(shí)施例中所使用的新化學(xué)中間體(例如式(XIII)、(XIV)、(XV)和(XVI)的新化合物)代表了本發(fā)明的另一個方面。純化的方法化合物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的許多方法進(jìn)行分離和純化，這些方法的例子包括色譜技術(shù)例如柱色鐠法(例如快速色鐠法)和HPLC。制備型LC-MS是一種用于純化有機(jī)小分子例如本文所述化合物的標(biāo)準(zhǔn)且有效的方法?？梢愿淖円合嗌Z(LC)和質(zhì)i瞽(MS)的方法，以使粗品更好地分離和提高M(jìn)S對樣品的檢測。制備型梯度LC方法的優(yōu)化包括改變柱子、揮發(fā)性洗脫劑和改性劑以及梯度。最優(yōu)化制備型LC-MS的方法、然后將其用于純化化合物的方法在本領(lǐng)域中是^^知的。這類方法描述于RosentreterU，HuberU.;OptimalfractioncollectinginpreparativeLC/MS;JCombChem.;2004;6(2)，159-64和LeisterW，StraussK，WisnoskiD，ZhaoZ,LindsleyC.，Developmentofacustomhigh-throughputpreparativeliquidchromatography/massspectrometerplatformforthepreparativepurificationandanalyticalanalysisofcompoundlibraries;JCombChem.;2003;5(3);322-9中。一個經(jīng)由制備型LC-MS來純化化合物的這類系統(tǒng)描述于下列實(shí)驗(yàn)部分，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可以使用與所述的系統(tǒng)和方法不同的其它系統(tǒng)和方法。具體而言，可利用基于正相制備型LC的方法代替此處所述的反相方法。大部分制備型LC-MS系統(tǒng)利用反相LC和揮發(fā)性的酸性改性劑，因?yàn)樵摲椒▽τ谛》肿拥募兓浅Ｓ行蚁疵搫┡c陽離子電噴霧質(zhì)譜分析法相容。也可采用其它色譜方案，例如上述分析方法中概述的正相LC、交替緩沖流動相、堿性改性劑等來純化這些化合物。藥物制劑雖然活性化合物可以單獨(dú)施用，但是優(yōu)選其以藥物組合物(例如制劑)的形式被給予，所述組合物包含至少一種本發(fā)明的活性化合物與一種或多種可藥用的載體、輔劑、賦形劑、稀釋劑、填充劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、潤滑劑或本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其它物質(zhì)，并任選地包含其它治療或預(yù)防性物質(zhì)；例如減少或減輕一些與化療有關(guān)的副作用的物質(zhì)。這類物質(zhì)的具體例子包括止吐劑和預(yù)防或減少與化療相關(guān)的中性白細(xì)胞減少的持續(xù)期和預(yù)防起因于紅細(xì)胞或白細(xì)胞水平降低的并發(fā)癥的物質(zhì)，例如紅細(xì)胞生成素(EPO)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)。因此，本發(fā)明還提供了如上所定義的藥物組合物和制備藥物組合物的方法，其包括將至少一種如上所定義的活性化合物與本文所述的一種或多種可藥用的載體、賦形劑、緩沖劑、輔劑、穩(wěn)定劑或其它物質(zhì)相混合。本文所用的術(shù)語"可藥用的"涉及在合理醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適合用于與個體(例如人)的組織接觸而不產(chǎn)生過度的毒性、刺激、變態(tài)反應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥、具有合理的益處/風(fēng)險(xiǎn)比的化合物、物質(zhì)、組合物和/或劑型。每種載體、賦形劑等還必須在與制劑中的其它成分相容的意義上是"可接受的"。因此，在另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物形式的本文所定義的式(I)化合物和其亞組。藥物組合物可以是任何適于口服、胃腸外、局部、鼻內(nèi)、眼、耳和直腸、陰道內(nèi)或透皮施用的形式。在組合物用于胃腸外施用的情況下，它們可被配制用于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下施用或通過注射、輸注或其它遞送手段直接遞送至靶器官或組織。遞送可通過快速濃注、短期輸注或長期輸注來實(shí)現(xiàn)，且可經(jīng)由被動遞送或通過利用合適的輸注泵來實(shí)現(xiàn)。適合于胃腸外施用的藥物制劑包括水性和非水性無菌注射液，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑、共溶劑、有機(jī)溶劑混合物、環(huán)糊精*劑、乳化劑(用于形成和穩(wěn)定乳劑)、用于形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)體成分、用于形成聚合凝膠的可凝膠化聚合物、冷凍干燥保護(hù)劑和尤其是用于穩(wěn)定可溶形式的活性成分并使制劑與預(yù)期接受者的血液等張的物質(zhì)組合。用于胃腸外施用的藥物制劑也可采用水性和非水性無菌混懸液的形式，其可包括助懸劑和增稠劑(R.G.Strickly，SolubilizingExcipientsinoralandinjectableformulations.PharmaceuticalResearch,21巻(2)2004，第201-230頁)。如果藥物的pKa與制劑的pH值差距足夠大，則可通過調(diào)整pH使可電離的藥物分子溶解達(dá)到所需濃度。對于靜脈內(nèi)和肌內(nèi)施用，可接受的范圍為pH2-12，但是皮下施用可接受的范圍為pH2.7-9.0。溶液pH通過藥物的鹽形式、強(qiáng)酸/堿如鹽酸或氫氧化鈉或通過包括但不限于由甘氨酸、檸檬酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、組氨酸、磷酸鹽、三(羥甲基)氨基甲烷(TRIS)或碳酸鹽形成的緩沖溶液來控制。在注射制劑中常使用水性溶液和水溶性有機(jī)溶劑/表面活性劑(即共溶劑)的組合。用在注射制劑中的水溶性有機(jī)溶劑和表面活性劑包括但不限于丙二醇、乙醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、甘油、二甲基乙酰胺(DMA)、N-曱基-2-吡咯烷酮(NMP;Pharmasolve)、二甲亞砜(DMSO)、SolutolHS15、CremophorEL、CremophorRH60和聚山梨酯80。這類制劑通常可(但不總是)在注射之前被稀釋。用在可商購獲得的注射制劑中的丙二醇、PEG300、乙醇、CremophorEL、CremophorRH60和聚山梨酯80是完全可與水混溶的有機(jī)溶劑和表面活性劑且可以彼此組合使用。所得有機(jī)制劑通常在靜脈內(nèi)濃注或靜脈內(nèi)輸注前稀釋至少2倍?；蛘?，可通過與環(huán)糊精絡(luò)合而達(dá)到增加的水溶性。脂質(zhì)體是由外層的脂類雙層膜和內(nèi)層的水性核心組成的且具有<100微米的總直徑的封閉球形小泡。根據(jù)疏水性程度，如果藥物被封入或嵌入脂質(zhì)體內(nèi)，適度疏水性的藥物可被脂質(zhì)體溶解。如果藥物分子變成脂類雙層膜的一部分，疏水性藥物也可凈皮脂質(zhì)體溶解，且在此情況下，疏水性藥物被溶解在脂類雙層的脂類部分中。通常的脂質(zhì)體制劑含有水及-5-20mg/ml的磷脂、等張劑(isotonicifier)、pH5-8緩沖液，并任逸地含有膽固醇。制劑可以存在于單位劑量或多劑量容器例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以儲存于冷凍干燥(凍干)條件下，只需在^f吏用前即刻加入無菌液體栽體例如注射用水。藥物制劑可通過冷凍干燥式(I)化合物或其酸加成鹽來制備。冷凍干燥指的是冷凍干燥組合物的操作方法。因此，凍千和冷凍干燥在本文中用作同義詞。通常的方法是將化合物溶解并將所得制劑澄清、無菌過濾并在無菌條件下轉(zhuǎn)入適于冷凍干燥的容器(例如小瓶)中。在小瓶的情況下，它們被用凍干塞部分地塞住?？蓪⒅苿├鋮s到冰凍并在標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行冷凍干燥，然后密封加蓋以形成穩(wěn)定的干燥的親液制劑。組合物通常具有〗氐的殘余水含量，例如基于親液物的重量，小于5重量％例如小于1重量％的殘余水含量。冷凍干燥制劑可含有其它賦形劑，例如增稠劑、^:劑、緩沖劑、抗氧化劑、防腐劑和張力調(diào)節(jié)劑。通常的緩沖劑包括磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽和甘氨酸。抗氧化劑的例子包括抗壞血酸、亞石克酸氫鈉、偏亞石克酸鈉、硫代甘油、硫脲、丁基化羥基曱苯、丁基化羥基苯甲醚和乙二胺四乙酸鹽。防腐劑可包括苯曱酸和其鹽、山梨酸和其鹽、對-羥基苯甲酸的烷基酯、苯酚、氯丁醇、芐醇、硫柳汞、苯扎氯銨和氯化十六烷基吡啶。如果必要，前述緩沖劑以及葡萄糖和氯化鈉可用于張力調(diào)節(jié)。增量劑一般用于冷凍千燥技術(shù)中以幫助加工和/或提供冷凍干燥塊的體積和/或機(jī)械完整性。增量劑意指易溶于水的固體顆粒狀的稀釋劑，當(dāng)與化合物或其鹽一起冷凍千燥時，其提供物理上穩(wěn)定的冷凍干燥塊、更優(yōu)的冷凍干燥方法和迅速且完全的重構(gòu)。增量劑也可用于使溶液等張。水溶性增量劑可以是任何一種通常用于冷凍干燥的可藥用的惰性固體物質(zhì)。這類增量劑包括例如糖如葡萄糖、麥芽糖、蔗糖和乳糖；多元醇如山梨醇或甘露醇；氨基酸如甘氨酸；聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；和多醣如葡聚糖。增量劑的重量與活性化合物的重量比通常為約1至約5，例如約1至約3，例如約1至2?；蛘?，它們可以以可被濃縮且密封于合適小瓶中的溶液形式被提供。劑型的滅菌可通過過濾或通過小瓶和其內(nèi)容物在配制過程的適當(dāng)階段的高壓滅菌來實(shí)現(xiàn)。所提供的制劑可能在遞送前需要進(jìn)一步稀釋或制備，例如稀釋成合適的無菌輸注包。臨時配制型注射溶液和混懸液可從無菌的粉末、顆粒和片劑制備。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物是適于靜脈內(nèi)施用例如通過注射或輸注靜脈內(nèi)施用的形式。用于胃腸外注射的本發(fā)明的藥物組合物也可包含可藥用的無菌水性或非水性溶液、分散液、混懸液或乳液以及在使用前即刻重構(gòu)為無菌注射液或分散液的無菌粉末。合適的水性和非水性載體、稀釋劑、溶劑或介質(zhì)的例子包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、羧甲基纖維素和它們的適當(dāng)混合物、植物油(如橄攬油)和注射用有機(jī)酯如油酸乙酯?？梢岳缤ㄟ^使用包衣物質(zhì)如卵磷脂、在分散的情況中通過維持所需的顆粒大小和通過^f吏用表面活性劑來維持適當(dāng)?shù)牧鲃有?。本發(fā)明的組合物也可含有輔劑如防腐劑、濕潤劑、乳化劑和分散劑。微生物作用的預(yù)防可通過包含各種抗細(xì)菌和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等來保證。也可能需要包括等張劑如糖、氯化鈉等?？勺⑸涞乃幬镄问降难娱L吸收可通過包含延遲吸收的物質(zhì)如單硬脂酸鋁和明膠來實(shí)現(xiàn)。如果化合物在水性溶媒中不穩(wěn)定或在水性溶媒中具有低溶解度，可將其配制成在有機(jī)溶劑中的濃縮物。然后將濃縮物在水性系統(tǒng)中稀釋至較低濃度，且可在給藥過程中短時間內(nèi)足夠穩(wěn)定。因此，在另一方面，提供了一種藥物組合物，其包含完全由一種或多種有機(jī)溶劑組成的非水性溶液，其可以以該形式進(jìn)行給藥或者更通常地在施用前用合適的靜脈內(nèi)賦形劑(鹽水、葡萄糖；緩沖的或未緩沖的)進(jìn)行稀釋(Solubilizingexcipientsinoralandinjectableformulations,PharmaceuticalResearch,21(2)，2004,第201-230頁)。溶劑和表面活性劑的例子有丙二醇、PEG300、PEG400、乙醇、二甲基乙酰胺(DMA)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP、Pharmasolve)、甘油、CremophorEL、CremophorRH60和聚山梨酯。具體的非水性溶液由70-80%丙二醇和20-30%乙醇組成。一個具體的非水性溶液由70%丙二醇和30%乙醇組成。另一個是80%丙二醇和20%乙醇。通常這些'溶劑組合使用且通常在靜脈內(nèi)快速濃注或靜脈內(nèi)輸注前稀釋至少2倍。靜脈內(nèi)快速濃注制劑的通常的量為~50%甘油、丙二醇、PEG300、PEG400和20。/。乙醇。靜脈內(nèi)輸注制劑的通常的量為~15%甘油、3%DMA和~10%丙二醇、PEG300、PEG400和乙醇。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物是適于靜脈內(nèi)施用例如通過注射或輸注靜脈內(nèi)施用的形式。對于靜脈內(nèi)施用，可以將溶液以其本身的形式給藥或者可以在施用前注入輸注袋內(nèi)(含有可藥用的賦形劑，如0.9%鹽水或5%葡萄糖)。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物是適于皮下(s.c.)施用的形式。適合于口服施用的藥物劑型包括片劑、膠嚢、小膠嚢、丸劑、錠劑、糖漿劑、溶液劑、散劑、顆粒劑、酏劑和混懸劑、舌下片、糯米紙嚢劑或貼劑和口腔貼劑。含有式(I)化合物的藥物組合物可根據(jù)已知技術(shù)配制，例如參見Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCompany,Easton,PA，USA。因此，片劑組合物可含有單位劑量的活性化合物以及惰性稀釋劑或載體如糖或糖醇，例如乳糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇；和/或非糖衍生的稀釋劑如碳酸鈉、磷酸鈣、碳酸釣或纖維素或其衍生物如曱基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素和淀粉如玉米淀粉。片劑也可含有這類標(biāo)準(zhǔn)成分如粘合劑和制粒劑如聚乙烯吡咯烷酮、崩解劑(例如可膨脹的交聯(lián)聚合物如交聯(lián)羧甲基纖維素)、潤滑劑(例如硬脂酸鹽)、防腐劑(例如對羥基苯曱酸酯)、抗氧化劑(例如BHT)、緩沖劑(例如磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖劑)和泡騰劑如檸檬酸鹽/碳酸氫鹽混合物。這類賦形劑是已知的，無需在此詳細(xì)討論。膠嚢劑可以是各種硬明膠或軟明膠形式且可含有固體、半固體或液體形式的活性組分。明膠膠嚢可由動物明膠或其合成的或植物^f生的等價(jià)物形成。固體劑型(例如片劑、膠嚢劑等)可以被包衣或不包衣，但通常具有包衣，例如保護(hù)性薄膜包衣(例如蠟或漆膜)或控制釋放的包衣。包衣(例如Endragit型聚合物)可被設(shè)計(jì)用于在胃腸道內(nèi)的所需位置釋放活性組分。因此，可對包衣進(jìn)行選擇以便在胃腸道內(nèi)某pH條件下降解，從而選擇性地在胃中或在回腸或十二指腸中釋放化合物。代替包衣或除了包衣之外，藥物可存在于固體基質(zhì)中，該固體基質(zhì)包含控制釋放的物質(zhì)，例如適合在胃腸道內(nèi)于不同的酸性或堿性條件下選擇性地釋放化合物的延遲釋放的物質(zhì)。或者，基質(zhì)材料或阻滯釋放的包衣可以采用溶蝕性聚合物(例如馬來酸酐聚合物)的形式，當(dāng)劑型通過胃腸道時其基本上被連續(xù)被溶蝕。作為另一種替代選擇，可以將活性化合物配制在滲透控制化合物釋放的遞送系統(tǒng)中。滲透釋放和其它延遲釋放或持續(xù)釋放制劑可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備。藥物組合物包含約1%到約95%、優(yōu)選約20%到約90%的活性成分。本發(fā)明的藥物組合物可以是例如單位劑量形式，如安瓿、小瓶、栓劑、糖衣九、片劑或膠嚢劑的形式。用于口服施用的藥物組合物可通過將活性成分與固體載體混合而獲得，如果需要將所得混合物制粒，并且如果需要或必需，在加入適當(dāng)賦形劑后將混合物加工成片劑、糖衣丸芯或膠嚢劑。也可能將其合并于允許活性成分以計(jì)量量擴(kuò)散或釋放的塑料載體中。也可將本發(fā)明的化合物配制成固體分散體。固體分散體是兩種或兩種以上固體的均勻的極細(xì)的分散相。固體溶液(分子性分散系統(tǒng))-一種固體^Ht體類型_公知可用在制藥技術(shù)中(參見(Chiou和Rkgelman，J.Pharm.Sci.，60，1281-1300(1971))，并且可用于增加溶解速度和增加水溶性差的藥物的生物利用度。藥物的固體*體一般通過熔融法或溶劑蒸發(fā)法制備。對于熔融法，加熱性質(zhì)通常為半固體和蠟狀的物質(zhì)(賦形劑)以使藥物熔化和溶解，接著通過冷卻到極低溫度來硬化。然后粉碎固體*體，過篩，與賦形劑混合，封入硬明膠膠嚢內(nèi)或壓成片劑?；蛘?，使用具有表面活性的和自乳化的載體使得固體分散體以熔化物的形式直接封入硬明膠膠嚢內(nèi)。當(dāng)熔化物冷卻到室溫時，在膠嚢內(nèi)形成固體填充物。固體溶液也可通過將藥物和所需的賦形劑溶解在水性溶液或可藥用的有機(jī)溶劑中、然后使用可藥用方法如噴霧干燥除去溶劑而制得。如果需要，可調(diào)整所得固體的顆粒大小，任選地與賦形劑混合并制成片劑或填充入膠嚢中。制備這類固體分散體或固體溶液的一種特別適合的聚合物輔料為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含基本上是無定形的固體溶液，所述固體溶液包含(a)—種式(I)化合物，例如實(shí)施例l的化合物；和(b)選自下組的聚合物聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(交聚維酮)、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚氧化乙烯、明膠、交聯(lián)聚丙烯酸(卡波姆)、羧甲基纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素(交聯(lián)羧曱纖維素)、甲基纖維素、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸酯共聚物和水溶性鹽如甲基丙烯酸和甲基丙烯酸酯共聚物的鈉和銨鹽、醋酞纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯和海藻酸丙二醇酯；其中所述化合物與所述聚合物的比為約1:1到約1:6，例如1:3，其由氯仿或二氯甲烷之一和曱醇或乙醇之一的混合物、優(yōu)選1:1比例的二氯曱烷/乙醇的混合物噴霧干燥而得。本發(fā)明還提供了包含上述固體溶液的固體劑型。固體劑型包括片劑、膠嚢劑和咀嚼片。已知的賦形劑可與固體溶液混合以提供所需的劑型。例如，膠嚢劑可含有與(a)崩解劑和潤滑劑或(b)崩解劑、潤滑劑和表面活性劑混合的固體溶液。片劑可含有與至少一種崩解劑、潤滑劑、表面活性劑和助流劑混合的固體溶液。咀嚼片可含有與增量劑、潤滑劑和如果需要另外的甜味劑(如人工甜味劑)和合適的矯味劑混合的固體溶液。藥物制劑可以以"患者包"的形式呈遞給患者，其含有在單一包裝(通常為泡罩包裝)中的整個療程。與其中藥劑師從大批量供應(yīng)中分出患者的藥物供應(yīng)的傳統(tǒng)處方相比，患者包具有優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)榛颊呖偰苁褂冒诨颊甙械乃幤氛f明書，而在患者處方中通常沒有該說明書。已經(jīng)證明藥品說明書可改善患者對醫(yī)師指示的依從性。用于局部使用的組合物包括軟膏劑、乳骨劑、噴霧劑、貼劑、凝膠劑、液體滴劑和植入劑(insert)(例如眼內(nèi)植入劑)。這類組合物可依照已知方法配制。用于胃腸外施用的組合物通常以無菌水性或油性溶液或細(xì)?；鞈乙旱男问教峁蛘呖梢砸匝屑?xì)的無菌粉末形式提供以臨時用無菌注射用水進(jìn)行重構(gòu)。用于直腸或陰道內(nèi)施用的制劑的例子包括陰道栓和栓劑，其可以例如由含有活性化合物的成形的可塑性或蠟狀物質(zhì)形成。劑的形式，且可以使用粉末吸入裝置或氣霧劑給藥裝置以標(biāo)準(zhǔn)形式施用。這類裝置是公知的。為了通過吸入施用，粉末制劑通常包含活性化合物以及惰性固體粉末狀稀釋劑如乳糖。式(I)化合物一般以單位劑量形式提供，這樣以來，其通常含有足夠的化合物以提供所需水平的生物學(xué)活性。例如，制劑可含有l(wèi)ng到2g的活性成分，例如lng到2mg的活性成分。在此范圍內(nèi)，具體的化合物亞范圍是O.lmg到2g的活性成分(更通常是10mg到lg，例如50mg到500mg),或lpg到20mg(例如lpg到10mg，例如O.lmg到2mg的活性成分)。對于口服組合物，單位劑量形式可含有l(wèi)mg到2g、更通常10mg到lg、例如50mg到lg、例如100mg到lg的活性化合物?；钚曰衔飳⒁宰銐蜻_(dá)到所需治療效果的有效量施用于需要其的患者(例如人或動物患者)。治療方法預(yù)計(jì)本文所定義的式(I)化合物和其亞組可用于預(yù)防或治療由細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶和糖原合成酶激酶-3介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥，這類疾病狀態(tài)或病癥的例子如上所述。通常對需要給藥的患者給予該化合物，例如人或動物病患，優(yōu)選人。通常以治療或預(yù)防有效的且一般無毒的量施用化合物。然而，在某些情況(例如在威脅生命的疾病的情況)中，施用式(I)化合物的益處可能比任何毒性效應(yīng)或副作用的缺點(diǎn)更重要，在該情況中，可以認(rèn)為需要施用與一定程度的毒性有關(guān)的量的化合物?？砷L期施用化合物以維持有益的治療效果或者可僅短期施用?；蛘呖梢砸悦}沖方式或連續(xù)方式施用化合物。式(I)化合物的通常的日劑量可以為每千克體重100皮克到100毫克，更通常是每千克體重5納克到25毫克，更通常是每千克體重10納克到15毫克(例如10納克到10毫克，更通常是每千克1孩吏克到每千克20毫克，例如每千克l微克到IO毫克)，但是如需要，也可以施用更高或更低的劑量。式(I)化合物可在每日基礎(chǔ)或在重復(fù)基礎(chǔ)上進(jìn)行施用，例如每2或3或4或5或6或7或10或14或21或28天施用一次。本發(fā)明的化合物可在劑量范圍內(nèi)口服施用，例如以l-1500mg、2-800mg或5-500mg、例如2-200mg或10-1000mg的劑量口服施用，劑量的具體例子包括10、20、50和80mg。化合物可每天施用一次或一次以上?；衔锟蛇B續(xù)施用(即在治療方案期間每天施用沒有中斷)?；蛘?，化合物可間斷施用(即在整個治療方案期間，在給定的一段時間如一周中連續(xù)施用，然后中斷一段時間如一周，然后再連續(xù)施用一段時間如一周等)。涉及間斷施用的治療方案的例子包括其中循環(huán)性地施用一周，中斷一周；或施用兩周，中斷一周；或施用三周，中斷一周；或施用兩周，中斷兩周；或施用四周，中斷兩周；或施用一周，中斷三周，例如進(jìn)行一個或多個該循環(huán)、例如2、3、4、5、6、7、8、9或10或更多個該循環(huán)的方案。對于60千克的人而言，劑量的例子包括以4.5-10.8mg/60kg/天(等于75-180)ig/kg/天)的起始劑量、隨后以44-97mg/60kg/天(等于0.7-1.6mg/kg/天)的有效劑量或72-274mg/60kg/天(等于1.2-4.6mg/kg/天)的有效劑量施用本文所定義的式(I)化合物，但是，如果需要，可以施用更高或更低的劑量。對于任何給定的體重，按比例換算mg/kg劑量。在一個具體的給藥計(jì)劃表中，患者將被每天給予一小時式(I)化合物的輸液，給藥長達(dá)10天，特別是長達(dá)一周5天，且以所需時間間隔如兩到四周、特別是每三周一次進(jìn)行重復(fù)治療。更具體地，患者可被每天給予一小時式(I)化合物的輸液達(dá)5天，且每三周一次進(jìn)行重復(fù)治療。在另一個具體的給藥計(jì)劃表中，患者被給予30分鐘到1小時的輸液，然后給予可變時期例如l-5小時例如3小時的維持輸注。在另一個具體的給藥計(jì)劃表中，患者被給予12小時到5天的連續(xù)輸注，特別是24小時到72小時的連續(xù)輸注。最后，所施用化合物的量和所用組合物的類型應(yīng)當(dāng)與疾病的性質(zhì)或待治療的生理情況相稱，且應(yīng)由醫(yī)師來決定。本文所定義的式(I)化合物和其亞組可作為單一治療劑纟皮施用，或者它們可與另外的其它用于治療特定疾病狀態(tài)例如腫瘤性疾病如上文所定義的癌癥的化合物之——起以組合治療方式施用。其它可與本發(fā)明的化合物一起(無論是同時還是以不同的時間間隔)施用或使用的治療劑或療法的例子包括但不限制于拓樸異構(gòu)酶抑制劑、烷化劑、抗代謝物、DNA結(jié)合劑、微管抑制劑(;敝管蛋白靶向劑)、單克隆抗體和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑，具體的例子有順鉑、環(huán)磷酰胺、阿霉素、伊立替康、氟達(dá)拉濱、5FU、紫杉烷類、絲裂霉素C和放射療法。對于與其它治療組合的CDK抑制劑的情況，可以以各自不同的劑量計(jì)劃并經(jīng)由不同的途徑給予兩種或兩種以上療法。在式(I)化合物與一、二、三、四或更多種(優(yōu)選一或二種，更優(yōu)選一種)其它治療劑組合施用的情況下，化合物可同時或相繼施用。當(dāng)相繼施用時，它們可以以近距離的時間間隔(例如歷經(jīng)5-10分鐘的時間)或以更長的時間間隔(例如間隔l、2、3、4或更多小時，或者如果需要間隔更長時間)施用，精確的劑量方案與治療劑的性質(zhì)相稱。對于與其它治療組合的CDK抑制劑的情況，可以以各自不同的劑量計(jì)劃并經(jīng)由不同的途徑給予兩種或兩種以上療法。在式(I)化合物與一、二、三、四或更多種(優(yōu)選一或二種，更優(yōu)選一種)其它治療劑組合施用的情況下，化合物可同時或相繼施用。當(dāng)相繼施用時，它們可以以形巨離的時間間隔(例如歷經(jīng)5-10分鐘的時間)或以更長的時間間隔(例如間隔l、2、3、4或更多小時，或者如果需要間隔更長時間)施用，精確的劑量方案與治療劑的性質(zhì)相稱。本發(fā)明的化合物也可與非化療療法如放射療法、光動力療法、基因療法；手術(shù)和控制飲食一起施用。對于與另一種化療劑的組合治療，可將式(I)化合物和一、二、三、四或更多其它治療劑例如一起配制成含有一、二、三、四或更多種治療劑的劑型。在一個供選擇的方案中，各治療劑可被分開配制并且以藥盒的形式一起提供，所述藥盒任選地具有它們的使用說明書。本領(lǐng)域技術(shù)人員通過他或她的普通常識可了解所用的給藥方案和組合治療。診斷方法在施用式(I)化合物之前，篩選患者以確定該患者正在患有或可能罹患的疾病狀態(tài)或病癥是否對采用抗細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶活性的化合物所進(jìn)行的治療敏感。例如，可分析取自患者的生物樣本以確定該患者正在患有或可能罹患的病癥或疾病如癌癥是否是以導(dǎo)致CDK過度活化或?qū)е抡DK活性通路增敏的基因異?；虻鞍踪|(zhì)表達(dá)異常為特征的疾病或病癥。導(dǎo)致CDK2信號的活化或增敏的這類異常的例子包括細(xì)胞周期蛋白E的上調(diào)(HarwellRM，MullBB，PorterDC，KeyomarsiK.;JBiolChem.2004年3月26日；279(13):12695-705)或p21或p27缺失，或存在CDC4變體(RajagopalanH，JallepalliPV，RagoC，VelculescuVE，KinzlerKW,VogelsteinB，LengauerC.;Nature.2004年3月4日；428(6978):77-81)。具有CDC4突變或細(xì)胞周期蛋白E的上調(diào)特別是過表達(dá)或者p21或p27缺失的腫瘤對CDK抑制劑特別敏感。術(shù)語"上調(diào)"包括表達(dá)升高或過表達(dá)，包括基因擴(kuò)增(即多個基因拷貝)和轉(zhuǎn)錄效應(yīng)以及高活性和活化(包括突變導(dǎo)致的活化)導(dǎo)致的表達(dá)增加。因此，可對患者進(jìn)行診斷測試以檢測細(xì)胞周期蛋白E上調(diào)或者p21或p27缺失或者存在CDC4變體的標(biāo)記性特點(diǎn)。術(shù)語"診斷"包括篩選。我們用"標(biāo)記"一詞包括基因標(biāo)記，包括例如測定DNA組成以鑒定CDC4的突變。術(shù)語"標(biāo)記"還包括體現(xiàn)細(xì)胞周期蛋白E上調(diào)特點(diǎn)的標(biāo)記，包括酶活性、酶水平、酶狀態(tài)(例如是否磷酸化)和前述蛋白質(zhì)的mRNA水平。具有細(xì)胞周期蛋白E上調(diào)或p21或p27缺失的腫瘤可能對CDK抑制劑特別敏感。可在治療之前優(yōu)先對胂瘤針對細(xì)胞周期蛋白E的上調(diào)或者p21或p27的缺失進(jìn)行篩選。因此，可對患者進(jìn)行診斷性測試以檢測細(xì)胞周期蛋白E上調(diào)或p21或p27缺失的標(biāo)記性特點(diǎn)。診斷測試通常用選自腫瘤活檢樣品、血液樣品(脫落的腫瘤細(xì)胞的分離和富集)、糞便活檢、痰、染色體分析、胸膜液、腹膜液或尿的生物樣本上進(jìn)行。Rajagopalan等人已發(fā)現(xiàn)(Nature.2004年3月4日；428(6978):77-81)在人結(jié)腸直腸癌和子宮內(nèi)膜癌中CDC4(也稱為Fbw7或Archipelago)存在突變(Spruck等人，CancerRes.2002年8月15日；62(16):4535-9)。攜帶CDC4突變的個體的鑒定意味著該患者特別適于用CDK抑制劑進(jìn)行治療?？稍谥委熤皟?yōu)先針對CDC4變體的存在對肺瘤進(jìn)行篩選。篩選方法通常涉及直接測序、寡核苷酸^:陣列分析或突變體特異性抗體。鑒定和分析蛋白質(zhì)的突變和上調(diào)的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。篩選方法包括但不限制于標(biāo)準(zhǔn)方法如逆轉(zhuǎn)錄酶多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)或原位雜交。在使用RT-PCR進(jìn)行的篩選中，腫瘤中的mRNA水平是通過產(chǎn)生mRNA的cDNA拷貝繼而用PCR擴(kuò)增cDNA來評價(jià)的。PCR擴(kuò)增的方法、引物的選擇和擴(kuò)增條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。核酸操作和PCR才艮據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行,如例如Ausubd，F(xiàn).M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,2004，JohnWiley&SonsInc.,或Iimis，M.A.等人，PCRProtocols:aguidetomethodsandapplications,1990,AcademicPress,SanDiego中所述。涉及核酸技術(shù)的反應(yīng)和操作在Sambrook等人，2001，第3版，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress中也有描述?；蛘?，可使用RT-PCR的可商購獲得的試劑盒(例如RocheMolecularBiochemicals)，或美國專利No.4,666,828;4，683，202;4，801，531;5，192，659、5,272,057、5,882,864和6,218,529中所述的方法，將它們引入本文作為參考。評價(jià)mRNA表達(dá)的原位雜交技術(shù)的一個例子是焚光原位雜交(FISH)(參見Angerer，1987Meth.EnzymoL，152:649)。通常，原位雜交包含下列主要步驟(l)固定待分析的組織；(2)對樣品進(jìn)行預(yù)雜交處理以增加目標(biāo)核酸的可接近性和減少非特異性結(jié)合；(3)將核酸混合物與生物結(jié)構(gòu)或組織中的核酸雜交；(4)進(jìn)行雜交后洗滌以除去雜交中未結(jié)合的核酸片段，和(5)檢測雜交的核酸片段。在這類應(yīng)用中使用的探針通常是標(biāo)記的，例如用放射性同位素或熒光指示劑進(jìn)^f亍標(biāo)記。優(yōu)選的探針應(yīng)足夠長，例如，約50、100或200個核苷酸到約1000或更多個核苷酸，以使得能在嚴(yán)格條件下與目標(biāo)核酸進(jìn)行特異性雜交。進(jìn)行FISH的標(biāo)準(zhǔn)方法在Ausubel，F(xiàn).M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,2004，JohnWiley&SonsIneandFluorescenceInSituHybridization:TechnicalOverviewbyJohnM.S.BartlettinMolecularDiagnosisofCancer,MethodsandProtocols,第2版；ISBN:1-59259-760-2;2004年3月，第077-088頁；Series:MethodsinMolecularMedicine中有描述?；蛘撸赏ㄟ^紳瘤樣品的免疫組織化學(xué)、使用微量滴定板的固相免疫分析、蛋白質(zhì)印跡法、二維SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)和本領(lǐng)域用于檢測特異性蛋白質(zhì)的已知方法分析由mRNA表達(dá)的蛋白質(zhì)產(chǎn)物。檢測方法包括使用位點(diǎn)特異性抗體。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解所有這類已知的用于檢測細(xì)胞周期蛋白E的上調(diào)或p21或p27的缺失或CDC4變體的技術(shù)均可適用于本情況。因此，所有這些技術(shù)也可用于鑒定特別適合用本發(fā)明的化合物治療的腫瘤。具有CDC4突變或細(xì)胞周期蛋白E的上調(diào)、特別是過表達(dá)或p21或p27缺失的腫瘤可能對CDK抑制劑特別敏感。優(yōu)先在治療前針對細(xì)胞周期蛋白E的上調(diào)、特別是過表達(dá)(HarwellRM，MullBB,PorterDC，KeyomarsiK.;JBiolChem.2004年3月26日;279(13):12695-705)或p21或p27缺失或CDC4變體對腫瘤進(jìn)行篩選(RajagopalanH，JallepalliPV，RagoC，VelculescuVE，KinzlerKW，VogelsteinB，LengauerC.;Nature.2004年3月4曰;428(6978):77-81)?？捎帽疚母攀龅脑\斷測試選擇患有套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)的患者以用本發(fā)明的化合物進(jìn)行治療。MCL是非霍奇金淋巴瘤的一種特殊的臨床病理學(xué)實(shí)體，其特征在于具有CD5和CD20共表達(dá)的小到中等大小的淋巴細(xì)胞增殖、侵襲性的和不可治愈的臨床病程和頻繁的t(ll;14)(ql3;q32)易位。在套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)中發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞周期蛋白DlmRNA的過表達(dá)是一種重要的診斷標(biāo)記。Yatabe等人(Blood.2000年4月1日；95(7):2253-61)提議應(yīng)包括細(xì)胞周期蛋白Dl-陽性作為MCL的標(biāo)準(zhǔn)之一，并提議應(yīng)以該新標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)探究這種不能治愈的疾病的創(chuàng)新療法。Jones等人(JMolDiagn.2004年5月；6(2):84-9)開發(fā)了一種用于細(xì)胞周期蛋白D1(CCND1)表達(dá)的實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR分析以幫助診斷套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)。Howe等人(CIinChem.2004年1月；50(l):80-7)使用實(shí)時定量RT-PCR評估細(xì)胞周期蛋白DlmRNA的表達(dá)并且發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化至CD19mRNA的細(xì)胞周期蛋白DlmRNA的定量RT-PCR可用于在血液、骨髓和組織中診斷MCL?；蛘撸墒褂蒙衔母攀龅脑\斷測試選擇患有乳腺癌的患者以用CDK抑制劑進(jìn)行治療。腫瘤細(xì)胞通常過表達(dá)細(xì)胞周期蛋白E并且已顯示細(xì)胞周期蛋白E在乳腺癌中過表達(dá)(Harwell等人，CancerRes，2000，60，481-489)。因此，特別是乳腺癌可以用本文所提供的CDK抑制劑進(jìn)行治療?？拐婢猛驹诹硪环矫?，本發(fā)明提供了如本文所定義的式(I)化合物和其亞組作為抗真菌劑的用途。如本文中所定義的式(I)化合物和其亞組可用于動物醫(yī)學(xué)(例如用于哺乳動物例如人的治療)，或用于植物的處理(例如農(nóng)業(yè)和園藝)，或作為一般性的抗真菌劑，例如作為防腐劑和消毒劑。在一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療哺乳動物例如人的真菌感染的如本文中所定義的式(I)化合物和其亞組。還提供了如本文中所定義的式(I)化合物和其亞組在制造用于預(yù)防或治療哺乳動物例如人的真菌感染的藥品中的用途。例如，本發(fā)明的化合物可對患有或有感染危險(xiǎn)的由念珠菌屬(C"wAV/fl)、發(fā)褲菌屬(7V/c/^p/^to")、小孢子菌屬(iWcnwpo/7/附)或表皮癬菌屬(五/7/V/emi/o/7/^(m)等生物體引起的局部真菌感染，或由白色念珠菌(Orn力'^fl/Wc"附)引起的粘膜感染(例如鵝口瘡和陰道念珠菌病)的人類患者給藥。也可給予本發(fā)明的化合物來治療或預(yù)防由例如白色念珠菌、新型隱J求菌(OjptoCOCC附MW/。/7MflW5)、黃曲霉(/45/^/^///WSy7tfV附)、煙曲霉(/45/7Cgi7/"s/"iw/g"f"s)、球孢子菌屬(OcciVZ/oW^)、S'J球孑包子菌屬(Pflnic"oc"V//0/fifes)、纟且纟只月包漿菌屬(/fto//flS附")或芽生菌屬(B/"sto加j;ces)51起的全身性真菌感染。在另一方面，本發(fā)明提供了農(nóng)業(yè)(包括園藝)用途的抗真菌組合物，其包含如本文所定義的式(I)化合物和其亞組及農(nóng)業(yè)上可接受的稀釋劑或載體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種治療或處理患有真菌感染的動物(包括哺乳動物例如人)、植物或種子的方法，該方法包括用有效量的如本文所定義的式(I)化合物和其亞組處理所述動物、植物或種子或所述植物或種子所在的地點(diǎn)。本發(fā)明還提供了一種治療植物或種子真菌感染的方法，該方法包括用抗真菌有效量的包含本文所定義的式(I)化合物和其亞組的殺真菌組合物處理植物或種子?？墒褂貌町惡Y選分析來選擇對非人類CDK酶具有特異性的本發(fā)明化合物。特異性地作用于真核病原體的CDK酶的化合物可用作抗真菌或抗寄生蟲劑。念珠菌屬CDK激酶抑制劑CKSI可用于治療念珠菌病。抗真菌劑可用于對抗前面所定義的感染類型或常發(fā)生于虛弱和免疫抑制的患者例如患有白血病和淋巴瘤的患者、接受免疫抑制劑治療的人和患有素因性病癥例如糖尿病或AIDS的患者、以及非免疫抑制的患者中的機(jī)會感染。本領(lǐng)域所述的分析法可用于篩選可能用于抑制至少一種與真菌病例如念珠菌病、曲霉病、毛霉病、芽生菌病、地霉病、隱球菌病、著色芽生菌病、球孢子菌病、分生孢子菌病(conidiosporosis)、組織胞漿菌病、足分枝菌病、鼻孢子菌病、諾卡菌病、假放線菌病、青霉病、念珠菌病(monoliasis)或孢子絲菌病有關(guān)的真菌的藥物。所述差異篩選分析可用于鑒定在曲霉病的治療中可能具有治療價(jià)值的抗真菌劑，所述分析利用克隆于酵母例如煙曲霉(」5/^/^///"5/"附/g"似力、黃曲霉(/45/7e"g/,/附/7flVWS)、黑曲霉(/^5/^/^///"5"/ge尸)、構(gòu)巢曲霉(/ls/7cg/〃附mV/w/fl"s)或土曲霉(^5pw7/"5",e,mw)的CDK基因，或當(dāng)霉菌感染為毛霉病(muconnycosis)時，CDK分析可衍生自酵母例如無根根霉(及A&o/;"s"rr/^附)、米根霉(i/^，附oo^"e)、傘枝犁頭霉(J65iV//flcor戸6^m)、分枝隼頭霉(^4^siV//flrfl柳5")或微小毛霉(MMcor/;Mw7/"s)。其它CDK酶的來源包括病原體卡氏肺嚢蟲(iV^"w^"他舉例而言，化合物的抗真菌活性的體外評價(jià)可通過測定最小抑菌濃度(M.I.C.)來進(jìn)行，它是使特定微生物在合適的培養(yǎng)基中無法生長的待測化合物濃度。在實(shí)踐中，向一系列各自摻入特定濃度測試化合物的瓊脂平板接種例如白色念珠菌的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物，然后將每一平板在37'C下溫育適宜時間。然后檢查平板上是否有真菌的生長，記錄適宜的M.I.C.值?；蛘?，可在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行濁度分析，概述該分析方法的例子的方案可參見下面的實(shí)施例?；衔锏捏w內(nèi)評價(jià)可在一系列的劑量水平下通過向已經(jīng)接種真菌、例如白色念珠菌或黃曲霉菌林的小鼠皿內(nèi)或靜脈內(nèi)注射或者口服給藥來進(jìn)行?；衔锏幕钚钥赏ㄟ^監(jiān)測治療和未治療的小鼠組真菌感染的生長進(jìn)行評估(通過組織學(xué)或通過取得來自感染的真菌)?；钚钥筛鶕?jù)化合物提供50%防止感染致死效果的劑量水平(PDs())來測定。對于人類抗真菌用途而言，如本文所定義的式(I)化合物和其亞組可單獨(dú)地或與根據(jù)預(yù)期給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐所選擇的藥物載體混合給藥。因此，例如，可采用在上述"藥物制劑"一節(jié)中所述的制劑經(jīng)口服、胃腸外、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下給藥。就對人類患者口服和胃腸外給藥而言，本發(fā)明的抗真菌化合物的日劑量水平為0.01至10mg/kg(分開的劑量)，這取決于化合物經(jīng)口服或胃腸外途徑給藥時的效力。化合物的片劑或膠嚢劑可例如含有5mg至0.5g活性化合物，每次酌情給藥一片(粒)、兩片(粒)或多片(粒)。無論如何，醫(yī)師將確定最適合于個體患者的實(shí)際劑量(有效量)，其將因特定患者的年齡、體重和響應(yīng)而異?；蛘?，抗真菌化合物可以以栓劑或陰道栓的形式給藥，或者它們可以以洗劑、溶液、霜劑、軟膏劑或撒粉的形式局部施用。例如，它們可被摻入由聚乙二醇或液體石蠟的水性乳液組成的霜劑中；或者它們可被摻入由白蠟或白軟石蠟基質(zhì)以及根據(jù)需要加入的穩(wěn)定劑和防腐劑組成的軟膏劑中，濃度為1至10%。除上述治療用途之外，用該差異篩選分析法所開發(fā)的抗真菌劑還可用作食品中的防腐劑、促進(jìn)家畜重量增加的飼料添加劑，或用于處理非生命物質(zhì)的消毒制劑，例如用于消毒醫(yī)院設(shè)備和房間。以相似的方式，并列比等人，(1994)FEBSLett356:317-21)，將可以從本發(fā)明化合物中選擇出可區(qū)別人/哺乳動物和昆蟲的酶的抑制劑。因此，本發(fā)明明確地包括本發(fā)明化合物在殺蟲劑中的用途和制劑，例如用于昆蟲如果蠅的處理。在另一個實(shí)施方案中，可根據(jù)植物CDK相對于哺乳動物酶的抑制特異性選擇某些受試的CDK抑制劑。例如，將植物CDK布置在含有一種或多種人酶的差異篩選分析中，以選擇對植物酶抑制的選擇性最高的那些化合物。因此，本發(fā)明具體包括用于農(nóng)業(yè)應(yīng)用的本發(fā)明CDK抑制劑的制劑，例如落葉劑等形式。對于農(nóng)業(yè)和園藝目的而言，本發(fā)明化合物可配制成適合于特定用途和預(yù)期目的的組合物形式。因此，化合物可以以撒粉劑或顆粒劑、拌種劑、水溶液、M液或乳液、浸液、噴霧劑、氣溶膠或煙霧劑的形式施用。組物也可以以^:粉劑、顆粒劑或顆粒，或用前稀釋的濃縮液的形式提供。這些組合物可包含那些在農(nóng)業(yè)和園藝中已知和可接受的常規(guī)載體、稀釋劑或助劑，且它們可根據(jù)常規(guī)方法制造。該組合物也可摻入其它活性成分，例如，具有除草或殺蟲活性的化合物或另一種殺真菌劑?；衔锖徒M合物可以以多種方式施用，例如它們可直接地施用至植物葉片、莖、枝、種子或根，或可施用到土壤或其它成長介質(zhì)，且它們不僅可以根除疾病，而且可預(yù)防性地保護(hù)植物或種子不受攻擊。舉例而言，該組合物可包含0.01到1重量％的活性成分。對于田間使用，活性成分的可能施用率為50到5000克/公頃。真菌和處理植物生長的土壤、育秧稻田或灌溉用水的用途。本發(fā)明還包括生真菌感染的用途。實(shí)施例現(xiàn)在參照下列實(shí)施例中所述的具體實(shí)施方案非限制性地闡述本發(fā)明。在實(shí)施例中，使用下列縮寫。AcOH乙酸BOC叔丁氧基羰基CDIl，l-羰基二咪唑DMAW90溶劑混合物DCM:MeOH、AcOH、H2O(90:18:3:2)DMAW120溶劑混合物DCM:MeOH、AcOH、H2O(120:18:3:2)DMAW240溶劑混合物DCM:MeOH、AcOH、H2O(240:20:3:2)DCM二氯甲烷DMF二曱基曱酰胺DMSO二曱亞砜EDCl-乙基-3-(3，-二甲氨基丙基)-碳二亞胺Et3N三乙胺EtOAc乙酸乙酯Et20乙醚HOAt1-羥基氮雜苯并三唑HOBt1-羥基苯并三唑MeCN乙腈MeOH甲醇P.E.石油醚Si。2硅膠TBTUN，N，N，，N，-四曱基-O-(苯并三唑-l-基)脲四氟硼酸鹽THF四氫吹喃分析型LC-MS系統(tǒng)和方法說明在這些實(shí)施例中，所制備的化合物是通過使用下述系統(tǒng)和操作條件的液相色譜和質(zhì)譜法定性的。當(dāng)存在具有不同同位素的原子并且引用了單一質(zhì)量時，對化合物所引用的質(zhì)量為單同位素質(zhì)量(也就是"C1;"Br等等)。使用如下所述的多個系統(tǒng)，這些系統(tǒng)裝配有并且在非常相似的操作條件下進(jìn)行。所用的操作條件描述于下。WatersPlatformLC-MS系統(tǒng)HPLC系統(tǒng)Waters2795質(zhì)譜檢測器MicromassPlatformLCPDA檢測器Waters2996PDA分析的酸性條件洗脫液A:H20(0.1%甲酸)洗脫液B:CH3CN(0.1%甲酸)梯度5-95。/。洗脫液B，歷經(jīng)3.5分鐘流速0.8ml/分鐘柱子PhenomenexSynergi4nMAX-RP80A，2.0x50mm分析的長酸性條件洗脫液A:H20(0.1%曱酸)洗脫液B:CH3CN(0.1%甲酸)梯度05-95Q/。洗脫液B，歷經(jīng)15分鐘流速0.4ml/分鐘柱子PhenomenexSynergi4jiMAX曙RP80A，2.0x150mmPlatformMS條件毛細(xì)管電壓錐電壓來源溫度掃描范圍離子化模式3.6kV(在負(fù)ES時為3.40kV)25V120QC100-800amu正電噴霧或負(fù)電噴霧或正&負(fù)電噴霧WatersFractionlynxLC-MS系統(tǒng)HPLC系統(tǒng)2767自動進(jìn)樣器-2525二梯度泵質(zhì)^普檢測器WatersZQPDA檢測器Waters2996PDA分析的酸性條件洗脫液A:H20(0.1%甲酸)洗脫液B:CH3CN(0.1%甲酸)梯度5-95。/。洗脫液B，歷經(jīng)4分鐘流速2.0ml/分鐘柱子PhenomenexSynergi4jiMAX-RP80A，4.6x50mmFractioiilynxMS條件毛細(xì)管電壓3.SkV(在負(fù)ES時為3JkV)錐電壓25V(在負(fù)ES時為30V)來源溫度120°C掃描范圍100-800amu離子化模式正電噴霧或負(fù)電噴霧或正&負(fù)電噴霧質(zhì)量指示純化的LC-MS系統(tǒng)制備型LC-MS是一種用于純化有機(jī)小分子例如本文所述化合物的標(biāo)準(zhǔn)且有效的方法?？梢愿淖円合嗌Z(LC)和質(zhì)語(MS)的方法，以使粗品更好地分離和提高M(jìn)S對樣品的檢測。制備型梯度LC方法的優(yōu)化包括改變柱子、揮發(fā)性洗脫劑和改性劑以及梯度。優(yōu)化制備型LC-MS方法的方法為本領(lǐng)域公知，采用它來純化化合物。這類方法描述于RosentreterU，HuberU.;OptimalfractioncollectinginpreparativeLC/MS;JCombChem.;2004;6(2)，159-64和LeisterW，StraussK，WisnoskiD，ZhaoZ，LindsleyC.，Developmentofacustomhigh-throughputpreparativeliquidchromatography/massspectrometerplatformforthepreparativepurificationandanalyticalanalysisofcompoundlibraries;JCombChem.;2003;5(3);322-9中。一個經(jīng)由制備型LC-MS來純化化合物的這類系統(tǒng)如下所述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可以使用與所述的系統(tǒng)和方法不同的其它系統(tǒng)和方法。具體而言，可利用基于正相制備型LC的方法代替此處所述的反相方法。大部分制備型LC-MS系統(tǒng)利用反相LC和揮發(fā)性的酸性改性劑，因?yàn)樵摲椒▽τ谛》肿拥募兓浅Ｓ行蚁疵搫┡c陽離子電噴霧質(zhì)謙分析法相容。也可采用其它色譜方案，例如上迷分析方法中概述的正相LC、交替緩沖流動相、堿性改性劑等來純化這些化合物。制備型LC-MS系統(tǒng)WatersFractionlynx系統(tǒng).硬件2767雙回路自動進(jìn)樣器/級分收集器2525制備泵用于柱選擇的CFO(色鐠柱流體組織器(fluidicorganiser))RMA(Waters試劑管理器)，作為補(bǔ)充泵(makeuppump)WatersZQ質(zhì)譜儀Waters29%光敏二極管陣列檢測器WatersZQ質(zhì)i普儀.軟件.-Masslynx4.0.WatersMS操作條件毛細(xì)管電壓3.5kV(在負(fù)ES時為3.2kV)錐電壓25V來源溫度120。C放大器500V掃描范圍125-800amu離子化模式正電噴霧或負(fù)電噴霧Agilent1100LC-MS制備系統(tǒng).硬件自動進(jìn)樣器1100系列"prepALS"泵用于制備型液流梯度的1100系列"Pr印Pump"和用于向制備型液流中泵送改性劑的1100系列"QuatPump"UV檢測器1100系列"MWD，，多波長檢測器MS檢測器1100系列"LC-MSDVL"級分收集器2x"Pr印-FC，，補(bǔ)充泵"WatersRMA"Agilent主動式分接器.軟件Chemstation:Chem32.AgilentMS操作條件毛細(xì)管電壓4000V(在負(fù)ES時為3500V)裂解電壓/增益150/1干燥氣體流速13.0升/分鐘氣體溫度350°C霧化器壓力50psig掃描范圍125-800amu離子化模式正電噴霧或負(fù)電噴霧色譜條件.柱子1.低pH色i脊法PhenomenexSynergyMAX-RP,lOp,100x21.2mm(或者對于較大極性的化合物使用ThermoHypersil-KeystoneHyPurityAquastar,5|i,100x21.2ram)2.高pH色i脊法PhenomenexLunaCI8(2)，IOjli，100x21.2mm(或者使用PhenomenexGemini,5)a,100x21.2mm).洗脫液1.低pH色鐠法溶劑A:H20+0.1%甲酸，pH1.5溶劑B:CH3CN+0.1%甲酸2.高pH色i普法溶劑A:H20+10mMNH4HOH+NH4OH,pH=9.2溶劑B:CH3CN3.補(bǔ)充溶劑MeOH+0.2%甲酸(用于兩種色谞法類型).方法根據(jù)分析結(jié)果，選擇最合適的制備型色i普法類型。通常的慣例是使用最適合于化合物結(jié)構(gòu)的色譜法類型(低或高pH)來進(jìn)行分析型LC-MS。一旦分析結(jié)果證實(shí)為良好的色鐠法，選擇一種相同類型的合適的制備方法。低和高pH色i普方法的通常運(yùn)行條件為流速24ml/分鐘梯度通常，所有梯度均具有使用95。/。A+5。/。B的最初0.4分鐘的步驟。然后根據(jù)分析結(jié)果，選擇3.6分鐘梯度以便獲得良好的分離(例如用于早期保留化合物的從5%到50%B;用于中間保留化合物的從35%到80%B等等)。洗滌在梯度結(jié)束時進(jìn)行1.2分鐘的洗滌步驟再平衡進(jìn)行2.1分鐘的再平衡步驟以制備用于下一次運(yùn)行的系統(tǒng)補(bǔ)充流速lml/分鐘.溶劑所有化合物通常溶解在100%MeOH或100%DMSO中。從所提供的信息，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠通過制備型LC-MS純化本文所述的化合物。各實(shí)施例的原料均有市售，除非另有說明。實(shí)施例11A,4-硝基-111-吡唑-3-甲酸甲酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage60</formula>在室溫下將亞硫酰氯(2.90ml，39.8mmol)緩慢加至4-硝基-3-吡唑曱酸(5.68g，36.2mmol)在MeOH(100ml)中的混合物中并攪拌混合物48小時。在真空中濃縮混合物并通過與曱苯共沸干燥得到白色固體狀的4-灘基-111-吡唑-3-甲酸曱酯。^匪R(400MHz,DMSO-d6)514.4(s，1H)，8.9(s，1H)，3.9(s，3H)。1B.4-氨基-lH-吡唑-3.甲酸曱酯在氫氣氛下攪拌4-硝基-lH-吡唑-3-甲酸甲酯和10。/。Pd/C在EtOH中的混合物20小時。通過硅藻土塞過濾混合物，在真空中濃縮并通過與曱苯共沸干燥得到4-氨基-lH-吡唑-3-曱酸曱酯。&匪R(400MHz,MeOD)57.2(s，1H)，3.9(s，3H)。1C.4-g6-二氯-苯曱酰氨基MH-吡唑-3-曱酸將2，6-二氯苯曱酰氯(8,2g;39.05mmol)小心地加到4-氨基-lH-吡唑-3-甲酸甲酯(5g;35.5mmol)和三乙胺(5.95ml;42.6mmol)在二惡烷(50ml)中的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage60</formula>溶液中，然后在室溫下攪拌5小時。過濾反應(yīng)混合物，用甲醇(50ml)和2M氫氧化鈉溶液(100ml)處理濾液，于50'C下加熱4小時，然后蒸發(fā)，將100ml的水加至殘余物中，然后用濃鹽酸酸化。通過過濾收集固體，用水(100ml)洗滌并抽干得到10.05g淡紫色固體狀的4-(2，6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-曱酸。(LC/MS:Rt2.26，[M+H+300/302)。ID.44-(2,6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-羰基卜氨基V哌啶-l-甲酸叔丁II在室溫下攪拌4-(2，6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-甲酸(6.5g，21.6mmo1)、4-氨基-l-BOC-哌咬(4.76g，23.8mmo1)、EDC(5.0g，25.9mmo1)和HOBt(3.5g，25.9mmol)在DMF(75ml)中的混合物20小時。在真空中濃縮反應(yīng)混合物，將殘余物在乙酸乙酯(100ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)之間進(jìn)行分配。用鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(MgS04)并在真空中濃縮。將殘余物溶解在50/。MeOH-DCM(30ml)中。通過過濾收集不溶物，用DCM洗滌并真空干燥得到白色固體狀的4-U4-(2,6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-羰基卜氨基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯(5,38g)。在真空中濃縮濾液并通過柱色譜使用梯度洗脫1:2EtOAc/己烷到EtOAc純化殘余物另外得到白色固體狀的4-{[4-(2，6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-羰基l-氨基p底咬-l-甲酸叔丁酯(2.54g)。IE.4-(2,6-二氯-苯甲酰氨基)-111-吡唑-3-曱酸哌啶-4-基酰胺鹽酸鹽用飽和HCl-EtOAc(40ml)處理4-(4-(2，6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-羰基-氨基卜哌咬-l-甲酸叔丁酯(7.9g)在MeOH(50ml)和EtOAc(50ml)中的溶液然后在室溫下攪拌過夜。由于甲醇的存在，產(chǎn)物沒有結(jié)晶，因此蒸發(fā)反應(yīng)混合物，將殘余物與EtOAc—起研磨。通過過濾收集所得白色固體，用EtOAc洗滌并在過濾器(sinter)上抽千得到6.3g4-(2，6-二氯-苯甲酰氨基HH-吡唑-3-甲酸哌啶-4-基酰胺鹽酸鹽。(LC/MS:Rt5.89，[M+H+:382腦)。1F.4-(2,6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-甲酸f1-甲烷磺酰基-哌啶-4-基)-酰壘<formula>formulaseeoriginaldocumentpage62</formula>將二異丙基乙胺(2.211111101)加入4-(2，6曙二氯-苯甲酰氨基)畫lH曙吡唑-3陽曱酸哌啶-4-基酰胺鹽酸鹽(lmmol)在乙腈(10ml)中的混合物中，接著加入甲烷磺酰氯(lmmol)。將混合物在室溫下攪拌16小時然后在真空中濃縮。將殘余物在乙酸乙酯和水之間進(jìn)行分配，分離各層并用鹽水洗滌有機(jī)部分，干燥(MgS04)并在真空中濃縮得到標(biāo)題化合物。IM+H廣460Rt2.67。LC/MS.r.t.2.67分鐘；m/z460.11^NMR:(400MHz，DMSO-d6)513.51(s，1H)，10.20(s,1H)，8.50(d,J-8.0Hz，1H)，8.41(s，1H)，7.66-7.56(m，3H)，3.95-3.89(m，1H)，3.61(d，J=12.0Hz,2H)，2.92(s，3H)，2.84(t,J=12.0Hz,2H)，1.89-1.86(m，2H)，1.79-1.70(m2H)實(shí)施例24-(2,6-二氯-苯甲酰氨基〗-111-吡唑-3-曱酸(l-異丙基磺?；?哌咬-4-基)-酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>標(biāo)題化合物按照實(shí)施例1中所描述的方法但是用異丙基磺酰氯代替甲烷磺酰氯且通過制備型LC/MS純化而制得。r丄2.83分鐘；m/z488.22。iHNMR:(400MHz，DMSO畫d6)513.42(s,1H)，10.16(s,1H)，8.46(d，J=8.0Hz，1H)，8.35(s，1H)，7.60-7.51(m，3H)，3.92-3.87(m，1H)，3.65(d，J=12.0Hz，2H)，3.35-3.27(m，1H)，2.95(t，J-12.0Hz,2H)，1.80-1.76(m，2H)，1.66-1.59(m，2H)，1.22(d，J=8.0Hz，6H)實(shí)施例34-(2,6-二氯-苯曱酰氨基)-lH-吡唑-3-甲酸(l-乙基-磺?；?哌啶-4-基V酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>標(biāo)題化合物按照實(shí)施例1中所描述的方法但是用乙基磺酰氯代替甲烷磺酰氯且通過用P.E.-EtOAc(1:1-0:1)洗脫的柱色語法純化而制得。r.t.2.74分鐘；m/z474.17。醒R(400MHz，DMSO-d6)513.45(s，1H)，10.17(s，1H)，8.51(d，J二8.0Hz，1H)，8.37(s，1H)，7.60-7.51(m，3H)，3.91-3.85(m，1H)，3.61(d，J=12.0Hz，2H),3.04(q，J=8.0Hz，2H)，2.86(t，J=12.0Hz，2H)，1.80畫1.78(m，2H),1.69-1.60(m，2H)，1.21(t，J=8.0Hz,3H)實(shí)施例44-(2，6-二氯-苯曱酰氨基)-lH-吡唑-3-曱酸(l-丙基-磺?；?哌啶-4-基)-酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula>標(biāo)題化合物按照實(shí)施例1中所描述的方法但是用丙烷磺酰氯代替甲烷磺酰氯且通過制備型LC/MS純化而制得。r.t.3.11分鐘；m/z488.18。H畫R:(400MHz，DMSO-d6)S13.42(s，1H)，10.15(s，1H)，8.46(d，J=8.0Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.60-7.51(m，3H)，3.91-3.84(m，1H)，3.60(d，J=12.0Hz，2H)，3.00(t,J=8.0Hz,2H)，2.85(t，J=12.0Hz，2H)，1.82-1.78(m，2H)，1.72-1.62(m，4H)，0.99(t，J=8.0Hz，3H)。生物活性實(shí)施例5活化的CDK2/細(xì)胞周期蛋白A激酶抑制活性(ICgg)的測定采用以下方案測定本發(fā)明化合物的激酶抑制活性。將活化的CDK2/細(xì)胞周期蛋白A(Brown等人，Nat.CellBiol.，1，pp438-443，1999;Lowe,E.D.，等人Biochemistry,41，pp15625-15634，2002)在2.5倍強(qiáng)度測定緩沖液(50mMMOPSpH7.2，62.5mM卩-磷酸甘油，12.5mMEDTA，37.5mMMgCl2，112.5mMATP，2,5mMDTT，2.5mM原釩酸鈉，0.25mg/ml牛血清白蛋白)中稀釋至125pM，取與10^1的組蛋白底物混合物(60pl牛組蛋白HI(UpstateBiotechnology,5mg/ml)、940WH20、35jiCi/3p-ATP)混合，與5jil測試化合物在DMSO(最多2.5%)中的不同稀釋液一起加至96孔板中。使反應(yīng)進(jìn)行2至4小時，然后用過量正磷酸(5jU，2%)終止反應(yīng)。在MilIiporeMAPH過濾板上，從磷酸化組蛋白Hl中分離出未結(jié)合到組蛋白Hl中的/3P-ATP。將MAPH板的小孔用0.5%正磷酸濕潤，然后用Millipore真空過濾系統(tǒng)通過這些孔過濾反應(yīng)產(chǎn)物。過濾之后，用200nl的0.5%正磷酸洗滌殘余物兩次。將過濾器干燥后，加入的Microscint20閃爍劑，然后在PackardTopcount上計(jì)數(shù)30秒。計(jì)算CDK2活性的百分抑制率并繪圖，以測定待測化合物抑制50%的CDK2活性所需要的濃度CIC別)。實(shí)施例6活化的CDKl/細(xì)胞周期蛋白B激酶抑制活性(IC^)的測定CDKl/細(xì)胞周期蛋白B測定法與上述CDK2/細(xì)胞周期蛋白A相同，除了使用CDKl/細(xì)胞周期蛋白B(UpstateDiscovery)和將該酶稀釋到6.25nM之外。本發(fā)明的化合物具有小于20|^M的ICs。值或在lOpM的濃度時提供對CDK2活性至少50%的抑制作用。在CDK2或CDK1測定法中，本發(fā)明的優(yōu)選化合物具有小于lnM的ICso值。實(shí)施例7GSK3-B激酶抑制活性分析將GSK3-卩(UpstateDiscovery)在25mMMOPS，pH7.00、25mg/mlBSA、0.0025Q/oBrij-35、1.25%甘油、0.5mlEDTA、25mMMgCl2、0.025%P-巰基乙醇、37.5mMATP中稀釋至7.5nM，取lOjil與10^1底物混合物混合。GSK3-P的底物混合物為溶于lml含35pCiy33P-ATP的水中的12.5|iM礴酸化糖原合成酶肽-2(UpstateDiscovery),將酶和底物以及5pl供試化合物在DMSO(至多2.5%)中的各種稀釋液一^口入到96孔板中。使反應(yīng)進(jìn)行3小時(GSK3-P)，然后用過量正磷酸(5[11，2%)終止。過濾操作方法同上文活化的CDK2/細(xì)胞周期蛋白A測定法。實(shí)施例8抗增殖活性本發(fā)明化合物的抗增殖活性可通過測量化合物對多種細(xì)胞系的細(xì)胞生長的抑制能力來測定。細(xì)胞生長抑制利用AlamarBlue測定法來測定(Nociari,M.M，Shalev，A.，Benias，P.，Russo，C.</7w/ww"o/<g/c"/MW/ioffc1998，213，157-167)。該方法是基于活細(xì)胞將刃天青還原為其熒光產(chǎn)物試卣靈的能力。對于每個增殖測定，將細(xì)胞接種在96孔板上，使其恢復(fù)16小時，然后加入抑制劑化合物達(dá)另外72小時。在溫育期結(jié)束時，加入10。/o(v/v)AlamarBlue，溫育另外6小時，然后在535nMex/590nMem下測定熒光產(chǎn)物。在非增殖細(xì)胞測定的情況下，將細(xì)胞在匯合下維持96小時，然后加入抑制劑化合物達(dá)另外72小時。如上借助AlamarBlue測定法測定活細(xì)胞數(shù)。各細(xì)胞系均從ECACC(歐洲動物細(xì)胞保藏中心，EuropeanCollectionofcellCultures)得到。具體地，用衍生自人結(jié)腸癌的HCT-116細(xì)胞系(ECACC保藏號91091005)測試本發(fā)明的化合物。在該測定法中發(fā)現(xiàn)許多本發(fā)明的化合物具有小于20nM的ICs。值，優(yōu)選的化合物具有小于luM的ICso值。實(shí)施例9口服生物利用度的測定可如下測定式(I)化合物的口服生物利用度。將供試化合物按照以下劑量水平和劑量配方以溶液形式靜脈內(nèi)和口服施用于balb/c小鼠；lmg/kg，靜脈內(nèi)，配制在10。/oDMSO/90。/o(2-羥基丙基)-P-環(huán)糊精(25。/。w/v)中；和5mg/kg，口服，配制在10%DMSO/20°/"K/70%PEG200中。在給藥后的各時間點(diǎn)，取血樣置于肝素化試管中，收集血漿部分用于分析。在進(jìn)行蛋白沉淀之后用LC-MS/MS進(jìn)行分析，通過與針對供試化合物構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)校正曲線比較對樣品進(jìn)行定量。用標(biāo)準(zhǔn)方法由血漿水平-時間曲線圖計(jì)算曲線下面積(AUC)。用以下方程計(jì)算百分比形式的口服生物利用度AUC口服X劑X100AUC靜脈內(nèi)劑量口服按照該方法，化合物4-(2,6-二氯-苯甲酰氨基)-lH-吡唑-3-甲酸(l-甲烷磺?；?哌^-4-基)-酰胺以口服途徑對小鼠給藥時，具有40-50%的生物利用度。實(shí)施例10異體移植(Xenograph)研究實(shí)施例1的化合物在植入了得自人類腫瘤的細(xì)胞系的棵鼠中具有抗腫瘤作用。當(dāng)以可以引起對肺瘤生物標(biāo)記的抑制作用的劑量口服給藥時，實(shí)施例1化合物的治療在皮下植入的異體移植物中產(chǎn)生了對腫瘤生長的抑制作用。這些生物標(biāo)記包括細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的底物例如視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白的磷酸化的抑制。實(shí)施例1的化合物在以多種不同的方案給藥時(包括幾個星期的長期給藥)是有效的，實(shí)施例11比較實(shí)施例將實(shí)施例1的化合物(其包含2，6-二氯苯基基團(tuán))的生物活性與其2,6-二氟苯基類似物的生物活性進(jìn)行比較。2，6-二氟苯基類似物在我們較早的申請PCT/GB2004/003179(公開號WO2005/012256)的實(shí)施例131中進(jìn)行了描述，其具有如下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage68</formula>更具體地講，比較了化合物的抗CDK2激酶和GSK3p激酶的活性和其抑制HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的能力。這些激酶抑制活性和HCT-116抑制活性是使用上述分析方法測定的，結(jié)果顯示在下表中。<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>本申請實(shí)施例1的化合物與其二氟類似物相比具有如下優(yōu)點(diǎn).與其二氟類似物相比，實(shí)施例1的化合物對人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞系的抗增殖效果要強(qiáng)6-7倍。.與其二氟類似物相比，實(shí)施例1的化合物具有更高的體外激酶(CDK2)抑制活性。.實(shí)施例1的化合物對GSK3J5的活性(0.22nM)低于其二氟-類似物(0.014nM)。.與其二氟類似物(6倍)相比，實(shí)施例1的化合物具有更高的CDK抑制/GSK3p選擇性(>200倍)。藥物制劑實(shí)施例12(i)片劑制劑通過以下方法制備含有式(I)化合物的片劑組合物混合50mg化合物與197mg作為稀釋劑的乳糖(BP)以及3mg作為潤滑劑的硬脂酸鎂，用已知方法壓制成片劑。(ii)膠嚢劑通過以下方法制備膠嚢劑混合lOOmg式(I)化合物與lOOmg乳糖，將所得混合物裝入標(biāo)準(zhǔn)的不透明的硬明膠膠嚢內(nèi)。(iii)可注射制劑I可通過以下方法制備通過注射施用的胃腸外組合物將式(I)化合物(例如鹽形式的式(I)化合物)溶解在含有10%丙二醇的水中，產(chǎn)生1.5重量％的活性化合物濃度。然后通過過濾將溶液滅菌，裝入安瓿內(nèi)并密封。(iv)可注射制劑II通過以下方法制備用于注射的胃腸外組合物將式(I)化合物(例如鹽形式的式(l)化合物)(2mg/ml)和甘露醇(50mg/ml)溶解在水中，將溶液無菌過濾，裝入可密封的lml小瓶或安瓿內(nèi)。v)可注射制劑III可通過以下方法制備用于通過注射或輸注靜脈內(nèi)遞送的制劑將式(I)化合物(例如鹽形式的式(I)化合物)以20mg/ml的濃度溶解在水中。然后將小并瓦密封并高壓滅菌。vi)可注射制劑IV可通過以下方法制備用于通過注射或輸注靜脈內(nèi)遞送的制劑將式(I)化合物(例如鹽形式的式(I)化合物)以20mg/ml的濃度溶解在含有緩沖劑的水(例如0,2M乙酸鹽pH4.6)中。然后將小瓶密封并高壓滅菌。fvii)皮下注射制劑通過以下方法制備用于皮下施用的組合物混合式(I)化合物與藥用級玉米油，產(chǎn)生5mg/ml的濃度。將組合物滅菌并裝進(jìn)適當(dāng)容器內(nèi)。viii)冷凍干燥制劑將配制的式(I)化合物的等分試樣放入50ml的小瓶中并冷凍干燥。在冷凍干燥期間，在(-45。C)下使用一步冷凍方案冷凍該組合物。將溫度升到-10。C以回溫，然后降低至在-45。C下冷凍，接著于+25。C下初次干燥約3400分鐘，繼之以二次千燥，如果溫度升至50。C則增加步驟。在初步和二次干燥期間，壓力被設(shè)置在80毫托。(ix)固體溶液制劑將實(shí)施例1的化合物以5到50%(例如16或20%)的濃度溶解在二氯甲烷/乙醇(l:l)中，使用對應(yīng)于下表中所給出的條件將溶液噴霧干燥。表中所給出的數(shù)據(jù)包括實(shí)施例1的化合物的濃度、噴霧千燥器的入口和出口溫度、噴霧干燥的固體的總產(chǎn)率、實(shí)施例l的化合物在噴霧干燥的固體中的濃度(分析)和由噴霧干燥的固體所組成的粒度分布(P.S.D.)。<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>可以將實(shí)施例1的化合物和PVP的固體溶液直接裝進(jìn)硬明膠或HPMC(羥丙基甲基纖維素)膠嚢內(nèi)，或與可藥用賦形劑如增量劑、助流劑或分散劑混合。該膠嚢可含有2mg-200mg、例如10、20和80mg實(shí)施例1的化合物。實(shí)施例13抗真菌活性的測定可采用下列方法測定式(I)化合物的抗真菌活性。測試化合物對抗一組真菌的作用，包括近平滑念珠菌(Om^/a戸rjwi/仍/s)、熱帶念珠菌(Gmrf/rf"、白念色珠菌(OwifffV/aa仿/ams)-ATCC36082和新型隱球菌(Co^似coccwsweo/or附a附)。這些測試微生物在4'C下保存于Sabourahd葡萄糖瓊脂斜面上。每一生物的單態(tài)懸浮液按照如下描述制備在27'C下、在旋轉(zhuǎn)搖床上、在含有氨基酸(Difco，Detroit,Mich.)(pH7.0)和0.05M嗎啉丙磺酸(MOPS)的酵母氮源液體培養(yǎng)基(YNB)中使酵母生長過夜。然后離心懸浮液，用0.85。/oNaCl洗滌兩次，然后將經(jīng)洗滌的細(xì)胞懸浮液用聲波處理4秒(BransonSonifier，350型，Danbury，Conn.)。在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)單態(tài)芽生孢子，在0.85。/oNaCl中調(diào)節(jié)至所需濃度。使用液體培養(yǎng)基微量稀釋技術(shù)的改良方法測定待測化合物的活性。將待測化合物在DMSO中稀釋到1.0mg/ml的比例，然后在pH7.0的含有MOPS(使用氟康峻作為對照)的YNB液體培養(yǎng)基中稀釋到64照/ml，以提供每種化合物的工作溶液。使用96孔板，用YNB液體培養(yǎng)基準(zhǔn)備第1和3至12孔，在第2至11孔制備化合物溶液的十倍稀釋液(濃度范圍為64至0.125jig/ml)。第1孔用作分光光度測定的無菌對照和空白。第12孔用作生長對照。向微量板第2至11孔的各孔接種lOfil(最終接種物數(shù)目為104個生物/ml)。將經(jīng)接種的板在35'C下溫育48小時。用旋渦混合器(Vorte-Genie2Mixer,ScientificIndustries,Inc.，Bolemia，N.Y.)振蕩板2分鐘后，以分光光度法測量在420nm的吸光度(AutomaticMicroplateReader,DuPontInstruments,Wilmington,Del.)來測定IC50值。IC50終點(diǎn)#:定義為與對照孔相比，顯示出生長減少約50%(或以上)的最低藥物濃度。在濁度測定中，這被定義為小孔濁度為<50%對照的最低藥物濃度(IC50)。最小溶胞濃度(MCC)通過如下方法確定在Sabourahd葡萄糖瓊脂(SDA)板上移種96孔板的所有小孔，在35。C下溫育1至2天，然后檢查存活性。實(shí)施例14控制整抹植物體內(nèi)真菌感染的生物學(xué)評價(jià)方法將式(I)化合物溶解在丙酮中，接著用丙酮連續(xù)稀釋以獲得所需濃度范圍。依病原體而定，通過加入9體積的0.05%Tween-20TM水溶液或0.01%TritonX-10()TM獲得最終處理體積。然后使用組合物采用下列方法來測定本發(fā)明化合物抗蕃茄疫病(致病疫霉(Phytophthorainfestans))的活性。使蕃茄(Rutgers品種)種子在無土的泥炭基盆栽混合物中生長直到幼苗10-20公分高。然后用100ppm比例的待試化合物噴灑該植物至流出。24小時后，測試植物用蕃茄疫病菌的孢子嚢水性懸浮液噴霧接種，并保持在露天房間過夜。然后將該植物轉(zhuǎn)移到溫室直到疾病在未處理的對照植物上發(fā)生。還采用類似的方法來測試本發(fā)明化合物抵抗小麥褐銹病(柄銹菌屬Puccinia)、小麥(Ervsiphevraminis)和小麥(Monon品種)的白粉病、小麥葉斑病(小麥殼針孑包(Septoriatritici))和小麥穎枯病(Leptosphaerianodorum)的活性。等價(jià)方式提供上述實(shí)施例的目的在于闡述本發(fā)明，不應(yīng)將其解釋為對本發(fā)明范圍強(qiáng)加任何限制。顯然，可以在不背離本發(fā)明基本原理的情況下對上文所述的和實(shí)施例中所例舉的本發(fā)明的具體實(shí)施方案進(jìn)行各種修改和變化。所有這類修改和變化都為本申請所涵蓋。權(quán)利要求1.式(I)化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(I)或其鹽、互變異構(gòu)體，其中W是2，6-二氯苯基；R2a和R2b均為氫；且RS為下式的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>2.根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中R"是Cw烷基。3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R"是曱基。4.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中W是乙基。5.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R"是正丙基。6.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R"是異丙基。7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其不是鹽或N-氧化物的形8.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的化合物，其是鹽、溶劑合物或N-氧化物的形式。9.用于預(yù)防或治療由細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶或糖原合成酶激酶-3介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥的根據(jù)權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物。10.預(yù)防或治療由細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶或糖原合成酶激酶-3介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥的方法，該方法包括將權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物施用給需要它的個體。11.減輕或降低由細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶或糖原合成酶激酶-3介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥的發(fā)病率的方法，該方法包括將權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物施用給需要它的個體。12.在哺乳動物中治療包含或起因于異常細(xì)胞生長的疾病或病癥的方法，該方法包括將抑制異常細(xì)胞生長有效量的權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物施用給哺乳動物。13.在哺乳動物中減輕或降低包含或起因于異常細(xì)胞引起的疾病或病癥的發(fā)病率的方法，該方法包括將抑制異常細(xì)胞生長有效量的權(quán)利要求l至8中任意一項(xiàng)的化合物施用給哺乳動物。14.在哺乳動物中治療包含或起因于異常細(xì)胞生長的疾病或病癥的方法，該方法包括將抑制cdk激酶(例如cdkl或cdk2)或糖原合成酶激酶-3活性有效量的權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物施用給哺乳動物。15.在哺乳動物中減輕或降低包含或起因于異常細(xì)胞生長的疾病或病癥的發(fā)病率的方法，該方法包括將抑制cdk激酶(例如cdkl或cdk2)或糖原合成酶激酶-3活性有效量的權(quán)利要求l至8中任意一項(xiàng)的化合物施用給哺乳動物。16.抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶或糖原合成酶激酶-3的方法，該方法包括使激酶與權(quán)利要求l至8中任意一項(xiàng)的激酶抑制性化合物接觸。17.調(diào)節(jié)細(xì)胞過程(例如細(xì)胞分裂)的方法，該方法通過^f吏用權(quán)利要求l至8中任意一項(xiàng)的化合物抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶或糖原合成酶激酶-3的活性來實(shí)現(xiàn)。18.用于預(yù)防或治療本文所述疾病狀態(tài)的權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物。19.權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)所述的化合物在生產(chǎn)用于一種或多種本文所定義用途的藥物中的用途。20.包含權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物和可藥用載體的藥物組合物。21.適于口服給藥形式的藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物和可藥用的載體。22.用于藥物中的權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物。23.用于上述和本文其它部分所述的任何用途和方法的根據(jù)權(quán)利要求l至8中任意一項(xiàng)的化合物。24.—種制備權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的化合物的方法，該方法包括將式(XVII)化合物與一種適合引入S02R"基團(tuán)的磺?；噭?例如磺酰氯如曱烷磺酰氯)反應(yīng)。25.—種診斷和治療由細(xì)胞周期依賴性激酶介導(dǎo)的疾病狀態(tài)或病癥的方法，該方法包括(i)篩選患者以確定該患者正在患有或可能惟患的疾病狀的治療敏感；(ii)當(dāng)患者的疾病或病癥被指示是敏感的時，對患者施用權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物。26.權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物在生產(chǎn)用于治療或預(yù)防患者的疾病或病癥的藥物中的用途，其中所迷患者已4皮檢查并確定為患有對用具有抗細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶活性的化合物進(jìn)行的治療敏感的疾病狀態(tài)或病癥或者有罹患這些疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)。27.用于抑制哺乳動物中肺瘤生長的權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物。28.用于抑制腫瘤細(xì)胞生長(例如在哺乳動物中)的權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>29.抑制哺乳動物(例如人)中腫瘤生長的方法，該方法包括對哺乳動物(例如人)施用抑制肺瘤生長有效量的權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的化合物。30.抑制腫瘤細(xì)胞(例如存在于哺乳動物例如人中的腫瘤細(xì)胞)生長的方法，該方法包括使腫瘤細(xì)胞與抑制腫瘤生長有效量的權(quán)利要求l至8中任意一項(xiàng)的化合物接觸。全文摘要本發(fā)明提供了一種式(I)化合物或其鹽、互變異構(gòu)體、溶劑合物或N-氧化物；其中R¹是2，6-二氯苯基；R^2a和R^2b都是氫；R³是基團(tuán)；其中R⁴為C_1-4烷基。該化合物具有作為CDK激酶抑制劑的活性且可抑制癌細(xì)胞的增殖。文檔編號C07D401/14GK101146794SQ200680009174公開日2008年3月19日申請日期2006年1月20日優(yōu)先權(quán)日2005年1月21日發(fā)明者A·J·伍德黑德,A·L·吉爾,G·特里瓦撒,P·G·懷亞特,V·貝爾迪尼申請人:阿斯泰克斯治療有限公司