專利名稱：包含長正五聚蛋白ptx3抑制劑的藥物的制作方法
本文描述的發(fā)明涉及長正五聚蛋白PTX3抑制劑在制備治療自身免疫性疾病及骨和軟骨退行性疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
PTX3是一種能夠使其自身在被二硫橋結(jié)合的同十聚體結(jié)構(gòu)(homodecameric structure)中自發(fā)有機化的糖蛋白，它在不同類型細(xì)胞中表達(Bottazzi等人，J.Biol.Chem.，1997；27232817-32823)，尤其在與炎性細(xì)胞因子白介素1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)接觸后的單核吞噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中表達。
PTX3由兩個結(jié)構(gòu)域組成與任何已知分子無關(guān)的N-末端和與短正五聚蛋白如C-反應(yīng)蛋白(CRP)類似的C-末端。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)人PTX3(hPTX3)和動物PTX3之間的高度相似性。
有關(guān)正五聚蛋白的綜述參見H.Gewurz等人，Current Opinion inImmunology，1995，754-64。
重組PTX3和原代細(xì)胞(例如成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和先天免疫細(xì)胞)表達的PTX3主要在被二硫橋穩(wěn)定的十聚體結(jié)構(gòu)中有機化。單個PTX3單體具有約45kDa的分子量，它可以通過還原二硫橋，隨后使參與單體間相互作用的還原半胱氨酸烷基化，或者通過相同物質(zhì)的定點誘變作用，從十聚體蛋白中獲得(Bottazzi等人，J.Biol.Chem.，1997；27232817-32823)。
最近對罹患類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的研究已經(jīng)顯示，滑膜液中的PTX3的表達水平顯著提高了。這種提高的PTX3的表達與表征該疾病的炎性過程有關(guān)(Lucchetti等人，Clin.Exp.Immunol.2000；119196-202)。
WO 03/086380描述了PTX3基因表達抑制劑在治療包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的自身免疫性疾病中的應(yīng)用。
WO 03/086380與本發(fā)明的區(qū)別在于，相對于本發(fā)明所述的化合物和抑制方法，它采用的是完全不同的化合物和完全不同的抑制方法。
事實上，在本專利申請中，所述的PTX3拮抗劑能夠直接抑制蛋白(PTX3)的生物活性。
本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚這樣一個事實，即用小分子調(diào)節(jié)基因表達(以選擇性方式)，例如不變更參與炎癥的其它基因的表達，如WO03/086380中所列的，可能是困難的。此外，在基因水平上抑制在重要生物學(xué)功能中發(fā)揮基本作用的蛋白的表達可能會引起不利的反應(yīng)，例如對感染和生殖不育的易感性增加。
因此在醫(yī)藥領(lǐng)域，對于能夠起到PTX3拮抗劑作用的用于治療本發(fā)明疾病的其它抑制劑還存在迫切需求。
發(fā)明概述現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)PTX3抑制劑或拮抗劑可以用于預(yù)防和治療自身免疫性疾病及骨和軟骨的退行性疾病。
本發(fā)明PTX3抑制劑的非限制性實例是單克隆或多克隆抗-PXT3抗體，而本發(fā)明PTX3拮抗劑的非限制性實例是單體PTX3或其肽或擬肽(peptidomimetic)衍生物。
因此本發(fā)明目的是能夠阻止長正五聚蛋白PTX3的生物學(xué)活性的長正五聚蛋白PTX3抑制劑或拮抗劑作為用于制備治療選自以下的自身免疫性疾病的藥物的藥劑，所述疾病選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、多發(fā)性硬化(MS)、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、甲狀腺炎、溶血性貧血、萎縮性睪丸炎、古德帕斯徹病、自身免疫性視網(wǎng)膜病、自身免疫性血小板減少癥、重癥肌無力、原發(fā)性膽汁性肝硬變、慢性活動性肝炎、潰瘍性結(jié)腸炎、皮炎、慢性腎小球腎炎、斯耶格倫綜合征、萊特爾綜合征、肌炎、全身性硬化癥或多關(guān)節(jié)炎；和選自以下的骨和軟骨退行性疾病骨關(guān)節(jié)炎；骨關(guān)節(jié)病；關(guān)節(jié)退行性疾??；膠原缺乏；以軟骨內(nèi)骨化為特征的軟骨或骨疾病原發(fā)性關(guān)節(jié)炎，包括例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型關(guān)節(jié)炎、未分化的慢性關(guān)節(jié)炎和多關(guān)節(jié)炎；自身免疫源性繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎，包括例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、克羅恩病關(guān)節(jié)炎；代謝障礙源性關(guān)節(jié)炎，包括例如，尿酸單鈉關(guān)節(jié)病、焦磷酸鹽關(guān)節(jié)病、草酸鈣關(guān)節(jié)病；感染性關(guān)節(jié)炎、歸咎于骨質(zhì)疏松癥的關(guān)節(jié)炎、無菌性骨壞死、良性和惡性骨腫瘤。
發(fā)明詳述“長正五聚蛋白PTX3抑制劑”是指任何單克隆或多克隆抗體，不論它是天然的(人或動物)、重組的或合成來源的，它能夠用于結(jié)合PTX3和阻止其生物學(xué)活性。
制備本發(fā)明單克隆抗體的一個實例由Godine，J.W.，1986描述在“Monoclonal AntibodiesPrinciple and Practice.學(xué)術(shù)出版社，圣地亞哥”中，而制備本發(fā)明多克隆抗體的一個實例由Harlow E.和Lane D.描述在“AntibodiesA Laboratory Manual.Cold SpringHarbor Laboratory，1988；Cold Spring Harbor，NY”中。
“單體正五聚蛋白”是指任何單體正五聚蛋白，不論它是天然的(人或動物)、重組的或合成來源的。
“單體正五聚蛋白衍生物”是指具有至少一個突變并且保留了選擇性抑制PTX3活性功能的所述單體正五聚蛋白的功能性類似物，或能夠刺激PTX3的線性或結(jié)構(gòu)域并且保留了選擇性抑制PTX3活性功能的肽或擬肽類似物。
單體正五聚蛋白的優(yōu)選類型是人單體正五聚蛋白，其序列描述在WO99/32516中。
與PTX3異常激活有關(guān)的自身免疫性疾病包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、多發(fā)性硬化(MS)、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、甲狀腺炎、溶血性貧血、萎縮性睪丸炎、古德帕斯徹病、自身免疫性視網(wǎng)膜病、自身免疫性血小板減少癥、重癥肌無力、原發(fā)性膽汁性肝硬變、慢性活動性肝炎、潰瘍性結(jié)腸炎、皮炎、慢性腎小球腎炎、斯耶格倫綜合征、萊特爾綜合征、肌炎、全身性硬化癥和多關(guān)節(jié)炎。
與PTX3異常激活有關(guān)的骨和軟骨退行性疾病包括骨關(guān)節(jié)炎；骨關(guān)節(jié)病；關(guān)節(jié)退行性疾?。荒z原缺乏；以軟骨內(nèi)骨化為特征的軟骨或骨疾病原發(fā)性關(guān)節(jié)炎，包括例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型關(guān)節(jié)炎、未分化的慢性關(guān)節(jié)炎和多關(guān)節(jié)炎；自身免疫源性繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎，包括例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、克羅恩病關(guān)節(jié)炎；代謝障礙源性關(guān)節(jié)炎，包括例如，尿酸單鈉關(guān)節(jié)病、焦磷酸鹽關(guān)節(jié)病、草酸鈣關(guān)節(jié)病；感染性關(guān)節(jié)炎、歸咎于骨質(zhì)疏松癥的關(guān)節(jié)炎、無菌性骨壞死、良性和惡性骨腫瘤。
以下實施例進一步闡明本發(fā)明。
實施例1PTX3-缺陷小鼠用于膠原引起的關(guān)節(jié)炎(CIA)的鼠類模型(Campbell等人，Eur.J.Immunol，2000；301568-75)。實驗?zāi)康氖窃u價PTX3-/-小鼠對關(guān)節(jié)炎表型誘導(dǎo)的易感性。
在尾近端區(qū)域通過多點皮內(nèi)注射，用總體積為100μl的、添加了250μg熱滅活的結(jié)核分枝桿菌的弗氏完全佐劑中的100μg小雞II型膠原(SIGMA)處理129 sv x C57 BL/6PTX3-/-小鼠。
21天后進行相同的處理。
在給藥階段結(jié)束后，用計算存在的發(fā)炎關(guān)節(jié)及其大小的任意評分系統(tǒng)評價關(guān)節(jié)炎的發(fā)生率和嚴(yán)重性。得到的結(jié)果列在表1中。
表1中報告的PTX3+/+小鼠的較大發(fā)病率提供的證據(jù)表明，PTX3-/-小鼠對發(fā)生膠原引起的關(guān)節(jié)炎的易感性較小。這個結(jié)果被PTX3+/+小鼠比PTX3-/-小鼠關(guān)節(jié)炎更嚴(yán)重的臨床評分所證實。
得到的結(jié)果表明，PTX3缺乏或它的抑制能用于預(yù)防和治療骨和軟骨的炎癥和/或退行性疾病。
表1PTX3+/+和PTX3-/-小鼠的膠原引起的關(guān)節(jié)炎
*實驗結(jié)束時的發(fā)病率(初次免疫接種后60天)°實驗結(jié)束時患關(guān)節(jié)炎動物的平均臨床評分圖例在第二次免疫接種后，一周兩次評價四肢關(guān)節(jié)炎的臨床跡象的出現(xiàn)。用1到4分給所涉及的各肢體評分；因此每只動物能夠獲得最多16分的評分。
就關(guān)于工業(yè)應(yīng)用方面來說，單體正五聚蛋白PTX3或其肽或擬肽衍生物或抗-正五聚蛋白PTX3抗體將是藥物組合物的形式，其中，活性成分被藥學(xué)可接受的賦形劑和/或稀釋劑，例如無菌水、羧甲基纖維素或本領(lǐng)域?qū)＜乙阎钠渌x形劑所溶解和/或所賦形。
單體正五聚蛋白可用的藥物組合物的實例與WO 99/32516中描述的用于長正五聚蛋白PTX3的那些相同。
本發(fā)明化合物可以通過腸內(nèi)或胃腸外途徑給藥，特別優(yōu)選的藥物形式是緩釋植入劑或關(guān)節(jié)內(nèi)注射形式。
根據(jù)主治醫(yī)師的判斷，日劑量將取決于患者的體重、年齡和全身狀況。
應(yīng)當(dāng)注意的是，包括緩釋形式的所述藥物組合物的制備可以使用藥劑師和制藥工藝學(xué)專家熟知的常規(guī)技術(shù)和手段來進行。
權(quán)利要求
1.長正五聚蛋白PTX3抑制劑或拮抗劑在制備預(yù)防和治療骨和軟骨退行性疾病的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中，長正五聚蛋白PTX3抑制劑是指能夠結(jié)合PTX3的任何單克隆或多克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中，抗體是天然的(人或動物)、重組的或合成來源的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中，拮抗劑是單體PTX3，或保留了選擇性抑制PTX3活性功能的它的一種肽或擬肽衍生物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的應(yīng)用，其中，拮抗劑是天然的(人或動物)、重組的或合成來源的。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的應(yīng)用，其中，單體正五聚蛋白是人源的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中，自身免疫性疾病選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、多發(fā)性硬化(MS)、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、甲狀腺炎、溶血性貧血、萎縮性睪丸炎、古德帕斯徹病、自身免疫性視網(wǎng)膜病、自身免疫性血小板減少癥、重癥肌無力、原發(fā)性膽汁性肝硬變、慢性活動性肝炎、潰瘍性結(jié)腸炎、皮炎、慢性腎小球腎炎、斯耶格倫綜合征、萊特爾綜合征、肌炎、全身性硬化癥和多關(guān)節(jié)炎。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中，所述骨或軟骨退行性疾病選自骨關(guān)節(jié)炎；骨關(guān)節(jié)??；關(guān)節(jié)退行性疾??；膠原缺乏；以軟骨內(nèi)骨化為特征的軟骨或骨疾病原發(fā)性關(guān)節(jié)炎，包括例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型關(guān)節(jié)炎、未分化的慢性關(guān)節(jié)炎和多關(guān)節(jié)炎；自身免疫源性繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎，包括例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、克羅恩病關(guān)節(jié)炎；代謝障礙源性關(guān)節(jié)炎，包括例如，尿酸單鈉關(guān)節(jié)病、焦磷酸鹽關(guān)節(jié)病、草酸鈣關(guān)節(jié)?。桓腥拘躁P(guān)節(jié)炎、歸咎于骨質(zhì)疏松癥的關(guān)節(jié)炎、無菌性骨壞死、良性和惡性骨腫瘤。
全文摘要
描述了長正五聚蛋白PTX3抑制劑在制備預(yù)防和治療自身免疫性疾病及骨和軟骨退行性疾病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號C07K14/47GK1893975SQ200480037194
公開日2007年1月10日 申請日期2004年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月23日
發(fā)明者B·伯塔茲, P·卡爾米納蒂, C·戈蘭達, A·曼托瓦尼 申請人:迪菲安特制藥有限公司