專(zhuān)利名稱(chēng)：硫代鉬酸鹽類(lèi)似物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明通常涉及新的硫代鉬酸鹽衍生物，新的硫代鉬酸鹽衍生物的制備方法，新的硫代鉬酸鹽衍生物的藥物組合物，以及使用新的硫代鉬酸鹽衍生物和新的硫代鉬酸鹽衍生物的藥物組合物治療或預(yù)防與異常血管生成有關(guān)的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙的方法。
背景技術(shù)：
大多數(shù)形式的癌癥源自于實(shí)體瘤(Shockley et al.，Ann.N.Y. Acad.Sci.1991，617367-382)，其在臨床上對(duì)治療例如使用單克隆抗體和免疫毒素的治療具有耐藥性。用于癌癥治療的抗血管生成療法從認(rèn)識(shí)發(fā)展而來(lái)，這種認(rèn)識(shí)是為了持續(xù)生長(zhǎng)，實(shí)體瘤需要血管生成(即，新的血管生成)(Folkman，Ann.Surg.1972，175409-416；Folkman，Mol.Med.1995，1(2)120-122；Folkman，Breast Cancer Res.Treat.1995，36(2)109-118；Hanahan et al.，Cell1996，86(3)353-364)?？寡苌莎煼ǖ男Яυ趧?dòng)物模型中已經(jīng)得到證明(Millauer et al.，Cancer Res.1996，561615-1620；Borgstrom et al.，Prostrate1998，351-10；Benjamin et al.，J.Clin.Invest.1999，103159-165；Merajver etal.，Proceedings of Special AACR Conference on Angiogenesis and CanceR1998，Abstract #B-11，January 22-24)。在沒(méi)有血管生成的情況下，實(shí)體瘤的內(nèi)細(xì)胞層沒(méi)有充分被滋養(yǎng)。此外，血管生成(即，異常血管化)還與許多其它疾病有關(guān)(例如，眼新血管疾病、黃斑變性、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等等)。新近，在動(dòng)物模型中，抑制血管生成與脂肪組織損失和體重減輕有著直接的關(guān)系，這表明抗血管生成療法可以用于預(yù)防肥胖癥(Rupnick et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.2002，9910730-10735)。
與此相反的是，除特殊情況外(例如，傷口修復(fù)，月經(jīng)期間的子宮內(nèi)壁增殖)，正常組織不需要生成血管。因此，需要生成血管是腫瘤細(xì)胞與正常組織之間一種顯著的差異。重要地是，腫瘤細(xì)胞對(duì)血管生成的依賴(lài)性，與正常細(xì)胞相比在數(shù)量上大于正常組織和腫瘤組織之間的細(xì)胞復(fù)制和細(xì)胞死亡的差異，這一點(diǎn)常常在癌癥治療中被利用。
血管生成需要銅，這一點(diǎn)已經(jīng)被大量研究所證實(shí)(Parke et al.，Am.J.Pathol.1988，137173-178；Rajuet al.，Natl.Cancer Inst.1982，691183-1188；Ziche et al.，Natl.Cancer Inst.1982，69475-482；Gullino，Anticancer Res.1986，6(2)153-158)。在本領(lǐng)域中，已經(jīng)報(bào)道了通過(guò)降低體內(nèi)銅的量，從而預(yù)防動(dòng)物模型中的血管生成并因此減少腫瘤生長(zhǎng)(Brem et al.，Neurosurgery1990，26391-396；Bremet al.，Am.J.Pathol.1990，137(5)1121-1142；Yoshidaet al.，Neurosurgery 1995 37(2)287-295)。這些方法包括結(jié)合采用銅螯合劑和低銅飲食。新近，Brewer等人，國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US99/20374已經(jīng)表明銅螯合劑(例如，四硫代鉬酸鹽)可以有效的治療需要血管生成的疾病(例如，實(shí)體瘤生長(zhǎng))。
除誘導(dǎo)血管生成之外，銅在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和存活方面也具有直接的作用。在患有許多不同實(shí)體癌的患者的血漿和腫瘤組織中，存在高含量的銅(Chakravarty et al.，J Cancer Res.Clin.Oncol.1984，108312-315)。最近，已經(jīng)表明四硫代鉬酸鹽下調(diào)了NF-κB的表達(dá)并抑制了其移位至炎性乳腺癌細(xì)胞系SUM 149中的細(xì)胞核(Pan et al.，Cancer Res.2002，624854-4859)。在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞存活率過(guò)程中可能涉及NF-κB體系并因此通過(guò)四硫代鉬酸鹽下調(diào)了其在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)，這表示了銅的螯合對(duì)腫瘤存活率的直接作用。
因此，在治療和/或預(yù)防血管生成以及在減少腫瘤細(xì)胞成活率中，需要全面探索新的硫代鉬酸鹽化合物即銅螯合劑的潛在作用。這樣的新硫代鉬酸鹽化合物對(duì)于治療各種與血管生成有關(guān)的疾病例如癌癥、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病或肥胖癥以及治療炎癥等的NF-κB途徑受到調(diào)節(jié)障礙的疾病可能是有效的。
發(fā)明概述通過(guò)提供新的硫代鉬酸鹽衍生物，新的硫代鉬酸鹽衍生物的制備方法，新的硫代鉬酸鹽衍生物的藥物組合物，以及使用新的硫代鉬酸鹽衍生物及其藥物組合物治療或預(yù)防與異常血管生成有關(guān)的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙的方法，本發(fā)明滿(mǎn)足這些以及其它要求。
第一方面，本發(fā)明提供一種結(jié)構(gòu)式(I)的化合物
或其溶劑化物或水合物或N-氧化物，其中R1、R2、R3、R5、R6和R7獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基；R4和R8獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基、或者當(dāng)N是芳環(huán)的一部分時(shí)則不存在；任選地，R1和R2一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起，R6和R7一起以及R6和R8一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R3和R7一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；以及Y-2是(MoS4)-2、(Mo2S12)-2、(Mo2S9)-2、(Mo2S7)-2、(Mo2S8)-2、(Mo2S11)-2、(Mo2S6)-2或(Mo2S13)-2；條件是如果Y是(MoS4)-2以及R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8是相同的，那么R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中的每一個(gè)不是氫、甲基、乙基或正丙基。
第二方面，本發(fā)明提供新的硫代鉬酸鹽衍生物的藥物組合物。該藥物組合物通常包含一種或多種硫代鉬酸鹽衍生物、其水合物、溶劑化物或N-氧化物以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體、賦形劑和助劑。稀釋劑、載體、賦形劑和助劑的選擇將取決于所需的給藥方式以及其它因素。
第三方面，本發(fā)明提供治療或預(yù)防以異常血管生成為特征的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙的方法。所述的方法通常包括給需要這種治療或預(yù)防的患者服用治療有效量的新的硫代鉬酸鹽衍生物和/或其藥物組合物。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1說(shuō)明二(膽堿)四硫代鉬酸鹽對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的作用；圖2說(shuō)明二(膽堿)四硫代鉬酸鹽不誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡；圖3說(shuō)明二(膽堿)四硫代鉬酸鹽在matrigel栓塞試驗(yàn)中是抗血管生成的；圖4說(shuō)明二(膽堿)四硫代鉬酸鹽抑制IL-8從融合內(nèi)皮細(xì)胞中分泌；圖5說(shuō)明二(膽堿)四硫代鉬酸鹽抑制來(lái)自激活單核細(xì)胞的IL-8的表達(dá)；以及圖6說(shuō)明二(膽堿)四硫代鉬酸鹽引起鼠KC血漿水平的降低。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明定義″本發(fā)明的化合物″是指包括在此公開(kāi)的結(jié)構(gòu)式(I)的化合物以及在此公開(kāi)的包括在通式(I)內(nèi)的任何具體化合物。本發(fā)明的化合物可以通過(guò)它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)和/或化學(xué)名稱(chēng)進(jìn)行確定。當(dāng)化學(xué)結(jié)構(gòu)和化學(xué)名稱(chēng)矛盾時(shí)，以化學(xué)結(jié)構(gòu)為主。本發(fā)明的化合物可以含有一個(gè)或多個(gè)手性中心和/或雙鍵，并因此可以存在立體異構(gòu)體，例如雙鍵異構(gòu)體(即，幾何異構(gòu)體)、對(duì)映體或非對(duì)映體。因此，在此的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖包括所示化合物的所有可能的對(duì)映體和立體異構(gòu)體，包括立體異構(gòu)純形式(例如，幾何純的，對(duì)映體純的或非對(duì)映純的)以及對(duì)映體和立體異構(gòu)體的混合物。本發(fā)明的化合物還可以以若干互變異構(gòu)形式存在。因此，在此的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖包括所示化合物的所有可能的互變異構(gòu)形式。本發(fā)明的化合物還包括同位素標(biāo)記的化合物，其中一個(gè)或多個(gè)原子具有不同于通常在自然界中發(fā)現(xiàn)的原子量?？梢园ㄔ诒景l(fā)明化合物中的同位素的例子包括，但不局限于，2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O等等。本發(fā)明的化合物可以以未溶劑化的形式和溶劑化的形式存在，包括水合物形式和N-氧化物。通常，水合物、溶劑化物和N-氧化物形式包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的某些化合物可以以多晶或無(wú)定形的形式存在。通常，對(duì)本發(fā)明的用途來(lái)說(shuō)，所有物理形式是等效的，并且包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。此外，應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)舉例說(shuō)明本發(fā)明化合物的部分結(jié)構(gòu)時(shí)，括號(hào)表示分子的部分結(jié)構(gòu)與其余部分的連結(jié)點(diǎn)。
″烷基″本身或作為另一取代基的一部分，是指飽和的或不飽和的、分枝的、直鏈或環(huán)狀一價(jià)烴基，是由母體烷烴、烯烴或炔烴的單個(gè)碳原子除去一個(gè)氫原子所衍生的。典型的烷基包括，但不局限于，甲基；乙基例如乙烷基、乙烯基、乙炔基；丙基例如丙烷-1-基、丙烷-2-基、環(huán)丙烷-1-基、丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、環(huán)丙-1-烯-1-基；環(huán)丙-2-烯-1-基、丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等等；丁基例如丁烷-1-基、丁烷-2-基、2-甲基-丙烷-1-基、2-甲基-丙烷-2-基、環(huán)丁烷-1-基、丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1，3-二烯-1-基、丁-1，3-二烯-2-基、環(huán)丁-1-烯-1-基、環(huán)丁-1-烯-3-基、環(huán)丁-1，3-二烯-1-基、丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等等；諸如此類(lèi)。
術(shù)語(yǔ)″烷基″具體的是指包括具有任何飽和度或飽和水平的基團(tuán)，即僅具有碳-碳單鍵的基團(tuán)，具有一個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵的基團(tuán)，具有一個(gè)或多個(gè)碳-碳三鍵的基團(tuán)，以及具有碳-碳單鍵、碳-碳雙鍵和碳-碳三鍵混合的基團(tuán)。當(dāng)具體說(shuō)明飽和程度時(shí)，使用″鏈烷基″、″鏈烯基″和″炔基″這樣表示。優(yōu)選地，烷基包括1-20個(gè)碳原子，更優(yōu)選包括1-10個(gè)碳原子，最優(yōu)選包括1-6個(gè)碳原子。
″鏈烷基″本身或作為另一取代基的一部分，是指飽和的、分枝的、直鏈或環(huán)烷基基團(tuán)，是由母體烷烴的單個(gè)碳原子除去一個(gè)氫原子所衍生的。典型的鏈烷基基團(tuán)包括，但不局限于，甲烷基；乙烷基；丙烷基例如丙烷-1-基，丙烷-2-基(異丙基)，環(huán)丙烷-1-基等等；丁烷基例如丁烷-1-基、丁烷-2-基(仲丁基)、2-甲基-丙烷-1-基(異丁基)、2-甲基-丙烷-2-基(叔丁基)、環(huán)丁烷-1-基等等；諸如此類(lèi)。
″鏈烯基″本身或作為另一取代基的一部分，是指具有至少一個(gè)碳-碳雙鍵的不飽和的、分枝的、直鏈或環(huán)烷基基團(tuán)，是由母體烯烴的單個(gè)碳原子除去一個(gè)氫原子所衍生的。該基團(tuán)可以以雙鍵周?chē)捻樖交蚍词綐?gòu)象存在。
典型的鏈烯基基團(tuán)包括，但不局限于，乙烯基；丙烯基例如丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、丙-2-烯-2-基、環(huán)丙-1-烯-1-基、環(huán)丙-2-烯-1-基；丁烯基例如丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1，3-二烯-1-基、丁-1，3-二烯-2-基、環(huán)丁-1-烯-1-基、環(huán)丁-1-烯-3-基、環(huán)丁-1，3-二烯-1-基等等；諸如此類(lèi)。
″炔基″本身或作為另一取代基的一部分，是指具有至少一個(gè)碳-碳三鍵的不飽和的、分枝的、直鏈或環(huán)烷基基團(tuán)，是由母體炔烴的單個(gè)碳原子除去一個(gè)氫原子所衍生的。
典型的炔基基團(tuán)包括，但不局限于，乙炔基；丙炔基例如丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等等；丁炔基例如丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等等；諸如此類(lèi)。
″烷二基″本身或作為另一取代基團(tuán)的一部分，是指飽和的或不飽和的、分枝的、直鏈的或環(huán)狀的二價(jià)烴基團(tuán)，是由母體烷烴、烯烴或炔烴的單個(gè)碳原子除去兩個(gè)氫原子所衍生的。兩個(gè)單價(jià)基團(tuán)中心或二價(jià)基團(tuán)中心的每個(gè)化合價(jià)可以與相同或不同的原子形成鍵。典型的烷二基基團(tuán)包括，但不局限于甲烷二基；乙二基類(lèi)例如乙烷-1，1-二基、乙烷-1，2-二基、乙烯-1，1-二基、乙烯-1，2-二基；丙二基類(lèi)例如丙烷-1，1-二基、丙烷-1，2-二基、丙烷-2，2-二基、丙烷-1，3-二基、環(huán)丙烷-1，1-二基、環(huán)丙烷-1，2-二基、丙-1-烯-1，1-二基、丙-1-烯-1，2-二基、丙-2-烯-1，2-二基、丙-1-烯-1，3-二基、環(huán)丙-1-烯-1，2-二基、環(huán)丙-2-烯-1，2-二基、環(huán)丙-2-烯-1，1-二基、丙-1-炔-1，3-二基等等；丁二基類(lèi)例如丁烷-1，1-二基、丁烷-1，2-二基、丁烷-1，3-二基、丁烷-1，4-二基、丁烷-2，2-二基、2-甲基-丙烷-1，1-二基、2-甲基-丙烷-1，2-二基、環(huán)丁烷-1，1-二基；環(huán)丁烷-1，2-二基、環(huán)丁烷-1，3-二基、丁-1-烯-1，1-二基、丁-1-烯-1，2-二基、丁-1-烯-1，3-二基、丁-1-烯-1，4-二基、2-甲基-丙-1-烯-1，1-二基、2-亞甲烷基-丙烷-1，1-二基、丁-1，3-二烯-1，1-二基、丁-1，3-二烯-1，2-二基、丁-1，3-二烯-1，3-二基、丁-1，3-二烯-1，4-二基、環(huán)丁-1-烯-1，2-二基、環(huán)丁-1-烯-1，3-二基、環(huán)丁-2-烯-1，2-二基、環(huán)丁-1，3-二烯-1，2-二基、環(huán)丁-1，3-二烯-1，3-二基、丁-1-炔-1，3-二基、丁-1-炔-1，4-二基、丁-1，3-二炔-1，4-二基等等；諸如此類(lèi)。當(dāng)舉例說(shuō)明具體的飽和度時(shí)，使用詞語(yǔ)″鏈烷基二基″、″鏈烯基二基″和″炔基二基″。優(yōu)選地，烷二基基團(tuán)是(C1-C20)烷二基，更優(yōu)選(C1-C10)烷二基，最優(yōu)選(C1-C6)烷二基。優(yōu)選的是飽和的非環(huán)狀鏈烷基二基基團(tuán)，其中基團(tuán)中心在未端碳原子上，例如，甲烷二基(亞甲基)；乙烷-1，2-二基(亞乙基)；丙烷-1，3-二基(亞丙基)；丁烷-1，4-二基(亞丁基)；諸如此類(lèi)(也稱(chēng)為亞烷基，在下文進(jìn)行定義)。
″亞烷基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指具有兩個(gè)末端單價(jià)基團(tuán)中心的直鏈烷二基基團(tuán)，其由直鏈的母體烷烴、烯烴或炔烴的兩個(gè)末端碳原子的每一個(gè)除去一個(gè)氫原子后獲得。典型的亞烷基基團(tuán)包括，但不局限于，亞甲基；亞乙基類(lèi)例如亞乙基、亞乙烯基、亞乙炔基；亞丙基類(lèi)例如亞丙基、亞丙[1]烯基、亞丙[1，2]二烯基、亞丙[1]炔基等等。；亞丁基類(lèi)例如亞丁基、亞丁[1]烯基、亞丁[2]烯基、亞丁[1，3]二烯基、亞丁[1]炔基、亞丁[2]炔基、亞丁[1，3]二炔基等等；諸如此類(lèi)。當(dāng)舉例說(shuō)明具體的飽和度時(shí)，使用術(shù)語(yǔ)亞烷基、亞烯基和/或亞炔基。優(yōu)選地，亞烷基基團(tuán)是(C1-C20)亞烷基，更優(yōu)選是(C1-C10)亞烷基，最優(yōu)選是(C1-C6)亞烷基。優(yōu)選的是直鏈飽和的亞烷基基團(tuán)，例如亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基，諸如此類(lèi)。
″?；灞旧砘蜃鳛榱硪蝗〈囊粋€(gè)部分，是指基團(tuán)-C(O)R30，其中R30是如在此所定義的氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、芳烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基。代表性的例子包括，但不局限于，甲酰基、乙?；?、環(huán)己基羰基、環(huán)己基甲基羰基、苯甲?；?、芐基羰基諸如此類(lèi)。
″酰胺基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指基團(tuán)-NR31C(O)R32，其中R31和R32每個(gè)獨(dú)立地是如在此所定義的氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、芳烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基。代表性的例子包括，但不局限于，甲酰氨基、乙酰氨基、環(huán)己基羰基氨基、環(huán)己基甲基-羰基氨基、苯甲酰基氨基、芐基羰基氨基諸如此類(lèi)。
″烷氧基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指基團(tuán)-OR33，其中R33表示如在此定義的烷基或環(huán)烷基基團(tuán)。代表性的例子包括，但不局限于，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環(huán)己氧基等等。
″烷氧羰基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指基團(tuán)-C(O)OR34，其中R34表示如在此定義的烷基或環(huán)烷基基團(tuán)。
″芳基″本身或作為另一取代基的一部分，是指單價(jià)的芳香族烴基團(tuán)，是由母體芳環(huán)體系的單個(gè)碳原子除去一個(gè)氫原子所衍生的。典型的芳基基團(tuán)包括，但不局限于，來(lái)源于醋蒽烯、苊烯、acephenanthrylene、蒽、薁、苯、屈、蔻、熒蒽、芴、并六苯、萘并四并苯、hexalene、as-indacene、s-indacene、茚滿(mǎn)、茚、萘、octacene、octaphene、octalene、卵烯、戊-2，4-二烯、并五苯、并環(huán)戊二烯、戊芬、茈、周萘(phenalene)、菲、二萘品苯、pleiadene、芘、皮蒽、玉紅省、三亞苯、三亞萘等等的基團(tuán)。優(yōu)選地，芳基包括6-20個(gè)碳原子，更優(yōu)選包括6-12個(gè)碳原子。
″芳烷基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指非環(huán)狀的烷基基團(tuán)，其中氫原子中的一個(gè)與一個(gè)碳原子(典型地是末端的或sp3碳原子)相連，被芳基基團(tuán)所代替。典型的芳烷基基團(tuán)包括，但不局限于，芐基、2-苯基乙烷-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘甲基、萘甲基萘甲基2-萘乙烷-1-基、2-萘乙烯-1-基、萘并芐基、2-萘并苯基乙烷-1-基諸如此類(lèi)。當(dāng)舉例說(shuō)明具體的烷基部分時(shí)，可以使用術(shù)語(yǔ)芳基鏈烷基、芳基鏈烯基和/或芳基炔基。優(yōu)選地，芳烷基基團(tuán)是(C6-C30)芳烷基，例如芳烷基基團(tuán)的鏈烷基、鏈烯基或炔基部分是(C1-C10)以及芳基部分是(C6-C20)，更優(yōu)選地，芳烷基基團(tuán)是(C6-C20)芳烷基，例如，芳烷基基團(tuán)的鏈烷基、鏈烯基或炔基部分是(C1-C8)以及芳基部分是(C6-C12)。
″環(huán)烷基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指飽和的或不飽和的環(huán)烷基基團(tuán)。當(dāng)舉例說(shuō)明具體的飽和度時(shí)，可以使用術(shù)語(yǔ)″環(huán)鏈烷基″或″環(huán)鏈烯基″。典型的環(huán)烷基基團(tuán)包括，但不局限于，來(lái)源于環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷諸如此類(lèi)的基團(tuán)。優(yōu)選地，環(huán)烷基基團(tuán)是(C3-C10)環(huán)烷基，更優(yōu)選是(C3-C7)環(huán)烷基。
″環(huán)雜烷基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指飽和的或不飽和的環(huán)烷基基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子(以及任何有關(guān)的氫原子)獨(dú)立地被相同的或不同的雜原子所代替。代替碳原子的典型雜原子包括，但不局限于，N、P、O、S、Si等等。當(dāng)舉例說(shuō)明具體的飽和度時(shí)，可以使用術(shù)語(yǔ)″環(huán)雜鏈烷基″或″環(huán)雜鏈烯基″。典型的環(huán)雜烷基基團(tuán)包括，但不局限于，來(lái)源于環(huán)氧化物、azirines、硫雜丙環(huán)、咪唑烯、嗎啉、哌嗪、哌啶、吡唑烷、吡咯烷、喹核堿諸如此類(lèi)的基團(tuán)。
″雜烷基、雜鏈烷基、雜鏈烯基、雜鏈烷基、雜烷二基和雜亞烷基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，分別是指烷基、鏈烷基、鏈烯基、炔基、烷二基和亞烷基基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子(以及任何有關(guān)的氫原子)每個(gè)獨(dú)立地被相同的或不同的雜原子基團(tuán)所代替?？梢园ㄔ谶@些基團(tuán)中的典型雜原子基團(tuán)包括，但不局限于，-O-、-S-、-O-O-、-S-S-、-O-S-、-NR35R36-、＝N-N＝、-N＝N-、-N＝N-NR37R38、-pR39、-P(O)2-、-POR40-、-O-P(O)2-、-SO-、-SO2-、-SnR41R42等等，其中R35、R36、R37、R38、R39、R40、R41和R42獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜烷基、取代雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基或取代雜芳基烷基。
″雜芳基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指單價(jià)雜芳香族基團(tuán)，其是通過(guò)從母體雜芳香族環(huán)體系的一個(gè)原子上除去一個(gè)氫后獲得的基團(tuán)。典型的雜芳基基團(tuán)包括，但不局限于，來(lái)源于吖啶、砷雜茚、咔唑、β-咔啉、色滿(mǎn)、色烯、噌啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、二氫吲哚、中氮茚、異苯并呋喃、異色烯、異吲哚、異吲哚啉、異喹啉、異噻唑、異唑、萘啶、二唑、唑、泊啶、菲啶、菲咯啉、吩嗪、酞嗪、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、吡唑、噠嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、吡咯嗪、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹喔啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三唑、咕噸等等的基團(tuán)。優(yōu)選地，所述的雜芳基基團(tuán)為5-20元雜芳基，更優(yōu)選為5-10元雜芳基。優(yōu)選的雜芳基基團(tuán)是來(lái)源于噻吩、吡咯、苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、吡啶、喹啉、咪唑、唑和吡嗪的那些。
″雜芳基烷基″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指一種非環(huán)狀的烷基基團(tuán)，其中與一個(gè)碳原子(典型地是末端碳原子或Sp3碳原子)連接的氫原子中的一個(gè)被雜芳基基團(tuán)代替。當(dāng)舉例說(shuō)明具體的烷基部分時(shí)，可以使用術(shù)語(yǔ)雜芳基鏈烷基、雜芳基鏈烯基和/或雜芳基炔基。在優(yōu)選實(shí)施方案中，雜芳基烷基基團(tuán)是6-30元的雜芳基烷基，例如，雜芳基烷基的鏈烷基、鏈烯基或炔基部分是1-10元的以及雜芳基部分是5-20元的雜芳基，更優(yōu)選是6-20元的雜芳基烷基，例如雜芳基烷基的鏈烷基、鏈烯基或炔基部分是1-8元的以及雜芳基部分是5-12元的雜芳基。
″母體芳族環(huán)系″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指不飽和的環(huán)狀或多環(huán)的環(huán)系，所述的環(huán)系具有一個(gè)共軛電子體系。包括在″母體芳族環(huán)系″定義中的具體例子是稠環(huán)系，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)是芳香族的以及一個(gè)或多個(gè)環(huán)是飽和的或不飽和的，例如芴、茚滿(mǎn)、茚、周萘(phenalene)等等。典型的母體芳族環(huán)系包括，但不局限于，醋蒽烯、苊烯、acephenanthrylene、蒽、薁、苯、屈、蔻、熒蒽、芴、并六苯、萘并四并苯、hexalene、as-indacene、s-indacene、茚滿(mǎn)、茚、萘、octacene、octaphene、octalene、卵烯、戊-2，4-二烯、并五苯、并環(huán)戊二烯、戊芬、茈、周萘(phenalene)、菲、二萘品苯、pleiadene、芘、皮蒽、玉紅省、三亞苯、三亞萘等等。
″母體雜芳香族環(huán)系″本身或作為另一取代基的一個(gè)部分，是指一種母體芳族環(huán)系，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子(以及任何有關(guān)的氫原子)獨(dú)立地被相同的或不同的雜原子代替。代替碳原子的典型的雜原子包括，但不局限于，N、P、O、S、Si等等。包括在″母體雜芳香族環(huán)系″定義中的具體例子是稠環(huán)系，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)是芳香族的以及一個(gè)或多個(gè)環(huán)是飽和的或不飽和的，例如砷雜茚、苯并二烷、苯并呋喃、色滿(mǎn)、色烯、吲哚、二氫吲哚、咕噸等等。典型的母體雜芳香族環(huán)系包括，但不局限于，砷雜茚、咔唑、β-咔啉、色滿(mǎn)、色烯、噌啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、二氫吲哚、中氮茚、異苯并呋喃、異色烯、異吲哚、異吲哚啉、異喹啉、異噻唑、異唑、萘啶、二唑、唑、泊啶、菲啶、菲咯啉、吩嗪、酞嗪、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、吡唑、噠嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、吡咯嗪、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹喔啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三唑、咕噸等等。
″藥學(xué)上可接受的鹽″是指本發(fā)明化合物的一種鹽，其具有母體化合物所需的藥理學(xué)活性。這些鹽包括(1)酸加成鹽，與無(wú)機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等等形成的；或與有機(jī)酸例如乙酸、丙酸、己酸、環(huán)戊烷丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋(píng)果酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、偏桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環(huán)[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羥萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、粘康酸等等形成的；或者(2)當(dāng)母體化合物中存在酸質(zhì)子時(shí)，酸質(zhì)子被金屬離子例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子代替后形成的鹽；或者是與有機(jī)堿例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基甲基葡糖胺等等配位的鹽。
″藥學(xué)上可接受的媒介物″是指與本發(fā)明化合物一起服用的稀釋劑、助劑、賦形劑或載體。
″患者″包括人。術(shù)語(yǔ)″人″和″患者″在此可互換使用。
″預(yù)防″是指減少患疾病或病癥的危險(xiǎn)(即，在易受疾病感染的、但還沒(méi)有遭受或出現(xiàn)該疾病癥狀的患者中，不會(huì)導(dǎo)致該疾病的至少一種臨床癥狀的形成)。
″前藥″是指藥物分子的一種衍生物，其在體內(nèi)需要經(jīng)轉(zhuǎn)化，以釋放出活性藥物。在轉(zhuǎn)化為母體藥物之前，前藥通常是，盡管不一定是，藥理學(xué)惰性的。例如，含羥基的藥物可以轉(zhuǎn)化成磺酸酯、酯、或碳酸酯前藥，其在體內(nèi)可以水解形成羥基化合物。例如，含氨基的藥物可以轉(zhuǎn)化成氨基甲酸酯、酰胺、烯胺、亞胺、N-膦?；-磷?；騈-亞磺酰基前藥，其在體內(nèi)可以水解形成氨基化合物。羧酸藥物可以轉(zhuǎn)化成酯(包括甲硅烷基酯和硫代酸酯)、酰胺或酰肼前藥，其在體內(nèi)水解形成羧酸化合物。官能團(tuán)不同于上面所列那些的藥物的前藥是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所公知的。
″前部分″是指一種形式的保護(hù)基，當(dāng)用于掩蔽藥物分子內(nèi)的官能團(tuán)時(shí)，將藥物轉(zhuǎn)化為前藥。典型地，前部分通過(guò)鍵附著于藥物上，通過(guò)體內(nèi)酶催化方法或非酶催化方法裂解該鍵。
″保護(hù)基″是指一些原子形成這樣的一種基團(tuán)，當(dāng)其附著于分子的活性官能團(tuán)時(shí)，掩蔽、降低或防止官能團(tuán)的活性。
保護(hù)基的例子可以在Green等人″Protective Groups in OrganicChemistry″，(Wiley，第二版1991)和Harrison等人″Compendium of SyntheticOrganic Methods″，Vols.1-8(John Wiley and Sons，1971-1996)中找到。代表性的氨基保護(hù)基包括，但不局限于，甲?；?、乙?；?、三氟乙酰基、芐基、芐氧羰基(″CBZ″)、叔丁氧羰基(″Boc″)、三甲基甲硅烷基(″TMS″)、2-三甲基甲硅烷基-乙磺?；?″SES″)、三苯甲基和取代三苯甲基、烯丙氧羰基、9-芴甲氧羰基(″FMOC″)、硝基-藜蘆氧羰基(″NVOC″)等等。代表性的羥基保護(hù)基包括，但不局限于，其中羥基被?；蛲榛哪切├缙S基、三苯甲基醚和烷基醚、四氫吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚和烯丙基醚。
″取代的″是指一個(gè)基團(tuán)中一個(gè)或多個(gè)氫原子獨(dú)立地被相同的或不同的取代基所代替。典型的取代基包括，但不局限于，-M、-R60、-O-、＝O、-OR60、-SR60、-S-、＝S、-NR60R61、＝NR60、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)2O-、-S(O)2OH、-S(O)2R60、-OS(O2)O-、-OS(O)2R60、-P(O)(O-)2、-P(O)(OR60)(O-)、-OP(O)(OR60)(OR61)、-C(O)R60、-C(S)R60、-C(O)OR60、-C(O)NR60R61、-C(O)O-、-C(S)OR60、-NR62C(O)NR60R61、-NR62C(S)NR60R61、-NR62C(NR63)NR60R61和-C(NR62)NR60R61其中M獨(dú)立地是鹵素；R60、R61、R62和R63獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基R60和R61與其相連的氮原子一起形成環(huán)雜烷基環(huán)或取代環(huán)雜烷基環(huán)；以及R64和R65獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、芳基、取代芳基、雜芳基或取代雜芳基，或者任選地R64和R65與其相連的氮原子一起形成環(huán)雜烷基環(huán)或取代環(huán)雜烷基環(huán)。優(yōu)選地，取代基包括-M、-R60、＝O、-OR60、-SR60、-S-、＝S、-NR60R61、＝NR60、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)2R60、-OS(O2)O-、-OS(O)2R60、-P(O)(O-)2、-P(O)(OR60)(O-)、-OP(O)(OR60)(OR61)、-C(O)R60、-C(S)R60、-C(O)OR60、-C(O)NR60R61、-C(O)O-、-NR62C(O)NR60R61，更優(yōu)選的取代基包括-M、-R60、＝O、-OR60、-SR60、-NR60R61、-CF3、-CN、-NO2、-S(O)2R60、-P(O)(OR60)(O-)、-OP(O)(OR60)(OR61)、-C(O)R60、-C(O)OR60、-C(O)NR60R61、-C(O)O-，最優(yōu)選的取代基包括-M、-R60、＝O、-OR60、-SR60、-NR60R61、-CF3、-CN、-NO2、-S(O)2R60、-OP(O)(OR60)(OR61)、-C(O)R60、-C(O)OR60、-C(O)O-，其中R60，R61和R62如上所定義.
任何疾病或病癥的″治療″，在一種實(shí)施方案中，是指改善疾病或病癥(即，阻止或降低疾病的發(fā)展或其至少一種臨床癥狀的發(fā)展)。在另一種實(shí)施方案中，″治療″是指改善至少一種不能夠被患者識(shí)別的身體參數(shù)。在還有一種實(shí)施方案中，″治療″是指在身體上(例如穩(wěn)定一種可識(shí)別的癥狀)或在生理上(例如穩(wěn)定一種身體參數(shù))或同時(shí)抑制疾病或病癥。在還有另一種實(shí)施方案中，″治療″是指推遲疾病或病癥的發(fā)生。
″治療有效量″是指一種化合物的數(shù)量，當(dāng)給患者用于治療一種疾病時(shí)，該量足以對(duì)治療這種疾病產(chǎn)生作用?！逯委熡行Я俊鍖㈦S化合物、疾病以及其嚴(yán)重程度、以及所治療患者的年齡、體重等等而改變。
現(xiàn)在，將詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。雖然本發(fā)明通過(guò)優(yōu)選的實(shí)施方案進(jìn)行說(shuō)明，但是本發(fā)明當(dāng)然并不限于那些優(yōu)選實(shí)施方案。相反，它應(yīng)當(dāng)覆蓋可以包括在所附權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的構(gòu)思和范圍內(nèi)的各種替換、修飾和同等物。
結(jié)構(gòu)式(I)的化合物在第一實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包括結(jié)構(gòu)式(I)的化合物
或其溶劑化物或水合物或N-氧化物，其中R1、R2、R3、R5、R6和R7獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基；R4和R8獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基、或者當(dāng)N是芳環(huán)的一個(gè)部分時(shí)為不存在；任選地，R1和R2一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起，R6和R7一起以及R6和R8一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R3和R7一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；以及Y-2是(MoS4)-2、(Mo2S12)-2、(Mo2S9)-2、(Mo2S7)-2、(Mo2S8)-2、(Mo2S11)-2、(Mo2S6)-2或(Mo2S13)-2；條件是如果Y是(MoS4)-2以及R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8是相同的，那么R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中的每一個(gè)不是氫、甲基、乙基或正丙基。
在一種實(shí)施方案中，Y是(MoS4)-2。在另一種實(shí)施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8不是烷基。
在還有另一種實(shí)施方案中， 優(yōu)選地，Y是(MoS4)-2。
在一種實(shí)施方案中，R1、R2、R3和R4至少之一不是烷基。在另一種實(shí)施方案中，R1、R2和R4是氫、鏈烷基或取代鏈烷基。優(yōu)選地，R1、R2和R4是氫、甲基或乙基。
在還有另一種實(shí)施方案中，R1和R2是鏈烷基。優(yōu)選地，R1和R2是甲基或乙基。
在還有另一種實(shí)施方案中，R1鏈烷基、取代鏈烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基或取代環(huán)烷基。優(yōu)選地，R1和R2一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。更優(yōu)選地，R1和R2一起是亞烷基或雜亞烷基。
在還有另一種實(shí)施方案中，R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。優(yōu)選地，R1和R2一起、R2和R3一起以及R2和R4一起是亞烷基。優(yōu)選地，R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 在還有另一種實(shí)施方案中，R3和R7一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。優(yōu)選地，R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。
在還有另一種實(shí)施方案中，R1、R2和R4是氫、鏈烷基或取代鏈烷基，以及R3是烷基、取代烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基，或者R3和R7一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。優(yōu)選地，R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3是烷基、取代烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基，或者R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。優(yōu)選地，R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3是烷基、取代烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或環(huán)烷基。
在還有另一種實(shí)施方案中，R1(R2)(R3)(R4)N是 或 在還有另一種實(shí)施方案中，R1(R2)(R3)(R4)N是
在還有另一種實(shí)施方案中，R1(R2)(R3)(R4)N是 在還有另一種實(shí)施方案中，R1、R2和R4是甲基或乙基以及R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。優(yōu)選地，R1(R2)(R2)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或 在還有另一種實(shí)施方案中，R1、R2和R4是氫以及R3是取代烷基、環(huán)烷基或取代雜芳基，或者R3和R7一起是亞烷基。在還有另一種實(shí)施方案中，R1和R2是鏈烷基以及R3和R4是烷基、取代烷基、芳基、芳烷基或亞烷基。優(yōu)選地，R1和R2是甲基或乙基，以及R4是烷基、取代烷基、芳基、芳烷基或亞烷基。
在還有另一種實(shí)施方案中，R1(R2)(R3)(R4)N是
或 其中R9是各種具有至少8個(gè)碳原子并且不超過(guò)18個(gè)碳原子的直鏈鏈烷基基團(tuán)的混合物。
在還有另一種實(shí)施方案中，R1、R2和R4是氫，以及R3是取代烷基、取代雜芳基、環(huán)烷基或亞烷基。優(yōu)選地，R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或 在還有另一種實(shí)施方案中，R1和R2一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基，R3是烷基或取代烷基，以及R4是氫或不存在。優(yōu)選地，R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或 本發(fā)明化合物的合成本發(fā)明的化合物可以通過(guò)方案1和2中所示的常規(guī)合成方法獲得。用于制備本發(fā)明化合物的原料及其中間體是市場(chǎng)上可買(mǎi)到的，或者它們可以通過(guò)眾所周知的合成方法進(jìn)行制備。例如，硫代鉬酸銨可以從眾所周知的化學(xué)試劑供應(yīng)商那里購(gòu)買(mǎi)(例如，Aldrich Chemical Company，Milwaukee，WI)。取代銨鹽(例如，氫氧化銨和鹵化銨)可以從市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)得到，或者可以使用眾所周知的合成方法很容易地進(jìn)行合成(Harrison et al.，″有機(jī)合成摘要(Compendium of Synthetic Organic Methods)，″Vols.1-8(John Wiley andSons，1971-1996)；″有機(jī)化學(xué)Beilstein手冊(cè)(Beilstein Handbook of OrganicChemistry)″，Beilstein有機(jī)化學(xué)研究所(Beilstein Institute of Organic Chemistry)，F(xiàn)rankfurt，Germany；Feiser et al.″，有機(jī)合成的試劑(Reagents forOrganic Synthesis)，″Volumes 1-17，Wiley Interscience；Trost et al.，″有機(jī)合成綜述(Comprehensive Organic Synthesis)″，Pergamon Press，1991；″Theiheimer′s有機(jī)化學(xué)合成方法″，Volumes 1-45，Karger，1991；March，″高級(jí)有機(jī)化學(xué)(Advanced Organic Chemistry)”，Wiley Interscience，1991；Larock″有機(jī)轉(zhuǎn)化綜述(Comprehensive Organic Transformations)″，VCH Publishers，1989；Paquette，″有機(jī)合成反應(yīng)試劑百科全書(shū)(Encyclopedia of Reagents for OrganicSynthesis)″，John Wiley & Sons，1995)。在此所述的化合物和/或原料的其它合成方法或者已經(jīng)在本領(lǐng)域中進(jìn)行了描述，或者對(duì)本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。因此，方案1和2的方法是舉例而不是全面綜述。
方案1 如上所述，在方案1中，將氫氧化季銨加入到在水存在下的硫代鉬酸鹽中，引起陽(yáng)離子交換(通過(guò)除去揮發(fā)性氨來(lái)驅(qū)動(dòng)產(chǎn)物平衡)，獲得所需的硫代鉬酸鹽衍生物。
方案2 如上所述，在方案2中，將鹵化季銨加入到在乙腈存在下的硫代鉬酸鹽中，引起陽(yáng)離子交換(通過(guò)生成鹵化銨驅(qū)動(dòng)來(lái)產(chǎn)物平衡)，獲得所需的硫代鉬酸鹽衍生物。
銨抗衡離子不同的硫代鉬酸鹽衍生物可以由化合物3通過(guò)用一當(dāng)量的另一種銨抗衡離子處理來(lái)制備。這樣的一種反應(yīng)預(yù)期能產(chǎn)生各種產(chǎn)物的統(tǒng)計(jì)學(xué)混合物。
本發(fā)明化合物的測(cè)定本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可以理解，在此所述的用于測(cè)定本發(fā)明化合物活性的體外和體內(nèi)測(cè)定是舉例而不是全面綜述。
內(nèi)皮細(xì)胞遷移的測(cè)定對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞遷移，通過(guò)每個(gè)transwell加200μL的膠原蛋白溶液，用I型膠原蛋白(50ug/mL)涂鋪transwell，然后在37℃下培養(yǎng)過(guò)夜。將transwell裝配在一個(gè)24孔板中，將化學(xué)引誘物(例如，F(xiàn)GF-2)以總體積0.8mL培養(yǎng)基加入到下室中。用無(wú)血清培養(yǎng)基將內(nèi)皮細(xì)胞例如人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(″HUVEC″)，其已經(jīng)用胰蛋白酶從單層培養(yǎng)中脫離，稀釋至約106細(xì)胞/mL的最終濃度，然后將0.2mL這種細(xì)胞懸液加入到每個(gè)transwell的上室中。向上室和下室中加入抑制劑，并在潮濕空氣中在37℃下遷移5小時(shí)。從用DiffQuik染色的板中移去transwell。通過(guò)用藥棉拭子刮除，從所述的上室中除去沒(méi)有遷移的細(xì)胞，然后將膜分離，安放在載玻片上，在高倍視野(400x)下計(jì)數(shù)，以測(cè)定細(xì)胞遷移的數(shù)目。
抗侵襲活性的生物測(cè)定對(duì)本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物進(jìn)行抗侵襲能力測(cè)試。在一種測(cè)定中，即Matrigel侵襲測(cè)定中，測(cè)定細(xì)胞例如內(nèi)皮細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞(例如，PC-3人前列腺癌)細(xì)胞通過(guò)重組基膜(Matrigel)侵襲的能力(Kleinman et al.，Biochemistry 1986，25312-318；Parish et al.，Int.J Cancer 1992，52378-383)。Matrigel是一種含IV型膠原蛋白、層粘連蛋白、硫酸類(lèi)肝素蛋白多糖例如基膜蛋白多糖的重組基膜，其與bFGF、玻璃粘連蛋白和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGFβ，尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑(uPA)、組織纖維蛋白溶酶原激活劑(tPA)和絲氨酸蛋白酶抑制劑即纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑1型(PAI-1))結(jié)，合并定位(Chambers et al.，Canc.Res.1995，551578-1585)。對(duì)于將細(xì)胞外受體或酶作為靶向的化合物，在本測(cè)定中獲得的結(jié)果通?？梢灶A(yù)測(cè)這些化合物在體內(nèi)的效力(Rabbani et al.，1995，Int.J.Cancer 63840-845)。
這些測(cè)定使用transwell組織培養(yǎng)插入物。侵襲細(xì)胞定義為能夠通過(guò)Matrigel和聚碳酸酯膜的上部并與膜的底部粘連的細(xì)胞。含聚碳酸酯膜(8.0μm孔徑)的transwell(Costar)用Matrigel涂鋪(Collaborative Reserach)，其中Matrigel已經(jīng)在無(wú)菌PBS中稀釋至75μg/mL的最終濃度(每個(gè)插入物60μL的稀釋Matrigel)，然后將其放在24孔板的孔中。所述的膜在生物學(xué)安全工作櫥中干燥過(guò)夜，然后通過(guò)加入100μL含抗生素的DMEM，在振動(dòng)臺(tái)上再水化1小時(shí)。通過(guò)抽吸從每個(gè)插入物中除去DMEM，將0.8mLDMEM/10％ FBS/抗生素加入到24孔板的每個(gè)孔中，這樣使它圍繞在transwell的外圍(″下室″)。將新鮮的DMEM/抗生素(100μL)、人谷氨酸-纖維蛋白溶酶原(5μ/mL)以及任何測(cè)試抑制劑加入到上部，transwell的內(nèi)部(″上室″)。對(duì)測(cè)試細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶化，接著再懸浮在DMEM/抗生素中，然后以800,000細(xì)胞/mL的最終濃度將其加入到transwell的上室中。將上室的最終體積調(diào)節(jié)至200μL。然后，將裝配板在潮濕的5％ CO2空氣中培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)后，固定細(xì)胞，用DiffQuik(吉姆沙染色劑)進(jìn)行染色，然后使用藥棉拭子刮擦上室以除去Matrigelt和任何沒(méi)有侵襲通過(guò)膜的細(xì)胞。使用X-acto刀片將膜從transwell中分離，將其安裝在使用Permount和蓋片的載玻片上，然后在高倍視野(400x)下進(jìn)行計(jì)數(shù)。由5-10倍視野計(jì)數(shù)確定被侵襲細(xì)胞的平均值，并作為抑制劑濃度的函數(shù)進(jìn)行繪圖。
抗血管生成活性的管形成測(cè)定在兩種不同的體外測(cè)定體系中，可以對(duì)本發(fā)明化合物進(jìn)行抗血管生成活性的測(cè)試。將內(nèi)皮細(xì)胞，例如，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(″HUVEC)或人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(″HMVEC″)其可以制備得到或者從商業(yè)上購(gòu)買(mǎi)得到，以2×105細(xì)胞/mL的濃度與纖維蛋白原(5mg/mL在磷酸鹽緩沖鹽水(″PBS″)中以1∶1(v/v)的比例混合。加入凝血酶(5單位/mL最終濃度)，然后將混合物立即轉(zhuǎn)入到24孔板中(每孔0.5mL)。使其生成血纖維蛋白凝膠，然后將VEGF和bFGF與測(cè)試化合物一起加入到所述的孔(每個(gè)孔的最終濃度為5ng/mL)。細(xì)胞在37℃在5％ CO2中培養(yǎng)4天，在此期間，對(duì)每個(gè)孔中的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并將其分類(lèi)為圓的、不帶分枝的長(zhǎng)的、帶分枝的長(zhǎng)的、或者帶有兩個(gè)或更多個(gè)分枝的長(zhǎng)的。結(jié)果用化合物每一濃度的5個(gè)不同孔的平均值來(lái)表示。典型地，在血管生成抑制劑存在下，細(xì)胞保持圓形的或形成未分化的管(例如，0或1個(gè)分枝)。這種測(cè)定法在本領(lǐng)域中被認(rèn)為可以用于預(yù)測(cè)體內(nèi)血管生成(或抗血管生成)的效力(Min et al.，Cancer Res.1996 562428-2433)。
在一種可供選擇的測(cè)定法中，當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞在Matrigel中進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，可以觀察到內(nèi)皮細(xì)胞管的形成(Schnaper et al.，J.Cell.Physiol.1995165107-118)。將內(nèi)皮細(xì)胞(1×104細(xì)胞/孔)轉(zhuǎn)移到涂敷有Matrigel的24孔板中，48小時(shí)后，確定管形成的數(shù)量。通過(guò)與內(nèi)皮細(xì)胞同時(shí)加入或在其后的不同時(shí)間點(diǎn)上加入，對(duì)抑制劑進(jìn)行測(cè)試。也可以通過(guò)加入血管生成生長(zhǎng)因子例如bFGF或VEGF、分化刺激劑(例如PMA)或其組合，來(lái)刺激管的形成。
通過(guò)將特定類(lèi)型的基膜出現(xiàn)在內(nèi)皮細(xì)胞中，這種測(cè)定法模擬血管生成，即可以預(yù)見(jiàn)遷移和分化內(nèi)皮細(xì)胞的基質(zhì)層首先相遇。除結(jié)合生長(zhǎng)因子外，在Matrigel(以及在基膜原位中)中發(fā)現(xiàn)的基質(zhì)組分或其蛋白水解物也可能刺激內(nèi)皮細(xì)胞的管形成，這使得這種模型對(duì)前面所述的血纖維蛋白凝膠血管生成模型構(gòu)成互補(bǔ)(Blood et al.，Biochim.Biophys.Acta 1990，103289-118；Odedra et al.，Pharmac.Ther.1991，49111-124)。在兩種測(cè)定法中，本發(fā)明化合物抑制內(nèi)皮細(xì)胞管形成，其表明所述的化合物還具有抗血管生成活性。
抑制增殖的測(cè)定本發(fā)明化合物抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力可以在96孔板中進(jìn)行測(cè)定。用I型膠原(明膠)涂敷所述板的孔(0.1-1mg/mL，在PBS中，每孔0.1mL，在室溫下30分鐘)。將所述的板洗滌(3x w/PBS)后，每孔平鋪3-6,000細(xì)胞，讓其在內(nèi)皮生長(zhǎng)培養(yǎng)基(EGM；Clonetics)或含0.1-2％FBS的M199培養(yǎng)基中附著4小時(shí)(37℃/5％CO2)。4小時(shí)后，除去培養(yǎng)基任何未附著的細(xì)胞，向每個(gè)孔中加入含bFGF(1-10ng/mL)或VEGF(1-10ng/mL)的新鮮培養(yǎng)基。最后加入測(cè)試化合物，將板培養(yǎng)(37℃/5％CO2)24-48小時(shí)。向每個(gè)孔中加入MTS(Promega)，然后培養(yǎng)1-4小時(shí)。然后，測(cè)定490nm處的吸光度，其與細(xì)胞數(shù)目成正比，以確定在對(duì)照組孔和那些含測(cè)試化合物孔之間增殖的差異。用培養(yǎng)粘附腫瘤細(xì)胞，可以建立類(lèi)似的測(cè)定體系。但是，在這種形式中，可以省略膠原。平鋪腫瘤細(xì)胞(例如，3,000-10,000/孔)，然后使其粘附過(guò)夜。然后，向孔中加入無(wú)血清培養(yǎng)基，細(xì)胞同步24小時(shí)。然后，向每個(gè)孔中加入含10％FBS的培養(yǎng)基，以刺激增殖。在一些孔中加入測(cè)試化合物。24小時(shí)后，將MTS加入到板中，形成測(cè)試，然后如上所述那樣進(jìn)行讀數(shù)。還可以使用相似的方法以評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物對(duì)其它細(xì)胞類(lèi)型(包括腫瘤細(xì)胞)增殖的作用，除了VEGF和bFGF沒(méi)有用來(lái)刺激細(xì)胞生長(zhǎng)之外。如果有證據(jù)表明抗增殖活性，可以使用TumorTACS(Genzyme)測(cè)定細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)。
細(xì)胞毒性的測(cè)定可以測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)各種細(xì)胞類(lèi)型包括腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。
一種典型的測(cè)定法包括在96孔板中以5-10,000細(xì)胞每孔的密度平鋪細(xì)胞。以各種濃度加入測(cè)試化合物，并與細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)。細(xì)胞用培養(yǎng)基洗滌3X。對(duì)于細(xì)胞毒性測(cè)定(測(cè)定細(xì)胞溶解作用)，使用Promega 96孔細(xì)胞毒性試劑盒。
角膜的血管生成模型所使用的方案基本上與Volpert等人，J.Clin.Invest.1996，98671-679中所述的相同。簡(jiǎn)要地說(shuō)，將雌性費(fèi)希爾老鼠(120-140gms)麻醉，然后將由Hydron、bFGF(150nM)和測(cè)試化合物組成的小球植入到很小的切口中，該切口在1.0-1.5mm的角膜中由limbus制得。
移植后第5天和第7天，評(píng)價(jià)新血管生成。在第7天，將動(dòng)物麻醉，灌輸一種染料例如膠體碳，以對(duì)血管進(jìn)行染色。然后，使動(dòng)物安樂(lè)死，角膜用福爾馬林，將角膜弄平，拍照，評(píng)價(jià)新血管生成的程度。通過(guò)對(duì)總的血管面積或長(zhǎng)度進(jìn)行成像，或者簡(jiǎn)單地通過(guò)對(duì)血管進(jìn)行計(jì)數(shù)，可以確定新血管的數(shù)量。
Matrigel栓塞測(cè)定此測(cè)定法基本上如Passaniti等人，Lab Invest.1992，67519-528所述那樣進(jìn)行。冰冷的Matrigel(例如，500μL)(Collaborative Biomedical Products，Inc.，Bedford，MA)與肝素(例如，50μg/ml)、FGF-2(例如，400ng/ml)和測(cè)試化合物混合。在某些測(cè)定中，bFGF可以被腫瘤細(xì)胞取代作為血管生成刺激物。將Makigel混合物皮下注射到4-8周大小的無(wú)胸腺的裸鼠，注射部位在腹部中線(xiàn)附近，優(yōu)選每只老鼠進(jìn)行三次注射。注入的Matrigel形成明顯的固體凝膠。如此選擇注射部位以致每只動(dòng)物接受陽(yáng)性對(duì)照栓塞(例如FGF-2+肝素)、陰性對(duì)照栓塞(例如，緩沖液+肝素)以及包括對(duì)血管生成起作用的測(cè)試化合物的栓塞(例如，F(xiàn)GF-2+肝素+化合物)。所有處理優(yōu)選一式三份。在注射后約第7天或者在觀察血管生成最佳的另外時(shí)間，通過(guò)頸部脫位處死動(dòng)物。沿腹部中線(xiàn)剝離鼠皮，回收Makigel栓塞，并立即在高分辨率下進(jìn)行掃描。然后，將栓塞分散在水中并在37℃下培養(yǎng)過(guò)夜。使用德臘布金溶液(例如，從Sigma處獲得)根據(jù)廠商的指示，測(cè)定血紅蛋白(Hb)含量。由于栓塞中Hb的數(shù)量反映樣品中血液的數(shù)量，因此栓塞中Hb的數(shù)量是測(cè)定血管生成的一種間接方法。此外，另一種方法，在將動(dòng)物處死前，向其注射0.1ml含與一個(gè)熒光基團(tuán)共軛的高分子量右旋糖酐的緩沖液(優(yōu)選PBS)。在分散栓塞中熒光的數(shù)量，熒光測(cè)定的，也可以作為一種栓塞中血管生成的測(cè)定方法。用mAb抗-CD31(CD31是血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子或″PECAM″)染色還可以用來(lái)證實(shí)栓塞中新血管生成和微血管密度。
雞胚絨毛尿囊膜(CAM)血管生成測(cè)定此測(cè)定法基本上如Nguyen等人，Microvascular Res.1994，4731-40所述那樣進(jìn)行。將含血管生成因子(bFGF)或腫瘤細(xì)胞加抑制劑的網(wǎng)眼放到8-天大的雞胚的CAM上，在植入樣品后第3-9天，觀察CAM。通過(guò)測(cè)定含血管的網(wǎng)眼中正方形的百分比，來(lái)確定血管生成的數(shù)量。
使用Matrigel腫瘤細(xì)胞栓塞測(cè)定法，在體內(nèi)評(píng)價(jià)血管生成抑制作用和抗腫瘤作用在此測(cè)定中，腫瘤細(xì)胞，例如將3LL路易士肺癌或老鼠前列腺細(xì)胞系MatLyLu的1-5×106細(xì)胞與Matrigel混合，然后根據(jù)在上面5.4.7節(jié)中所述方案，將其注射到老鼠的側(cè)腹中。約5-7天后，在栓塞中可以觀察到大量的腫瘤細(xì)胞和強(qiáng)大的血管生成反應(yīng)。在真實(shí)的腫瘤環(huán)境中，化合物的抗腫瘤和抗血管生成作用可以通過(guò)將所述的化合物包含在栓塞中進(jìn)行評(píng)價(jià)。然后，測(cè)定形成的腫瘤重量、Hb含量或熒光含量(在處死前，注入右旋糖酐-熒光基團(tuán)共軛物)。為了測(cè)定Hb或熒光，首先，將所述的栓塞用組織勻漿器勻漿。
皮下腫瘤生長(zhǎng)的異種移植模型在裸鼠的右側(cè)腹，給所述的動(dòng)物皮下接種MDA-MB-231細(xì)胞(人乳癌)和Matrigel(1×106細(xì)胞，在0.2mL中)。腫瘤成長(zhǎng)至200mm3，然后開(kāi)始用測(cè)試化合物進(jìn)行處理。每隔一天測(cè)量腫瘤的體積，處理2周后處死所述的動(dòng)物。切除腫瘤，稱(chēng)重并埋入石蠟中。通過(guò)H和E、抗-CD31、Ki-67、TUNEL和CD68染色，分析腫瘤的組織切片。
其它人腫瘤細(xì)胞系，包括但不局限于PC-3、CWR22R、SK-OV-3、A2780、A549、HCT116、HT29也可以按類(lèi)似方式用來(lái)測(cè)試本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性。
轉(zhuǎn)移的異種移植模型使用實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移模型(Crowley et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993，905021-5025)，本發(fā)明的化合物還可以用來(lái)測(cè)試對(duì)晚期轉(zhuǎn)移的抑制。晚期轉(zhuǎn)移包括腫瘤細(xì)胞的附著和外滲、局部侵襲、接種、增殖和血管生成。將用指示基因轉(zhuǎn)染，優(yōu)選用綠色熒光蛋白(GFP)基因轉(zhuǎn)染的人前列腺癌細(xì)胞(PC-3)，但是作為一種可供選擇的方法，用編碼酶氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)、熒光素酶或LacZ的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)染的人前列腺癌細(xì)胞(PC-3)接種到裸鼠中。這種方法允許利用這些標(biāo)記(GFP的熒光檢測(cè)或酶活性的組織化學(xué)比色檢測(cè))中的任何一個(gè)以跟蹤這些細(xì)胞的命運(yùn)。注射細(xì)胞，優(yōu)選i.v.，約14天后確定轉(zhuǎn)移，特別是在肺中，但是也在局部淋巴結(jié)、股骨和大腦中。這模擬在人前列腺癌中天然存在的轉(zhuǎn)移的器官趨向性。例如，將GFP-表達(dá)的PC-3細(xì)胞(每只老鼠1×106細(xì)胞)i.v.注射到裸(nu/nu)鼠的尾部靜脈中。以100μg/動(dòng)物/天的劑量每天通過(guò)IP給予動(dòng)物測(cè)試組合物。觀察單一轉(zhuǎn)移性細(xì)胞和病灶，并且通過(guò)熒光顯微術(shù)或光學(xué)顯微鏡組織化學(xué)，或者通過(guò)研磨組織并定量比色測(cè)定可測(cè)的標(biāo)記，進(jìn)行定量測(cè)定。
通過(guò)HPRG和功能性衍生物在體內(nèi)抑制自發(fā)轉(zhuǎn)移老鼠同源乳腺癌系(Xing et al.，Int.J.Cancer 67423-429(1996)使用MatBIII老鼠乳腺癌細(xì)胞。將腫瘤細(xì)胞，例如約106懸浮在0.1mL PBS中，接種到雌性費(fèi)希爾老鼠乳房的脂肪墊中。在接種的時(shí)候，腹膜內(nèi)植入一種14天的Alza滲透微泵以分配測(cè)試化合物。將化合物溶于PBS中(例如，200mM的儲(chǔ)備液)，過(guò)濾除菌，并將其放在微型泵中以獲得約4mg/kg/天的釋放速度。對(duì)照組動(dòng)物僅僅接受在微型泵中的媒介物(PBS)或空白對(duì)照肽。在大約第14天的時(shí)候處死動(dòng)物。
實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移的其它模型也可以用來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物。這些模型利用上文所述的人腫瘤細(xì)胞系，對(duì)裸鼠的尾部靜脈進(jìn)行靜脈。典型地，在接種腫瘤細(xì)胞28天后處死這些老鼠，在它們的肺中評(píng)價(jià)是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。
3LL路易士肺癌原發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)在1951年，這種腫瘤系在C57BL/6老鼠中作為肺癌自發(fā)形成(CancerRes.1955，1539.See，also Malave et al.，J.Nat′l.Canc.Inst.1979，6283-88)。通過(guò)皮下接種，在C57BL/6老鼠中通過(guò)傳代進(jìn)行繁殖，并且在半同種異源的C57BL/6×DBA/2 F1老鼠中或在異源的C3H老鼠中進(jìn)行測(cè)試。典型地，對(duì)于皮下植入，每組使用六只動(dòng)物，或者對(duì)于肌肉注射植入，每組使用十只動(dòng)物。腫瘤可以以2-4mm片段進(jìn)行皮下接種，或者可以以約0.5-2×106細(xì)胞的懸浮細(xì)胞的接種物進(jìn)行肌肉注射植入或皮下植入。植入24小時(shí)后開(kāi)始進(jìn)行治療，或者直到獲得指定大小的腫瘤(通常約400mg)后才開(kāi)始進(jìn)行治療。每天腹膜內(nèi)給予測(cè)試化合物，連續(xù)給藥11天。
接著對(duì)動(dòng)物進(jìn)行稱(chēng)重、觸診并測(cè)定腫瘤大小。在未經(jīng)治療的對(duì)照組受試動(dòng)物中，肌內(nèi)接種12天后，典型的腫瘤重量為500-2500mg。典型的平均存活時(shí)間為18-28天。在第1-11天，使用陽(yáng)性對(duì)照化合物，例如環(huán)磷酰胺以20mg/kg/注射每天。計(jì)算的結(jié)果包括平均動(dòng)物體重、腫瘤大小、腫瘤重量、存活時(shí)間。為了證實(shí)治療活性，應(yīng)該在兩種多劑量測(cè)定中對(duì)測(cè)試組合物進(jìn)行測(cè)試。
3LL路易士肺癌初生生長(zhǎng)和自發(fā)轉(zhuǎn)移模型此模型已經(jīng)被許多研究者使用(Gorelik et al.，1980，J.Nat′l.Canc.Inst.651257-1264；Gorelik et al.，1980，Rec.Results Canc.Res.7520-28；Isakov etal.，InvasionMetas.1982，212-32；Talmadge et al.，J.Nat′l.Canc.Inst.1982，69975-980；Hilgard et al.，Br.J.Cancer 1977，3578-86)。測(cè)試?yán)鲜笫切坌訡57BL/6老鼠，2-3個(gè)月大。皮下注射、肌內(nèi)注射或足墊內(nèi)植入后，此腫瘤引起轉(zhuǎn)移，優(yōu)選在肺中。對(duì)于某些腫瘤系，原發(fā)性腫瘤起抗轉(zhuǎn)移作用，因此在進(jìn)行轉(zhuǎn)移階段研究之前，首先必須切除原發(fā)性腫瘤(美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,639,725)。
通過(guò)用0.3％的胰蛋白酶溶液處理切碎的腫瘤組織，從實(shí)體瘤中制備得到單細(xì)胞懸浮液。細(xì)胞用PBS(pH 7.4)洗滌3次，然后將其懸浮在PBS中。以這種方式制得的3LL細(xì)胞的成活力通常為約95-99％(由臺(tái)盼藍(lán)染料排除)。將懸浮在0.05ml PBS中的活腫瘤細(xì)胞(3×104-5×106)進(jìn)行皮下注射，或者注射到C57BL/6老鼠的背部或其腳墊的后部。背部皮下注射106細(xì)胞3-4天后，可以觀察到腫瘤的出現(xiàn)。出現(xiàn)腫瘤的日子并每隔一天用卡尺測(cè)量已確立的腫瘤的直徑。
治療為每周給予一個(gè)或兩個(gè)劑量的肽或衍生物。在另一種實(shí)施方案中，所述的肽通過(guò)滲透微型泵給予。
在背部腫瘤切除的實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)腫瘤達(dá)到約1500mm3大小時(shí)，將老鼠隨機(jī)分為兩組(1)徹底切除原發(fā)性腫瘤；或(2)進(jìn)行假手術(shù)并原封不動(dòng)的保留腫瘤。雖然500-3000mm3的腫瘤抑制轉(zhuǎn)移的生長(zhǎng)，但是1500mm3是最大尺寸的原發(fā)性腫瘤，其在高存活率和沒(méi)有局部再生長(zhǎng)的情況下可以安全地被切除。21天后，處死所有老鼠，并進(jìn)行尸體解剖。
除去肺并稱(chēng)其重量。將肺固定在布安溶液中，記錄可見(jiàn)轉(zhuǎn)移的數(shù)目。還使用裝有含千分尺的目鏡的雙目立體鏡，在8X放大倍數(shù)下，測(cè)定轉(zhuǎn)移的直徑。在所記錄直徑的基礎(chǔ)上，有可能計(jì)算每個(gè)轉(zhuǎn)移的體積。為了測(cè)定每個(gè)肺中轉(zhuǎn)移的總體積，將可見(jiàn)轉(zhuǎn)移的平均數(shù)乘以轉(zhuǎn)移的平均體積。為了進(jìn)一步測(cè)定轉(zhuǎn)移性生長(zhǎng)，有可能測(cè)定125IdUrd與肺細(xì)胞的結(jié)合(Thakur et al.，J.Lab.Clin.Med.1977，89217-228)。十天后切除腫瘤，將25μg氟脫氧尿嘧啶接種到帶腫瘤的腹膜中(并且，如果使用的話(huà)，切除腫瘤的小鼠)。30分鐘后，小鼠給予1μCi的125IdUrd(碘苷)。再過(guò)一天，除去肺和脾并稱(chēng)重，然后使用γ計(jì)數(shù)器測(cè)定125IdUrd的結(jié)合度。
在帶足墊腫瘤的小鼠中，當(dāng)腫瘤達(dá)到約8-10mm直徑時(shí)，將小鼠隨機(jī)分為兩組(1)膝關(guān)節(jié)以上結(jié)扎后，將帶腫瘤的腿截肢；或(2)小鼠保持原封不動(dòng)，作為未截肢的帶腫瘤對(duì)照組。(在帶腫瘤的小鼠中，無(wú)腫瘤腿的截肢對(duì)隨后的轉(zhuǎn)移沒(méi)有已知的影響，排除了麻醉、應(yīng)激或手術(shù)的可能影響)。截肢后第10-14天殺死小鼠。如上所述那樣對(duì)轉(zhuǎn)移進(jìn)行評(píng)價(jià)。
治療用途根據(jù)本發(fā)明，給患有一種疾病的患者，優(yōu)選為人，服用結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物，這種疾病的特征在于異常血管生成銅代謝紊亂、神經(jīng)變性病癥、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙。異常血管生成包括異常新血管生成例如形成新血管、血管變大、血管出現(xiàn)更多分枝以及任何其它機(jī)理，其導(dǎo)致有病組織或部位的血液承載能力增加。
特征為異常血管生成的疾病包括，但不局限于，癌癥(例如，任何血管化腫瘤，優(yōu)選是一種實(shí)體瘤，包括但不局限于，肺癌、乳房癌、卵巢癌、胃癌、胰腺癌、喉癌、食道癌、睪丸癌、肝癌、腮腺癌、膽道癌、結(jié)腸癌、直腸癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、膀胱癌、前列腺癌、甲狀腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、小細(xì)胞癌、黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、肉瘤(例如血管肉瘤、軟骨肉瘤))、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、動(dòng)脈硬化、動(dòng)靜脈的畸形、角膜移植新血管生成、延遲傷口愈合、糖尿病性視網(wǎng)膜病、與年齡有關(guān)的黃斑變性、肉芽形成、燒傷、血友病性關(guān)節(jié)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肥厚性瘢痕、新生血管性青光眼、不結(jié)合性骨折、Osier韋伯綜合癥、牛皮癬、肉芽瘤、晶狀體后纖維組織形成、翼狀胬肉、硬皮病、沙眼、血管粘連、眼睛的新血管生成、寄生蟲(chóng)病、術(shù)后肥大、頭發(fā)生長(zhǎng)的抑制、黃斑變性(包括濕式和干式)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。在一種實(shí)施方案中，特征在于異常血管生成的疾病是癌癥、黃斑變性和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
此外，根據(jù)本發(fā)明，可以給患有一種與銅代謝紊亂有關(guān)的疾病(例如，威爾遜氏病)為特征的患者，優(yōu)選為人，服用結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物，以對(duì)這樣的疾病進(jìn)行治療。
更進(jìn)一步，根據(jù)本發(fā)明，可以給患者(優(yōu)選人)服用結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物以治療肥胖癥。結(jié)構(gòu)式(I)的化合物還可以用于降低炎性細(xì)胞因子的水平(例如，TNF-α、TNF-β、IL-8等等)，并且纖溶酶原激活物抑制劑，其可能與血管生成和肥胖癥有關(guān)(Loskutoffet al Ann.N.Y.Acad.Sci.，2000，902272-281；Pan et al.，Cancer Res.，2002，624854-4859；Hanada et al.，Cytokine Growth Factor Rev.2002，13413-421；Chen et al.，Science 2002，2961634-5；Miyake et al.，J.Neuropathol.Exp.Neurol.5918-28；Koch et al.，Science 1992，2581798-801；Osawa et al.，Infect.Immun.2002，706294-6301；Bajou et aL，Nat.Med.1998，4 923-8)。
更進(jìn)一步，根據(jù)本發(fā)明，可以給患有一種神經(jīng)變性疾病的患者(優(yōu)選人)服用結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物以治療所述的神經(jīng)變性疾病。在本領(lǐng)域中已經(jīng)報(bào)道，銅含量的提高可以調(diào)節(jié)各種神經(jīng)變性疾病包括阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)和朊病毒病的病理學(xué)(Llanos et al.，DNACell Biol.2002，21259-270；Carri et al.，F(xiàn)unct。Neural 2001，16181-188；Perry etal.，CNSDrugs 2002，16339-352；Kowalik-Jankowska et al.，Eraviron HealthPerspect，2002，5869-870；Maynard et al.，J.Biol.Chem.2002，September4；Gnjec et al.，F(xiàn)ront Biosci.2002，16-23；Strausak et al.，Brain Res.Bull.200155175-185；Brown，Brain Res.Bull.2001，55165-173；Brown，Biochem.Soc.Trans 2002，30742-745)。
更進(jìn)一步，根據(jù)本發(fā)明，可以給患者(優(yōu)選人)服用結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物以治療疾病，所述疾病的特征在于NF-κB的異常調(diào)節(jié)活性或者炎性反應(yīng)的異常調(diào)節(jié)炎癥。
此外，在某些實(shí)施方案中，給患者(優(yōu)選人)服用結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物作為一種抵抗各種疾病或病癥的預(yù)防措施，這些疾病的特征在于異常血管生成、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性病癥、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙。因此，結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物可以用來(lái)預(yù)防一種疾病或病癥并且同時(shí)用來(lái)治療另一種疾病(例如，預(yù)防威爾遜氏病或阿爾茨海默氏病，同時(shí)治療癌癥)。
結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或式(I)化合物的藥物組合物在治療或預(yù)防各種疾病或病癥中的適合性可以通過(guò)本領(lǐng)域中和在此所述的方法進(jìn)行測(cè)定。所述疾病的特征在于異常血管生成、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性病癥、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙。因此，本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員有能力測(cè)定和使用結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物，以治療或預(yù)防異常血管生成、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙。
治療性/預(yù)防性給藥本發(fā)明的化合物和/或其藥物組合物可以有利地在人類(lèi)醫(yī)學(xué)中使用。如上面第5.5節(jié)所述，結(jié)構(gòu)式(1)的化合物和/或其藥物組合物可以用于治療或預(yù)防各種疾病，所述疾病的特征在于異常血管生成、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙。
當(dāng)用于治療或預(yù)防上述疾病或病癥時(shí)，可以單獨(dú)服用或使用本發(fā)明的化合物和/或其藥物組合物，或者可以與其它藥物一起服用或使用。本發(fā)明的化合物和/或其藥物組合物可以單獨(dú)服用或使用，還可以與其它藥物有效劑(例如，其它抗癌藥，其它抗血管生成藥，其它螯合劑例如鋅、青霉胺等等以及其它抗肥胖藥)一起服用或使用，其中所述的其它藥物有效劑包括本發(fā)明的其它化合物。
本發(fā)明提供治療和預(yù)防方法，包括給需要這種治療的患者服用治療有效量的一種藥物組合物和/或本發(fā)明的化合物。所述的患者可以是動(dòng)物，更優(yōu)選是哺乳動(dòng)物，最優(yōu)選是人。
本發(fā)明的化合物和/或本發(fā)明的藥物組合物，其包括一種或多種本發(fā)明的化合物，優(yōu)選為口服給藥。本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物還可以通過(guò)任何其它方便的途徑給藥，例如通過(guò)灌注或彈丸注射，通過(guò)上皮粘膜或皮膚粘膜(例如，口腔粘膜、直腸粘膜和腸粘膜)吸收?？梢匀砘蚓植拷o藥?？梢杂脕?lái)施用本發(fā)明化合物和/或藥物組合物的各種釋放體系是已知的(例如，包封在脂質(zhì)體、微粒、微膠囊、膠囊中)。給藥方法包括，但不局限于，皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜外、口服、舌下、腦內(nèi)、陰道內(nèi)、經(jīng)皮、直腸、吸入，或者局部給藥，特別是局部用于耳、鼻、眼睛或皮膚。優(yōu)選的給藥方式將由醫(yī)師決定，并且部分取決于醫(yī)療病癥的部位。在多數(shù)情況下，給藥將使本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物釋放到血流中。
在特定的實(shí)施方案中，可能希望將本發(fā)明的一種或多種化合物和/或藥物組合物局部地用于需要治療的部位。例如，這可以通過(guò)手術(shù)期間的局部灌注、局部施用例如手術(shù)后與創(chuàng)傷敷料一起使用、通過(guò)注射、通過(guò)導(dǎo)管、通過(guò)栓劑、或通過(guò)植入物而實(shí)現(xiàn)，但是并不受這些方法的限制，其中所述植入物是多孔的、無(wú)孔的或凝膠狀材料，包括膜例如sialastic膜，或纖維。在一種實(shí)施方案中，給藥可以通過(guò)在癌癥或關(guān)節(jié)炎的部位(或形成部位)進(jìn)行直接注射。
在某些實(shí)施方案中，可能希望通過(guò)任何合適的途徑，包括腦室內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外注射，將本發(fā)明的一種或多種化合物和/或藥物組合物引入到中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。例如通過(guò)一根腦室內(nèi)導(dǎo)管與一個(gè)容器例如Ommaya容器相連，可以有助于進(jìn)行腦室內(nèi)注射。
本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物還可以直接吸入肺部。對(duì)于通過(guò)吸入法給藥，本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物可以方便地通過(guò)許多不同裝置被釋放到肺中。例如，一種可計(jì)量的“劑量吸入器”(″MDI″)，其使用含有一種合適低沸點(diǎn)推進(jìn)劑的罐，可以用來(lái)將本發(fā)明的化合物直接給予肺，例如，所述的合適低沸點(diǎn)推進(jìn)劑是二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或任何其它合適氣體。
或者，可以使用干粉吸入(″DPI″)裝置，將本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物用于肺中。DPI裝置的給藥機(jī)理是，例如在容器內(nèi)一股氣體生成大量的干粉，然后可以讓患者吸入。DPI裝置在本領(lǐng)域中也是公知的。有各種各樣多次劑量DPI(″MDDPI″)系統(tǒng)，可以釋放一次以上的治療劑量。MDDPI裝置可以從公司例如Astra Zeneca、Glaxo Wellcome、IVAX、Schering Plough、Skye Pharma和Vectura那里買(mǎi)到。例如，對(duì)于這些系統(tǒng)，可以配制用在吸入器或吹藥器中的膠囊和藥筒，其中含有本發(fā)明化合物的粉末混合物以及一種合適的粉末基質(zhì)例如乳糖或淀粉。
可以用來(lái)將本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物給予肺的另一種類(lèi)型的裝置是一種液體噴霧裝置，例如由Aradigm公司提供。液體噴霧裝置使用非常小的噴嘴孔使液體藥物制劑霧化，然后霧化后的藥物制劑可以直接被肺吸入。
在一種實(shí)施方案中，使用噴霧器將本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物用于肺中。例如通過(guò)使用超聲波能量，噴霧器從液體藥物制劑中生成氣溶膠，以形成能夠容易被吸入的微粒(例如參見(jiàn)，Verschoyle et al.，British J Cancer，1999，80，Suppl.2，96，其在此引入作為參考)。噴霧器的例子包括由Sheffield/Systemic Pulmonary Delivery Ltd.提供的裝置(參見(jiàn)，Armer et al.，United States Patent No.5,954,047；van der Linden et al.，United States PatentNoNo.5,950,619；van der Linden et al.，United States Patent No.5,970,974)，Aventis and Batelle Pulmonary Therapeutics。
在另一種實(shí)施方案中，可以使用電流體動(dòng)力學(xué)(″EHD″)氣溶膠裝置，將本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物釋放到肺中。EHD氣溶膠裝置使用電能將液體藥物溶液或懸浮液霧化(例如參見(jiàn)，Noakes et al.，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,765,539)。當(dāng)使用EHD氣溶膠裝置將本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物用于肺時(shí)，所述制劑的電化學(xué)性質(zhì)是重要的優(yōu)化參數(shù)，這樣的優(yōu)化通常由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員進(jìn)行。EHD氣溶膠裝置可以比現(xiàn)有的肺給藥技術(shù)更有效。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物可以以小囊泡的形式給予，特別是以脂質(zhì)體的形式給予。(參見(jiàn)，Langer，1990，Science，2491527-1533；Treat et aL，in″治療傳染性疾病和癌的脂質(zhì)體(Liposomes inthe Therapy of Infectious Disease and Cancer)″，Lopez-Berestein andFidler(eds.)，Liss，New York，pp.353-365(1989)；通常參見(jiàn)″Liposomes in theTherapy of Infectious Disease and Cancer，″Lopez-Berestein and Fidler(eds.)，Liss，New York，pp.353-365(1989))。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物可以通過(guò)持續(xù)釋放系統(tǒng)給藥，優(yōu)選通過(guò)口服持續(xù)釋放系統(tǒng)給藥。在一種實(shí)施方案中，可以使用泵(參見(jiàn)，Langer，supra；Sefton，1987，CRC Crit Ref Bomed Eng 14201；Saudek et al.，1989，N.Engl.JMed.321574)。
在另一種實(shí)施方案中，可以使用聚合材料(參見(jiàn)″受控釋放的醫(yī)藥應(yīng)用(Medical Applications of Controlled Release)″，Langer and Wise(eds.)，CRCPres.，Boca Raton，F(xiàn)lorida(1974)；″受控藥物的生物利用度(Controlled DrugBioavailability)″，藥物設(shè)計(jì)和性能(Drug Product Design and Performance)，Smolen and Ball(eds.)，Wiley，New York(1984)；Ranger and Peppas，1983，JMacromol.Sci.Rev.Macromol Chem.2361；還參見(jiàn)Levy et al.，1985，Science228190；During et al.，1989，Ann.Neurol.25351；Howard et al.，1989，J.Neurosurg.71105)。在另一種實(shí)施方案中，聚合材料用于口服的持續(xù)釋放給藥。優(yōu)選的聚合物包括羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素和羥乙基纖維素(最優(yōu)選是羥丙基甲基纖維素)。其它優(yōu)選的纖維素醚已經(jīng)被描述(Alderman，Int.J.Phama.Tech. & Prod.Mfr.，1984，5(3)1-9)。影響藥物釋放的因素是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所公知的，并且已經(jīng)在本領(lǐng)域中進(jìn)行了描述。(Bamba et al.，Int.J.Pharm.，1979，2，307)。
在另一種實(shí)施方案中，包有腸溶衣的制劑可以用于口服持續(xù)釋放給藥。優(yōu)選的包衣材料包括溶解度與pH有關(guān)的聚合物(即，pH-控制釋放的)，具有緩慢的或與pH有關(guān)的溶脹、溶解或侵蝕速率的聚合物(即，時(shí)間-控制釋放的)、酶降解的聚合物(即，酶-控制釋放的)，以及形成堅(jiān)固層(該堅(jiān)固層在壓力增加的情況下才破壞)的聚合物(即，壓力-控制釋放的)。
在還有另一種實(shí)施方案中，滲透性釋放體系可以用于口服持續(xù)釋放給藥(Verma et al.，DrugDev.Ind.Plaarm.，2000，26695-708)。在另一種實(shí)施方案中，OROSTM滲透裝置可以用于口服持續(xù)釋放裝置。(Theeuwes et al.，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)3,845,770；Theeuwes et al.，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)3,916,899)。
在還有另一種實(shí)施方案中，可以將受控釋放系統(tǒng)放在本發(fā)明化合物和/或藥物組合物的目標(biāo)接近，因此僅需要一小部分的全身性劑量(例如參見(jiàn)，Goodson，in″Medical Applications of Controlled Release，″supra，vol.2，pp.115-138(1984))。還可以使用在Langer，1990，Science 2491527-1533中論述的其它受控釋放系統(tǒng)。
本發(fā)明的藥物組合物本發(fā)明的藥物組合物含有治療有效量的一種或多種本發(fā)明的化合物，優(yōu)選以純化的形成，與合適量的藥學(xué)上可接受的賦形劑一起，由此提供一種合適患者給藥的形式。當(dāng)給予患者時(shí)，本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑優(yōu)選是無(wú)菌的。當(dāng)靜脈內(nèi)施用本發(fā)明的化合物時(shí)，水是優(yōu)選的賦形劑。鹽溶液和葡萄糖水溶液以及丙三醇溶液也可以用作液體賦形劑，特別是對(duì)于可注射溶液。合適的藥物賦形劑還包括賦形劑例如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化鈉、脫脂奶粉、丙三醇、丙二醇、乙二醇、水、乙醇等等。本發(fā)明的藥物組合物，如果需要，還可以含有少量的潤(rùn)濕劑或乳化劑或pH緩沖劑。此外，可以使用助劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、潤(rùn)滑劑和著色劑。
包含本發(fā)明化合物的藥物組合物可以通過(guò)常規(guī)的混合、溶解、造粒、制糖錠、研磨、乳化、封裝、包埋或冷凍干燥方法進(jìn)行制備。藥物組合物可以以常規(guī)的方式使用一種或多種生理上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或助劑進(jìn)行制備，這些生理上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或助劑有助于將本發(fā)明的化合物加工成藥學(xué)上可使用的制劑。合適的制劑取決于所選擇的給藥途徑。
本發(fā)明的藥物組合物可以采取溶液、懸浮液、乳劑、片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、含液體的膠囊、粉末、持續(xù)釋放制劑、栓劑、乳劑、氣溶膠、噴霧劑、懸浮液或任何其它可使用形式。在一種實(shí)施方案中，藥學(xué)上可接受的賦形劑是膠囊(例如參見(jiàn)，Grosswald et al.，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,698,155)。合適的藥物賦形劑的其它例子已經(jīng)描述在本領(lǐng)域中(例如RemingtonThe Scienceand Practice of Pharmacy，Philadelphia College of Pharmacy and Science，20thEdition，2000)。
對(duì)于局部給藥，可以將本發(fā)明的化合物配制成溶液、凝膠劑、膏劑、乳劑、懸浮液等等。這些在本領(lǐng)域中也是公知的。
全身性制劑包括設(shè)計(jì)成通過(guò)注射給藥的那些，例如皮下注射、靜脈注射、肌內(nèi)注射、鞘內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射，以及設(shè)計(jì)成經(jīng)皮、轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)、經(jīng)口或經(jīng)肺給藥的那些。全身性制劑可以與另一種有效劑一起制備，所述有效劑可以改善氣道粘液的粘液纖毛清除率或減少粘液粘度。這些有效劑包括，但不局限于，鈉通道阻滯劑、抗生素、N-乙酰半胱氨酸、高半胱氨酸和磷脂。
在一種實(shí)施方案中，根據(jù)常規(guī)方法，將本發(fā)明的化合物配制成適合于人靜脈注射給藥的藥物組合物。典型地，靜脈注射給藥的本發(fā)明化合物是以無(wú)菌等滲含水緩沖液形式的溶液。至于注射，可以將本發(fā)明的化合物配制在水溶液中，優(yōu)選配制在生理學(xué)相容的緩沖液中，例如漢克斯液、林格液或生理鹽水緩沖液。所述溶液可以含有配制試劑例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。必要時(shí)，所述藥物組合物還可以包括一種增溶劑。用于靜脈注射給藥的藥物組合物可以任選包括一種局部麻醉劑例如利諾卡因以減輕注射部位的疼痛。通常，在單位劑型中，組分或者單獨(dú)提供或者混合在一起提供，例如，在密閉容器例如標(biāo)明有效劑數(shù)量的安瓿瓶或sachette中作為冷凍干燥粉末或無(wú)水濃縮物。當(dāng)本發(fā)明的化合物通過(guò)輸液給藥時(shí)，例如，它可以用含無(wú)菌藥物級(jí)水或鹽水的輸液瓶進(jìn)行配制。當(dāng)本發(fā)明的化合物通過(guò)注射給藥時(shí)，提供安瓿瓶的滅菌注射水或鹽水，這樣在給藥前可以將所述組分混合。
對(duì)于轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)給藥，適合滲透過(guò)屏障的滲透劑在該制劑中使用。這樣的滲透劑通常在本領(lǐng)域中是已知的。
用于口服給藥的藥物組合物例如可以以片劑、錠劑、含水懸浮液或含油懸浮液、粒劑、粉劑、乳劑、膠囊、糖漿劑或酏劑的形式存在?？诜o藥的藥物組合物可以含有一種或多種任選試劑，例如，甜味劑如果糖、阿司帕坦或糖精；調(diào)味劑如薄荷、冬青油或、櫻桃；著色劑以及防腐劑，以便獲得一種可口的制劑。此外，當(dāng)以片劑或丸劑形式存在時(shí)，所述的組合物可以進(jìn)行包衣，以便延遲在胃腸道中的崩解和吸收，由此在延長(zhǎng)期限內(nèi)獲得一種持續(xù)作用。包裹滲透性活性驅(qū)動(dòng)化合物的選擇性滲透膜同樣適合于口服給藥的本發(fā)明的化合物。在這些后者的平臺(tái)中，來(lái)自包圍膠囊的環(huán)境中的液體被驅(qū)動(dòng)化合物吸收，其溶脹以通過(guò)孔隙替換藥物或藥物組合物。與立即釋放制劑的尖鋒分布圖不同，這些釋放平臺(tái)可以提供一種基本上零級(jí)的釋放分布圖。還可以使用時(shí)間延遲物質(zhì)例如單硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯。口服組合物可以包括標(biāo)準(zhǔn)賦形劑甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等等。這些賦形劑優(yōu)選是藥物級(jí)的。
對(duì)于口服液體藥劑例如，懸浮液、酏劑和溶液，合適的載體、賦形劑或稀釋劑包括水、鹽水、亞烷基二醇(例如，丙二醇)、聚(亞烷基)二醇(例如，聚乙二醇)油類(lèi)、醇類(lèi)、pH在4至6之間的略微酸性的緩沖液(例如，在約5.0mM至約50.0mM之間的乙酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸)等等。此外，可以加入調(diào)味劑、防腐劑、著色劑、膽鹽、酰肉堿等等。
對(duì)于口腔含化給藥，所述的藥物組合物可以采取片劑、糖錠等等的形式，以常規(guī)方式進(jìn)行配制。
適合與噴霧器、液體噴霧裝置和EHD氣溶膠裝置一起使用的液體藥物制劑通常包括本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑。優(yōu)選地，所述的藥學(xué)上可接受的賦形劑是一種液體例如醇、水、聚乙二醇或一種全氟化碳。任選地，可以加入另外的物質(zhì)，以改變本發(fā)明化合物溶液或懸浮液的氣溶膠性質(zhì)。優(yōu)選地，這種物質(zhì)是液體例如醇、乙二醇、聚乙二醇或脂肪酸。適合在氣溶膠裝置中使用的配制液體藥物溶液或懸浮液的其它方法是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所已知的(例如，參見(jiàn)Biesalski，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,112,598；Biesalski，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,556,611)。
本發(fā)明的化合物還可以配制成直腸或陰道的藥物組合物例如栓劑或保留灌腸劑，例如含常規(guī)栓劑基質(zhì)例如可可脂或其它甘油酯。
除前面所述的制劑外，本發(fā)明的化合物還可以配制成儲(chǔ)存制劑。這些長(zhǎng)效作用制劑可以通過(guò)植入給藥(例如，皮下注射或肌內(nèi))或通過(guò)肌內(nèi)注射給藥。因此，例如，本發(fā)明的化合物可以與合適的聚合材料或疏水性材料(例如，以在一種可接受油中乳液的形式)或離子交換樹(shù)脂，或以微溶衍生物的形式例如以微溶鹽的形式，一起進(jìn)行配制。
當(dāng)本發(fā)明的化合物是酸性時(shí)，在上述任何制劑中包括游離酸、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物?；旧媳３钟坞x酸活性的藥學(xué)上可接受的鹽，可以通過(guò)與堿反應(yīng)進(jìn)行制備，并且藥學(xué)上可接受的鹽比相應(yīng)的游離酸形式在含水和其它質(zhì)子溶劑中更易溶解。
治療劑量本發(fā)明的化合物或其藥物組合物通過(guò)以這樣一種數(shù)量使用，其可以有效地獲得指定的目的。對(duì)于在治療或預(yù)防特征在于異常血管生成的疾病或病癥、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病和肥胖癥中使用，結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物將以治療有效量服用或使用。
在治療在此公開(kāi)的具體疾病或病癥中，本發(fā)明化合物的有效數(shù)量將取決于疾病或病癥的性質(zhì)，并且可以由之前所述的在本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)進(jìn)行確定。此外，可以任選進(jìn)行體外或體內(nèi)測(cè)定，以確定最佳的劑量范圍。當(dāng)然，本發(fā)明化合物給藥的數(shù)量將取決于所治療的對(duì)象、所治療對(duì)象的體重、疾病的嚴(yán)重程度、給藥方式以及主治醫(yī)生的判斷等等因素。
例如，在一種藥物組合物中，劑量可以由單一給藥、多次應(yīng)用或控制釋放給予。在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過(guò)口服持續(xù)釋放給藥。優(yōu)選地，在此實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物每天給藥兩次(更優(yōu)選每天給藥一次)?？梢灾芷谛缘刂貜?fù)劑量給藥，可以單獨(dú)提供或與其它藥物一起提供，并且如果需要有效治療疾病狀態(tài)或病癥，可以持續(xù)給藥。
口服給藥的合適劑量范圍取決于藥效，但是相對(duì)于每公斤體重，通常給予約0.001mg至約200mg的本發(fā)明化合物。劑量范圍可以很容易地由本領(lǐng)域普通熟練技術(shù)人員根據(jù)已知方法進(jìn)行確定。
靜脈注射(i.v.)給藥的合適劑量范圍在約0.01mg至約100mg每公斤體重之間。鼻內(nèi)給藥的合適劑量范圍在約0.01mg/kg體重至約1mg/kg體重之間。栓劑通常含有約0.01毫克至約50毫克的本發(fā)明化合物每公斤體重，并且包含約0.5％至約10％重量的活性成分。對(duì)于皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、硬膜外、舌下或腦內(nèi)給藥的情況，推薦的劑量為約0.001mg至約200mg每公斤體重。有效劑量可以從來(lái)源于體外或動(dòng)物模型測(cè)試體系的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)外推得到。這些動(dòng)物模型和體系在本領(lǐng)域中是公知的。
在人體中使用之前，優(yōu)選將本發(fā)明的化合物進(jìn)行體外和體內(nèi)測(cè)定，以獲得所需的治療活性或預(yù)防活性。例如，體外測(cè)定可以用于確定到底是施用本發(fā)明的具體化合物還是施用本發(fā)明化合物的組合對(duì)于降低驚厥是優(yōu)選的。使用動(dòng)物模型體系還可以證明本發(fā)明的化合物是有效的和安全的。
優(yōu)選地，在此所述的本發(fā)明化合物的治療有效劑量將提供治療好處，但是不會(huì)引起顯著的毒性。本發(fā)明化合物的毒性可以使用標(biāo)準(zhǔn)藥物方法進(jìn)行確定，并且可以很容易地由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員確定。毒性作用和治療作用的劑量比是治療指數(shù)。在治療疾病和病癥中，本發(fā)明的化合物優(yōu)選表現(xiàn)出特別高的治療指數(shù)。在此所述的本發(fā)明化合物的劑量將優(yōu)選在循環(huán)濃度的范圍內(nèi)，其包括一種幾乎沒(méi)有毒性的有效劑量。
聯(lián)合治療在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物可以與至少一種其它治療劑進(jìn)行聯(lián)合治療。本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物與該治療劑累加起作用，或更優(yōu)選起協(xié)同作用。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物或本發(fā)明化合物的藥物組合物與另外的藥物同時(shí)給藥，其中另外的藥物可以是與本發(fā)明化合物部分相同的藥物組合物或者是不同的藥物組合物。在另一種實(shí)施方案中，在施用另外的藥物之前或之后，施用本發(fā)明化合物的藥物組合物。
特別是，在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物可以與其它化學(xué)治療劑進(jìn)行聯(lián)合治療，例如烷基化試劑(例如，氮芥類(lèi)(例如，環(huán)磷酰胺、異磷酰胺、雙氯乙基甲胺、melphalen、苯丁酸氮芥、六甲三聚氰胺、硫替派)，磺酸烷基酯(例如，白消安)、亞硝基脲三嗪抗代謝物(例如，葉酸類(lèi)似物、嘧啶類(lèi)似物(例如，氟尿嘧啶、5-氟脲嘧啶脫氧核苷、阿糖胞苷等等)，嘌呤類(lèi)似物(例如，巰嘌呤、thiogunaine、噴司他丁等等)，天然產(chǎn)物(例如，長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、依托泊苷、tertiposide、更生霉素、柔紅霉素、doxurubicin、博來(lái)霉素、mithrmycin、絲裂霉素C、左天冬酰胺酶、干擾素α)，鉑配位絡(luò)合物(例如，順-鉑、卡鉑等等)，米托蒽醌，羥基脲，丙卡巴肼，激素和拮抗劑(例如，潑尼松、己酸羥孕酮、醋酸甲羥孕酮、醋酸甲地孕酮、己烯雌酚、乙炔雌二醇、他莫昔芬、丙酸睪酮、氟甲睪酮、氟他米特、醋酸亮丙瑞林等等)，抗血管生成藥或抑制劑(例如，血管他丁、維甲酸和紫杉醇、雌二醇衍生物、噻唑嘧啶衍生物等等)，細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑(例如，阻斷致癌基因的反義核苷酸其抑制細(xì)胞凋亡、腫瘤抑制劑、TRAIL、TRAIL多肽、與Fas有關(guān)的因數(shù)1、白細(xì)胞介素-1β-轉(zhuǎn)化酶、磷酸酪氨酸抑制劑、RXR類(lèi)視色素受體激動(dòng)劑、喹諾酮衍生物等等)，螯合劑(青霉胺、鋅、曲恩汀等等)以及其它減肥藥。
治療試劑盒本發(fā)明提供治療試劑盒，其包含本發(fā)明的化合物或本發(fā)明的藥物組合物。治療試劑盒還可以含有其它化合物(例如，化學(xué)治療劑、天然產(chǎn)物、激素或拮抗劑、抗血管生成藥或抑制劑、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)藥或螯合劑)或這些其它化合物的藥物組合物。
治療試劑盒可以有一個(gè)單個(gè)容器，其含有本發(fā)明的化合物或本發(fā)明的藥物組合物以及有或者沒(méi)有其它組分(例如，其它化合物或這些其它化合物的藥物組合物)，或者對(duì)于每個(gè)組分可以有不同的容器。優(yōu)選地，本發(fā)明的治療試劑盒包括本發(fā)明的化合物或本發(fā)明的藥物組合物，以及與第二種化合物或其藥物組合物一起共同給藥(第二種藥物優(yōu)選是化學(xué)治療劑、天然產(chǎn)物、激素或拮抗劑、抗血管生成藥或抑制劑、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)藥或螯合劑)。試劑盒中的組分可以預(yù)先混合，或者在給予患者之前，將每種組分放在分開(kāi)的容器中。
試劑盒中的組分可以以一種或多種液體溶液的形式提供，優(yōu)選以水溶液，更優(yōu)選以無(wú)菌水溶液的形式提供。試劑盒中的組分也可以以固體的形式提供，通過(guò)加入合適的溶劑(其優(yōu)選放在另外的不同容器中)，其可以轉(zhuǎn)化為液體。
治療試劑盒的容器可以是管瓶、試管、燒瓶、瓶、注射器或包封固體或液體的任何其它容器。通常，當(dāng)存在多個(gè)組分時(shí)，所述的試劑盒含有第二個(gè)管瓶或其它容器，其可以分開(kāi)進(jìn)行劑量。對(duì)于藥學(xué)上可接受的液體，所述的試劑盒還可以含有另一個(gè)容器。
優(yōu)選地，治療試劑盒將含有一些器件(例如，一個(gè)或多個(gè)針頭、注射器、滴眼管、吸管等等)，其使試劑盒中的組分能夠施用。
實(shí)施例本發(fā)明通過(guò)下列實(shí)施例進(jìn)一步進(jìn)行說(shuō)明，其詳細(xì)描述了本發(fā)明化合物的制備以及生物學(xué)活性測(cè)定的方法。顯然，本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可以在材料和方法方面進(jìn)行不脫離本發(fā)明范圍的許多修飾。
實(shí)施例1合成四硫代鉬酸鹽衍生物的一般方法將市場(chǎng)上可買(mǎi)到的季銨堿的水溶液(2當(dāng)量)加入到四硫代鉬酸銨(1當(dāng)量)中，接著加入去離子水，直到所有固體物料溶解為止。在真空(約5-10托)下，在20℃下，將溶液放在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上2小時(shí)，需要時(shí)，加入水以保持恒定的體積。如果這種方法產(chǎn)生沉淀，那么通過(guò)過(guò)濾收集固體，用異丙醇、乙醇和乙醚洗滌，然后在P2O5存在下，在高真空下在真空干燥器中干燥24小時(shí)。如果溶液保持澄清，那么首先將反應(yīng)混合物過(guò)濾，以除去少量的固體雜質(zhì)，然后從帶有異丙醇的濾液中析出產(chǎn)物。通過(guò)過(guò)濾收集固體，用異丙醇、乙醇和乙醚洗滌，然后在P2O5存在下，在高真空下在真空干燥器中干燥24小時(shí)。
實(shí)施例2合成四硫代鉬酸鹽衍生物的一般方法固體季銨鹵化物(2當(dāng)量)加入到四硫代鉬酸銨(1當(dāng)量)在干燥乙腈(5mL，每mmol的TM)中的懸浮液中，在氮?dú)庀?，將所得混合物在室溫下攪?8小時(shí)。如果這種方法產(chǎn)生沉淀，那么通過(guò)過(guò)濾收集固體，用水、異丙醇、乙醇和乙醚洗滌，然后在P2O5存在下，在高真空下在真空干燥器中干燥24小時(shí)。如果溶液保持澄清，那么首先將反應(yīng)混合物過(guò)濾，然后將濾液在真空中進(jìn)行濃縮。將所得固體懸浮在水中，接著過(guò)濾，固體用異丙醇、乙醇和乙醚洗滌，然后在P2O5存在下，在高真空下在真空干燥器中干燥24小時(shí)。
實(shí)施例3四硫代鉬酸鹽，二(三乙基甲基銨)此化合物由四硫代鉬酸銨(994mg，3.82mmol)和20％重量的三乙基甲基氫氧化銨(5.12g，7.69mmol)的水溶液，根據(jù)實(shí)施例1的方法進(jìn)行制備，得到1.05g(60％)的標(biāo)題化合物，產(chǎn)物是一種橙紅色固體。IR(KBr，cm-1)472；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.27(q，J＝7.3Hz，12H)，2.89(s，6H)，1.19(tt，J＝7.3，1.8Hz，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ55.1(6C)，46.1(2C)，7.7(6C)；ESMS/(三乙基甲基銨)+116.3；UV(H2O)468nm(ε＝12000)。元素分析C14H36MoN2S4C，36.82；H，7.95；N，6.13.實(shí)測(cè)值C，37.07；H，7.88；N，6.24。
實(shí)施例4四硫代鉬酸鹽，二(三乙基苯基銨)此化合物由四硫代鉬酸銨(1.00g，3.85mmol)和10％重量的三乙基苯基氫氧化銨(15.1g，7.71mmol)的水溶液，根據(jù)實(shí)施例1的方法進(jìn)行制備，得到388mg(17％)的標(biāo)題化合物，產(chǎn)物是一種橙色固體。IR(KBr，cm-1)470；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.91(d，J＝8.2Hz，4H)，7.69-7.55(m，6H)，3.89(q，J＝6.9Hz，12H)，1.04(t，J＝6.9Hz，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ141.9(2C)，130.5(4C)，130.1(2C)，122.7(4C)，55.3(6C)，8.0(6C)；ES MS m/z(三乙基苯基銨)+178.2；UV(H2O)468nm(ε＝12300)。元素分析C24H4OMoN2S4C，49.63；H，6.94；N，4.82；S，22.08.實(shí)測(cè)值C，49.39；H，7.23；N，5.15；S，22.41。
實(shí)施例5四硫代鉬酸鹽，二(膽堿)在本申請(qǐng)中，二(膽堿)四硫代鉬酸鹽具有與二[2-羥乙基)三甲基銨]四硫代鉬酸鹽相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)。此化合物由四硫代鉬酸銨(1.08g，4.15mmol)和50％重量的膽堿氫氧化物(2.01g，8.29mmol)的水溶液，根據(jù)實(shí)施例1的方法進(jìn)行制備，得到1.30g(73％)的標(biāo)題化合物，產(chǎn)物是一種橙色固體。IR(KBr，cm-1)3389，474；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.21(t，J＝4.6Hz，2H)，3.87-3.79(m，4H)，3.43(t，J＝4.6Hz，4H)，3.13(s，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ67.1(2C)，55.5(2C)，53.3(6C)；ES MSm/z(膽堿)+104.2；UV(H2O)468nm(ε＝12900).元素分析C10H28MoN2O2S4C，27.77；H，6.52；N，6.48；S，29.65；Mo，22.18.實(shí)測(cè)值C，27.63；H，6.84；N，6.39；S，29.86；Mo，22.23。
實(shí)施例6四硫代鉬酸鹽，二(乙酰膽堿)此化合物由氯化乙酰膽堿(732mg，4.03mmol)和四硫代鉬酸銨(500mg，1.92mmol)，根據(jù)實(shí)施例2的方法進(jìn)行制備，得到390mg(39％)的標(biāo)題化合物，產(chǎn)物是一種橙紅色固體。IR(KBr，cm-1)1747，1728，482，469，461；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ4.47-4.41(m，4H)，3.72-3.69(m，4H)，3.16(s，18H)，2.07(s，6H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ170.1(2C)，63.9(2C)，58.0(2C)，53.1(6C)，20.9(2C)；ES MSm/z(乙酰膽堿)+146.4；UV(H2O)468nm(ε＝13300)。元素分析C14H32MoN2O4S4C，32.55；H，6.24；N，5.42；S，24.82.實(shí)測(cè)值C，32.66；H，6.23；N，5.51；S，24.97。
實(shí)施例7四硫代鉬酸鹽，二[2-(甲氧基)乙基三甲基銨]
此化合物由四硫代鉬酸銨(5g，19.2mmol)和2-(甲氧基)乙基三甲基氯化銨(6.199g，40.3mmol，合成參見(jiàn)本實(shí)施例中下面的描述)在乙腈(125ml)的攪拌懸浮液中進(jìn)行制備。懸浮液攪拌2小時(shí)，在此期間形成一種細(xì)小的淺紅色粉末。在玻璃粉上過(guò)濾沉淀，蒸發(fā)乙腈，在真空中干燥，得到1.76g(20％)的標(biāo)題化合物。元素分析C14H32MoN204S4C，31.293；H，7.003；N，6.082.實(shí)測(cè)值C，30.85；H，6.89；N，6.11。
2-(甲氧基)乙基三甲基氯化銨如下制備在25圓底燒瓶中，將1-氯-2-甲氧基乙烷(3.636g，38.5mmol，合成參見(jiàn)本實(shí)施例下面描述)與三甲胺(40％在水中，7.77ml，50mmol)混和?；旌衔镌诨亓飨录訜?4小時(shí)，冷卻至室溫，用15ml乙醚洗滌三次。從水層中蒸發(fā)除去溶劑，剩下一種塊狀的白色固體，將此固體用異丙醇洗滌，接著在真空下進(jìn)行干燥，得到4.136g(70％)的化合物。
1-氯-2-甲氧基乙烷如下制備將20ml氯仿與2-甲氧基乙醇(5.4ml，69mmol)在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行混和。依次通過(guò)注射器加入亞硫酰氯(5.0ml，69mmol)和吡啶(5.5ml，69mmol)，在室溫下攪拌1小時(shí)，再回流1小時(shí)。將反應(yīng)組分冷卻，用水淬滅，與一起25ml 1M的HCl洗滌兩次，然后蒸發(fā)除去溶劑。在硅膠上過(guò)濾反應(yīng)產(chǎn)物，用丙酮洗脫，得到5.94g(91％)的淺褐色組分。
根據(jù)本實(shí)施例，合成二[2-(甲氧基)乙基三甲基銨]四硫代鉬酸鹽的機(jī)理如下 實(shí)施例8四硫代鉬酸鹽，二[烷基二甲基(苯基甲基)銨]此化合物由四硫代鉬酸銨(1.00g，3.84mmol)和苯扎氯銨(2.90g，8.07mmol)根據(jù)實(shí)施例6的方法進(jìn)行制備，得到2.75g(82％)的標(biāo)題化合物，產(chǎn)物是一種稠的紅油。IR(薄膜，cm-1)471；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.58-7.46(m，10H)，4.54(s，4H)，3.24-3.20(m，4H)，2.95(s，12H)，1.83-1.71(m，4H)，1.30-1.21(m，40H)，0.88-0.81(m，6H)；ES MSm/z[十二烷基二甲基(苯基甲基)銨]+304.7，[十四烷基二甲基(苯基甲基)銨]+332.7；UV(DMSO)473.5nm(ε＝10100)。
實(shí)施例9四硫代鉬酸鹽，二(1-乙基-3-甲基-1H-咪唑 鹽)此化合物由四硫代鉬酸鹽，二(銨)(1.00g，3.84mmol)和1-乙基-3-甲基-1H-咪唑氯化(1.18g，8.06mmol)，根據(jù)實(shí)施例2的方法，進(jìn)行以下改變；將混合物過(guò)濾，濾液在真空中進(jìn)行濃縮，過(guò)濾所得固體，用EtOH和乙醚漂洗，在高真空干燥器中干燥24小時(shí)，得到標(biāo)題化合物(0.419g，24％)，產(chǎn)物是一種紅褐色固體。IR(KBr顆粒，cm-1)3064，1566，1167，465；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.24(s，1H)，7.77(s，1H)，7.69(s，1H)，4.20(q，J＝7.3Hz)，3.86(s，3H)，1.40(t，J＝7.3Hz)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ136.9，123.5，121.8，44.1，35.7，15.3；MSm/z(C6H11N2)+111.2；UV(H2O)468nm(ε＝11016)。元素分析C12H22N4MoS4C，32.28；H，4.97；N，12.55；S，28.72.實(shí)測(cè)值C，31.88；H，4.87；N，12.56；S，28.79。
實(shí)施例10四硫代鉬酸鹽，二(苯基三甲基銨)此化合物由四硫代鉬酸鹽，二(銨)(1.00g，3.84mmol)和苯基三甲基氯化銨(1.38g，8.06mmol)，根據(jù)實(shí)施例2的方法進(jìn)行制備，得到標(biāo)題化合物(0.859g，45％)，產(chǎn)物是一種橙色固體。IR(KBr顆粒，cm-1)3032，3005，1485，1458，473；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.98(m，4H)，7.61(m，6H)，3.62(s，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ147.2，130.0，129.9，120.5，56.3；MS m/z(C9H14N)+136.2；UV(H2O)468 nm(ε＝12900)。元素分析C18H28N2MoS4C，43.53；H，5.68；N，5.64；S，25.83.實(shí)測(cè)值C，43.66；H，5.98；N，5.76；S，25.73。
實(shí)施例11四硫代鉬酸鹽，二(芐基三甲基銨)此化合物由四硫代鉬酸鹽，二(銨)(0.500g，1.92mmol)和芐基三甲基氫氧化銨(1.60g，40％的水溶液)，根據(jù)實(shí)施例1的方法進(jìn)行制備，得到標(biāo)題化合物(0.869g，91％)，產(chǎn)物是一種紅色固體。Mp179-181℃(分解)；IR(KBr顆粒，cm-1)2995，1483，1454，474；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.52(m，10H)，4.56(s，4H)，3.04(s 18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ132.9，130.2，128.9，128.4，67.7，51.7；MS m/z(C10H16N)+150.3；UV(H2O)468 nm(ε＝12008)。元素分析C20H32N2MoS4C，45.78；H，6.15；N，5.34；S，24.44.實(shí)測(cè)值C，45.67；H，6.15；N，5.62；S，24.41。
實(shí)施例12四硫代鉬酸鹽，戊烷-1，5-二(三甲基銨)向四硫代鉬酸鹽，二(銨)(0.100g，0.226mmol)在CH3CN(2mL)中的懸浮液中加入戊烷-1，5-二(三甲基銨)碘化物(0.054g，0.205mmol)在水(2mL)中的溶液。在室溫下攪拌5小時(shí)后，過(guò)濾褐紅色固體，懸浮在水中，然后過(guò)濾，并用EtOH、iPrOH和Et2O洗滌。在高真空干燥器中干燥過(guò)夜后，得到標(biāo)題化合物(0.051g，60％)，產(chǎn)物是一種紅色固體。IR(KBr顆粒，cm-1)2997，472；1H NMR(300MHz，MeOH-d5)δ3.22(m，4H)，2.98(s 18H)，1.70(m，4H)，1.31(2H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ79.4，64.9，52.2，21.6；UV(H2O)468nm(ε＝12025)。元素分析C11H28N2MoS4C，32.03；H，6.84；N，6.79；S，31.09.實(shí)測(cè)值C，32.40；H，6.74；N，6.80；S，30.87。
實(shí)施例13四硫代鉬酸鹽，二(2-羥基亞氨基甲基-1-甲基-吡啶)此化合物由四硫代鉬酸鹽，二(銨)(1.00g，3.84mmol)和2-羥基亞氨基甲基-1-甲基-吡啶氯化(1.39g，8.06mmol)，根據(jù)實(shí)施例2的方法，進(jìn)行如下改變加入水(10mL)，以溶解鹵化銨。得到標(biāo)題化合物(1.20g，66％)，是一種紅色固體。IR(KBr顆粒，cm-1)1002，477；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.05(app d，1H)，8.67(s，1H)，8.54(app t，1H)，8.08(app d，1H)，8.04(app t，1H)，4.39(s，3H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ147.6，147.1，145.1，142.0，127.4，124.9，46.3；MS m/z(C7H9N2O)+137.1；UV(H2O)468nm(ε＝12092)。
實(shí)施例14四硫代鉬酸鹽，二(1，1-二甲基吡咯烷 鹽)此化合物由四硫代鉬酸銨(0.644g，2.47mmol)和1，1-二甲基吡咯烷碘化(1.18g，5.19mmol)，根據(jù)實(shí)施例2的方法進(jìn)行制備，得到一種橙色固體。IR(KBr，cm-1)471；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.09(m，4H)，3.10(s，6H)，3.47(t，J＝6Hz，4H)；13C(75MHz，DMSO-d6)δ21.44，50.86，64.68；ES MSm/z(1，1-二甲基吡咯烷鎓鹽)+100；UV(H2O)468nm(ε＝14130)。元素分析C12H28N2MoS4C，33.94；H，6.64；N，6.59；S，30.21.實(shí)測(cè)值C，33.68；H，6.97；N，6.58；S，30.06。
實(shí)施例15四硫代鉬酸鹽，亞乙基二銨將氯化銨(0.411g，7.68mmol)和乙二胺(0.230g，3.84mmol)溶于50mL水中。向此溶液中加入四硫代鉬酸銨(1.0g，3.84mmol)，接著將混合物攪拌3小時(shí)。過(guò)濾收集生成的磚紅色固體(233mg)，用異丙醇和Et2O漂洗，在P2O5存在下，在高真空下在真空干燥器中干燥24小時(shí)。
母液濃縮至約原始體積的1/3，再次通過(guò)過(guò)濾收集新生成的晶體，接著進(jìn)行漂洗(387mg)。標(biāo)題化合物的總回收量是620mg(56.8％)。IR(KBr，cm-1)474；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.08(s，4H)；7.79(br s，4H)；13C(75MHz，DMSO-d6)δ37.08；ES MS m/z(亞乙基二銨)+60.5；UV(H2O)468nm(ε＝12310).元素分析C2H10MoN2S4C，8.39；H，3.52；N，9.78；S，44.80.實(shí)測(cè)值C，8.75；H，3.28；N，10.05；S，44.99。
實(shí)施例16四硫代鉬酸鹽，二(1，4-二甲基吡啶)此化合物由四硫代鉬酸銨(0.50g，1.92mmol)和1，4-二甲基吡啶碘化(0.95g，4.03mmol)，根據(jù)實(shí)施例2的方法進(jìn)行制備，得到203mg(24％)的標(biāo)題化合物，產(chǎn)物是一種橙色固體。IR(KBr，cm-1)469；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.49(s，3H)，4.30(s，3H)，7.93，(d，J＝6Hz，2H)，8.85(d，J＝6Hz，2H)；13C(75MHz，DMSO-d6)δ21.31，47.03，127.94(2C)，144.77，157.93；ES MSm/z二(1，4-二甲基吡啶)+108.2；UV(H2O)468nm(ε＝13480).元素分析C14H20N2MoS4C，38.17；H，4.57；N，6.35；S，29.11.實(shí)測(cè)值C，38.27；H，4.24；N，6.36；S，28.89。
實(shí)施例17四硫代鉬酸鹽，二(苯基三甲基銨)此化合物根據(jù)實(shí)施例1的方法進(jìn)行制備。IR(cm-1)470；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.99-7.97(d，J＝8.4Hz，4H)，7.66-7.56(m，6H)，3.62(s，18H)；UV(H2O)468nm(ε＝13151)。元素分析C18H28MoN2S4C，43.53；H，5.68；N，5.64；S，25.83.實(shí)測(cè)值C，42.72；H，5.20；N，5.27；S，27.54。
實(shí)施例18四硫代鉬酸鹽，二(乙烯基三甲基銨)此化合物根據(jù)實(shí)施例1的方法進(jìn)行制備。IR(cm-1)470；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.62-6.56(m，2H)，5.76(d，J＝15.2Hz，2H)，5.54(m，2H)，3.24(s，18H)；UV(H2O)468rm(ε＝18012)。
實(shí)施例19四硫代鉬酸鹽，二(環(huán)丙基甲基三甲基銨)此化合物根據(jù)實(shí)施例2的方法進(jìn)行制備。IR(cm-1)474；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.24(d，J＝7.2Hz，4H)，3.11(s，18H)，1.16(m，2H)，0.72-0.69(m，4H)，0.42-0.38(m，4H)；UV(H2O)468nm(ε＝14239)。
實(shí)施例20四硫代鉬酸鹽，二(芐基苯基二甲基銨)此化合物根據(jù)實(shí)施例2的方法進(jìn)行制備。IR(cm-1)470；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.76-6.60(m)，5.00(s)，2.87(s)；UV(H2O)468nm(ε＝15606)。
實(shí)施例21四硫代鉬酸鹽，己烷-1，6-二(三甲基銨)此化合物根據(jù)實(shí)施例2的方法進(jìn)行制備。IR(cm-1)478；UV(DMSO)468nm(ε＝12666)。
實(shí)施例22四硫代鉬酸鹽，二[2-羥乙基)三甲基銨]將氫氧化膽堿(50％w/w，在水中，2.56mL，11.3mmol)加入到鉬酸銨四水合物(1.0g，5.66mmol的鉬)在2.5mL去離子水中的溶液中。在室溫下，向該溶液中鼓入硫化氫氣體50分鐘，在此期間，溶液的顏色由褐色變?yōu)榧t色。向該溶液中鼓入氮?dú)?0分鐘，以?xún)艋芙庠诜磻?yīng)混合物中的硫化氫，然后在減壓下除去溶劑。將紅色固體溶于去離子水(3×25mL)中，在減壓下反復(fù)除去溶劑以便除去溶解的氨。將粗產(chǎn)物溶于20mL去離子水中，接著過(guò)濾。通過(guò)向水層中加入異丙醇析出產(chǎn)物。通過(guò)過(guò)濾收集固體，接著用乙醇(3x)和乙醚(3x)洗滌，生成粗的標(biāo)題化合物(2.218g，90％)。用去離子水和異丙醇進(jìn)行重結(jié)晶，然后用乙醇(3x)和乙醚(3x)洗滌，得到標(biāo)題化合物(1.565g，62％)，是一種像片狀的紅色晶體1H NMR(300MHz，DMSO-d6)5.23(br t，J＝4.7Hz，2H)，3.85(br s，4H)，3.46-3.43(m，4H)，3.14(s，18H)。
實(shí)施例23四硫代鉬酸鹽，二[(2-羥乙基)三甲基銨]將硫化氫氣體鼓入到在一個(gè)配衡壓力容器中的氫氧化膽堿(50％w/w在水中，5.2mL，23mmol)和氫氧化銨(30％w/w在水中，8.2mL，70mmol)的溶液中，鼓入時(shí)間為6分鐘。溶解在溶液中的硫化氫的數(shù)量是2.5g。向壓力容器中加入溶于去離子水中的鉬酸銨四水合物(2.01g，11.4mmol)，并用去離子水(0.5mL)洗滌側(cè)壁。將反應(yīng)混合物密封，在室溫下攪拌2小時(shí)又45分鐘，在此期間，在紅色溶液中生成晶體。將混合物轉(zhuǎn)入到一個(gè)圓底燒瓶中，加入去離子水，直到固體溶解為止。在減壓下除去溶劑，殘余物溶解在去離子水中，然后重復(fù)濃縮步驟。所得紅色殘余物用去離子水和異丙醇進(jìn)行重結(jié)晶，紅色片狀物分別用異丙醇、乙醇和乙醚各洗滌一次，然后在五氧化二磷存在下在真空干燥器中干燥23小時(shí)，得到3.05g(62％)標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.21(t，J＝4.6Hz，2H)，3.87-3.79(m，4H)，3.43(t，J＝4.6Hz，4H)，3.13(s，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ67.1(2C)，55.5(2C)，53.3(6C)；MS m/z(膽堿)+104.2；UV(H2O)468nm(ε＝12400)。元素分析C10H28MoN2O2S4C，27.77；H，6.52；N，6.48；S，29.65.實(shí)測(cè)值C，27.76；H，6.59；N，6.85；S，29.52。
實(shí)施例24四硫代鉬酸鹽，二[(2-羥乙基)三甲基銨]將去離子水(200ml)加入到氫氧化膽堿(50％w/w在水中，38.2mL，14.7mmol)中，接著加入四硫代鉬酸銨(19.1g，7.35mmol)，回蕩燒瓶，直到所有固體物質(zhì)溶解為止。將所述溶液放在一個(gè)真空(約5-10托)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上110分鐘，浴溫為20℃，如果需要，加入水以保持恒定的體積。過(guò)濾反應(yīng)混合物，以除去少量的固體雜質(zhì)，從帶異丙醇(1L)的濾液中析出產(chǎn)物。過(guò)濾收集固體，用異丙醇、乙醇和乙醚洗滌，然后在高真空中干燥21小時(shí)，得到28.32g(89％)的所需的產(chǎn)物，產(chǎn)物是一種橙色粉末。粗產(chǎn)物用去離子水和異丙醇進(jìn)行重結(jié)晶，得到紅色片狀物，該紅色片狀物分別用異丙醇、乙醇和乙醚各洗滌一次，然后在五氧化二磷存在下在真空干燥器中干燥24小時(shí)，得到20.76g(65％)的標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.23(t，J＝4.8Hz，2H)，3.89-3.81(m，4H)，3.44(t，J＝4.8Hz，4H)，3.14(s，18H)。元素分析C10H28MoN2O2S4C，27.77；H，6.52；N，6.48；S，29.65.實(shí)測(cè)值C，27.91；H，6.21；N，6.26；S，29.70。
實(shí)施例25四硫代鉬酸鹽，二[(2-羥乙基)三甲基銨]在一個(gè)500mL錐形瓶中，將[NH4]2[MoS4](100g，0.380mol)懸浮在200mL蒸餾水中。向懸浮液中加入45wt％的氫氧化膽堿在甲醇(250mL)中的溶液(市場(chǎng)上可買(mǎi)到的)。加入馬上形成大量的鮮紅色沉淀。在氮?dú)庀拢趧×覕嚢柘聦⒓訜嶂?0℃，直到所有固體溶解為止(～1小時(shí))。所述的深紅色溶液在減壓下保持4小時(shí)，在此期間析出紅色結(jié)晶固體。在冰浴中將懸浮液冷卻30分鐘，然后過(guò)濾。產(chǎn)物用異丙醇洗滌，直到洗液變?yōu)槌吻鍨橹?，然后用乙醚洗滌，最后在真空中進(jìn)行干燥，得到138g高度結(jié)晶的產(chǎn)物(83％收率)。
實(shí)施例26四硫代鉬酸膽堿的X射線(xiàn)結(jié)構(gòu)測(cè)定在158(2)K處使用SiemensSMART area衍射儀(Siemens AG，Wittelsbacherplatz 2，D-80333，Munich，F(xiàn)ederal Republic of Germany)收集(膽堿)2MoS4的紅色晶體的衍射數(shù)據(jù)。由晶胞得到單斜P(pán)晶格a＝18.6066(1)，b＝12.7061(1)，c＝17.7621(2)，β＝117.540(1)(空間群P21/c)。通過(guò)直接法分析晶體結(jié)構(gòu)，在不對(duì)稱(chēng)單元中顯示2[MoS4]和4膽堿陽(yáng)離子。對(duì)單位細(xì)胞中的所有非氫原子進(jìn)行最小二乘法擬合和收斂后，最終的R因子是0.06。單位細(xì)胞中原子的細(xì)胞坐標(biāo)如下所示
原子x/a y/b z/cMo10.35020.74320.4307Mo20.16410.25790.0786N1 0.47240.60220.2250N2 0.33060.31420.4043N3 -0.0120 0.0317-0.3170N4 0.19200.85720.1184S1 0.24500.82680.4246S2 0.43540.85660.4245S3 0.40960.65530.5492S4 0.31140.63240.3236S5 0.27690.17600.1066S6 0.11670.19080.1604S7 0.07680.2372-.0535S8 0.18830.42480.1079O1 0.68600.92150.6690O2 0.61330.60750.8536O3 0.89510.34080.7335O4 0.93550.33760.5362C1 0.71560.88120.6189C2 0.65760.79590.5590C3 0.64710.68010.6669C4 0.75340.64880.6274C5 0.61390.61510.5265C6 0.62880.51110.8973C7 0.61440.41570.8417C8 0.50160.47660.7046C9 0.52210.29040.7373C100.47100.40230.8135C110.90860.41690.7986C120.92400.51650.7797C131.05800.45800.7905C141.01860.63750.7813C151.04960.54300.9103C160.90860.48150.5675C170.85050.42620.4598C180.71990.38490.3353C190.84170.37630.3214C200.81820.24460.4035
實(shí)施例27類(lèi)似物的化學(xué)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)保持10天后的％鹽MW敞開(kāi)在室內(nèi)條件下丙烷-1，3-二(三甲基銨) 384.552乙基-3-甲基-1H-咪唑鹽 446.575三甲基苯基銨 496.685四丙基銨 596.92*82銨 260.28*48乙酰膽堿 516.639膽堿 432.52 62三乙基苯基銨 580.77 76甲基三乙基銨 456.63 631，1-二甲基吡咯烷鹽424.57 70丁烷-1，4-二(三甲基銨) 398.53 401，4-二甲基吡啶440.53 32三甲基芐基銨 524.69 94亞乙基二(三甲基銨) 370.540戊烷-1，5-二(三甲基銨) 412.586*9天；不同的研究7天，74-77％RH，RT二(苯基三甲基銨) 496.61 98二(乙烯基三甲基銨) 396.49 72二(環(huán)丙基甲基三甲基銨) 452.60 86二(芐基苯基二甲基銨) 648.81 45己烷-1，6-二(三甲基銨) 426.56 94實(shí)施例28硫代鉬酸鹽與膽堿四硫代鉬酸鹽比較的生物學(xué)數(shù)據(jù)，體內(nèi)3LL路易士肺癌原發(fā)腫瘤生長(zhǎng)使用的腫瘤模型是在C57BL/6小鼠中的3LL JF。在1951年，這種腫瘤系在C57BL/6小鼠中作為肺癌自發(fā)形成。(Cancer Res.1539，1955.還參見(jiàn)Malave et al.，J.Nat′l.Canc.Inst.6283-88(1979)。通過(guò)皮下接種，在C57BL/6小鼠中通過(guò)傳代進(jìn)行繁殖，并且在半同種異源的C57BL/6×DBA/2 F1小鼠中或在異源的C3H小鼠中進(jìn)行測(cè)試。典型地，對(duì)于皮下植入，每組使用六只動(dòng)物，或者對(duì)于肌肉注射植入，每組使用十只動(dòng)物。腫瘤可以以2-4mm片段進(jìn)行皮下植入，或者可以以約0.5-2×106細(xì)胞的懸浮細(xì)胞的接種物進(jìn)行肌肉注射。植入24小時(shí)后開(kāi)始進(jìn)行治療，或者直到獲得指定大小的腫瘤(通常約100mg)后才開(kāi)始進(jìn)行治療。每天給予測(cè)試化合物，連續(xù)給藥11-25天。
接著對(duì)動(dòng)物進(jìn)行稱(chēng)重、觸診并測(cè)定腫瘤大小。皮下接種12天后，未處理對(duì)照組受體中典型的腫瘤重量是500-2500mg，典型的平均存活時(shí)間為18-28天。以170mg/kg/注射每6天給予陽(yáng)性對(duì)照化合物例如環(huán)磷酰胺。計(jì)算的結(jié)果包括平均動(dòng)物體重、腫瘤大小、腫瘤重量和存活時(shí)間。為了證實(shí)治療活性，應(yīng)該在兩種多劑量測(cè)定中對(duì)測(cè)試組合物進(jìn)行測(cè)試。雌性C57/BL小鼠的背部中間，皮下接種1×106路易士肺癌(3LL)細(xì)胞。腫瘤接種(50mg/kg，通過(guò)管飼)那天以后，用四硫代鉬酸鹽和膽堿硫代鉬酸鹽開(kāi)始進(jìn)行治療。環(huán)磷酰胺(170mg/kg，每6天通過(guò)皮下給予，腫瘤細(xì)胞接種后第3天開(kāi)始給予)用作對(duì)照組。2x/周測(cè)定腫瘤體積和動(dòng)物體重，在對(duì)照組中腫瘤體積達(dá)到平均2000mm3時(shí)，將動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死。測(cè)定治療組(T)與對(duì)照組(C)中腫瘤體積的比值(T/C)。采集末端心臟血液，分析紅細(xì)胞濃度(血細(xì)胞容量計(jì)，HCT)。
*顯著的；**正常是45％實(shí)施例29二(膽堿)四硫代鉬酸鹽抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖二(膽堿)四硫代鉬酸鹽抑制HUVECs的增殖，以一種劑量依賴(lài)性方式，如圖1所示，并且沒(méi)有出現(xiàn)細(xì)胞中毒。盡管沒(méi)有加入外源性銅，但是該測(cè)定在10％血清存在下進(jìn)行。血清中含有結(jié)合銅的蛋白質(zhì)，并且血清中的銅含量約為1-2μM。銅在bFGF與它的受體結(jié)合中起一定的作用(Patstone et al.，J Biol.Chem.1996，271(7)3343-6)；因此二(膽堿)四硫代鉬酸鹽還可能對(duì)增殖誘導(dǎo)機(jī)理具有一種直接作用。二(膽堿)四硫代鉬酸鹽與融合HUVECs(在T-75中)培養(yǎng)72小時(shí)，在測(cè)定末端對(duì)細(xì)胞進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，表明二(膽堿)四硫代鉬酸鹽對(duì)融合穩(wěn)定的內(nèi)皮細(xì)胞幾乎沒(méi)有影響，例如可以參見(jiàn)表1。
在37℃培養(yǎng)72小時(shí)后，二(膽堿)四硫代鉬酸鹽對(duì)融合HUVECs成活力的作用表1條件細(xì)胞數(shù)目活細(xì)胞數(shù)目對(duì)照組 390,000 335,000對(duì)照組+1uM ATN-224 400,000 460,000對(duì)照組+10uM ATN-224 535,000 555,000對(duì)照組+50uM ATN-224 487,500 475,000實(shí)施例30在內(nèi)皮細(xì)胞中，二(膽堿)四硫代鉬酸鹽沒(méi)有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡內(nèi)皮細(xì)胞用不同劑量的二(膽堿)四硫代鉬酸鹽培養(yǎng)72小時(shí)(一種典型增殖測(cè)定的時(shí)間過(guò)程)并測(cè)定活化天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3的水平。正如可以從圖2中看出，在內(nèi)皮細(xì)胞中，用二(膽堿)四硫代鉬酸鹽培養(yǎng)不會(huì)引起可測(cè)量水平的活化天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3。作為對(duì)照組，我們用10μM喜樹(shù)堿(一種細(xì)胞凋亡的已知誘導(dǎo)劑)培養(yǎng)相同密度的HUVECs。因此，用二(膽堿)四硫代鉬酸鹽培養(yǎng)的HUVECs表現(xiàn)出與在正常增殖條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞相似水平的活化天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3。
實(shí)施例31在Matrigel栓塞測(cè)定中，二(膽堿)四硫代鉬酸鹽是抗血管生成的實(shí)施例35中所述的體內(nèi)matrigel測(cè)定通常被用來(lái)測(cè)定血管生成。如圖3中所示，二(膽堿)四硫代鉬酸鹽，通過(guò)管飼經(jīng)口給予，在體內(nèi)matrigel測(cè)定中抑制由bFGF誘導(dǎo)的血管生成。
實(shí)施例32二(膽堿)四硫代鉬酸鹽下調(diào)來(lái)自融合內(nèi)皮細(xì)胞的IL-8分泌物如圖4所示，二(膽堿)四硫代鉬酸鹽降低了來(lái)自融合內(nèi)皮細(xì)胞的IL-8分泌物的數(shù)量。IL-8，同時(shí)是一種血管生成原細(xì)胞因子，對(duì)于所有已知類(lèi)型的遷移免疫細(xì)胞是趨化性的。
實(shí)施例33二(膽堿)四硫代鉬酸鹽下調(diào)來(lái)自活化單核細(xì)胞的IL-8表達(dá)未活化的單核細(xì)胞不表達(dá)IL-8，但是Thp-1細(xì)胞的PMA活化誘導(dǎo)IL-8的轉(zhuǎn)錄和翻譯。圖5表示二(膽堿)四硫代鉬酸鹽能夠下調(diào)來(lái)自活化單核細(xì)胞的可測(cè)量IL-8的表達(dá)/分泌。
實(shí)施例34二(膽堿)四硫代鉬酸鹽引起鼠KC的血漿水平的減少老鼠不表達(dá)IL-8，但是表達(dá)同系物，例如鼠KC。鼠KC實(shí)際上比人IL-8對(duì)人GROα具有更高的同源性，但是它的受體具有對(duì)人IL-8受體高的同源性。鼠KC的表達(dá)由TNFα誘導(dǎo)。通過(guò)管飼將二(膽堿)四硫代鉬酸鹽給予帶腫瘤(帶腫瘤小鼠，其在它們的血漿中具有可測(cè)量的鼠KC)的C57/B16小鼠(50mg/kg每天)。在治療的第21天，從所述動(dòng)物中采集血漿樣品，進(jìn)行鼠KC測(cè)定。這些數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析表明，在兩組的鼠KC值之間存在顯著差異(p＜0.1)，如圖6所示。
實(shí)施例35Matrigel栓塞測(cè)定此測(cè)定基本上如Passaniti etal.，Lab Invest.67519-528(1992)所述那樣進(jìn)行。冰冷的Matrigel(例如500μL)(Collaborative Biomedical Products，Inc.，Bedford，MA)與肝素(例如50μg/ml)、FGF-2(例如400ng/ml)和測(cè)試化合物混合。在某些測(cè)定中，bFGF可以被腫瘤細(xì)胞取代作為血管生成刺激物。將Makigel混合物皮下注射到4-8周大小的無(wú)胸腺的裸鼠，注射部位在腹部中線(xiàn)附近，優(yōu)選每只小鼠進(jìn)行三次注射。注入的Matrigel形成明顯的固體凝膠。如此選擇注射部位以致每只動(dòng)物接受陽(yáng)性對(duì)照栓塞(例如FGF-2+肝素)、陰性對(duì)照栓塞(例如，緩沖液+肝素)以及包括對(duì)血管生成起作用的測(cè)試化合物的栓塞(例如，F(xiàn)GF-2+肝素+化合物)。所有處理優(yōu)選一式三份。在注射后約第7天或者在觀察血管生成最佳的外加時(shí)間，通過(guò)頸部脫位處死動(dòng)物。沿腹部中線(xiàn)剝離鼠皮，回收Makigel栓塞，并立即在高分辨率下進(jìn)行掃描。然后，將栓塞分散在水中并在37℃下培養(yǎng)過(guò)夜。使用德臘布金溶液(例如，從Sigma處獲得)根據(jù)廠商的指示，測(cè)定血紅蛋白(Hb)含量。由于栓塞中Hb的數(shù)量反映樣品中血液的數(shù)量，因此栓塞中Hb的數(shù)量是測(cè)定血管生成的一種間接方法。此外，另作為方法，在將動(dòng)物處死前，向其注射0.1ml含與一個(gè)熒光基團(tuán)共軛的高分子量右旋糖酐的緩沖液(優(yōu)選PBS)。熒光測(cè)定在分散的栓塞中熒光的數(shù)量也可以作為一種栓塞中血管生成的測(cè)定方法。用mAb抗-CD31(CD31是″血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子或PECAM″)染色還可以用來(lái)證實(shí)栓塞中新血管生成和微血管密度。
最后，人們應(yīng)該注意到實(shí)施本發(fā)明有幾種可供選擇的途徑。因此，本發(fā)明的實(shí)施方案應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是舉例說(shuō)明而不是限制性的，本發(fā)明并不受在此給出的這些細(xì)節(jié)的限制，而是可以在所附權(quán)利要求的范圍和在同等物的范圍內(nèi)進(jìn)行修飾。在本說(shuō)明書(shū)中提到的所有公開(kāi)的文獻(xiàn)和專(zhuān)利文獻(xiàn)均作為參考文獻(xiàn)引用。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)構(gòu)式(I)的化合物 或其溶劑化物或水合物，其中R1、R2、R3、R5、R6和R7獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基；R4和R8獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基、或者當(dāng)N是芳環(huán)的一部分時(shí)，則不存在；任選地，R1和R2一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起，R6和R7一起以及R6和R8一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R3和R7一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；以及Y-2是(MoS4)-2、(Mo2S12)-2、(Mo2S9)-2、(Mo2S7)-2、(Mo2S8)-2、(Mo2S11)-2、(Mo2S6)-2或(Mo2S13)-2；條件是如果Y是(MoS4)-2以及R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8是相同的，那么R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中的每一個(gè)不是氫、甲基、乙基或正丙基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中Y是(MoS4)-2。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中
4.權(quán)利要求3的化合物，其中Y是(MoS4)-2。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一個(gè)不是烷基。
6.權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中的至少一個(gè)不是烷基。
7.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R4是氫、鏈烷基或取代鏈烷基。
8.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R4是氫、甲基或乙基。
9.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2是鏈烷基。
10.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2是甲基或乙基。
11.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1是鏈烷基、取代鏈烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基或取代環(huán)烷基。
12.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。
13.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2是亞烷基或雜亞烷基。
14.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2一起、R2和R3一起以及R2和R4一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。
15.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，R1和R2一起、R2和R3一起以及R2和R4一起是亞烷基。
16.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu)
17.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R3和R7一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。
18.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。
19.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R4是氫、鏈烷基或取代鏈烷基，以及R3是烷基、取代烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基，或者R3和R7一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。
20.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3是烷基、取代烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基，或者R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。
21.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3是烷基、取代烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或環(huán)烷基。
22.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或
23.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu)
24.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu)
25.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu)
26.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。
27.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或
28.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R4是氫，以及R3是取代烷基、環(huán)烷基或取代雜芳基，或者R3和R7一起是亞烷基。
29.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2是鏈烷基，以及R3和R4是氫、烷基、取代烷基、芳基、芳烷基或亞烷基。
30.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2是甲基或乙基，以及R3和R4是氫、烷基、取代烷基、芳基、芳烷基或亞烷基。
31.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或 其中R9是一個(gè)具有至少8個(gè)碳原子并且不超過(guò)18個(gè)碳原子的直鏈鏈烷基基團(tuán)的混合基團(tuán)。
32.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R4是氫，以及R3是取代烷基、取代雜芳基、環(huán)烷基或亞烷基。
33.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或
34.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1和R2一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基，R3是烷基或取代烷基，以及R4是氫或不存在。
35.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或
36.一種藥物組合物，包含權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或助劑。
37.一種治療或防止患者中癌癥的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物。
38.一種在患者中治療或防止癌癥的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求36的藥物組合物。
39.權(quán)利要求37的方法，還包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的另一種抗癌藥或一種包含其它抗癌藥和藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或助劑的藥物組合物。
40.權(quán)利要求38的方法，還包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的另一種抗癌藥或一種包含其它抗癌藥和藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或助劑的藥物組合物。
41.權(quán)利要求37的方法，還包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的鋅或鋅的藥物組合物。
42.權(quán)利要求38的方法，還包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的鋅或包含鋅和藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或助劑的藥物組合物。
43.權(quán)利要求37的方法，其中所述的癌癥是乳腺癌、腎癌、腦癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、軟骨肉瘤或血管肉瘤。
44.一種治療或預(yù)防患者中濕式黃斑變性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物。
45.一種治療或預(yù)防患者中濕式黃斑變性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎癥的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求36的藥物組合物。
46.一種治療或預(yù)防患者中異常血管化的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物。
47.一種治療或預(yù)防患者中異常血管化的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求36的藥物組合物。
48.一種治療或預(yù)防患者中過(guò)量銅含量的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物。
49.一種治療或預(yù)防患者中過(guò)量銅含量的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求36的藥物組合物。
50.一種治療或防止患者中肥胖癥的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物。
51.一種治療或預(yù)防患者中肥胖癥的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求36的藥物組合物。
53.權(quán)利要求50的方法，還包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的另一種減肥藥或包含其它減肥藥和藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或助劑的藥物組合物。
54.權(quán)利要求51的方法，還包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的另一種減肥藥或包含其它減肥藥和藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或助劑的藥物組合物。
55.一種治療或預(yù)防患者中神經(jīng)變性疾病的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物。
56.一種治療或預(yù)防患者中神經(jīng)變性疾病的方法，包括給需要這種治療的患者服用一種治療有效量的權(quán)利要求36的藥物組合物。
57.權(quán)利要求55的方法，其中所述的神經(jīng)變性疾病是阿爾茨海默氏病、肌肉萎縮性側(cè)索硬化或朊病毒病。
58.權(quán)利要求56的方法，其中所述的神經(jīng)變性疾病是阿爾茨海默氏病、肌肉萎縮性側(cè)索硬化或朊病毒病。
全文摘要
本發(fā)明提供新的硫代鉬酸鹽衍生物，新的硫代鉬酸鹽衍生物的制備方法，新的硫代鉬酸鹽衍生物的藥物組合物，使用新的硫代鉬酸鹽衍生物治療與異常血管生成有關(guān)的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF－κB調(diào)節(jié)障礙的方法，以及使用硫代鉬酸鹽衍生物的藥物組合物治療與異常血管生成有關(guān)的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF－κB調(diào)節(jié)障礙的方法。
文檔編號(hào)C07D295/02GK1684678SQ03822555
公開(kāi)日2005年10月19日 申請(qǐng)日期2003年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月23日
發(fā)明者羅伯特·J·特南斯基, 安德魯·馬扎爾, 帕特里夏·L·格拉德斯通, 迪米特里·庫(kù)庫(kù)瓦尼斯, 埃米·L·阿倫, 肖恩·M·奧黑爾, 梅利莎·L·P·普賴(lài)斯, 史蒂文·R·皮里-謝潑德, 費(fèi)爾南多·多納特 申請(qǐng)人:阿特努奧恩公司, 密歇根大學(xué)董事會(huì)