專利名稱：新型吖糖衍生物和以其為有效成分的藥劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有吖糖構(gòu)造的新型氧肟酸化合物，具體涉及以下述通式(A)或通式(I)表示的吖糖衍生物和其藥學(xué)上可接受的鹽，以及以其為有效成分的藥劑， 式(A)中，Ar表示p位可有取代基的苯基，式(I)中，R1表示氫原子、鹵原子、羥基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或異烯丙氧基，且上述C1～C8烷氧基也可由C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及可有效用作上述化合物(A)的制造用中間體的下式(IIA)或(IIB)所示化合物， 式中Ar表示p位可有取代基的苯基，CO-R2表示氧肟酸等價(jià)體，OR3表示羥基等價(jià)體。
背景技術(shù)：
為實(shí)現(xiàn)與金屬原子的高配位能力，人們開發(fā)出了很多氧肟酸化合物，以用作金屬酶抑制劑。以前，在這類用途中，肽類化合物是主流(例如WO94/02447、WO90/05719號公報(bào))，而最近，公開了很多局部構(gòu)造中有磺酰胺的化合物，例如歐洲專利公開公報(bào)(EP1081137)中所揭示的具有與本發(fā)明化合物共通的N-磺酰哌啶-2-氧肟酸構(gòu)造的化合物用作聚集蛋白聚糖分解酶抑制劑的內(nèi)容。
作為抑制目標(biāo)的金屬酶中，除膠原酶、基質(zhì)裂解素和白明膠酶等MMP(WO90/05716)之外，在醫(yī)藥品開發(fā)方面，引人矚目的是TNF-α生成酶(WO94/10990)和Fas配位體溶解酶(WO97/09066)等。
已知，EGF族生長因子，可利用金屬酶使來自于前體的膜結(jié)合蛋白溶解，形成可溶性配位體而與受容體結(jié)合的方式，其中，在HB-EGF的情況下，該溶解過程在角質(zhì)化細(xì)胞的繁殖中具有重要功能(WO01/70269)。該公報(bào)中揭示了具有四氫化異喹啉骨架的氧肟酸衍生物抑制HB-EGF的溶解酶，而做為角質(zhì)化細(xì)胞繁殖性疾病的有效治療劑的內(nèi)容。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供新型角質(zhì)化細(xì)胞繁殖性疾病的治療劑。
本發(fā)明人等在深入研究后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，由上述通式(A)所示具有吖糖構(gòu)造的氧肟酸化合物能抑制HB-EGF的溶解，有望用作角質(zhì)化細(xì)胞繁殖性疾病的治療劑，從而完成本發(fā)明。
下面，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。


圖1為實(shí)施例4的化合物的肥厚抑制效果示意圖。
圖2為實(shí)施例4的化合物的角質(zhì)化細(xì)胞的再上皮化率(％)抑制效果示意圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明涉及以通式(A)
表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽所構(gòu)成的。式中，Ar表示p位可有取代基的苯基。在本發(fā)明中，取代基的具體例可舉出鹵原子、羥基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或異烯丙氧基等，且上述C1～C8烷氧基也可由C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代，特別優(yōu)選為甲氧基、2-乙氧乙氧基或苯氧基。
本發(fā)明化合物(A)可以通過化合物(IIA)或(IIB) 根據(jù)下示方法制得。式中Ar表示在p位可有取代基的苯基，CO-R2表示氧肟酸等價(jià)體，OR3表示羥基等價(jià)體。
在本發(fā)明中，取代基的具體例同上所述，可舉出鹵原子、羥基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或異烯丙氧基等，且上述C1～C8烷氧基也可由C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代。
氧肟酸等價(jià)體除表示一價(jià)原子團(tuán)-CONHOH本身之外，還表示可根據(jù)常規(guī)方法通過化學(xué)變換轉(zhuǎn)變?yōu)樵撛訄F(tuán)-CONHOH的官能團(tuán)，R2的具體例可舉出比如甲氧基、乙氧基或芐氧氨基等。該芐氧氨基可很容易由羧酸和芐氧胺的縮合反應(yīng)引入，在氧肟酸等價(jià)體中，除羧基之外，還包括易于轉(zhuǎn)變成羧基的各種酯。因此，用各種羧基保護(hù)基保護(hù)的羧酸所包括的具體例可舉出，R2除為上述甲氧基、乙氧基、芐氧氨基之外，還有芐氧基、叔丁氧基等。
羥基等價(jià)體除羥基本身之外，還包括根據(jù)常規(guī)方法容易通過化學(xué)變換轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的官能團(tuán)，R3除意味著氫原子之外，還意味著乙?；⑵S基、叔丁基、四氫吡喃基及其它醇保護(hù)基。
而特別適宜用作化合物(IIA)或(IIB)的是以下式(IIIA)或(IIIB)表示的化合物， 式中R1表示氫原子、鹵原子、羥基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或異烯丙氧基，且該C1～C8烷氧基可由C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代，R4表示氫原子或乙酰基，R5表示芐氧氨基、芐氧基、甲氧基或乙氧基。
通式(A)包含由下式 所示的所有立體異構(gòu)體或其混合物，特別優(yōu)選為(Id)。
同樣，化合物(IIA)或(IIB)以及化合物(IIIA)或(IIIB)也包含了各自對應(yīng)的8種立體異構(gòu)體或其混合物。下述說明所用略語和記號的含義如下。
Ac乙酰基；AcOCs乙酸銫；Bn芐基；DEAD偶氮二羧酸二乙酯；DIEA二異丙基乙胺；DMFN，N-二甲基甲酰胺；DMP2，2-二甲氧基丙烷；DMAP4-二甲基氨基吡啶；DCC二環(huán)己基碳化二亞胺；WSC1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽；HOBt1-羥基-1H-苯并三唑；HPLC高速液體色譜；THF四氫呋喃；TBAF四丁基氟化銨的1.0MTHF溶液；Pd/C鈀-碳；Pd(OH)2/C氫氧化鈀-碳；PPh3三苯基膦；NaOMe甲醇鈉；NH2OBn芐基羥胺鹽酸鹽；18-Crown-618-冠-6；MsCl甲磺酰氯；Tf2O三氟甲烷磺酸酐。
本發(fā)明的化合物(A)可由下示方法制成。
1.化合物(I)的立體異構(gòu)體(Ie)以及(Ig)的制造立體異構(gòu)體(Ie)以及(Ig)可如下式(流程1)所示，流程1 對由D-或L-蘇糖醇和甘氨酸衍生物反應(yīng)而得的化合物(IV)[TetrahedronLetters，Vol.38，No.46，8009-8012(1997)參照]進(jìn)行脫保護(hù)，以進(jìn)行閉環(huán)反應(yīng)，得到前體(IIIA-1)，然后進(jìn)行脫保護(hù)和官能團(tuán)的化學(xué)變換而制得。式中，TBDMS表示叔丁基二甲基硅烷基。R1同上所述。
首先，將化合物(IV)[Tetrahedron Letters，Vol.38，No.46，8009-8012(1997)參照]的一級羥基保護(hù)基(TBDMS)脫保護(hù)，得到化合物(V)。反應(yīng)通常是在THF等惰性溶劑中加入TBAF，在0℃～室溫下攪拌0分～2小時(shí)。
然后，由光延反應(yīng)使化合物(V)閉環(huán)，得到化合物(IIIA-1)?？稍诶鏣HF等惰性溶劑中加入三苯基膦及DEAD，在0℃～室溫下攪拌30分～4小時(shí)進(jìn)行反應(yīng)。這時(shí)，由于可得到來自化合物(IIIA-1)的芐氧羰基α位不對稱碳的表異構(gòu)化的混合物，故能根據(jù)需要，由HPLC或其它各種色譜分離精制化合物(IIIA-1)，以供下一級反應(yīng)。或以混合物形式直接將化合物(IIIA-1)供給下一級反應(yīng)，也可在任意階段進(jìn)行分離精制。
所得前體(IIIA-1)可由芐氧羰基變換成芐氧氨羰基后分別進(jìn)行脫保護(hù)衍生成目的物(Ie)或(Ig)。
首先，由氫化分解切斷除去化合物(IIIA-1)的芐酯部位，然后與芐羥胺縮合得到化合物(IIIA-2)。氫化分解通常是在乙酸乙酯、甲醇等低級醇或1，4-二噁烷中，根據(jù)需要還可加水，在10％鈀-碳、20％氫氧化鈀-碳或鉑等的催化下，在氫氣流下或加壓下，于室溫～60℃的溫度下攪拌1～5小時(shí)的條件下進(jìn)行。繼而，縮合通常在DCC或WSC等縮合劑以及根據(jù)需要添加的HOBt等縮合助劑的存在下，在0℃～室溫下攪拌2～24小時(shí)進(jìn)行。供給反應(yīng)的摩爾比為，以羧酸為1摩爾，芐基羥胺為0.8～1.5摩爾，縮合劑為1.0～1.5摩爾，縮合助劑為1.0～1.5摩爾。
然后，可通過切除化合物(IIIA-2)的各保護(hù)基得到目的物。即，可按照通常的方法分別切除乙酰基、丙酮化合物基以及芐基。例如，脫乙?；磻?yīng)通常是在甲醇等低級醇中加入28％的NaOMe，在0℃～室溫下攪拌1～6小時(shí)的條件下進(jìn)行。丙酮化合物基的切除可在例如甲醇等的溶劑中，在陽離子交換樹脂的存在下，根據(jù)需要還可加水，在室溫～50℃的條件下進(jìn)行2～24小時(shí)的反應(yīng)而完成。芐基的切除可同上所述，利用氫化分解進(jìn)行。
在流程1中，為得到立體異構(gòu)體(Ie)，可使用化合物(IV)的(3S、4S、5R)體化合物(IVe)，而為得到立體異構(gòu)體(Ig)，可使用化合物(IV)的(3R、4R、5S)體化合物(IVg)，(位置編號以己酸為基準(zhǔn))。而化合物(IVe)和(IVg)可分別由L-蘇糖醇和D-蘇糖醇與甘氨酸衍生物的反應(yīng)物衍生而得。
2.化合物(I)的立體異構(gòu)體(If)以及(Ih)的制造立體異構(gòu)體(If)以及(Ih)如下式(流程2)所示，流程2
用丙酮化合物基對各立體異構(gòu)體(Ie)或(Ig)的3位和4位的羥基保護(hù)后，使5位的羥基立體反轉(zhuǎn)而制得(位置編號以哌啶環(huán)為基準(zhǔn))。另外，式中THP表示四氫吡喃基，R1同上所述。
首先，切除可如流程1所示化合物(IIIA-1)一樣合成的化合物(IIIA-3)的保護(hù)基(四氫吡喃基和丙酮化合物基)，得到化合物(VI)。反應(yīng)如利用上述丙酮化合物基切斷時(shí)所用的使用陽離子交換樹脂的方法，就可一次性切除兩個(gè)保護(hù)基。
然后，使化合物(VI)生成丙酮化合物，得到化合物(IIIB-1)。反應(yīng)可在例如DMF等惰性溶劑中，在對甲苯磺酸一水合物或樟腦-10-磺酸等酸催化劑的存在下，添加5～15倍量的DMP，在室溫～80℃下反應(yīng)2～24小時(shí)的條件下進(jìn)行。
然后使化合物(IIIB-1)的羥基變成三氟甲磺酸基，再由SN2親核取代反應(yīng)引發(fā)立體反轉(zhuǎn)，得到化合物(IIIB-2)。調(diào)制三氟甲基磺酸體的反應(yīng)通常是在二氯甲烷等溶劑中，并在三乙胺或吡啶等堿的存在下，在-60℃～0℃下，添加三氟甲磺酸酐，并在該溫度下攪拌30分鐘～2小時(shí)的條件下進(jìn)行。此時(shí)所得的三氟甲基磺酸體在反應(yīng)結(jié)束后無需特別精制，而可馬上供給后續(xù)反應(yīng)，也可由硅膠柱色譜等精制后馬上供給后續(xù)反應(yīng)。而SN2親核取代反應(yīng)可在例如乙腈等溶劑中，在18-冠-6的存在下，添加乙酸銫，在0℃～室溫下攪拌1～24小時(shí)的條件下進(jìn)行。
然后利用氫化分解切除化合物(IIIB-2)的芐酯部位，再與芐基羥胺縮合，得到化合物(IIIB-3)。再以任意順序切除(IIIB-3)的各保護(hù)基，即乙酰基、丙酮化合物基和芐基，即可得到目的物(If)或(Ih)。反應(yīng)條件與上述流程1的條件相同。
3.化合物(I)的立體異構(gòu)體(Ia)、(Ib)、(Ic)以及(Id)的制造立體異構(gòu)體(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)可經(jīng)例如下式流程3制得。其中，R1含義同上所述。

首先，還原化合物(VII)[Synthesis，No.9，1305-1309(2000)參照]的迭氮基后，使之與烯丙基磺酰氯(VIII)反應(yīng)，得到化合物(IX)。迭氮基的還原可在例如乙酸乙酯、低級醇或1，4-二噁烷中，根據(jù)需要還可加水，在10％鈀-碳、20％氫氧化鈀-碳或鉑等的催化下，在氫氣流或加壓下，在室溫～60℃的條件下進(jìn)行。隨后的與烯丙基磺酰氯(VIII)的反應(yīng)是在DMF等惰性溶劑中，在DMAP等堿的存在下，在通常0℃～室溫下攪拌1～24小時(shí)的條件下進(jìn)行。
然后，選擇性切除化合物(IX)末端的丙酮化合物基。反應(yīng)可在例如陽離子交換樹脂的存在下，在甲醇等溶劑中，根據(jù)需要還可加水，在室溫～50℃下攪拌5小時(shí)～4天的條件下進(jìn)行。也可通過在乙腈中用氯化鈰七水合物與草酸在室溫條件下攪拌0.5～2小時(shí)而得到目的物(X)。
然后，有選擇地將化合物(X)的一級羥基變換成甲磺?；?。反應(yīng)在例如二氯甲烷等溶劑中，在三乙胺或DIEA等堿的存在下，用0.95～1.05摩爾甲磺酰氯，優(yōu)選在-60℃～-20℃的低溫下攪拌30分～5小時(shí)的條件下進(jìn)行，而得到目的化合物(XI)。
然后由化合物(XI)的分子內(nèi)閉環(huán)反應(yīng)得到化合物(IIIB-4)。反應(yīng)通常在DMF等惰性溶劑中，在碳酸鉀或三乙胺等堿的存在下，在室溫～100℃，優(yōu)選為40～60℃下反應(yīng)1～5小時(shí)的條件下得到目的化合物(IIIB-4)。
然后，使化合物(IIIB-4)的酯部位利用加堿水解變成相應(yīng)的羧酸，通常不精制地與芐基羥胺縮合得到化合物(IIIB-5)。加堿水解通常是在甲醇等低級醇中，使用氫氧化鈉或氫氧化鋰水溶液，優(yōu)選為調(diào)配1當(dāng)量水溶液，在0～60℃下攪拌1～5小時(shí)。然后切除丙酮化合物基和芐基，得到化合物(Ia)、(Ib)、(Ic)或(Id)。該反應(yīng)可按照流程1或流程2的反應(yīng)進(jìn)行。
在流程3中，為得到立體異構(gòu)體(Ia)、立體異構(gòu)體(Ib)、立體異構(gòu)體(Ic)、立體異構(gòu)體(Id)可分別使用化合物(VII)的(3R、4S、5S)體化合物(VIIa)、化合物(VII)的(3S、4R、5S)體化合物(VIIb)、化合物(VII)的(3S、4R、5R)體化合物(VIIc)、化合物(VII)的(3R、4S、5R)體化合物(VIId)(位置編號以己酸為基準(zhǔn))。而化合物(VIIa)、化合物(VIIb)、化合物(VIIc)、化合物(VIId)可分別由L-古洛糖-1，4-內(nèi)酯、L-葡萄糖-1，5-內(nèi)酯、D-古洛糖-1，4-內(nèi)酯、D-甘露糖-1，4-內(nèi)酯調(diào)制[Synthesis，9，1305-1309(2000)]。
4.化合物(I)的立體異構(gòu)體(Id)的另一種制造方法立體異構(gòu)體(Id)可按照下式流程4，在保護(hù)立體異構(gòu)體(Ia)的3位及4位羥基后，使其5位的羥基立體反轉(zhuǎn)而制得(位置編號以哌啶環(huán)為基準(zhǔn))。
式中R1和上述意義相同。
首先，使化合物(IIIB-6)[流程3的化合物(IIIB-5)之一]的游離羥基立體反轉(zhuǎn)，得到化合物(IIIB-7)。具體而言，使該羥基變成三氟甲磺酸基，然后利用乙酰氧離子進(jìn)行SN2親核取代反應(yīng)。反應(yīng)條件同流程2所述。
然后，以任意順序切除(IIIB-7)的各保護(hù)基，即乙酰基、丙酮化合物基和芐基，就可得到目的物(Id)。反應(yīng)條件和流程1相同。
這些化合物可以口服或非口服形式向患者給藥?？诜┬统瑒㈩w粒劑、粉劑、細(xì)粒劑、硬膠囊等固體制劑之外，還包括漿液劑、軟膠囊等液劑。這些制劑可根據(jù)常規(guī)方法制得。例如片劑、顆粒劑、粉劑或細(xì)粒劑可由上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與例如乳糖、淀粉、結(jié)晶纖維素、硬脂酸鎂、羥丙基纖維素、滑石等常用醫(yī)藥添加物混合制得，硬膠囊劑是通過將上述細(xì)粒劑或粉劑填充到適當(dāng)?shù)哪z囊中制得。而漿液劑是通過使上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽溶于或懸濁于含白糖、羧基纖維素等的水溶液中而制得。軟膠囊劑是通過將上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽溶于或懸浮于植物油、油性乳劑、二醇等脂質(zhì)賦形劑中，再填充于軟膠囊中而制成。
非口服劑形除注射劑之外，還有軟膏、擦拭藥水、霜?jiǎng)┑韧庥脛蹦c栓、陰道栓等栓劑，噴霧劑等經(jīng)鼻給藥劑等。這些制劑可由常規(guī)方法制得，例如注射劑可通過將上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽溶于或乳化于生理食鹽水或植物油、油性乳劑、二醇等脂質(zhì)賦形劑中，在無菌狀態(tài)下封入安瓿或藥劑小瓶而制得。軟膏劑則是在凡士林、石蠟、甘油等基劑中加入上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，并根據(jù)需要加入乳化劑、保存劑等，利用常規(guī)方法制得。
本發(fā)明的藥劑給藥量因劑形，患者年齡、性別、體重或癥狀而異，通常，有效成分以0.1～600mg/kg體重/日、優(yōu)選為10～200mg/kg體重/日為適量，以一日一次或分2～4次進(jìn)行給藥。
試驗(yàn)例11.試驗(yàn)化合物化合物a實(shí)施例2；化合物b實(shí)施例3；化合物c實(shí)施例4；化合物d實(shí)施例1；化合物e實(shí)施例5。
2.試驗(yàn)方法使用表達(dá)HB-EGF與來自人體胎盤的堿性磷酸酶(AP)的融合蛋白的人體纖維肉瘤(fibrosarcoma HT-1080)轉(zhuǎn)染子，進(jìn)行下述試驗(yàn)。
用胰蛋白酶-EDTA處理培養(yǎng)后的該轉(zhuǎn)染子，使用MEM培養(yǎng)基(不含酚紅、含10％FCS，下同)調(diào)制每1ml有1.0×105個(gè)細(xì)胞濃度的細(xì)胞浮游液。將該細(xì)胞浮游液以每孔0.2ml植入96孔培養(yǎng)皿，在37℃的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)一晚。吸除培養(yǎng)上清液，用磷酸緩沖生理鹽水以每孔0.2ml的用量洗凈，然后以每孔0.1ml的用量，加入試驗(yàn)化合物溶液[用DMSO稀釋1mM或0.1mM的二甲亞砜(DMSO)溶液，再用MEM培養(yǎng)基稀釋至100倍，調(diào)成所需濃度]，在37℃的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)預(yù)處理30分鐘。吸除培養(yǎng)上清液，以每孔0.2ml加入與預(yù)處理相同濃度的含試驗(yàn)化合物的TPA溶液(將120μM的DMSO溶液在MEM培養(yǎng)基內(nèi)稀釋至60nM)，用37℃的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)60分鐘。并僅以在MEM培養(yǎng)基中進(jìn)行預(yù)處理，且不含試驗(yàn)化合物TPA溶液作為培養(yǎng)后產(chǎn)物的對照。
將取自各孔的0.1ml培養(yǎng)上清液和用作背景的0.1ml的MEM培養(yǎng)基本身分別放入新的96孔培養(yǎng)皿，封蓋后，在65℃下培養(yǎng)10分鐘，使存在于MEM培養(yǎng)基和細(xì)胞中的內(nèi)源性AP鈍化。在各孔中加入0.1ml基質(zhì)溶液(在即將使用之前用0.01％氯化鎂/1M二乙醇胺將預(yù)先調(diào)制的磷酸對硝基苯100mg/ml的水溶液稀釋100倍調(diào)制而成)，遮光，在室溫條件下培養(yǎng)120分鐘。用微量板讀數(shù)器測定各孔的405nm吸光度，然后，以僅MEM培養(yǎng)基的背景的吸光度與作為對照的僅加入TPA的培養(yǎng)上清液的吸光度之差為100％，求得表示試驗(yàn)化合物的50％吸光度的濃度，作為試驗(yàn)化合物的IC50(μM)。
3.試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果如表1表示表1

試驗(yàn)例21.試驗(yàn)化合物化合物c(實(shí)施例4)2.試驗(yàn)方法將BALB/c類雄性實(shí)驗(yàn)鼠背部去毛，再將TPA丙酮溶液10μL(0.1mM)涂布約1cm2的面積。對于給藥群，將試驗(yàn)化合物溶于丙酮并涂布TPA后，在5分鐘、24及48小時(shí)后，在TPA涂布部位上涂布20μL的液量。對于非給藥群，僅涂布TPA。另外，以不涂布TPA丙酮溶液、而是涂布純丙酮的群為對照群。
涂布TPA的72小時(shí)后，使實(shí)驗(yàn)鼠死亡，剝離其皮膚組織，用福爾馬林固定，然后沿中心線將TPA溶液或丙酮涂布部位的中央部切開，按照一般方法制作石蠟包切片。脫石蠟后，用蘇木精-曙紅將標(biāo)本染色，在顯微鏡下測量表皮厚度。
將涂布了TPA和試驗(yàn)化合物的群(給藥群)的表皮厚度與非給藥群及對照群的數(shù)據(jù)作比較，測試試驗(yàn)化合物的增生抑制效果。
3.試驗(yàn)結(jié)果圖1表示試驗(yàn)結(jié)果。圖1中，縱軸數(shù)字表示表皮厚度(μm)。分別以TPA(-)的柱圖表示對照群的表皮厚度，以TPA柱圖表是非給藥群。1、10及100的各柱圖分別表示投放1、10及100(μg/部位)試驗(yàn)化合物時(shí)的表皮厚度。并根據(jù)Dunnett法測定給藥群相對于非給藥群的有效差，用*或**表示結(jié)果(*p＜0.05，**p＜0.01)?？v向棒表示標(biāo)準(zhǔn)誤差。
試驗(yàn)例31.試驗(yàn)化合物化合物c(實(shí)施例4)2.試驗(yàn)方法依照Tsuboi等人的方法(Tsuboi et al.，J.Dermatol.，19，673-675(1992)制作創(chuàng)傷治愈標(biāo)本。除去BALB/c類雄性試驗(yàn)鼠背部的毛，用活體檢測用打孔機(jī)在背部皮膚上打出2個(gè)直徑6mm的圓孔。對于給藥群，將試驗(yàn)化合物懸浮于1.5％羧甲基纖維素鈉/0.01M磷酸緩沖溶液(溶劑)中，用50μL/部位的液量進(jìn)行手術(shù)，然后于次日開始的7天內(nèi)1日1次地反復(fù)涂在各創(chuàng)口。手術(shù)后8日，使試驗(yàn)鼠死亡，摘除包括創(chuàng)傷部位的皮膚組織，以10％中性緩沖福爾馬林溶液固定1日，相對于中心線垂直地切開創(chuàng)傷中央部位，按照常規(guī)方法制作石蠟切片。脫石蠟后，根據(jù)使用抗角蛋白抗體的免疫組織化學(xué)染色法將角質(zhì)化細(xì)胞染色。對角質(zhì)化細(xì)胞的再上皮化的測量是用圖像解析系統(tǒng)執(zhí)行，測量創(chuàng)傷部的長度(mm)和角質(zhì)化細(xì)胞的再上皮化(mm)。按照下式算出各動(dòng)物的角質(zhì)化細(xì)胞的再上皮化率(％)。
2.試驗(yàn)結(jié)果圖2表示試驗(yàn)結(jié)果。圖2中，縱軸數(shù)字表示角質(zhì)化細(xì)胞的再上皮化率(％)。黑色的4根柱圖表表示給藥群的角質(zhì)化細(xì)胞的再上皮化率，最下端的數(shù)字為試驗(yàn)化合物的給藥量(μg/部位)。對照的柱圖表示對照群的角質(zhì)化細(xì)胞的再上皮化率。并根據(jù)Dunnett法測定給藥群相對于對照群的有效差，用**表示結(jié)果(**p＜0.01)?？v向棒表示標(biāo)準(zhǔn)誤差。
下面舉出實(shí)施例具體說明本發(fā)明。而實(shí)施例6～9所示中間體可如實(shí)施例1～5所述同樣地衍生為最終化合物(I)。
實(shí)施例1(2R，3S，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺的制造(1)(3S，4’S，5’R)-3-乙酸基-3-[5’-(叔丁基二甲基硅烷氧甲基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-2-(4”-甲氧基苯磺酰氨基)-丙酸芐酯 將已知化合物(IVa)，即通式(IV)中R1是甲氧基、3位的乙酸基為羥基的化合物20.0g溶于80mL吡啶，加入乙酸酐40mL，在室溫下攪拌3小時(shí)。再加入甲醇20mL，攪拌5分鐘后減壓濃縮溶劑。將所得殘?jiān)苡谝宜嵋阴?00mL，用2.5％檸檬酸(×2)及水洗滌后，以硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑。用硅膠中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝1∶5→1∶4)精制所得殘?jiān)?，得到?biāo)記化合物漿液16.2g。
1H-NMR(CDCl3)δ0.07(s)，0.10(s)，0.85-1.0(m)，1.2-1.4(m)，1.44(s)，1.96(s)，2.07(s)，3.5-4.0(m)，4.1-4.2(m)，4.40(dd，J＝1.9，10.7Hz)，4.48(dd，J＝2.6，8.9Hz)，4.8-5.3(m)，5.56(d，J＝9.0Hz)，6.8-6.9(m)，7.1-7.45(m)，7.7-7.8(m)(2)(2R，3S，4’S，5’S)-3-乙酸基-3-[5’-羥甲基-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-2-(4’-甲氧基苯磺酰氨基)-丙酸芐酯
將上述(1)的化合物16.0g溶于200mL的THF中，添加乙酸4.06g，在冰冷攪拌條件下加入67.2mL的TBAF，在室溫下攪拌1.5小時(shí)。然后在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯300mL，用水及飽和食鹽水洗凈后，用硫酸鎂干燥，并減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝1∶3→1∶2→1∶1→3∶2→2∶1)進(jìn)行精制，得到標(biāo)記化合物漿液4.17g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.22(s，3H)，1.36(s，3H)，2.07(s，3H)，3.5-3.7(m，1H)，3.75-3.9(m，1H)，3.86(s，3H)，3.9-4.2(m，2H)，4.47(dd，1H，J＝2.7，8.9Hz)，4.90(d，1H，J＝12.2Hz)，5.09(d，1H，J＝12.2Hz)，5.14(dd，1H，J＝2.6，8.8Hz)，5.55(d，1H，J＝8.8Hz)，6.89(d，2H，J＝8.9Hz)，7.2-7.4(m，5H)，7.73(d，2H，J＝8.9Hz)(3)(3aS，6R，7S，7aS)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐酯 將上述(2)的化合物4.1g溶于50mL的THF，加入三苯基膦3.0g，冰冷后添加2.0g的DEAD，室溫?cái)嚢?0分鐘。然后在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯150mL，用飽和食鹽水洗凈后，加硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物2.7g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s，3H)，1.41(s，3H)，2.13(s，3H)，3.15(dd，1H，J＝11.1，11.9Hz)，3.27(dd，1H，J＝2.5，9.3Hz)，3.86(s，3H)，3.9-4.0(m，1H)，4.15-4.25(m，1H)，5.12(d，1H，J＝12.0Hz)，5.18(d，1H，J＝12.0Hz)，5.2-5.25(m，1H)，5.81(t，1H，J＝2.5Hz)，6.88(d，2H，J＝9.0Hz)，7.25-7.4(m，5H)，7.71(d，2H，J＝9.0Hz)(4)(3aS，6R，7S，7aS)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐氧酰胺 將上述(3)的化合物2.7g溶于50mL乙酸乙酯，添加270mg的10％Pd/C，氫氣環(huán)境下室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后濾去催化劑，減壓條件下濃縮濾液。將所得殘?jiān)苡?0mL的DMF，添加1.3g的WSC和913mg的HOBt。再添加芐基羥胺鹽酸鹽1.08g及DIEA873mg，室溫?cái)嚢?小時(shí)。而后添加WSC299mg、HOBt211mg、芐基羥胺鹽酸鹽248mg及DIEA202mg攪拌45分鐘。再向反應(yīng)液中添加乙酸乙酯200mL，用0.5當(dāng)量鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和食鹽水洗凈后，用硫酸鎂干燥并減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→1∶2→2∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物2.08g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.37(s，3H)，1.41(s，3H)，1.88(s，3H)，3.0-3.2(m，1H)，3.5-3.7(m，2H)，3.89(s，3H)，4.2-4.3(m，1H)，4.73(bs，1H)，4.89(d，1H，J＝11Hz)，4.96(d，1H，J＝11Hz)，5.71(t，1H，J＝2.1Hz)，6.98(d，1H，J＝9.0Hz)，7.42(s，5H)，7.71(d，2H，J＝9.0Hz)(5)(3aS，6R，7S，7aS)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐氧酰胺 將上述(4)的化合物1.85g溶于甲醇25ml，添加668mg的28％NaOMe，室溫?cái)嚢?小時(shí)。再加入334mg的28％NaOMe，室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯150mL，用0.5當(dāng)量鹽酸及飽和食鹽水洗凈。用硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑后，將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝2∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物1.36g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s，3H)，1.39(s，3H)，3.02(dd，1H，J＝10.9，12.8Hz)，3.3-3.55(m，2H)，3.88(s，3H)，4.07(dd，1H，J＝4.1，12.8Hz)，4.75-5.05(m，4H)，6.96(d，2H，J＝9.1Hz)，7.3-7.5(m，5H)，7.80(d，2H，J＝9.1Hz)，9.17(s，1H)(6)(2R，3S，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸芐氧酰胺 將上述(5)的化合物1.1g溶于甲醇25mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 3.0g，室溫下攪拌一夜。再濾去不溶物，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物974mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.16(d，1H，J＝5.0Hz)，3.4-3.7(m，2H)，3.81(s，3H)，4.27(d，1H，J＝2.1Hz)，4.68(s，2H)，4.86(d，1H，J＝5.4Hz)，4.94(d，1H，J＝4.5Hz)，5.05(d，1H，J＝3.8Hz)，7.07(d，2H，J＝8.9Hz)，7.25-7.5(m，5H)，7.71(d，2H，J＝8.9Hz)，11.5(s，1H)(7)(2R，3S，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺 將上述(6)的化合物316mg溶于甲醇25mL，添加40mg的10％Pd/C，在氫氣環(huán)境下室溫?cái)嚢?小時(shí)。再濾去催化劑，減壓濃縮濾液，得到無色粉末狀標(biāo)記化合物242mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.25-3.7(m，5H)，3.83(s，3H)，4.34(d，1H，J＝2.0Hz)，4.7-5.2(m，3H)，7.05(d，2H，J＝8.9Hz)，7.72(d，2H，J＝8.9Hz)，8.88(s，1H)，10.86(s，1H)。
TOF-Mass385(M+Na)實(shí)施例2(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺的制造(1)(2R，4’S，4”S，5’R)-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯 將已知化合物(2R，4’S，4”S，5’R)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯18.7g溶于乙酸乙酯180mL，加入3.0g的10％Pd/C，在氫氣加壓下室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后濾去催化劑，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)苡?60mL的DMF，加入8.7g的DMAP及對甲氧基苯磺酰氯14.7g，室溫?cái)嚢?2小時(shí)。然后在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯500mL，用1當(dāng)量鹽酸、水及飽和食鹽水依次洗凈，再以硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物22.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.37(s，3H)，1.39(s，3H)，1.42(s，3H)，1.43(s，3H)，3.56(s，3H)，3.86(s，3H)，3.85-4.3(m，6H)，5.36(d，1H，J＝10.1Hz)，6.96(d，2H，J＝9.0Hz)，7.76(d，2H，J＝9.0Hz)(2)(1”S，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”，2”-二羥乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯
將上述(1)的化合物18.9g溶于90％甲醇水溶液450mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 16.1g，室溫?cái)嚢?日。再濾去不溶物，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→三氯甲烷∶甲醇＝40∶1)精制，得到標(biāo)記化合物10.5g，回收原料6.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.37(s，3H)，1.42(s，3H)，3.56(s，3H)，3.7-3.8(m，3H)，3.86(s，3H)，3.99(dd，1H，J＝1.6，9.7Hz)，4.20(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz)，4.39(dd，1H，J＝1.7，8.4Hz)，5.53(d，1H，J＝9.8Hz)，6.95(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz).
(3)(1”R，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”-羥基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯 將上述(2)的化合物3.3g溶于二氯甲烷50mL，加入三乙胺1.11mL，在-40℃下冷卻后，緩慢滴加甲磺酰氯0.62mL/二氯甲烷3mL，在該溫度下攪拌50分鐘。再用飽和食鹽水洗凈反應(yīng)液，以硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2→2∶3→1∶1)精制，得到標(biāo)記化合物1.74g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.38(s，3H)，1.43(s，3H)，2.60(d，1H，J＝8.0Hz)，3.14(s，3H)，3.58(s，3H)，3.87(s，3H)，3.95-4.1(m，2H)，4.25-4.5(m，4H)，5.42(d，1H，J＝9.6Hz)，6.97(d，2H，J＝9.0Hz)，7.76(d，2H，J＝9.0Hz)(4)(3aR，4R，7S，7aR)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯 將上述(3)的化合物4.6g溶于150mL的DMF，加入碳酸鉀1.54g，在45℃下攪拌1.5小時(shí)。再向反應(yīng)液中添加乙酸乙酯300mL，用水(×2)及飽和食鹽水洗凈，以硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物3.1g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s，3H)，1.45(s，3H)，2.41(d，1H，J＝4.1Hz)，3.25(dd，1H，J＝9.6，12.0Hz)，3.58(s，3H)，3.5-3.65(m，1H)，3.7-3.8(m，1H)，3.88(s，3H)，3.9-4.2(m，2H)，5.06(d，1H，J＝6.1Hz)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.70(d，2H，J＝9.0Hz)。
(5)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐氧基酰胺的制造 (5-1)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸甲酯將上述(4)的化合物780mg溶于甲醇15mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 5.0g，室溫下攪拌6.5小時(shí)。然后濾去不溶物，減壓濃縮濾液。所得殘?jiān)?0mL的DMF溶解，加入1.8g的DMP和20mg的對甲苯磺酸一水合物，在室溫下攪拌5小時(shí)，50℃下攪拌1小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯150mL，用飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和食鹽水依次洗凈，再以硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到標(biāo)記化合物和上述(4)的化合物的混合物620mg。
(5-2)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐氧基酰胺將上述(5-1)的混合物620mg溶于甲醇30mL，加入1當(dāng)量氫氧化鈉水溶液8.5mL，室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后在反應(yīng)液中加入水50mL，用醚洗凈，以10％檸檬酸水溶液使水層呈酸性，用乙酸乙酯萃取。用水及飽和食鹽水洗凈有機(jī)層后，用硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)苡?0mL的DMF，加入431mg的WSC和344mg的HOBt。繼而加入芐羥胺鹽酸鹽359mg及291mg的DIEA，室溫?cái)嚢枰灰?。再向反?yīng)葉中加入乙酸乙酯100mL，用10％檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和食鹽水依次洗凈，再以硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝2∶3→1∶1)精制后，過濾取得析出固體，得到標(biāo)記化合物98mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.36(s，3H)，1.41(s，3H)，2.9-3.2(m，2H)，3.55-3.75(m，2H)，3.88(s，3H)，4.1-4.25(m，2H)，4.68(d，1H，J＝4.3Hz)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.73(d，2H，J＝9.0Hz)，9.1(s，1H)。
(6)(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸芐氧酰胺的制造 將上述(5-2)的化合物100mg溶于1，4-二噁烷/甲醇5-15mL的混合溶液，加入陽離子交換樹脂Muromac 2.5g，室溫?cái)嚢?4小時(shí)。再濾去不溶物，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→10∶1)精制，得到標(biāo)記化合物88mg。
1H-NMR(DMSO-d6+D2O)δ3.0-3.25(m，1H)，3.28(dd，1H，J＝6.7，9.4Hz)，3.41(t，1H，J＝11.1Hz)，3.81(s，3H)，4.17(d，1H，J＝6.8Hz)，4.49(d，1H，J＝10.6Hz)，4.57(d，1H，J＝10.6Hz)，7.07(d，2H，J＝8.9Hz)，7.25-7.45(m，5H)，7.67(d，2H，J＝8.9Hz)(7)(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺 將上述(6)的化合物88mg溶于甲醇12mL，加入20mg的10％Pd/C，氫氣環(huán)境下室溫?cái)嚢?小時(shí)。再濾去催化劑，減壓濃縮濾液后，將所得殘?jiān)鼉鼋Y(jié)干燥，得到無色非晶質(zhì)標(biāo)記化合物60mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.0-3.7(m，5H)，3.84(s，3H)，4.20(d，1H，J＝5.3Hz)，7.09(d，2H，J＝9.0Hz)，7.67(d，2H，J＝9.0Hz)，8.82(bs，1H)，10.67(s，1H)TOF-Mass385(M+Na)，401(M+K)實(shí)施例3(2R，3R，4R，5S)-1-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-3，4，5-三羥基-哌啶-2-羧酸羥酰胺的制造(1)(2R，4’S，4”S，5’R)-[4-(乙氧乙氧基)苯磺酰氨基]-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯 將已知化合物(2R，4’S，4”S，5R)-迭氮基-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯30.6g溶于乙酸乙酯360mL，加入5.3g的10％Pd/C，在氫氣加壓條件下室溫?cái)嚢?小時(shí)。再濾去催化劑，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)苡?80mL的DMF，加入14.2g的DMAP，在冰冷攪拌下添加對乙氧乙氧基苯磺酰氯26.3g，室溫?cái)嚢?小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯500mL，用1當(dāng)量鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和食鹽水依次洗凈后，以硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝35∶65→2∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物35.5g。
1H-NMR(CDCl3)δ··25(t，3H，J＝7.0Hz)，1.37(s，3H)，1.39(s，3H)，1.43(s，3H)，1.44(s，3H)，3.57(s，3H)，3.61(q，2H，J＝7.0Hz)，3.75-3.85(m，2H)，3.85-4.0(m，2H)，4.05-4.3(m，6H)，5.36(d，1H，J＝10.0Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz)(2)(1”S，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”，2”-二羥乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-[4-(乙氧乙氧基)苯磺酰氨基]-乙酸甲酯的制造 將上述(1)的化合物35.1g溶于90％甲醇水溶液800mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 29.8g，室溫?cái)嚢?日。再濾去不溶物，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1→三氯甲烷∶甲醇＝25∶1)精制，得到標(biāo)記化合物18.2g，回收原料8.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25(t，3H，J＝7.0Hz)，1.38(s，3H)，1.47(s，3H)，2.3(bs，1H)，2.66(d，1H，J＝6.7Hz)，3.5-3.7(m，5H)，3.7-3.85(m，5H)，3.97(d，1H，J＝8.4Hz)，4.1-4.25(m，3H)，4.40(dd，1H，J＝1.7，8.5Hz)，5.46(d，1H，J＝9.5Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz)(3)(1”R，2R，4’R，5’S)-[4-(乙氧乙氧基)苯磺酰氨基]-[5’-(1”-羥基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-乙酸甲酯
將上述(2)的化合物18.2g溶于二氯甲烷300mL，加入三乙胺4.25g，在-60℃下冷卻后，緩慢滴加甲磺酰氯4.59g/二氯甲烷30mL，在該溫度下攪拌50分鐘。再用飽和食鹽水洗凈反應(yīng)液，以硫酸鎂干燥有機(jī)層后，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝2∶3→1∶1→3∶2)精制，得到標(biāo)記化合物13.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25(t，3H，J＝7.0Hz)，1.3 8(s，3H)，1.43(s，3H)，2.60(d，1H，J＝8.0Hz)，3.14(s，3H)，3.58(q，2H，J＝7.1Hz)，3.75-3.85(m，2H)，3.96(dd，1H，J＝1.7，9.5Hz)，3.9-4.4(m，8H)，5.43(d，1H，J＝9.5Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz)(4)(3aR，4R，7S，7aR)-5-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-7-羥基-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯 將上述(3)的化合物10.4g溶于200mL的DMF，加入碳酸鉀3.1g，在50℃下攪拌1小時(shí)。然后向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯500mL，用水(×2)及飽和食鹽水洗凈，以硫酸鎂干燥有機(jī)層后，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物7.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25(t，3H，J＝7.0Hz)，1.35(s，3H)，1.45(s，3H)，3.25(dd，1H，J＝9.7，12.1Hz)，3.5-3.85(m，9H)，3.85-4.25(m，4H)，5.05(d，1H，J＝6.1Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.69(d，2H，J＝9.0Hz)。
(5)(3aS，6R，7R，7aS)-5-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-7-羥基-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐氧酰胺的制造 (5-1)(3aS，6R，7R，7aS)-5-(4-乙氧乙氧基-苯磺酰)-7-羥基-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸甲酯將上述(4)的化合物2.0g溶于甲醇35mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 8.0g，室溫?cái)嚢枰灰埂Ｔ贋V去不溶物，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)苡?5mL的DMF，加入2.7g的DMP及對甲苯磺酸一水合物10mg，室溫?cái)嚢枰灰购?，?0℃下攪拌1小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯150mL，用飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和食鹽水依次洗凈，以硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到標(biāo)記化合物和上述(4)的化合物的混合物817mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.1Hz)，1.26(t，J＝7.2Hz)，1.35(s)，1.43(s)，1.45(s)，3.07(d，J＝5.8Hz)，3.25(dd，J＝9.7，12.0Hz)，3.55(s)，3.58(s)，3.6-3.8(m)，3.8-4.25(m)，4.95(d，J＝6.6Hz)，5.05(d，J＝6.1Hz)，7.0(d，2H，J＝9.0Hz)，7.69(d，2H，J＝9.0Hz)。
(5-2)(3aS，6R，7R，7aS)-5-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-7-羥基-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐氧基酰胺將上述(5-1)的混合物817mg溶于甲醇/1，4-二噁烷5-15mL的混合溶劑，加入1當(dāng)量氫氧化鈉水溶液5mL，室溫?cái)嚢?小時(shí)20分鐘。再用5％檸檬酸水溶液中和后以乙酸乙酯萃取。用水及飽和食鹽水洗凈有機(jī)層后，以硫酸鎂干燥并減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)苡?0mL的DMF，添加238mg的WSC及190mg的HOBt。繼續(xù)添加芐羥胺鹽酸鹽198mg及160mg的DIEA，室溫?cái)嚢枰灰?。再向反?yīng)液中加入乙酸乙酯100mL，用10％檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和食鹽水依次洗凈后，以硫酸鎂干燥并減壓蒸溜去除溶劑。在所得殘?jiān)屑尤胍颐?乙酸乙酯(5∶1)，濾取析出的固體，得到標(biāo)記化合物98mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.0Hz)，1.36(s，3H)，1.40(s，3H)，2.9-3.2(m，2H)，3.5-3.7(m，4H)，3.75-3.85(m，2H)，4.1-4.25(m，4H)，4.68(d，1H，J＝4.2Hz)，4.88(d，1H，J＝11.0Hz)，4.94(d，1H，J＝11.0Hz)，7.01(d，2H，J＝9.0Hz)，7.4(s，5H)，7.71(d，2H，J＝9.0Hz)，9.10(s，1H)。
(6)(2R，3R，4R，5S)-1-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-3，4，5-三羥基-哌啶-2-羧酸芐氧基酰胺的制造 將上述(5-2)的化合物溶于甲醇130mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 23.4g，室溫?cái)嚢枰灰埂Ｔ贋V去不溶物，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→10∶1)精制，得到標(biāo)記化合物4.3g。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.1(t，3H，J＝7.0Hz)，3.0-3.2(m，1H)，3.25-3.3(m，1H)，3.35-3.75(m，7H)，4.54(d，1H，J＝10.6Hz)，4.61(d，1H，J＝10.6Hz)，4.98(d，1H，J＝4.7Hz)，5.13(d，1H，J＝4.7Hz)，5.44(d，1H，J＝4.6Hz)，7.11(d，2H，J＝8.9Hz)，7.35(s，5H)，7.69(d，2H，J＝8.9Hz)，11.31(s，1H)(7)(2R，3R，4R，5S)-1’-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-3，4，5-三羥基-哌啶-2-羧酸羥胺 將上述(6)的化合物1.66g溶于甲醇70mL，加入350mg的10％Pd/C，在氫氣環(huán)境中，在40℃下攪拌1小時(shí)。再濾去催化劑并減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝10∶1→5∶1)精制，得到無色粉末狀標(biāo)記化合物815mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.13(t，3H，J＝7.0Hz)，3.0-3.3(m，3H)，3.50(q，2H，J＝7.0Hz)，3.35-3.7(m，2H)，3.7-3.75(m，2H)，4.1-4.25(m，3H)，4.90(d，1H，J＝4.9Hz)，5.07(d，1H，J＝4.7Hz)，5.35(d，1H，J＝4.5Hz)，7.09(d，2H，J＝8.9Hz)，7.66(d，2H，J＝8.9Hz)，8.82(d，1H，J＝1.95Hz)，10.67(d，1H，J＝1.95Hz)TOF-Mass443(M+Na)，459(M+K)。
D4.0°[c＝0.1，MeOH]實(shí)施例4(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺的制造(1)(2R，4’S，4”S，5’R)-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯 將已知化合物(2R，4’S，4”S，5’R)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯22.4g溶于乙酸乙酯200mL，加入2.2g的10％Pd/C，在氫氣加壓下室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。再濾去催化劑并減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)苡?50mL的DMF，加入10.4g的DMAP，再加入對苯氧基苯磺酰氯20.0g，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯500mL，用1當(dāng)量鹽酸、水及飽和食鹽水依次洗凈后，以硫酸鎂干燥有機(jī)層并減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→1∶2)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物30.1g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.39(s，3H)，1.40(s，3H)，1.44(s，3H)，1.45(s，3H)，3.62(s，3H)，3.9-4.3(m，6H)，5.39(d，1H，J＝10.1Hz)，7.0-7.15(m，4H)，7.2-7.3(m，1H)，7.3-7.5(m，2H)，7.79(d，2H，J＝9.1Hz)。
(2)(1”S，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”，2”-二羥乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯
將上述(1)的化合物19.4g溶于乙腈230mL，加入氯化鈰(III)七水合物27.7g及草酸167mg，室溫?cái)嚢?0分鐘。再加入碳酸鈉進(jìn)行中和，然后濾去不溶物并用乙酸乙酯洗凈。濾液和洗液一起進(jìn)行減壓濃縮后，所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1→3∶2→2∶1)精制，得到標(biāo)記化合物8.8g，回收原料7.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.40(s，3H)，2.15-2.25(m，1H)，2.61(d，1H，J＝8.0Hz)，3.63(s，3H)，3.7-3.85(m，3H)，4.00(dd，1H，J＝1.7，9.8Hz)，4.23(dd，1H，J＝2.4，8.4Hz)，4.43(dd，1H，J＝1.7，8.5Hz)，5.46(d，1H，J＝9.8Hz)，7.0-7.15(m，4H)，7.2-7.3(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.78(d，2H，J＝8.9Hz)。
(3)(1”R，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”-羥基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯的制造 將上述(2)的化合物20.0g溶于二氯甲烷180mL，加入三乙胺4.47g，在-40℃下冷卻后，緩慢滴加甲磺酰氯4.80g/二氯甲烷40mL，在該溫度下攪拌40分鐘。然后用水及飽和碳酸氫鈉水溶液洗凈反應(yīng)液，用硫酸鎂干燥有機(jī)層并減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3-1∶2→1∶1)精制，得到標(biāo)記化合物14.1g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.39(s，3H)，1.44(s，3H)，2.57(d，1H，J＝7.9Hz)，3.13(s，3H)，3.61(s，3H)，3.9-4.1(m，2H)，4.2-4.5(m，4H)，5.44(d，1H，J＝9.5Hz)，6.95-7.15(m，4H)，7.15-7.35(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.77(d，2H，J＝9.0Hz).
(4)(3aR，4R，7S，7aR)-7-羥基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯 將上述(3)的化合物17.5g溶于300mL的DMF，加入碳酸鉀5.2g，在50℃下攪拌1小時(shí)20分鐘。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯500mL，用水及飽和食鹽水(×3)洗凈，以硫酸鎂干燥有機(jī)層后減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物11.4g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.37(s，3H)，1.47(s，3H)，2.20(d，1H，J＝4.1Hz)，3.28(dd，1H，J＝9.5，11.9Hz)，3.55-3.6(m，1H)，3.74(t，1H，J＝9.2Hz)，3.9-4.2(m，3H)，5.08(d，1H，J＝6Hz)，7.0-7.2(m，4H)，7.2-7.3(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.73(d，2H，J＝9.0Hz).
(5)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羥基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐氧基酰胺的制造 (5-1)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羥基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸甲酯將上述(4)的化合物11.4g溶于甲醇150mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 25.0g，室溫?cái)嚢枰灰?。在濾去不溶物后減壓濃縮濾液。將析出的固體溶于200mL的DMF，加入20.8g的DMP及對甲苯磺酸一水合物450mg，室溫?cái)嚢枰灰购笤儆?0℃攪拌2小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入碳酸氫鈉，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3)精制，得到標(biāo)記化合物和上述(4)的化合物的混合物6.5g。
(5-2)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羥基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐氧基酰胺將上述(5-1)的混合物12.7g溶于甲醇/1，4二噁烷30-150mL的混合溶劑，加入1當(dāng)量氫氧化鈉水溶液30mL，室溫?cái)嚢?小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入1當(dāng)量鹽酸，然后用乙酸乙酯萃取。以水及飽和食鹽水洗凈有機(jī)層后，用硫酸鎂干燥并減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)苡?60mL的DMF，加入10.3g的WSC及8.3g的HOBt。再加入芐基羥胺鹽酸鹽8.6g及7.0g的DIEA，室溫?cái)嚢枰灰?。再向反?yīng)液中加入乙酸乙酯500mL，用10％檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和食鹽水依次洗凈后，以硫酸鎂干燥有機(jī)層并減壓蒸溜去除溶劑。向所得殘?jiān)刑砑右颐?乙酸乙酯(5∶1)，濾取析出的固體，得到標(biāo)記化合物1.28g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.40(s，3H)，1.43(s，3H)，3.0-3.25(m，2H)，3.6-3.8(m，2H)，4.02(d，1H，J＝7.9Hz)，4.17(dd，1H，J＝3.9，11.4Hz)，4.71(d，1H，J＝5.1Hz)，4.89(d，1H，J＝11.1Hz)，4.95(d，1H，J＝11.3Hz)，7.0-7.15(m，3H)，7.25-7.3(m，3H)，7.35-7.5(m，6H)，7.74(d，2H，J＝9.0Hz)，9.07(s，1H)(6)(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸芐氧基酰胺的制造 將上述(5-2)的化合物1.5g溶于甲醇30mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 3.4g，室溫?cái)嚢枰灰?。再濾去不溶物，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→10∶1)精制，得到標(biāo)記化合物1.1g。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.1-3.25(m，1H)，3.35-3.5(m，3H)，4.19(d，1H，J＝6.8Hz)，4.53(d，1H，J＝10.5Hz)，4.61(d，1H，J＝10.5Hz)，5.01(d，1H，J＝4.9Hz)，5.17(d，1H，J＝4.8Hz)，5.49(d，1H，J＝4.6Hz)，7.0-7.15(m，4H)，7.15-7.3(m，1H)，7.3-7.5(m，7H)，7.75(d，2H，J＝8.9Hz)，11.32(s，1H)。
(7)(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺 將上述(6)的化合物1.68g溶于甲醇70mL，加入350mg的10％Pd/C，在氫氣環(huán)境中，在40℃下攪拌2小時(shí)。再濾去催化劑，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→9∶1→4∶1)精制，得到無色粉末狀標(biāo)記化合物951mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.0-3.7(m，5H)，4.20(d，1H，J＝6.7Hz)，4.93(d，1H，J＝4.9Hz)，5.11(d，1H，J＝4.7Hz)，5.39(d，1H，J＝4.5Hz)，7.0-7.25(m，4H)，7.25-7.35(m，1H)，7.4-7.55(m，2H)，7.73(d，2H，J＝9.0Hz)，8.83(d，1H，J＝1.9Hz)，10.66(d，1H，J＝1.9Hz)。
TOF-Mass447(M+Na)，463(M+K)[α]D5.9°(c＝0.1，MeOH)實(shí)施例5(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺的制造(1)(2R，4’S，4”R，5’R)-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯
將已知化合物(2R，4’S，4”R，5’R)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯30.1g溶于乙酸乙酯300mL，加入4.3g的10％Pd/C，在加壓氫氣環(huán)境下，在40℃下攪拌4小時(shí)。再濾去催化劑，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)苡?90mL的DMF，加入18.1g的DMAP及對苯氧基苯磺酰氯34.5g，室溫?cái)嚢枰灰?。再向反?yīng)液中加入乙酸乙酯700mL，用1當(dāng)量鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和食鹽水依次洗凈后，以硫酸鎂干燥有機(jī)層并減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→2∶3)精制，得到標(biāo)記化合物38.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.33(s，3H)，1.37(s，3H)，1.40(s，3H)，1.48(s，3H)，3.57(s，3H)，3.85-4.3(m，6H)，5.46(d，1H，J＝10.5Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.3(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.7-7.85(m，2H)(2)(1”R，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”，2”-二羥乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯 將上述(1)的化合物25.8g溶于乙腈300mL，加入氯化鈰(HI)七水合物36.9g及草酸223mg，室溫?cái)嚢?0分鐘。再加入碳酸鈉中和，然后濾去不溶物，用乙酸乙酯洗凈。將濾液和洗液一起減壓濃縮，然后將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→3∶1)精制，得到標(biāo)記化合物16.0g，回收原料7.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s，3H)，1.42(s，3H)，2.61(bs，1H)，3.61(s，3H)，3.65-3.95(m，3H)，4.05-4.25(m，1H)，4.25-4.4(m，2H)，5.46(d，1H，J＝8.6Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.3(m，1H)，7.3-7.5(m，2H)，7.7-7.85(m，2H)(3)(1”R，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”-羥基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯 將按上述(2)所得化合物25.0g溶于二氯甲烷430mL，加入三乙胺5.79g，冷卻至-40℃后，緩慢滴加甲磺酰氯6.25g/二氯甲烷20mL，并在該溫度下攪拌1小時(shí)。再用水洗凈反應(yīng)液，以硫酸鎂干燥有機(jī)層后，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝35∶65→2∶3→1∶1)精制，得到標(biāo)記化合物13.5g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s，3H)，1.41(s，3H)，2.91(d，1H，J＝6.5Hz)，3.13(s，3H)，3.61(s，3H)，3.85-4.0(m，1H)，4.05-4.28(m，2H)，4.28-4.4(m，2H)，4.54(dd，1H，J＝2.5，11.1Hz)，5.47(d，1H，J＝9.5Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.3(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.7-7.85(m，2H)(4))(3aR，4R，7R，7aR)-7-羥基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯
將上述(3)的化合物13.5g溶于320mL的DMF，加入碳酸鉀4.0g，在45C下攪拌1小時(shí)10分鐘。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯500mL，以水及飽和食鹽水(×2)洗凈，用硫酸鎂干燥有機(jī)層后，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝2∶3)精制，得到標(biāo)記化合物10.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s，3H)，1.44(s，3H)，2.23(s，1H)，3.65(s，3H)，3.65-3.75(m，1H)，3.82(dd，1H，J＝2.5，9.8Hz)，4.0-4.2(m，2H)，4.3-4.4(m，1H)，5.05(d，1H，J＝6.3Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.25(m，1H)，7.35-7.45(m，2H)，7.7-7.8(m，2H)(5)(3aR，4R，7R，7aR)-7-羥基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐氧基酰胺 將上述(4)的化合物10.2g溶于甲醇/1，4-二噁烷30-150mL的混合溶劑，加入1當(dāng)量氫氧化鈉55mL，室溫?cái)嚢?小時(shí)10分鐘。再向反應(yīng)液中加入5％檸檬酸水溶液中和，然后用乙酸乙酯萃取。用水及飽和食鹽水洗凈有機(jī)層，再以硫酸鎂干燥減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)苡?00mL的DMF，加入5.48g的WSC及3.86g的HOBt，再加入含芐羥胺鹽酸鹽4.56g及3.70g的DIEA的50mL的DMF溶液，室溫?cái)嚢?小時(shí)30分鐘。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯500mL，以0.5當(dāng)量鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和食鹽水依次洗凈，再用硫酸鎂干燥有機(jī)層減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝1∶1)精制，得到無色粉末的標(biāo)記化合物8.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.28(s，3H)，1.42(s，3H)，2.39(s，1H)，3.39(d，1H，J＝14.5Hz)，3.61(d，1H，J＝9.1Hz)，4.05-4.25(m，1H)，4.28(s，1H)，4.83(d，1H，J＝11.2Hz)，4.92(d，1H，J＝11.2Hz)，5.07(d，1H，J＝5.4Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.25(m，1H)，7.3-7.5(m，7H)，7.8-7.9(m，2H)，8.94(s，1H).
(6)(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸芐氧基酰胺 將上述(5)的化合物8.68g溶于甲醇350mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 19.0g，室溫?cái)嚢枰灰?。再濾去不溶物并減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝1∶0→30∶1→20∶1→10∶1)精制，得到無色粉末狀標(biāo)記化合物7.35g。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.65-3.90(m，5H)，4.15(d，1H，J＝6.1Hz)，4.52(d，1H，J＝10.5Hz)，4.59(d，1H，J＝10.5Hz)，4.65-4.75(m，2H)，5.26(d，1H，J＝4.3Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.25(m，1H)，7.3-7.45(m，7H)，7.78(d，2H，J＝8.8Hz)，11.2(s，1H).
(7)(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺 將上述(6)的化合物6.0g溶于甲醇180mL，加入1.3g的10％Pd/C，在氫氣環(huán)境下，在45℃下攪拌2小時(shí)30分鐘。再濾去催化劑并減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→10∶1→5∶1)精制，得到無色粉末狀標(biāo)記化合物3.76g。
熔點(diǎn)103.5-112℃1H-NMR(DMSO-d6)δ3.5-3.95(m，5H)，4.13(d，1H，J＝6.5Hz)，4.55-4.7(m，2H)，5.16(d，1H，J＝4.3Hz)，7.04(d，2H，J＝8.8Hz)，7.14(d，2H，J＝7.6Hz)，7.25(t，1H，J＝7.3Hz)，7.4-7.55(m，2H)，7.78(d，2H，J＝8.8Hz)，8.76(s，1H)，10.56(s，1H)。
TOF-Mass425(M+H)，447(M+Na)，453(M+K)[α]D36°(c＝0.1，MeOH)實(shí)施例6(3aS，4R，7R，7aR)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸羥酰胺的制造(1)(3S，4’S，5’R)-3-[5’-(叔丁基二甲基硅烷羥甲基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-2-(4”-甲氧苯磺酰氨基)-3-(四氫吡喃氧)-丙酸芐酯 將通式(IV)中R1是甲氧基，3位的乙酸基是羥基的已知化合物(IVa)21g溶于二氯甲烷150mL，加入二氫吡喃5.79g和對甲苯磺酸一水合物200mg，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入三氯甲烷50mL，用飽和食鹽水洗凈，然后以硫酸鎂干燥減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶7→1∶6→1∶5→1∶4)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物16.7g。
1H-NMR(CDCl3)δ0.01-0.06(m)，0.8-1.0(m)，1.2-1.8(m)，3.0-3.25(m)，3.5-4.2(m)，4.2-4.65(m)，4.8-5.15(m)，5.37(d，J＝10.7Hz)，5.49(d，J＝8.6Hz)，5.54(d，J＝9.9Hz)，6.60(d，J＝10.5Hz)，6.8-6.95(m)，7.2-7.4(m)，7.7-7.85(m)。
(2)(3S，4’S，5’S)-3-[5’-羥甲基-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-2-(4”-甲氧基苯磺酰氨基)-3-(四氫吡喃氧)-丙酸芐酯
將上述(1)的化合物16.7g溶于200mL的THF，加入乙酸3.9g及64.8mL的TBAF，室溫?cái)嚢枰灰?。再減壓濃縮反應(yīng)液，并加入乙酸乙酯100mL，水洗后用硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝1∶1→2∶1)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物12.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.1-1.6(m)，3.0-3.3(m)，3.5-4.0(m)，4.0-4.25(m)，4.25-4.65(m)，4.9-5.2(m)，5.37(d，J＝10.8Hz)，5.49(d，J＝8.1Hz)，5.57(d，J＝9.8Hz)，6.57(d，J＝10.4Hz)，6.8-7.0(m)，7.2-7.4(m)，7.7-7.85(m)(3)(3aS，6R，7S，7as)-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-7-(四氫吡喃氧)-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸芐酯 將上述(2)的化合物12.8g溶于200mL的THF，加入三苯基膦13.9g及8.95g的DEAD，室溫?cái)嚢?.25小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯150mL，水洗后用硫酸鎂干燥并減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝1∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物10.7g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.2-1.5(m，6H)，1.5-2.0(m，6H)，3.15-3.3(m，2H)，3.5-3.7(m，1H)，3.75-4.2(m，3H)，3.86(s，3H)，4.75-4.85(m，1H)，4.9-4.95(m，1H)，5.0-5.3(m，3H)，6.8-6.95(m，2H)，7.25-7.5(m，5H)，7.7-7.9(m，2H).
(4)(2R，3S，4R，5S)-3，4，5-三羥基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸芐酯
將上述(3)的化合物10.6g溶于甲醇110mL，加入陽離子交換樹脂Muromac 50g，室溫?cái)嚢枰灰?。再濾去不溶物，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝50∶1→30∶1→10∶1)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物7.4g。
1H-NMR(CDCl3)δ2.95(t，1H，J＝11.1Hz)，3.3-3.6(m，2H)，3.7-4.0(m，4H)，3.82(s，3H)，4.53(bs，1H)，4.9-5.2(m，3H)，6.82(d，2H，J＝8.9Hz)，7.2-7.4(m，5H)，7.73(d，2H，J＝8.9Hz)。
(5)(3aS，4R，7S，7aR)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐酯 將上述(4)的化合物7.4g溶于80mL的DMF，加入17.6g的DMP及對甲苯磺酸一水合物70mg，室溫?cái)嚢枰灰购?，?0℃下攪拌1.5小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯150mL，用飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和食鹽水(×3)洗凈，以硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝1∶3→1∶2→1∶1)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物6.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.77(s，3H)，1.28(s，3H)，3.03(d，1H，J＝6.3Hz)，3.30(dd，1H，J＝3.1，12.1Hz)，3.3-3.5(m，1H)，3.75-3.85(m，1H)，3.86(s，3H)，4.08(dd，1H，J＝2.0，5.7Hz)，4.73(dd，1H，J＝1.8，6.8Hz)，4.96(d，1H，J＝1.8Hz)，5.19(d，1H，J＝12.2Hz)，5.26(d，1H，J＝12.2Hz)，6.92(d，2H，J＝9.0Hz)，7.4(s，5H)，7.78(d，2H，J＝9.0Hz)。
(6)(3aS，4R，7R，7aR)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐酯 將上述(5)的化合物4.1g溶于二氯甲烷/氯毛菌素60-10mL，在-20℃下攪拌，加入三氟甲磺酸酐2.89mL，并在該溫度下攪拌30分鐘。再向反應(yīng)液中加入三氯甲烷50mL，以1當(dāng)量鹽酸及食鹽水洗凈后，用硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1)精制，所得化合物溶于乙腈60mL，加入乙酸銫1.77g及3.05g的18-冠-6，室溫?cái)嚢?小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯100mL，用飽和食鹽水洗凈后，用硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝1∶4→1∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物791mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.18(s，3H)，1.33(s，3H)，1.93(s，3H)，3.26(dd，1H，J＝5.9，12.5Hz)，3.67(dd，1H，J＝4.3，13.0Hz)，3.87(s，3H)，4.15-4.25(m，1H)，4.8-4.9(m，2H)，5.14(d，1H，J＝1.8Hz)，5.23(d，1H，J＝12.4Hz)，5.28(d，1H，J＝12.4Hz)，6.93(d，2H，J＝9.0Hz)，7.3-7.5(m，5H)，7.84(d，2H，J＝9.0Hz)。
(7)(3aS，4R，7R，7aR)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐氧基酰胺 將上述(6)的化合物730mg溶于甲醇10mL，加入132mg的28％NaOMe，室溫?cái)嚢?小時(shí)。再加入132mL的28％NaOMe，室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯100mL，用1當(dāng)量鹽酸及飽和食鹽水洗凈。用硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑后，將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1)精制，得到非晶質(zhì)標(biāo)記合物587mg。
1H-NMR(CDCl3)δ0.93(s，3H)，1.23(s，3H)，3.10(dd，1H，J＝2.4，11.8Hz)，3.29(d，1H，J＝6.6Hz)，3.45-3.55(m，1H)，3.7-3.8(m，1H)，3.90(s，3H)，4.1-4.2(m，1H)，4.6(d，1H，J＝2Hz)，4.74(dd，1H，J＝2.0，7.3Hz)，4.99(s，2H)，7.01(d，2H，J＝9Hz)，7.35-7.55(m，5H)，7.77(d，2H，J＝9Hz)，9.36(s，1H)。
(8)(3aS，4R，7R，7aR)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸羥酰胺 將上述(7)的化合物278mg溶于乙酸乙酯15mL，加入38mg的10％Pd/C，在氫氣環(huán)境下室溫?cái)嚢?小時(shí)。再濾去催化劑并減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(三氯甲烷∶甲醇＝50∶1→30∶1→10∶1)精制后，凍結(jié)干燥，得到無色非晶質(zhì)標(biāo)記化合物205mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.99(s，3H)，1.18(s，3H)，3.20(dd，1H，J＝2.1，10.8Hz)，3.25-3.45(m，2H)，3.80(s，3H)，3.92(t，1H，J＝5.3Hz)，4.28(d，1H，J＝6.2Hz)，4.53(s，1H)，5.92(d，1H，J＝6.6Hz)，7.14(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz)，9.28(s，1H)，11.12(s，1H)。
TOF-Mass425(M+Na)，441(M+K)實(shí)施例7(3aR，4R，7R，7aR)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐氧基酰胺的制造(1)(3aR，4R，7S，7aR)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸羥酰胺
將實(shí)施例2(4)的化合物1.5g溶于甲醇30mL，加入1當(dāng)量氫氧化鈉水溶液9.5mL，室溫?cái)嚢?小時(shí)。再追加氫氧化鈉水溶液4mL及1，4-二噁烷4mL，攪拌1小時(shí)。再向反應(yīng)液中加水50mL，用乙醚洗凈，然后以10％檸檬酸水溶液使水層呈酸性，用乙酸乙酯萃取。用水及飽和食鹽水洗凈后，以硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)苡?5mL的DMF，加入932mg的WSC及744mg的HOBt。繼而加入芐羥胺鹽酸鹽776mg及628mg的DIEA，室溫?cái)嚢枰灰?。再向反?yīng)液中加入乙酸乙酯150mL，用10％檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及飽和食鹽水依次洗凈后，以硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶環(huán)己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到標(biāo)記化合物910mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.23(s，3H)，1.42(s，3H)，2.35(d，1H，J＝4.6Hz)，2.9(dd，1H，J＝9.8，12.1Hz)，3.4-3.55(m，1H)，3.59(dd，1H，J＝5.6，9.6Hz)，3.75-4.0(m，2H)，3.87(s，3H)，4.1(d，1H，J＝14.3Hz)，4.14(d，1H，J＝14.3Hz)，5.04(d，1H，J＝5.2Hz)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.38(s，5H)，7.85(d，2H，J＝9.0Hz)，8.97(s，1H)。
(2)(3aR，4R，7R，7aR)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐氧基酰胺 (2-1)(3aR，4R，7S，7aR)-三氟甲磺酸[4-芐氧基氨甲酰-5-(4’甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-7-基]酯將上述(1)的化合物1.0g溶于氯毛菌素10mL，在-20℃下，攪拌加入三氟甲磺酸酐0.4mL，在該溫度下攪拌2小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯50mL，用稀鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液及食鹽水依次洗凈，再以硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→1∶2)精制，得到標(biāo)記化合物670mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.18(s，3H)，1.41(s，3H)，3.82(s，3H)，3.75-3.85(m，2H)，4.23(d，1H，J＝5.4，12Hz)，4.33(t，1H，J＝9Hz)，4.56(d，1H，J＝12Hz)，4.62(d，1H，J＝6Hz)，4.67(d，1H，J＝12Hz)，5.3-5.35(m，1H)，7.1-7.2(m，2H)，7.3-7.5(m，5H)，7.75-7.8(m，2H)，11.67(s，1H)(2-2)(3aR，4R，7R，7aR)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐氧基酰胺將上述(2-1)的化合物670mg溶于乙腈30mL，加入乙酸銫0.5g及1.4g的18-冠-6，室溫?cái)嚢?6小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯100mL，用稀鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和食鹽水依次洗凈，以硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→1∶1)精制，得到標(biāo)記化合物161mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.26(s，3H)，1.33(s，3H)，3.82(s，3H)，3.75-3.95(m，3H)，4.24(dd，1H，J＝3，10.2Hz)，4.63(d，1H，J＝10.8Hz)，4.72(d，1H，J＝10.8Hz)，4.75(d，1H，J＝6.6Hz)，5.35-5.4(m，1H)，7.1-7.2(m，2H)，7.3-7.45(m，5H)，7.7-7.75(m，2H)，11.55(s，1H)。
(3)(3aR，4R，7R，7aR)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐氧基酰胺 將上述(2-2)的化合物100mg溶于甲醇2mL，加入28％甲醇鈉18mg，室溫?cái)嚢?小時(shí)。再加入陽離子交換樹脂中和，濾去不溶物，減壓濃縮濾液。將所得殘?jiān)霉枘z柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2→1∶1→2∶1)精制，得到標(biāo)記化合物(69mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.43(s，3H)，1.53(s，3H)，3.36(d，1H，J＝14.4Hz)，3.5-3.65(m，1H)，3.86(s，3H)，3.8-3.9(m，2H)，4.1-4.2(m，1H)，4.27(bs，1H)，4.86(d，1H，J＝11.4Hz)，4.93(d，1H，J＝11.4Hz)，5.08(bs，1H)，6.9-7.0(m，2H)，7.3-7.4(m，5H)，7.8-7.9(m，2H)，8.88(s，1H)。
實(shí)施例8(3aS，4R，7S，7aS)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯的制造(1)(2R，4’R，4”S，5’S)-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯 用已知化合物[(2R，4’S，4”R，5’S)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯11.7g按照實(shí)施例2(1)一樣反應(yīng)，制得無色固體狀標(biāo)記化合物11.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.28(s，3H)，1.33(s，3H)，1.36(s，3H)，1.46(s，3H)，3.55(s，3H)，3.87(s，3H)，3.8-4.0(m，3H)，4.05-4.25(m，3H)，5.58(d，1H，J＝7.9Hz)，6.95(d，2H，J＝8.9Hz)，7.78(d，2H，J＝8.9Hz)。
(2)(1”S，2R，4’S，5’R)-[5’-(1”，2”-二羥乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯
用上述(1)的化合物14.7g按照實(shí)施例2(2)一樣反應(yīng)，制得標(biāo)記化合物7.1g，回收原料4.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s，3H)，1.36(s，3H)，1.9(bs，1H)，3.54(s，3H)，3.65-3.8(m，2H)，3.86(s，3H)，3.8-4.05(m，1H)，4.12(d，1H，J＝5.8Hz)，4.25-4.34(m，1H)，6.97(d，2H，J＝9.0Hz)，7.79(d，2H，J＝9.0Hz)。
(3)(1”R，2R，4’S，5’R)-[5’-(1”-羥基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯 用上述(2)的化合物7.06g按照實(shí)施例2(3)一樣反應(yīng)，制得標(biāo)記化合物2.6g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.30(s，3H)，1.35(s，3H)，3.12(s，3H)，3.57(s，3H)，3.87(s，3H)，3.9-4.0(m，2H)，4.0-4.2(m，1H)，4.2-4.35(m，2H)，4.45-4.55(m，1H)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.78(d，2H，J＝9.0Hz)。
(4)(3aS，4R，7S，7aS)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯 用上述(3)的化合物2.47g按照實(shí)施例2(4)一樣反應(yīng)，制得漿液狀標(biāo)記化合物1.01g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.44(s，3H)，1.46(s，3H)，2.375(d，1H，J＝1.4Hz)，3.23(dd，1H，J＝5.1，14.7Hz)，3.46(dd，1H，J＝4.5，9.8Hz)，3.75(s，3H)，3.8-3.9(m，1H)，3.88(s，3H)，4.1-4.2(m，1H)，4.35-4.4(m，1H)，4.41(d，1H，J＝8.7Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.80(d，2H，J＝9.0Hz)實(shí)施例9(3aS，4R，7R，7aS)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐氧基酰胺的制造(1)(2S，4’S，4”R，5’R)-乙酸基-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯 將化合物[(2R，4’S，4”R，5’R)-羥基-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯30g(Helvetica.Chimica Acta，Vol.71,609-618項(xiàng)(1988)參照)溶于二氯甲烷/氯毛菌素350-39mL，在-20℃下，攪拌加入三氟甲磺酸酐/二氯甲烷20-10mL，在該溫度下攪拌1小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入三氯甲烷50mL，水洗后用硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)精制而得的化合物再溶于乙腈130mL，加入乙酸銫4.89g及8.45g的18-冠-6，在室溫下攪拌1小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯200mL，用水及飽和食鹽水洗凈后，以硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物9.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.41(s，3H)，1.46(s，3H)，1.47(s，3H)，1.48(s，3H)，2.24(s，3H)，3.83(s，3H)，3.93(dd，1H，J＝6.7，8.4Hz)，4.05-4.2(m，2H)，4.5-4.65(m，1H)，4.50(dd，1H，J＝5.3，7.8Hz)，5.16(d，1H，J＝3.1Hz)(2)(2S，4’S，4”R，5’R)-羥基-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯
將上述(1)的化合物9.0g溶于甲醇45mL，加入2.61mL的28％NaOMe，室溫?cái)嚢?小時(shí)40分鐘。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯200mL，用1當(dāng)量鹽酸及飽和食鹽水洗凈。以硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑后，將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→3∶7)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物3.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.41(s，3H)，1.42(s，3H)，1.43(s，3H)，2.0-2.15(m，1H)，3.7-4.0(m，3H)，3.81(s，3H)，4.0-4.15(m，1H)，4.38(dd，1H，J＝5.3，7.5Hz)(3)(2R，4’R，4”R，5’S)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯 將上述(2)的化合物3.0g溶于二氯甲烷/氯毛菌素50-4mL，在-30℃下攪拌，加入三氟甲磺酸酐2.0mL，在該溫度下攪拌1小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入三氯甲烷50mL，用1當(dāng)量鹽酸及飽和食鹽水洗凈。以硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓蒸溜去除溶劑，將所得殘?jiān)苡?0mL的DMF，加入迭氮化鈉1.21g，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。再向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯50mL，用1當(dāng)量鹽酸及飽和食鹽水洗凈后，以硫酸鎂干燥，減壓蒸溜去除溶劑。將所得殘?jiān)霉枘z中壓柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)精制，得到漿液狀標(biāo)記化合物2.89g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.37(s，3H)，1.43(s，6H)，1.44(s，3H)，3.83(s，3H)，3.85-3.95(m，1H)，4.0-4.23(m，5H)，4.40(dd，1H，J＝4.8，7.2Hz)(4)(2R，4’R，4”R，5’S)-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊環(huán)]-5’-基)-乙酸甲酯 用上述(3)的化合物18.8g按照實(shí)施例2(1)一樣反應(yīng)，制得無色固體狀標(biāo)記化合物27.4g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s，3H)，1.378(s，3H)，1.382(s，3H)，1.44(s，3H)，3.50(s，3H)，3.87(s，3H)，3.85-4.10(m，5H)，4.20-4.25(m，1H)，5.38(d，1H，J＝9.5Hz)，6.97(d，2H，J＝9.0Hz)，7.76(d，2H，J＝9.0Hz)。
(5)(1”R，2R，4’S，5’R)-[5’-(1”，2”-二羥乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯 用上述(4)的化合物19.8g按照實(shí)施例4(2)一樣反應(yīng)，制得標(biāo)記化合物11.6g，回收原料2.6g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s，3H)，1.38(s，3H)，3.49(s，3H)，3.7-3.8(m，3H)，3.86(s，3H)，3.85-4.25(m，3H)，6.97(d，2H，J＝9.0Hz)，7.76(d，2H，J＝9.0Hz)(6)(1”S，2R，4’S，5’R)-[5’-(1”-羥基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯
用上述(5)的化合物11.1g按照實(shí)施例2(3)一樣反應(yīng)，制得標(biāo)記化合物7.6g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s，3H)，1.39(s，3H)，2.71(d，1H，J＝8.0Hz)，3.13(s，3H)，3.51(s，3H)，3.87(s，3H)，3.9-4.4(m，6H)，5.60(d，1H，J＝9.9Hz)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.77(d，2H，J＝9.0Hz)(7)(3aS，4R，7R，7aS)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯 用上述(6)的化合物(7.5g)按照實(shí)施例2(4)一樣反應(yīng)，制得漿液狀標(biāo)記化合物6.05g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.44(s，6H)，2.74(d，1H，J＝7.2Hz)，3.26(dd，1H，J＝2.8，14.9Hz)，3.45-3.75(m，3H)，3.80(s，3H)，3.88(s，3H)，3.95-4.1(m，1H)，4.33(d，1H，J＝8.9Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.84(d，2H，J＝9.0Hz)。
(8)(3aS，4R，7R，7aS)-7-羥基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氫-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸芐氧基酰胺
用上述(7)的化合物350mg按照實(shí)施例7(1)一樣反應(yīng)，制得標(biāo)記化合物114mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s，3H)，1.41(s，3H)，2.57(d，1H，J＝7.7Hz)，3.32(dd，1H，J＝7.3，10.2Hz)，3.48(d，1H，J＝2.8Hz)，3.87(s，3H)，3.85(dd，1H，J＝8.8，10.3Hz)，3.9-4.0(m，1H)，4.27(d，1H，J＝8.5Hz)，4.93(d，1H，J＝11.0Hz)，4.99(d，1H，J＝10.9Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.3-7.5(m，5H)，7.84(d，2H，J＝9.0Hz)，8.86(s，1H)實(shí)施例10藥片的制造如下所述，制得每片中含100mg實(shí)施例5的(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺(化合物e)的藥片。
配方成分配量主藥(化合物e)100重量份玉米淀粉 46重量份微晶纖維素 98重量份羥丙基纖維素 2重量份硬脂酸鎂 4重量份操作將主藥、玉米淀粉及微晶纖維素混合，加入溶于50重量份水中的羥丙基纖維素并充分捏合。將該捏合物通過篩子，制成顆粒并干燥，然后在所得顆粒中混入硬脂酸鎂，制得1片250mg的藥片。
實(shí)施例11制造顆粒劑如下所述，制得含實(shí)施例5的(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺(化合物e)的顆粒劑。
配方成分配量主藥(化合物e) 200重量份乳糖 185重量份玉米淀粉 109重量份羥丙基纖維素 6重量份操作將主藥、乳糖和玉米淀粉混合，向該混合物中加入溶于120重量份水中的羥丙基纖維素，并充分捏合。將該捏合物通過20目篩子，制成顆粒，干燥整粒，制得500mg中含主藥200mg的顆粒劑。
實(shí)施例12膠囊劑的制造如下所述，制得每個(gè)膠囊中含100mg實(shí)施例5的(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺(化合物e)的膠囊劑。
配方成分配量主藥(化合物e) 100重量份乳糖35重量份玉米淀粉60重量份硬脂酸鎂5重量份操作將上述各成分充分混合，將該混合粉末200mg充填于膠囊中，得到膠囊劑。
實(shí)施例13注射劑的制造在實(shí)施例5的0.5重量份(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺(化合物e)和5重量份山梨糖醇的混合物中加入注射用蒸餾水，將混合物溶解，并配成100重量份，用膜濾器過濾該水溶液。將濾液以每次5g充填于經(jīng)氮?dú)庵脫Q的安瓿內(nèi)，封蓋后，在120℃下進(jìn)行15分鐘的殺菌處理，得到一安瓿中含25mg化合物(e)的注射劑。
實(shí)施例14軟膏劑的制造將實(shí)施例5的(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羥基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羥酰胺(化合物e)1.0重量份和丁基苯甲酸0.1重量份分散于5.0重量份的輕質(zhì)流動(dòng)石蠟中，在乳缽中粉碎后，用200目篩篩選。將該粉末與流動(dòng)石蠟5.0重量份混合，然后加入經(jīng)約60℃加熱的凝膠化烴88.9重量份中，均勻分散，制得油性軟膏。
產(chǎn)業(yè)實(shí)用性本發(fā)明的藥劑可抑制因12-O-十四?；鸩ù?13-乙酸酯(下文簡稱為TPA)的刺激性而導(dǎo)致的由HB-EGF細(xì)胞膜的游離(參照試驗(yàn)例1)。并可抑制試驗(yàn)鼠背部涂布TPA后的表皮增生的結(jié)果，抑制試驗(yàn)鼠皮膚創(chuàng)傷模型中的角化細(xì)胞的再上皮化(參照試驗(yàn)例2，3)。在使用試驗(yàn)鼠的這些實(shí)驗(yàn)中，未觀察到重危副作用，所以，本發(fā)明的藥劑可作為有效的角化細(xì)胞增殖抑制劑。
權(quán)利要求
1.一種由下式(A)所表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式中，Ar為可在p位可有取代基的苯基。
2.一種由下記通式(I)所表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式中，R1表示氫原子、鹵原子、羥基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或異烯丙氧基，該C1～C8烷氧基可被C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代。
3.將權(quán)利要求1或2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分的藥劑。
4.將權(quán)利要求1或2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分的角質(zhì)化細(xì)胞繁殖抑制劑。
5.一種由下式(IIA)或(IIB)所表示的化合物 式中，Ar表示可在p位可有取代基的苯基，CO-R2表示氧肟酸等價(jià)體，OR3表示羥基等價(jià)體。
6.一種由下式(IIIA)或(IIIB)所表示的化合物 式中，R1表示氫原子、鹵原子、羥基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或異烯丙氧基，該C1～C8烷氧基可被C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代；R4表示氫原子或乙?；?；R5表示芐氧氨基、芐氧基、甲氧基或乙氧基。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型的吖糖衍生物以及將其作為有效成分的藥劑。該藥劑能用于角質(zhì)化細(xì)胞繁殖性疾病的治療。
文檔編號C07D491/056GK1662500SQ03815019
公開日2005年8月31日 申請日期2003年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月26日
發(fā)明者月田孝博, 森山英樹, 模田耕一, 畠山真理子, 西村紳一郎 申請人:卡爾那生物科學(xué)株式會(huì)社