專利名稱：醋酸奧曲肽生產工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種醋酸奧曲肽生產工藝。
背景技術：
奧曲肽是人工合成的生長抑制素，是九十年代臨床應用最具有成效的激素類藥物，它與天然生長抑制素的藥理作用相同，但半衰期延長了三十倍，具有廣泛的應用價值，它能抑制多種胃腸道激素的分泌及其他多種內分泌功能，在臨床上治療各型的胰腺炎、胰腺瘺管、腸瘺、肝硬化食道胃底曲張靜脈出血、消化道潰瘍出血、嚴重腹瀉等，并有望用于消化系統(tǒng)內分泌腫瘤的治療，但是現有的合成工藝選用了價格昂貴的L-Thr(ol)，使患者的使用受到價格的限制。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是解決現有技術中現有的合成醋酸奧曲肽工藝選用了價格昂貴的L-Thr(ol)，使患者的使用受到價格限制，需要一種價廉的醋酸奧曲肽合成工藝的問題。本發(fā)明設計醋酸奧曲肽生產工藝，其特征在于由下列工藝步驟組成，(1)取Boc-Thr(Ac)-Wang樹脂(1.01mmol/g，1.01mmol)裝入反應容器中，用DMF浸泡，洗滌，加入TFA與二氯甲烷的混合液，25℃反應半小時，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，加三乙胺與二氯甲烷混合液，25℃反應十分鐘，分別用DMF，二氯甲烷各洗滌三次，抽干，加入Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，25℃反應一小時，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(2)上述試劑卡氏法檢測氨基為陽性的，用接肽試劑補接后重復用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干至卡氏法檢測氨基為陰性，加入封頭試劑，25℃反應一小時，用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，加入脫帽試劑，25℃反應十二分鐘，用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(3)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(4)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-Lys(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(5)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(6)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(7)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(8)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-D-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，放入真空干燥器中干燥，得八肽樹脂，(9)將八肽樹脂轉移到茄形瓶中，冷卻下加入脫側鏈試劑，25℃攪拌二小時，抽干，二氯甲烷，DMF，無水乙醇各洗滌三次，抽干，(10)取步驟(9)的八肽樹脂轉移到茄形瓶中，加入50％的乙醇，25℃攪拌在一小時內滴加硼氫化鈉和乙醇溶液，25℃攪拌四小時后過濾，用50％的乙醇分次洗滌，再將濾液和洗滌合并，加醋酸至PH值得7，40℃下減壓濃縮，(11)在上述濃縮液中加水，攪拌中滴加氨水至PH值7.8，室溫空氣中氧化24小時，用冰醋酸調至PH值5.5，加活性碳攪拌30分鐘后過濾，(12)濾液分批經純化后凍干得白色疏松塊狀成品。本發(fā)明的優(yōu)點利用硼氫化鈉還原取代價格昂貴的L-Thr(ol)，可大大降低醋酸奧曲肽生產合成的成本。
下面結合實施例對本發(fā)明作詳細說明，具體實施方式
(1)取10g的Boc-Thr(Ac)-Wang樹脂(1.01mmol/g，1.01mmol)裝入反應容器中，用100mlDMF浸泡，洗滌，使樹脂充分膨脹，加入50ml TFA與50ml二氯甲烷的混合液，25℃反應半小時，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，加8ml三乙胺與92ml二氯甲烷混合液，25℃反應十分鐘，分別用DMF，二氯甲烷各洗滌三次，抽干，加入23.4g Fmoc-Cys(Trt)-OH，12.8g TBTU，6.1g HOBt，用80ml接肽試劑溶解，25℃反應一小時，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(2)上述試劑卡氏法檢測氨基為陽性的，用40ml接肽試劑補接后重復用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干至卡氏法檢測氨基為陰性，加入100ml封頭試劑，25℃反應一小時，用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，加入100ml脫帽試劑，25℃反應十二分鐘，用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，測定氨基為0.722mmol/g，(3)在上述脫帽反應后的樹脂中，加11.9g Fmoc-Thr(tBu)-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，測定氨基為0.663mmol/g，(4)在上述脫帽反應后的樹脂中，加13.9g Fmoc-Lys(Boc)-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，測定氨基為0.601mmol/g，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(5)在上述脫帽反應后的樹脂中，加15.7gFmoc-D-Trp(Boc)-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，測定氨基為0.543mmol/g，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(6)在上述脫帽反應后的樹脂中，加11.6g Fmoc-Phe-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，測定氨基為0.478mmol/g樹脂，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(7)在上述脫帽反應后的樹脂中，加17.6g Fmoc-Cys(Trt)-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，測定氨基為0.434mmol/g樹脂，(8)在上述脫帽反應后的樹脂中，加11.6g Fmoc-D-Phe-OH，9.6g TBTU，4.6g HOBt，用80ml接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，測定氨基為0.391mmol/g樹脂，，放入真空干燥器中干燥，得八肽樹脂20.8g，接肽總收率為78.5％，每步接肽收率為97％以上，樹脂體積增加約一倍，(9)將20.8g八肽樹脂轉移到茄形瓶中，冷卻下加入脫側鏈試劑，25℃攪拌二小時，抽干，二氯甲烷，DMF，無水乙醇各洗滌三次，抽干，得八肽樹脂16.9g(10)取步驟(9)的八肽樹脂16.9g轉移到茄形瓶中，加入150ml 50％的乙醇，25℃攪拌在一小時內滴加2g硼氫化鈉和50ml乙醇溶液，25℃攪拌四小時后過濾，用150ml50％的乙醇分次洗滌，再將濾液和洗滌合并，加醋酸至PH值得7，40℃下減壓濃縮，(11)在上述濃縮液中加水4200ml，攪拌中滴加2M的NHOH至PH值7.8，室溫空氣中氧化24小時，用冰醋酸調至PH值5.5，加活性碳攪拌30分鐘后過濾，(12)濾液分批經純化后凍干得1.1g白色疏松塊狀成品，收率10.7％。本品性狀、溶解度、鑒別、比旋度、吸收度、水分、相關肽、氨基酸組分、醋酸含量等各項均達到歐洲藥典的規(guī)定。
上述英文縮寫表L-Thr(ol) L-型蘇氨醇Boc-Thr(Ac)-Wang樹脂 叔丁氧羰酰-蘇氨酸(乙?；?王樹脂TFA 三氟乙酸DMF 二甲基甲酰胺TBTU 氧-(1氫-苯并三氮唑基)-四甲基脲-四氟化硼HOBt 1-羥基苯并三氮Fmoc-Cys(Trt)-OH 芴甲氧羰基-半胱氨酸(三苯甲基)Fmoc-Thr(tBu)-OH 芴甲氧羰基-蘇氨酸(叔丁基)Fmoc-Lys(Boc)-OH 芴甲氧羰基-賴氨酸(叔丁氧酰)Fmoc-D-Trp(Boc)-OH芴甲氧羰基-D-型-色氨酸(叔丁氧酰)Fmoc-Phe-OH 芴甲氧羰基-苯丙氨酸Fmoc-D-Phe-OH 芴甲氧羰基-D-型苯丙氨酸
權利要求
1.醋酸奧曲肽生產工藝，其特征在于由下列工藝步驟組成，(1)取Boc-Thr(Ac)-Wang樹脂(1.01mmol/g，1.01mmol)裝入反應容器中，用DMF浸泡，洗滌，加入TFA與二氯甲烷的混合液，25℃反應半小時，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，加三乙胺與二氯甲烷混合液，25℃反應十分鐘，分別用DMF，二氯甲烷各洗滌三次，抽干，加入Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，25℃反應一小時，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(2)述試劑卡氏法檢測氨基為陽性的，用接肽試劑補接后重復用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干至卡氏法檢測氨基為陰性，加入封頭試劑，25℃反應一小時，用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，加入脫帽試劑，25℃反應十二分鐘，用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(3)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(4)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-Lys(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(5)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(6)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(7)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，(8)在上述脫帽反應后的樹脂中，加Fmoc-D-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，加入反應容器，25℃反應一小時，抽干，分別用DMF，無水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗滌三次，抽干，放入真空干燥器中干燥，得八肽樹脂，(9)將八肽樹脂轉移到茄形瓶中，冷卻下加入脫側鏈試劑，25℃攪拌二小時，抽干，二氯甲烷，DMF，無水乙醇各洗滌三次，抽干，NHOH(10)取步驟(9)的八肽樹脂轉移到茄形瓶中，加入50％的乙醇，25℃攪拌在一小時內滴加硼氫化鈉和乙醇溶液，25℃攪拌四小時后過濾，用50％的乙醇分次洗滌，再將濾液和洗滌合并，加醋酸至PH值得7，40℃下減壓濃縮，(11)在上述濃縮液中加水，攪拌中滴加氨水至PH值7.8，室溫空氣中氧24小時，用冰醋酸調至PH值5.5，加活性碳攪拌30分鐘后過濾，(12)濾液分批經純化后凍干得白色疏松塊狀成品，上述英文縮寫表Boc-Thr(Ac)-Wang樹脂叔丁氧羰酰-蘇氨酸(乙酰基)王樹脂TFA 三氟乙酸DMF 二甲基甲酰胺TBTU氧-(1氫-苯并三氮唑基)-四甲基脲-四氟化硼HOBt1-羥基苯并三氮Fmoc-Cys(Trt)-OH芴甲氧羰基-半胱氨酸(三苯甲基)Fmoc-Thr(tBu)-OH芴甲氧羰基-蘇氨酸(叔丁基)Fmoc-Lys(Boc)-OH芴甲氧羰基-賴氨酸(叔丁氧 酰)Fmoc-D-Trp(Boc)-OH 芴甲氧羰基-D-型-色氨酸(叔丁氧 酰)Fmoc-Phe-OH 芴甲氧羰基-苯丙氨酸Fmoc-D-Phe-OH 芴甲氧羰基-D-型苯丙氨酸
全文摘要
本發(fā)明涉及一種醋酸奧曲肽生產工藝，其特征在于由下列工藝步驟組成，取Boc－Thr(Ac)－Wang樹脂裝入反應容器中，加入TFA與二氯甲烷的混合液反應，洗滌后加三乙胺與二氯甲烷混合液反應，加入Fmoc－Cys(Trt)－OH，TBTU，HOBt，用接肽試劑溶解，卡氏法檢測氨基為陽性用接肽試劑補接后至卡氏法檢測氨基為陰性，加入封頭試劑、脫帽試劑，洗滌，加Fmoc－Thr(tBu)－OH，TBTU，HOBt，加Fmoc－Lys(Boc)－OH，TBTU，HOBt，溶解，加Fmoc－D－Trp(Boc)－OH，TBTU，HOBt，接肽試劑溶解，加Fmoc－Phe－OH，TBTU，HOBt，加入反應容器，洗滌抽干，加Fmoc－Cys(Trt)－OH，TBTU，HOBt，加Fmoc－D－Phe－OH，TBTU，HOBt，干燥得八肽樹脂，八肽樹脂中加入脫側鏈試劑，乙醇，硼氫化鈉和乙醇溶液，乙醇洗滌，加醋酸及滴加NHOH至pH值7.8，用冰醋酸調至pH值5.5，濾液分批經純化后凍干得白色疏松塊狀成品。本發(fā)明的優(yōu)點利用硼氫化鈉還原取代價格昂貴的L－Thr(ol)，可大大降低醋酸奧曲肽生產合成的成本。
文檔編號C07K7/00GK1490330SQ0213752
公開日2004年4月21日 申請日期2002年10月18日 優(yōu)先權日2002年10月18日
發(fā)明者周逸明 申請人:上海子能高科股份有限公司