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睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的制作方法

文檔序號:3504788閱讀:575來源:國知局
專利名稱:睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物工程遺傳基因,特別是生殖健康領(lǐng)域的睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因。
背景技術(shù)
目前,生殖健康領(lǐng)域是國際上的研究熱點,隨著人類基因組計劃的順利實施和人類基因組草圖的完成,男性生殖健康以及男性不育的遺傳學(xué)研究,已成為遺傳學(xué)研究領(lǐng)域中的重大課題。據(jù)醫(yī)學(xué)統(tǒng)計,育齡夫婦中約有10-15%的不育,其中一個重要的原因是男方生精障礙,表現(xiàn)為無精或嚴(yán)重少精(<200萬/ml),約占不育男子10%。生精細(xì)胞的凋亡是精子發(fā)生的一個逆過程,主要發(fā)生在睪丸中。人類睪丸是一種具有高度增殖能力的組織,但成年睪丸中產(chǎn)生的成熟精子的數(shù)量要比預(yù)計生成的精子數(shù)少20-75%。大量研究表明睪丸中生精細(xì)胞這種自發(fā)性退化是通過凋亡而發(fā)生的,同時還發(fā)現(xiàn)在不育男性中精子凋亡異常增多,因此,凋亡調(diào)控的紊亂也是特發(fā)性男性不育癥的一個重要決定因素。目前國際上已知的睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因有Bcl-2/Bax基因族、Fas/Apo-1基因、HSP基因族、iNOS基因、TRAIL及其受體基因、TR2基因等,但是到目前為止國際上尚無特異性的睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于研究、克隆出特異性的睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是從模式生物小鼠基因出發(fā),或從模式生物小鼠出發(fā)建立小鼠的隱睪凋亡模型后,再通過抑制消減雜交(SSH)技術(shù)克隆小鼠生精細(xì)胞凋亡相關(guān)的EST,進一步運用分子生物學(xué)技術(shù)和生物信息技術(shù)共克隆出特異性的4個人類睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(TSARG1、TSARG2、TSARG3、TSARG4)和2個小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(Tsarg1、Tsarg),均已登陸genebank并獲得登陸序列號(尚未公開)。
具體實施例方式依本發(fā)明的前述技術(shù)解決方案所獲得4個人類睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因為TSARG1、TSARG2、TSARG3、TSARG4,2個小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因為Tsarg1、Tsarg。它們各自的堿基序列及相應(yīng)蛋白序列分別表達如下TSARG1(AY032925)1 aacattttca ccaagggaaa caagttatga ccatgattac gccaaggctt gaatggatgc61 aggtcgaatt ttagattgaa gggatccaga tctccagtct ttactcaata tagggatcga121 gcgtccgccc gggcaggtaa ggctcctagg gcagagggca aacggcccct ccaggaggga181 gccgggagat tacgcagctc catgtaggtc cacgtttagg ttgggaggat ctaccatgaa241 gaaggtcaag aagaaaaggt cagaggccag acgccaccga gactccacct cccagcatgc301 tagctccaat tccacctctc agcagcctag tcctgaatcc acaccacagc agcctagccc361 tgaatccaca ccacagcatt ccagccttga aaccacctcc cggcagccag cattccaagc421 ccttccagca cccgaaatcc gccgctcctc ttgctgcctt ttatctccag atgctaacgt481 gaaggcagcc cctcaatcca ggaaagcagg gcctctgatt cgcgccggcc cgcattcctg541 ctcctgtgcc acttgcccct gcagctccgc ttgctggcgt cgtctggggc tatgccatag601 ccgcatcttc gatgtccttc tgcctcggga ctggcagatg gcgccaggga gaggactccc661 caacctgctc accttctaca gaaaatcttc aagaaaaccc tccagtcatc gtaacgcgtg721 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權(quán)利要求
1.睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,其特征在于它是特異性的人類睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因TSARG1,其堿基序列為1 aacattttca ccaagggaaa caagttatga ccatgattac gccaaggctt gaatggatgc61 aggtcgaatt ttagattgaa gggatccaga tctccagtct ttactcaata tagggatcga121 gcgtccgccc gggcaggtaa ggctcctagg gcagagggca aacggcccct ccaggaggga181 gccgggagat tacgcagctc catgtaggtc cacgtttagg ttgggaggat ctaccatgaa241 gaaggtcaag aagaaaaggt cagaggccag acgccaccga gactccacct cccagcatgc301 tagctccaat tccacctctc agcagcctag tcctgaatcc acaccacagc agcctagccc361 tgaatccaca ccacagcatt ccagccttga aaccacctcc cggcagccag cattccaagc421 ccttccagca cccgaaatcc gccgctcctc ttgctgcctt ttatctccag atgctaacgt481 gaaggcagcc cctcaatcca ggaaagcagg gcctctgatt cgcgccggcc cgcattcctg541 ctcctgtgcc acttgcccct gcagctccgc ttgctggcgt cgtctggggc tatgccatag601 ccgcatcttc gatgtccttc tgcctcggga ctggcagatg gcgccaggga gaggactccc661 caacctgctc accttctaca gaaaatcttc aagaaaaccc tccagtcatc gtaacgcgtg721 tcctccaagc cctcggaact gtggctgtgg ctctgggggc tctaggagct gcctactaca781 tcactgaatc cttgtgaaca agcccctagg cccacagtct ggcagacctc caccagcccc841 aggagttgat aggtgatggc gctgggagaa gatgttcaga atatctcaaa agccaagtcc901 agaagatcca gtttccatca aagggacctc tcttgtcacc aaaatttaaa aaaagaaaaa961 aaaaacgaaa aaa其蛋白序列為MKKVKKKRSEARRHRDSTSQHASSNSTSQQPSPESTPQQPSPESTPQHSSLETTSRQPAFQALPAPEIRRSSCCLLSPDANVKAAPQSRKAGPLIRAGPHSCSCATCPCSSACWRRLGLCHSRIFDVLLPRDWQMAPGRGLPNLLTFYRKSSRKPSSHRNACPPSPRNCGCGSGGSRSCLLHH
2.睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,其特征在于它是特異性的人類睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因TSARG2,其堿基序列為1 gcgctgaggt ctcgccccat aagactccgc cccgccccac gaggccgcgc cgccagcaat61 aaggcccagc cccgccttct gctgttgccg cagcaaccca gaaagcgtca tggctgccgc121 cggccaggaa aaagggtatt tgacacagac tgcggcagcc ctagacaagt caccgtcact181 ttcgccacag ctagcagctc ccatccgagg gaggcctaag aagtgtctgg tctatccgca241 tgcgccgaag agctcccgct tgtctcgttc cgttctgcgt tggcttcagg gtctggatct301 cagcttcttc cccaggaaca tcaacagaga tttttcaaat ggcttcctaa ttgcagaaat361 attctgtata tattacccct gggaacttga attatcatcc tttgaaaacg ggacctcttt421 aaaagtcaag ttggataact gggcacagtt ggagaagttc ctggcaagaa aaaaatttaa481 attacctaaa gaactaatcc atggaacaat tcattgtaaa gctggagtgc ctgaaatatt541 gatagaagag gtttacactt tattaacaca tcgagaaatt aaaagtatcc aggatgactt601 tgtgaatttc acggactata gctaccagat gcgtttaccc ctggtttcca ggtctacagt661 ttcgaagtct attaaagata acattaggtt atcagaatta ctaagcaatc ccaacatgct721 gaccaatgaa cttaaagcgg agttcctcat ccttttacat atgttgcaaa gaaaattagg781 cagaaaattg aatccagaat ggtttgatgt gaaaccaaca gtgggagaag ttactctcaa841 tcaccttcct gcccaagcct ctgggcgcag atataattta aaagttaaaa gaggaagagt901 tgtccctgtt ttaccaaata taggtagtgg tggcagttca catagagaaa tacatgtgaa961 gcaagctgga caacattctt attactctgc tatgaaacct atcagaaaca tggacaagaa1021 accttgaaaa gcacctgtca aatggctttg aagaagtgat gccaccatct ctagccataa1081 taaagaaaca gaatcaccta gtattggatg tatttcaata ataaatagag tggtgtcttt1141 tccataattg tgttaaagaa catttctttt ccattcaatt tgtttattaa actcctatgc1201 caggcattgt tgaaaataca aaattaaata aat蛋白序列為MAAAGQEKGYLTQTAAALDKSPSLSPQLAAPIRGRPKKCLVYPHAPKSSRLSRSVLRWLQGLDLSFFPRNINRDFSNGFLIAEIFCIYYPWELELSSFENGTSLKVKLDNWAQLEKFLARKKFKLPKELIHGTIHCKAGVPEILIEEVYTLLTHREIKSIQDDFVNFTDYSYQMRLPLVSRSTVSKSIKDNIRLSELLSNPNMLTNELKAEFLILLHMLQRKLGRKLNPEWFDVKPTVGEVTLNHLPAQASGRRYNLKVKRGRVVPVLPNIGSGGSSHREIHVKQAGQHSYYSAMKPIRNMDKKP
3.睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,其特征在于它是特異性的人類睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因TSARG3,其堿基序列為1 tgtagctgga ggacaggaaa tagatcttta ttatgtcagt ttaagccctg cgccatccca61 cccttgtatc atatctgtgc agcaggctcc cctgcacacc ctgaggctgt ggcgggtagg121 ggtggggtga ggcccggcta gcctcctctc acccctgctc cagcccacca cagtcatgtc181 agcaatgcct ggcgcagcat ctgcttcttc tggggtgtga ggcgggtggg gaactggatg241 tcgaagaaga tgaagagatc ccctttctta gtggggtcct ccggcaatgg catcccctcc301 cctggcacct tcttgaagta tttggggtgg atgatgtcat tgatggggat gttgagcaga361 cggtcatcta gggtcctcac ctccacagtg cagcaggtga gagccttgcc aagagggatg421 gggttcacga agaagaggtt gtcattctcc ctgcggaagc gagggtgtag cttctccttt481 acgatgaaaa tgatgtctgc tgggatgatg ttggggccct ggtccccttc cttctcaaag541 gtgatgcgtg tgccctgcct ccaaccgggc ttcacatcaa tggtcaggat cttgtccttg601 atggtggagg agtacccatc ctcgttcagc acccttctgg agatcttaat ttttttggtg661 cagccaaaga ataagtcctc cagggacagg tagagatccc gttcgacttg ggggtcctgc721 ttcttgaccc ctcggccctg gagcccccca aagttcaaat ctacctcact tccttctgca781 tcaaaaaact ctgcaggagg aaaggaggca ctccctctgg tggccgcgct caggagtgcc841 agaagagact gctggtagtc ctcggcagga agtgcaaaga cagccccatc ctggctctgc901 ccctgatgtg ctgtgtgatc cgtgggcttc agtgtcttgg tctgtgggat ggggtaataa961 tgcctgacct gccttccacc attaagatga agagctaaaa cttgctgaga gcttactatg1021 cgtcaggtgc tatttttgga accttacatt attatttcat tggtccaggg agcccaaaca1081 aaacgcttaa ggtcccgtag ctagtaagca gtagagttgg gatctgaacc acaggacaat1141 atgactacgg aacctgtgtc cttaaccact gtgccacgcc gcatcgctag atgtggaagc1201 ccctcataag ctgtaaactc gaggggcgct atggttaaga gttttcatat tctgcctctc1261 atggttaatg ccatggaata aacttcacag gctagaatgg tgaaatgacc ttaggcaggg1321 atggtgaggt gactacacta tgtccctcta agatgcgatg ggcaatcaag aggcctgaat1381 cttctggtcc tcctgttgca ttgctgaatt c蛋白序列MSKKMKRSPFLVGSSGNGIPSPGTFLKYLGWMMSLMGMLSRRSSRVLTSTVQQVRALPRGMGFTKKRLSFSLRKRGCSFSFTMKMMSAGMMLGPWSPSFSKVMRVPCLQPGFTSMVRILSLMVEEYPSSFSTLLEILIFLVQPKNKSSRDR
4.睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,其特征在于它是特異性的人類睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因TSARG4,其堿基序列為1 acttttcagg ggacattcag aggcatcagc cccttcctcc tcaccagctc ccagagttcc61 catctccatc cccaatccta aagaaggaaa tcgatgccac ggtcctcaag gagccctggg121 gacccaggcg ccctactcga agatgtggcc cacaatccca gaccccggag gattgcccag181 cgaggccgga acaccagcag gatggcagag gacacctccc caaacatgaa tgacaacatc241 ctgttgcctg tccgcaacaa tgaccaagcc ctaggcctga ctcagtgcat gctgggatgt301 gtgtcctggt tcacctgttt tgcctgctcc ctgagaactc aggcccagca ggttctgttt361 aacacgtgca gatgcaagct gctgtgccag aagctcatgg agaagacagg cattctgctc421 ctctgtgctt tcggattctg gatgttttct attcacttac catcgaaaat gaaagtctgg481 caggatgaca gcataaatgg tccactgcag agcttgaggt tgtaccagga gaaggtgcga541 catcacagtg gggaaatcca ggacctccga ggtagcatga accagctcat tgccaagctc601 caggagatgg aagccatgtc cgatgagcaa aaaatggccc agaaaataat gaagatgata661 cacggagatt acatcgaaaa gccagacttt gccctgaagt ctataggggc cagcattgac721 tttgagcaca cgtcagtcac ctataaccat gagaaggccc actcctactg gaactggatc781 cagctgtgga actacgcaca gcccccagac gtgatccttg agcccaacgt gacacctggc841 aattgctggg cctttgaggg tgaccgcggc caggtgacca tccaattggc tcagaaggtt901 tacctgtcca acctcacgct gcagcacatc cccaagacca tctcattgtc aggcagcctg961 gacaccgccc ccaaggactt cgtcatctat ggcatggagg gctcccccaa ggaggaggtg1021 ttcctggggg catttcagtt tcagccagaa aacatcatcc agatgttccc actccagaac1081 cagccggccc gggctttcag tgcggtcaag gtgaagatct caagcaactg ggggaaccca1141 ggcttcactt gcctgtaccg cgtgcgagtg catggctctg tggccccgcc cagagagcag1201 cctcaccaga acccctaccc taagagagat taaaatttat tctttacccc ca蛋白序列MPRSSRSPGDPGALLEDVAHNPRPRRIAQRGRNTSRMAEDTSPNMNDNILLPVRNNDQALGLTQCMLGCVSWFTCFACSLRTQAQQVLFNTCRCKLLCQKLMEKTGILLLCAFGFWMFSIHLPSKMKVWQDDSINGPLQSLRLYQEKVRHHSGEIQDLRGSMNQLIAKLQEMEAMSDEQKMAQKIMKMIHGDYIEKPDFALKSIGASIDFEHTSVTYNHEKAHSYWNWIQLWNYAQPPDVILEPNVTPGNCWAFEGDRGQVTIQLAQKVYLSNLTLQHIPKTISLSGSLDTAPKDFVIYGMEGSPKEEVFLGAFQFQPENIIQMFPLQNQPARAFSAVKVKISSNWGNPGFTCLYRVRVHGSVAPPREQPHQNPYPKRD
5.睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,其特征在于它是特異性的小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Tsarg1,其堿基序列為1 gaaaagatca agagacatac ccacagggga gactgcctac ctagggaggg agccaggaaa61 ttcacagctc catgtagctc cacggtgtta ctctagaagg atcaccatga agaaggtcaa121 aaagaaaaag tctgattcca ggcgccgcag gaattccatt tcaccgcaga ctagctccga181 ttcctcacag cagcccagct cagaaacccc gccgtcatgt ccagagcccg cctcgccacc241 atctaagcca cagccttgcc aggagtccac cacaccacac caagttaacc ctgagcctaa301 accgcaacag catacaccac agcctctccc gcctccagag aaacctgcct catctccgtt361 cctggtaccc atggaaccta aaccaattct tccaagcagg aaagcagtgc ctctgaccta421 tgtggcccca cgctcctgct cctgtgcagc ctgcccgggc agctccgctt gctggcatcg481 tctggggctt tgccatagcc gaatctttga tgtcctccta cctcgggact ggtcatccat541 gccagggaga ggagtcccaa accttctcac cttctacaga aaaccgtcaa ggaagtactg601 cgctccccgt aactctcgtg cttcaagctc tcggaactgt tgctgtggct ctgggggcct661 tgggagttgc ctacttcatg gctgaatcct tgtgaattgg accccaggcc caccgtccgg721 caggggttca tggcatggca ccccaactat gccactctgc gtaaggatta ttctaagaag781 aaagtcgttg agaaactgaa gctcgtctct gccctctctg atctacctga gaacagcata841 atctctgcta ttacaatgag gtgacgccat cccgggaagg gtgaacagtc ttgcccctga901 agacagcaca cgggaaaacc atcccacaca aagtctgcct tgtctccata tcggtgtcct961 tccacagtca gccaccattc acattcaaac ctcttatagc ttccctacaa aattcttgct1021 gtttatgggg atgtctgtac atcttttgtg tcatttgctc tgtgcacagg cactgcctca1081 ttaataactt gttttctctt gcc蛋白序列MKKVKKKKSDSRRRRNSISPQTSSDSSQQPSSETPPSCPEPASPPSKPQPCQESTTPHQVNPEPKPQQHTPQPLPPPEKPASSPFLVPMEPKPILPSRKAVPLTYVAPRSCSCAACPGSSACWHRLGLCHSRIFDVLLPRDWSSMPGRGVPNLLTFYRKPSRKYCAPRNSRASSSRNCCCGSGGLGSCLLHG
6.睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,其特征在于它是特異性的小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Tsarg,其堿基序列為1 ataggatagg aatctttatt atgtcagcct aaggtctcac gcctccccat cttcataggc61 tgggggttga gtggatagga gcaggcaagg cccagctagc cctctccatc cctgttcctg121 ctcaggtccc ccagaattag gtcagcaatg cctggcgcag catctgcttc ttctggggtg181 tgaggcgggt ggggaactgg atgtcaaaga agatgaagag gtctcccttc ttgctggggt241 tctcaggcag tggcatcccc tcacctggca caatcttgaa gtacttaggg tggacaatgt301 cgttgatagg gatgttgagc agccggtcat caagagtctt cacctccaca gtgcagcagg361 taagggcctt gcccaaagga atggggtaca cgaagaagag gttgtcatgc tccctgcgga421 agcgagggtg cagcttctcc ttcacaatga agataatgtc agcagggatg atgttggggc481 cctggtcccc ttccttctca aaggtgat~c gtgtgccctg cctccatcca ggtctcacat541 cgatggtcag gatcttgtcc ttgatggtag aagaatatct gtcttcattt agtacccttc601 gggagatctt aatttttttg gtgcagccaa agaataagtc ctcaagggac agatagaggt661 ctcgttcaat gggagggtct tgtttctgga cgcctctgcc ccaaagcccc ccaaaattca721 aatctatatc atttccttct gcatcaaaaa attcgctgaa ggggttgtct cccccaaaaa781 actcgtggaa cactttgtca gggttgccat ggaagacgta gccagttgtc catggagtct841 gggatccaaa ctctagggga atcccaccct tcaggccttc ctcaccaaac ttgtcataga901 tgcctcgctt cacagggtcg ctcagcacgt cgtaggcttc tgctatttgc ttgaatatct961 ctggtgcacc cggctcagat gacttcaatg ggtggttctt cagggcaagt ttccggtatc1021 ttgaccacag gtctgtatgg tggggacata ggttatgtca agttgacata aaactagcca1081 gcacacttgg tcttctggta attaggctag ccttatctat ttgccatggt aatccttcca1141 ttgatgagtc ccattggcc蛋白序列MSKKMKRSPFLLGFSGSGIPSPGTILKYLGWTMSLIGMLSSRSSRVFTSTVQQVRALPKGMGYTKKRLSCSLRKRGCSFSFTMKIMSAGMMLGPWSPSFSKVMRVPCLHPGLTSMVRILSLMVEEYLSSFSTLREILIFLVQPKNKSSRDR
全文摘要
睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,從模式生物小鼠基因出發(fā),或從模式生物小鼠出發(fā)建立小鼠的隱睪凋亡模型后,再通過抑制消減雜交(SSH)技術(shù)克隆小鼠生精細(xì)胞凋亡相關(guān)的EST,進一步運用分子生物學(xué)技術(shù)和生物信息技術(shù)共克隆出特異性的4個人類睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(TSARG1、TSARG2、TSARG3、TSARG4)和2個小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(Tsarg1、Tsarg)其優(yōu)點在于以本發(fā)明為基礎(chǔ)可以進一步研究基因的表達產(chǎn)物——睪丸凋亡相關(guān)蛋白質(zhì)的功能,研究蛋白質(zhì)的晶體學(xué)結(jié)構(gòu),確定其結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,從而為男性不育的診斷和治療、新型避孕藥物的研制提供候選靶標(biāo)。
文檔編號C07K14/435GK1459458SQ0211413
公開日2003年12月3日 申請日期2002年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月20日
發(fā)明者盧光琇, 李麓蕓, 付俊江, 劉上峰, 劉剛, 邢曉為 申請人:盧光琇
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