一種海藻寡糖復合微生物肥及其制備方法
【專利摘要】一種海藻寡糖復合微生物肥及其制備方法，涉及微生物肥料。所述海藻寡糖復合微生物肥各組分的體積百分比為：海藻寡糖溶液20％～80％、膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液20％～80％；其中，有效活菌數(shù)≥2億/mL，海藻寡糖含量≥0.5g/kg，pH值為6.8～7.2。制備方法：將膠凍樣芽孢桿菌用固體無氮培養(yǎng)基進行活化后，接種到種子培養(yǎng)基中，得到一級種子發(fā)酵液；將一級種子液接種至種子發(fā)酵罐中，培養(yǎng)得到二級種子液；將二級種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)后，制得膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液；將海藻寡糖溶液、膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液混合即得海藻寡糖復合微生物肥。具有改良土壤，增進肥效、調(diào)節(jié)作物生長、改善作物品質(zhì)等功效。CGMCC No.399520100702
【專利說明】
一種海藻寡糖復合微生物肥及其制備方法
技術(shù)領域
[0001 ]本發(fā)明涉及微生物肥料，尤其是涉及一種海藻寡糖復合微生物肥及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 2015年3月18日，中國農(nóng)業(yè)部發(fā)布《到2020年化肥使用量零增長行動方案》，隨著化 肥生產(chǎn)電費、增值稅等優(yōu)惠政策的取消，肥料行業(yè)正在由特殊商品向一般商品轉(zhuǎn)變;氮肥、 磷肥產(chǎn)能過剩，化肥行業(yè)整體利潤水平不高，面臨著去產(chǎn)能化及進行結(jié)構(gòu)調(diào)整的難題，這給 微生物肥料帶來機會。國家保留了微生物肥料生產(chǎn)流通環(huán)節(jié)實行免征增值稅優(yōu)惠政策，這 意味著將促進微生物肥料的應用。2015年我國化肥平均利用率為35.2%，微生物肥料具有 提高化肥利用率的作用，可以滿足化肥"零增長"的需要，未來微生物肥料將占肥料總量的 15 %左右，應用推廣面積4億畝以上。
[0003] 膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus Mucilaginosus)又稱娃酸鹽細菌，是芽孢桿菌屬，其 菌落圓形、無色、透明、隆起，菌落光滑、濕潤有光澤，邊緣整齊。膠凍樣芽孢桿菌能夠通過其 菌體自身代謝產(chǎn)生有機酸、氨基酸、多糖、激素等物質(zhì)促進植物的生長，并且能夠分解含鉀 礦物，釋放出鉀及其他應用元素，還具備溶磷和固氮功能(吳作為等，2004)，是廣泛應用于 我國微生物肥料的生產(chǎn)菌種，在農(nóng)業(yè)微生物制劑領域發(fā)揮了重要的作用。但是，由于土壤環(huán) 境的不同，特別在一些鹽堿地或重金屬污染等土壤，微生物往往因為耐受性不高而無法生 存，不能很好定殖于土壤，發(fā)揮其功效。
[0004] 海藻寡糖是由海藻多糖降解得到的聚合度在2~10的直鏈或支鏈化合物，廣泛存 在于褐藻類、紅藻類、綠藻類和藍藻等海藻中。海藻寡糖具有提高化肥利用率(張朝霞等， 2014)、調(diào)節(jié)植物生長（Idrees et al.，2012)、提高植物抗逆性(Vera et al.，2011)、減少 植物病蟲害發(fā)病率的作用，作為新型綠色環(huán)保生物肥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中起到重要作用。海藻寡 糖還能增加土壤微生物數(shù)量，促進土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的變化，將之用于微生物肥料中，對 于提高功能菌在土壤的定殖能力起到幫助作用。
[0005] 中國專利CN201410359147.X公開一種海藻寡糖生物肥的制備方法，將太平洋火色 桿菌(Flammeovirga Pacifica)H2接種入產(chǎn)糖培養(yǎng)基中，發(fā)酵后離心，收集上清液，將上清 液經(jīng)過管式膜過濾后，收集濾出液，加入蛋白酶處理，即得海藻寡糖生物肥;該海藻寡糖生 物肥能明顯提高土壤有效氮磷鉀含量和土壤有機質(zhì)含量，促進土壤中黃桿菌屬的生長，但 對植物的促生效果未有體現(xiàn)。中國專利CN201010256317.3提供一種寡聚海藻酸肥，該寡聚 海藻酸能直接制備成植物促進劑，或輔以大量的元素和/或微量元素制成復合型海藻酸肥， 對黃瓜增產(chǎn)作用明顯?？梢姾Ｔ骞烟窃诟纳仆寥澜Y(jié)構(gòu)和土壤微生物系統(tǒng)，促進植物生長方 面都有很好的應用效果。
[0006] 中國專利CN201410154473.7公開一種雙藻寡糖顆粒肥及其制備方法，其特點是： 雙藻寡糖顆粒肥組分包括褐藻寡糖溶液與綠藻寡糖溶液混合液，同時還含尿素、硫酸銨、氯 化銨、磷酸一銨、硫酸鉀、氯化鉀、凹凸棒/膨潤土、糠醛渣、有益菌中的至少2種組分組合;該 方法分別將褐藻堿解、綠藻酸解，然后將褐藻降解液與綠藻降解液中和，制備褐藻寡糖溶液 和綠藻寡糖溶液，混合后過膠體磨均質(zhì)機，制得雙藻寡糖活性溶液，然后將雙藻混合液在攪 拌條件下直接加入顆粒肥生產(chǎn)過程中；該雙藻寡糖顆粒肥中使用的海藻寡糖為褐藻寡糖和 綠藻寡糖混合液，具有抗逆防病、促根提質(zhì)、增進肥效的作用。
[0007] 目前，海藻寡糖生物肥料大多復合大量元素和/或中微量元素，所用海藻寡糖的分 子量相差很大，影響了海藻寡糖作用效果。而且，多數(shù)以褐藻寡糖和綠藻寡糖為主，而紅藻 寡糖，尤其是聚合度4~8的龍須菜寡糖與功能菌的結(jié)合在微生物肥料中的應用還未見相關 報道和研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，提供制備簡單，可直接施于土 壤或葉面噴施，定殖土壤能力強，可有效改良土壤、增進肥效、促進植物生長、改善品質(zhì)的一 種海藻寡糖復合微生物肥及其制備方法。
[0009] 所述海藻寡糖復合微生物肥各組分按體積百分比為:海藻寡糖溶液20%~80%、 膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液20 %~80 % ;其中海藻寡糖含量多0.5g/kg，有效活菌數(shù)多2億/mL， pH值為6.8~7.2。
[0010] 所述膠凍樣芽孢桿菌為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus Mucilaginosus)三炬01號菌 株，已于2010年07月02日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址:北 京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，郵編：100101，保藏編號為CGMCC No.3995〇
[0011] 所述海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，包括以下步驟：
[0012] 1)將膠凍樣芽孢桿菌用固體無氮培養(yǎng)基進行活化后，接種到種子培養(yǎng)基中，得到 一級種子發(fā)酵液;將一級種子液接種至種子發(fā)酵罐中，培養(yǎng)得到二級種子液;所述膠凍樣芽 孢桿菌為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus Mucilaginosus)三炬01號菌株，已于2010年07月02日 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.3995;
[0013] 2)將所得的二級種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)后，制得膠凍樣芽孢 桿菌發(fā)酵液；
[0014] 3)將步驟2)收集的膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液與海藻寡糖溶液混合，即得海藻寡糖復 合微生物肥。
[0015] 在步驟1)中，所述固體無氮培養(yǎng)基的組成為蔗糖5~10g/L、磷酸氫二鉀0.3~ 0.88凡、硫酸鎂0.1~0.4〖凡、氯化鈉0.15~0.35〖凡、碳酸| 150.5~1.2〖凡，瓊脂20〖/匕滅菌 前pH值為7.0~7.5;所述活化培養(yǎng)的條件是于28~32 °C條件下培養(yǎng)48~72h;
[0016] 所述種子培養(yǎng)基的組成可為蔗糖5~10g/L、磷酸氫二鉀0.3~0.8g/L、硫酸鎂0.1 ~0.4g/L、氯化鈉0.15~0.35g/L、碳酸|丐0.5~1.2g/L，滅菌前pH值為7.0~7.5。所述一級 種子培養(yǎng)的條件可于30~35°C，150~200rpm條件下培養(yǎng)24~36h;所述二級種子培養(yǎng)的條 件可于種子發(fā)酵罐中，30~35°C條件下，保持罐轉(zhuǎn)速125~150rpm，培養(yǎng)24~48h。
[0017] 在步驟2)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為海藻寡糖溶液0~20mL/L、酵母膏1.0~ 1.88/1、淀粉5.0~7.58/1、豆柏粉5.0~7.(^/1、硫酸鎂0.8~1.68/1、磷酸氫二鉀1.0~ 1.88凡、碳酸| 155.0~10.(^凡、氯化鈉0.1~0.48凡，滅菌前卩!1值為7.0~7.5;所述種子液接 種至發(fā)酵罐培養(yǎng)基中發(fā)酵的接種量按體積的百分比為種子液的10%;所述發(fā)酵條件可為： 轉(zhuǎn)速控制在200~250rpm，通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速和通氣量使溶解氧控制在20% (V/V)，罐溫控制在 30°C，罐壓保持在0.05~0.06MPa，pH值通過10 %的氨水和10 %的鹽酸控制在7.2，發(fā)酵時間 36~48h〇
[0018] 在步驟3)中，所述海藻寡糖是利用微生物直接降解龍須菜所得的聚合度為4~8的 寡糖;所述海藻寡糖溶液中海藻寡糖的質(zhì)量百分濃度為4~5g/L;所述海藻寡糖溶液、步驟 2)所得的膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液按體積百分比可為(20%~80%) :(20%~80%)。
[0019] 所述海藻寡糖復合微生物肥，有效活菌數(shù)彡2億/mL，海藻寡糖含量彡0.5g/kg，pH 值為6.8~7.2。
[0020] 本發(fā)明提供的一種海藻寡糖復合微生物肥由海藻寡糖溶液和膠凍樣芽孢桿菌發(fā) 酵液復配而成，制備工藝簡單。本發(fā)明采用的菌株為膠凍樣芽孢桿菌CGMCC No. 3995，具有 解磷解鉀功能，能分泌多種植物激素，促進植物生長。而海藻寡糖具有誘導植物抗逆、調(diào)節(jié) 植物生長代謝等活性，與膠凍樣芽孢桿菌共同作用，能夠改良土壤、增進肥效、增產(chǎn)提質(zhì)。
[0021] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0022] 1、根據(jù)NY 882-2004的規(guī)定對本發(fā)明所用的功能菌進行解鉀能力測定，該功能菌 含鉀長石粉在培養(yǎng)基中，速效鉀相對增加量達到25.1 %，具有較強解鉀能力；
[0023] 2、根據(jù)NY/T 1847-2010的規(guī)定對本發(fā)明所用的功能菌進行解磷能力測定，該功能 菌在含有難溶性無機、有機磷培養(yǎng)液中，可溶性磷相對含量分別增加440mgAJP46.9mg/L， 該功能菌具有很強的解磷能力。
[0024] 3、根據(jù)NY/T 1847-2010的規(guī)定對本發(fā)明所用的功能菌進行產(chǎn)促進作物生長活性 物質(zhì)能力測定，該功能菌能分泌植物激素，總量可達到194mg/L，具有很強的植物促生能力。 [0025] 4、本發(fā)明多用的功能菌具有極強的耐鹽、耐重金屬能力，在高濃度鹽、高濃度鎘的 固態(tài)培養(yǎng)基上生長良好，能適應多種土壤環(huán)境。
[0026] 5、本發(fā)明的海藻寡糖復合微生物肥具有改良土壤的作用;海藻寡糖有利于土壤有 益微生物活動，提高功能菌的定殖能力，同時能改良土壤結(jié)構(gòu)，促進植物對肥料的吸收利 用。
[0027] 6、本發(fā)明的海藻寡糖復合微生物肥制備簡單，對植物具有明顯增產(chǎn)提質(zhì)效果，安 全環(huán)保，具有很好的推廣價值。
【附圖說明】
[0028] 圖1為不同施用量海藻寡糖復合微生物肥葉面噴施后土壤有效鉀含量。
[0029] 圖2為不同施用量海藻寡糖復合微生物肥葉面噴施后土壤有效磷含量。
[0030] 圖3為不同施用量海藻寡糖復合微生物肥葉面噴施后土壤有機質(zhì)含量。
[0031] 圖4為不同施用量海藻寡糖復合微生物肥葉面噴施后生菜鮮重。
[0032] 在圖1~4中，各標記為：對照組，即清水噴施；4mL表示實驗組，每次噴施4mL稀釋 800倍的海藻寡糖復合微生物肥m，共2次;6mL表示實驗組，每次噴施6mL稀釋800倍的海藻 寡糖復合微生物肥ΙΠ ，共2次;8mL表示實驗組，每次噴施8mL稀釋800倍的海藻寡糖復合微生 物肥ΙΠ ，共2次；10mL表示實驗組，每次噴施10mL稀釋800倍的海藻寡糖復合微生物肥ΙΠ ，共2 次。
【具體實施方式】
[0033] 為了進一步理解本發(fā)明，下面通過實施例和附圖對本發(fā)明作詳細說明，但本發(fā)明 并不局限于以下實施例。
[0034] 實施例1海藻寡糖復合微生物肥的制備
[0035] 1)將膠凍樣芽孢桿菌用固體無氮培養(yǎng)基（蔗糖5g/L、磷酸氫二鉀0.5g/L、硫酸鎂 0. lg/L、氯化鈉0.2g/L、碳酸鈣0.6g/L、瓊脂20g/L，蒸餾水配置，滅菌前pH值為7.0，121°C、 20min滅菌后使用）進行活化后，接種到種子培養(yǎng)基（10g/L、磷酸氫二鉀0.8g/L、硫酸鎂 0 · 4g/L、氯化鈉0 · 35g/L、碳酸|丐1 · Og/L，蒸餾水配置，滅菌前pH值為7 · 2，121°C、20min滅菌 后使用）中，在30°C條件下，200rpm振蕩培養(yǎng)24h，得到一級種子發(fā)酵液;將一級種子液接種 至種子發(fā)酵罐中，在30°C下，保持發(fā)酵罐攪拌轉(zhuǎn)數(shù)150rpm，培養(yǎng)36h培養(yǎng)得到二級種子液。
[0036] 2)將步驟1)所得的二級種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基（海藻寡糖溶液5mL/L、酵母膏 1. 〇g/L、淀粉5. Og/L、豆柏粉5. Og/L、硫酸鎂0.8g/L、磷酸氫二鉀1. Og/L、碳酸鈣5. Og/L、氯 化鈉0. lg/L，蒸餾水配置，滅菌前pH值為7.2，121°C，20min滅菌后使用）中，接種量按體積的 百分比為種子液的10%;發(fā)酵過程中，發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速控制在250rpm，通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速和通氣量使 溶解氧控制在20 % (V/V)，罐溫控制在30°C，罐壓保持在0.05~0.06MPa，pH值通過10 %的氨 水和10 %的鹽酸控制在7.2，培養(yǎng)48h后發(fā)酵結(jié)束，制得膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液。
[0037] 3)將步驟2)收集的膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液與海藻寡糖溶液按體積百分比80%: 20%混合，即得海藻寡糖復合微生物肥I;將步驟2)收集的膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液與海藻寡 糖溶液按體積百分比60% :40%混合，即得海藻寡糖復合微生物肥Π ;將步驟2)收集的膠凍 樣芽孢桿菌發(fā)酵液與海藻寡糖溶液按體積百分比40% :60%混合，即得海藻寡糖復合微生 物肥ΙΠ;將步驟2)收集的膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液與海藻寡糖溶液按體積百分比20% :80% 混合，即得海藻寡糖復合微生物肥IV。
[0038] 實施例2
[0039]試驗設計7個試驗組，分別為：
[0040] 陰性對照組CK:清水；
[0041 ]陽性對照組CK1:海藻寡糖溶液；
[0042]陽性對照組CK2:膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0043]試驗組A:海藻寡糖復合微生物肥I;
[0044] 試驗組B:海藻寡糖復合微生物肥Π ;
[0045] 試驗組C:海藻寡糖復合微生物肥m;
[0046] 試驗組D:海藻寡糖復合微生物肥IV。
[0047] 土壤過篩，去除雜物、石頭等，拌勻，制成試驗土樣，每盆裝土2kg。常規(guī)施肥，以尿 素0.7g/kg、KH2P〇4 0.5g/kg，KCl 0.085g/kg的添加量向土樣添加氮磷鉀肥溶液。挑選籽粒 飽滿、大小一致的油菜種子用1%的次氯酸鈉消毒15min，用去離子水沖洗干凈，然后用去離 子水浸泡12h。將浸過水的小白菜種子播種于盆中，待發(fā)芽一周后，選擇長勢一致的幼苗進 行定苗，每盆5株，噴灑澆水，使得田間持水量約為60%~70%。將上述試驗組海藻寡糖溶 液、膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液、海藻寡糖復合微生物肥分別用水稀釋500倍。取10mL上述稀釋 過的海藻寡糖溶液、膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液、海藻寡糖復合微生物肥在油菜定苗后7d進行 葉面噴施。在人工氣候室培養(yǎng)40d，中期追肥一次。
[0048]結(jié)果如下所示：
[0049] 1)相比對照CK，不同處理組均能使土壤微生物數(shù)量、土壤有效磷、有效鉀及有機質(zhì) 含量有不同程度的提高，有機質(zhì)含量最大提高了 22.8 % (處理B)，細菌數(shù)量最大提高了4倍 (陽性對照組CK1)，不同處理對土壤性質(zhì)的影響見表1。
[0050] 表 1
[0051]
[0052] 2)相比對照CK，不同處理組均能使油菜鮮重、株高、根長、葉片數(shù)有不同程度的提 高，尤其處理D能使油菜鮮重增加54.8%，株高增加2.5%，根長增加29.3 %。而且，海藻寡糖 復合微生物肥還能增加油菜葉片數(shù)，普遍增加1~2片。不同處理對油菜產(chǎn)量的影響見表2。
[0053] 表 2
[0055] 實施例3
[0056] 土壤過篩，去除雜物、石頭等，拌勻，制成試驗土樣，每盆裝土2kg。常規(guī)施肥，以尿 素0.7g/kg、KH2P04 0.5g/kg，KCl 0.085g/kg的添加量向土樣添加氮磷鉀肥溶液。挑選籽粒 飽滿、大小一致的生菜種子用1%的次氯酸鈉消毒15min，用去離子水沖洗干凈，然后用去離 子水浸泡12h。將浸過水的生菜種子播種于盆中，待發(fā)芽一周后，選擇長勢一致的幼苗進行 定苗，每盆5株，噴灑澆水，使得田間持水量約為60 %~70 %。
[0057] 將上述試驗組海藻寡糖復合微生物肥用水稀釋800倍。分別取4mL、6mL、8mL、10mL 上述稀釋過的海藻寡糖復合微生物肥m在油菜定苗后7d進行葉面噴施，隔7d相同施用量再 進行噴施一次，共兩次，以清水作為對照。在人工氣候室培養(yǎng)40d，中期追肥一次。
[0058] 分析不同實驗組的土壤成分及生菜生長情況，發(fā)現(xiàn)土壤中有機質(zhì)含量、有效鉀、有 效磷的含量及生菜的產(chǎn)量都有不同程度提高，具體結(jié)果見圖1~4。
[0059] 實施例4
[0060]試驗材料為鐵觀音，種植年限7年。
[0061]試驗地點為福建漳州市南靖縣書陽鎮(zhèn)雙峰村，試驗地土壤為黃紅壤，土壤有機質(zhì) 19 · 4g/kg、全氮 0 · 96g/kg、堿解氮 49 · 7mg/kg、有效磷21 · 9mg/kg、速效鉀76mg/kg、pH值4 · 9。 [0062]試驗設4個處理。處理A海藻寡糖復合微生物肥ΙΠ +常規(guī)施肥;處理B海藻寡糖復合 微生物肥m+80 %常規(guī)施肥;處理C噴施等量清水+常規(guī)施肥;處理D噴施等量清水(不施肥）。 所述海藻寡糖復合微生物肥m中海藻寡糖多2g/kg、pH值為6.8、有效活菌數(shù)多2億/mL。 [0063] 試驗設3次重復，其中處理A和處理B兩個示范片面積各30畝，其他設試驗示范區(qū)面 積各1畝，樣品采摘小區(qū)面積為30m2,采用隨機區(qū)組排列。海藻寡糖復合微生物肥仔茶葉上 噴施方法：在夏茶芽萌發(fā)時噴施一次，15d后再噴施一次，共施2次，濃度為400倍，每次 666.7m2用海藻寡糖復合微生物肥500mL兌水200kg均勻噴施。處理C、D同期噴施等量清水。 生長期間其他管理方法一致。
[0064]于2〇15年6月14日 666.71112施茶葉配方肥0:?2〇5:1(2〇為21:6:13)751^。處理8 666.71112施茶葉配方肥0:?2〇5:1(2〇為21:6:13)6〇1^。處理厶、8于2〇15年6月14日和3〇日各噴 施海藻寡糖復合微生物肥ΙΠ 1次，使用400稀釋液。處理C、D同期噴施等量清水。夏茶于2015 年8月17日采收，實測產(chǎn)量。
[0065] 結(jié)果如下所示：
[0066] 1)處理A茶葉葉片比處理B、C、D葉片較濃綠。處理A、B、C、D茶樹平均芽頭密度(個/ 0.11112)分別為64.9、63.8、60.2、46.6。處理厶、8比處理(：分別增加了4.7、3.6個/0.1111 2;處理八、 B、C、D茶樹平均百芽重（1芽3葉）分別為269.38、270.(^、236.78、206.(^。處理4、8比處理(：分 別增加了 32.6g和33.3g。
[0067] 2)各小區(qū)不同處理對茶葉產(chǎn)量的影響見表3,處理A每666.7m2鮮茶產(chǎn)量比處理B、C 分別增加17.8kg和22.2kg，分別增產(chǎn)8.33 %、10.6 % ;按5:1折干毛茶計算，處理A沒666.7m2 干毛茶產(chǎn)量比處理B、C分別增產(chǎn)3.56kg、4.44kg，分別增產(chǎn)8.33%和10.6%。處理B比處理C 增產(chǎn)2.13%，處理C比處理D增產(chǎn)42.4%。
[0068] 表 3
[0069]
[0070] 對試驗處理小區(qū)產(chǎn)量方差分析(見表4)^ = 26.14沖0.01=9.78，說明處理間產(chǎn)量 差異達極顯著水平。
[0071] 表4不同處理茶葉產(chǎn)量方差分析
[0073] 對試驗處理小區(qū)產(chǎn)量進行LSD法多重比較(見表3)，結(jié)果表明：處理A與處理B、C、D 產(chǎn)量差異大極顯著水平，處理B與處理C差異不明顯，說明茶葉噴施海藻寡糖生物肥增產(chǎn)效 果達到極顯著水平。同時，在常規(guī)施肥減少20%情況下茶葉噴施海藻寡糖復合微生物肥肥 效與常規(guī)施肥處理產(chǎn)量差異不顯著。
[0074] 3)處理A鮮茶中茶多酚含量13.2% (以干基計）、Vc含量25.7mg/100g，處理C茶多酚 含量12.7% (以干基計）、Vc含量14. lmg/100g，處理A比C鮮茶中茶多酚含量增加0.5% (以干 基計）、Vc含量增加11.6mg/100g。茶葉噴施海藻寡糖復合微生物肥能促進鮮茶品質(zhì)的提高。 [0075]以上試驗驗證了本發(fā)明的海藻寡糖復合微生物肥具有極顯著的增產(chǎn)、增進肥效、 改善品質(zhì)的效果。
[0076]此外，本發(fā)明各種不同實施方式中間可以任意組合。
【主權(quán)項】
1. 一種海藻寡糖復合微生物肥，其特征在于各組分按體積百分比為：海藻寡糖溶液 20%~80%、膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液20%~80% ;其中海藻寡糖含量彡0.5g/kg，有效活菌 數(shù)彡2億/mL，pH值為6 · 8~7 · 2; 所述膠凍樣芽孢桿菌為膠凍樣芽孢桿菌(BaciIlus muci Iaginosus)三炬01號菌株，已 于2010年07月02日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為 CGMCC No.3995〇2. 如權(quán)利要求1所述一種海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，其特征在于包括以下步 驟： 1) 將膠凍樣芽孢桿菌用固體無氮培養(yǎng)基進行活化后，接種到種子培養(yǎng)基中，得到一級 種子發(fā)酵液;將一級種子液接種至種子發(fā)酵罐中，培養(yǎng)得到二級種子液;所述膠凍樣芽孢桿 菌為膠凍樣芽孢桿菌(BaciIlus MuciIaginosus)三炬01號菌株，已于2010年07月02日保藏 于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.3995; 2) 將所得的二級種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)后，制得膠凍樣芽孢桿菌 發(fā)酵液； 3) 將步驟2)收集的膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液與海藻寡糖溶液混合，即得海藻寡糖復合微 生物肥。3. 如權(quán)利要求1所述一種海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，其特征在于在步驟1)中， 所述固體無氮培養(yǎng)基的組成為鹿糖5~10g/L、磷酸氫二鉀0.3~0.8g/L、硫酸鎂0.1~0.4g/ L、氯化鈉0 · 15~0· 35g/L、碳酸鈣0· 5~1 · 2g/L，瓊脂20g/L，滅菌前pH值為7 · 0~7 · 5。4. 如權(quán)利要求1所述一種海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，其特征在于在步驟1)中， 所述活化培養(yǎng)的條件是于28~32 °C條件下培養(yǎng)48~72h。5. 如權(quán)利要求1所述一種海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，其特征在于在步驟1)中， 所述種子培養(yǎng)基的組成為蔗糖5~10g/L、磷酸氫二鉀0.3~0.8g/L、硫酸鎂0.1~0.4g/L、氯 化鈉0 · 15~0 · 35g/L、碳酸鈣0 · 5~1 · 2g/L，滅菌前pH值為7 · 0~7 · 5。6. 如權(quán)利要求1所述一種海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，其特征在于在步驟1)中， 所述一級種子培養(yǎng)的條件是于30~35°C，150~200rpm條件下培養(yǎng)24~36h;所述二級種子 培養(yǎng)的條件可于種子發(fā)酵罐中，30~35 °C條件下，保持罐轉(zhuǎn)速125~150rpm，培養(yǎng)24~48h。7. 如權(quán)利要求1所述一種海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，其特征在于在步驟2)中， 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為海藻寡糖溶液〇~20mL/L、酵母膏1.0~1.8g/L、淀粉5.0~7.5g/ 1-豆柏粉5.0~7.(^/1、硫酸鎂0.8~1.68/1、磷酸氫二鉀1.0~1.88/1、碳酸鈣5.0~10.(^/ 1^、氯化鈉0.1~0.48凡，滅菌前卩!1值為7.0~7.5。8. 如權(quán)利要求1所述一種海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，其特征在于在步驟2)中， 所述種子液接種至發(fā)酵罐培養(yǎng)基中發(fā)酵的接種量按體積的百分比為種子液的10%;所述發(fā) 酵條件可為:轉(zhuǎn)速控制在200~250rpm，通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速和通氣量使溶解氧控制在20 % (V/V)， 罐溫控制在30°(：，罐壓保持在0.05~0.0610^，？田直通過10%的氨水和10%的鹽酸控制在 7.2,發(fā)酵時間36~48h。9. 如權(quán)利要求1所述一種海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，其特征在于在步驟3)中， 所述海藻寡糖是利用微生物直接降解龍須菜所得的聚合度為4~8的寡糖;所述海藻寡糖溶 液中海藻寡糖的質(zhì)量百分濃度為4~5g/L。10.如權(quán)利要求1所述一種海藻寡糖復合微生物肥的制備方法，其特征在于在步驟3) 中，所述海藻寡糖溶液、步驟2)所得的膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵液按體積百分比為（20%~ 80%):(20% ~80%)。
【文檔編號】C05F11/08GK105884415SQ201610249929
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月21日
【發(fā)明人】余勁聰, 何舒雅, 林克明, 尤越
【申請人】福建三炬生物科技股份有限公司