高效蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效蛹蟲草菌種培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛹蟲草是以蠶蛹為宿主的真菌，與冬蟲夏草同科同屬，化學(xué)成分基本一致，其抗腫 瘤成分蟲草素含量高于冬蟲夏草，且是衛(wèi)生部批準(zhǔn)的新資源食品，具有抗腫瘤、抗病毒、抗 菌、抗炎癥、延緩衰老、提高免疫力等多種功效，適用人群廣泛。近年來蛹蟲草的人工栽培與 開發(fā)迅速發(fā)展，然而蛹蟲草的菌種經(jīng)過幾代培養(yǎng)會出現(xiàn)菌絲體生長慢，轉(zhuǎn)色慢，生活力下 降，出草率下降，出草慢等菌種衰退現(xiàn)象。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種高效蛹蟲草菌種培養(yǎng)基，以該培養(yǎng)基作 為菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)蛹蟲草可有效提高出草率，提高蛹蟲草產(chǎn)量，解決菌種退化等問題。
[0004] 本發(fā)明提供的高效蛹蟲草菌種培養(yǎng)基以水為溶劑，由如下濃度的成分構(gòu)成： 蛋白胨 I0~20g/L、 酵母粉 3~5g/L、 黃豆粉 3~5g/L、 玉米漿 5~10g/L、 葡萄糖 15~30 g/L、
[0005] 磷酸二氫鉀：U~1.5g/L、 氯化鈉 0,8~1.2g/L、 硫酸鎂 1~1.2g/L、 生物素 3~5 g/L、 2% 卵黃 l">-3._g/L。
[0006] 作為優(yōu)選配方，上述高效蛹蟲草菌種培養(yǎng)基由如下濃度的成分構(gòu)成： 蛋白胨 15g/L.,
[0007] 酵母粉 5g/L、 黃豆粉 3 g/L、 玉米漿 6 g/L、 葡萄糖 15g/L、 磷酸二氫鉀_ 1.2g/L、
[0008] 氯化鈉 1.2 g/L、 硫酸鎂 1.2 g/L、 生物素 4 g/L、 2%卵黃 1.5 g/L〇
[0009] 作為再優(yōu)選，上述高效蛹蟲草菌種培養(yǎng)基還可以包括:水解酪蛋白〇.5-lg/L、L-氨 基酸0.1-0.5g/L。
[0010] 本發(fā)明進(jìn)一步提供上述高效蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的制備方法，具體包括如下步驟： 以純凈水將各組分并充分混勻，分裝入培養(yǎng)瓶，密封，滅菌，冷卻。
[0011 ] 所述滅菌的具體條件為：121°C、1 · IMpa滅菌20~45min。
[0012] 本發(fā)明蛹蟲草菌種培養(yǎng)基配方合理，各成分間協(xié)同作用良好。使用本發(fā)明培養(yǎng)基 作為菌種培養(yǎng)基活化蛹蟲草菌種后再培養(yǎng)蛹蟲草，營養(yǎng)全面均衡，可有效改變菌絲體生長 慢、轉(zhuǎn)色慢、出草慢，活力低，出草率低等現(xiàn)象，獲得的蟲草子實體產(chǎn)量穩(wěn)定，可有效降低或 減緩蛹蟲草菌種的退化現(xiàn)象。
【具體實施方式】
[0013] 以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步具體描述，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好地 理解本發(fā)明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發(fā)明的限定。
[0014] 實施例1:
[0015] 一、蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的配制：
[0016] 本實施例蛹蟲草菌種培養(yǎng)基以水為溶液，由如下濃度的成分構(gòu)成： 蛋白胨 I5g/L、 酵母粉 5 g/L、 黃豆粉 3g/L、
[0017] 玉米漿 6g/L、 葡萄糖 15 g/L、 磷酸二氫鉀l,2g/L、 氯化鈉 1.2 g/L、 硫酸鎂 L2g/L、
[0018] 生物素 4g/U 2% 卵黃 l.5g/L。
[0019] 制備如下：按以上重量配方稱取各成分，加純凈水充分溶解和混勻，定容至1L，然 后分裝入三角培養(yǎng)瓶，每瓶裝200ml，121°C、1. IMpa滅菌30~40min，待其自然冷卻后備用。
[0020] 二、蛹蟲草菌種的活化
[0021] 1、在超凈臺中使用上述配制的菌種培養(yǎng)基接種已經(jīng)明顯退化的蟲草菌體(菌種為 Cordyceps militaris(L)Link)，接種比例為 1:100〇
[0022] 2、在溫度22°〇條件下避光靜置培養(yǎng)2411，然后溫度22°〇、170印111下繼續(xù)培養(yǎng)60-72h，使菌液濃度達(dá)到每毫升3-5個菌球。
[0023]三、蛹蟲草的培養(yǎng)
[0024] 采用常用方法進(jìn)行蛹蟲草的無菌培養(yǎng)、收獲以及干燥。具體如下：
[0025] 1、在超凈臺中接種活化的蛹蟲草菌體至固體培養(yǎng)基，每瓶50ml固體培養(yǎng)基接種 lmL活化菌液。固體培養(yǎng)基配方如下:干蠶蛹粉30g/L、大米粉170g/L、磷酸二氫鉀1.2g/L、磷 酸二氫鈉〇.8g/L、牛肉膏l(xiāng)g/L。
[0026] 2、在溫度22°C、濕度75~85 %條件下避光培養(yǎng)3~5天，使蟲草菌絲迅速長滿培養(yǎng) 基表面，防止其他雜菌在培養(yǎng)基表面生長。
[0027] 3、第5~20天光照培養(yǎng)，白天12小時日光燈光照，溫度20~22°C(最好為22°C)、濕 度80~85 %，光照強度控制在100~150Lx;晚上12小時閉光，溫度18~20°C (最好18°C)、濕 度75~85 %。每天通風(fēng)2次，早晚各一次，氣溫相對低的時候進(jìn)行每次20~30分鐘。白天晚上 溫差有利于原基的分化形成。
[0028] 4、第21~35天白天12小時光照（自然光加日光燈），溫度20~22°C(最好為22°C)、 濕度75%~85%，光照強度控制在1000~1200Lx;晚上12小時閉光，溫度18~20°C(最好為 18°C)、濕度75~85%。此時間為子實體生長時期，強光對子實體的生長有利，使其呈棒狀生 長并不斷成熟、健壯、色澤變?yōu)轷r艷的橙黃色，在此生長階段每天通風(fēng)2次，早晚各一次，氣 溫相對低的時候進(jìn)行每次20~30分鐘。
[0029] 5、收獲及再培養(yǎng)，旋開培養(yǎng)瓶蓋，鑷子用75%酒精消毒后，將子實體取出（只取出 培養(yǎng)基上面的部分），將取出的子實體置于干凈的不銹鋼盤中，挑選色澤均勻、粗壯、完整的 子實體，去除殘存的培養(yǎng)基后置于新的不銹鋼盤中稱重備用;培養(yǎng)瓶中剩余部分按第20~ 35天的培養(yǎng)條件及方法繼續(xù)培養(yǎng)，再次收獲。
[0030] 培養(yǎng)中的注意事項：
[0031] A、光照時要用散射光，而不能用直射光，蟲草的生長有向光性，對光照均勻的地方 的瓶子要進(jìn)行轉(zhuǎn)瓶，使其光照均勻，子實體向上生長。
[0032] B、在培養(yǎng)過程中要嚴(yán)格控制溫度和濕度，所以要嚴(yán)格控制好溫度。在目前車間沒 控制溫度設(shè)備的情況下，要用地面灑水來控制培養(yǎng)室的溫度，一般一天灑水3次，但也要根 據(jù)當(dāng)天的氣溫情況來變，溫度高要多灑，培養(yǎng)室溫度超過25°C，要開空調(diào)降溫。
[0033] C、每天培養(yǎng)室要通風(fēng)換氣一到兩次，時間選擇在早上和傍晚溫度相對低的時候， 每次20~30分鐘。
[0034] D、接種后污染的瓶子要及時的拿出，把里面的培養(yǎng)基倒出重新滅菌后重新接種， 不能讓污染的瓶子放在培養(yǎng)室里培養(yǎng)，而造成整個培養(yǎng)室受雜菌的污染。
[0035] 實施例2: