預(yù)防西、甜瓜土傳病害的新型多抗復(fù)合微生物肥制備及應(yīng)用方法
【專利說明】預(yù)防西、甜瓜土傳病害的新型多抗復(fù)合微生物肥制備及應(yīng) 用方法
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域： 本發(fā)明涉及一種預(yù)防西、甜瓜土傳病害的新型多抗復(fù)合微生物肥制備及應(yīng)用方法，屬 于肥料制造領(lǐng)域。
[0002]
【背景技術(shù)】： 現(xiàn)有生物有機(jī)肥、微生物肥，添加預(yù)防病害的功能菌一般都是5406菌或枯草芽孢桿 菌，靠菌種產(chǎn)生的激素抑制病原菌發(fā)生。施用量少，施肥方法不對(duì)，基質(zhì)中蛋白缺少，不能有 效供給有功能菌繁殖生長，其效果不太明顯，特別是土傳病害。如：枯萎病，根結(jié)線蟲病，幾 乎看不到效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的之一在于提供一種能夠阻隔西、甜瓜根苗周圍病原菌的侵染和侵 襲，同時(shí)為在有機(jī)質(zhì)中提高了蛋白含量，給菌種生長提供了營養(yǎng)的，達(dá)到肥、藥雙效目的一 種預(yù)防西、甜瓜土傳病害的新型多抗復(fù)合微生物肥制備及應(yīng)用方法。
[0004] 技術(shù)解決方案 一種預(yù)防西、甜瓜土傳病害的新型多抗復(fù)合微生物肥，其特征在于，制備方法如下：在 有機(jī)肥腐熟中添加含碳植物粉和含蛋白的谷類粉進(jìn)行發(fā)酵，碳氮比22-28:1，在發(fā)酵后有機(jī) 物料中再加入功能菌，充分混合均勻即得多抗復(fù)合微生物肥。
[0005]所述有機(jī)肥腐熟采用動(dòng)物糞，包括羊糞、牛糞、雞糞中的一種或二種以上混合。
[0006]所述含碳植物粉包括：秸桿粉、糠醛渣、甜高粱渣。
[0007]所述谷類粉包括玉米面、油餅或豆餅中的一種或二種以上混合。
[0008]所述功能菌包括：含量達(dá)到45-55億/克的綠色木霉菌、含量達(dá)到45-55億/克的 哈茨木霉菌，含量達(dá)到45-55億/克的的淡紫擬青霉4%。
[0009]本發(fā)明為加快有機(jī)物料發(fā)酵速度，在有機(jī)物料中加入1. 5-3%的腐熟劑。
[0010] 本發(fā)明物料均為重量百分比，有機(jī)肥腐熟為40-60%羊糞和15-25%雞糞；碳植物粉 為15-25%秸桿粉，含蛋白的谷類粉為4-6 %玉米面、2-4 %油餅；還包括腐熟劑1.5-3及含 量達(dá)到45-55億/克的綠色木霉菌2-3%、含量達(dá)到45-55億/克的哈茨木霉菌3. 5-4. 5%， 含量達(dá)到45-55億/克的淡紫擬青霉3. 5-4. 5%。
[0011] 一種預(yù)防西、甜瓜土傳病害的新型多抗復(fù)合微生物肥的制備方法，其特征在于，制 備方法如下： 1) 有機(jī)物料的制備將40-60%羊糞，15-25%雞糞，15-25%秸桿粉，4-6%玉米面，2-4 %油 餅，1. 5-3%肥料腐熟劑，充分混合均勻，在溫度：55-60°C的高溫下堆肥，殺死病原菌，當(dāng)堆 垛塌陷，布滿白色菌絲，無臭味，達(dá)到無害化標(biāo)準(zhǔn)，即制成有機(jī)物料； 2) 在85-95%有機(jī)物料中加入功能菌種，功能菌種的加入量占有機(jī)物料總量的10-12% ; 充分混合均勻，即制成多抗復(fù)合微生物肥；其中：有益菌種包括：含量達(dá)到45-55億/克的 綠色木霉菌2-3%、含量達(dá)到45-55億/克的哈茨木霉菌3. 5-4. 5%，含量達(dá)到45-55億/克 的淡紫擬青霉3. 5-4. 5%。
[0012] -種預(yù)防西、甜瓜土傳病害的新型多抗復(fù)合微生物肥的應(yīng)用方法，其特征在于，采 用刨窩穴施和起壟撒施，與土混合均勻，在西甜瓜每苗的根圈周圍大量繁殖功能菌種，形成 保護(hù)罩，抵抗病原菌侵襲。
[0013] 本發(fā)明的積極有益效果 本發(fā)明菌種復(fù)合后對(duì)控害工作原理描述：綠色木霉、哈茨木霉、淡紫擬青霉都屬半知菌 亞門，絲孢綱，絲孢目，混合后互不拮抗，分泌的抗生素可以抑制病原菌生長，定植。
[0014] 哈茨木霉和淡紫擬青霉菌種可以重寄生在寄主菌上面，分解病原菌的細(xì)胞壁，穿 透寄主菌絲，吸取營養(yǎng)。將病原菌殺死并能平行生長和螺旋纏繞，使作物根圈形成保護(hù)罩， 任何病原菌不能侵染和侵襲，特別是對(duì)根結(jié)線蟲有毒殺作用。試驗(yàn)結(jié)果表明：能有效預(yù)防根 結(jié)線蟲病、根腐病、立枯病、枯萎病、菌核病、灰霉病、炭疽病，具有多抗作用。
[0015] 三種菌復(fù)合并能改良土壤，破除板結(jié)，提高土壤通透性和供氧量，促進(jìn)作物根系和 植株生長，對(duì)種子萌發(fā)生長也有促進(jìn)作用。苗期表現(xiàn)苗齊，苗旺，苗壯。三菌復(fù)合，具有肥藥 雙效作用。
[0016] 有機(jī)肥做為基質(zhì)，添加蛋白原，加快了菌種繁殖生長。
[0017] 實(shí)踐證明，此項(xiàng)技術(shù)不但能預(yù)防土傳病害，而且抗重茬效果明顯。
[0018] 本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，具有抗多種病害的能力，對(duì)根結(jié)線蟲病，枯萎病， 根腐病，立枯病防治效率80%以上，具有殺蟲，抗病害，雙重功效。施用方便，肥效高，使用只 需一次，節(jié)省勞力，不污染環(huán)境。
[0019] 具體實(shí)施方法： (2)有益菌種添加綠色木霉2%，含量達(dá)到50億/克，哈茨木霉菌添加4%，含量達(dá)到50 億/克，淡紫擬青霉3%，含量達(dá)到50億/克。
[0020] 本發(fā)明有機(jī)肥腐熟，用羊糞50%、雞糞20%、秸桿粉20%，用玉米面5%、油餅3%碳氮比 25:1 ;用腐熟劑2%，為了加快發(fā)酵，上述物料，充分預(yù)混，堆肥發(fā)酵，溫度升到55°C-60°C，每 天翻堆一次，15-20天徹底腐熟、殺死糞便中的所有細(xì)菌和蛔蟲卵，達(dá)到無害化處理的要求 (即堆垛塌陷，布滿白色菌絲，無臭味)。后熟期保留7-10天，作為功能菌的載體，制作完成。 本發(fā)明有機(jī)肥發(fā)酵過程中添加玉米面和油餅，目的是供給后來的功能菌生長發(fā)育。
[0021] 添加功能菌：在后熟期的有機(jī)肥中添加綠色木霉菌2%(含量達(dá)到50億/克)，哈茨 木霉菌4% (含量達(dá)到50億/克)，淡紫擬青霉3% (含量達(dá)到50億/克)，充分混合均勾，使 配制好的預(yù)防西甜瓜土傳病害的新型多抗復(fù)合微生物肥，功能菌總含量達(dá)到5億/克，有機(jī) 質(zhì)含量多50%，水分< 30%，通過質(zhì)檢化驗(yàn)，合格產(chǎn)品包裝入庫。
[0022] 菌種形態(tài)結(jié)構(gòu)，防病機(jī)理和功效描述：綠色木霉菌屬半知菌亞門，絲孢綱，絲孢目， 粘孢菌類，能生產(chǎn)多功能活性酶，如纖維酶、幾丁質(zhì)酶，它產(chǎn)生的小分子抗生素和大分子抗 菌蛋白或細(xì)胞壁降解酶類來抑制病原菌的生長，繁殖，對(duì)植物病害防治有重要作用。
[0023] 哈茨木霉屬叢梗孢科，半知菌亞門，絲孢綱，絲孢目。能分泌酶及抗生素物質(zhì)，分解 病原菌的細(xì)胞壁。在植物根圈形成保護(hù)罩，它具有寄生作用，寄主菌絲分泌物使哈茨木霉趨 向寄主菌生長。一旦寄主被哈茨木霉寄生物識(shí)別，哈茨木霉沿寄主菌絲平行生長和螺旋狀 纏繞生長并產(chǎn)生附著胞狀分枝吸附于寄主菌絲上。通過分泌胞外酶溶解細(xì)胞壁，穿透寄主 菌絲吸取營養(yǎng)，將病原菌殺死；其次分泌的抗生素也可以抑制病原菌生長定植，減輕危害。 用來預(yù)防腐霉菌，立枯絲核菌、鐮刀菌、灰葡萄孢菌效果明顯。
[0024] 淡紫擬青霉絲孢菌科，半知菌綱，絲孢菌目，能寄生在根結(jié)線蟲的卵囊，在粘性基 質(zhì)中，生防菌絲包圍整個(gè)卵。由于外源性代謝物和幾丁質(zhì)酶的活動(dòng)，使卵殼表層破裂，隨后 真菌侵入并取而代之。也能分泌毒素對(duì)線蟲起毒殺作用，它在控害方面功效顯著，防病率可 達(dá)80%以上，對(duì)其它昆蟲也有防殺作用，對(duì)植物病原菌有明顯抑制作用，同時(shí)能夠刺激作物 生長。 本發(fā)明根據(jù)三種有益功能菌的作用和機(jī)理，應(yīng)用要求： 第一，穴施。播種前刨窩撒施與土混拌，然后播種。這樣菌株生長發(fā)育，破壞和殺死周 圍病原菌和害蟲，使作物根圈周圍形成保護(hù)罩，給作物生長創(chuàng)造良好條件。畝用量50-80公 斤。
[0025] 第二：溫室大棚施用，起壟撒施和土壤混合均勻，畝用量100-200公斤，然后覆膜 播種，這樣能使壟道內(nèi)形成保護(hù)罩。
[0026] 綠色木霉菌的培養(yǎng) ①一級(jí)試管斜面培養(yǎng)：PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g，葡萄糖15g，瓊脂15g，蒸餾水 1000mL，將綠色木霉菌接種到試管PDA培養(yǎng)基上，28°C下活化培養(yǎng)4天，獲得試管菌種。
[0027] ②二級(jí)種子培養(yǎng)：PDB培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g，葡萄糖15g，蒸餾水1000mL，將試 管菌種接入PDB培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)4天（28°C，140轉(zhuǎn)/分）制成種子液。
[0028] ③液體發(fā)酵培養(yǎng)：對(duì)發(fā)酵設(shè)備及培養(yǎng)基滅菌后，將二級(jí)種子液1:10的體積比接種 PDB發(fā)酵培養(yǎng)液中，在28°C下發(fā)酵72小時(shí)，罐壓0. 05MPa;通氣量6Slpm;攪拌速度150rpm; 每10小時(shí)取樣一次，觀察有無雜菌，以培養(yǎng)基平板法檢測活菌數(shù)達(dá)到（2.5 -3.0)X108個(gè) /mL。管道、空氣過濾器、發(fā)酵罐、培養(yǎng)基的滅菌按生產(chǎn)工藝標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。
[0029] 哈茨木霉菌株的培養(yǎng) 菌株FJAT- 9040由中國農(nóng)科院提供。用土豆、蔗糖、瓊脂、PDA培養(yǎng)基，液體發(fā)酵用査 氏培養(yǎng)基、硝酸鈉3g，磷酸二氫鉀lg、硫酸鎂0. 5g、氯化鉀0. 5g、硫酸亞鐵0. 01g、蔗糖30g、 水 1000mL。
[0030] 接種活化的菌種FJAT- 9040于査氏培養(yǎng)基(裝液量為50mL或250mL三角瓶28°C 120rmin1振蕩培養(yǎng)96h，培養(yǎng)液經(jīng)無菌紗布過濾去菌絲體后，作為種子液備用） 配制查氏液體培養(yǎng)基30L，加入到50L發(fā)酵罐，按程序培養(yǎng)，滅菌30min，冷卻28°C，將種 子液按1%接種量接入發(fā)酵罐，罐溫28°C，通氣量0. 8vvm，轉(zhuǎn)速120r.min\進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。 每隔8h、12h、24h取樣300mL，分成三份，用發(fā)酵狀態(tài)參數(shù)測定，用稀釋涂板法測定孢子數(shù)。
[0031] 淡紫擬青霉的培養(yǎng) 菌株由中國農(nóng)科院提供。用PDA或CMA培養(yǎng)基繁殖(馬鈴薯、蔗糖培養(yǎng)基)，培養(yǎng)時(shí)間5d。
[0032] 液體發(fā)酵，用種子罐發(fā)酵，培養(yǎng)溫度28°C，罐壓0. 05 - 0.OIMpa，轉(zhuǎn)速200-250r. min\ 通風(fēng)量 1:0. 5,培養(yǎng) 24- 48h。
[0033] 發(fā)酵罐培養(yǎng)6