專(zhuān)利名稱(chēng)：含鈷夾心雜多酸及其合成方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及夾心雜多酸及其合成方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
結(jié)直腸癌是世界上第三大高發(fā)內(nèi)臟惡性腫瘤及由于治療抗性引起癌相關(guān)死亡的主要原因之一?；颊呓邮艿闹饕委煼椒礊楣孟⑿酝饪剖中g(shù)及化學(xué)藥物治療?；煼椒ㄒ呀?jīng)成為一種臨床腫瘤治療最重要的方法。臨床實(shí)踐和實(shí)驗(yàn)研究階段的化療藥物主要包括合成化合物和天然產(chǎn)物提取物或植物化學(xué)物，但首選并且效果明顯的仍是合成化合物，如 2000年，結(jié)直腸惡性腫瘤臨床主要應(yīng)用的化療藥物是5-氟脲嘧啶結(jié)合甲酰四氫葉酸。為了進(jìn)一步增加結(jié)直腸惡性腫瘤患者的存活率，急待高效化療合成藥物的研發(fā)。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)多金屬氧酸鹽抗結(jié)直腸腫瘤進(jìn)行了探索，如1992年，Na[IMo6024]作為抗結(jié)直腸癌藥物在日本應(yīng)用于是臨床，但多金屬氧酸鹽作為結(jié)直腸腫瘤化療藥物的尚未開(kāi)展，尤其是基于過(guò)渡金屬鈷的多金屬氧酸鹽在抗結(jié)直腸腫瘤中的研究未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供含鈷夾心雜多酸及其合成方法和應(yīng)用。本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸的分子式為H6[Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4 (OH2)14] (C3H4N2) 2。本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸的合成方法按以下步驟進(jìn)行一、在磁力攪拌下，將 4mmol 5mmol的Na2WO4溶解在80mL 120mL的去離子水中，并加熱至80°C 120°C，然后逐滴加入濃度為6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 0 7. 0，得到溶液A ；二、將0. 3mmol 0. 8mmol 的Bi (NO3) 3溶解在IOmL濃度為6mol/L的鹽酸中，得到Bi (NO3) 3溶液，再將Bi (NO3) 3溶液、 0. 5mmol Immol的CoCl2和0. 8mmol 1. 2mmol的咪唑同時(shí)加入到步驟一得到的溶液A 中混合均勻，在攪拌條件下，加熱至80°C 120°C并保持Ih 2h，然后冷卻至室溫，過(guò)濾后， 將濾液靜止5 10天，析出晶體，得到含鈷夾心雜多酸。本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸作為抗人結(jié)直腸癌化療藥物的應(yīng)用。本發(fā)明所合成的含鈷夾心雜多酸H6 [Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4 (OH2)14] (C3H4N2)2 是一種活性修飾的多金屬氧酸鹽，它對(duì)人結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)抑制作用與誘導(dǎo)人結(jié)直腸腫瘤細(xì)胞凋亡的的作用。本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸的結(jié)構(gòu)屬于Krebs-型夾心化合物，其中兩個(gè)[B-β -BiW9O33]9-通過(guò)兩個(gè)共用頂點(diǎn)的WO6八面體和兩個(gè)Co11O3(H2O)3八面體構(gòu)成 Krebs-型結(jié)構(gòu)，與多陰離子配位的兩個(gè)Na+分別與另外的Na+相連。兩個(gè)[Bi2W2tlCo2]片段通過(guò)兩個(gè)Na+形成一維鏈狀結(jié)構(gòu)。在多聚的一維鏈中，兩個(gè)配位的橋連Na+離子為八面體配位， 每個(gè)鈉離子由四個(gè)水和兩個(gè)來(lái)自于毗鄰的[Co2 (H2O) 6 (WO2) 2 (B- β -Biff9O33) 2] 1(1_陰離子中的 μ 2-0原子配位，每個(gè)橋連鈉離子分別通過(guò)三個(gè)水分子與另外的一個(gè)通過(guò)六個(gè)水配位的Na+ 離子相連，額外的鈉離子起到穩(wěn)定結(jié)構(gòu)和平衡電荷的作用。每?jī)蓚€(gè)多酸分子通過(guò)兩個(gè)鈉橋形成無(wú)限擴(kuò)展的ID鏈狀結(jié)構(gòu)。獨(dú)立的有機(jī)咪唑分子位于兩個(gè)鈉橋與多陰離子形成的孔中。本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸通過(guò)多酸的氧化還原性使人結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡。本發(fā)明合成的 H6 [Bi2W20Co2 (OH2 ) 6070Na4 (OH2) 14] (C3H4N2) 2 采用噻唑藍(lán)(MTT)方法檢測(cè)了該化合物對(duì)人結(jié)腸癌HT-29腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，其半數(shù)抑制濃度IC5tl = 0. llmmol/L，24h。Hoechst 33342和Α0/ΕΒ等熒光染色法檢測(cè)出本實(shí)施方式中含鈷夾心雜多酸H6 [Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4 (OH2)14] (C3H4N2) 2對(duì)人結(jié)腸腫瘤細(xì)胞株具有凋亡誘導(dǎo)作用。 采用單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)(慧星實(shí)驗(yàn))和凋亡細(xì)胞的瓊脂糖凝膠電泳(DNAladder)實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)出本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸H6[Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4(OH2)14] (C3H4N2)2對(duì)腫瘤細(xì)胞株體外實(shí)驗(yàn)存在的DNA損傷，如彗星施尾及DNA Ladder中出現(xiàn)的不同分子量的DNA 片斷。采用透射電鏡和掃描電鏡形態(tài)學(xué)觀察，獲得了本實(shí)施方式中所得含鈷夾心雜多酸 H6[Bi2W20Co2 (OH2) 6070Na4 (OH2) 14] (C3H4N2) 2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的超微結(jié)構(gòu)，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)出IC5tl下細(xì)胞凋亡接近半數(shù)。本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸可用作抗人結(jié)直腸癌化療藥物。


圖1是試驗(yàn)一制備的含鈷夾心雜多酸的分子模型；圖2是試驗(yàn)一制備的含鈷夾心雜多酸的紅外吸收光譜圖；圖3是試驗(yàn)一制備的含鈷夾心雜多酸和5-氟脲嘧啶的藥物濃度與腫瘤細(xì)胞活性的關(guān)系曲線(xiàn)圖；其中a表示本試驗(yàn)一制備的含鈷夾心雜多酸的濃度與腫瘤細(xì)胞活性的關(guān)系曲線(xiàn)，b表示5-氟尿嘧啶的濃度與腫瘤細(xì)胞活性的關(guān)系曲線(xiàn)；圖4是試驗(yàn)一制備的含鈷夾心雜多酸作用24h后的人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞倒置顯微鏡下(X200)細(xì)胞形態(tài)圖；圖5是試驗(yàn)一中作為空白對(duì)照的人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞倒置顯微鏡下(X200)細(xì)胞形態(tài)圖； 圖6是0. 2mmol/L試驗(yàn)一制備的含鈷夾心雜多酸作用24h后的人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞熒光顯微鏡下(X200)細(xì)胞形態(tài)圖；圖7是試驗(yàn)一中作為空白對(duì)照的人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞熒光顯微鏡下(X200)細(xì)胞形態(tài)圖。
具體實(shí)施例方式
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式的含鈷夾心雜多酸的分子式為IUBi2W2。(^ (CHi)6O7^a4(CHi)14] 艦)2。本實(shí)施方式中的H6[Bi2W2tlCo2(OH2)6O7tlNa4(OH2)14] (C3H4N2)2 為粉紅色粉未狀晶體。 本實(shí)施方式的 H6 [Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4 (OH2)14] (C3H4N2) 2 采用噻唑藍(lán)(MTT)方法檢測(cè)了該化合物對(duì)人結(jié)腸癌HT-29腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，其半數(shù)抑制濃度IC5tl = 0. Ilmmol/ L，24h。Hoechst 33342和Α0/ΕΒ等熒光染色法檢測(cè)出本實(shí)施方式中含鈷夾心雜多酸 H6[Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4(OH2)14] (C3H4N2)2對(duì)人結(jié)腸腫瘤細(xì)胞株具有凋亡誘導(dǎo)作用。采用單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)(慧星實(shí)驗(yàn))和凋亡細(xì)胞的瓊脂糖凝膠電泳(DNAladder)實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)出本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸H6 [Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4 (OH2)14] (C3H4N2) 2對(duì)腫瘤細(xì)胞株體外實(shí)驗(yàn)存在的DNA損傷情況，如彗星施尾及DNA Ladder中出現(xiàn)的不同分子量的DNA 片斷。采用透射電鏡和掃描電鏡形態(tài)學(xué)觀察，獲得了本實(shí)施方式中所得含鈷夾心雜多酸 H6[Bi2W20Co2 (OH2) 6070Na4 (OH2) 14] (C3H4N2) 2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的超微結(jié)構(gòu)，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)出IC5tl下細(xì)胞凋亡接近半數(shù)。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式的含鈷夾心雜多酸的合成方法按以下步驟進(jìn)行 一、在磁力攪拌下，將4mmol 5mmol的Na2WO4溶解在80mL 120mL的去離子水中，并加
4熱至80°C 120°C，然后逐滴加入濃度為6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 0 7. 0，得到溶液A ； 二、將0. 3mmol 0. 8mmol的Bi (NO3)3溶解在IOmL濃度為6mol/L的鹽酸中，得到Bi (NO3)3 溶液，再將Bi (NO3)3溶液、0. 5mmol Immol的CoCl2和0. 8mmol 1. 2mmol的咪唑同時(shí)加入到步驟一得到的溶液A中混合均勻，在攪拌條件下，加熱至80°C 120°C并保持Ih 2h， 然后冷卻至室溫，過(guò)濾后，濾液靜止5 10天，析出晶體，得到含鈷夾心雜多酸。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
二不同的是步驟一中將4. 2mmol
4.8mmol的Na2WO4溶解在90mL IlOmL的去離子水中，并加熱至90°C 110°C。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
二或三不同的是步驟一調(diào)節(jié)PH至
5.5 6. 5。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
二或三相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
二至四之一不同的是步驟二中將 0. 4mmol 0. 7mmol的Bi (NO3) 3溶解在IOmL濃度為6mol/L的鹽酸中，得到Bi (NO3) 3溶液， 再將Bi (NO3)3溶液、0. 6mmol 0. 9mmol的CoCl2和0. 9mmol 1. Immol的咪唑同時(shí)加入到步驟一得到的溶液A中混合均勻。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
二至四之一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
二至五之一不同的是步驟二中加熱溫度為90°C 110°C，保持時(shí)間為1. 2h 1. Sh0其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
二至五之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
二至六之一不同的是步驟二中靜止時(shí)間為6 8天。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
二至六之一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式的含鈷夾心雜多酸作為抗人結(jié)直腸癌化療藥物的應(yīng)用。本實(shí)施方式的H6 [Bi2W20Co2 (OH2 ) 6070Na4 (OH2) 14] (C3H4N2) 2 采用噻唑藍(lán)(MTT)方法檢測(cè)了該化合物對(duì)人結(jié)腸癌HT-29腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，其半數(shù)抑制濃度IC5tl = 0. llmmol/L，24h。Hoechst 33342和Α0/ΕΒ等熒光染色法檢測(cè)出本實(shí)施方式中含鈷夾心雜多酸H6 [Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4 (OH2)14] (C3H4N2) 2對(duì)人結(jié)腸腫瘤細(xì)胞株具有凋亡誘導(dǎo)作用。 采用單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)(慧星實(shí)驗(yàn))和凋亡細(xì)胞的瓊脂糖凝膠電泳(DNAladder)實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)出本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸H6 [Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4 (OH2)14] (C3H4N2) 2對(duì)腫瘤細(xì)胞株體外實(shí)驗(yàn)存在的DNA損傷情況，如彗星施尾及DNA Ladder中出現(xiàn)的不同分子量的DNA 片斷。采用透射電鏡和掃描電鏡形態(tài)學(xué)觀察，獲得了本實(shí)施方式中所得含鈷夾心雜多酸 H6[Bi2W20Co2 (OH2) 6070Na4 (OH2) 14] (C3H4N2) 2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的超微結(jié)構(gòu)，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)出IC5tl下細(xì)胞凋亡接近半數(shù)。本發(fā)明采用以下試驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果試驗(yàn)一本試驗(yàn)的含鈷夾心雜多酸的合成方法按以下步驟進(jìn)行一、在磁力攪拌下，將4. 7mmol的Na2WO4溶解在IOOmL的去離子水中，并加熱至100°C，然后逐滴加入6mol/ L的HCl調(diào)節(jié)pH至6. 0，獲得溶液A ；二、將0. 5mmol的Bi (NO3) 3溶解在IOmL濃度為6mol/ L的鹽酸中，得到Bi (NO3) 3溶液，再將Bi (NO3) 3溶液、0. 7mmol的CoCl2Ummol的固體咪唑同時(shí)加入到溶液A中混合均勻，然后加熱至IOCTC并保持1. 5h，然后自然冷卻至室溫，常壓過(guò)濾后，將濾液冷卻后靜止8天，析出晶體，得到含鈷夾心雜多酸。本試驗(yàn)一得到的含鈷夾心雜多酸的分子式為H6 [Bi2W20Co2 (OH2) 6070Na4 (OH2) 14](C3H4N2)2，為一種為粉紅色粉未狀晶體。通過(guò)單晶X-射線(xiàn)衍射分析處理后可知本試驗(yàn)一制備的含鈷夾心雜多酸 H6 [Bi2W2tlCo2 (OH2)6O7tlNa4 (OH2)14] (C3H4N2)2 屬于 Krebs-型夾心化合物，其中兩個(gè) [B- β -BiW9O33] 9_通過(guò)兩個(gè)共用頂點(diǎn)的WO6八面體和兩個(gè)Co11O3(H2O) 3八面體構(gòu)成Krebs-型結(jié)構(gòu)，與多陰離子配位的兩個(gè)Na+分別與另外的Na+相連。兩個(gè)[Bi2W2tlCo2]片段通過(guò)兩個(gè) Na+形成一維鏈狀結(jié)構(gòu)。在多聚的一維鏈中，兩個(gè)配位的橋連Na+離子為八面體配位，每個(gè)鈉離子由四個(gè)水和兩個(gè)來(lái)自于毗鄰的[Co2 (H2O) 6 (WO2) 2 (B- β -Biff9O33) 2] &陰離子中的μ 2_0 原子配位，每個(gè)橋連鈉離子分別通過(guò)三個(gè)水分子與另外的一個(gè)通過(guò)六個(gè)水配位的Na+離子相連，額外的鈉離子起到穩(wěn)定結(jié)構(gòu)和平衡電荷的作用。每?jī)蓚€(gè)多酸分子通過(guò)兩個(gè)鈉橋形成無(wú)限擴(kuò)展的ID鏈狀結(jié)構(gòu)。獨(dú)立的有機(jī)咪唑分子位于兩個(gè)鈉橋與多陰離子形成的孔中。該結(jié)構(gòu)如附圖1所示。本試驗(yàn)一制備的含鈷夾心雜多酸的紅外吸收光譜圖如圖2所示，從圖2可以看出 944 (s)，819 (s)，632 (s) cm—1 譜帶歸屬為多酸骨架的振動(dòng)峰，1621 (m)，1434 (w)，1061 (m) cm—1 譜帶歸屬為咪唑的振動(dòng)峰，3386 (s)，3146 (m)，2967 (w) cm—1譜帶歸屬為N-H和O-H的振動(dòng)峰。 從而證明含鈷夾心雜多酸的分子式為H6[Bi2W20Co2 (OH2) 6070Na4(OH2) 14] (C3H4N2)2。按質(zhì)量百分比將的青鏈霉素、的谷氨酰胺和10%的胎牛血清加入到 RPMI-1640完全培養(yǎng)液中，得到培養(yǎng)基，將本試驗(yàn)制備的不同劑量的含鈷夾心雜多酸加入到培養(yǎng)基中，得到加藥培養(yǎng)基，再將人結(jié)腸癌細(xì)胞用加藥培養(yǎng)基于37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h后，用質(zhì)量百分比為0. 25%的胰酶消化后，采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)本試驗(yàn)一制備的含鈷夾心雜多酸對(duì)人結(jié)腸癌HT-29腫瘤細(xì)胞的體外增殖抑制作用，并以5-氟脲嘧啶作為對(duì)照，得到的藥物濃度與腫瘤細(xì)胞活性的關(guān)系曲線(xiàn)圖如圖3所示，其中a表示本試驗(yàn)一合成的含鈷夾心雜多酸的濃度與腫瘤細(xì)胞活性的關(guān)系曲線(xiàn)，b表示5-氟尿嘧啶的濃度與腫瘤細(xì)胞活性的關(guān)系曲線(xiàn)，從圖3可以看出，對(duì)腫瘤細(xì)胞活性的抑制作用與藥物濃度之間存在的劑量依賴(lài)性，隨著含鈷夾心雜多酸給藥劑量的增加，細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制，并且含鈷夾心雜多酸對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制明顯高于臨床用藥5-氟脲嘧啶對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制。按質(zhì)量百分比將的青鏈霉素、的谷氨酰胺和10%的胎牛血清加入到 RPMI-1640完全培養(yǎng)液中，得到培養(yǎng)基，將本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸0. 2mmol/L加入到培養(yǎng)基中，得到加藥培養(yǎng)基，再將人結(jié)腸癌細(xì)胞用加藥培養(yǎng)基于37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h后，用質(zhì)量百分比為0. 25%的胰酶消化后，采用倒置顯微鏡對(duì)人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況和形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察，同時(shí)做空白對(duì)照，本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸作用24h后的人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞倒置顯微鏡下(X200)細(xì)胞形態(tài)圖如圖4所示，作為空白對(duì)照的人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞倒置顯微鏡下(X200)細(xì)胞形態(tài)圖如圖5所示，比較圖4和圖5，可知本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸作用后，人結(jié)腸癌HT-29腫瘤細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞皺縮、變圓及細(xì)胞碎裂等形態(tài)學(xué)改變，表明含鈷夾心雜多酸對(duì)人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞存在生長(zhǎng)抑制作用，其半數(shù)抑制濃度 IC50 = 0. llmmol/L，24h。按質(zhì)量百分比將的青鏈霉素、的谷氨酰胺和10%的胎牛血清加入到RPMI-1640完全培養(yǎng)液中，得到培養(yǎng)基，將本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸按濃度為 0. 2mmol/L加入到培養(yǎng)基中，得到加藥培養(yǎng)基，再將人結(jié)腸癌細(xì)胞用加藥培養(yǎng)基于37°C、 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，用質(zhì)量百分比為0.25%的胰酶消化后，采用hoechst 33342熒光染色法觀察細(xì)胞形態(tài)，同時(shí)做空白對(duì)照，圖6為0. 2mmol/L本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸作用24h后的人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞熒光顯微鏡下(X200)細(xì)胞形態(tài)圖，圖7為對(duì)照組的人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞熒光顯微鏡下(X200)細(xì)胞形態(tài)圖，比較圖6和圖7可以看出對(duì)比對(duì)照組， HT-29細(xì)胞經(jīng)含鈷夾心雜多酸作用后出現(xiàn)了染色質(zhì)凝聚、核碎裂片斷及凋亡小體的形成等典型的細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變，由此可見(jiàn)，本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸對(duì)人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞株具有凋亡誘導(dǎo)作用。按質(zhì)量百分比將的青鏈霉素、的谷氨酰胺和10%的胎牛血清加入到RPMI-1640完全培養(yǎng)液中，得到培養(yǎng)基，將本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸按濃度為 0. 2mmol/L加入到培養(yǎng)基中，得到加藥培養(yǎng)基，再將人結(jié)腸癌細(xì)胞用加藥培養(yǎng)基于37°C、 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，用質(zhì)量百分比為0. 25%的胰酶消化后，采用單細(xì)胞凝膠電泳 (慧星實(shí)驗(yàn))和凋亡細(xì)胞的瓊脂糖凝膠電泳(DNA ladder)兩種實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)，結(jié)果顯示本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸作用后的彗星施尾及DNALadder中出現(xiàn)的不同分子量的DNA片斷，由此可知，本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸對(duì)腫瘤細(xì)胞株體外具有誘導(dǎo)DNA的損傷作用。按質(zhì)量百分比將的青鏈霉素、的谷氨酰胺和10%的胎牛血清加入到RPMI-1640完全培養(yǎng)液中，得到培養(yǎng)基，將本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸按濃度為 0. 2mmol/L加入到培養(yǎng)基中，得到加藥培養(yǎng)基，再將人結(jié)腸癌細(xì)胞用加藥培養(yǎng)基于37°C、 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，用質(zhì)量百分比為0. 25%的胰酶消化后，采用透射電鏡和掃描電鏡形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)本試驗(yàn)制備的含鈷夾心雜多酸能夠誘導(dǎo)人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞凋亡的超微結(jié)構(gòu)，包括細(xì)胞膜起泡，微絨毛消失及分離的凋亡小體擴(kuò)在的核膜，胞漿空泡及DNA碎裂等超微結(jié)構(gòu)的改變。并采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)了 IC5tl下細(xì)胞凋亡接近半數(shù)。在此基礎(chǔ)上采用Western blot法(蛋白免疫印跡)檢測(cè)了細(xì)胞凋亡執(zhí)行器Caspase-3蛋白在不同藥物劑量下24h后的蛋白表達(dá)，結(jié)果表明Caspase-3蛋白被激活，并且含鈷夾心雜多酸劑量濃度的增加，蛋白表達(dá)增強(qiáng)并呈現(xiàn)裂分趨勢(shì)。
權(quán)利要求
1.含鈷夾心雜多酸，其特征在于含鈷夾心雜多酸的分子式為 H6 [Bi2W20Co2 (OH2) 6070Na4 (OH2) 14] (C3H4N2) 2。
2.如權(quán)利要求1所述的含鈷夾心雜多酸的合成方法，其特征在于含鈷夾心雜多酸的合成方法按以下步驟進(jìn)行一、在磁力攪拌下，將4mmol 5mmol的Na2WO4溶解在80mL 120mL的去離子水中，并加熱至80°C 120°C，然后逐滴加入濃度為6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH 至5. O 7. 0，得到溶液A ；二、將0. 3讓ol 0. 8讓01的Bi (NO3) 3溶解在IOmL濃度為6mol/L 的鹽酸中，得到Bi (NO3) 3溶液，再將Bi (NO3) 3溶液、0. 5mmol Immol的CoCl2和0. 8mmol 1. 2mmol的咪唑同時(shí)加入到步驟一得到的溶液A中混合均勻，在攪拌條件下，加熱至80°C 120°C并保持Ih 2h，然后冷卻至室溫，過(guò)濾后，濾液靜止5 10天，析出晶體，得到含鈷夾心雜多酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含鈷夾心雜多酸的合成方法，其特征在于步驟一中將4.2謹(jǐn)ol 4. Siimol的Na2WO4溶解在90mL IlOmL的去離子水中，并加熱至90°C 110°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3的含鈷夾心雜多酸的合成方法，其特征在于步驟一中調(diào)節(jié)pH至5.5 6. 5o
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3的含鈷夾心雜多酸的合成方法，其特征在于步驟二中將 0. 4mmol 0. 7mmol的Bi (NO3) 3溶解在IOmL濃度為6mol/L的鹽酸中，得到Bi (NO3) 3溶液， 再將Bi (NO3)3溶液、0. 6mmol 0. 9mmol的CoCl2和0. 9mmol 1. Immol的咪唑同時(shí)加入到步驟一得到的溶液A中混合均勻。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3的含鈷夾心雜多酸的合成方法，其特征在于步驟二中加熱溫度為90°C 110°C，保持時(shí)間為1. 2h 1. 8h。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或3的含鈷夾心雜多酸的合成方法，其特征在于步驟二中靜止時(shí)間為6 8天。
8.如權(quán)利要求1所述的含鈷夾心雜多酸作為一種抗人結(jié)直腸癌化療藥物的應(yīng)用，其特征在于含鈷夾心雜多酸作為抗人結(jié)直腸癌化療藥物的應(yīng)用。
全文摘要
含鈷夾心雜多酸及其合成方法和應(yīng)用，它涉及夾心雜多酸及其合成方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種新的具有抗人結(jié)直腸癌的化療藥物及其合成方法。本發(fā)明的含鈷夾心雜多酸的分子式為H6[Bi2W20Co2(OH2)6O70Na4(OH2)14](C3H4N2)2。合成方法一、將Na2WO4溶于水中，加熱并調(diào)節(jié)pH，得到溶液A；二、將Bi(NO3)3、CoCl2和咪唑同時(shí)加入溶液A中混勻，加熱至80℃～120℃并保持1h～2h，經(jīng)冷卻、過(guò)濾、靜止后得到含鈷夾心雜多酸。該化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞具有生長(zhǎng)抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用。可作為抗人結(jié)直腸癌化療藥物。
文檔編號(hào)C01G51/00GK102503892SQ20111033997
公開(kāi)日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月1日
發(fā)明者于凱, 初麗麗, 吳江, 周百斌, 山祁, 王春曉, 王路, 蘇占華 申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)