專利名稱：用于擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈cdr3序列的引物集及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及用于擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的引物集及其用途。更具體地，本發(fā)明涉及用于擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的引物集，擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈CDR3的方法，富集免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的方法，構(gòu)建免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的測(cè)序文庫的方法，確定免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的序列信息的方法，確定個(gè)體免疫狀態(tài)的方法，確定個(gè)體免疫狀態(tài)的系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
免疫球蛋白、T細(xì)胞受體和HLA(人類白細(xì)胞抗原)是人類基因組中最活躍的分子，決定和反映了人和環(huán)境的相互作用。免疫大分子的多樣性使得機(jī)體能識(shí)別無數(shù)的外來物質(zhì)和清除體內(nèi)產(chǎn)生的部分代謝物。免疫大分子多樣性產(chǎn)生的機(jī)制主要有基因重排、體細(xì)胞突變、非模板核苷酸的插入與缺失等。免疫球蛋白重鏈重排指V、D、J三種基因片段重排形成多種CDR3序列，首先是DJ基因片段重排，重排后的基因片段再與V基因進(jìn)行組合，得到編碼CDR3的基因；在免疫球蛋白輕鏈中，先進(jìn)行K鏈基因重排，若重排失敗，則A鏈基因開始重排，由重排、非模板核苷酸的插入與缺失等機(jī)制產(chǎn)生多種多樣特異性的基因片段。由此，一個(gè)個(gè)體內(nèi)可能產(chǎn)生IO11個(gè)特異性的分子。免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御病原菌入侵與免疫調(diào)節(jié)的重要系統(tǒng)，對(duì)其研究有很重要的意義。然而，目前對(duì)于⑶R3的研究仍有待改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種能夠有效地對(duì)免疫球蛋白輕鏈CDR3序列進(jìn)行富集的手段。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種用于擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈V-J重排序列的引物集。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該引物組合物包括正向引物組，所述正向引物組由至少一種V區(qū)引物組成，所述至少一種V區(qū)引物的每一種均包含與至少一個(gè)V基因片段互補(bǔ)的序列；以及反向引物組，所述反向引物組由至少一種J區(qū)引物組成，所述至少一種J區(qū)引物的每一種均包含與至少一個(gè)J基因片段互補(bǔ)的序列。利用該引物集，能夠有效地對(duì)免疫球蛋白輕鏈V-J重排后產(chǎn)生的各種CDR3序列進(jìn)行富集，從而為對(duì)CDR3多態(tài)性的深入研究提供了便利的工具。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提出了一種擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈V-J重排的方法，利用前面所述引物集，多重PCR同時(shí)擴(kuò)增Vk-Jk和乂入-夂重排或者任一種重排。在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種構(gòu)建免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的測(cè)序文庫的方法。包括以下步驟:根據(jù)前面所述的方法，獲得富集所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的擴(kuò)增產(chǎn)物；以及針對(duì)所述擴(kuò)增產(chǎn)物，構(gòu)建DNA測(cè)序文庫，所述DNA測(cè)序文庫構(gòu)成所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的測(cè)序文庫。由此，可以在對(duì)輕鏈CDR3序列進(jìn)行富集的基礎(chǔ)上，構(gòu)建可以用于測(cè)序的測(cè)序 文庫。
根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明提出了一種確定免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的序列信息的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該確定免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的序列信息的方法包括以下步驟:根據(jù)前面所述的方法，構(gòu)建免疫球蛋白輕鏈CDR3測(cè)序文庫；以及對(duì)所述免疫球蛋白輕鏈CDR3測(cè)序文庫進(jìn)行測(cè)序，以便確定所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的序列信息。
本發(fā)明再一方面提出了一種確定個(gè)體免疫狀態(tài)的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該確定個(gè)體免疫狀態(tài)的方法包括以下步驟:根據(jù)前面所述的方法，對(duì)所述個(gè)體的免疫球蛋白輕鏈CDR3序列進(jìn)行測(cè)序，以便獲得由多個(gè)測(cè)序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測(cè)序結(jié)果；以及基于所述測(cè)序結(jié)果，確定所述個(gè)體的免疫狀態(tài)。通過該方法，能夠有效地獲得個(gè)體的免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的序列信息，從而可以有效地確定個(gè)體免疫狀態(tài)。本發(fā)明的又一方面提出了一種確定個(gè)體免疫狀態(tài)的系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該確定個(gè)體免疫狀態(tài)的系統(tǒng)包括:免疫球蛋白輕鏈CDR3序列富集裝置，所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列富集裝置中設(shè)置有前面所述的引物組合物，以便對(duì)所述個(gè)體的核酸樣本富集免疫球蛋白輕鏈CDR3序列；文庫構(gòu)建裝置，所述文庫構(gòu)建裝置與所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列富集裝置相連，以便針對(duì)所述經(jīng)過富集的免疫球蛋白輕鏈CDR3序列構(gòu)建免疫球蛋白輕鏈CDR3序列測(cè)序文庫；測(cè)序裝置，所述測(cè)序裝置與所述文庫構(gòu)建裝置相連，用于對(duì)所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列測(cè)序文庫進(jìn)行測(cè)序，以便獲得由多個(gè)測(cè)序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測(cè)序結(jié)果；以及分析裝置，所述分析裝置與所述測(cè)序裝置相連，用于對(duì)基于所述測(cè)序結(jié)果，確定所述個(gè)體的免疫狀態(tài)。由此，利用該系統(tǒng)，能夠有效地實(shí)施前述確定個(gè)體免疫狀態(tài)的方法，從而能夠有效地確定個(gè)體的免疫狀態(tài)。本發(fā)明的又一方面提出了一種試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該所述試劑盒中設(shè)置有前面所述的引物組合物。由此，利用該試劑盒能夠用于檢測(cè)免疫球蛋白輕鏈的V-J重排，或者用于檢測(cè)免疫球蛋白輕鏈CDR3序列。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。


本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對(duì)實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中:圖1是引物擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈中V-J重排構(gòu)成的CDR3序列的示意圖；圖2是根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的對(duì)免疫球蛋白輕鏈CDR3序列進(jìn)行富集和測(cè)序的流程示意圖；圖3是根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的用于確定個(gè)體的免疫狀態(tài)的系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖:圖4是根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的多重PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果；圖5是根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的對(duì)免疫球蛋白輕鏈CDR3序列測(cè)序后，所得到的Vk-Jk基因片段配對(duì)分布及豐度的結(jié)果示意圖；圖6是根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的對(duì)免疫球蛋白輕鏈CDR3序列測(cè)序后，所得到的Va-Ja基因片段配對(duì)分布及豐度的結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施例方式下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標(biāo)號(hào)表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。需要說明的是在本文中所使用的術(shù)語“第一”、“第二”等僅用于方便描述目的，而不能理解為指示或暗示相對(duì)重要性。在本發(fā)明的描述中，除非另有說明，“多個(gè)”的含義是兩個(gè)或兩個(gè)以上。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種用于擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的引物集。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該引物集包括正向引物組和反向引物組。其中，正向引物組由至少一種V區(qū)引物組成，所述第二引物組由至少一種J區(qū)引物組成。在本文中所使用的術(shù)語“V區(qū)引物”指的是這樣的一種引物，其能夠特異性地識(shí)別免疫球蛋白輕鏈家族中的V基因片段，從而可以引導(dǎo)進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，由此正向引物組中所包含的V區(qū)引物的每一種均包含與至少一個(gè)V基因片段互補(bǔ)的序列。類似的，在本文中所使用的術(shù)語“J區(qū)引物”指的是這樣的一種引物，其能夠特異性地識(shí)別免疫球蛋白輕鏈家族中的J基因片段，從而可以引導(dǎo)進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，由此反向引物組中所包含的J區(qū)引物的每一種均包含與至少一個(gè)J基因片段互補(bǔ)的序列。進(jìn)而，在V區(qū)引物和J區(qū)引物的引導(dǎo)下，可以通過擴(kuò)增反應(yīng)例如PCR，從含有輕鏈編碼基因的核酸樣本中特異性地?cái)U(kuò)增包含V基因片段和J基因片段的編碼序列。由于免疫球蛋白輕鏈CDR3是由V、J基因片段重排產(chǎn)物所編碼的，因而通過特異性識(shí)別V和J基因片段引物，即正向引物組和反向引物組，能夠有效地從包含CDR3編碼序列的核酸樣本中擴(kuò)增獲得CDR3編碼序列的擴(kuò)增產(chǎn)物。而由于免疫球蛋白輕鏈有入、K兩種類型，存在Va-Ja重排和Vk-Jk重排兩種方式，具體地，在本發(fā)明實(shí)施例中，通過特異性識(shí)別Va和J人基因片段引物，即正向引物組中的SEQ ID NO:1-15和反向引物組中的SEQID NO:20-22，能夠選擇性地有效地從包含⑶R3編碼序列的核酸樣本中擴(kuò)增獲得\型輕鏈CDR3序列的擴(kuò)增產(chǎn)物；K型輕鏈CDR3擴(kuò)增產(chǎn)物的選擇性獲得類似，利用正向引物組中的SEQ ID NO:16-19和反向引物組中的SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24引物組來進(jìn)行；類似的，混合使用正向引物組SEQ ID NO:1-19和反向引物組的SEQ ID NO:20-24，多重PCR可一并獲得\、K兩種類型輕鏈的CDR3序列；在輕鏈中，CDR3是V-J重排的產(chǎn)物，因而通過采用根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的引物組合物，能夠高特異性地從樣本中擴(kuò)增富集獲得CDR3的編碼序列，而不會(huì)存在其他的干擾序列。從而能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)輕鏈CDR3編碼序列的有效富集，進(jìn)而為針對(duì)CDR3進(jìn)行深入研究提供了便利的工具。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，V區(qū)引物和J區(qū)引物在PCR擴(kuò)增過程中的作用，并不受特別限制。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體示例，V區(qū)引物可以作為正義鏈引物，J區(qū)引物可以作為反義鏈引物。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過如此設(shè)置V區(qū)引物和J區(qū)引物，能夠進(jìn)一步提高將引物組合物用于富集免疫球蛋白輕鏈CDR3序列時(shí)的富集效率。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述引物組合物能夠適用的免疫球蛋白類型，不受特別限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)研究需要，選擇適當(dāng)?shù)拿庖咔虻鞍鬃鳛檠芯繉?duì)象。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述免疫球蛋白為人類免疫球蛋白。由此，可以有效地將引物組合物用于對(duì)人類免疫球蛋白輕鏈CDR3序列進(jìn)行富集，從而可以有效地用于對(duì)人體免疫狀況進(jìn)行研究。另外，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，可以通過對(duì)V區(qū)引物和J區(qū)引物的序列進(jìn)行選擇，實(shí)現(xiàn)一條引物可以識(shí)別多種V基 因片段，從而可以進(jìn)一步提高擴(kuò)增的效率，減少引物的數(shù)目，降低成本。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，第一引物組的至少一種引物包含與多個(gè)V基因片段的保守區(qū)互補(bǔ)的序列。由此，可以在減少引物的數(shù)量的同時(shí)，提高對(duì)免疫球蛋白輕鏈CDR3序列進(jìn)行富集的效率，發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，這樣操作能夠提高各CDR3序列擴(kuò)增的均一性，從而能夠真實(shí)地反映CDR3序列在宿主中的分布比例。類似的，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，反向引物組的至少一種包含與多個(gè)J基因片段的保守區(qū)互補(bǔ)的序列。由此，可以在減少引物的數(shù)量的同時(shí)，提高對(duì)免疫球蛋白輕鏈CDR3序列進(jìn)行富集的效率，發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，這樣操作能夠提高各CDR3序列擴(kuò)增的均一性，從而能夠真實(shí)地反映CDR3序列在宿主中的分布比例。具體地，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，針對(duì)人類免疫球蛋白輕鏈CDR3的序列特征，本發(fā)明提出了一組V區(qū)引物，和一組J區(qū)引物，其序列和名稱分別總結(jié)如下:
權(quán)利要求
1.一種用于擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈V-J重排的引物集，其特征在于，包括， 正向引物組，所述正向引物組由至少一種V區(qū)引物組成，所述至少一種V區(qū)引物的每一種均包含與至少一個(gè)V基因片段互補(bǔ)的序列；以及， 反向引物組，所述反向引物組由至少一種J區(qū)引物組成，所述至少一種J區(qū)引物的每一種均包含與至少一個(gè)J基因片段互補(bǔ)的序列； 任選地，所述免疫球蛋白為人類免疫球蛋白， 任選地，所述V-J重排包括Va-Ja重排和Vk-Jk重排的至少一種， 任選地，所述正向引物組的至少一種引物包含與多個(gè)V基因片段的保守區(qū)互補(bǔ)的序列， 任選地，所述正向引物組選自SEQ ID NO:1-19所示的核苷酸序列， 任選地，所述反向引物組的至少一種包含與多個(gè)J基因片段的保守區(qū)互補(bǔ)的序列， 任選地，所述反向引物組選自SEQ ID NO:20-24所示的核苷酸序列。
2.一種擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈V-J重排的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1所述的引物集進(jìn)行， 任選地，所述擴(kuò)增為PCR， 任選地，所述擴(kuò)增為多重PCR， 任選地，所述V-J重排包括Va-Ja重排和Vk-Jk重排的至少一種， 任選地，所述Va-Ja重排，對(duì)應(yīng)的引物集的正向引物組選自SEQ ID NO:1-15核苷酸序列，對(duì)應(yīng)的引物集的反向引物組選自SEQ ID NO:20-22核苷酸序列； 任選地，所述Vk-Jk重排，對(duì)應(yīng)的引物集的正向引物組選自SEQ ID NO:16-19核苷酸序列，對(duì)應(yīng)的引物集的反向引物組選自SEQ ID NO:23-24核苷酸序列。
3.一種富集免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的方法，其特征在于，包括以下步驟: 提供核酸樣本，所述核酸樣本中包含編碼免疫球蛋白輕鏈CDR3的核酸序列；以及 利用權(quán)利要求1所述的引物集，以所述核酸樣本作為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以便富集所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的擴(kuò)增產(chǎn)物， 任選地，進(jìn)一步包括: 從人外周血分離外周血單個(gè)核細(xì)胞；以及 從所述外周血單個(gè)核細(xì)胞提取所述核酸樣本， 任選地，通過密度梯度離心分離所述外周血單個(gè)核細(xì)胞， 任選地，所述PCR擴(kuò)增為多重引物PCR擴(kuò)增， 任選地，所述多重引物PCR擴(kuò)增的退火溫度為60攝氏度， 任選地，進(jìn)一步包括通過選自瓊脂糖凝膠電泳、磁珠純化和純化柱純化的至少一種分離純化所述擴(kuò)增產(chǎn)物， 任選地，所述擴(kuò)增產(chǎn)物的長度為110-250bp。
4.一種構(gòu)建免疫球蛋白重鏈CDR3序列的測(cè)序文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟: 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，富集所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的擴(kuò)增產(chǎn)物；以及針對(duì)所述擴(kuò)增產(chǎn)物，構(gòu)建DNA測(cè)序文庫，所述DNA測(cè)序文庫構(gòu)成所述免疫球蛋白輕鏈⑶R3編碼序列的測(cè)序文庫，任選地，針對(duì)所述擴(kuò)增產(chǎn)物，構(gòu)建DNA測(cè)序文庫進(jìn)一步包括: 對(duì)所述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行末端修復(fù)，以便獲得經(jīng)過末端修復(fù)的擴(kuò)增產(chǎn)物； 對(duì)所述經(jīng)過末端修復(fù)的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行3’端添加堿基A，以便獲得3’末端添加堿基A的擴(kuò)增產(chǎn)物； 將所述3’末端添加堿基A的擴(kuò)增產(chǎn)物與接頭相連，以便獲得連接產(chǎn)物； 對(duì)所述連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以便獲得第二擴(kuò)增產(chǎn)物；以及將所述第二擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化回收，以便獲得回收產(chǎn)物，所述回收產(chǎn)物構(gòu)成所述DNA測(cè)序文庫， 任選地，所述末端修復(fù)是利用Klenow片段、T4 DNA聚合酶和T4多核苷酸激酶進(jìn)行的，所述Klenow片段具有5’ 一 3’聚合酶活性和3’ 一 5’外切酶活性，但缺少5’ 一 3’外切酶活性， 任選地，利用Klenow (3’_5’ exo-)對(duì)所述經(jīng)過末端修復(fù)的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行3’端添加堿基A， 任選地，將所述具有粘性末端A的擴(kuò)增產(chǎn)物與接頭相連是利用T4 DNA連接酶進(jìn)行的， 任選地，通過選自瓊脂糖凝膠電泳、磁珠純化和純化柱純化的至少一種分離純化所述第二擴(kuò)增產(chǎn)物。
5.一種確定免疫球蛋白輕鏈CDR3序列信息的方法，其特征在于，包括以下步驟: 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，構(gòu)建免疫球蛋白輕鏈CDR3序列測(cè)序文庫；以及 對(duì)所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列測(cè)序文庫進(jìn)行測(cè)序； 任選地，所述測(cè)序利用選自Illumina、SOLiD、Roche 454和單分子測(cè)序裝置的至少一種進(jìn)行。
6.一種確定個(gè)體免疫狀態(tài)的方法，其特征在于，包括以下步驟: 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，對(duì)所述個(gè)體的免疫球蛋白輕鏈CDR3序列進(jìn)行測(cè)序，以便獲得由多個(gè)測(cè)序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測(cè)序結(jié)果；以及 基于所述測(cè)序結(jié)果，確定所述個(gè)體的免疫狀態(tài)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，基于所述測(cè)序結(jié)果，確定所述個(gè)體的免疫狀態(tài)進(jìn)一步包括: 將所述測(cè)序結(jié)果與對(duì)照序列進(jìn)行比對(duì)，以便確定所述個(gè)體中所包含的免疫球蛋白輕鏈⑶R3的亞家族類型，以及各亞家族類型的相對(duì)比例。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，在多個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)，從相同的個(gè)體提取樣品，并分別根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，獲得多個(gè)測(cè)序結(jié)果；以及 將所述多個(gè)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，以便確定所述個(gè)體中免疫球蛋白輕鏈CDR3亞家族類型以及相對(duì)比例的變化。
9.一種確定個(gè)體免疫狀態(tài)的系統(tǒng)，其特征在于，包括:免疫球蛋白輕鏈CDR3序列富集裝置，所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列富集裝置中設(shè)置有權(quán)利要求1所述的引物集，以便對(duì)所述個(gè)體的核酸樣本富集免疫球蛋白輕鏈CDR3序列；文庫構(gòu)建裝置，所述文庫構(gòu)建裝置與所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列富集裝置相連，以便針對(duì)所述經(jīng)過富集的免疫球蛋白輕鏈CDR3序列構(gòu)建免疫球蛋白輕鏈CDR3序列測(cè)序文庫；測(cè)序裝置，所述測(cè)序裝置與所述文庫構(gòu)建裝置相連，用于對(duì)所述免疫球蛋白輕鏈CDR3序列測(cè)序文庫進(jìn)行測(cè)序，以便獲得由多個(gè)測(cè)序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測(cè)序結(jié)果；以及 分析裝置，所述分析裝置與所述測(cè)序裝置相連，用于基于所述測(cè)序結(jié)果，確定所述個(gè)體的免疫狀態(tài)， 任選地，所述分析裝置進(jìn)一步包括比對(duì)單元，所述比對(duì)單元中存儲(chǔ)有對(duì)照序列，用于將所述測(cè)序結(jié)果與對(duì)照序列進(jìn)行比對(duì)，以便確定所述個(gè)體中所包含的免疫球蛋白輕鏈CDR3的亞家族類型，以及各亞家族類型的相對(duì)比例。
10.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中設(shè)置有權(quán)利要求1所述的引物集， 任選地，所述試劑盒用于檢測(cè)免疫球蛋白輕鏈的V-J重排； 任選地，所述試劑盒用于檢測(cè)免疫球蛋白輕鏈CDR3序列。
全文摘要
本發(fā)明涉及擴(kuò)增免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的引物集、試劑盒及方法，富集免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的方法，構(gòu)建免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的測(cè)序文庫的方法，確定免疫球蛋白輕鏈CDR3序列的序列信息的方法，確定個(gè)體免疫狀態(tài)的方法，確定個(gè)體免疫狀態(tài)的系統(tǒng)。該引物集包括正向引物組，所述正向引物組由至少一種V區(qū)引物組成，所述至少一種V區(qū)引物的每一種均包含與至少一個(gè)V基因片段互補(bǔ)的序列；以及反向引物組，所述反向引物組由至少一種J區(qū)引物組成，所述至少一種J區(qū)引物的每一種均包含與至少一個(gè)J基因片段互補(bǔ)的序列。利用該引物集，能夠有效地對(duì)免疫球蛋白輕鏈CDR3序列進(jìn)行富集，從而為對(duì)CDR3進(jìn)行深入研究提供便利的工具。
文檔編號(hào)C40B50/06GK103215255SQ20121001717
公開日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2012年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月19日
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