N0:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、沈Q ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、沈Q ID NO: 10、沈Q ID NO: 11、沈Q ID NO: 12、沈Q ID NO: 13、沈Q ID NO: 14、沈Q ID NO: 15、沈Q ID NO: 16、沈Q ID N0:17、WQIDN0:18、WQIDN0:19、WQIDN0:20、WQIDN0:21、WQIDN0:22、WQID NO:23、沈Q ID NO:24、沈Q ID NO:25、沈Q ID NO:26、沈Q ID NO:27、沈Q ID NO:28、沈Q ID N0:29、沈Q ID N0:30、沈Q ID N0:31、沈Q ID N0:32、沈Q ID N0:33、沈Q ID N0:34、沈Q ID NO:35、沈Q ID NO:36、沈Q ID NO:37、沈Q ID NO:38、沈Q ID NO:39、沈Q ID NO:40、沈Q ID N0:41、沈Q ID N0:42、沈Q ID N0:43、沈Q ID N0:44、沈Q ID N0:45、沈Q ID N0:46 或沈Q ID NO:47的成熟多膚具有至少100% -致性。
[007U 在一個第六方面，該具有角質(zhì)酶增強活性的G冊1多膚是SEQ ID N0:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、 SEQ ID NO:10、沈Q ID NO:11、沈Q ID NO:12、沈Q ID NO:13、沈Q ID NO:14、沈Q ID NO:15、 沈Q ID NO:16、沈Q ID NO:17、沈Q ID NO:18、沈Q ID NO:19、沈Q ID NO:20、沈Q ID NO:21、 沈Q ID NO:22、沈Q ID NO:23、沈Q ID NO:24、沈Q ID NO:25、沈Q ID NO:26、沈Q ID NO:27、 沈Q ID N0:28、沈Q ID N0:29、沈Q ID N0:30、沈Q ID N0:31、沈Q ID N0:32、沈Q ID N0:33、 沈Q ID NO:34、沈Q ID NO:35、沈Q ID NO:36、沈Q ID NO:37、沈Q ID NO:38、沈Q ID NO:39、 沈Q ID N0:40、沈Q ID N0:41、沈Q ID N0:42、沈Q ID N0:43、沈Q ID N0:44、沈Q ID N0:45、 SEQ ID N0:46或SEQ ID N0:47的成熟多膚的一個變體，該變體在一個或多個（例如若干 個）位置包括一個取代、缺失和/或插入。
[0072] 優(yōu)選地，氨基酸改變的性質(zhì)較小，也就是說不會顯著影響蛋白質(zhì)折疊和/或活性 的保守氨基酸取代或插入；典型地是1個至大約30個氨基酸的小段缺失；小段氨基或駿基 末端延伸，例如氨基末端的甲硫氨酸殘基；多至大約20-25個殘基的小段接頭膚；或通過 改變凈電荷或另一功能而協(xié)助純化的小段延伸，例如多組氨酸區(qū)段、抗原表位、或結(jié)合結(jié)構(gòu) 域。
[0073] 保守取代的實例處于W下組內(nèi)：堿性氨基酸（精氨酸、賴氨酸W及組氨酸）、酸性 氨基酸（谷氨酸和天冬氨酸）、極性氨基酸（谷氨酷胺和天冬酷胺）、疏水性氨基酸（亮氨 酸、異亮氨酸W及鄉(xiāng)氨酸）、芳香族氨基酸（苯丙氨酸、色氨酸W及酪氨酸）、W及小氨基酸 (甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸W及甲硫氨酸）。一般不會改變比活性的氨基酸取代是本 領(lǐng)域已知的并且例如在比諾伊拉特（爬11^地）和1?.1^.希爾化111)，1979在蛋白質(zhì)（化6 Proteins),學(xué)術(shù)出版社（Academic Press),紐約中描述的。最常發(fā)生的交換是Ala/Ser、 Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/ Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、W及 Asp/Gly。
[0074] 可替代地，氨基酸改變具有該樣一種性質(zhì)；改變多膚的物理化學(xué)特性。例如，氨基 酸改變可W提高多膚的熱穩(wěn)定性、改變底物特異性、改變最適pH，等等。
[0075] 一種母體多膚中的必需氨基酸可W根據(jù)本領(lǐng)域中已知的程序來識別，如 定點誘變或丙氨酸掃描誘變（坎寧安（化nnin曲am)和韋爾斯（Wells)，1989,科學(xué) (Science) 244:1081-1085)。在后一項技術(shù)中，在該分子中的每個殘基處引入單個丙氨酸突 變，并且對所得突變體分子的角質(zhì)酶增強活性進行測試w鑒別對于該分子的活性至關(guān)重要 的氨基酸殘基。還參見，希爾頓化ilton)等人，1996,生物化學(xué)雜志271:4699-4708。也可 結(jié)合假定接觸位點氨基酸的突變，如通過W下技術(shù)例如核磁共振、結(jié)晶學(xué)、電子衍射、或光 親和標(biāo)記進行確定的對結(jié)構(gòu)進行物理學(xué)分析，從而確定酶的活性位點或其他生物學(xué)相互作 用。參見，例如，德弗斯（de Vos)等人，1992,科學(xué)255:306-312 ;史密斯（Smith)等人，1992， 分子生物學(xué)雜志224:899-904 ;烏樂達(dá)維爾（Wlodaver)等人，1992,陽BS快報309:59-64。 還可W從與親本多膚相關(guān)的多膚的一致性分析推斷必需氨基酸的一致性。
[0076] 可W做出單個或多個氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用誘變、重組和/或改組 的已知方法進行測試，隨后進行相關(guān)篩選程序，如由里德哈爾-奧爾森巧ei化aar-Olson) 和薩奧爾（531161')，1988，科學(xué)6^611〇6)241:53-57;博維炬〇*16)和薩奧爾，1989，美國國 家科學(xué)院院刊（Proc.化tl. Acad. Sci.USA)86:2152-2156;W0 95/17413;或 W0 95/22625 披露的那些。其他可W使用的方法包括易錯PCR、瞻菌體展示（例如洛曼（Lowman)等人， 1991，生物化學(xué)炬iochemistry) 30:10832-10837 ;美國專利號 5, 223, 409 ;W0 92/06204) W 及區(qū)域定向誘變（德比什爾值erbyshire)等人，1986,基因（Gene)46:145 ;內(nèi)爾（Ner)等 人，1988, DNA 7:127)。
[0077] 可W結(jié)合誘變/改組方法與高通量自動化篩選方法來檢測由宿主細(xì)胞表 達(dá)的克隆的、誘變的多膚的活性（內(nèi)斯（Ness)等人，1999,自然生物技術(shù)（化化re Biotechnology) 17:893-896)。編碼活性多膚的誘變的DM分子可W回收自宿主細(xì)胞，并且 使用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法對其進行迅速測序。該些方法允許迅速確定多膚中單個氨基酸殘基 的重要性。
[007引 沈Q ID NO:2、沈Q ID NO:3、沈Q ID NO:4、沈Q ID NO:5、沈Q ID NO:6、沈Q ID N0:7、沈Q ID N0:8、沈Q ID N0:9、沈Q ID N0:10、沈Q ID N0:11、沈Q ID N0:12、沈Q ID NO: 13、沈Q ID NO: 14、沈Q ID NO: 15、沈Q ID NO: 16、沈Q ID NO: 17、沈Q ID NO: 18、沈Q ID N0:19、WQIDN0:20、WQIDN0:21、WQIDN0:22、WQIDN0:23、WQIDN0:24、WQID NO:25、沈Q ID NO:26、沈Q ID NO:27、沈Q ID NO:28、沈Q ID NO:29、沈Q ID NO:30、沈Q ID N0:31、沈Q ID N0:32、沈Q ID N0:33、沈Q ID N0:34、沈Q ID N0:35、沈Q ID N0:36、沈Q ID N0:37、沈Q ID N0:38、沈Q ID N0:39、沈Q ID N0:40、沈Q ID N0:41、沈Q ID N0:42、沈Q ID N0:43、SEQ ID N0:44、SEQ ID N0:45、SEQ ID N0:46 或 SEQ ID N0:47 的成熟多膚的氨基酸 取代、缺失和/或插入的總數(shù)一直到10個，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個。
[0079] 在一個實施例中，該成熟多膚包括W下各項或由其組成；SEQ ID N0:22的氨基酸 20至326、569 10側(cè):3的氨基酸18至239、569 10側(cè):4的氨基酸20至258、569 10側(cè):5 的氨基酸19至226、SEQ ID N0:6的氨基酸20至304、SEQ ID N0:7的氨基酸16至317、 SEQ ID NO:8 的氨基酸 22 至 249、SEQ ID NO:9 的氨基酸 20 至 249、SEQ ID NO: 10 的氨基 酸 18 至 232、SEQ ID NO: 11 的氨基酸 16 至 235、SEQ ID NO: 12 的氨基酸 19 至 323、SEQ ID 側(cè)：13的氨基酸16至310、569 10側(cè)：14的氨基酸20至246、569 10側(cè)：15的氨基酸22至 354、沈Q ID NO: 16 的氨基酸 22 至 250、沈Q ID NO: 17 的氨基酸 22 至 322、沈Q ID NO: 18 的氨基酸24至444、569 10側(cè)：19的氨基酸26至253、569 10側(cè):20的氨基酸18至246、 SEQ ID NO:21 的氨基酸 20 至 334、SEQ ID NO:22 的氨基酸 18 至 227、SEQ ID NO:23 的氨 基酸 20 至 223、SEQ ID NO:24 的氨基酸 22 至 368、SEQ ID NO:25 的氨基酸 25 至 330、SEQ ID NO:26的氨基酸17至236、SEQ ID NO:27的氨基酸19至250、SEQ ID NO:28的氨基酸 23 至 478、SEQ ID N0:29 的氨基酸 17 至 230、SEQ ID N0:30 的氨基酸 20 至 257、SEQ ID NO: 31的氨基酸23至251、SEQ ID NO: 32的氨基酸19至349、SEQ ID NO: 33的氨基酸24至 436、沈Q ID NO:34 的氨基酸 21 至：344、沈Q ID NO:35 的氨基酸 26 至 400、沈Q ID NO:36 的氨基酸21至389、SEQ ID NO:37的氨基酸22至406、SEQ ID NO:38的氨基酸20至427、 SEQ ID NO:39 的氨基酸 18 至 267、SEQ ID NO:40 的氨基酸 21 至 273、SEQ ID NO:41 的氨 基酸 21 至 322、SEQ ID NO:42 的氨基酸 18 至 234、SEQ ID NO:43 的氨基酸 24 至 233、SEQ ID NO:44的氨基酸17至237、SEQ ID NO:45的氨基酸20至484、SEQ ID NO:46的氨基酸 22至320、或SEQ ID NO:47的氨基酸1至20。
[0080] 共物質(zhì)
[0081] 與G冊1多膚一起添加一種共物質(zhì)甚至可W進一步增強該酶促效率。
[008引在一個方面，根據(jù)W0 2008/151043,具有角質(zhì)酶增強活性的G冊1多膚是在一種可 溶性活化二價金屬陽離子的存在下使用。在一個優(yōu)選方面，該可溶性活化二價金屬陽離子 選自周期表中的堿金屬或過渡金屬。在一個更優(yōu)選方面，該可溶性活化二價金屬陽離子選 自下組，該組由W下各項組成；Mn++、CO++、Mg++、Ca++及其組合。在一個更優(yōu)選的方面，該 可溶性活化二價金屬陽離子是Mn++。在另一個更優(yōu)選的方面，該可溶性活化二價金屬陽離 子是CO++。在另一個更優(yōu)選的方面，該可溶性活化二價金屬陽離子是Mg++。在另一個更優(yōu) 選的方面，該可溶性活化二價金屬陽離子是化++。在另一個更優(yōu)選方面，該可溶性活化二 價金屬陽離子是選自下組的兩種或更多種（若干種）陽離子，該組由W下各項組成；Mn++、 Co++、Mg++、W及化++。在一個最優(yōu)選的方面，該可溶性活化二價金屬陽離子處于硫酸鋪的 形式。
[0083] 在一個方面，該具有角質(zhì)酶增強活性的G冊1多膚在一種二氧基化合物、一種雙環(huán) 化合物、一種雜環(huán)化合物、一種含氮化合物或一種含硫化合物存在下使用。
[0084] 二氧基化合物可W包括包含兩個或更多個氧原子的任何適合化合物。在一些方 面，二氧基化合物包含一個如在此所述的被取代的芳基部分。二氧基化合物可W包含一 個或